植入前遗传学诊断
高通量基因测序植入前胚胎遗传学诊断和筛查技术规范
（１）患者的姓名、年龄、采用本项技术的适应证；
（２）胚胎的编号、胚胎的状态、采样日期和报告日期；
（３）检测的项目和检测方法以及测试的检测级别分类(A、B、C)；
（４）检测报告应对每个被检胚胎的检测结果以标准的专业方式描述。常染色体隐性遗传性基因疾病的PGD应明确是正常、致病基因杂合子或纯合子，或致病基因复合杂合子（重型）胚胎；常染色体显性遗传性疾病的PGD应明确是正常或重型胚胎，染色体病的PGD以是否出现易位和非易位染色体数目和／或结构的改变来表示，PGS以是否出现染色体非整倍体的改变来表示。必要时根据检测结果辅以其它的描述或说明；
２．禁忌证：有如下情况之一者，不得实施PGD技术：
（１）患有《母婴保健法》规定的不宜生育的遗传性疾病；
（２）患有目前无法进行胚胎植入前遗传学诊断的遗传性疾病；
（３）其它不适宜实施辅助生殖技术的情况。
二、工作程序
对具备适应证的患者，医师应在其夫妇双方签署知情同意书后，予以核查并备案相关证件，进行术前检查并排除禁忌证；建立病历档案；按辅助生殖技术程序促排卵后经阴道穿刺取卵，行卵胞浆内单精子注射授精，胚胎体外培养，择时行胚胎活检，获取样本进行高通量测序、生物信息学分析，确定胚胎的相关遗传性状是否适合进行胚胎移植，适时向接受本项技术的夫妇双方报告并解释胚胎的高通量测序检测结果，选择胚胎进行宫腔内移植；成功妊娠后须跟踪患者妊娠情况，择时进行产前诊断，根据产前诊断结果作相应处理，并随访妊娠最终结局和子代情况。具体流程可参考附件１制定。
二、设备条件
机构须具备细胞遗传学实验诊断的设备和上述第一部分第一条第３款所要求的相应设备。在此基础上，机构应同时具备专业的高通量测序技术相应的核心设备（如与第三方合作可由第三方提供），该设备由经卫生行政管理部门批准试点或正式开展高通量测序技术临床应用的单位生产。各种设备的种类、数量须与实际开展的项目及工作规模相匹配。
胚胎移植前遗传学诊断 PGD
胚胎移植前遗传学诊断 PGD胚胎移植前遗传学诊断(PGD)起源于90年代初，是未来父母防止胚胎受到异常基因或染色体影响的一种措施.根据未来父母的个人需求,有各种可用的胚胎移植前遗传学诊断方式.通过对试管婴儿周期中的卵子或胚胎进行基因测试,经过分析并且诊断为正常的胚胎将被移植到母亲的子宫，在那里，胚胎有希望着床并诞生出一个健康的孩子来。
目前，我们能够对多种遗传学状况进行胚胎移植前遗传学诊断,包括对单基因异常或染色体异常的诊断.玉兰生殖遗传研究所自1990年PGD技术问世以来,就一直实施胚胎移植前遗传学诊断。
我们是极体剥离技术的开创者，并且是世界上提供PGD服务最活跃的医疗中心之一.我们的工作人员在胚胎移植前遗传学诊断的技术领域有深厚的经验。
PGD怎样才能使患者收益?胚胎移植前遗传学诊断可以大大减少您的婴儿受到异常染色体与特定遗传病影响的机会。
使用PGD技术,我们可以测试出许多种不同的疾病，包括非整倍体，单基因病和染色体易位。
许多夫妇因非整倍体的问题而请求胚胎移植前遗传学诊断,如，唐氏综合症，第18对染色体三体症，第13对染色体三体症和特纳综合症。
这些疾病通常不会在家族中出现(即非家族遗传而来)。
然而，高达60%的早期流产是由于非整倍体引起的，非整倍性出现的风险随着女性的年龄增加而提高.实施非整倍体PGD 可以增加夫妇怀孕的机会，减少流产风险，增加他们将健康的试管婴儿的孩子带回家的整体机率。
其他夫妇因特定遗传病而请求胚胎移植前遗传学诊断，这类遗传病可能会在他们的家族中出现，如泰伊-萨克斯二氏病，囊肿性纤维化，肌肉萎缩症，X染色体易损综合症或脊髓性肌萎缩.我们的中心拥有对许多种单基因疾病进行测试的丰富经验，其中包括对罕见的遗传综合症的测试。
对于个人携带染色体易位的病人，胚胎移植前遗传学诊断可用于测试其卵和胚胎得知其具体的易位情况。
这大大降低流产和与不平衡的染色体易位相关联的新生儿出生缺陷和智力迟钝的风险。
应用二代测序技术进行胚胎植入前遗传学筛查及诊断的基本原理
应用二代测序技术进行胚胎植入前遗传学筛查及诊断的基本原理LI Li-li;SUN Nan;ZHANG Wen-xin【摘要】辅助生殖技术的发展已帮助越来越多不孕不育的夫妇解决生育难题,而胚胎植入前遗传学筛查(PGS)及胚胎植入前遗传学诊断(PGD)进一步排除了存在遗传缺陷的胚胎,并选择健康胚胎进行植入,从而极大降低了新生儿患遗传性疾病的概率.这两项技术最初采用基于分子杂交或聚合酶链式反应(PCR)的检测方法,随后微阵列技术也被应用其中.随着人类基因组计划的完成,DNA测序技术进入高速发展的阶段,二代测序(NGS)采用鸟枪法为基本测序策略,结合生物信息学工具,以高通量、较低成本、检测项目覆盖面广、自动化程度高、可检测未知片段等优势,正不断扩大在PGS/PGD中的应用,同时也对辅助生殖技术产生了深远的影响.【期刊名称】《中国医学装备》【年(卷),期】2019(016)007【总页数】8页(P7-14)【关键词】二代测序技术;胚胎植入前遗传学筛查;胚胎植入前遗传学诊断【作者】LI Li-li;SUN Nan;ZHANG Wen-xin【作者单位】;;【正文语种】中文【中图分类】R394-3遗传学和基因组学的快速发展对人类生命健康及繁衍的影响日益深远，对多种常见和罕见疾病的研究有助于对应预防、检测及治疗方法的开发，从而提高患者及其家人的生活质量。
在不孕不育等问题日益严峻的情况下，辅助生殖技术(assisted reproductive technology，ART)应运而生并被采用于个性化的生育治疗策略，帮助受生育难题困扰的家庭。
其中，植入前遗传学筛查(preimplantation genetic screening，PGS)主要针对高龄、反复助孕失败、反复自然流产等患者，进行植入前胚胎的染色体畸变检测，用于筛查和丢弃染色体畸变的胚胎，保证受孕者所植入的胚胎具有正常染色体组的同时，解决因胚胎染色体畸变而导致的植入失败和反复流产现象，并提高妊娠率[1-2]；植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis，PGD)则主要针对父母本已患有明确遗传病或携带其致病基因，在种植前对胚胎进行相应遗传学诊断，主要包括单基因遗传病和染色体病(如罗氏易位、平衡易位等)，通过选择无致病因素的胚胎进行植入，以提高生育健康婴儿的概率[3]。
第三代试管婴儿技术
第三代试管婴儿技术第三代试管婴儿也称胚胎植入前遗传学诊断(PGD)，指在IVF-ET的胚胎移植前，取胚胎的遗传物质进行分析，诊断是否有异常，筛选健康胚胎移植，防止遗传病传递的方法。
