基于新型生物标志物的MRSA腹腔感染模型制作与治疗监测
腹腔感染抗感染治疗
MRSA
存在下列情况，医疗机构相关性腹腔感染
需经验性覆盖MRSA
1. 患者存在MRSA定植 2. 之前抗感染治疗疗效不佳或有抗菌药物暴露史
社区血行感染肝脓肿需覆盖金葡菌 推荐应用万古霉素
TIPS
1. 腹腔感染常为需氧+厌氧混合感染 2. 社区：肠杆菌科+厌氧菌
0.3
0.3 0.16 0.04
汪复主编：实用抗感染治疗学，2004
血-胰屏障穿透力强的药物
急性胰腺炎本身为化学性炎症，无应用抗菌药物的 指征 有较强穿透能力的药物是喹诺酮类、碳青霉烯类、 头孢哌酮/舒巴坦、头孢唑肟、头孢他啶、头孢噻 肟、甲硝唑等
医疗机构相关性腹腔感染
非发酵菌
目标治疗 有碳青霉烯类暴露史
社区腹腔感染几个不推荐
氨苄西林/舒巴坦不推荐
头孢替坦和克林霉素不推荐（口腔厌氧菌感染效果佳，但腹腔 厌氧菌感染效果差）
氨基糖苷类不常规推荐（针对ESLBs+不需联合，且有神经肌
肉阻断作用） 高危患者喹诺酮类药物不推荐使用，除非敏感性>90%
缺乏MRSA或真菌感染依据时，不推荐覆盖
胆汁浓度高的抗菌药物
抗菌药物 四环素/多西环素 红霉素 利福平 胆汁/血药浓度比值 0.2~32 8~25 5~20 抗菌药物 头孢唑林 磺胺甲噁唑 氨曲南
胆汁/血药浓度比值 0.7 0.4~0.7 0.6
哌拉西林
头孢哌酮 美洛西林 头孢曲松 头孢吡肟 克林霉素 美罗培南 环丙沙星 左氧氟沙星
1~15
8~12 1~10 10 5 2.5~3 0.3~3 2 1~2
庆大霉素
妥布霉素 青霉素 万古霉素 头孢噻肟 头孢呋辛 链霉素 苯唑西林 头孢他啶
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠腹膜炎模型的建立
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠腹膜炎模型的建立摘要：“超级细菌”耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin inresistantStaphylococcusaarews，MRSA）是诱发连续腹膜透析患者腹膜炎的常见细菌，且治疗困难。
目前缺少MRSA腹膜炎动物模型。
腹腔注射2x109?2x1010CFU/mL7组不同浓度的MRSA感染小鼠，观察小鼠死亡时间，测定肝脏与脾脏细菌定植量，进行肝、脾病理分析，确定适宜的建模浓度。
研究发现，小鼠感染细菌浓度最小致死剂量为每只2x109CFU，最适建模浓度为每只1.4x109CFU。
结果表明建立了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠腹膜炎模型，为MRSA致腹膜炎的致病机制研究、疫苗的研制提供实验基础关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）；腹膜炎；小鼠模型EstablishmentofMousePeritonitisModelofMethicillinResistant Staphylococcus aureusSUNQi，WANGXiang-yu，CHENShi-qi，SITULi-fang，ZHAOWei，WANCheng-song*（BSL-3Laboratory，SchoolofPublicHealthandTropicalMedicine，SouthernMedicalUniversity，Guangzhou510515，Guangdong，China）Abstract：”Superbacteria11methicillinresistantStaphylococcusaureus（MRSA）isafrequentcauseofperi?tonitisincontinuousperitonealdialysis，andthetreatmentisdifficult.Meanwhile，MRSAperitonitisanimalmodelsarelacking.Itwasperformedwithmicedividedintoseveng