RNA干扰SIRT1基因表达对HepG2细胞部分能量代谢信号及炎症因子影响

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RNA干扰沉默mTOR基因对肝癌HepG2细胞侵袭和转移的影响

RNA干扰沉默mTOR基因对肝癌HepG2细胞侵袭和转移的影响

RNA干扰沉默mTOR基因对肝癌HepG2细胞侵袭和转移的影响顾靓;张阳德【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2011(8)6【摘要】目的:探讨RNA干扰技术对人肝癌HepG2细胞mTOR的表达及细胞侵袭与转移的影响.方法:体外合成mTOR siRNA,并转染HepG2细胞24h,同时设无义对照组(转染无义对照siRNA)、空白对照组(转染空脂质体)及正常对照组(不转染).采用western blot法检测各组HepG2细胞的mTOR蛋白表达;应用Transwell小室细胞体外实验检测转染后肝癌HepG2细胞的穿膜细胞数,评价肝癌细胞体外侵袭和转移能力的变化.结果:mTOR siRNA转染组HepG2细胞mToR 蛋白的表达低于各对照组(P<0.05);HepG2细胞侵袭和转移力均显著低于各对照组(P<0.05).结论:mTOR siRNA可有效抑制HepG2细胞mTOR蛋白的表达,且能抑制HepG2细胞的侵袭和迁移.%Objective: To study the effect of mTOR siRNA on the expression of mTOR gene, cell invasion and metastasis of human Hepatoma HepC2 cell.Methods: The oligonucleotide templates of mTOR siRNA were designed primarily, then were used to transfect HepG2 with 24 h, and the control groups were established accordingly by using siRNA with insignificant order, liposome only and no transfection.The level af protein of mTOR was measured by westem blot.Transwell chamber in vitro was to detect the cell count which were able to invade matrigel membrane to assess the ability of cell invasion and metastasie Results: The expressionof mTOR protein in the groups transfected with mTOR siRNA was lower than that of the control groups (P<0.05).The invasion and metastasis of HepG2 cells transfected with mTOR siRNA we're decreased than those of the control groups (P<0.05).Conclusion: RNA inierference of mTOR in HepG2 cell line could effetively restrain the expression of mTOR, which could significantly inhibit the invasion and metastasis of HepG2 cell.【总页数】3页(P14-16)【作者】顾靓;张阳德【作者单位】中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心,湖南长沙,410008;中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心,湖南长沙,410008【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.RNA干扰技术沉默CDC25a基因对人肝癌细胞HepG2增殖的影响 [J], 李薇;曹骥;周玲丽;罗旺;杨春;骆成飘;李瑗;苏建家2.RNA干扰GCF2基因沉默对人肝癌BEL-7404细胞侵袭能力的影响 [J], 郭固楠;李金平;陈筠;熊彬;宁小梅;李福建;彭家茵;李玉保;钟明琳;黄植熙3.体外研究RNA干扰介导的SIAH2基因沉默对人肝癌细胞HepG2的影响 [J], 刘瑶;贺兴波;黄文峰;周云;黄才斌4.RNA干扰沉默mTOR基因对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响 [J], 顾靓;张阳德;赵劲风;廖明媚;段菁华5.VEGF基因沉默对肝癌HepG2细胞侵袭和迁移的影响 [J], 宋向芹;司秀文;张芳;赵延婷因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

