小鼠脂肪源性干细胞的成骨分化研究

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大鼠脂肪源性干细胞的分离与鉴定

（广州医学院第一附属医院妇产科
广州５１０１２０）
摘要目的：体外分离培养大鼠脂肪源性干细胞，观察并记录大鼠脂肪源性干细胞的生长特点，探索其成骨分化潜能。方法：取ＳＤ大鼠腹股沟脂肪垫，消化分离出脂肪源性干细胞后进行传代培养。用ＭＴＴ（四甲基偶氮唑蓝）法对原代及１，３，５，７，９，１１，１３代细胞进行生长测定。流式细胞仪下对第４代脂肪源性干细胞进行表面标记物ＣＤ４４，ＣＤ１０６，ＣＤ１０５，ＣＤ４９ｄ的表达测
定。取第３代脂肪源性干细胞进行体外诱导分化实验；地塞米松、甘油磷酸钠、维生素Ｃ作用下成骨方向诱导。结果：细胞表面标记物ＣＤ４４，ＣＤ１０６，ＣＤ１０５，ＣＤ４９ｄ阳性率分别为９９．５９％，０．８５％，９５．００％，８９．５６％。ＭＴＴ绘制生长曲线显示经多次传代后细胞仍能保持较强的增殖能力。成骨诱导组诱导后，茜素红染色下可见钙结节沉积。结论：大鼠脂肪源性干细胞，持续
干细胞群，即脂肪源性干细胞（ＡｄｉｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅＤｅｒｉｖｅｄＳｔｅｍ

脂肪组织干细胞的研究进展

脂肪组织干细胞的研究进展杨立业;黄天华【摘要】脂肪组织中存在多能的干细胞,在体外可以长期增殖,在一定的条件下能够分化为脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞、成肌细胞、内皮细胞、神经细胞、心肌细胞和平滑肌细胞,是一种新的组织工程和细胞移植的干细胞来源.本文综述了脂肪组织干细胞的培养、向多种方向分化和动物实验的研究进展.【期刊名称】《癌变·畸变·突变》【年(卷),期】2007(019)002【总页数】3页(P162-164)【关键词】干细胞;脂肪;分化【作者】杨立业;黄天华【作者单位】汕头大学医学院生物学教研室,广东,汕头,515041;汕头大学医学院生物学教研室,广东,汕头,515041【正文语种】中文【中图分类】R338.1组织工程的一个研究重点是种子细胞的来源问题，自体的多能干细胞应用到临床能够治疗疾病，造血干细胞是最早应用到临床的干细胞。

组织工程的一种细胞来源是骨髓基质，骨髓腔中含有几种细胞成分，包括间充质干细胞（mesenchyml stem cells，MSCs），它能分化为脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞和成肌细胞，是目前骨和软骨组织工程的主要细胞来源[1]。

然而它的自体获得也受到一些条件的限制，并且一次骨穿获得的细胞数量有限。

另外一种潜在的自体干细胞来源是脂肪组织，它的获取可在局麻下进行，对病人的损伤较小。

脂肪来源的干细胞目前可称为脂肪来源的基质细胞（adipose tissue-derived stromal cells，ADSCs），能分化为脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞、成肌细胞、内皮细胞、神经细胞和平滑肌细胞[2-6]。

人类、大鼠和小鼠的ADSCs细胞培养方法相同[1，4，6]。

首先，获取的脂肪组织用缓冲液反复冲洗，剪刀剪碎，0.075%的胶原酶37℃消化30～50 min，800 g离心10 min，沉淀成分为基质血管层（stromal vascular fraction，SVF），DMEM培养基重悬细胞，筛网过滤离心，弃上清。

脂肪组织来源的干细胞提取、制备及储存质量管理专家共识

脂肪组织来源的干细胞提取、制备及储存质量管理专家共识脂肪组织来源的干细胞(adipose tissue-derived stromal/stem cells，ASCs)是从脂肪组织中分离提取得到的，具有取材容易、对机体损伤小、体内储备量大、体外可大规模培养、可多向分化等优点。

ASCs在人体修复重建、免疫调节及组织再生等方面的应用成为近年来干细胞研究的重要内容，也是组织工程及再生医学的研究热点。

大量研究表明，自体脂肪组织移植到软组织缺损部位后，其中40%~60%会被吸收，自体脂肪组织结合ASCs移植，能明显减少自体脂肪组织移植的吸收、液化、坏死及纤维化等情况发生，有利于构建具有生物学结构和功能的脂肪组织。

同时，利用脂肪组织可以进行大规模的ASCs提取、制备、储存，为再生医学提供种子细胞。

目前，国内外尚缺乏ASCs提取、分离、制备及储存的标准和质量管理规范，导致各制备机构或研究应用机构之间无法进行统一评估和交流，严重制约了ASCs在皮肤软组织修复重建等相关领域的发展。

为了建立安全、规范、稳定、可追溯的行业共识、指南及标准，从源头保证ASCs的提取、制备、储存的高质性和安全性，中国医药生物技术协会皮肤软组织修复与重建技术分会联合从事细胞制备和存储、皮肤软组织修复重建、分子生物学及整形和美容外科等多学科的专家，参照中国医药生物技术协会《细胞库质量管理规范》及《干细胞制剂制备质量管理自律规范》，组织起草脂肪组织采集及ASCs制备、检测、储存的标准和质量管理专家共识，旨在促进ASCs在皮肤软组织修复重建技术等领域研究成果的转化，进一步促进多学科的交流和发展。

