乳膏剂微生物限度检查验证方案解读
克霉唑乳膏微生物限度检测方法的验证
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３８ Ｏ
西 北 药学 杂 志
２０ 年 １ 第 ２ 卷 ０８ Ｏ月 ３
第 ５期
・
药剂 ・
克 霉 唑乳 膏微 生物 限度检 测 方法 的验 证
王 亚 南 ，魏 立 平 ，罗晓 茹 ，吴 艳 （ 解放军总后勤部卫 生部药 品仪器检验所 ， 北京 １０ ７ ） ０ ０ １
Ｖａ ｉ ｔｏ ｔ ｏ ｍ ｉ ｒ ｂａ ｔ ｒ ａ ｉ ｉ ｄ ｔ ｒ ｉ ｔｏ ｍｅ ｈ ｄ ｆ ｒ ｌｄａ ｉ ｎ ｅ ｔ ｆ ｃ ｏ ｃ ｅ ｉ ｌｍ ｔ ｅ ｅ ｍ ｎａ ｉ ｎ ｔ ｏ ｓ ｏ Ｃｌ ｔ ｉ ｚ ｌ ｏ ｒ ｍａ ｏ ｅ
Ｃｒ ａ ｅ ｍ
Ｗ Ａ ａ ａ ， Ｅ ｉｉ ， ＵＯ Ｘｉ ｒ ， Ｕ Ｙ ｎ Ｉ ｓ ｔ ｔ ｆ ｒＤ ｕ ｎ ｎ ｔｕ ｎ ｏ ｔｏ ｏ Ｌ Ｂ ｉｉ ｇ １ ０ ７ ｈ ｎ ） ＮＧ Ｙ ｎ ｎ Ｗ Ｉ ｐｎ Ｉ ａ ｕ ｗ ａ （ｎ ｔ ｕｅ ｏ ｒ ｇ ａ ｄ Ｉ ｓ ｍｅ ｔ ｎｒ ｌ ｆ Ｐ Ａ， ｅ ｎ ０ ０ １Ｃ ｉ Ｌ ｇ ｏ ｉ ｒ Ｃ ｊ ａ
夫西地酸倍他米松乳膏微生物限度检查方法验证
［ 摘 要］ 建 立夫 西地 酸倍 他米 松乳 膏进 行微 生物 限度 检查 法 。 方法： 以４ 种 细菌 、 ２ 种霉菌 进行 夫西 地 酸倍他 米松 乳膏 微生 物 限度检 查方 法 的验证 试验 。 结果 ： 试验 组大 肠埃 希菌 、 金黄 色葡 萄球 菌 、 枯草 芽孢 杆菌 采用 薄膜 过滤 法 回收率 在８ ０ ％以上 ， 霉 菌及酵 母 菌采 用常 规法 回收 率在 ８ ２ ％以上 ， 控 制菌 铜 绿假单 胞菌 采用 常 规法 ， 控 制菌 金黄 色葡萄 球菌 采用 薄膜 过滤法 可检 出试验 菌 。 结论： 经验证 夫西 地酸倍 他米 松乳 膏采 用薄膜 过滤 法检查 细菌 、 控 制菌 ， 常 规法 检查霉 菌及酵 母菌 、 控
薄膜 过滤法 测定结 果显示 ： 采 用薄膜 过滤法 （ 取Ｉ ： ３ Ｏ 供试 液 ｌ ｍ１ ） ＥＡ４ ５ ＊ ｃ含
３ ％吐温 的ｐ Ｈ７ ． Ｏ 的无 菌氯化 钠蛋 白胨 缓冲液 １ ０ ０ ｍｌ 中， 混匀， 过滤 ， 每 膜 用４ ５ ＂ Ｃ
含３ ％吐 温的ｐ Ｈ７ ． Ｏ 的无 菌氯 化钠 蛋 白胨 缓冲 液 ７ ０ ０ ｍ Ｕ ｆ ｆ ７ 次 冲洗 ） 三次 独立 实 验， 金 黄色 葡萄球 菌 、 大肠 杆菌 和枯草 芽孢 菌回收 率均 大于７ ０ ％， 本 品的抑 菌作
钠 蛋 白胨 缓冲 液 ７ ￣ｉ ＇ ｔ １ 分７ 次冲洗 ， 取 出滤膜 分别 加 入２ 瓶１ ０ ０ ｍｉ 营养 肉汤培 养
色念珠菌真菌液体培养物ｌ ｍ１ ３ １ ９ ｍ１ ０ ． ９ ％无菌氯化钠溶液 ， １ ０ 倍稀释至１ ０ — ５ － １ ０ － ７ ， 菌落 数约 为５ ０ １ ０ ０ ｃ ｆ ａ ／ ｍＩ ， 做菌 落 计数备 用 。 ③取 经２ ５ ￣ Ｃ 培养１ 周 的黑
复方樟脑乳膏微生物限度检查的方法学验证
Ａｂｔａｔ ｂｅｔｅＴ ｓ ｂｉ ｅ ｏ ｆ ｃｏｉ ｉｉ ｅａ ｉａｏ ｏ ｃｍ ａ ｄｃｍ ｈｒ ｒａ ｓｒｃ：Ｏ ｊｃｖ ｏｅｔ ｌｈａｍ ｔ ｄｏ ｍｉ ｂ ｌ ｍ ｔ ｘｍ ｎｔ ｎｆ ｏ ｐｎ ａ ｐ ｏ ｅｍ．Ｍｅ ｏ ｓＢｓ ｇＯ ｅ ｉ ａ ｓ ｈ ｒ ａｌ ｉ ｒ ｃ ｔ ｄ ａｉ ｆｔ ｈ ｎ ｈ
ｎ ｔ ｆ ｃ ｉｇ ｔｅ ｍｉｒ ｂ ｎ ｔｅ ｓ ｍｐ ｅ ｂ ｉ ｇｌ ｉ ｇ ｔｉ ａ ｍｏ ｅｆ ａ ｉｌ ｔ ｏ ｆ ｃｏ ｉｌ ｉ ｔｅ ａ ｎ ｔ ｎ ａ ｄ ｃ ｎｒ ｌ ａ ｔｒａｔ ｓ ｏ ｆ ｔ ｃｏ ｅｉ ｈ ａ ｌ ｅｎ ｉ ｎ ．Ｉ ｓ ｒ ｅ ｓｂ ｅｍｅｈ ｄ ｏ ｒｂ ａ ｍｉ ｘ ｍｉ ａｉ ｎ ｏ ｔ ｃｅ ｔ ａｅ ｎ ｈ ｖ ｍｉ ｌ ｏ ｏｂ ｉ ｅ
复方樟脑 乳膏 由樟脑 、薄荷 脑 、水杨酸 甲酯 、苯海拉 明 、葡萄糖酸氯己定 、甘草次 酸组成 ，所含樟脑 、薄荷脑 、 水杨 酸甲酯具 有缓解 肿胀 、止痛 、止 痒作用 ，盐 酸苯海 拉 明为抗组胺药 ，葡 萄糖酸氯 己定 为消毒 防腐 药 ，甘草次 酸 具有 抗炎 、抗 过 敏作 用。用 于虫 咬皮 炎 、湿疹 、瘙痒 症 、 神经性皮炎 、过敏性 皮炎 、丘疹 性荨麻 疹等 ，也可 用于肩 胛酸痛 、肌 肉痛及烫 伤后 的皮 肤疼痛 。我 们在采 用常规法 进行微生物 限度检查 时，发 现其 主药 抑菌作 用较强 ，不 能 消除其干 扰 ，所 以需要 选择合 适 的方 法。经查 阅文献… ， 决定根据 ０ ２ １ ． ２ ｍ滤 膜可截 留细菌的 特性 ，选用 薄膜 过滤 ． 法来进行本品种的微生物 限度检查 。 根据 《 中华人 民共和 国药典 ２０ ０ ５年版》 附录 ｘ 微生 Ｉ Ｊ 物限度检查 法 ，对薄 膜过滤法 用于复 方樟脑乳 膏微 生物限 度 检 查 进行 方 法 学 验 证 。 １ 仪 器 与 试 药 试 验仪 器 高压灭 菌锅 （ Ｘ—Ｂ ５ ，合肥华泰医疗设备 Ｌ ７Ｌ 有限公 司） ，恒温培养箱 （ Ｒ Ｌ Ｈ一１０，上海一恒 ） ５ ，生化培 养箱 （ Ｈ Ｓ Ｐ一００ ７ ，上海 实验仪 器厂 ） ，恒温水 浴 （ ＷＳ一 Ｈ ２ ，上 海 一 恒 科 技 有 限公 司 ） ４ ，生 物 安 全 柜 （ Ｈ Ｂ Ｃ一１０ ６０１ Ｉ Ａ Ｂ ，苏州 安 泰 空 气 技 术 有 限 公 司 ） 微 孔 滤 膜 （ 径 ／３ 。 直 ５ｍ ０ ｍ，孔 径 ０ ２ Ｉ ．２ｘ ｍ，上 海 新 亚 ） 试药 复方樟脑 乳膏 （ 自制 ，批 号 ２ ００ ０ ） ０ ９ ８ １ ；氯 化 钠 蛋白胨缓 冲液 （ Ｈ ． ，自制 ） ｐ ７０ ；生理 盐水 （ 自制 ） ；聚 山梨酯 一８ （ Ｏ 广州化学试剂厂 ，批号 ２ ００ ０ ０ ８ ７ １—１ 。 ） 培养基 营养琼脂培养 基 ；营养 肉汤培养基 ；改 良马丁 培养基 ；玫瑰红钠 琼脂培 养基 ；胆盐乳 糖增菌 培养 基 ；改 良马丁琼脂培养基 ；溴化 十六烷 基三 甲铵 琼脂 甘露醇氯 化 钠琼脂培养基 ，均购 自广东环凯微生物科技有 限公 司。 验证用菌株 大 肠埃 希菌 Ａ Ｃ ８３ ，金 黄 色葡 萄球 菌 Ｔ Ｃ ７９ Ｃ Ｃ （ ）２０ ３ Ｍ Ｃ Ｂ ６ ０ ，枯 草 芽孢 杆菌 Ｃ Ｃ （ ＭＣ Ｂ）６ ５ １ ３０ ，铜 绿 假 单 胞 菌 Ａ Ｃ ９２ ，白 色 念 珠 菌 Ａ Ｃ １ ２ １ Ｔ Ｃ０７ Ｔ Ｃ ０ ３ ，黑 曲 霉 Ａ Ｃ １４ ４ Ｔ Ｃ ６ ０ ，均购 自广东微生物菌种保藏中心。 ２ 方 法 与 结 果 ２ １ 菌悬液制备 ． ２ １ １ 取 大肠埃希菌 、金黄色葡萄球菌 、枯草 芽孢杆菌 的 ． ．