通过影响RNA干扰调节基因表达

通过影响RNA干扰调节基因表达

通过影响RNA干扰调节基因表达随着科技的进步和发展,人们对于基因的研究越来越深入。

在这个过程中,RNA干扰作为一种新兴的基因调节技术,已经成为了热门话题。

它的作用是通过干扰RNA的功能和表达,来调控基因的表达,从而对人类健康等方面产生重大的影响。

本文将从基本原理、应用前景以及存在的问题等方面,对RNA干扰技术进行详细的探讨。

一、基本原理RNA干扰是一种紧密结合于基因的后转录调控机制。

它的主要作用是通过RNA分子的降解或者抑制转录,来影响基因的表达。

RNA干扰过程中,RNA分子与特定的核酸复合物结合,形成RISC复合物。

RISC复合物能够识别并结合到具有互补序列的RNA分子,以此来调控RNA的降解或者抑制转录。

在RNA干扰过程中,RNA分子主要分为两种类型,一种是长链RNA(dsRNA),另一种是短链RNA(siRNA)。

其中,长链RNA是由两条互补的RNA分子所组成,能够被RISC复合体切割成短链RNA。

短链RNA则是由外源性dsRNA或部分内源性lncRNA剪切产生的。

两种类型的RNA分子在RISC复合体的共同作用下,能够识别并结合到具有互补序列的RNA分子,从而调控基因的表达。

二、应用前景RNA干扰作为一种新兴的基因调节技术,具有广泛的应用前景。

针对RNA干扰的应用场景,大致可以分为两类:基础研究和临床研究。

基础研究方面,RNA干扰技术可用于解决基因功能研究和疾病模型建立等问题。

在基因功能研究方面,RNA干扰技术可以使研究者采用靶向性的方法,精确地控制基因的表达,从而更好地解析基因与疾病发生的关系。

在疾病模型建立方面,RNA干扰技术可以提供更直接、准确的方法,使得研究者可以通过RNA干扰对感兴趣的基因进行控制,从而构建更加实用、稳定的疾病模型。

临床研究方面,RNA干扰技术可用于开发新型的治疗方案。

在治疗癌症等疾病方面,RNA干扰技术通过针对关键基因的干扰,可以起到精确诊断和靶向治疗的作用,从而有效地提高治疗效果。

SIRT1基因shRNA慢病毒载体构建及干扰效应检测

SIRT1基因shRNA慢病毒载体构建及干扰效应检测

SIRT1基因shRNA慢病毒载体构建及干扰效应检测邓昭玲;王彦;杜利清;刘强;赵辉;陈乃耀【摘要】BACKGROUND: SIRT1 gene plays a very important role in cell energy metabolism, apoptosis and ageing, while other studies have found that SIRT1 may play a regulatory role in the inflammatoryresponse.rnOBJECTIVE: To construct short hairpin RNA interference lentiviral vector of SIRT1 gene and to evaluate their inhibitory effect in THP-1 cells.rnMETHODS: The SIRI1 target specific oligonucleotide sequence was designed, synthesized and connected into the pGCSIL-GFP vector digested by Age I and EcoR I 293T cells were packaged to produce the lentivirus, and then transfected with THP-1 cells. The inhibitory effect on SIRT1 gene was tested by the real-time quantitative PCR and Western Blot.rnRESULTS AND CONCLUSION: The PCR and DNA sequencing of positive clones demonstrated that the lentivirus shRNA vector of SIRT1 gene was constructed successfully. The real-time quantitative PCR and Western Blot confirmed that the vector could suppress the expression level of SIRT1 at mRNA and protein levels.%背景:SIRT1基因在细胞能量代谢、凋亡及衰老过程中发挥极重要的作用,另有研究发现SIRT1可能在炎症反应方面起着调控作用.目的:构建SIRT1特异性的shRNA慢病毒载体,并初步检测其对THP-1细胞SIRT1基因的抑制效应.方法:设计SIRT1靶点特异性的寡核苷酸序列,连接到经Age Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切线性化的pGCSIL-GFP 载体,包装293T细胞产生慢病毒,再转染THP-1细胞,通过实时荧光定量PCR实验及Western Blot检测对SIRT1靶基因的抑制情况.结果与结论:阳性克隆PCR及测序证实SIRT1基因shRNA慢病毒载体构建成功,实时荧光定量PCR及Western Blot检测该载体在mRNA和蛋白水平能抑制THP-1细胞的SIRT1表达.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2012(016)028【总页数】5页(P5255-5259)【关键词】RNA干扰;SIRT1;转染;炎症;慢病毒载体【作者】邓昭玲;王彦;杜利清;刘强;赵辉;陈乃耀【作者单位】河北联合大学附属医院血液科,河北省唐山市,063000;中国医学科学院放射医学研究所,天津市分子核医学重点实验室,天津市,300192;中国医学科学院放射医学研究所,天津市分子核医学重点实验室,天津市,300192;中国医学科学院放射医学研究所,天津市分子核医学重点实验室,天津市,300192;天津商业大学生物技术与食品科学学院,天津市食品生物技术重点实验室,天津市,300314;河北联合大学附属医院血液科,河北省唐山市,063000【正文语种】中文【中图分类】R318背景:SIRT1基因在细胞能量代谢、凋亡及衰老过程中发挥极重要的作用,另有研究发现SIRT1可能在炎症反应方面起着调控作用。

SIRT1基因敲低增强HepG2细胞对单壁碳纳米角的敏感性

SIRT1基因敲低增强HepG2细胞对单壁碳纳米角的敏感性

SIRT1基因敲低增强HepG2细胞对单壁碳纳米角的敏感性贺轲;黄睿;夏正林;段小鹏;何景亮;李伯伟;张锦前;向国安【期刊名称】《中国医学物理学杂志》【年(卷),期】2017(034)005【摘要】目的:探讨SIRT1基因敲低增强HepG2细胞对单壁碳纳米角(Single-Walled Carbon Nanohorns,SWNHs)的敏感性.方法:通过在HepG2细胞中建立过表达和敲低SIRT1的细胞株,流式细胞检测不同SIRT1表达水平对HepG2细胞周期的影响;采用不同浓度SWNHs对HepG2细胞进行处理,CCK-8法评估HepG2细胞对SWNHs的敏感性;采用Westernblotting探索SIRT1影响HepG2细胞凋亡的机制.结果:获得低表达si-SIRT1和高表达pLV-SIRT1细胞株,发现si-SIRT1组细胞周期阻滞,并且有(14.94±1.22)%细胞出现凋亡,HepG2组和pLV-SIRT1组细胞凋亡率分别为(5.43±0.34)%和(4.49+0.34)%,si-SIRT1组与之相比,差异具有统计学意义(P<0.05);SIRT1基因敲低增强HepG2细胞对SWNHs的敏感性,低表达si-SIRT1组的数据显示,低浓度SWNHsl0在24h后si-SIRT l-HepG2细胞的活性下降到(43.22±2.21)%,而最大剂量SWNHs40在48 h后si-SIRTl-HepG2细胞的活性下降到(2.02±0.13)%,与对照组(HepG2组)相比差异具有统计学意义(P<0.05);通过Western-blotting验证,si-SIRT1组的P53表达增高,其相关下游凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-7也出现高表达.结论:通过敲低SIRT1后HepG2细胞周期阻滞,对SWNHs的敏感性显著增强,SWNHs有望成为一种有效的生物治疗肝癌的新方法.【总页数】5页(P484-488)【作者】贺轲;黄睿;夏正林;段小鹏;何景亮;李伯伟;张锦前;向国安【作者单位】广东省第二人民医院普通外科,广东广州510317;广东省第二人民医院普通外科,广东广州510317;广东省第二人民医院普通外科,广东广州510317;广东省第二人民医院普通外科,广东广州510317;广东省第二人民医院普通外科,广东广州510317;广东省第二人民医院普通外科,广东广州510317;广东省第二人民医院普通外科,广东广州510317;广东省第二人民医院普通外科,广东广州510317【正文语种】中文【中图分类】R392.12【相关文献】1.敲低CUEDC2基因表达可增强卵巢癌细胞对顺铂的敏感性 [J], 李金航;王爱春;周涛;李涛;蔡宏;刘爱军2.敲低CUEDC2基因表达可增强卵巢癌细胞对顺铂的敏感性 [J], 李金航;王爱春;周涛;李涛;蔡宏;刘爱军;3.敲低和敲除OPTN基因SKOV3细胞的构建及其对抗癌药物敏感性的影响 [J], 王鹏;陈曦;徐恰;刘会;郭若文;刘芸;许尹;秦宜德4.单壁纳米碳管增强纳米铝基复合材料的制备 [J], 钟蓉;丛洪涛;成会明;卢柯5.单壁纳米碳管/纳米铝基复合材料的增强效果 [J], 丛洪涛;钟蓉;成会明;卢柯因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

