13 中药制剂分析2(第二军医大学)

ChP2010一部附录IX Q 农药残留量测定法

色谱条件与系统适用性试验： SE-54（30m 0.32mm 0.25um）或DB-1701，63NiECD电子捕获检测器。进样口温度：230℃；检测器 温度：300℃；不分流进样；程序升温：初始100℃， 每分钟10℃升至220℃，每分钟8℃升至250℃，保持 10分钟。 理论塔板数按α-BHC峰计算，不低于106，分离度应大 于1.5。
二、鉴别试验
鉴定有临床疗效的已知成分
黄连 麻黄 乌头 洋地黄 延胡索 小檗碱（抗菌消炎） 麻黄碱（支气管哮喘） 乌头碱（毒性） 强心苷（强心） 延胡索乙素（镇痛）
显微鉴别（含生药粉制剂）

丸剂、片剂、胶囊剂、散剂 快速，简便，覆盖面大
选择原则


应选有专属性的特征进行鉴别
多来源的药材应选择共有的特征进行鉴别
针对农残的对策
抗虫药材品种的选育 生物防治及生物农药的使用 科学种植中药材，科学使用农药 采收、加工、包装、贮存 药材种植环境的选择 降低土壤农药残留本底 加强绿色中药材基地建设
中药制剂分析的一般程序
取样
鉴别
检查
含量测定
含量测定
测定项目的选定原则
1 首选君药及贵重药、剧毒药建立含量 测定方法 2 其次考虑臣药及其他味药 3 有效成分明确的，可选有效成分 4 成分类别清楚的，可测某一类总成分 的含量
中药及其制剂分析2
Analysis of Pharmaceutical Preparations and Traditional Chinese Medicine
中药制剂分析的一般程序
取样
鉴别
检查
含量测定
鉴别药味的选取原则


单味制剂，直接选取单一药味进行鉴别。中 药复方制剂，应按照君、臣、佐、使，依次 选择药味。 当药味较多时，应首选君药、臣药、贵重药、 毒性药进行鉴别研究。 凡有原粉入药者，应该作显微鉴别。 原则上处方中的每一药味均应进行鉴别研究， 选择尽量多的药味制订在标准中，但最少也 要超过处方的1/3药味。
（二）总灰分和酸不溶性灰分的测定
总灰分的测定（生理灰分+外来杂质）
供试品 △ 炭化
已恒重坩埚 500~ 600℃
恒重 灰化
酸不溶性灰分的测定（外来杂质）
总灰分 过滤 △
已恒重坩埚
d HCl
灰化 炭化
（三）重金属的测定
铅≤10ppm 镉≤0.3ppm 硫代乙酰胺法
5检测成分应归属某单一药味 6检测成分应与中医用药的功能主治相近 7无法含量测定的，可测定浸出物含量
化学分析法 常用定量方法 分光光ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ法
色谱法
（一）化学分析法
重量分析法 特点 容量分析法
A、准确度、精密度高 B、抗干扰能力差
（二）分光光度法
UV法 比色法
特点
A、灵敏度高 B、简便、快速 C、精密度稍低 D、干扰多
流动相的选择
（2）碱性成分

生物碱类化合物如小檗碱、麻黄碱等 ; 固定相上的 残余硅醇基往往使峰拖尾或被吸附，柱效降低。 ①向流动相中加入胺类添加剂作为扫尾剂，让胺类 添加剂中的游离胺基与残余硅醇基（Si－OH）首 先相互作用，从而掩盖生物碱分子与键合相的亲硅 醇基效应。 常用添加剂：三乙胺、乙二胺、二乙胺、正丁胺
0 0 100
2
5 20 32 50
0
8 8 15 70
100
92 92 85 30
溶液制备
供试品溶液
药材粉末0.2g 80%甲醇25ml 超声20min
超声20min 过滤
80%甲醇25ml 滤液
残渣
过滤
合并滤液
滤液
挥干，甲醇定容至25ml
不同产地知母药材的HPLC指纹图谱
中药制剂分析的一般程序
例如反相离子抑制色谱法测定绿原酸

分 离 条 件 为 色 谱 柱 :YWG-C18(4.6mm×25cm); 流动相:甲醇-水-乙酸(60:40:0.5)。
流动相的选择
② 离子对色谱

离子对色谱法测定中药有效成分酸性成分时， 所采用的流动相 pH 一般为77.5 ，常用的反离 子为四丁基季铵盐及四丁基磷酸盐等。 例如大黄素：反相离子对色谱法分离条件为色 谱柱 : YWG-C18(4.6mmi.d.×25cm); 流动相 : 甲醇-水(含10mmol/L四丁基磷酸钠)=65:35; 流 速1ml/min。
农残的特性