FA-VD-111 甲硝唑乳膏微生物限度检查方法验证方案
解放军总医院第一附属医院
甲硝唑乳膏
微生物限度检查方法验证方案
1 目的
根据《中国药典》2015版草案中的相关规定，建立甲硝唑乳膏的微生物限度检查方法，并对其进行验证，保证其检验方法的科学性，使检验结果准确可靠。
2 范围
本验证方案适用于甲硝唑乳膏的微生物限度检查方法的验证。
3 人员与职责
质量控制人员负责验证方案与报告的起草，并按照批准的方案实施，完成检验相关数据的采集；质量保证人员负责验证方案和报告的审核；质量管理负责人负责验证方案和报告的批准。
4 培训
本方案实施前应对参加验证人员进行培训，并做好培训记录确保进行验证的人员均能熟悉、掌握验证过程。
5 验证方案
5.1 制剂信息
甲硝唑乳膏为甲硝唑加入至以甘油、三乙醇胺、水组成的水相和以硬脂酸、羊毛脂、凡士林组成的油相乳化混匀后的基质中配制而成，有一定的抗菌作用，临床作为抗阿米巴、抗滴虫、抗厌氧菌药使用。
其质量标准中规定应进行微生物限度检查，每1g样品中细菌数不得超过100cfu，霉菌和酵母菌数不得超过100cfu，并不得检出金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌。
根据以上特点，本方案中按《中国药典》2015版草案《非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法》（1105）和《非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法》（1106）中相关要求，决定采用稀释剂稀释法消除抑菌性成分对结果的影响，制备供试品溶液；采用平皿法中的倾注法对供试品中的需氧菌总数及霉菌和酵母菌总数进行计数，根据草案对其质量标准中规定的金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌进行检查，并对所选用的计数和检查方法进行验证。
复方苦参乳膏微生物限度检查方法验证
培养 ２ ４ ４ ８ 小 时计 数 。取 １ ： ２ ０ 供 试液 ｌ ｍ ｌ 均匀 接 种 于 ５ 个 平 皿 即０ ． ２ ｍ ｌ ／ Ｉ ｍ， 立 即倾 注 玫 瑰 红 钠 脂 琼 培 养基 ， 平 行 制 备 ２份 ， 置 养 箱 培养 １ ８ — ２ ４ 小时 ； 接 种 白色念 珠 菌 的 新鲜 培 养 物 至 ｌ Ｏ ｍ ｌ 改 于 ２ ３ ～ ２ ８ ＇ （ ３ 培 养箱 培 养 ４ ８ — ７ ２ 小 时计 数 。结 果 见表 １ 表 １ 菌 落 计 数 方 法 的 验证 良马 丁 培 养 基 中 ， 培养 ２ ４ — ４ ８ 小 时， 然后各用 ０ ． ９ ％无 菌 氯 化钠 溶液做 ｌ Ｏ倍系列稀释至每 ｌ ｍ ｌ 含菌数在 ５ ０ — １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ的菌悬液。 菌种类型 试验次数 试验组 菌液组 供试品对照组 试验组回收率 接 种 黑 曲霉 的新 鲜 培 养 物 至 改 良马 丁 琼 脂 斜 面 培 养 基 上 ， ２ ３ — ２ ８ ℃培 养 ５ － ７ 天 至 大 量 孢子 产生 ，加 入 ３ － ５ ｍ １ ０ ． ９ ％无 菌 氯 化钠 溶液 ， 振摇 ， 洗脱 孢子 ， 吸 出 孢 子悬 液 ， （ 用 管 口带 有 薄 的 无 菌棉 花能过滤菌丝的无菌吸管 ） 至无 菌 试 管 内 ， 用０ ． ９ ％无 菌 氯 化钠 溶 液 制成 每 ｌ ｍ ｌ 含 孢子 数 在 ５ ０ — １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ的孢 子 悬 液 。 ２ ． ２ 供 试 液 的制 备 ： 称取样品 ５ ｇ 加 到 已灭 菌 带 玻璃 珠 数 粒 含 聚 山梨酯一 ８ ０ ｌ Ｏ ｇ 、单 硬脂 酸 甘 油 酯 ３ ｇ的 １ ５ ０ ｍ ｌ 三 角烧 瓶 中 ， ４ ４ ￣ Ｃ 保温后 ， 充 分振 摇 ， 使 供 试 品溶 解 ， 加入 ８ ０ ｍ ｌ 预先保温至 ４ ４ ℃已 灭菌的 Ｐ Ｈ ７ ． ０无 菌 氯 化 钠 一 蛋 白胨 缓 冲溶 液 中 ， 充分振摇 ， 使乳
···软膏微生物方法学验证方案
文件编号：TS-YZ-WF-006-03 生效日期: 页码：共页**软膏微生物方法学验证方案******制药有限公司验证方案起草部门起草人职务签字日期质量部*** QC主任质量部*** QC质量部*** QC验证方案审核部门姓名职务签字日期质量部*** 部长验证方案批准批准人职务签字日期*** 质量受权人目录1. 目的--------------------------------------------------------------------4 2．概述--------------------------------------------------------------------43. 验证小组----------------------------------------------------------------44. 相关文件和人员培训的验证------------------------------------------------4 4.1 确认所需文件的验证---------------------------------------------------44.2人员培训的验证--------------------------------------------------------45. 验证内容：槐芩软膏微生物方法学------------------------------------------5 5.1细菌、霉菌及酵母菌的检查----------------------------------------------5 5.2三批样品的细菌、霉菌及酵母的检查--------------------------------------7 5.3控制菌（金黄色葡萄球菌）的检查----------------------------------------7 5.4三批样品的金黄色葡萄球菌的检查----------------------------------------8 5.5控制菌（铜绿假单胞菌）的检查------------------------------------------95.6三批样品的铜绿假单胞菌）的检查---------------------------------------106. 偏差分析及处理----------------------------------------------------------117. 拟定日常监控及再验证周期------------------------------------------------118. 结果与评价--------------------------------------------------------------119. 附录--------------------------------------------------------------------111.目的：对建立的微生物限度检查方法进行验证，以证明该方法是否适合于槐芩软膏的微生物限度检查试验。