RNA干扰HIF-1α对肝癌细胞系HepG2生物学特性的影响

RNA干扰HIF-1α对肝癌细胞系HepG2生物学特性的影响

RNA干扰HIF-1α对肝癌细胞系HepG2生物学特性的影响摘要】目的缺氧诱导因子-1 α (HIF-1 α)是参与肿瘤细胞代谢的核心转录因子。

本研究旨在于评估RNAi下调HIF-1a对肝癌细胞系HepG2生物学特性的影响。

方法化学合成特异性HIF-1a siRNA,转染缺氧条件下培养的肝细胞肝癌细胞系HepG2,利用Westernblot技术检测转染后HIF-1a,血管生产因子,和基质金属蛋白酶2表达情况。

MTT分析及裸鼠皮下接种肿瘤细胞明确细胞增殖率。

结果乏氧条件培养,HIF-1α表达减少61.54%,VEGF表达减少64.71%;MMP-2表达减少53.33%。

HepG2 细胞增殖力下降50%,接种裸鼠肿瘤形成缓慢。

结论 HIF-1a SiRNA抑制HIF-1α表达,抑制肝癌细胞系生长。

其机制可能与下调血管生成因子和基质金属蛋白酶表达有关。

【关键词】缺氧诱导因子-1 α RNA干扰肝细胞肝癌【中图分类号】R73 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2013)15-0078-03前言肝细胞肝癌是危害人类健康的第五大恶性肿瘤,每年大约500,000新发病例,肿瘤致死率位居第三位[1-2]。

血管丰富是影响肝癌预后的主要原因,在肿瘤生长和转移过程起重要作用。

低氧是实体瘤微环境的基本特征之一,局部缺氧微环境使肿瘤细胞的一些基因和蛋白表达发生改变。

这些变化使肿瘤细胞在适应缺氧微环境的同时,也会增加肿瘤血管生成。

在这个过程中转录因子HlF-l起着中枢纽带的作用[3]。

缺氧诱导因子是缺氧条件下广泛存在于哺乳动物及人体的一种转录因子[4,5]。

研究证实HIF—l在动物及人体许多肿瘤中大量表达,对肿瘤的生长、血管生成、转移、凋亡及耐药皆有影响。

HIF-1α与HIF-1β结合形成有转录活性的HIF-α,从而调节血管生成,肿瘤生长和凋亡等活动。

常氧情况下,HIF-1α维持低浓度状态。

缺氧状态下,更多的HIF-1α与HRE结合,刺激血管生成,在肿瘤细胞浸润、转移方面起重要作用。

RNA干扰技术在基因功能研究中的应用

RNA干扰技术在基因功能研究中的应用

RNA干扰技术在基因功能研究中的应用随着人类对基因的认识不断深入,探索和理解基因功能的重要性日益凸显。

在基因功能研究中,RNA干扰技术作为一种强大的工具被广泛应用。

本文将从原理、应用实例和前景展望三个方面来介绍RNA干扰技术在基因功能研究中的应用。

一、原理RNA干扰(RNA interference,简称RNAi)是在细胞中通过特定的RNA分子介导,通过退化已经存在的mRNA分子或抑制其翻译而靶向调节和控制基因表达的过程。

RNA干扰技术主要包括两个步骤:siRNA的合成和siRNA与靶标mRNA结合并降解。

二、应用实例1. 基因沉默RNA干扰技术常用于研究特定基因的功能。

通过合成特定的siRNA,可将其引入细胞,使其与目标mRNA片段特异性结合并导致mRNA的降解。

这使得研究人员可以研究该基因的沉默对细胞功能的影响。

2. 基因敲除RNA干扰技术还可以用于基因敲除,即通过沉默或降解基因的mRNA来完全阻断目标基因的表达。

通过此方法,研究人员可以模拟基因突变体或病理条件,深入研究具体基因在细胞生物学中的重要性。

3. 基因诱导表达除了靶向降解基因表达外,RNA干扰技术也可以通过合成合适的siRNA,来增加特定基因的表达。

这可以用于研究某些基因或蛋白质的功能,特别是对于那些难以通过已有的方法进行研究的基因或蛋白质。

4. 功能基因组学RNA干扰技术在功能基因组学中发挥着重要作用。

由于目前我们对人类基因组中许多基因的功能知之甚少,利用RNA干扰技术可以对大规模基因进行高通量筛选,以便识别和发现新的功能基因。

三、前景展望随着RNA干扰技术的不断发展和改进,它在基因功能研究中的应用前景广阔。

一方面,RNA干扰技术可以帮助我们更好地理解基因和基因功能的复杂网络;另一方面,它也为治疗基因相关疾病和研发新的药物提供了新的途径。

总结RNA干扰技术作为一种功能强大的工具,广泛应用于基因功能研究中。

通过RNA干扰技术,我们可以实现基因沉默、基因敲除、基因诱导表达等。

RNA干扰在HepG2细胞中对HBV基因的抑制作用的开题报告

RNA干扰在HepG2细胞中对HBV基因的抑制作用的开题报告

RNA干扰在HepG2细胞中对HBV基因的抑制作用的开题报告一、研究背景世界卫生组织(WHO)报告显示,全球大约有2亿人患有慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染。