roupsandgivenintraperitonealinjection2x109?2x1010CFU/mLofMRSA.Atthesametim e，thetimeofdeathwasrecorded.Besides，thebacteriaamountofliverandspleenwasmeasuredandthepathologicalanalysisofliverand spleenwasperformed.Thenappropriatemodelingconcentrationwasdetermined.Theresult sshowedthattheminimallethaldoseoftheclinicalisolatedMRSAwas2x109CFUeachmous eandtheoptimalconcentrationofmodelingwas1.4x109CFUeachmouse.Themouseperito nitismodelofmethicillin-resistantstaphylococcusaureuswasconstruct?edsuccessfully，whichprovidedareliableanimalmodelfortheresearchofperitonitiscausedbyMRSAandde velopmentofthevaccine.Keywords：methicillinresistantStaphylococcusaureus（MRSA）；peritonitis；mousemodel（LifeScienceResearch，2015，19（1）：054?058）耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillinre?sistantStaphylococcusaureus，MRSA）自1961年在英国首次发现，全球范围内均有广泛报道。
替加环素专家共识解读2024(附图表)
替加环素专家共识解读2024（附图表）如何重新评价和定义替加环素？替加环素单药或联合治疗的文献数据分析和评价应该被分开来进行：一.腹腔感染、皮肤及软组织感染2010年IDSA腹腔感染指南中建议替加环素单药治疗轻中度CA的成人患者（证据级别：A-I）[1]。
虽然替加环素在体外实验中对MRSA具有很好的敏感性，但是目前替加环素治疗腹腔感染仅有少量的研究涉及到MRSA微生物学和临床疗效，因此万古霉素仍应作为治疗MRSA的一线治疗药物[1]。
2017年7月，世界急诊外科学会（WSES）更新了腹腔感染指南，认为替加环素是治疗腹腔感染可行的抗菌药物经验治疗方案之一，尤其对于cIAIs。
具体推荐如下[2]：1. CA cIAI的非重症患者的经验性抗菌药物治疗（肾功能正常）：如存在社区获得性产ESBL肠杆菌感染风险，可用替加环素100mg（首剂200mg），然后50mgq12h或厄他培南1g q24h。
2. HCA IAI的非重症患者的经验性抗菌药物治疗（肾功能正常）：减少碳青霉烯使用方案，替加环素100mg（首剂200mg），然后50mg q12h+哌拉西林/他唑巴坦4.5g q6h。
2016年一篇国外综述报道，对于产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌（CRKP）引起的腹腔感染，推荐使用大剂量替加环素[3]：1. 美罗培南MIC≤8-16mg/l：美罗培南2g q8h i.v. + 替加环素100mg q12hi.v.（首剂200mg）+多粘菌素E450万单位q12h或庆大霉素3-5mg/d/kg q24h或磷霉素4gq4h。
2. 美罗培南MIC>8-16mg/l：替加环素100mg q12h i.v.（首剂200mg）+多粘菌素E450万单位q12h+ 庆大霉素3-5mg/d/kg q24h。