第三代试管婴儿已经可以实现对孩子性别的筛选，但因为涉及道德以及男女比例失衡问题，很多国家是禁止对孩子进行性别的筛选的。
目前已知的可以合法选择性别的地方有美国和巴厘岛，泰国也因为2014年的代孕事件被禁止性别筛选。
一、第三代试管婴儿过程1.促排卵治疗由于不是每个卵子都能受精，不是每个受精卵都能发育成有活力的胚胎，因此要从女性体内获得多个卵子，才能保证有可以移植的胚胎，这就需要对女性进行促排卵治疗。
2.取卵医生在B超引导下应用特殊的取卵针经阴道穿刺成熟的卵泡，吸出卵子。
取卵通常是在静脉麻醉下进行的，因此妇女并不会感到穿刺过程导致的痛苦。
3.体外受精精子的获取：当女性取卵时，男性进行取精。
精液经过特殊的洗涤过程后，将精卵放在特殊的培养基中，以期自然结合。
这就是所谓的常规受精方式。
4.胚胎移植受精后数日，应用一个很细的胚胎移植管，通过子宫颈将最好的胚胎移入母体子宫，根据年龄、胚胎质量和既往IVF的结局，决定移植胚胎的个数，通常移植2～3个胚胎。
近年来，为了降低多胎妊娠率，一些中心选择单胚胎移植，或最多移植2个胚胎。
由于胚胎移植管很细，医生动作轻柔，所以患者通常不会有任何痛苦。
5.黄体支持由于应用了GnRH激动剂/拮抗剂和促排卵药物，以及取卵导致的卵泡颗粒细胞的丢失，妇女在取卵周期通常存在黄体功能不足，需要应用黄体酮和/或绒毛膜促性腺激素进行黄体补充/支持。
如果没有妊娠，停用黄体酮，等待月经来潮。
如果妊娠了，则继续应用黄体酮，通常至B超看到胎心后3周。
6.妊娠的确定在胚胎移植后14天测定血清HCG，确定是否妊娠。
在胚胎移植后21天再次测定血清HCG，以了解胚胎发育的情况。
在胚胎移植后30天经阴道超声检查，确定是否宫内妊娠，有无胎心搏动。
胚胎植入前遗传学诊断筛查技术专家共识
胚胎植入前遗传学诊断/筛查技术专家共识随着辅助生殖技术临床开展规模的日益扩大，以及细胞及分子遗传学诊断技术的快速发展，胚胎植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis，PGD)和植入前遗传学筛查(preimplantation genetic screening，PGS)技术迎来了快速的增长和发展。
为使该项技术更加规范且有效地实施，经中国妇幼保健协会生育保健专业委员会、中国医师协会生殖医学专业委员会、中国医师协会医学遗传学分会、中国遗传学会遗传咨询分会和中国妇幼健康研究会生殖内分泌专业委员会专家讨论，结合国际发展动态和国内临床应用的实际情况，达成以下临床和实验室专家共识。
第一部分PGD/PGS的临床流程与质控1 适应证和禁忌证1.1 PGD的适应证1.1.1 染色体异常夫妇任一方或双方携带染色体结构异常，包括相互易位、罗氏易位、倒位、复杂易位、致病性微缺失或微重复等。
1.1.2 单基因遗传病具有生育常染色体显性遗传、常染色体隐性遗传、X连锁隐性遗传、X 连锁显性遗传、Y连锁遗传等遗传病子代高风险的夫妇，且家族中的致病基因突变诊断明确或致病基因连锁标记明确。
1.1.3 具有遗传易感性的严重疾病夫妇任一方或双方携带有严重疾病的遗传易感基因的致病突变，如遗传性乳腺癌的BRCA1、BRCA2致病突变。
1.1.4 人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)配型曾生育过需要进行骨髓移植治疗的严重血液系统疾病患儿的夫妇，可以通过PGD选择生育一个和先前患儿HLA配型相同的同胞，通过从新生儿脐带血中采集造血干细胞进行移植，救治患病同胞。
1.2 PGS的适应证近期高通量遗传检测技术(PGS 2.0版)的研究和发展，对PGS的临床意义提出了新的质疑，包括不同程度和部位胚胎染色体异常嵌合型的存在、临床检测技术的精准性、对移植胚胎的选择和放弃的标准、PGS的活产率计算方式及其应用价值等，提示PGS的循证证据尚需进一步的研究和验证，其指征也面临修正和更新。
胚胎植入前遗传学诊断
胚胎植入前遗传学诊断(Preimplantation Genetic Diagnosis ,PGD)一、定义胚胎种植前遗传学诊断(PGD)就是指在体外受精过程中,对具有遗传风险患者得胚胎进行种植前活检与遗传学分析,以选择无遗传学疾病得胚胎植入宫腔,从而获得正常胎儿得诊断方法,可有效地防止有遗传疾病患儿得出生。
植入前遗传学诊断就是随着人类辅助生殖技术,即“试管婴儿”技术发展而开展起来得一种新技术,它就是产前诊断得延伸,遗传学诊断得又一更有希望得新技术。
二、意义(一) 对高龄孕妇与高危妇女进行PGD可以有效地避免遗传病患儿得出生。
(二) 可以有效地避免传统得产前诊断技术,对异常胚胎进行治疗性流产,避免中期妊娠遗传诊断及终止妊娠所致得危险及痛苦。
(三) ＰＧＤ技术得产生与完善可以排除遗传病携带者胚胎,阻断致病基因得纵向传递,从而降低人类遗传负荷。
三、适应征理论上只要有足够得序列信息,ＰＧＤ能针对任何遗传条件进行诊断,即凡就是能够被诊断得遗传病都可以通过ＰＧＤ来防止其患儿出生。
进行PGD得主要对象就是可能有遗传异常或高危遗传因素,需要产前诊断得病例,尤其就是可能同时具有两种以上不同得遗传异常情况。
ＰＧＤ现已用于一些单基因缺陷得特殊诊断,包括Duchenne型肌营养不良、脆性Ｘ综合征、黑朦性白痴(Tay Sachsdiseade)、囊性纤维病(cysticfibrosis)、Rh血型、甲型血友病、镰型细胞贫血与地中海贫血、进行性营养不良、新生儿溶血、21抗蛋白缺乏症,、粘多糖贮积症(ＭＰＳ)、韦霍二氏脊髓性肌萎缩(Werding Hoffman disease),还有染色体异常如Down’S综合征、18三体,罗氏易位等。
四、植入前遗传学诊断得取材可从胚胎着床前各个阶段活检取样,获取其遗传物质信息进行诊断。
目前多采用激光打孔、机械切割或Tyrode酸化打孔后吸出细胞得方法取材。
(一)极体极体细胞可以使用第一极体或第二极体,它们在胚胎发育与合子形成中就是非必须得,因而不影响卵子受精与正常发育,且不会引起伦理学上得争议。
高通量基因测序植入前胚胎遗传学诊断和筛查技术规范
一、适应证和禁忌证
１．适应证：（１）高通量测序PGD的适应证：包括多种遗传疾病如基因性疾病、非平衡的染色体结构异常、染色体数目异常，以及染色体微小片段插入、缺失与重复等；（２）高通量测序PGS的适应证：自然流产≥3次、或2次自然流产且其中至少１次流产物检查证实存在病理意义的染色体或基因异常的患者，反复种植失败（移植优质胚胎３次及以上，或移植不少于10个可移植胚胎）的患者，也可用于>38岁的高龄且需要采用辅助生殖技术的患者。