1 脂肪组织采集1.1 脂肪组织采集机构要求脂肪组织的采集工作应在取得《医疗机构执业许可证》的医疗机构中实施。

采集人员应持医师或者护士执业证书，经过相应的专业技术培训。

采集机构应具有完整的标准化操作规程(standard operation procedure，SOP)，并备有采集过程中的应急预案。

EGFP-质粒转染C57小鼠脂肪来源干细胞的研究

EGFP-质粒转染C57小鼠脂肪来源干细胞的研究摘要：目的：探讨带有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因的pEGFP.N3是否能够有效转染ADSCs。

方法：提取pEGFP-Genesil-1质粒，采用Lipofectamine2000脂质体将绿色荧光表达质粒Genesil-1载体转染至ADSCs。

镜检各个时间点含有荧光的鼻咽癌细胞数，并选取转染率最高时间点的鼻咽癌细胞，用流式检测精确的转染率。

结果脂质体复合物转化ADSCs 24h后，荧光倒置显微镜下可见绿色荧光，4ug/ml质粒浓度组转染48小时绿色荧光蛋白阳性细胞率达最高值。

结论带有增强型绿色荧光蛋白基因的pEGFP.N3可以较为高效地转染ADSCs。

关键词：EGFP；ADSCs 鼻咽癌细胞；绿色荧光表达质粒脂肪来源干细胞（ADSCs）因其来源充足、易于扩增、可多向分化等特点而成为组织工程、细胞治疗、基因治疗等方面的研究热点。

在体内实验中，为证明移植细胞的转归和生成组织的来源，细胞的标记与示踪是关键问题之一。

本实验用带有增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）基因的pEGFP．N3转染ADSCs，检测其转染效率及体内移植效果，为ADSC的研究和应用奠定基础。

1.材料与方法采用Lipofectamine 2000脂质体将绿色荧光表达质粒Genesil-1载体转染ADSCs，分别收集各细胞样品进行流式细胞检测转染率和在光学显微镜下观察细胞形态。

各个时间点转染的鼻咽癌细胞，在荧光显微镜下随机取不重复视野，每个视野数100个细胞，计数荧光细胞数，每时间点计数三次，取平均值，各时间点的转染率，，送转染率最高的时间点的鼻咽癌细胞再做流式检测精确的转染率。

实验数据用x±s表示，利用SPSS12统计软件处理，两受体表达在两细胞中比较采用t检验，p﹤0.05为差异有统计学意义。

所得实验数据以X±s 表示，使用SPSS20.运用配对t检验统计学分析， P<0.05被认为有统计学意义。

小鼠脂肪间充质干细胞的分离_培养以及多潜能分化的研究

494　中国组织化学与细胞化学杂志第18卷现,从22细胞胚胎培养24h后,体外受精胚胎培养液内H2O2含量较高,且培养液中H2O2含量越高,胚胎的发育情况越差。

可见,槲皮素、维生素C在一定浓度范围内对体外受精胚胎发育有一定的促进作用。

011、012和015μmol/L的槲皮素能克服二细胞发育阻滞,对体外受精胚胎42细胞发育率的促进作用明显;50μmol/L维生素C对体外受精胚胎囊胚发育率的促进作用较明显。

培养液中H2O2含量与胚胎发育情况呈负相关。

小鼠脂肪间充质干细胞的分离、培养以及多潜能分化的研究　金明顺　张　毅　贾秀芬　周燕华　闫　妍　刘慧雯　哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室,黑龙江　1500811脂肪间充质干细胞由于取材时侵害性小、易于培养以及低衰老性已经成为目前研究的热点。

本实验中取小鼠腹股沟脂肪组织,采用01075%Ⅰ型胶原酶消化获得脂肪间充质干细胞,流式细胞仪检测培养第3代的脂肪间充质干细胞表面标记CD29,CD44和SCA21,同时在诱导培养基内,将第3代脂肪间充质干细胞进行成骨和成脂诱导培养,通过细胞的形态学、碱性磷酸酶活性、骨钙沉积鉴定其向成骨方向分化,通过油红2O染色鉴定其向成脂方向分化,以探讨由小鼠脂肪组织分离获得脂肪间充质干细胞的方法及其在体外诱导向成骨、成脂方向分化的潜能。

结果显示,脂肪间充质干细胞成长梭形,与骨髓间充质干细胞相似CD29和CD44双阳性的细胞达到80%以上;经成骨诱导(011μM地塞米松,200μM维生素C,and10mMβ2甘油磷酸钠)培养的脂肪间充质干细胞可见细胞呈层状排列,聚集成群,3周后进行碱性磷酸酶染色可见胞质深染,茜素红染色后钙结节呈红色;经成脂诱导(100μM地塞米松,1μM维生素C,100μM吲哚美辛和10μg/ml胰岛素)的脂肪间充质干细胞镜下可见细胞变圆,胞质内可见大小不等的脂滴,油红2O染色诱导细胞呈红色,而同期对照组培养的脂肪间充质干细胞则表现为阴性。