该病毒可以导致肝硬化和肝癌等严重疾病。

虽然有疫苗和药物可以预防和治疗HBV感染,但目前仍没有根治方法。

因此,研究HBV感染治疗的新方法仍然具有重要意义。

RNA干扰作为一种新型的基因靶向治疗技术,已经在慢性乙型肝炎治疗上展现出了一定的应用价值。

二、研究目的本研究旨在探究RNA干扰在HepG2细胞中对HBV基因的抑制效果,以期为HBV感染相关疾病的治疗提供新的治疗方法。

三、研究内容1.构建质粒本研究将使用pGPU6/GFP/Neo质粒,该质粒具有Green Fluorescent Protein(GFP)的表达能力。

在该质粒中,可在U6小核RNA转录起始位点上,以RNA干扰的方式靶向HBV cccDNA,从而抑制其复制和转录。

2.转染HepG2细胞将构建好的质粒在HepG2细胞中进行转染。

同时对于转染后几个小时和天数时刻,对转染后的细胞进行相应的检测,以评价RNA干扰对HBV基因的抑制效果。

3.检测抑制效果检测抑制效果主要包括HBV基因表达水平、HBV mRNA水平和HBV DNA水平。

使用技术如Real-time PCR等。

四、研究意义本研究旨在探究RNA干扰在HepG2细胞中对HBV基因的抑制效果,具有重要的意义。

一方面,研究结果可以为HBV感染相关疾病的治疗提供新的方法和思路。

另一方面,该研究结果可以为RNA干扰技术在基因治疗领域的应用提供新的参考。

siRNA干扰MDM2基因对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

siRNA干扰MDM2基因对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

siRNA干扰MDM2基因对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响刘莉;丁浩;马果果;邓璐林;张吉翔【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2011(051)016【摘要】目的将靶向MDM2的siRNA转染人肝癌HepG2细胞,观察转染后细胞内p21基因的表达变化及其对HepG2细胞增殖和凋亡的影响.方法将人工合成的针对MDM2基因的siRNA片段通过Lipofectamine<'TM>2000转染人肝癌细胞HepG2.实验分为MDM2 siRNA转染组、阴性对照组、脂质体组、正常对照组.分别用RT-PCR和Western blot法检测各组细胞中MDM2、p21的Mrna和蛋白质的表达量,并用MTT法检测各组细胞的增殖活力,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化.结果与其他3组比较,siRNA转染组细胞中MDM2 Mrna及蛋白表达减少(P<0.01),而p21 Mrna及蛋白表达增高(P<0.01).HepG2转染MDM2 siRNA 后,增殖能力减弱,凋亡显著.结论 MDM2基因可能通过影响p21控制肝癌细胞的生长.%Objective To transfect siRNA targeting MDM2 gene into human hepatoma cell line HepG2 and to observe the expression of p21 and its effect on the proliferation and apoptosis of HepG2 cells.Methods The MDM2 siRNA was transfected into HepG2 by means of LipofectamineTM 2000.There were four groups in this study including siRNA group, negative control (NC) group, Lipofectamine (Lip) group and normal cellgroup.Reverse transcriptase PCR and Western blot were used to measure the MDM2 and p21 expression at mRNA and protein levels,respectively.The cell proliferation was assessed by MTT assay and the changes in cell cycle and apoptosis were evaluated by flowcytometry.Results Compared with normal cell group, NC group and Lip group, the expression of MDM2 mRNA and protein decreased significantly in siRNA group ( P < 0.01 ), the expression of p21 mRNA and protein enhanced significantly ( P < 0.01 ).The proliferation of HepG2 cells was markedly inhibited and the apoptosis of HepG2 cells was increased after transfected by MDM2 siRNA (P < 0.01 ).Conclusion MDM2 gene may regulate the cell proliferation by interacting with p21.【总页数】4页(P12-15)【作者】刘莉;丁浩;马果果;邓璐林;张吉翔【作者单位】南昌大学第二附属医院,江西省分子医学重点实验室,南昌,330006;南昌大学第二附属医院,江西省分子医学重点实验室,南昌,330006;南昌大学第二附属医院,江西省分子医学重点实验室,南昌,330006;南昌大学第二附属医院,江西省分子医学重点实验室,南昌,330006;南昌大学第二附属医院,江西省分子医学重点实验室,南昌,330006【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.siRNA靶向抑制CDCA5基因表达对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响 [J], 陈墅圳;聂玉强;杜艳蕾;徐言;沈桂佳2.RNA干扰沉默mTOR基因对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响 [J], 顾靓;张阳德;赵劲风;廖明媚;段菁华3.siRNA干扰沉默EZH2基因对人肝癌HepG2细胞增殖的影响 [J], 庞玉艳;冯震博;李佳;危丹明4.siRNA干扰纤维蛋白原α链基因对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响 [J], 李莹莹;巴亚斯古楞;董菁;任建林5.STAT5A基因有效siRNA序列的筛选及其对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响 [J], 杨华秀;曾永秋;曹洋;林春燕;黄燕;李洁因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

MTA1靶向RNA干扰对人肝癌HepG2细胞生物学行为影响的研究

MTA1靶向RNA干扰对人肝癌HepG2细胞生物学行为影响的研究
摘 要: 目的 观 察 转 移 相 关 基 因 1MT ) 异性 s N 对 肝 癌 细 胞株 HeG ( A1 特 i A R p 2细胞 生 物 学行 为 的影 响 。方 法 体 外 构 建
2个 MT A1特异 性 s NA 表 达 载体 ( R i 、 R i ) 实验 分 为脂 质 体 对 照 、 质 粒转 染对 照 及 MTA1 i A 重 组 质 粒转 染 i R p NA 一 p NA , 1 2 空 RN s
中 图分 类 号 : 9 9 1 Q2 9 R 7 . ; 7
文献 标 识 码 : A
文 章 编 号 : 6 18 4 ( 0 0 1 — 8 40 l 7 3 8 2 1 ) 4 1 2 —3
Ef e t o TAl RNA n e f r n e o i l g c l b ha i ur o e fc fM i t r e e c n b o o i a e v o f H pG2 lv r c c r c ls i e an e e l
( HE~G n gu X j M i g, EN n Ji — o。 A n W a Fe g
( p rme t J Ga ton eoo y, lHopi l ,尸LA , u a 3 0 O ( n ) De a t n sre trlg 1 s t o 6 a D W h n 4 0 1 , ia
so fM TA1 mRNA n r t i sd t c e y q a t a i eR' C 。e p c i ey MTT a s y wa p l d t e e mi e t ee l in o a d p o en wa ee t d b u n i t I t v 、P R r s e t l . v s a sa p i o d tr n h el e g o h s a u . o t t a e r v l a e y f w y o ty Reu t Th e u n eo p cf i r wt t t s Ap p o i r t swe ee a u t d b l c t me r . s l c o s es q e c f e i c sRNA s c r e tb e u n e s i wa o r c y s q e c