４．机构可根据自身条件独立开展本项检测，也可择优与经卫生行政管理部门批准的高通量测序技术临床应用于胚胎植入前遗传学诊断的试点或正式运行的医学检验机构签订合作进行本项检测的服务协议，将测序交由对方进行。
（１）独立开展本项检测的机构，必须采取必要措施保证本项技术的质量并定期进行评价，按本规范开展工作。
（２）与上述合作医学检验机构在本机构内共建联合实验室或交由上述合作方进行本项检测的医疗机构，由双方合作开展本项技术。医疗机构与合作方须签订合作协议，明确双方权责：
二、设备条件
机构须具备细胞遗传学实验诊断的设备和上述第一部分第一条第３款所要求的相应设备。在此基础上，机构应同时具备专业的高通量测序技术相应的核心设备（如与第三方合作可由第三方提供），该设备由经卫生行政管理部门批准试点或正式开展高通量测序技术临床应用的单位生产。各种设备的种类、数量须与实际开展的项目及工作规模相匹配。
①对外合作的医疗机构必须是符合本规范第一部分基本要求所规定的医疗机构；
②医疗机构负责临床医疗行为，包括病例的筛选、PGD/PGS方案的确定、检测前的咨询、签署知情同意书、样本采集、报告签署和发放、结果解释、临床处理、质量评价、医疗风险管理等；
胚胎植入前遗传学诊断
囊胚活检
• D5-6天胚胎发育到囊胚阶段后，活检囊胚滋养层细胞进行 遗传学检测。
• 优点： 不影响将要发育成胎儿的内细胞团的发育； 可检测细胞数较多，检测失败概率降低； 对SNP-array而言，能大大减低费用。
groups,includingQiao’s,aresteppingupefforts
street.Inside,about50physiciansonher
Theconditionsthereareripe:geneticdiseases toimprovethetechnology,increaseawareness
centre that she runs blocks the doorway aroundtheworldhasgenerallybeenslow,in well-equippedandpowerfulclinical-research
and extends some 80 metres down the China,itisstartingtoexplode.
活检细胞移入EP管
全基因组扩增 全基因组扩增产物
关键技术④： 对全基因组扩增产物的全基因组测序
关键技术⑤： SNP芯片技术
二、植入前遗传学诊断和筛查的临床应用
遗传组学分析
CHINA’S PUSH
FOR
BETTER BABIES
Acampaigntoincreasepreimplantationgenetic diagnosiscouldputthecountryonthepath towardseliminatingcertaindiseases.
胚胎行植入前遗传学诊断后妊娠并分娩一例
１ ９ 年 ， 国 的Ｈ ｎ ｙｉｅ … 用 聚合 酶链 Ｃ 技 术 扩 增 ｘ 连 锁 疾 病妇 女 体 外 受 精 胚 胎 Ｐ Ｒ） 一 的Ｙ 色体 长臂 特异 重 复序 列 ，首 次成 功 对胚 胎进 染 行 了性 别诊 断 ， 得 了正 常女婴 。 获 随后 Ｐ 技 术逐 渐 ＧＤ 广 泛应 用 于 多种 染 色 体 疾 病 和 部 分 单 基 因 遗 传 病 的夫 妇 ， 过对 这些 夫 妇 的配 子 或胚 胎 进 行相 应 遗 通 传 学 检测 ， 择 正 常 胚 胎 移 植 回母 体 宫 腔 ， 样 就 选 这
（ Ｉｔ ｐ ｏ ａ ｈ Ｆ ｍ ｌｎ，０ ２， ：０ ４ ２） Ｉ ｎ ｒｄＨｅｈ ／ ａ Ｐａ ２ １ ３１ ４ ４， １ ， Ｒｅ
１ 病例 报告
声 显示 宫 内妊娠 ， 胎囊 ， 见胎芽 及胎 心 。妊 娠 中 单 可
患 者 女 ，９ 。 因 稽 留流 产 后 不 孕 半 年 ， ２岁 于
示 ，枚 均 为正 常男性 胚胎 。移植 ３ ５ 枚胚 胎 ， 存 ２ 。 冻 枚 胚 胎移 植 后 第 １天 ， ｈ Ｇ ７ ｕ。移植 后 ４ 超 ４ 血 Ｃ 为４ ２Ｉ 周
作者单位 ：０ １０ 天津市 中心妇产科医院生殖 医学 中心 ３００ 通信作者 ： 张云山 ， － ａｌｔ ｙ＠ｈｔ ｉｃｒ Ｅ ｍ ｉ：ｚｓ ｏ ｌ ｏ ｊ ｍａ ． ｎ
２ 卵裂球 。固定 后进 行荧 光原位 杂交 （ＩＨ）探 针 个 ＦＳ ， 选 用 美 国Ｖ ｓ 公 司生 产 的性 染 色体 着 丝 粒探 针 ， ｙｉ ｓ ｘ
Ｋｉ ｆ ｔ ￣合征 ，个女孩为Ｘ Ｘ ｌｅ ｌｒ ｎ ｅｅ １ Ｘ 嵌合型 ， 其余５ 个男 孩 和３ 女孩核 型及 表型 未见 异常 。 Ｉ ＸＸ 嵌 合 型 个 ｛ ￣ Ｘ 的表型正常 的女性生育 了一个双倍体／ 四倍体嵌合
植入前遗传学诊断的研究现状及展望
植入前遗传学诊断的研究现状及展望（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）遗传性疾病已经成为威胁人类健康的主要疾病之一。
在没有找到一种有效的治疗方法之前，用产前诊断技术预防遗传病患儿的出生，是达到减少乃至杜绝遗传病发生的主要途径。
本世纪60年代以来，羊膜腔穿刺技术、绒毛膜取样技术已经常规地应用于围产儿监测，有效地减少了遗传病患儿的出生,同时产前诊断技术本身也得到了不断的发展，主要表现在两个方面：无创性产前诊断及植入前遗传学诊断（preimplantationgeneticdiagnosis,PGD)。
PGD指对配子或移入到子宫腔之前的胚胎进行遗传学分析，去除有遗传缺陷的配子或胚胎。
它可以有效地避免传统的产前诊断技术对异常胚胎进行治疗性流产的要求，因而受到广泛关注。
1989年，英国Handyside成功地用聚合酶链反应（PCR）技术分析卵裂球的性别构成，完成了世界上第一例PGD诊断，开创了产前诊断的新纪元。
进入90年代，植入前诊断技术有了飞速发展。
1994年，Monne用荧光原位杂交(fluorescentinsituhybridization，FISH)技术，在植入前诊断染色体非整倍体及胚胎性别获得成功。
此后，多重PCR，荧光PCR，多色FISH等技术，特别是1999年以来开展的间期核转换（interphasenuclerconversion)技术，全基因组扩增（wholegenomeamplification,WGA），比较基因组杂交(comparativegenomichybridization，CGH)技术相继用于PGD，进一步促进了该技术的研究和应用。