硝酸咪康唑乳膏微生物限度检查验证
法， 值得临床推广应用 。
参 考 文 献
［ ］ 乐 杰 ． 产科 学 ． 民 卫 生 出版 社 ，０４：９９ ． １ 妇 人 ２０ ８ －２ ［ 杨 琼珍 ． 非 司 酮 配 伍 米 索 前 列 醇 在 稽 留 流 产 刮 宫术 前 的 应 ２］ 米 用 ． 国计 划 生育 学 杂志 ，０ ６３ １５ ：７ ．８ ． 中 ２０ ，（ ２ ） １９ １０
台 、 温生化培养箱 过滤器 。 恒
色念珠菌 、 曲霉 取过滤 膜贴 于玫 瑰红 钠 琼脂 培养基 ２ ￣ 黑 ０Ｃ
～
２ ℃培养 ７ 。① 阳性对照菌液组 ： “ ． ” ５ ２ｈ 取 ２ ２ 项下 的对 照
菌液大肠埃希 菌、 黄色葡萄球菌 、 芽孢杆菌 、 金 枯 白色 念 珠
１ ３ 阳性 对照菌 ： ． 大肠 埃希 菌 ［ Ｍｃ （ ４ １２ ； 黄 色葡 Ｃ ｃ Ｂ）４ ０ ］ 金 萄球 菌 ［ ＭＣ Ｂ）２０ ３］ 枯 草 芽 孢 杆 菌 ［ Ｍ Ｃ（ Ｃ Ｃ（ ６０ ； Ｃ Ｃ Ｂ） ６ ５ １ ； 绿 假 单 孢 菌 ［ Ｃ Ｃ（ ３０ ］铜 Ｅ ＭＣ Ｂ）１１４］ 白 色 念 珠 菌 ００ ； ［ ＭＣ （ ） ８０ ］ 黑 曲霉菌 ［ ＭＣ Ｆ ９０ ３ （ 种均 由 Ｃ Ｃ Ｆ ９０１ ； Ｃ Ｃ（ ） ８０ ］ 菌
次 冲洗 ， 入 大 肠 埃 希 菌 、 黄 色 葡 萄 球 菌 、 草 芽 孢 杆 菌 取 加 金 枯 过 滤 膜 贴 于 营 养 琼 脂 培 养 基 ，０ ～ ３ ℃ 培 养 ４ ； 入 白 ３℃ ５ ８ｈ 加
微生物限度检查方法验证方案
微生物限度检查方法验证方案微生物限度检查法验证方案1。
目的:为确认所采用的方法适用于药品微生物限度检查，包括细菌、霉菌、酵母菌和对照菌的计数，特制定本验证方案。
通过比较试验菌的复苏生长结果，评价整个试验方法的准确性、有效性和重现性，从而确定试验样品在实验条件下无抑菌活性或抑菌活性可忽略不计。
所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。
验证过程应严格按照本计划规定的内容进行。
因特殊原因确需变更的，应填写《验证计划变更申请书》，报验证领导小组批准。
2.范围: 本验证计划适用于微生物限度检查方法的验证。
3。
规范性引用文件:根据《中国药典》XXXX版附录二附录九J微生物限度检查法的要求，由于部分试验品的抗菌活性，当已建立的微生物检查方法或产品的成分发生变化或原检查方法的检查条件发生变化时，可能会影响检查结果的准确性。
因此，必须验证测试物品的抗菌活性和测试方法的可靠性。
4.验证和实施:4.4.1试验前准备:4.4.1.1试验设备的准备:试管、刻度移液器、薄膜过滤器、滤膜(孔径0.22um，直径50毫米)、平皿、空三角瓶、称重纸等。
试验要求用牛皮纸包裹，放在湿热灭菌器中，在121℃灭菌30分钟，3天内使用4.4.1.2试验培养基的制备:取脱水培养基如营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基(BL)、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡萄糖醛酸苷培养基(MUG)等经适用性检验合格的脱水培养基，按相应的制备说明用纯净水配制，分装，2小时内放入湿热灭菌器中，121℃灭菌15分钟，3周内使用4.4.1.3试验用稀释液/缓冲液和冲洗液的配制:取有效期内的试剂，配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、0.05%(毫升/毫升)聚山梨酯80无菌氯化钠溶液和0.05%(毫升/毫升)0.9%氯化钠溶液等。
按照相应的制备方法，用纯净水配制，加热溶解，过滤，分装，121℃灭菌15分钟，3周内使用4.4.2试验菌的制备和稀释:4.4.2.1细菌、霉菌和酵母菌计数法验证菌液:4.4.2.1.1取少量新鲜培养的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌，接种于10毫升营养肉汤中，在30-35℃培养18-24小时；将新鲜白色念珠菌培养物接种到改良的马丁培养基中，在23-28℃培养24-48小时；将黑曲霉的新鲜培养物接种到改良的马丁琼脂斜面培养基上，在23-28℃培养5-7天4.4.2.1.2将上述大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和白色念珠菌的均匀培养物(细菌悬液)用0.9%无菌氯化钠溶液稀释两次，以制备每毫升细菌含50-100伏的测试细菌溶液。
中国药典微生物限度检查方法验证方案
中国药典微生物限度检查方法验证方案一、引言药品的质量与安全性是保障患者用药安全的重要方面。
微生物限度检查是药品质量控制的重要环节，用于评价药品中微生物的污染情况。
为确保检测结果的准确性和可靠性，本文旨在制定中国药典微生物限度检查方法验证方案。
二、背景微生物限度检查方法验证是指确定某一方法在特定条件下的适用性，方法验证的结果直接影响到药品生产和品质控制。
为了保证方法验证的可靠性，必须按照一定的规范和要求进行操作。
三、验证目的验证中国药典中所规定的微生物限度检查方法在实际应用中的准确性和可靠性，以确保药品的微生物限度符合国家及相关法规的要求。
四、验证程序1. 确定验证方法：根据中国药典中规定的微生物限度检查方法，选择合适的验证样品和验证条件。
2. 准备验证样品：从实际生产过程中随机选取药品样品，确保样品的代表性。
3. 执行验证实验：按照中国药典中的方法操作，对验证样品进行微生物限度检查。
4. 数据分析和评估：根据验证实验的结果，进行数据分析和评估，评估方法的准确性和可靠性。