二. 广泛耐药革兰阴性菌（XDR-GNB）感染的抗菌治疗2016年一篇XDR-GNB感染的抗菌治疗中国专家共识报道了多种联合治疗方案（见下表）[5]。
2024年医疗卫生行业继续教育-不同部位感染的给药方案优化与实践课后练习答案
2024年医疗卫生行业继续教育-临床内科学-感染病学（含传染病学）-不同部位感染的给药方案优化与实践课后练习答案目录一、以持续质控管理促进抗菌药物合理使用 (1)二、MDR革兰阴性菌感染HAP/VAP的抗菌药物治疗 (3)三、重症社区获得性肺炎病原体评估与抗菌药物治疗 (5)四、常见呼吸系统感染中抗菌药物的合理应用 (7)五、腹腔感染实战病例分享 (9)六、复杂腹腔感染抗菌药物治疗 (11)七、林林总总皮肤软组织感染 (12)八、心内膜炎感染的治疗 (14)九、中枢神经系统细菌感染治疗现状及进展 (16)十、侵袭性念珠菌感染的研究进展 (18)十一、复杂性尿路感染的治疗 (20)十二、单纯性泌尿系感染的治疗及药学监护 (22)十三、脓毒症患者的抗感染治疗 (24)十四、侵袭性真菌病应对策略 (26)十五、多重耐药菌抗菌药物方案的优化 (28)一、以持续质控管理促进抗菌药物合理使用1.抗菌药物管理工作组由多部门、多学科共同合作，各部门职责、分工明确。
以下哪个部门不属于抗菌药物管理工作组成员（）A.医务B.感染科专家C.微生物专家D.后勤E.护理参考答案：D2.三级甲等医院抗菌药物使用强度不得超过（）A.25DDDsB.30DDDsC.40DDDsD.60DDDsE.没有规定参考答案：C3.住院患者抗菌药物使用率不能超过（）A.20%B.30%C.40%D.50%E.60%参考答案：E4.门诊患者抗菌药物使用率不能超过（）A.40%B.10%C.60%E.30%参考答案：D5.以下哪个药物不属于特殊使用级抗菌药物（）A.万古霉素B.亚胺培南西司他汀C.头孢他美酯D.替加环素E.卡泊芬净参考答案：C二、MDR革兰阴性菌感染HAP/VAP的抗菌药物治疗1.HAP/VAP抗感染疗效判断应根据（）A.患者的临床表现、影像学改变、感染标志物等因素综合判断B.临床表现C.影像学改变D.感染标志物E.PCT参考答案：A2.HAP非危重MDR菌感染低风险的患者，应进行（）治疗。
《2024年基于生物信息学发现肝细胞癌标志性miRNA及作用与机制研究》范文
《基于生物信息学发现肝细胞癌标志性miRNA及作用与机制研究》篇一一、引言肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma，HCC）是一种常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率均较高。
由于HCC的早期诊断困难，治疗手段有限，因此寻找有效的诊断标志物和治疗方法成为当前研究的重点。
近年来，随着生物信息学技术的发展，越来越多的研究开始关注microRNA（miRNA）在HCC发生、发展中的作用。
本文旨在通过生物信息学方法，发现HCC的标志性miRNA，并研究其作用与机制。
二、方法1. 数据收集与处理我们首先从公共数据库中收集了HCC相关的miRNA表达数据，包括正常肝组织、癌旁组织和HCC组织的miRNA表达谱数据。
然后，对数据进行预处理，包括数据清洗、归一化等步骤。
2. 差异表达分析利用生物信息学软件，我们对预处理后的数据进行差异表达分析，找出在HCC组织中显著差异表达的miRNA。
3. 靶基因预测与功能注释通过靶基因预测软件，我们预测了差异表达miRNA的靶基因，并对这些靶基因进行功能注释，了解其在HCC发生、发展中的作用。
4. 实验验证为了进一步验证生物信息学分析的结果，我们设计了一系列实验，包括细胞实验和动物实验，对关键miRNA和其靶基因进行验证。
三、结果1. 差异表达miRNA的筛选通过生物信息学分析，我们筛选出在HCC组织中显著差异表达的miRNA，包括上调和下调的miRNA。
2. 靶基因预测与功能注释我们预测了这些差异表达miRNA的靶基因，并对这些靶基因进行功能注释。
结果表明，这些靶基因主要参与细胞增殖、凋亡、侵袭和转移等过程，与HCC的发生、发展密切相关。