脂肪源性基质细胞特性及其向神经细胞分化的研究进展

ＣＤｌ６、ＣＤｌ８，ＣＤ３１，ＣＤ４５，ＣＤ５０，ＣＤ５６，ＣＤ６２，ＣＤｌ０４，
ｃｅｌｌｓ，ＡＤＳＣ）。由于ＡＤＳＣ具有来源丰
富、体外扩增容易及低免疫原性等优点。同时，可避免胚胎干、神经干细胞等应用产生的伦理及严重移植物排斥反应的问题，因此，更有利于神经移植研究。本文就ＡＤＳＣ的生物学特性、电生理特性、免疫原性及向神经细胞分化进展进行综述。
万方数据
・１３７２・
植后１４ｄ发现２％ＡＤＳＣ迁徙到同侧皮质损伤区域，以梗死周边区为主，动物缺失的躯体感觉、运动功能有所恢复，而经脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）转染ＡＤＳＣ后神经恢复更明显。由于表达成熟神经元及星形胶质细胞标志的ＡＤＳＣ仅占１０％。且移植细胞的电生理情况亦不明确，故症状改善可能并非细胞转化及细胞融合的直接结果。此外，仅仅依靠少量存活尚且功能不明确的ＡＤＳＣ替代脑损伤的脑组织亦远远不够。
干细胞移植治疗中枢神经系统损伤和变性疾病已成为研究热点，广泛应用于基础研究及临床治疗。其中研究较多的是骨髓基质细胞（ｂｏｎｅｍａｒ—ｌｏｗ
ｓｔｌｏｍａｌ
ｃｅｉｌｓ，ＢＭＳＣ），但骨髓基
质细胞的获取给病人带来一定的痛苦，且数量有限，不利于大规模的实验研究及临床应用。近年来发现脂肪组织中存在一些类似于骨髓基质细胞的细胞，此类细胞具有干细胞特征，可自我复制，高度增殖，并具备多向分化潜能。在特定培养条件下，可向不同胚层分化，称之为脂肪组织源性干细胞（ａｉｄｐｏ－
ＡＤＳＣ及其诱导分化的神经样细胞在脑缺血疾病的临床应
用前景随着对ＡＤＳＣ体外神经分化的研究进展，人们设想将ＡＤ－Ｓｃ植入中枢神经系统进行脑缺血疾病的治疗，然而这些植入细胞能否存活并发挥功能，许多学者对其作用机制进行了大量研究。７．１细胞移植后能在宿主体内存活、迁移，并向神经元样细胞分化Ｓａｆｆｏｒｄ等¨＂将ＡＤＳＣ及其诱导分化的神经细胞分别定向注入鼠脑海马ＣＡｌ区，发现诱导后植入的ＡＤＳＣ沿胼胝体和纹状体嘴尾轴迁徙，最远可达２ｍｍ，并至少可存活１２周。存活的ＡＤＳＣ类似神经细胞形态，表达早期神经元标记神经元特异性烯醇化酶（ＮＳＥ）、ＮｅｕＮ，而未经体外神经诱导的ＡＤＳＣ则无上述现象发生，提示体外神经诱导为ＡＤＳＣ移植后能否在神经微环境中生存所必需。然而，移植后ＡＤＳＣ能否表达神经元及神经胶质细胞的全部标记，其最终表型在移植前就已决定还是因局部神经微环境而改变，它们能否替代缺失神经元发挥神经功能，包括神经电位诱发、神经突触建立、递质合成传递等功能目前尚无相关文献报道。Ｋａｎｇ等口１将成人ＡＤＳＣ以腺病毒标记，经侧脑室立体定向移植入鼠ＭＡＣＯ模型，移

RUNX2研究进展

医学分子生物学杂志,2006,3(1):52254　J Med Mol B i ol,2006,3(1):52254作者简介:顾新丰,男,1977年生,硕士研究生通讯作者:蒋垚(电话:02126436918128101,E 2mail:guxinfeng@sjtu 1edu 1cn )Author ’s brief intr oducti on:G U Xinfeng,male,born in 1977,Graduatestudent f or master degree Corres ponding author:J I A NG Yao (Tel:8626436918128101,E 2mail:guxinfeng@sjtu 1edu 1cn )RUNX2研究进展顾新丰,蒋垚上海交通大学附属第六人民医院骨科　上海市,200233【摘要】　RUNX2是转录因子RUNXX 家族成员之一,作为成骨细胞的特异转录因子,对骨组织的形成和重建起着重要作用。

RUNX2决定着多能干细胞向成骨细胞分化,促进软骨细胞的成熟和软骨的血管化。

另外,RUNX2与破骨细胞和细胞外基质的形成也有关。

通过对RUNX2基因表达调控及其诱导成骨细胞分化的分子机制的研究,已为骨代谢性疾病的治疗提供了新的思路。

【关键词】　RUNX2蛋白;骨细胞;基因表达调控【中图分类号】　R341Advances i n the Research of RUNX2G U Xinfeng,J I A NG YaoD epart m ent of O rthopaedics,Shangha i S ixth People ’s Hospital,J iaotong U niversity,Shanghai,200233,China【Abstract 】　RUNX2is a me mber of the runt ho mol ogy domain fa m ily of transcri p ti on fact ors 1A sa s pecific transcri p ti on fact or for osteoblast,RUNX2p lays an i m portant r ole in the f or mati on and re 2constructi on of bone tissue 1It can deter m ine the differentiati on of multi potent ste m cells int o osteo 2blasts,p r omote the maturity of chondr ocytes and vascularizati on of cartilage 1RUNX2is als o ass oci 2ated with the f or mati on of osteoclasts and extracellularmatrix 1Defining the molecular mechanis m s by which RUNX2functi ons as a master regulat ory gene for activating the p r ogra m of osteoblast ogenesis has p r ovided novel insights f or the therapeutic strategies of the metabolic diseases of bone 1【Key words 】　RUNX2p r otein;osteoblast;gene exp ress 骨骼的形成和重建主要是骨祖细胞和软骨祖细胞的分化、增殖和细胞外基质的形成。