5. 结果判定：根据数据评估结果，对微生物限度检查方法进行判定，判断方法是否适用于实际生产中的微生物限度检查。
6. 验证报告编制：根据验证实验的结果和结论，编制验证报告。
五、验证内容本次验证主要包括如下内容：1. 对选择的验证样品进行微生物限度检查。
2. 对验证样品进行菌落计数。
3. 对验证样品进行培养方法的验证。
4. 对不同微生物种类的检查方法进行验证。
5. 对不同微生物菌株的适应性进行验证。
六、风险评估在验证过程中，存在一定的风险因素，需进行风险评估，确保验证结果的可靠性和准确性。
风险评估主要包括验证样品来源的可靠性、实验操作的准确性、验证条件的合理性等。
七、验证结果与讨论根据验证实验的结果和数据分析，可以得出下列结论：1. 所验证的微生物限度检查方法在实际应用中的准确性和可靠性较高。
2. 所验证的微生物限度检查方法适用于不同药品制剂类型的微生物限度检查。
微生物限度检查方法适用性验证方案
微生物限度检查方法适用性验证方案适用性验证是指对微生物限度检查方法所应用范围进行验证，确保方法适用于具体药物产品的检测。
适用性验证需要涉及以下几个方面：1.准确性：准确性是微生物限度检查方法的基本要求。
验证方法的准确性需要进行重复性和中间精密度实验，确保在一定条件下对同一药物样品进行测试时，结果之间具有较高的一致性和准确性。
2.灵敏度：灵敏度是指微生物限度检查方法能够检测到微生物数量的最低限度。
灵敏度验证需要使用一系列稀释溶液，以确定方法可以可靠地检测到微生物的最低限度。
3.特异性：特异性是指微生物限度检查方法只对目标微生物有反应，不受其他微生物的干扰。
特异性验证需要进行对照实验，验证方法能够正确地检测出目标微生物，并排除其他微生物的干扰。
4.精密度：精密度是指方法的重复性和中间精密度。
重复性验证需要多次重复测定同一样品，验证方法在相同条件下的结果具有较高的一致性；而中间精密度验证需要在不同的实验室、不同仪器、不同操作人员下进行测试，验证方法在不同条件下的可靠性。
5.稳定性：稳定性是指方法在一定时间范围内的稳定性。
稳定性验证需要在一定时间范围内对同一样品进行测试，并比较结果的一致性，以确保方法的可靠性和稳定性。
在实施适用性验证时需要注意以下几个方面：1.选择合适的药物样品进行验证，确保样品具有代表性和典型性。
2.严格控制实验条件，包括试验环境、温度、湿度等，以减少实验条件对结果的影响。
3.提高实验人员的技能水平，确保实验人员具有足够的实验操作技能和知识背景。
4.在验证过程中及时记录实验数据，并进行统计分析，确保结果的可靠性和准确性。
5.与相关法规和标准保持一致，确保验证方法的合规性和可靠性。
适用性验证是确保微生物限度检查方法准确性和可靠性的重要环节。
通过适用性验证，可以确保所采用的方法能够可靠地检测药物产品中的微生物限度，从而保证药品的质量和安全性。
3种软膏剂的微生物限度检查验证
（ 江省金华市第五 医院， 江 金 华 浙 浙 ３ １０ ） ２０ １
摘要 ：目的 建立 ３种医院乳膏剂 的微生物限度检查方法 。方法 菌活性 。结果
采用 ５种 阳性对照菌 ， 通过 回收率试 验 ， 定它们 是否有抑 测 复方 曲安奈 德樟脑乳 膏（Ⅱ） 维 生素 Ｅ 、
ｔ
复方曲安奈德樟脑 乳膏（Ⅱ） 维生素 Ｅ尿囊素乳膏 （ 这二种供试 品试 验菌 回收率均高于 ７ ％ ， 明无抑菌 、 Ⅱ） ０ 证
作用 ；５ １ ％复方硫乳膏 （ 有抑 菌作用 ， Ⅲ） 但通过培养基稀释法可消除抑菌作用 。结论
关键词 ： 医院制剂 ； 微生物 限度 ； 方法验证 ； 抑菌作用
尿囊 素乳膏 （Ｉ） Ｉ 可按常规方法进行微生物限度检查 ，５ １％复方硫乳膏 （ 需按培养基稀 释法进 行微 生物限度检查 。 Ⅲ）
ｃ ｎ ｒｌｂａ ｔ ｒｕ ｗａ ｍｐｌｙ ｄ． ｄ ｄｅｅ ｍｉ ｄ ｍｉｒ ｂ ａ ｎ ｉ ｉｏ ｙ ａ ｔｖ ｔ ｙ ｍ ｅ ｓｏ ｅ ｌｉ ｒｔ ｅ ｔ ｏ ｔｏ ｃ ｅ ｍ ｓｅ ｉ ｏ ｅ ａ ｔｒ ｎｅ ｃｏ ｉ ｌｉ ｈ ｂｔ ｒ ｃｉｉｙ ｂ ａ ｆｒ ｃａ ｍ ａｅ ｔｓ．Ｒｅ ｌｌｓ Ｒｅ ａ ｄｉ ｈｅｅ ｍ． ｎ ｎ ｓｌｔ ｇ ｒ ｎｇ ｔ ｏ
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安 徽 医 药
Ａ ｈ ｉ ｅ ｉ ｌ ｎ ｈ ｒ ａｅｔ ａ ｏｒａ ２０ ｐ；２ ４ ｎ ｕ Ｍ ｄｃ ｄＰ ａｍ ｃｕｉ ｌ ｕｎｌ ０ ８Ａ ｒ１ （ １ ａａ ｃ Ｊ
微生物限度检查方法验证方案
微生物限度检查方法验证方案微生物限度检查方法验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1.验证方案起草起草人：起草时期：年月日2.验证小组成员：3.验证方案审核4.验证方案批准批准人：批准日期：二、验证方案1.验证目的和原理1.1验证目的为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。
验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。
1.2原理通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。
2.验证方法步骤2.1验证前的准备：进行微生物限度检查方法验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。
试验菌应包括G—、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。
2.2验证试验的操作计划：用3个不同批号产品微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断限度检查方法是否对产品有影响。
2.3试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“”的微生物限度检查对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组回收率也不低于70%。
3.试验实施3.1试验前的准备3.1.1主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。
3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。
环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。
操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于4.9pa。