3. 实验验证结果通过细胞实验和动物实验，我们验证了关键miRNA及其靶基因在HCC发生、发展中的作用。
结果表明，这些miRNA及其靶基因的表达水平与HCC的发生、发展密切相关，可为HCC的诊断和治疗提供新的思路和方法。
四、讨论本研究通过生物信息学方法，发现了HCC的标志性miRNA，并研究了其作用与机制。
基于秀丽隐杆线虫MRSA感染模型的Brevinin-2家族抗菌肽筛选及治疗机制研究
基于秀丽隐杆线虫MRSA感染模型的Brevinin-2家族抗菌肽筛选及治疗机制研究基于秀丽隐杆线虫MRSA感染模型的Brevinin-2家族抗菌肽筛选及治疗机制研究摘要：金黄色葡萄球菌耐药性（MRSA）感染已成为全球范围内严重威胁公共卫生的问题。
本研究采用秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）MRSA感染模型，通过筛选抗菌肽库，鉴定出Brevinin-2家族抗菌肽，并深入研究其抗菌活性及治疗机制。
引言：MRSA是一种对多种抗生素产生耐药性的严重细菌感染，目前在医院感染中占有重要地位。
寻找新的抗菌药物，尤其是具有广谱活性和良好耐药性的抗菌肽，已成为治疗MRSA感染的重要策略。
方法：1.建立秀丽隐杆线虫MRSA感染模型：将感染的秀丽隐杆线虫与MRSA菌株同时培养，观察感染程度，确定感染时间和浓度。
2.抗菌肽库筛选：利用感染模型，将不同抗菌肽加入培养基中，观察其对MRSA感染模型的影响。
3.鉴定Brevinin-2家族抗菌肽：利用质谱分析等技术，鉴定筛选出的抗菌肽，并进行物理化学性质和结构分析。
4.抗菌活性测试：通过体外抗菌试验和细菌增殖抑制率实验，评估Brevinin-2家族抗菌肽的抗菌活性等。
5.治疗机制研究：通过测定线虫感染后的相关生理指标和基因表达水平，探究Brevinin-2家族抗菌肽的治疗机制。
结果：1.建立了可重复和稳定的秀丽隐杆线虫MRSA感染模型。
2.筛选出具有抗菌活性的Brevinin-2家族抗菌肽，并鉴定了其物理化学性质和结构。
3.Brevinin-2家族抗菌肽对MRSA具有较强的抗菌活性。
4.Brevinin-2家族抗菌肽通过影响细菌细胞膜的完整性、DNA 合成和蛋白质合成等，发挥其抗菌作用。
5. Brevinin-2家族抗菌肽可以显著减轻线虫感染后的炎症反应和死亡率。
讨论和结论：本研究通过秀丽隐杆线虫MRSA感染模型，筛选出具有抗菌活性的Brevinin-2家族抗菌肽，并对其治疗机制进行了深入研究。
腹腔感染的治疗
常见病原菌
大肠杆菌、克雷伯杆菌、肠球菌 大肠杆菌、克雷伯杆菌、脆弱类拟杆菌、梭菌属 大肠杆菌、克雷伯杆菌属、变形杆菌 大肠杆菌、铜绿假单胞菌和厌氧菌(拟杆菌属) 大肠杆菌、克雷伯杆菌属、肠球菌和脆弱拟杆菌 绝大多数为厌氧菌感染 更常见对铜绿假单胞菌、肠杆菌属等耐药菌株
第三型腹膜炎
继发性腹膜炎经治疗后症状仍持续或48小时 后症状复发
特点:
医院获得性感染 多为耐药菌 可能为肠道菌群易位
复杂腹腔感染(cIAI)
单纯腹腔感染：病灶可完全切除，仅需预防性使用 抗菌药物
复杂腹腔感染：感染源经外科处理后，仍残留细菌 ，需使用抗感染药物
严重腹腔感染：伴有脓毒症、重症脓毒症或脓毒症 休克的腹腔感染
推荐的抗菌治疗
阿莫西林/克拉维酸，或环丙沙星+甲硝唑 厄他培南或替加环素 哌拉西林/他唑巴坦 美罗培南或亚胺培南 +/-氟喹诺酮类 阿莫西林/克拉维酸，或环丙沙星+甲硝唑 替加环素 哌拉西林/他唑巴坦 美罗培南或亚胺培南 +/-氟喹诺酮类 哌拉西林+替加环素+氟喹诺酮类 哌拉西林+替加环素+棘白菌素，或美罗培南或亚胺培 南或 多利培南+替考拉宁+棘白菌素
KPC：耐碳青霉烯类抗生素的肺炎克雷伯杆菌
5.Rice LB et al. The Journal of Infectious Diseases 2008;197:1079-81; 6. http://www.who.int/world-health-day/zh/ 7. 胡付品等.中国感染与化疗杂志.2012;12(5):321-329.