目前在全世界范围内，包括我国在内，已有18个国家，50多个PGD中心在从事相应的研究，已经分娩的100多例新生儿发育良好，初步证实PGD是一种安全、可靠的产前诊断技术。
一、PGD的研究进展1．取材途径：PGD是指在胚胎移入到宫腔之前的诊断。
(整理)胚胎植入前遗传学诊断
胚胎植入前遗传学诊断(Preimplantation Genetic Diagnosis ,PGD)一、定义胚胎种植前遗传学诊断(PGD)是指在体外受精过程中，对具有遗传风险患者的胚胎进行种植前活检和遗传学分析，以选择无遗传学疾病的胚胎植入宫腔，从而获得正常胎儿的诊断方法，可有效地防止有遗传疾病患儿的出生。
植入前遗传学诊断是随着人类辅助生殖技术，即“试管婴儿”技术发展而开展起来的一种新技术，它是产前诊断的延伸，遗传学诊断的又一更有希望的新技术。
二、意义（一）对高龄孕妇和高危妇女进行PGD可以有效地避免遗传病患儿的出生。
（二）可以有效地避免传统的产前诊断技术，对异常胚胎进行治疗性流产，避免中期妊娠遗传诊断及终止妊娠所致的危险及痛苦。
（三）ＰＧＤ技术的产生与完善可以排除遗传病携带者胚胎，阻断致病基因的纵向传递，从而降低人类遗传负荷。
三、适应征理论上只要有足够的序列信息，ＰＧＤ能针对任何遗传条件进行诊断，即凡是能够被诊断的遗传病都可以通过ＰＧＤ来防止其患儿出生。
进行PGD的主要对象是可能有遗传异常或高危遗传因素，需要产前诊断的病例，尤其是可能同时具有两种以上不同的遗传异常情况。
ＰＧＤ现已用于一些单基因缺陷的特殊诊断，包括Duchenne型肌营养不良、脆性Ｘ综合征、黑朦性白痴(Tay Sachsdiseade)、囊性纤维病(cysticfibrosis)、Rh血型、甲型血友病、镰型细胞贫血和地中海贫血、进行性营养不良、新生儿溶血、21抗蛋白缺乏症，、粘多糖贮积症(ＭＰＳ)、韦霍二氏脊髓性肌萎缩(Werding Hoffman disease)，还有染色体异常如Down’S 综合征、18三体，罗氏易位等。
四、植入前遗传学诊断的取材可从胚胎着床前各个阶段活检取样，获取其遗传物质信息进行诊断。
目前多采用激光打孔、机械切割或Tyrode酸化打孔后吸出细胞的方法取材。
（一）极体极体细胞可以使用第一极体或第二极体，它们在胚胎发育和合子形成中是非必须的，因而不影响卵子受精和正常发育，且不会引起伦理学上的争议。
胚胎植入前遗传学诊断名词解释
胚胎植入前遗传学诊断名词解释1. 胚胎植入前遗传学诊断概述胚胎植入前遗传学诊断（Preimplantation Genetic Diagnosis, PGD）是一种在试管受精（体外受精）胚胎发育到培养囊胚阶段前，对胚胎进行遗传学分析和筛查的技术。
通过PGD，可以获得胚胎的遗传信息，以便筛查某些遗传病、染色体异常或遗传性疾病的携带者。
PGD通常结合辅助生殖技术，如体外受精（IVF），旨在选择出健康的胚胎用于胚胎植入。
2. PGD的应用范围2.1 遗传病筛查•单基因病筛查：通过对胚胎进行遗传学诊断，可以检测出携带有单基因遗传病的胚胎，如囊胞性纤维化等。
携带有遗传病基因的胚胎可以被排除，以减少疾病遗传给下一代的风险。
•染色体异常筛查：染色体异常是导致胚胎停育、流产和先天性异常的主要原因之一。
通过PGD，可以检测出染色体异常的胚胎，并选择正常的胚胎进行植入，提高妊娠成功率。
2.2 染色体易位和平衡易位携带者筛查•对于染色体易位或平衡易位携带者，他们自身可能没有明显疾病症状，但易位染色体的组合可能会导致异常的胚胎发育，增加流产风险。
PGD可以帮助筛查携带易位染色体的胚胎，选择正常胚胎以减少流产的风险。
2.3 个性化医学•除了遗传病筛查外，PGD还可以用于选择具有特定基因型的胚胎，以满足父母的个人需求。
例如，一些夫妇可能希望选择具有特定基因特征的胚胎，如造血干细胞移植所需的HLA配型相匹配的胚胎。
3. PGD的技术原理和流程3.1 胚胎植入前的胚胎活检技术•PGD通常需要在体外受精后的囊胚阶段进行胚胎活检。
胚胎活检可以通过取出囊胚的一小部分细胞进行遗传学分析。
3.2 全基因组扩增技术（Whole Genome Amplification, WGA）•WGA是一种将少量胚胎细胞的基因组DNA扩增到足够数量进行遗传学分析的技术。
常用的WGA方法包括PCR和多位点连锁扩增（Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification, MLPA）。
遗传elearning题库主观题
第一章1．试述遗传病的主要特点。
2．试述遗传病的种类。
第二章3. 试述基因定义的沿革。
4. 简述断裂基因的特点。
5. 说明RNA编辑的生物学意义。
6. 试述miRNA与siRNA之间异同点。
7. 简述蛋白质合成过程。
8. 简述核糖体上与蛋白质合成有关的结合位点与催化位点。
9. 何谓突变，它包括哪两种类型？10. 基因突变的特征是什么？简述其分子机制。
11. 紫外线引起DNA损伤修复的主要方式有哪些？简述切除修复和重组修复的过程。
12. 如果切除修复和重组修复有缺陷，将分别引起什么后果？13. 何谓移码突变？什么样的DNA的改变可以引起移码突变？第三章人类基因组学14. 概述基因组学的研究内容。
15. 说明HGP的科学目标和工作任务。
16. 什么是遗传图和物理图？简述构建原理。
17. 基因定位的主要方法的特点是什么？18. 说明基因克隆的三种研究策略。
19. 说明基因组医学在遗传病研究中的应用。
第四章染色体20. 细胞周期分为那几个时期？各时期的特点是什么？21. 简述精子发生的过程。
22. 简述染色体的形成过程。
23. 比较常染色质与异染色质异同。
24. 减数分裂前期有哪些分期？试述各分期特点。
25. 什么是减数分裂？其发生的意义何在？26. 细胞周期中间期各分期的特点有那些？27. 简述人类染色体的多态性及其应用。
28. 高分辨率显带染色体如何命名，有何意义。
29. 说明显带染色体是如何描述的。
30. 常用的染色体显带技术有哪些？31. 人类染色体是如何分组的，核型是如何描述的？第五章单基因遗传病32．一对表型正常的夫妇生出了一个先天聋哑的女儿，此聋哑女儿长大后与先天聋哑男子结婚并生育了一个表型正常的儿子，试分析其原因。
33．一对表型正常的夫妇，婚后生出了一个患有白化病的女儿和一个红绿色盲的儿子，请分析其原因。
34．一家系，第Ⅰ代男性为一Huntington舞蹈症患者，41岁时发病，其与一正常女性结婚后生育一子三女，儿子和一女儿也是Huntington舞蹈症患者，儿子发病年龄为35岁，女儿37岁时发病。