RNA干扰在细胞调控中的作用

RNA干扰在细胞调控中的作用

RNA干扰在细胞调控中的作用细胞调控是生物体内各种复杂生理过程的基础,也是维持机体正常功能的关键。

在细胞调控中,RNA干扰起着重要的作用。

RNA干扰是一种通过特异性降解靶基因mRNA的机制,以调节基因表达和维持基因组稳定的方式。

在过去的几十年里,RNA干扰已成为分子生物学和生物医学研究中的重要工具,并在当前的研究领域中有着广泛的应用。

RNA干扰是一种通过双链RNA介导的降解特定mRNA的生物学过程。

它的发现源于人们对植物中双链RNA导致基因剪接异常的观察。

随后的研究揭示了RNA干扰在多种生物中的存在,并被发现能有效地靶向基因表达。

RNA干扰的机制主要通过两种方式实现:siRNA介导的RNA干扰和miRNA介导的RNA干扰。

siRNA是由外源双链RNA引起的RNA干扰。

它可以来源于体外合成的siRNA,也可以由细胞内的dsRNA本身产生。

siRNA进入到细胞内后,与RNA诱导的沉默复合物(RISC)结合,形成活化状态的RISC-siRNA复合物。

RISC-siRNA复合物的一条链将靶标mRNA选择性降解,另一条链用于重复循环这个过程,从而迅速地和高效地靶向特定mRNA,抑制其翻译和表达。

miRNA是由内源性的长RNA产生的RNA干扰。

miRNA分子经过一系列成熟步骤后,进入RISC复合物中。

与siRNA类似的是,RISC-miRNA复合物靶向靶基因mRNA,并将其靶向选择性降解。

与siRNA不同的是,miRNA能够在较长时间范围内调节基因表达,从而对细胞调控起到更稳定的作用。

RNA干扰在细胞调控中的作用是多方面的。

首先,RNA干扰可以调节基因表达。

通过选择性降解特定mRNA,RNA干扰可以有效地抑制基因的翻译和表达。

这对于细胞调控来说意义重大,因为不同的基因表达水平可以调节细胞的功能、分化和增殖。

其次,RNA干扰在基因组稳定性中起到了重要的作用。

除了抑制基因表达,RNA干扰还能抑制内源性的嵌合基因活化,防止基因组中的不正常重排和突变。

RNA干扰技术在基因沉默中的应用

RNA干扰技术在基因沉默中的应用

RNA干扰技术在基因沉默中的应用基因沉默是一种重要的分子生物学现象,它可以通过RNA干扰技术得到广泛应用。

本文将介绍RNA干扰技术的原理、应用和最新研究成果。

一、RNA干扰技术的原理RNA干扰技术是一种通过特异的基因沉默来抑制目标基因表达的技术。

它基于RNA分子的特殊性质,通过两种主要的机制实现基因沉默:siRNA和miRNA。

1. siRNA机制siRNA(small interfering RNA)是双链RNA分子,它由外源性引物或内源性lncRNA(long non-coding RNA)产生。

siRNA通过一系列的酶切和融合反应,在细胞质中形成活性siRNA复合物。

然后,活性siRNA复合物将与靶标mRNA特异性结合并介导其降解,从而导致基因沉默。

2. miRNA机制miRNA(microRNA)是一种内源性短RNA,由基因转录产生。

与siRNA类似,miRNA也通过与靶标mRNA结合并介导其降解或抑制转录的方式来实现基因沉默。

不同的是,miRNA通常与靶标mRNA的3'非翻译区域结合,形成RNA诱导沉默复合物(RISC),从而抑制靶标mRNA的翻译或稳定性。

二、RNA干扰技术的应用RNA干扰技术已经被广泛应用于基因功能研究、疾病治疗和转基因生物的改良。

下面将分别介绍它们的具体应用。

1. 基因功能研究RNA干扰技术在基因功能研究中发挥着重要作用。

通过特异性抑制目标基因的表达,可以揭示基因在生物体内的功能和调控机制。

例如,科学家可以设计和合成特定靶标基因的siRNA,然后转染到细胞中,验证目标基因的功能。

此外,通过高通量筛选技术结合RNA干扰,可以快速鉴定和验证大量的候选靶基因。

2. 疾病治疗RNA干扰技术还被应用于疾病治疗。

因为很多疾病与基因表达异常相关,通过RNA干扰技术抑制病因基因的表达,可以改善相关疾病的症状。

例如,利用siRNA靶向抑制肿瘤相关基因的表达,可以抑制肿瘤细胞的增殖和转移。

RNA干扰现象的发现

RNA干扰现象的发现

发展RNA干扰技术
改进RNA干扰技术的效率和特异性,降低脱靶效应 ,提高其在医学和生物学研究中的应用价值。
RNA干扰在疾病治疗中 的应用
探索利用RNA干扰技术治疗各种疾病的方法 ,包括遗传性疾病、癌症和病毒感染等。
02
RNA干扰的机制
干扰RNA的产生
1 2
转录后基因沉默
在转录后基因沉默过程中,某些基因转录产生双 链RNA,这些双链RNA被切割成21-25个核苷酸 的小片段,称为siRNA。
农业领域
利用RNA干扰技术培育抗虫、抗病、抗逆的转基因作物,提高农 业生产效率。
生物防治领域
利用RNA干扰技术防治害虫和有害生物,保护生态环境和人类健 康。
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个性化治疗
利用患者特异性基因突变信息,设计 个性化siRNA药物,实现精准治疗。
新型RNA干扰技术
研究并开发新型RNA干扰技术,如长 非编码RNA干扰、microRNA干扰等。
拓展应用领域
探索RNA干扰技术在其他领域的应用, 如农业、动物育种、生物防治等。
潜在的应用领域
医学领域
RNA干扰技术可用于治疗遗传性疾病、癌症、病毒感染等疾病, 也可用于药物研发和疫苗设计。
重要发现
2001年
RNA干扰现象被证实存在于哺乳动物细胞中,这一发现为RNA干扰在医学和生物学领域的应用奠定 了基础。
2002年
科学家发现小干扰RNA(siRNA)是RNA干扰过程中的关键分子,能够引导沉默复合物(RISC)对靶 mRNA进行切割。
研究方向
深入探究RNA干扰的分 子机制
研究RNA干扰过程中涉及的酶、蛋白质和 RNA分子的作用机制,以及它们之间的相互 作用关系。