一种诊断用生物标志物的应用[发明专利]
![一种诊断用生物标志物的应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/a6fccd5b7f21af45b307e87101f69e314332fabe.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202110064427.8(22)申请日 2021.01.18(71)申请人 中国农业大学地址 100083 北京市海淀区清华东路17号中国农业大学(东区)(72)发明人 李向东 张珊珊 (51)Int.Cl.C12Q 1/6883(2018.01)C12N 15/113(2010.01)(54)发明名称一种诊断用生物标志物的应用(57)摘要本发明提供一种多囊卵巢综合征诊断用miRNA生物标志物，所述miRNA生物标志物为miR ‑615‑5p。
本发明检测PCOS病人和健康对照的壁层颗粒细胞、卵丘颗粒细胞和血清中miR ‑615‑5p的表达，发现miR ‑615‑5p水平显著降低。
在人原代颗粒细胞和人卵巢颗粒细胞系KGN中过表达miR ‑615‑5p促进颗粒细胞增殖和雌激素的产生。
采用DHT(双氢睾酮)诱导小鼠多囊卵巢综合征小鼠模型，发现miR ‑615‑5p在多囊卵巢综合征模型小鼠卵巢中低表达。
本研究表明，miR ‑615‑5p可以作为多囊卵巢综合征的生物标志物，为临床制药提供理论基础。
权利要求书1页 说明书4页序列表2页 附图3页CN 112662752 A 2021.04.16C N 112662752A1.多囊卵巢综合征诊断用miRNA生物标志物，其特征在于，所述miRNA生物标志物为miR ‑615‑5p。
2.权利要求1所述的miRNA生物标志物在制备或筛选人多囊卵巢综合征的诊断及治疗药物中的应用。
3.权利要求1所述的miRNA生物标志物在制备人多囊卵巢综合征检测试剂中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测试剂选自用于southern印迹法、northern印迹法、PCR法、逆转录酶PCR法、实时定量PCR法、纳米阵列法、宏阵列法、放射自显影法或原位杂交法检测生物标志物miR ‑615‑5p的相关试剂。
超级微生物：全球健康的潜在威胁
超级微生物：全球健康的潜在威胁近年来，超级微生物的研究引起了科学界和公众的广泛关注。
所谓超级微生物，即对常规抗生素或抗菌药物产生耐药性，甚至具备多重耐药性的细菌和其他微生物。
这些微生物既可以是常见的致病菌，也可以是环境中潜在的病原体。
其产生与耐药性的传播，不仅给全球公共卫生带来了巨大挑战，也引发了对未来医疗及健康安全的深刻担忧。
超级微生物的发展背景超级微生物的崛起与多种因素息息相关。
首先，抗生素的广泛使用是造成耐药性产生的重要原因。
在过去的几十年中，抗生素在医学、农业以及兽医领域的过度使用，使得细菌经历了自然选择过程，演化出了抵御这些药物的能力。
其次，过度使用抗生素和不当使用抗生素（如不按照医生处方服用）导致了细菌的耐药性增加。
研究表明，在某些国家和地区，医疗环境中对于抗生素的滥用使得许多普通感染变得难以治疗。
此外，从动物源传播至人类的抗药性细菌，也是目前全球公卫工作面临的重要挑战。
随着全球化贸易和旅行的发展，耐药性微生物能够轻易地跨国界传播，加剧了全球健康风险。
超级微生物的主要类型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）MRSA是一种对β-内酰胺类抗生素（如青霉素）产生耐药性的金黄色葡萄球菌。
这种细菌常见于医院中，但随着社区传播也逐渐引发公众关注。
MRSA感染可能导致严重的医疗并发症，如心内膜炎、骨髓炎等。
耐多药结核分枝杆菌（MDR-TB）MDR-TB是对至少两种第一线抗结核药物（异烟肼和利福平）具有耐药性的结核分枝杆菌。
世界卫生组织（WHO）指出，MDR-TB已成为全球公共卫生的重要威胁，其控制面临巨大挑战。
克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）克雷伯氏菌是常见的医院获得性感染病原体之一，部分变异类型对多种抗生素表现出了显著耐药性。
其中，一些分离株产生了广谱β-内酰胺酶，使其对多种抗生素免疫，所致感染往往伴随较高的死亡率。