胚胎植入前遗传学诊断筛查技术专家共识
‘中国产前诊断杂志(电子版)“ 2018年第10卷第2期㊃视频导读㊃P G S 在高龄㊁反复自然流产反复种植失败患者中的临床应用孙晓溪(复旦大学附属妇产科医院上海集爱遗传与不育诊疗中心)随着辅助生殖在实验室技术方面不断地革新,临床医生也需要重新评估新的诊断治疗方法㊁适应新的技术潮流从而获得更好的临床结局㊂其中,植入前遗传学筛查(p r e i m pl a n t a t i o n g e n e t i c s c r e e n i n g ,P G S )技术就在近年来获得了极大的关注㊂P G S 又可以称为是P G T-A ,其中文全称是植入前胚胎非整倍体筛查或植入前胚胎遗传学筛查,是指在辅助生殖技术中进行胚胎染色体数目的筛查㊁选择染色体正常的胚胎植入,被应用于自身核型正常但胚胎出现遗传异常风险较高的妇女,以期降低流产率㊁增加活产率,该技术也称为 升级版的第三代试管婴儿㊂今天,就让我们跟随来自复旦大学附属妇产科医院的孙晓溪教授一起来探讨一下P G S 临床应用的情况㊂D O I :10.13470/j .c n k i .c j pd .2018.02.016胚胎植入前遗传学诊断/筛查技术专家共识徐晨明(上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院)植入前胚胎遗传学诊断技术(p r e i m p l a n t a t i o n g e n e t i cd i a g n o -s i s ,P G D )是对胚胎或卵子行卵裂球/滋养层细胞或极体活检,作染色体和(或)基因学检测,将无疾病胚胎植入子宫妊娠,并出生正常子代的技术㊂该技术于1990年由H a n d y s i d e 教授首次应用于性连锁疾病诊断㊂植入前遗传学筛查(p r e i m p l a n t a t i o n g e n e t i cs c r e e n i n g ,P G S )又称 低风险 P G D ,是指对体外受精形成的胚胎进行染色体非整倍体分析,选择无遗传学异常的胚胎植入宫腔,以提高临床妊娠率㊁降低流产率和出生缺陷㊂在今年刚举办的 第八届中国胎儿医学大会 上,来自上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院的徐晨明教授就P G D ㊁P G S 的适应证㊁工作流程等内容做了详尽的讲解㊂D O I :10.13470/j .c n k i .c j p d .2018.02.01775。
北京2015年上半年主治医师(计划生育)入职考试试题
北京2015年上半年主治医师(计划生育)入职考试试题一、单项选择题（共25题，每题2分，每题的备选项中，只有1个事最符合题意）1、植入前遗传学诊断可以避免的是A．复发性流产B．排卵障碍C．梗阻性无精子症D．免疫性不孕E．反复的选择性流产或引产和遗传性疾病患儿的出生2、女性，27岁，人工流产后5日出现发热，体温380C。
查体：外阴(-)，阴道内少许血性分泌物，子宫颈充血，无举痛，子宫正常大，压痛明显。
双侧附件区未触及明显增厚，无压痛。
本病应首先考虑为A．盆腔腹膜炎B．不全流产C．输卵管卵巢炎D．子宫内膜炎及子宫肌炎E．吸宫不全3、女，26岁，孕75天行钳刮术后，妊娠物已全部清除，出血仍多，应采取措施A．注射缩宫素B．注射止血剂C．输血、输液D．再次清宫E．按摩子宫4、男性雄激素主要产生于A．间质细胞B．支持细胞C．生精细胞D．精子E．肾上腺皮质细胞5、对症状严重的45岁子宫腺肌病患者，首选治疗措施是A．药物对症治疗B．假孕疗法C．高效孕激素治疗D．保留生育功能的保守治疗E．子宫切除术，保留双附件6、透明带最早出现于A．原始卵泡B．初级卵泡C．次级卵泡D．成熟卵泡E．排卵时7、关于精囊腺的解剖错误描述为A．位于膀胱底B．在输精管壶腹外侧C．为长椭圆形囊状器官D．其排泄管与射精管相连E．精囊腺全长3～4cm，管腔最宽处可达7～10cm8、淋病的临床表现中，叙述正确的是A．男性淋菌性尿道炎潜伏期为10～20天B．急性后尿道炎是男性淋病奈瑟菌感染的最常见临床表现C．阴道是女性淋菌感染的原发部位D．女性淋病奈瑟菌感染常见症状为大量脓性白带E．女性患者不易发生淋菌性尿道炎9、休克的根本问题是A．低血压B．酸中毒C．少尿D．中心静脉压下降E．组织细胞受累10、女，38岁，G6P1，负压吸宫术后36天月经未来潮，平素月经规律，术后阴道少量出血5天即止，近2日下腹隐痛，术后三周始有性生活，血HCG阴性，B型超声提示宫腔积液，最可能的情况为A．宫颈粘连B．排卵延迟C．再次妊娠D．盆腔感染E．异位妊娠11、有生育打算的正常育龄妇女备孕前补充叶酸的量应是A．0.1mg/d B．0.4mg/dC．1mg/d D．2mg/dE．4mg/d12、下列不属于输精管复通术的禁忌证的是A．全身健康状况不良，不能耐受手术B．绝育术后因精神因素所致的性功能障碍经多方治疗无效C．有出血性疾患者D．生殖系统急性感染者E．阴囊皮肤感染者13、急性前列腺炎不宜做的检查是A．血常规B．尿常规C．前列腺B型超声D．前列腺按摩E．以上全部是14、钳刮术中出血多少可诊断为人工流产术时出血，下列选项正确的是A．≥100ml B．≥150mlC．≥200ml D．≥250mlE．≥300ml15、目前的皮下埋植剂均采用A．天然孕激素B．合成孕激素C．单纯雌激素D．孕激素和雌激素的复合制剂E．雄激素16、下列哪一种药物治疗逆行射精A．β-受体激动剂B．5α-还原酶抑制剂C．α-受体激动剂D．α-受体阻滞剂E．磷酸二酯酶抑制剂17、第一产程活跃期的加速期，是指宫口扩张A．0～3cmB．3～4cmC．4～9cmD．6～7cmE．7～8cm18、妊娠期呼吸系统变化正确的是A．肺活量增加B．呼吸次数增加甚至达20～40次/分C．残气量下降、每分钟通气量增加D．母体血内氧气及二氧化碳分压均增高E．孕中期耗氧量增加30%～40%19、药物流产的适应证不包括A．确诊为宫内妊娠B．多次人工流产史C．子宫极度倾屈D．18～45岁健康妇女E．瘢痕子宫20、胎儿神经管畸形筛查中最可靠的指标是A．E2 B．HCG C．μE3D．PRL E．AFP21、我国的长效口服避孕药中炔雌醚的剂量是A．0.3mg B．0.03mg C．3mgD．30mg E．300mg22、关于经腹输卵管绝育术手术时机正确的是A．以排卵期前后1～2天为宜B．自然完全流产后C．药物流产正常转经后D．哺乳期闭经E．取出宫内节育器后23、口服避孕药长效与短效的区分主要取决于A．孕激素B．雄激素C．雌激素D．雌激素与孕激素E．孕激素与雄激素24、关于口服避孕药的避孕机制，哪项正确A．药物影响下丘脑-垂体-卵巢内分泌轴，使排卵提前发生B．孕激素使宫颈粘液增多，不利精子通过C．口服避孕药使子宫内膜过度增殖，不利于受精卵着床D．孕激素作用使子宫内膜分泌不良，不适于受精卵着床E．口服避孕药增加身体内的前列腺素分泌，达到避孕效果25、关于长效口服避孕药，下列正确的是A．长效口服避孕药由炔雌醇和天然孕激素组成B．孕激素直接作用于下丘脑-垂体-卵巢轴发生抗排卵作用C．雌激素使内膜转化，引起撤退性出血D．长效口服避孕药服用一次可避孕3个月E．长效口服避孕药副反应较短效口服避孕药大二、多项选择题（共25题，每题2分，每题的备选项中，有2个或2个以上符合题意，至少有1个错项。