RNA干扰技术在基因表达调控中的应用

RNA干扰技术在基因表达调控中的应用

RNA干扰技术在基因表达调控中的应用随着科学技术的不断发展,人们对基因和基因表达调控的研究也越发深入。

其中,RNA干扰技术作为一种常用的实验手段,被广泛应用于基因表达调控的研究中。

本文将介绍RNA干扰技术的原理、应用以及最新研究进展。

一、RNA干扰技术的原理RNA干扰技术是一种通过介导RNA分子与靶基因的mRNA相互作用,抑制靶基因表达的方法。

其具体的原理包括两个步骤:siRNA的合成和siRNA的介导靶基因降解。

siRNA(small interfering RNA)是RNA干扰技术中的核心分子。

它通过在细胞内选择性靶向互补的mRNA序列,引导RNA诱导的沉默复合体(RISC)结合并降解mRNA,从而达到靶基因的抑制效果。

二、RNA干扰技术的应用由于RNA干扰技术具有高效、特异、可逆等特点,因此在基因表达调控的研究中得到了广泛的应用。

1. 功能研究RNA干扰技术可以用于研究靶基因的功能。

通过将特定的siRNA 引入细胞中,可以有效地降低该基因的表达水平,从而观察该基因缺失或减少对细胞功能的影响。

这种方法可以帮助科研人员深入了解靶基因在细胞中的作用机制,从而揭示基因调控网络的复杂性。

2. 疾病治疗RNA干扰技术在疾病治疗方面也具有巨大的潜力。

通过选择合适的siRNA靶向关键基因,可以抑制疾病相关基因的表达,从而达到治疗疾病的目的。

目前,RNA干扰技术在癌症治疗、遗传性疾病治疗以及传染病治疗等方面都取得了一定的进展。

3. 基因工程利用RNA干扰技术可以实现对特定基因的选择性沉默,从而在基因工程中发挥重要作用。

通过设计合成特定的siRNA序列,可以针对性地抑制或调控特定基因的表达,从而实现对生物体性状的改良和优化。

这为农业、畜牧业以及医药领域的研究提供了新的思路和方法。

三、RNA干扰技术的最新研究进展随着对RNA干扰技术的深入研究,人们不断探索其更广阔的应用领域。

1. 长非编码RNA的调控近年来,长非编码RNA(lncRNA)的重要性得到了广泛的认识。

RNA干扰调节的基因表达与细胞生物学

RNA干扰调节的基因表达与细胞生物学

RNA干扰调节的基因表达与细胞生物学RNA干扰是一种细胞内的天然防御系统,通过RNA介导的信号途径,使细胞针对一定的异质体RNA进行降解和剥夺、以达到抵御病原体感染和维持基因表达稳态的生理功能。