大肠杆菌（Escherichia coli）尽管大肠杆菌是肠道中的正常菌群，但部分株系如产超广谱β-内酰胺酶的大肠杆菌（ESBL-E. coli）却显示出强大的耐药能力。
基于新型生物标志物的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌静脉感染模型制作与治疗监测
基于新型生物标志物的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌静脉感染模型制作与治疗监测李静静;时凯悦;徐丛慧;位晓丹;米佳;姜文国;杨春华【期刊名称】《滨州医学院学报》【年(卷),期】2019(042)001【总页数】3页(P55-57)【关键词】金黄色葡萄球菌;替考拉宁;动物模型;降钙素原;Presepsin;髓系细胞触发受体-1【作者】李静静;时凯悦;徐丛慧;位晓丹;米佳;姜文国;杨春华【作者单位】滨州医学院临床医学院烟台 264003;滨州医学院临床医学院烟台264003;滨州医学院临床医学院烟台 264003;滨州医学院医药研究中心;滨州医学院医药研究中心;滨州医学院医药研究中心;滨州医学院医药研究中心【正文语种】中文【中图分类】R-33耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant staphylococcus aureus，MRSA)是一种临床上常见的革兰氏染色阳性致病菌，其临床检出率逐年上升，居医院感染病原菌首位[1]。
由MRSA引起的感染与乙型肝炎、艾滋病并列为世界范围内3大难解决的感染性疾病[2]。
MRSA的多重耐药性使得针对其治疗困难，且费用昂贵[3]。
因此，采用新型生物标志物早期监测感染，并及时予以治疗，将能够大大节省检测时间，提高对MRSA感染早期检测的灵敏度，对于MRSA感染现状的缓解具有重要的作用。
临床上常用的抗MRSA药物主要有糖肽类及恶唑烷酮类，前者是治疗MRSA感染的经典药物，临床上常用的是万古霉素和替考拉宁。
因为替考拉宁临床疗效可靠，不良反应较少[4]，所以本研究选用替考拉宁作为抗菌药物监测治疗效果。
降钙素原(procalcitonin，PCT)、Presepsin、髓系细胞触发受体-1(TREM-1)与感染的严重程度相关。
评价这三种新型生物标志物在检测MRSA感染中的参考价值，对于临床MRSA感染的治疗具有重要的指导意义。
为此，本研究建立了MRSA小鼠全身感染模型，并监测三种新型生物标志物含量变化以对建立的模型和治疗效果进行评价。
MRSA感染诊治策略
装置
金葡菌
外科伤口，蜂窝织炎疖， 烧伤创面感染
医院 医院或社区
需重视排除污染 多为甲氧西林耐药
株
医院内获得者多为 MRSA
肠球菌属
尿路感染，留置导尿管， 腹膜透析伴腹膜炎，泌尿 医院或社区 生殖系统手术或操作后
肺炎链球菌
社区获得性肺炎
社区
抗菌药物临床应用指导原则（2015版）
感染性心内膜炎主要病原菌
、蜂窝织炎、脓肿、感染疡、烧伤
骨关节炎－骨髓炎 脓毒性关节炎
人工关节 植入脊柱感染
尿路感染 腹腔感染 等
HA-MRSA与 CA-MRSA特性比较
Health care contact Mean age at infection Skin and soft tissue infections Antibiotic resistance
2005 ~ 2014 年 CHINET 金葡菌中 MRSA 检出率呈下降趋势
44.6
GPC=革兰阳性菌；MRSA=耐甲氧西林金黃色葡萄球菌
2014
2014
MRSA： 不同医院差别大 MRSE： 不同医院较一致 总体在下降
浙医二院 88.2
353/400
MRSA占临床分离金葡菌的比例高达50％以上
SCCmec Type IV, V
USA 300 and 400 Frequent
SCC = Staphylococcal cassette chromosome PVL = Panton Valentine leukocidin
院内金葡菌感染危险因素
• 免疫力低下 • 大手术继发的感染 • 多发伤继发的院内感染 • 大面积烧伤 • 褥疮 • 静脉导管、外周血管留置
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠腹膜炎模型的建立