胚胎植入前遗传学诊断课件
单 PGD/PGS的流程与相关技术
关键技术
ICSI技术 囊胚培养 ③囊胚活检
①极体活检 ②单卵裂球活检
固定、FISH 检测 全基因组扩增
囊胚冷冻
微量细胞遗传学检测
正常胚胎移植
关键技术①：胚胎活检技术
极体活检
单卵裂球活检
囊胚活检
讨论：极体活检vs囊胚活检？
关键技术②：囊胚玻璃化冷冻
冷冻胚胎库
关键技术③： 单细胞全基因组扩增技术
活检细胞移入EP管
全基因组扩增 全基因组扩增产物
关键技术④： 对全基因组扩增产物的全基因组测序
关键技术⑤： SNP芯片技术
二、植入前遗传学诊断和筛查的临床应用
CHI NA’S P US H
极体活检
• 活检第一极体和第二极体，检测母源性的染色体结构异 常或基因突变，以及减数分裂异常造成的染色体非整倍 体。
• 优点：对卵母细胞的发育没有影响。 缺点： 只能检测母源性的染色体异常； 不能检测受精后发生的染色体异常； 可检测细胞数少，易发生检测失败。
卵裂球活检
• 在D3胚胎发育到6-10细胞时活检出1-2个卵裂球，进行遗
nullisomy 21 Nullisomy 14 disomy 21
首例FISH-PGD（2003年）：罗氏易位
PGD 分类
高风险PGD (Preimplantati on genetic diagnosis， PGD)
低风险PGD (preimplantation genetic screening， PGS)
PGD/PGS逐渐被PGT取代
• PGT (Preimplantation Genetic testing)：是一个广 义的术语，指在胚胎植入前，利用显微技术和DNA分 析技术对胚胎的染色体异常进行检测，选择正常的胚 胎植入。
植入前遗传学诊断
退火（ annealing ）
• 两条单链多核苷酸通过互补碱基之间的氢键 形成双链分子的过程。可发生在同一来源或 不同来源核酸链之间，可以形成双链DNA分 子、双链RNA或DNA-RNA杂交分子。
• 地中海贫血（Thalassemia）。是一组遗传性 溶血性贫血。其共同特点是由于珠蛋白基因 的缺陷使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或 几种合成减少或不能合成。
• Nekkebroeck 等 比 较 PGD ， IVF 和 自 然 妊 娠 (natural conception，NC)的单胎出生儿童2岁时在心理行为、运动发 育方面的状况。结果显示，PGD出生的儿童与IVF或NC出生 的儿童在上述方面无差异，PGD对其无影响。后续研究又比 较三者在情感、语言习以及孩子父母在社会压力、健康状况 等方面的情况，三者间也无显著差异。
• PGD的常规方法 • 目前应用于PGD的常规方法有聚合酶链反应
(polymerase chain reaction，PCR)和荧光原位杂交 (fluorescence in situ hybridization．FISH)
• 常用的PCR类型有巢式PCR、多重PCR、荧光PCR 、荧光定量PCR等。PCR扩增后，用于后续基因诊
谢 谢！
让我们共同进步
PGD的安全性
• PGD是建立在IVF（体外受精）基础上的一项技术。除了常 规的体外操作外，胚胎还受到在配子或胚胎时期取材所受的 机械或化学刺激，以及胚胎时期取材导致的胚胎物质减少等 方面的影响。表观遗传学的研究表明，遗传印迹的甲基化等 表遗传修饰主要发生于配子发育和种植前阶段，而此期正是 体外操作阶段，会干扰基因组印迹的建立与维持，从而造成 表观遗传学疾病。
增技术，可用于质粒、细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome，BAC)及全基因组DNA的扩增。认为用MDA进 行全基因组扩增(whole genome amplification，WGA)是当前 效率最高的全基因组扩增方法。基因组中不同位置的各个位 点都能通过MDA实现相似的扩增效率。Hellani等报道首例应 用MDA诊断地中海贫血及囊眭纤维化的PGD。后来用于其他 疾病的报道逐渐增多，如Marfan综合征等。 • MDA的缺陷有嵌合性DNA重排，包括序列倒位、序列重新拼 结等。用于PGD时，MDA的主要缺点是等位基因脱手 13(allele dropout，ADO)。不同位点的ADO大致在13％～36 ％左右。虽然ADO发生率较高，但误诊的风险仅为0．02％ ，这是因为在同时分析多个诊断性相关的位点的情况下，即 使MDA有较高的ADO率，但不可能同时干扰所有的诊断位点 ，从而保证其有较低的误诊率。
胚胎植入前遗传学诊断技术专题
胚胎植入前遗传学诊断技术专题生物探索编者按自世界首例试管婴儿诞生以来，相继出现了三代试管婴儿技术。
技术的发展以及现实需求使第三代试管婴儿技术应用越来越广泛，患者受益越来越显著。
然而，第三代试管婴儿技术在临床上应用如何？面临着哪些困境？在全面二孩时代，企业是如何推动我国第三代试管婴儿技术的发展？世界首例“试管婴儿”于1978年7月25日诞生于英国奧德海姆总医院，我国首例试管婴儿于1988年诞生于北京大学第三医院，迄今为止，全世界已有超过600万例的试管婴儿。
自世界首例试管婴儿诞生以来，相继出现了三代试管婴儿技术。
技术的发展以及现实需求使第三代试管婴儿技术应用越来越广泛，患者受益越来越显著。
然而，第三代试管婴儿技术在临床上应用如何？面临着那些困境？在全面二孩时代，企业是如何推动我国第三代试管婴儿技术的发展？1概述三十多年来，辅助生殖技术的发展经历了常规的“试管婴儿”（体外受精和胚胎移植）、卵胞浆内单精子显微注射（ICSI）、胚胎移植前基因（遗传学）诊断，再到囊胚培养、卵子和精子冷冻、卵母细胞体外成熟技术等，这些技术是现代科学的一项重大成就，开创了胚胎研究和生殖控制的新纪元。
