增敏微生物抑制法检测恩诺沙星药物残留

建省 出入境检验 检疫局 微生物 实验 室提供 ） 。
１ 培 养基 ． ３
１ ）保存 及传 代 用 细菌培 养 基 。成 分 ：蛋 白胨 １ ． ｇ 牛 肉膏 ３０ｇ 氯化钠 ５０ｇ 琼脂 １ ． ｇ 蒸 馏 ００ ， ． ， ． ， ５ ， ０ 水 １０ ０ｍＬ ｐ ．± ．。 各成分 加热溶 解 ， ０ ，Ｈ７３ ０１ 将 分装 试
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福建畜牧兽医
第３ ２百度文库
第 ２期
２１ ０ ０年
增敏微生物抑制法检测恩诺沙 星药物残 留
沈翠 香 ’ 斯 坎达 尔 ・ 买合 木提 黄 晓蓉 ｚ 吴
摘
谦 ｚ
（． １ 新疆 农业 大学动物 医学学 院 乌鲁木 齐 ８ ０ ５ ； ． ３ ０ ２ ２福建 省 出入境检 验检疫 局 福州 ３ ０ ０ ） ５ ０ １
要 建 立一 种 基 于显 色反 应 来定 性判 断动 物 源性 食 品 中的 恩诺 沙星 药 物 残 留 的微 生物 检 测 方 法 。在 培 养 基 中添加 适 量 已
知 浓度 的 恩诺 沙 星来提 高敏 感 菌 的敏 感 度 。协 同显 色剂 来检 测 动物 源 性食 品 中的 恩 诺 沙 星 残 留 。该 方 法使 检 测 限从 ５ ， ｋ ０ｐ ／ ｇ ｇ 降低 至 １ ｇ ｋ 。建 立 的方 法 可 用 于动 物 源性 食 品 中恩 诺 沙 星 药物 残 留 检测 ， 能满 足 各 国 限量 要 求 。 ０￣ ／ ｇ 且
调 移液器 ：０ １０ Ｌ １０ １０ ０ Ｌ； 璃珠 ， １ ０ ，０ ～ ０ 玻 三角 瓶 ；分 液漏 斗 ；．５ ｍ微 孔 滤膜 ；０ｍＬ容量 瓶 ； ０４ １
１ ０ｍＬ容 量 瓶 ０
箱保存 ， 贮存 期 ７ｄ 。 ２１ 标 准 工 作 液 ．． ２ 吸取 一定 量标 准储 备 液 ， 用
强 、易吸收 和体 内分 布广等 优点而 得到 临床的广泛 使用 ，同时药 物残 留问题 亦引 起人 们 的极 大关 注 。
３ 检 定 用培 养 基 。成 分 ： 肉膏 １ ， 母 膏 ） 牛 ． ｇ酵 ５
１ ， 白胨 ５ ， 萄糖 １ ， 化钠 ３５ｇ 磷 酸 ． ｇ蛋 ５ ． ｇ葡 ０ ． ｇ氯 ０ ． ，
关键 词 微 生物 抑 制 法 敏 感度 恩 诺 沙 星 残 留
文 章 编 号 ：０ ３ ４ ３ （ １）２ ０ １— ３ １０ — ３ １２ ００ —０ ６ ０ ０
文献 标 识 码 ： Ａ
恩诺 沙 星 （ｎｏ ｏａｉ ， 称 Ｅ Ｒ） ｅ ｒｆ ｘｃｎ 简 ｌ Ｎ 为人 工 合 成 的动物专用 药 ． 多数革 兰氏 阳性 菌 、 对 阴性 菌及支 原
２１１ 标 准储备液 精确 称取恩诺沙星标准品 １ ， ．． ０ｍｓ
用 ０１ｍ ｌ ａ Ｈ溶液溶 解并 定容 至 １ ． ｏ ＬＮ Ｏ ／ ０ｍＬ， 配制 成恩 诺沙 星标 准储 备液 （ ０ ｇ ） 置 ２ ８℃冰 １０ ０Ｉ ／ 。 ｘ ｍＬ －