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠腹膜炎模型的建立孙琦;王湘雨;陈诗琪;司徒莉芳;赵卫;万成松【期刊名称】《生命科学研究》【年(卷),期】2015(19)1【摘要】“超级细菌”耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)是诱发连续腹膜透析患者腹膜炎的常见细菌,且治疗困难.目前缺少MRSA腹膜炎动物模型.腹腔注射2×109 ～2×1010 CFU/mL 7组不同浓度的MRSA感染小鼠,观察小鼠死亡时间,测定肝脏与脾脏细菌定植量,进行肝、脾病理分析,确定适宜的建模浓度.研究发现,小鼠感染细菌浓度最小致死剂量为每只2×109 CFU,最适建模浓度为每只1.4×109CFU.结果表明建立了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠腹膜炎模型,为MRSA致腹膜炎的致病机制研究、疫苗的研制提供实验基础.【总页数】5页(P54-58)【作者】孙琦;王湘雨;陈诗琪;司徒莉芳;赵卫;万成松【作者单位】南方医科大学公共卫生与热带医学学院BSL-3实验室,中国广东广州510515;南方医科大学公共卫生与热带医学学院BSL-3实验室,中国广东广州510515;南方医科大学公共卫生与热带医学学院BSL-3实验室,中国广东广州510515;南方医科大学公共卫生与热带医学学院BSL-3实验室,中国广东广州510515;南方医科大学公共卫生与热带医学学院BSL-3实验室,中国广东广州510515;南方医科大学公共卫生与热带医学学院BSL-3实验室,中国广东广州510515【正文语种】中文【中图分类】R-33【相关文献】1.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌肺炎小鼠感染模型的建立与评估 [J], 王星;周文江;沈艳;刘芳;杨华;高谦;王德成2.大肠杆菌致小鼠急性腹膜炎模型的建立 [J], 孙伟;刘晓梅;周峰;汤仁仙3.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠全身感染模型的建立与评价 [J], 王婷婷;左钱飞;刘开云;廖亚玲;解庆华;邹全明;曾浩4.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌皮肤脓肿小鼠感染模型的建立与评估 [J], 王德成;王星;周文江;彭秀华;高谦5.小鼠急性腹膜炎模型建立的方法 [J], 汪丽佩;张婷因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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取5g胰蛋白胨(TRYPTONE)，2.5g酵母粉(YEAST EXTRACT)，5g氯化钠倒入500mL试剂瓶中混匀，加入蒸馏水至五百毫升，121°C下，高压 20分钟后储存备用。
3.2固体培养基的配制
在两个高压过的试剂瓶上分别标注名称及日期，取胰蛋白胨（TRYPTONE)5g，酵母粉(YEAST EXTRACT)2.5g，NACL5g，琼脂粉（REGULAR AGAROSE G-10)7.5g，倒入500 mL试剂瓶中混匀，，121°C下，高压20min左右，待冷却至50-60°C后，倒入平皿中制版。
(7)查找文献小鼠感染细菌最小致死剂量浓度为约为每只2×109CFU，适合建模浓度约为每只1.4×109CFU[8]，当菌液OD值为0.258时可通过腹腔注射使小鼠造成全身感染，将重悬后的菌液稀释，用紫外分光光度计在波长为600nm条件下测量其OD值，直至稀释至菌液的OD值为0.258，此时菌液的浓度1.0×109CFU/mL。测量时，取0.1ml菌液至离心管中，3000r离心5分钟，倒掉上清液后用0.9％氯化钠溶液洗涤、沉淀、重悬在测量。
2实验材料
2.1菌株
耐药金黄色葡萄球菌来自于滨州医学院附属医院临床分离。
2.2实验试剂
表1实验试剂及来源
实验试剂 来源
MRSA（SCCmec Ⅲ型）
雌性小白鼠
胰蛋白胨（TRYPTONE）
普通国产试剂
2.3实验器材
表2实验的器材及来源
主要仪器 型号 来源
微量台式离心机
高速大容量离心机
电子天平
紫外可见分光光度计
超净工作台
移液枪
全自动高压灭菌器
高压蒸汽灭菌器
电热鼓风干燥箱
德国Eppendorf AG公司
瑞士METTER TOLEDO公司
上海现科分光仪器有限公司
苏州苏洁净化设备公司
德国RAININ公司
日本SANYO公司
日本Panasonic公司
上海pendorf公司