试管婴儿的三大时代试管婴儿技术出现后经历不断发展的过程，相继出现三代试管婴儿技术。
“第一代试管婴儿”也称常规试管婴儿技术，是为了解决女性因素导致的不孕问题，如输卵管、内分泌、宫腔问题等而诞生的。
这种技术将精子与卵子放在体外共同培养，靠精子和卵子的自由结合来实现受精过程。
“第二代试管婴儿”是为了解决由于男性因素导致的不育问题，它又称卵母细胞胞浆内单精子显微注射，通过直接将精子注射入卵母细胞胞浆内，来达到助孕目的。
如果男方精子数量稀少或没有足够的活动量，或即使有了足够的活动量，精子也不愿意与卵子结合，这种情况下第二代试管婴儿技术可以大显身手。
“第三代试管婴儿”也称胚胎植入前遗传学诊断，指在胚胎移植前，取胚胎的遗传物质进行分析，诊断胚胎是否有异常，然后筛选健康胚胎移植。
胚胎植入前遗传学诊断名词解释
胚胎植入前遗传学诊断名词解释胚胎植入前遗传学诊断简介胚胎植入前遗传学诊断（Preimplantation Genetic Diagnosis，PGD）是一种常用于辅助生殖技术的遗传学检测方法。
它通过对胚胎进行基因检测，以筛查或诊断可能携带某种遗传疾病的胚胎，并选择健康的胚胎进行植入到母体子宫内，从而降低将遗传疾病传递给后代的风险。
胚胎植入前遗传学诊断的步骤1.体外受精（In Vitro Fertilization，IVF）：通过促排卵药物促进卵巢发育并采集女性多个成熟卵子，然后将卵子与精子在实验室中结合，使其受精形成受精卵。
2.胚胎培养：受精卵在实验室中进行培养，通常持续3-5天。
在此期间，受精卵会发育为多个细胞的团块，称为胚胎。
3.胚胎细胞取样：在胚胎培养的特定时间点，通过取样技术，如取卵细胞进行基因检测。
通常有两种主要的取样方法：细胞外囊胚活检（BlastomereBiopsy）和滋养层细胞活检（Trophectoderm Biopsy）。
–细胞外囊胚活检：在第三天的8-10个细胞阶段，通过取一个或多个细胞来进行基因检测。
–滋养层细胞活检：在第五天的100-150个细胞阶段，通过取一部分滋养层细胞来进行基因检测。
4.基因检测：从取样的胚胎细胞中提取DNA，并进行遗传学分析。
常用的遗传学分析方法包括：–多态性位点分析（Polymorphic Marker Analysis）：通过分析特定位点上的多态性标记来确定是否携带某种遗传疾病。
–针对特定突变位点的PCR扩增（Polymerase Chain Reaction，PCR）：通过PCR扩增特定突变位点的DNA片段，并进行序列分析来确定是否携带某种遗传疾病。
–数字PCR（Digital PCR）：通过将DNA分子分隔成数百万个微小的反应室，并计算每个反应室中的DNA分子数量，来检测特定突变位点的存在。
–着丝粒染色体检测（Fluorescence In Situ Hybridization，FISH）：通过使用荧光探针标记染色体特定区域的DNA序列，来检测染色体异常。
三代试管PGD如何诊断单基因疾病的,流程是什么？
单基因遗传病由于单个基因的问题而引起的家族遗传病，如果家庭成员其中一个儿童已经出现了类似疾病，早期诊断该疾病非常重要，生活中，很多这种单基因遗传病诊断只能在怀孕期间发现，但是，在确诊胎儿疾病情况下，被迫做出终止妊娠是非常困难的决定。
胚胎植入前遗传学诊断PGD或单基因疾病的植入前遗传学检测PGT-M（两者概念接近、叫法的差异）分子水平上得到证实，从而选择健康胚胎移植，确保健康婴儿的出生。
这个方法使得选择最佳和最有活力的并有遗传能力的胚胎，从而有效地增加了胚胎植入及试管婴儿的成功率，对于单基因疾病的家庭，推荐使用PGD（PGT-M），虽然这些疾病有很多是罕见病，但总的来说，它们深深影响了很大一部分生活，比较常见的单基因遗传病有：遗传咨询01显性遗传疾病- 一方患病，下一代50%会患病•亨廷顿氏舞蹈病;-精神功能障碍疾病;，在初始阶段，以无法控制的无序运动为特征。
•软骨发育不全（侏儒症）;- 由FGFR3基因突变引起的遗传性疾病，导致骨骼生长不均匀。
•多囊肾：16号染色体的短臂或4号染色体短臂引起，腹痛，血尿，腹部有肿块，高血压和肾功能衰竭02隐性遗传病;- 经常发生在兄弟姐妹身上•囊性纤维化;- 基于CFTR基因突变的遗传性疾病，其特征为外分泌腺病变，呼吸道和胃肠道严重并发症。
•苯**尿症;- 遗传无法代谢氨基酸苯丙氨酸，如果不及时治疗会导致大脑和神经受损。
•脊髓性肌萎缩症;- 以脊髓神经细胞功能障碍为特征，肌肉无力和萎缩。
•先天性聋哑03X连锁遗传病- 最常见于男性•脆性X染色体综合征;- 由FMR1基因突变引起的遗传性疾病，其特征是卵巢早衰或衰竭，伴有精神发育迟滞。
•肌管肌病;- 先天性肌病、面部肌肉严重无力、吞咽障碍和呼吸功能障碍。
•血友病;- 出血性疾病，可减缓血液凝固过程。
•进行性（Duchenne、Becker）肌营养不良症;- 遗传性疾病影响肌肉纤维的结构，从而导致严重的肌肉无力和失去行走，还可导致骨骼畸形、心脏和呼吸衰竭、内分泌和精神障碍。
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– 遗传印记（genetic imprinting ）
• 定义： 定义：
– 传给子代的亲本基因在子代中表达的状况取决于 基因来自母本还是父本的现象。该现象在合子形 成时已经决定，是涉及基因表达调控的遗传。目 前发现导致这种遗传差异的有DNA甲基化、假基 因作用、染色质构象等因素。
二、微测序技术
• 微测序技术，又称为单核苷酸引物延伸法(single nucleotide primer extension，SnuPE)，是一种有多种用途的新技术， 已经广泛应用于法医学、人口遗传学等领域。 • 其原理是设计一对针对突变位点的特异性引物，退火后直接 结合于突变位点附近，同时加入与野生型及突变型模板互补 的一种荧光双脱氧核苷酸，分别用不同的颜色标记4种双脱 氧核苷酸，经过多轮的延伸与链终止过程，产生许多带有荧 光标记的核苷酸片段，经毛细管电泳从而实现对模板序列的 推导。 • 微测序技术具有快速、敏感的特点，结合毛细管电泳技术可 以一次实现对多个突变位点的检测而实现高通量分析。微测 序技术开始主要用于检测单核苷酸多态性(·single nucleotide polymorphism，SNP)的突置换扩增(multiple displacementamplification，MDA) • MDA是一种基于酶促反应而不依赖热循环的DNA体外等温扩 增技术，可用于质粒、细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome，BAC)及全基因组DNA的扩增。认为用MDA进 行全基因组扩增(whole genome amplification，WGA)是当前 效率最高的全基因组扩增方法。基因组中不同位置的各个位 点都能通过MDA实现相似的扩增效率。Hellani等报道首例应 用MDA诊断地中海贫血及囊眭纤维化的PGD。后来用于其他 疾病的报道逐渐增多，如Marfan综合征等。 • MDA的缺陷有嵌合性DNA重排，包括序列倒位、序列重新拼 结等。用于PGD时，MDA的主要缺点是等位基因脱手 13(allele dropout，ADO)。不同位点的ADO大致在13％～36 ％左右。虽然ADO发生率较高，但误诊的风险仅为0．02％ ，这是因为在同时分析多个诊断性相关的位点的情况下，即 使MDA有较高的ADO率，但不可能同时干扰所有的诊断位点 ，从而保证其有较低的误诊率。