中药材中农药残留污染具有普遍性
种植药材中农药残留量较高，而野生药材中仅有痕 量检出


中成药中农药残留量一般较低
同一地区的同种药材、同一药材的不同部位农药残 留量也有较大的差异


不易发生急性中毒事件
有机磷和氨基甲酸酯类农药检出率较低，残留量也 低
薄层色谱法
薄层酶抑制法 ---- 利用某些有机磷农药对胆碱
方法
烘干法、甲苯法、 减压干燥法 炽灼残渣法 干法、湿法破坏 - 硫代 乙酰胺法 古蔡法、二 乙基二硫 代氨基甲酸银法等 氧瓶燃烧法 ( 不明农药 测定总氯 / 磷量 ) 、 GC (已知农药)、比色等
砷盐 农药残留
(一)水分测定法
烘干法（不含或少含挥发性成分） 甲苯法 （含挥发性成分） 减压干燥法（含挥发性成分贵重药） GC法
示例 万氏牛黄清心丸
[处方] 牛黄10g 黄芩120g [方药分析]
朱砂60g 栀子120g
黄连200g 郁金80g
牛黄—清热解毒药，主含胆酸类成分 黄连—清热燥湿药，主要为小檗碱 黄芩—清热燥湿药，主要为黄酮类 栀子—清热泻火药，主含栀子甙 朱砂—安神药，主含硫化汞（HgS）
郁金—活血去瘀药，主含挥发油
WHO规定植物药
干法破坏
湿法破坏
（四）残留农药

有机氯类：六六六、 DDT 、五氯硝基苯、艾 氏剂
有机磷类：磷酸酯类（敌敌畏、敌百虫）、硫 代磷酸酯类（对硫磷）、磷酰胺及硫代磷酰胺 （甲胺磷） 氨基甲酸酯类：萘基氨基甲酸酯类（西维因）、 杂环甲基氨基甲酸酯类（呋喃丹）、涕灭威等 拟除虫菊酯类





流动相的选择

②加入反离子，常用离子对试剂为烷基磺酸（盐），如 庚烷磺酸钠；所采用的流动相的pH为33.5。 例如反相离子对HPLC法测定伪麻黄碱 分离条件为色谱柱：（4.0mmi.d.×25cm），流动 相：乙腈（50ml）-水（400ml）-磷酸氢钾（4g）庚烷磺酸钠（1g）：乙二胺（0.1ml），流速 0.7ml/min。
取样
鉴别
检查
含量测定
中药及其制剂分析的杂质检查
检查项目
水分 总灰分和酸 不溶性灰分 重金属
意义
贮藏过程中保证质量的中药指 标，霉变、粘结、成分分解 控制药材中泥土、砂土的量 对人体有严重危害，药材由于 环境污染等原因易引入重金属 杂质，严重影响中药出口 药材由于受除草剂、杀虫剂、 化学肥料等影响易引入砷盐 药材栽培为了减少虫害，喷洒 农药，土壤中残存的农药，含 磷、含氯，严重影响中药出口
供 试 品
黄 芩 甙
黄 芩 空 白
栀 子 甙
栀子空白
供试 品
中药指纹图谱
定义：运用现代分析技术表征和评价具有代表性中药 化学成分群信息。

“现代分析技术”：光谱、色谱、波谱、联用技术， 以及化学计量学和计算机技术等。 “中药化学成分群”：药材、饮片、中药提取物和 成药中与药理活性相关的，由次生代谢产物组成的 化合物群。 “代表性”：中药化学成分群信息须具有统计学意 义的样本数。

流动相的选择
（3）酸性成分

中药有效成分酸性成分：脂肪酸、酚类、黄酮类 等。如丹参素、黄芩甙、甘草酸等； 常采用离子抑制色谱法及离子对色谱法。

流动相的选择
① 离子抑制色谱法

通过向流动相中加入少量弱酸（常用醋酸）调节 流动相的 pH 值，抑制组分的解离，以达到分离 的目的。本法适用于3≤pKa≤7的弱酸。
色谱鉴别
TLC法——应用最多
（Rf、颜色、荧光）
GC法
—— 含挥发性成分的药物
HPLC法——常与含量测定同时进行
阴、阳对照法
阳性对照 将要鉴别的药材按制剂 工艺处理，再按鉴别方 法提取的溶液
阴性对照 把制剂中要鉴别的药材 除去，用剩下的各味药 按制剂工艺处理，再按 鉴别方法提取的溶液
色谱指纹图谱的基本属性
整体性 将指纹图谱作为一个整体来分析和比较 它的综合特征以达到鉴别的目的。 模糊性 强调分析、比较指纹图谱的相似性，而 不是完全相同。 是一种综合的、量化的色谱鉴别手段。
指纹图谱的制定原则
系统性：指图谱所反映的化学成分全部信息，其中包括中 药有效部位所含主要成分的种类，或指标成分 的全部。 特征性：指图谱中反映的化学成分信息是具有高度选择性 的，这些信息的综合结果，将有助于特征区分 中药的真伪与优劣。 稳定性：在规定的方法与条件下，不同的操作者和不同的 实验室应能作出相同的指纹图谱。
酯酶具有抑制作用，且酶的基质 (β-醋酸萘酯) 水解产物能与特定显色剂结合呈紫色反应原 理，在已有农药展层的薄层板上，其农药斑 点部位因酶的活性被抑制，基质不被水解， 不引起呈色反应，能在薄层板上衬出无色斑 点，根据斑点大小，经扫描测定残留量。
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气相色谱法
提取： 1、有机溶剂 + 硅藻土或Flori硅土柱纯化 2、超临界流体萃取（SFE） 色谱柱：毛细管柱，多以硅氧烷类为固定液， 如OV-17，OV-21，SE-30，SE-54等 检测器：电子捕获检测器（ECD） 火焰光度检测器（FPD）