3.1.3试验样品：批号：批号：批号：3.1.4培养基：3.1.5稀释液：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。
3.1.6验证用微生物名称及其编号编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。
3.1.7器具：无菌薄膜过滤器：（孔径0.45um直径50mm）、无菌移液管（5ml）4.验证方法4.1菌液的制备将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种至10ml的无菌营养肉汤中在30～35℃下培养18～24小时，将白色念珠菌接种至改良马丁液体培养基中，在23～28℃下培养24～48小时。
微生物限度检查方法验证方案 (1)
微生物限度检查方法验证方案1.目的：为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查，特制定本验证方案，通过比较试验菌的恢复生长结果，来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计，所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。
验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案修改申请并报验证领导小组批准2.范围：本验证方案适用于微生物限度检查方法的验证。
3.规范性引用文件：根据《中国药典》2010年版二部附录ⅪJ 微生物限度检查法的要求，由于某些供试品具有抗菌活性，在建立微生物检查方法或产品的组分发生改变或原检查法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。
4.验证实施：试验前的准备:试验用具的准备：将试验需用的试管、刻度吸管、薄膜过滤器、滤膜（孔径、直径50mm）、平皿、空三角瓶、称量纸等，用牛皮纸包扎好后，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌30 min，在3天内使用。
试验用培养基的制备：取适用性检查合格的营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基（BL）、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基（MUG）等脱水培养基，按照相应的配制说明，用纯化水配制、分装后，在2小时内，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌15 min，在3周内使用。
试验用稀释剂/缓冲液、冲洗液的制备：取在有效期内的试剂，按照相应的配制方法，配制无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、%无菌氯化钠溶液、%（ml/ml）聚山梨酯80的%无菌氯化钠溶液等，用纯化水配制，加热使溶，过滤，分装，在121℃，灭菌15 min，在3周内使用。
试验菌的制备和稀释：细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证用菌液：控制菌检查方法验证用菌液：取上述均匀培养物（菌悬液），用%无菌氯化钠溶液对倍稀释，制成每1ml含菌10～100cfu的试验菌液。
中药软膏剂微生物限度检查
3. 1摇 从表 2、表 3 可见,受试中药软膏剂对金黄色 葡萄球菌的抑菌作用较铜绿假单孢菌强,不同品种
的抑菌作用也不尽相同。 大多数品种在 1 颐100 浓度 时多有抑菌性,所以若在控制菌检验中未设置阳性 对照实验,则往往会显示假阴性结果。 有些品种甚 至稀释至 1 颐1000 时仍有抑菌作用,按常规法检验各 稀释级均无菌生长并不是实际结果。
采用加样回收法,精密称取已知含量样品(2. 944 mg / g) 约 0. 125 g,定量加入浓度 380 滋g / mL 的盐酸小 檗碱对照品 1 mL,按“2. 3冶 项下方法制备溶液,并进样 测定,计算回收率,结果平均回收率 = 100. 29 % ,n = 5, RSD = 1. 36% ,见表 1。
1摇 实验材料
1. 1摇 仪器与试剂摇 半封闭薄膜过滤器(奥特赛恩斯仪 器有限公司) ,0. 22 滋m 孔径微孔滤膜( 上海生物化学 试剂公司 ),培养箱( 上海跃进医疗器械厂)。 十四烷 酸异丙酯( 北京中联试 剂 精 细化学 品有限 公 司,批号: 000726) 。 2. 2 摇 试 验 用 菌 种 摇 铜 绿 假 单 胞 菌 [ CMCC ( B ) 10 104] 、金黄色葡萄球菌[ CMCC( B)26 003] 均由中国药 品生物制品检定所提供。 2. 3摇 培养基摇 营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养 基、营养肉汤培养基、甘露醇高盐琼脂培养基 BL 增菌 培养液、 溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基均由中国药 品生物制品检定所提供。 2. 4摇 供试品摇 马应龙麝香痔疮膏(武汉马应龙药业有 限公司),铍宝消炎癣湿药膏( 广东皮宝制药有限公 司),片仔癀软膏(漳州片仔癀药业有限公司) 。
表 1摇 回收率试验测定结果 Tab. 1摇 Result of recovery test
莫匹罗星软膏微生物限度检查的方法学验证
微 生物 限度 检查是 反 映药 品安全 性 的重要 指标
（ Ｂ） ６ ３ ５ ０ １ ］ 、 铜绿 假单胞 菌 ［ Ｃ Ｍ Ｃ Ｃ（ Ｂ） １ ０ １ ０ ４ ］ 、 白色
之一 ， 《 中 国药 典 》 明 确规 定 ， 当 建 立 药 品 的微 生 物
限度检查 法 时 ， 应 进 行 方 法 验证 。验证 的 目的是
Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｏ ｐ ｏ ｅ ｉ ａ ， ｃ ｏ ｍｍｏ ｎ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ， ｄ ｉ ｌ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ａ ｎ ｄ ｍｅ ｍｂ ｒ ａ ｎ ｅ ｉ ｆ ｌ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｗｅ ｒ ｅ ｕ ｓ ｅ ｄ ｏｒ ｆ ｔ ｈ ｅ ｖ ｅ ｒ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ
铜绿假 单胞茵采用常规 法。结论 确立 了莫 匹罗星软 膏的微生物限度检 查方法 ， 可有 效控 制其 质量。
关键 词 ： 莫 匹 罗 星软 膏 ； 微 生 物 限 度检 查 ； 方法 验 证
中图分类号 ： Ｒ ９ ２ ７ ． １ １ 文献标 识码 ： Ａ 文章编号 ： ２ ０ ９ ５— ５ ３ ７ ５ （ ２ ０ １ ４ ） １ ０—０ ５ ９ ２— ０ ０ ３
药学研究 ・ ￣ ｕ ｍ ａ ｌ ｏ ｆ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍ ａ ｃ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ Ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ２ ０ １ ４ Ｖ ｏ １ ． ３ ３ ， Ｎｏ ． １ ０
莫 匹罗星 软 膏微 生物 限度 检 查 的方 法 学验 证
杨 育林 ， 吉 莹洁
（ 洛 阳市食 品 药 品检 验 所 ， 河南 洛阳 ４ ７ １ ０ ２ ３ ）
念 珠菌 ［ Ｃ Ｍ Ｃ Ｃ（ Ｆ ） ９ ８ ０ ０ １ ］ 、 黑 曲霉菌 ［ Ｃ Ｍ Ｃ Ｃ（ Ｆ ） ９ ８ ０ ０ ３ ］ 均 由河南 省食 品药 品检验所提供 。
复方地塞米松乳膏微生物限度检查方法的验证试验
摘
５ ０２ ） ３ ０ １
要 ：目的］ ［ 建立复方地塞米松 乳膏微 生物限度检 查法 ， 并对方法进行 验证 。［ 法］ 方 采用《 中国药典）０５ ２０ 年版二部 附
维普资讯
：： ：
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２０ ， ｏ．１ ｏ３ ０８ Ｖ １ ． １Ｎ
制 。因此 ， 用 高效 液相 色谱 法 测定 样 品中大 黄 素 的含 ｊ 采
关键词 ： 复方地塞米松乳膏 ； 生物 限度检查 ； 法验证 微 方
中 图分 类 号 ： ９ ７ 文 献 标 识 码 ： 文章 编 号 ：０ ８ ４ ６ ２ ０ ）３ ０ ４ ３ Ｒ１ Ａ １０ —７ ８ （０ ８ ０ —０７ —０
Ｖａ ｉ ａ ｉｎ ｆＭ ｅｈｏ ｎ ｔ ｅ Ｍ ｉｒ ｂ ａ ｍ ｉ ｓ ｏ ｍ ｐ ｕ ｄ ｌｄ ｔｏ ｏ ｔ ｄ ｏ ｈ ｃ ｏ ｉ ｌＬｉ ｔＴｅ ｔｆ ｒＣｏ ｏ ｎ
Ａ ｓ ａｔ［ ｂ ｃｖ］ｏｅａｌｈ ｔ ｄ ｆ ｉｏｉ ｍｔｅ ｒｏ ｐｕｄ ｅａ ｅ ａ ｎ ｅ ｔ ｃ． ｄ ａ ｙ ｕ ｔ ｂｔ ｃ：Ｏ ｊ ｔ ｅＴ ｔ ｉ ｍｅ ｏ ｃ ｂ Ｉ ｉｔ ｔｏ ｃｍ ｏｎ ｘｍ ｔ ｓ ｅ ｃ ａ ｅ－ａ ｒ ｔｈ ｒ ｅｉ ｓ ｂｓ ａ ｈ ｏ ｍ ｒ ａ ｉ ｓｆ ｌ ｄ ｈ ｏ ａ ｔｅｒ ｎ ｎ ｃｒｏ ｅ ￣ ｖｌａｏ ｉｍ ｔ ｄ ［ ｅ ｏｓ ｈ ｅ ｏｓ ｆ ｉｏｉ ｔｅ ｐｎｉ ｌ ｅＩ ｆ ｈｒ ａｏｏｉｏ ｏｌ Ｓｅｕ． ａｄｔｎ ｆｈ ｅ ｏ ． Ｍ ｔ ｄ］ ｅ ｔ ｄ ｃ ｂ ｌｍｉｔ ｔｎ ｐｅｄ ｅｖ ｕ ａ ｃｐｅ ｐ ｐ ’ｒ ｂ ｉ ｉ ｏ ｔｓ ｈ ｈ Ｔ ｍ ｈ ｏ ｍ ｒ ａｌ ｓｉａ ｉ ｃ ｏｍ Ｉ ｐ ｍ ｓ ｏ ａ ｆｅ ｅ ｐ １ ｈ ａｅｉ ｎ ０５ ｗ ｒ ａｏｔ ｉ ｔ ｃ ｐｕ ｄ ｅａ ｔａ ｎ ｅ ｔ ｃ ａ 【 ｅ ｌ］ ｏｔ ｅ ｅ ｏ ｕ ｓ ｉｏ Ｃ ｉ （ ｔ ０ ） ｅ ｐｅ ｔ ｖ ｄ ｅ ｏ ｏ ｎ ｘｍｅ ｓ ｅ ｃ ａ ｅ ｃｆ ｎ ｄｉ ２ ｏ ｅｄ ｄ ｏ ａ ａ ｍ ｌ ｄ ｈ ｏ ａ ｔ ｅ ｒ ｍ．Ｒ ｕｓＲ ｕ ｎ ｔ ｄｃ ｌｂ ｕｅ ｓ ｔ ｉ ｍ ｈ ｏｄｅ ｄ
冰酚软膏微生物限度检查方法学验证
冰酚软膏微生物限度检查方法学验证摘要目的：建立冰酚软膏微生物限度检查法.方法：以4株细菌、2株真菌对冰酚软膏进行了微生物限度检查方法的验证试验。
结果：试验组金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌采用薄膜过滤法（冲洗量300mL）回收率为85%以上；白色念珠菌、黑曲霉菌采用平皿法回收率为87%以上；控制菌检查中采用直接接种法，可检出铜绿假单胞菌；采用薄膜过滤法（冲洗量300mL），可检出金黄色葡萄球菌。
结论：经验证冰酚软膏采用薄膜过滤法检查细菌，常规法检查霉菌、酵母菌，直接接种检查铜绿假单胞菌，波膜过滤法检查金黄色葡萄球菌。
标签：冰酚软膏；微生物限度检查；方法学验证冰酚软膏是我院自行配制的医院制剂，其主要成分为冰片、丹皮酚等，具有消炎止痒之作用，多年来一直备受广大患者的推崇，经多年临床验证表明，疗效显著，且不良反应小。
为更好地控制药品质量，我们参考相关文献[1-4]对其微生物检查方法进行验证。
1 仪器与材料1.1 仪器设备：净化工作台；PL2001-L电子天平（梅特勒-托利多公司）；HTY-761匀浆仪、HTY-ⅢA集菌仪、开放式薄膜过滤器（杭州高德泰林有限公司）；BIO-Ⅱ-A2生物安全柜（上海振梓空气净化设备有限公司）；YQL-LS-50S Ⅱ立式压力蒸汽灭菌器（上海博讯实业有限公司）；GHP-9162电热恒温培养箱（扬州慧科电子有限公司）；MJX-160B-Z霉菌培养箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）。
1.2 试药与培养基营养肉汤培养基、改良马丁液体培养基、改良马丁琼脂培养基、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基（BL）、亚碲酸钠肉汤培养基等均由中药品生物制品检定所提供。
稀释剂：pH7.0蛋白胨-氯化钠缓冲液（稀释供试品用，中国药品生物制品检定所提供），聚山梨酯80（分析纯）1.3 供试品：冰酚软膏（规格：每盒重10g，生产厂家：上海海虹（实业）集团巢湖今辰药业有限公司，批号：20130511，20130512，20130513）1.4 试验菌：大肠埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC（B）44102〕，金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）〔CMCC（B）26003〕，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63501〕，铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）〔CMCC（B）10104〕，白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98001〕，均由中国医学菌种保藏中心提供；黑曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98003〕，由中国药品生物制品检定所提供。