美国BIO-RAD公司
美国基因公司
3.实验试剂的配制
4.实验步骤
4.1细菌的复苏
⑴首先将在-80°冰箱中存放的MRSA放至室温进行复苏
⑵取1支50mL离心管写好日期和用途，向里倒入25mL液体培养基
⑶用移液枪取10ulMRSA（SCCmecⅢ型）于离心管中，放入摇床中37 ℃，200r/min，摇10小时。
⑷用接种环将混匀的接种液接种在固体培养基的培养皿中，倒置放于37°恒温箱中培养6小时(在超净工作台上进行平板的涂布和倒置)。见图1
3.3替考拉宁的配制
取替考拉宁15mg，生理盐水10mL于15mL离心管中，慢慢混匀至替考拉宁粉末溶解，避免产生泡沫，使用0.22um滤膜过滤，封口后写上日期和名称，冷藏备用。
3.4氨苄西林的配制
取氨苄西林15mg，生理盐水10mL于15ml离心管中，慢慢混匀至氨苄西林粉末溶解，避免产生泡沫，使用0.22um滤膜过滤，封口，冷藏备用。
⑸待培养皿中有菌落生成，挑取一个菌落至含有30ml液体培养基的离心管中，放入摇床中37 ℃，200r/min。摇菌10小时。
⑹得到的细菌的混悬液在3000r条件下用离心机离心5分钟，倒掉上清液，用0.9％氯化钠溶液洗涤沉淀，稀释混悬后600nm条件下测量OD值。每毫升菌液活菌数=平均菌落生长数×稀释倍数
腹腔感染模型是新药研究中常用的模型，可造成动物的全身感染，该模型常用来观察动物的生存数和生存时间，计算药物的治疗指数和安全系数，进而来评价药物的治疗时间与安全性。生物标志物可以能被客观测量的指标，能作为正常生物学过程、病理改变、治疗过程中药物反应的指标。由于分子生物学理论及技术不断发明与利用，疾病发生、发展的分子机制越来越明朗化，多种因素可共同导致基因、组织发生变化、进而表达、蛋白质等活性物质。该活性物质分泌到组织或者体液中后可被多种技术研究检测、发现，进而成为特异的生物标志物[3]。降钙素(procalcitonin，PCT)是一类蛋白质生物标志物[4]，是降钙素的前体，但是它在脓毒症和感染过程中的调节机制不同于降钙素[5]。sCD14切割后N端的片段Presepsin(sCD14-ST)，被认为在评估脓毒症严重程度和预后等方面具有高敏感和特异性，并能更准确的指导脓毒症抗菌药的应用[6]。TREM-1是一个与机体炎症反应发生发展密切相关的免疫分子，是一种表达在细胞表面的跨膜糖蛋白，可选择性表达于血液中性粒细胞和单核细胞[7]。本课题通过在小鼠体内腹腔注射MRSA菌株，建立MRSA小鼠感染模型，并用酶联免疫吸附剂测定实验(ELISA)对小鼠血清中三种生物标志物(PCT、Presepsin、sTREM-1)的表达水平进行检测，分析小鼠模型的验证感染情况，同时还检测了氨苄西林和替考拉宁对小鼠炎症感染的治疗效果。该实验对MRSA小鼠感染模型的建立和MRSA感染的临床临床治疗过程起到了重要的指导作用。
酵母（YEAST EXTRACT)
氨苄西林
替考拉宁
氯化钠
琼脂粉
酒精（75%）等 滨医附院临床分离得到
济南朋悦实验动物繁育有限公司
英国OXOID公司
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大连美仑生物技术有限公司
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天津市瑞金特化学品有限公司
scientific research special
1．前 言
近年来随着人们对药品的需求量增大还有临床药品的滥用导致了细菌的耐药性越来越严重，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌作为临床中最常见的耐药菌。数据统计显示: 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，MRSA)是临床上导致病患感染菌血症最常见病原菌之一，仅低于大肠杆菌和伯霍尔德杆菌，感染致死率高达48%[1]。耐甲氧西林金黄色葡萄菌(MRSA)占金黄色葡萄球菌的比例约77.68%[2]。MRSA感染目前是临床研究的重点和难点。
-80°C 立式超低温冰箱
恒温摇床
定量PCR仪
超微量分光光度计 Heraeus Fresco 21
5804 R
ME3002E
756
DL-CJ-2NDI
G1200922M
MLS-3750
MLS-3781L-PC
DFA-7000
906
Innova43R
IQ5
Np2000C 美国Thermo Fisher公司