脂肪来源干细胞ADSC 之生物学特性、分离、应用前景

调节淋巴细胞反应
研究发现 1、ADSC可明显抑制PHA刺激的淋巴细胞增殖，IL-2可逆转 ADSC的抑制作用。 2、ADSC可明显抑制双相混合淋巴细胞反应，抑制作用成脂肪干细胞细胞数量依赖性；经IFN-γ 作用后抑制作用未见明显减弱。结果表明，ADSC可在体外抑制淋巴细胞增殖反应，具有一定的调节淋巴细胞反应的能力。
应用脂肪干细胞研究的优点
1、来源充足，取材量大，能反复取材，脂肪细胞中干细胞含量远远高于骨髓中的干细胞含量。 2、属自体移植，无免疫排斥反应。 3、不涉及医学伦理问题。 4、取材简便，分离容易，避免抽取骨髓，损伤较小，患者易于接受。 5、细胞增殖快速。
第二部分大鼠脂肪干细胞的分离培养
1.大鼠腹腔注射10%水合氯醛350mg/kg达到麻醉效果，用体积分数75%的乙醇逆毛方向消毒。 2.无菌条件下切取双侧腹股沟脂肪，置入含有1000U/ml青霉素和链霉素PBS液中浸泡10min，然后用不含抗生素的 PBS液反复冲洗，仔细去除大体可见的血管和其他组织。 3.将脂肪组织剪成约1mm×1mm×1mm小块，置于10ml的 0.1%的I型胶原酶中，37℃中摇床120r/min消化30min，待悬液成糊状，加入3倍体积PBS液终止消化，以1200g 离心10min，弃上清，沉淀用含体积分数10%胎牛血清 (FBS)的L-DMEM制成单细胞悬液。 4.以2×105/cm2密度接种于培养瓶中，置37℃、体积分数 5%CO2培养箱中培养。48h首次换液后每3d换液，每天显微下观察、记录。
体外扩增
体外培养条件下，ADSC不像骨髓间充质干细胞对培养基中胎牛血清的来源和质量有严格要求。DMEM，α MEM， RPMI1640是ADSC的常用培养基。一般只添加10%胎牛血清，并且血清无生产批号限制。在传代培养中，ADSC平均倍增时间为60h，细胞在3-4d即可增殖一倍，培养的细胞可以稳定增殖和传代，体外培养10代以后，细胞的增殖速度亦没有明显减速。ADSC并表现低水平衰老，1代时细胞没有出现衰老现象，10代时少于5%细胞出现衰老，15代时仍低于 15%，这表明ADSC体外扩增能力很强，传代培养易于获得大量有分化能力的细胞。

脂肪来源的间充质干细胞及外囊泡促成骨分化的研究进展

1672V ol.40 No.12 Dec. 2020上海交通大学学报（医学版）JOURNAL OF SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCE )综述近年来，我国骨质疏松症患病率逐渐攀升。

一项最新研究[1]显示，我国骨质疏松症的总患病率为13%，总人数已超过1.78亿。

老年人是骨质疏松症的重点人群，自1982年起，我国65岁以上老年人占人口比重不断升高，2019年我国65岁以上老年人占人口比重已达到12.6%[2]。

预计到2050年，我国骨质疏松症或骨密度低的患者将达到2.12亿[1]。

骨质疏松症使得骨质脆性增加、易于骨折，导致患者的生活水平急剧下降。

利用脂肪来源的间充质干细胞（adipose-derived mesenchymal stem cells ，ADMSCs ）诱导成为成骨细胞治疗骨质疏松症是医学研究的新方向[1]。

ADMSCs 可以通过旁分泌功能，分泌一些生物活性分子，为组织修复建立良好的微环境，促进新生血管的形成和伤口愈合，并且减少组织的炎症反应。

ADMSCs 也可分泌促进血管生成和抗凋亡潜能的生长因子，如转化生长因子（transforming growth factor ，TGF ）、胰岛素样生长因子（insulin growth factor ，IGF ）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor ，VEGF ）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor ，HGF ）[3]和骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein ，BMP ）家族BMP-2、BMP-7等[4]。

ADMSCs 来源丰富，通过脂肪抽吸术易于获得，无免疫排斥。

平均每300 mL 脂肪组织可获得108个细胞，每克动物脂肪可获得5 000个成纤维集落形成单位（colony forming unit-fibroblast ，CFU-F ）[5]。

诱导脂肪干细胞成软骨分化的研究进展

诱导脂肪干细胞成软骨分化的研究进展作者：赖仲宏钟佳宁徐房添来源：《右江医学》2020年第10期【关键词】脂肪干细胞;生长因子;成软骨分化;软骨缺损;组织工程中图分类号：R68 ; 文献标志码：A ; DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2020.10.012由于创伤、肿瘤、骨关节炎等原因常导致软骨组织缺损，软骨组织缺损是骨科领域最具挑战性的难题之一[1]。

软骨组织由于缺乏营养血管、神经和淋巴回流，常导致软骨自我修复能力差、增殖活性和再生能力低[2]。

近年来，软骨组织工程的发展为软骨组织缺损修复提供了新的思路，软骨组织工程主要包括三方面：种子细胞、生长因子、生物支架[3]。

脂肪干细胞（Adipose-derived stem cells，ADSCs）作为理想的种子细胞具有组织来源丰富、取材容易、免疫原性低、增殖速度快和具有多向分化潜能等优点，已成为软骨组织工程研究的热点。