在这种过程中,RNA干扰试验被广泛用于研究基因调控机制、致病微生物和肿瘤细胞的治疗方法等。

本文将介绍RNA干扰调节的基因表达与细胞生物学的相关研究进展。

1. RNA干扰的检测方法RNA干扰可以通过多种方法来检测,其中最常用的是RNA干扰试验。

该试验中将siRNA或shRNA引入细胞内或者通过化学合成方法制备特定的siRNA分子,判断RNA分子的表达与功能。

第二种方法是RNA干扰生物芯片,该芯片通过检测RNA的序列和结构,对不同的RNA处理方式进行分析,判断RNA的转录后调节。

2. RNA干扰的基因表达调控RNA干扰可以直接负调控基因的表达,也可以通过间接途径影响基因的表达。

例如,RNA干扰可以通过去除RNA分子中的特定部分,使其失去调节基因表达的能力。

另一方面,RNA干扰也可以直接降解RNA,从而对靶向RNA进行随机攻击,这样基因表达就会遭到抑制。

RNA干扰表现出了调控基因表达的显著优势和生物学意义。

一些基因可能在不同的细胞类型和分化状态下得到不同的表达。

RNA干扰可以通过逆转录或者胶原酶,切割RNA,或者转写RNA,对这些基因进行对比研究。

3. RNA干扰对细胞生物学的影响RNA干扰不仅影响基因表达,还与许多细胞生物学过程紧密相关。

例如,RNA干扰流程的不同阶段可以触发细胞分裂和凋亡等多种细胞生物学现象。

此外,RNA干扰也可以引起特定的免疫相应和信号途径,从而影响细胞的命运和生物学效应。

RNA干扰已经成为了研究细胞生物学的重要工具之一,并且能够为细胞分子学、生物技术和药物开发等领域提供基础和支持。

4. RNA干扰在治疗和预防疾病中的应用由于RNA干扰可以抑制靶向RNA的转录和转化,在医学领域展现了巨大的应用前景和发展潜力。

siRNA 抑制 HM GA1基因表达对 LX-2细胞生物学功能的影响

siRNA 抑制 HM GA1基因表达对 LX-2细胞生物学功能的影响

siRNA 抑制 HM GA1基因表达对 LX-2细胞生物学功能的影响胡蕾;刘莉;张霜;杜芳腾;张吉翔【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2016(045)017【摘要】Objective To investigate the effects of siRNA mediated HMGA 1 silence on proliferation and the gene expression of HMGA1 ,α-SMA and E-cadherin in activated hepatic stellate cells and its mechanisms .Methods Synthetic HMGA1 siRNA was transfected into LX-2 cells to silence the HMGA1 gene .The expression level of HMGA1 ,α-SMA and E-cadherin was determined by RT-PCR and Western blot experiments .LX-2 cell proliferation was assessed by M TT assay .Results The best inhibited effect was HMGA1-siRNA-1 .Compared with control group ,the cell proliferation and the mRNA and protein expression of HMGA 1 ,α-SMA in TGF-β1 group and TGF-β1 + NC-siRNA group were significantly increased (P<0 .05) ,without significant differences between the two groups (P>0 .05) ,while the expression of E-cadherin in TGF-β1 group and TGF-β1 + NC-siRNA group were significantly decreased compared with control group (P< 0 .05) .Meanwhile ,the cells in TGF-β1 + HMGA1 siRNA group showed significantly decreased proliferation level ,down-regulated mRNA and protein expression of HMGA 1 ,α-SMA but up-regulated expression of E-cadherin compared with TGF-β1 group and TGF-β1 + NC-siRNAgroup(P< 0 .05) .Conclusion HMGA1 interference could signifi-cantly down-regulate the expression of HMGA1 in LX-2 cells cultured with TGF-β1 ,thus inhibiting the proliferation and activation of the cells .%目的:探讨高迁移率蛋白 A1(HMGA1)siRNA 对人肝星状细胞 HMGA1、α-SMA 、E-钙黏素(E-cadherin)基因的表达调控作用及增殖活性的影响,并探讨其可能的机制。

RNA干扰技术在基因表达调控中的应用

RNA干扰技术在基因表达调控中的应用

RNA干扰技术在基因表达调控中的应用基因是生物体内控制遗传特征的基本单位,而基因的表达调控则决定了细胞功能的实现。

近年来,RNA干扰技术作为一种强大的基因调控工具,引起了科学界的广泛关注和研究。

本文将从RNA干扰技术的原理、应用领域以及未来发展方向等方面进行探讨。

RNA干扰(RNA interference,简称RNAi)是一种通过特异性降解靶向RNA 分子的技术。

它最早在真核生物中被发现,后来发现在多种生物中也存在RNA干扰现象。

RNA干扰技术主要通过两种途径实现:siRNA和miRNA。

siRNA(small interfering RNA)是由外源双链RNA分子通过酶切产生的,它能够与靶向mRNA 互补配对并引导RNA酶复合物(RISC)降解mRNA分子。

miRNA(microRNA)则是内源性产生的一类小RNA分子,它们通过与mRNA互补配对,调控靶向基因的转录和翻译。

RNA干扰技术在基因表达调控中的应用广泛。

首先,RNA干扰技术可以用于研究基因功能。

通过设计合成特定的siRNA或miRNA,可以选择性地沉默目标基因,从而观察其沉默后对细胞生理过程的影响。

这种方法被广泛应用于模式生物研究,如小鼠、斑马鱼等。

其次,RNA干扰技术也可用于基因治疗。

许多疾病的发生与基因表达异常有关,通过干扰相关基因的表达,可以达到治疗疾病的目的。

例如,肿瘤治疗中,可以设计siRNA靶向癌细胞的关键基因,抑制其生长和扩散。

此外,RNA干扰技术还可以用于农业领域,通过沉默特定基因来提高作物的产量和抗性。

尽管RNA干扰技术在基因表达调控中有着广泛的应用前景,但仍然存在一些挑战和限制。

首先,RNA干扰技术的特异性和有效性仍然需要进一步提高。

在设计siRNA或miRNA时,需要考虑到靶向序列的选择、长度和结构等因素,以确保其能够特异性地沉默目标基因。

其次,RNA干扰技术在体内递送的难题也需要解决。

RNA分子在体内易被酶降解,且难以穿越细胞膜进入细胞。

RNA 干扰技术在免疫细胞中的应用研究

RNA 干扰技术在免疫细胞中的应用研究

RNA 干扰技术在免疫细胞中的应用研究细胞是生命的基本单位,而免疫细胞则是保护我们身体免受外来入侵的神兵利器。

在现代医学中,对免疫细胞的研究已经成为了一个重要的研究领域。

随着科技的进步,研究人员发现 RNA 干扰技术在免疫细胞里的应用潜力越来越大,本文将从不同角度探讨这一技术的应用和前景。

一、RNA 干扰技术的基本原理RNA 干扰技术是指依靠 RNA 介导的基因沉默,从而对特定基因表达进行调控。

RNA 干扰技术能够通过引入其反义序列(siRNA 或 miRNA)抑制基因表达,siRNA 是人工合成的短 RNA 分子,它可以通过靶向 mRNA 的特定序列来影响基因表达,从而使基因被沉默。

miRNA 是由真核细胞内部转录的一种小RNA 分子,与 siRNA 相似,可通过靶向 mRNA 的特定序列来沉默特定基因。

二、RNA 干扰技术在免疫细胞中的应用1、RNA 干扰技术在自然杀伤细胞中的应用自然杀伤细胞(NK细胞)是一类关键的免疫细胞,它能够扫除体内有害的细胞,同时还能够产生多个细胞因子,如干扰素 (IFN)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α) 和白细胞介素-10 (IL-10) 等。

研究发现,NK 细胞的活性主要受到多种基因的调控,而 RNA 干扰技术可以精确地靶向这些基因,从而有效地调控 NK 细胞的活性。

在研究中,研究人员通过 siRNA 对 NK 细胞的 IFN-γ、Perforin 和 Granzyme 等基因进行干扰,发现这些细胞的活性显著降低,从而证明了 RNA 干扰技术在调控 NK细胞活性方面的应用价值。

2、RNA 干扰技术在树突状细胞中的应用树突状细胞(DC)是一类重要的免疫细胞,它们能够识别并捕获体内的外来抗原,然后将其呈递给 T 细胞,促进 T 细胞的活化。

研究表明,RNA 干扰技术也可以应用于树突状细胞的研究中。

在研究中,研究人员通过 siRNA 对树突状细胞的关键基因进行干扰,发现干扰组细胞的活性显著降低,同时这些细胞的抗原呈递功能也受到了抑制。

靶向NRP-1基因的siRNA对Hep-2细胞增殖及mRNA表达的影响的开题报告

靶向NRP-1基因的siRNA对Hep-2细胞增殖及mRNA表达的影响的开题报告

靶向NRP-1基因的siRNA对Hep-2细胞增殖及mRNA表达的影响的开题报告
一、研究背景和意义
神经球蛋白-1(NRP-1)是一种表达在多种细胞中的跨膜受体,它参与了神经系统的发育、血管生成以及肿瘤转移等生物学过程。