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• IVF /in vitro fertilization(试管婴儿、体外受精) 又称试管婴儿，是指分别将卵子与精子取出后 ，置于试管内使其受精，再将胚胎前体---受精 卵移植回母体子宫内发育成胎儿。试管婴儿是 用人工方法让卵子和精子在体外受精并进行早 期胚胎发育，然后移植到母体子宫内发育而诞 生的婴儿 。
PGD的安全性 的安全性
• PGD是建立在IVF（体外受精）基础上的一项技术。除了常 规的体外操作外，胚胎还受到在配子或胚胎时期取材所受的 机械或化学刺激，以及胚胎时期取材导致的胚胎物质减少等 方面的影响。表观遗传学的研究表明，遗传印迹的甲基化等 表遗传修饰主要发生于配子发育和种植前阶段，而此期正是 体外操作阶段，会干扰基因组印迹的建立与维持，从而造成 表观遗传学疾病。 • Nekkebroeck 等 比 较 PGD ， IVF 和 自 然 妊 娠 (natural conception，NC)的单胎出生儿童2岁时在心理行为、运动发 育方面的状况。结果显示，PGD出生的儿童与IVF或NC出生 的儿童在上述方面无差异，PGD对其无影响。后续研究又比 较三者在情感、语言习以及孩子父母在社会压力、健康状况 等方面的情况，三者间也无显著差异。
一例试管婴儿
退火（ annealing ）
• 两条单链多核苷酸通过互补碱基之间的氢键 形成双链分子的过程。可发生在同一来源或 不同来源核酸链之间，可以形成双链DNA分 子、双链RNA或DNA-RNA杂交分子。
• 地中海贫血（Thalassemia）。是一组遗传性 溶血性贫血。其共同特点是由于珠蛋白基因 的缺陷使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或 几种合成减少或不能合成。
一、微阵列比较基因组杂交
• 微阵列比较基因组杂交(comparative genomie hybridization，CGH) CGH原理是提取待测与对照基因组DNA，标记不同荧光后以1：1的比例 混合，与正常人中期染色体杂交。根据荧光的不同判定待检测基因组中 对应序列拷贝数的改变。CGH可检测出一些不常见的异常，如5号与9号 染色体三体，其发生率在l 000次自然流产中不足1％。这也间接说明，一 些未被识别的非整倍体异常同样对胚胎的发育具有致死性。 • CGH在PGD的应用有两种方式：单卵裂球CGH和第一极体CGH. • 因CGH需要3-4 d才能出结果，考虑到体外受精治疗周期中的移植窗口期 限制,拟施行CGH的卵裂球在活检后就需要对胚胎进行冻存，因此冻融后 胚胎存活数目的下降是目前单卵裂球CGH的主要缺陷（缺点）。 • 而第一极体在胞浆内配子注射后取出，即当日，这样便有足够时间等待 CGH结果以挑选正常卵母细胞受精的胚胎。这种对卵母细胞间接的细胞 遗传学分析，可检出在减数分裂I期分离过程异常造成的非整倍体，如三 倍体或单倍体等，这也正是造成早期流产的主要原因。第一极体CGH虽 然避免了胚胎冻融（优点），但对第一极体的检测不能检测卵母细胞减 数分裂Ⅱ期及精源性异常。此外，第一极体CGH不能检测出嵌合性胚胎 ，但通过对第二极体的检测则能部分弥补这点缺陷。（缺点）
• FISH是用带有荧光标记的特异性探针与染色 体结合后，在荧光显微镜下观察特定染色体 的情况。常用于PGD的FISH探针有染色体记 数探针(CEP)、染色体特异单一序列探针 (CSI)等，针对不同的需要可以选用不同的探 针。
• 除了上述方法外，一些新方法、新技术不断 出现并应用到临床PGD中。 • 一、微阵列比较基因组杂交 • 二、微测序技术 • 三、多重置换扩增
植入前遗传学诊断新进展
preimplantation genetic diagnosis(PGD)´s ´
latest progress
主讲：吴振楠 2009041101 组员：王芳，吴明瑶
PGD的定义，应用及分类 的定义， 的定义
• 植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis /PGD)是辅助生殖技术与遗传学诊断技术相结合的一 种植入前诊断技术，为遗传病高危夫妇提供尽可能大 的选择范围，把对某些疾病发现和诊断的时机提前到 胚胎发育的最早阶段，阻断一些单基因疾病及染色体 异常疾病的发生是辅助生殖技术的一个重要方面。 • PGD的常规方法 • 目前应用于PGD的常规方法有聚合酶链反应 (polymerase chain reaction，PCR)和荧光原位杂交 (fluorescence in situ hybridization．FISH)
• 常用的PCR类型有巢式PCR、多重PCR、荧光PCR 、荧光定量PCR等。PCR扩增后，用于后续基因诊 断的方法主要有：①根据特异性目的条带的有无做 出诊断，主要用于由基因缺失而引起的疾病的诊断 。②多态性分析，即在致病基因附近寻找几个与其 紧密连锁的DNA多态性位点。通过连锁分析进行诊 断和携带者检测。③等位基因寡核苷酸特异探针 (allele．specific oligonucleotide。ASO)斑点杂交及 反向斑点杂交(reverse dot blot，RDB)。④单链构象 多态性(single．strand conformation polymorphism analysis。SSCP)及变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gelelectrophoresis，DGGE)等