ADSCs在不同的诱导条件下可向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞等方向分化[4]。

基于ADSCs 具有成软骨分化特性，软骨组织工程为软骨缺损修复提供了新的治疗方法。

本文将从脂肪干细胞的特性、ADSCs成软骨分化的主要影响因素和当前现状及展望等方面进行综述。

1 脂肪干细胞的起源和特点ADSCs起源于细胞的中胚层，是一种具有多向分化潜能的间充质干细胞。

2001年，ZUK 等[5]从脂肪组织中分离出成纤维母样细胞，并发现在不同的诱导条件下可向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞等方向分化。

在后续的研究中，通过对 PLA的克隆形成能力研究和多谱系分化能力的鉴定，发现PLA具有干细胞的特性，并首次将分离的细胞命名为ADSCs。

ADSCs与骨髓间充质干细胞（bone marrow stem cells，BMSCs）同属于间充质干细胞，生物学特性基本相似，在分子表型上，都能够阳性表达CD29、CD44、CD90及CD105，阴性表达CD31、CD45、HLA-DR，同时2种细胞都能阳性表达Nanog、Oct-4、SOX-2等干细胞相关转录因子[6]。

脂肪来源干细胞相关生长因子及其作用的研究进展

【关键词】脂肪来源干细胞生长因子生物学作用
【中图分类号】Ｑ７８６【文献标识码】Ｂ【文章编号１１６７３ — ０３６４（２０１３）０５ — ０２８５ — ０４
ＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒｓＲｅｌａｔｅｄｗｉｔｈＡｄｉｐｏｓｅ — ｄｅｒｉｖｅｄＳｔｅｍＣｅｌｌｓａｎｄＴｈｅｉｒＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＥｆｅｃｔｓＺＨＡ０Ｐｅ￣ｕａｎ，ＣＨＥＮＧ
组织工程与重建外科杂志
２０１３年１０月
第９卷第５期
・Байду номын сангаас
２８５・
。综Ｊ坏述 ‘ ．
．
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－０３６４．２０１３．０５．０１３
脂肪来源干细胞相关生长因子及其作用的研究进展
Ｃｈｅｎ，ＸＩＥＹｕｎ，ＬＩＱｉｎ￣ｅｎｇ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｌａｓｔｉｃａｎｄＲｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｖｅＳｕｒｇｅｒｙ，ＳｈｎｇａｈａｉＮｉｎｔｈＰｅｏｐｌｅＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｈｎｇａｈａｉ
（Ａｄｉｐｏｓｅｄｅｒｉｖｅｄｓｔｅｍｃｅ１１ｓ，ＡＤＳＣｓ），脂肪来源干细胞的研究

成骨细胞向脂肪细胞和骨细胞分化的研究进展

成骨细胞向脂肪细胞和骨细胞分化的研究进展成骨细胞和脂肪细胞共同来源于骨髓基质干细胞，在一定条件下两者可以相互转化。

骨细胞是由嵌入骨基质的成骨细胞分化而来，但在研究骨细胞功能时发现骨细胞有去分化为成骨细胞的趋势。

本文结合最新研究，简要介绍成骨细胞、骨细胞和脂肪细胞与它们关键性基因的相关性，着重叙述成骨细胞向脂肪细胞横向分化及可能机制，同时叙述了成骨细胞向骨细胞分化相关研究，供同行参考、借鉴。

标签：成骨细胞；脂肪细胞；骨细胞；横向分化【Abstract】Osteoblasts and adipocytes are derived from bone marrow stromal cells. Both of them have transdifferentiation each other under a certain condition. Osteocytes are differentiated from osteoblasts embedded in the bone matrix，but found in research of bone cell function，osteocytes have the tendency to dedifferentiate into osteoblasts.This paper introduces the correlation of osteoblasts，osteocytes ，adipocytes and their key genes combined with the latest research，and emphasizes the differentiation from osteoblasts into adipocytes and its possible mechanism，and it also narrates the research of differentiation from osteoblasts into osteocytes for reference to the colleagues.【Key words】Osteoblast；Adipocyte；Osteocyte；Transdifferentiation成骨细胞在骨代谢中发挥了的重要作用，其分化成熟、功能活动及归属对骨质疏松等代谢性疾病的发生发展意义深远。