3种软膏剂的微生物限度检查验证
3种软膏剂的微生物限度检查验证
陆益萍
【期刊名称】《安徽医药》
【年(卷),期】2008(012)004
【摘要】目的建立3种医院乳膏剂的微生物限度检查方法.方法采用5种阳性对照菌,通过回收率试验,测定它们是否有抑菌活性.结果复方曲安奈德樟脑乳膏(Ⅱ)、维生素E尿囊素乳膏(Ⅱ)这二种供试品试验菌回收率均高于70%,证明无抑菌作用;15%复方硫乳膏(Ⅲ)有抑菌作用,但通过培养基稀释法可消除抑菌作用.结论复方曲安奈德樟脑乳膏(Ⅱ)、维生素E尿囊素乳膏(Ⅱ)可按常规方法进行微生物限度检查,15%复方硫乳膏(Ⅲ)需按培养基稀释法进行微生物限度检查.
【总页数】2页(P318-319)
【作者】陆益萍
【作者单位】浙江省金华市第五医院,浙江,金华,321001
【正文语种】中文
【中图分类】R9
【相关文献】
1.复方熊胆茵陈颗粒微生物限度检查及控制菌检查方法验证 [J], 吴仲;张勋;孔祥佳;徐伟;洪振丰
2.均质器分散法制备软膏剂微生物限度检查供试液的尝试 [J], 周泉
3.非水溶性软膏剂的微生物限度检查 [J], 曹苹;李军;袁慧文
4.中药软膏剂微生物限度检查 [J], 宋新康;蓝红梅
5.3种医院软膏剂微生物限度检查方法学研究 [J], 陈媛;吴楣;蓝红梅;宋增炫;彭云英
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目录1.确认目的 22. 参考文件 23. 试验器材 24. 菌液制备与检验 25. 需养菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证 36. 控制菌检查方法的验证 47. 试验结果 58.验证结论 9安徽圣鹰药业有限公司第0页共9 页1.目的确认对供试品进行微物限度检查时，所采用的需养菌、霉菌和酵母菌计数方法及控制菌检查方法是否适合于该药品的微生限度检查。
2.参考文件《中国药典》2015版四部3.试验器材及样品3.1培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基、麦康凯琼脂培养基、麦康凯液体培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、十六烷基三甲铵琼脂培养基。
以上培养基均由北京三药科技开发公司生产3.2菌种大肠埃希菌（scherichia coli) [CMCC(B) 44102]枯草芽孢杆菌（Bcillus scbtilis ) [CMCC(B) 63501]金黄色葡萄球菌（Staphylococcus ） [CMCC(B) 26003]铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ) [CMCC(B) 10104]白色念珠菌（Candida albicans) [CMCC(F) 98001]黑曲霉（Aspergillus niger) [CMCC(F) 98003]大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉均由中国医学菌种保藏中心提供3.3环吡酮胺乳膏批号151201、151202、1512034.菌液制备与检验4.1取经30-35℃培养18-24h的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨液体培养基培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释，金黄色葡萄球菌稀释至10-7、枯草芽孢杆菌稀释至10-5、大肠埃希菌稀释至10-7，约为50～100cfu/ml，备用。
4.2取经20-25℃培养2-3天白色念珠菌的沙氏葡萄糖液体培养基的培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-5，约为50～100cfu/ml，做活菌计数备用。
4.3取经20-25℃培养5-7天黑曲霉的沙氏葡萄糖液体培养基的培养物，加5ml含0.05%（ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
吸取出孢子悬液，用0.05%（ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-4，约为50～100cfu/ml，备用。
上述各株菌的培养物均为第三代的培养物。
4.4菌液的检验4.4.1取上述金黄色葡萄球菌107、枯草芽孢杆菌105、铜绿假单胞菌107的稀释液各1ml，分第1页共9页别用45℃胰酪大豆胨琼脂培养基20ml注皿，各平行测定两个平皿，30-35℃培养逐日观察计数，应约为50～100cfu/ml。
结果见表14.4.2取上述白色念珠菌105稀释液及上述黑曲霉104孢子悬液各1ml,分别用45℃沙氏葡萄糖琼脂培养基20ml注入平皿，各副行测定两个平皿，30-35℃培养逐日观察计数，应约为50～100cfu/ml。
结果见表15.需养菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证结果见表2-7照中国药典2015版微生限度检查法（中国药典2015年版四部1105、1106）中微生物计数方法和控制菌检查法进行试验。
供试液的制备：取供试品10g，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液到100ml，制成匀浆液，作为1：10的供试液。
5.1考虑到环吡酮胺对真菌具有较强的抑制作用,对球菌、杆菌亦有抑制作用,故采用培养基稀释法进行试验。
结果见表2-75.1.1试验组：取供试液分别按0.5ml/皿、0.2ml/皿加入平皿后，加入上述不大于100cfu 的试验菌，立即倾注2015版四部药典规定的培养基，置规定的温度培养5-7天，逐日观察结果。
5.1.2菌液组：除不加供试液外，其他同试验组测定法。
5.1.3供试品对照组：除不加菌液外，其他同试验组测定法。
5.1.4回收率的计算：按如下公式计算试验组加菌回收率。