此外,NRP-1还可以与VEGF等细胞因子结合,影响肿瘤细胞的增殖和转移。

Hep-2是人源性喉癌细胞系,具有高度的增殖能力。

因此,研究针对NRP-1基因的RNA干扰技术对Hep-2细胞增殖以及NRP-1 mRNA表达的影响,可以为肿瘤治疗提供理论和实践上的新思路。

二、研究目的
本实验旨在通过合成针对NRP-1基因的siRNA,转染进入Hep-2细胞中,以探究其对Hep-2细胞增殖以及NRP-1 mRNA表达的影响。

三、研究内容和方法
1. 合成针对NRP-1基因的siRNA:使用生物信息学方法设计靶向NRP-1基因的siRNA序列,并通过化学合成得到相关siRNA。

2. 转染siRNA:将合成好的siRNA转染进入Hep-2细胞,并设置两个对照组:阳性对照组(转染siRNA对GAPDH基因的siRNA)和阴性对照组(未转染siRNA)。

3. 检测细胞增殖情况:使用CCK-8试剂检测不同处理组下的Hep-2细胞增殖情况。

4. 检测NRP-1 mRNA表达:使用RT-PCR方法检测不同处理组下Hep-2细胞中NRP-1 mRNA的表达情况。

四、预期结果和意义
本研究预计结果为,靶向NRP-1基因的siRNA可以抑制Hep-2细胞增殖,同时降低NRP-1 mRNA的表达水平。

这一研究结果将为NRP-1在肿瘤发生、进展及治疗中的作用提供新的认识和深化,为肿瘤治疗提供新的思路。

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U CP — —2 m RN A e xp r e s s i o n i n t h e g r o u p t r a n s f e c t e d wi t h SI RT 1 — —s i RN A d e c r e a s e d t h a n t h o s e o f t he c o nt r o l
[ Ab s t r a c t ]Ob j e c t i v e T o s t u d y a f t e r i n h i b i t i o n o f S I R T 1 g e n e e x p r e s s i o n b y R NA i n t e r f e r e n c e i n He p G 2
s o me ,t h e t r a n s f e c t i o n e f f i c i e n c y a nd t h e e xp e r s s i o ns o f CPT — l m R NA 、 ECH S 一 1 m RN A 、 U CP 一 2 m RN A 、
法 将S I R T1一s i R NA 在 脂 质 体 介 导 下 瞬 时 转 入 人 肝 癌 H e p G2细 胞 , 用 实 时 荧光 定 量 P C R 方 法 检 测 转 染 效 率及转 染 后 C P T —l mR NA、 E C HS一 1 mR NA、 UC P一2 mR NA、 F A S mR NA、 A C C mR NA、 I I 一6 mR NA
FAS mRNA 、 ACC mRNA、 I I ~6 mRNA we r e d e t e c t e d b y r e a l —t i me q u a nt i t a t i v e PCR.Re s u l t s The 1 e v e l s o f
内蒙 占医学杂志 I n n e r Mo n g o l i a Me d J 2 0 1 4年第 4 6卷第 1 0期
l1 6 3
RNA 干扰 S I RT1及 炎症 因子 影响
林 晓宇 , 朱月 永 , 江家骥 ( 福 建 医科 大学附 属 第一 医院肝 病 中心 , 福建 福州 3 5 0 0 0 4 ) [ 摘要 ]目的 研究 R NA干扰 抑 制 S I RT 1基 因表达 对 He p G 2部 分 能 量代 谢 信 号及 炎症 因子 影响 。 方
I I N Xi a o— y u , Z HU Yu e—y o n g , J I ANG J i a —j i
( Fi r s t a f f i l i a t e d h o s p i t a l o ff u j i a n me d i c a l u n i v e r s i t y l i v e r c e n t e r , Fu z h o u 3 5 0 0 0 4 Ch i n a)
的表达 变化 。结果
H e p G2细 胞 成 功 转 染 S I R T1 一s i R NA 后, UC P一2 mR NA 表 达 降 低 ( P<0 . 0 1 ) 、 F AS
mR NA 表 达 增 高 ( P< 0 . 0 1 ) 、 A C C mR N A 表达 增 高( P<0 . 0 5 ) 、 I I 一6 mR NA 表 达 增 高( P< 0 . 0 0 1 ) , 而C P T

影响 。
[ 关 键词 ]H e p G 2 ; 细胞 ; 能量代 谢 ; 炎 症 因子
[ 中图分 类号 ] R5 8 9 [ 文献标 识码]A [ 论文编号 ]1 0 0 4 — 0 9 5 1 ( 2 0 1 4 ) 1 0 — 1 1 6 3 — 0 3
Ef f e c t 0 f SI RT1 Ge ne n hi b i t i o n b y s i RNA O i l S o me En e r g y Me t a b o l i s m S i g n a l s a n d I n la f mma t o r y Cy t o k i n e o f He D G2 Ce l l s
c e l l s ,t h e c h a ng e s ma y O c c ur s t o pa r t o f t he e n e r g y me t a bo l i s m s i g na l s a nd i nf l a mma t o r y c y t o ki n e s . Me t h o ds The o l i g o nu c 1 e o t i de t e mp l a t e s o f SI RT1一s i RNA we r e u s e d t o t r a n s i e nt t r a n s f e c t e d i n t o He p G2 c e l l s wi t h I i p o —
1 mRN A、 E C HS一1 mR NA 表达 无 明显差 异 。结 论 肝 癌 He p G 2细胞 中抑 制 S I RT 1基 因 表达 可抑 制对 UC P一2 mR NA 表达 , 促进 脂肪 酸 合成及 诱发 炎症 反 应 , 而对 线 粒 体 氧化 途 径 C P T一1 、 E C HS I表达 无 明 显
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