小鼠脂肪间充质干细胞的分离培养及生物学特性分析

小鼠脂肪间充质干细胞的分离培养及生物学特性分析刘寿生;雷俊霞;黎阳;项鹏;周敦华【摘要】[Objective] To establish an effective way for isolation and expansion of mouse adipose-derived stromal cells (ADSC), and to observe the biological characteristics of mouse ADSC. [Methods] ADSC were obtained from adipose of BALB/C mouse, isolated and purified in vitro to determine cell morphology, immunophenotype, differentiation potentiality, clone formation ability, growth kinetics and immunoloregulation characteristics in the lymphocyte proliferation inhibition test; T lymphocytes (1 ?105) were cultured in the presence of ConA (ConA was 20 μg/mL), and ADSC of different number interacted with activated T lymphocytes respectively. Experiment was divided into 8 groups by the different number of ADSC: A group as positive control (ConA+T lymphocytes), B group (ADSC 1× 103+ConA+T lymphocytes), C group (ADSC× 1 04+ConA+T lymphocytes), D group (ADSC 2 × 104+ConA+T lymphocytes), E group as negative control (T lymphocytes), F group (ADSC1 ×103), G group (ADSC1 × 104), H group (ADSC 2 × 104), F, G, H were reference groups. The ability of T lymphocyte proliferation was measured by cck-8 method. [Results] ADSC showed plastic-adherent, fibroblastic-like morphologic characteristics, cell proliferation was inadequate and cell morphology changed to flat, enlarged shapes with the passage increasing. ADSC at passage 3 highly expressed CD29 and CD44, moderately expressed Sca-1, weakly expressed CD34, CD45, and CDllb.Three passaged ADSC could be induced to differentiate into osteoblasts and adipocytes, and had strong ability to shape colony forming unit-fibroblasts (CFU-Fs). Doubling time of three,five, and eight passaged ADSC was (22 ?3)h, (24 ?3)h, and (30 ?3)h, respectively. The proliferation rate after passage 5 slowed down gradually. ADSC could suppress T lymphocyte proliferation, the inhibition ratios of B, C, and D group were 20. 78%, 47. 94%, and 60.70%, respectively, which was similar to bone marrow mesenchymal stem cells (BMSC). [Conclusion] ADSC can be isolated and expanded effectively by using adherent culture, they possess general characteristics of mesenchymal stem cells, in addition, they are easier to be purified and their proliferation rate is faster compared with BMSC,so ADSC may be a good multipotential cell candidate for the future cell replacement therapy.%[目的]建立一种有效的分离、培养小鼠脂肪间充质干细胞(ADSC)的方法,从而为小鼠间充质干细胞(MSC)的来源提供更广阔的选择,以利于MSC在小鼠模型中的研究.[方法]体外分离、纯化BALB/C小鼠ADSC,进行细胞形态、表面标志、成脂及成骨分化潜能鉴定、克隆形成能力、生长动力学等方面的研究,并通过淋巴细胞增殖抑制试验研究其免疫调节特性:用终浓度为20μg/mL的ConA作用于T淋巴细胞(1×105个),以不同数量的ADSC分别与活化T淋巴细胞作用,根据ADSC数量不同实验分为A组(ConA+T细胞)、B组(ADSC 1×103/孔+ConA+T细胞)、C组(ADSC 1×104/孔+ConA+T细胞)、D组(ADSC 2×104/孔+ConA+T细胞),同时E组(单纯T细胞)作为阴性对照组,F组(ADSC 1×103孔)、G组(ADSC 1×104/孔 )、H组(ADSC 2×104/孔)作为参照组.用CCK-8法检测作用前后T细胞功能.[结果]ADSC镜下形态呈贴壁、梭型,且随着代数的增加,细胞逐渐增大；第3代ADSC高表达CD29和CD44,中表达Sca-1,低表达或不表达CD34、CD45、CD1 1b;第3代ADSC可诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞;第3代ADSC有很强的集落形成能力；第3代ADSC倍增时间为(22±3)h,第5代ADSC 倍增时间为(24±3)h,第8代ADSC倍增时间为(30±3)h,第5代后的ADSC增殖速度随着代数的增加逐渐减慢;ADSC可以抑制T淋巴细胞的增殖,B、C、D组的抑制率分别为20.78％、47.94％、60.70％,抑制能力和骨髓间充质于细胞(BMSC)相似.[结论]通过贴壁培养可以从小鼠脂肪中分离培养出高纯度ADSC,该方法效率高,培养出的ADSC具有BMSC的一般特性,且与BMSC相比更易纯化,具有更快的增殖速度,有望作为小鼠MSC的有效来源.【期刊名称】《中山大学学报（医学科学版）》【年(卷),期】2012(033)003【总页数】6页(P299-304)【关键词】间充质干细胞;小鼠;骨髓;脂肪组织;免疫调节【作者】刘寿生;雷俊霞;黎阳;项鹏;周敦华【作者单位】中山大学附属第二医院儿科,广东广州510120;中山大学中山医学院,广东广州510080;中山大学附属第二医院儿科,广东广州510120;中山大学中山医学院,广东广州510080;中山大学附属第二医院儿科,广东广州510120【正文语种】中文【中图分类】R725.5;R329.4间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）最初是在骨髓中分离出来的，但后来在脂肪组织、肌肉组织、牙根、胎盘、羊水及脐带血中均分离出MSC［1］。

小鼠骨髓和脂肪间充质干细胞定向分化能力的比较研究

实验研究小鼠骨髓和脂肪间充质干细胞定向分化能力的比较研究钟家帅，冯玉梅△摘要：目的探讨小鼠骨髓源性间充质干细胞（BM-MSCs）和脂肪源性间充质干细胞（AD-MSCs）的定向分化能力。

方法从C57BL/6J小鼠股骨骨髓和腹股沟白色脂肪组织中分别分离和培养BM-MSCs和AD-MSCs，分别使用成骨、成软骨和成脂诱导分化培养基诱导两种细胞定向分化。

采用茜素红、阿利新蓝和油红O染色检测成骨、成软骨和成脂分化程度；实时荧光定量PCR（qPCR）鉴定MSCs并检测定向分化相关基因Runx2、Sp7（成骨），Sox9、Col2a1（成软骨），Pparg和Cebpa（成脂）表达水平，确定细胞的定向分化能力。