碎机 ； 恒温水 浴锅 ； 涡旋振荡 器 ； 高效 液相色 谱仪 ， 可
二氢钾 １ ２ｇ 磷 酸氢二 钾 ３ ８ｇ 琼 脂 １． ｇ 蒸 馏 ． ， ３ ． ， ６ ５ ， ０ 水 １０ ０ｍ ，Ｈ ． ＋ ． 。 各成 分加热 溶解 ， 装 ０ Ｌ ｐ ７０ ００ 将 ０ ５ 分 每瓶 ５ ．２ ０ｍＬ １ １℃高压灭 菌 １ ｉ【 ５ｍ ｎ 。 １ 试 剂 ｐ ８０磷 酸 盐 一 ． ４ Ｈ． 乙腈 缓 冲液 （ ： ２３ ； ＶＶ＝ ：）
ｐ ８０磷 酸盐 一 Ｈ． 乙腈缓 冲液 稀 释成 相 应 浓度 的标 准
１ 菌种 大肠 杆 菌 Ｅ ｃ ｅｉｈａｃ ｌ Ａ Ｃ ８ ３ （ ． ２ ｓｈ ｒ ｉ ｏｉ Ｔ Ｃ ７ ９ 福 ｃ
工作液 ， 当 日配制使 用 。 须 ２２ 茵 悬液的 制备 在确 定保 存 的菌 种生 化特 性 没 ． 有 改变后 ， 将其 接种 到增菌 用液体 培养 基 ，３ ± ） （６ １ ℃
目前对 恩诺沙 星的残 留检测 主要有微 生物法 、高效
液相 色谱 法 、 联免疫 法和 毛细管 电泳法等［ 酶 ２ １ 。本方 法就是利 用微生 物法来 检测恩诺 沙星残 留的 ，与传
统方法不 同 的是 ．利用 Ｅ Ｒ极稳定 的化学 性质 ． Ｎ 在
检测培 养基 中加 入微 量 Ｅ Ｒ． 其既 不影 响细 菌生 Ｎ 使 长 ， 能有 效 提 高大 肠杆 菌 对 Ｅ Ｒ 的敏 感 性 ， 又 Ｎ 同时 利 用红 四氮 唑 ｆｒ ｈｎ ｌ ｅ ａｏｉ ｈｏｉｅ Ｔｉ ｅｙ ｔ ｒｚｌ ｍ ｃ ｌ ｄ ，简称 ｐ ｔ ｕ ｒ １ Ｃ 的显色 效果 可方 便 、 性判 断 Ｅ Ｒ药 残 ， 检 Ｔ １ ｒ 定 Ｎ 使
２ 方 法 ２１ 恩 诺 沙 星 标 准 液 的 配 制 ．
测 限从原来 的 ５ ｇ ｋ Ｏ ／ ｇ降低 到 ｌ ／ ０
１ 材 料 与 方 法
ｋ。 ｇ
１１ 仪 器和试 剂 （０ １ ｏ恒 温箱 ； 荡培 养箱 ； ． ３± ） Ｃ 震 分 析 天平 ： 心机 ： 离 无菌 圆头 离心 管若 干 ； 速组 织捣 高
肉膏 ３ ， ． ｇ 氯化 钠 ５０ｇ 蒸馏 水 １０ ０ ｍ ，Ｈ － ０ ． ， ０ Ｌ ｐ ７３ ±
０１ 将 各成分 加热溶 解 ， 装每 管 ５ｍ ，２ ＝ ．。 分 Ｌ １ １ｃ高压 【
灭 菌 １ ｉ ５ｍ ｎ
体都 有 良好 的抑制作 用Ⅲ 。由于其抗 菌谱广 、 杀菌力
Ｔ＇ Ｉ Ｃ显色液 （ 称取 ０１ Ｉ ． ｇＴ＇ Ｃ加入 ５ｍＬ９ ％乙醇溶 ５
解 再 用 蒸馏 水 定 容 至 １０ ｍ ０ Ｌ配 制 成 １０ ０ Ｉ ／ ０ ｇ ￣ ｍＬ Ｔ Ｃ显色液 ：． ｍｏ ＬＮ Ｏ 溶液 ； Ｙ ０１ ｌ ａ Ｈ ／ 恩诺 沙星标 准 品 （ ｒ ｈｅ ｓ ｒ ｒ ｍ Ｈ， Ｄ ． ｒｎｔ ｆ ｂ 有效 期 内 ）正 己烷 。 Ｅ ｏｅ Ｇ ；