试验组的平均菌落数-供试品对照组的平均菌落数试验组的加菌回收率=---------------------------------------------菌液组的平均菌落数5.2薄膜过滤法：结果见表2-7.5.2.1试验组：取1：10供试液1ml加至500ml PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，全部通过开放式滤器后（滤膜先用冲洗液润湿），用500ml PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，100ml/次，在最后一次冲洗液中加入上述不大于100cfu的试验菌，冲洗完成毕后，滤干，取出滤膜贴于规定的培养基平板上，置规定的温度培养5-7天，逐日观察结果。
5.2.2菌液组：以500ml PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液代替供试液，其他同试验组测定法。
5.2.3供试品对照组：除不加菌液外，其他同试验组测定法。
5.2.4回收率的计算：按如下公式计算试验组加菌回收率。
试验组的平均菌落数-供试品对照组的平均菌落数试验组的加菌回收率=---------------------------------------------第2页共9页菌液组的平均菌落数6.控制菌检查方法的验证本品为皮肤给药制剂,根据《中国药典》2015年版四部微生物限度检查法项下规定,皮肤给药制剂均需做金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌检查方法的验证：结果见表8.6.1按常规法：6.1.1试验组：取1：10的供试液10ml加入100ml胰酪大豆胨液体培养基中，加入上述不大于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌，混匀，30-35℃培养18-24小时。
6.1.2阴性对照组：以10ml的 PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液代替供试液，加入100ml胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，30-35℃培养18-24小时。
6.1.3 阳性对照组：以10ml的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液代替供试液，加入100ml胰酪大豆胨液体培养基中，加入上述不大于100cfu的大肠埃希菌，混匀，30-35℃培养18-24小时。
6.1.4供试品组：供试液10ml加入100ml胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，30-35℃培养18-24小时。
6.2按薄膜过滤法6.2.1试验组：取1：10的供试液10ml至500ml PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，全部通过开放式滤器后（滤膜先用冲洗液润湿），用500ml PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，100ml/次，冲洗完成毕后，滤干，取出滤膜加至100ml胰酪大豆胨液体培养基中，加入上述不大于100cfu的大肠埃希菌，30-35℃培养18-24小时。
6.2.2阴性对照组：以10ml氯化钠-蛋白胨缓冲液代替供试液加至500ml PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，全部通过开放式滤器后（滤膜先用冲洗液润湿），用500ml PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，100ml/次，冲洗完成毕后，滤干，取出滤膜加至100ml胰酪大豆胨液体培养基中，30-35℃培养18-24小时。
6.2.3阳性对照组：以10ml氯化钠-蛋白胨缓冲液代替供试液至500ml PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，全部通过开放式滤器后（滤膜先用冲洗液润湿），用500ml PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，100ml/次，冲洗完成毕后，滤干，取出滤膜加至100ml胰酪大豆胨液体培养基中，加入上述不大于100cfu的大肠埃希菌，30-35℃培养18-24小时。
6.2.4供试品组：取1：10的供试液10ml至500ml PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，全部通过开放式滤器后（滤膜先用冲洗液润湿），用500ml PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，100ml/次，冲洗完成毕后，滤干，取出滤膜加至100ml胰酪大豆胨液体培养基中，30-35℃培养18-24小时。
第3页共9页7.试验结果表1、试验用菌液检查（菌落计数单位：cfu )表2、白色念珠菌计数方法的验证（菌落计数单位：cfu )第4页共9页表4、铜绿假单胞菌计数方法的验证（菌落计数单位：cfu )表5、金黄色葡萄球菌计数方法的验证（菌落计数单位：cfu )第5页共9页表6、枯草芽孢杆菌计数方法的验证（菌落计数单位：cfu )第6页共9页表中“+”表示试验结果检出控制菌；“-”表示试验结果未检出控制菌。
检查人：日期：复核人：日期：第7页共9页8.验证结论第8页共9页读书的好处1、行万里路，读万卷书。
2、书山有路勤为径，学海无涯苦作舟。
3、读书破万卷，下笔如有神。
4、我所学到的任何有价值的知识都是由自学中得来的。
——达尔文5、少壮不努力，老大徒悲伤。
6、黑发不知勤学早，白首方悔读书迟。
——颜真卿7、宝剑锋从磨砺出，梅花香自苦寒来。
8、读书要三到：心到、眼到、口到9、玉不琢、不成器，人不学、不知义。
10、一日无书，百事荒废。
——陈寿11、书是人类进步的阶梯。
12、一日不读口生，一日不写手生。
13、我扑在书上，就像饥饿的人扑在面包上。
——高尔基14、书到用时方恨少、事非经过不知难。
——陆游15、读一本好书，就如同和一个高尚的人在交谈——歌德16、读一切好书，就是和许多高尚的人谈话。
——笛卡儿17、学习永远不晚。
——高尔基18、少而好学，如日出之阳；壮而好学，如日中之光；志而好学，如炳烛之光。
——刘向19、学而不思则惘，思而不学则殆。
——孔子20、读书给人以快乐、给人以光彩、给人以才干。
——培根安徽圣鹰药业有限公司第0页共9 页。