基于GEO数据库中GSE43804和GSE122778数据集的小鼠和人类BM-MSCs和AD-MSCs基因表达谱数据，分析差异表达基因及其富集的信号通路。

结果分离培养得到的BM-MSCs和AD-MSCs细胞形态不同，AD-MSCs梭形形态更明显；两种细胞均表达CD29、CD44和CD90，不表达CD34和CD45。

定向诱导后AD-MSCs的成骨和成脂分化程度高于BM-MSCs，而成软骨分化程度低于BM-MSCs （P＜0.05）；定向诱导后AD-MSCs中Runx2、Pparg和Cebpa mRNA表达水平高于BM-MSCs，Sox9mRNA表达水平低于BM-MSCs（P＜0.05）。

小鼠和人的AD-MSCs高表达的基因富集于PPAR和WNT信号通路，BM-MSCs高表达的基因富集于软骨和骨发育信号通路。

结论小鼠AD-MSCs成骨和成脂分化能力强于BM-MSCs，而成软骨分化能力弱于BM-MSCs，PPAR、WNT、软骨和骨发育信号通路的活化状态在决定BM-MSCs和AD-MSCs不同定向分化潜能中起重要调节作用。

关键词：间质干细胞；骨髓；脂肪类；PPARγ；Wnt信号通路；成骨分化；成软骨分化；成脂分化中图分类号：R329.24文献标志码：A DOI：10.11958/20230437Comparative study on the directed differentiation ability of mouse bone marrow andadipose-derived mesenchymal stem cellsZHONG Jiashuai,FENG Yumei△Tianjin Medical University Cancer Institute and Hospital,National Clinical Research Center for Cancer;Tianjin's ClinicalResearch Center for Cancer;Key Laboratory of Cancer Prevention and Therapy,Tianjin;Department of Biochemistry and Molecular Biology,Tianjin Medical University Cancer Institute and Hospital,Tianjin300060,China△Corresponding Author E-mail:**************.cnAbstract:Objective To investigate the targeted differentiation ability of mouse bone marrow derived mesenchymal stem cells(BM-MSCs)and adipose-derived mesenchymal stem cells(AD-MSCs).Methods BM-MSCs and AD-MSCs were isolated and cultured from bone marrow of femur and white adipose tissue of groin of C57BL/6J mice respectively,and the two types of cells were induced by osteogenic,chondrogenic and adipogenic differentiation medium respectively.Alizarin red,alcian blue and oil red O staining were used to detect the differentiated degree of osteogenic,chondrogenic and lipogenic differentiation.Real-time fluorescence quantitative PCR(qPCR)was used to identify MSCs and detected expression levels of directed differentiation-related genes Runx2,Sp7(osteoblast),Sox9,Col2a1(chondroblast),Pparg and Cebpa(lipogenesis)to determine the directed differentiation ability of cells.Based on gene expression profiles of mouse and human BM-MSCs and AD-MSCs in GEO database GSE43804and GSE122778,the differentially expressed genes and their enrichment signal pathways were analyzed.Results The cell morphology of BM-MSCs and AD-MSCs obtained by isolation and culture was different,and spindle-shaped morphology was more obvious in AD-MSCs.Both cells expressed CD29,CD44and CD90,but did not express CD34and CD45.AD-MSCs showed higher osteogenic and lipogenic differentiation than those of BM-MSCs after directed induction,while chondrogenic differentiation was lower in AD-MSCs than that of BM-MSCs(P＜0.05).After directional induction,expression levels of Runx2,Pparg and Cebpa mRNA were higher in AD-MSCs than those in BM-MSCs,and Sox9mRNA expression levels were lower than those in BM-MSCs(P＜0.05).Highly expressed genes of AD-MSCs in mice and human were enriched in PPAR and WNT signaling pathways.Highly expressed genes of BM-MSCs were基金项目：天津市医学重点学科（专科）建设项目（TJYXZDXK-009A）作者单位：天津医科大学肿瘤医院，国家恶性肿瘤临床医学研究中心，天津市恶性肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤防治重点实验室，天津医科大学肿瘤医院肿瘤研究所生物化学与分子生物学研究室（邮编300060）作者简介：钟家帅（1999），男，硕士在读，主要从事肿瘤分子生物学方面研究。

长链非编码RNA调控不同来源干细胞成骨分化机制的研究进展

2021年 06月第18卷第3期生物骨科材料与临床研究O rthobaedic B iomechanics M aterials A nd C linical S tudy .78.doi: 10.3969/i.issn. 1672-5972.2021.03.015 文章编号:swgk2019-l 1-00243长链非编码RNA 调控不同来源干细胞成骨分化机制的研究进展**基金项目：广东省医学科学技术研究基金项目（编号:A2018262）；深圳市卫生健康委员会学科建设能力提升项目（编号:SZXJ2018065）；深圳市三名工程（编号:SZSM201612086）作者单位:1深圳市第二人民医院，广东深圳,518035；2汕头大学医学院，广东汕头,515000林梓聪▽刘建全I 赵誌I 李文翠I 熊建义I *［摘要］肌腱病是世界范围内的常见疾病，无论手术与否，肌腱钙化均是其最常见的并发症之一。

然而，肌腱病导致肌腱钙化的发病机制尚不清楚，有证据表明此病理改变可能与肌腱组织中外源性或内源性的干细胞异常成骨分化有关。

近年来，长链非编码RNA （lncRNA ）参与调控不同来源干细胞成骨分化成为研究热点，这也为解决相应的临床问题提供了一个新方法。

本文从lncRNA 调控不同来源干细胞成骨分化机制的角度作一综述，为治疗肌腱组织异常成骨分化的发病寻找新的研究方向和靶点。

［关键词］长链非编码RNA ；干细胞；成骨分化［中图分类号］R329.2 ［文献标识码］AResearch progress of long non-coding RNA regulation in osteogenic differentiation of stem-cellLili Zicong Liu Jianquan ] Zhao Zhe 1, Li Wencui', Xiong Jianyi'. 1 Shenzhen Second P eople's Hospital, ShenzhenGuangdong, 518035; 2 Shantou University Medical College, Shantou Guangdong, 515000, China[Abstract] Tendinopathy is a common disease among the world, and whether repair operation or not, calcification oftendon, is one of the most common complications. Although the mechanism of tendon calcification is unclear, some evidences demonstrated that this pathological change may be related to the abnonnal osteogenic differentiation of exogenous or endogenous stem cells in tendon tissue. Recently, IncRNA has become a research hotspot of r egulating the osteogenic differentiation of s tem-cell in tendon tissue, which also provides a new method to solve the corresponding clinical problems.This article reviews the mechanism of I ncRNA regulating the osteogenic differentiation of stem cells from different sources, in order to find a new research direction and target for the treatment of a bnormal osteogenic differentiation of t endon tissue.Osteogenic differentiation［Key words ］ Long non-coding RNA （IncRNA ）; Stem cell;肌肉骨骼疾病是全世界都面临的重大医疗问题,而有研究指出肌腱疾病约占肌肉骨骼疾病的30%；甚至在美国，仅2008 一年便有约200万人因为肌腱问题咨询医生111 o 即便如此，经过治疗后的损伤肌腱也并不能保证恢复如初，极易遗留各种各样的后遗症，令患者痛苦不堪。

2021不同组织细胞中Circ RNAs成骨分化的作用范文3

2021不同组织细胞中Circ RNAs成骨分化的作用范文摘要：　环状核糖核酸（circular RNAs,CircRNAs）是一类特殊的非编码RNA 分子，呈封闭环状结构，由非经典剪接方式反向剪接而形成，存在于高度分化的真核生物中。

越来越多的研究表明CircRNAs在成骨分化中发生变化，本文介绍CircRNAs在组织细胞成骨分化中的作用，并对其在成骨分化过程中的作用靶点及信号通路研究现状作一综述。

关键词：　环状RNA;成骨; 分化; 调控; Abstract： CircRNAsare a special class of non-coding RNA(ncRNA) molecules. They have a closed circular structure and are formed by reverse splicing by non-classical splicing methods. They coexist in highly differentiated eukaryotes. More and more studies have shown that CircRNAs would change during osteogenic differentiation. This paper introduces the role of CircRNAs in tissue cell osteogenic differentiation, and reviews the current research status of the targets and signaling pathways of CircRNAs during osteogenic differentiation. Keyword：　CircRNAs;Osteogenesis; Differentiation; Regulation; 环状核糖核酸（circularRNAs,Circ RNAs）首次在类病毒中被发现[1],被认为是异常剪接的副产品。

微小RNA经Wnt通路调控成骨分化及其力学响应的研究进展

微小RNA经Wnt通路调控成骨分化及其力学响应的研究进展鄢志雄【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2018(047)006【总页数】4页(P832-835)【关键词】微小RNA;Wnt信号通路;干细胞;成骨分化;力学载荷【作者】鄢志雄【作者单位】桂林医学院生物技术学院,广西桂林541004【正文语种】中文【中图分类】R318.01微小RNA(miRNA)是一类长度约22 nt的内源性非编码RNA，主要通过识别靶基因mRNA和靶基因mRNA的非编码区碱基配对，引导沉默复合体降解mRNA或阻碍其翻译，在转录后水平负调控基因的表达[1]。

miRNA在干细胞分化、增殖和新陈代谢中，起着关键调节作用[2]。

Wnt信号通路是一个蛋白质相互作用的复杂网络，为生物生长发育所必需[3-4]。

Wnt信号传导路径较多，据信号转导途径的不同，将Wnt信号通路分为经由β-catenin的经典Wnt/β-catenin信号通路、调控细胞平面极性的Wnt/PCP(planner cell polarity pathway)信号通路和调控细胞内钙信号的Wnt/Ca2+信号通路[3]。

后两种被称为非经典Wnt信号通路。

近年来，研究证明Wnt信号通路在干细胞的成骨分化和骨量维持上起着重要作用[4]。

力学载荷是控制骨重建的一个重要因素，适量的力学载荷能保持骨形态和功能的稳定[5]。

有报道显示机械刺激能通过Wnt信号通路途径影响干细胞的成骨分化[6-7]。

近年来大量研究都集中在机械应力刺激下干细胞成骨分化的分子机制方向[8-10]。

然而，力学转导的确切机制尚未研究清楚。

Wnt信号通路可能在机械刺激下的干细胞成骨分化信号传导过程中有重要地位，而与Wnt信号通路相关的miRNA也具有巨大的研究价值。

本文就miRNA通过Wnt信号通路调控成骨分化的分子机制及力学载荷对此过程的影响方面的研究现状及新进展做一综述。

1 miRNA在干细胞成骨分化中的调控作用干细胞是一种具有多向分化潜能的细胞，其成骨分化是众多基因程序性表达及精细调控的结果。