河豚鱼多药耐药基因
水产养殖环境中的细菌耐药问题
抗菌药品能够用于治疗各种细菌感染以及致病微生物的感染，抗生素在人类的生活中产生了重要的作用。
但长期使用抗生素也会导致细菌产生耐药性。
当前防治水生生物遭受细菌感染的主要手段还是依赖于抗菌药物，科学合理的使用抗菌药物，能够有效的治疗水生生物的细菌感染，但是一旦滥用药物，就会造成水产养殖中产生的细菌形成耐药性，从而加大生产养殖的成本，对养殖水域造成污染，引发水产残留药品超标。
一、细菌耐药性的介绍细菌耐药性指抗菌药物无法对细菌产生效果，细菌对抗菌药物不敏感，是细菌在生存中产生的一种特殊的表现形式，细菌耐药性主要分为获得耐药性以及固有耐药性获得耐药性主要指细菌在与抗菌药物进行接触之后，通过质粒介导，改变自身的代谢方式，产生抵抗抗菌药物的能力，获得耐药性能够通过质粒将耐药基因传递给后代，成为固有耐药性，在长时间不接触抗菌药物时也会逐渐消失。
固有耐药性又称称之为天然耐药性，形成原因是细菌的结构与化学组成上的不同导致细菌本身对抗菌药物不敏感，天然耐药性是由细菌的染色体基因决定的。
世代相传，不会造成改变。
二、水产养殖细菌耐药产生原因分析鱼类致病菌产生耐药性的关键原因在于没有按照规范使用相关的抗菌药物。
在以下几个方面得以体现：1、没有明确抗菌药物的抗菌谱使用一种或是同一类的抗菌药物时，首先要诊断感染病的类型，对病原体感染部位都要有充分的了解，也要对当前使用的抗菌药物所对应的抗菌谱有着充分的了解。
在使用抗菌药物时，要充分的对照抗菌谱，抗菌谱泛指一个种类的抗菌素所能消除或抑制的细菌种类，对于一种或是一类的抗菌药物来说，药物的作用机制决定了这种药物的抗菌谱，在使用抗菌药物时，要遵循以下的原则：对于能够使用窄谱抗菌药物解决的感染病，就要避免使用广谱抗生素;能够使用一种抗菌药物解决的感染病，就不要将多种抗菌药物进行混合的使用。
2、未通过系统化的抗敏实验就使用抗菌药物药物的敏感实验主要是指测定病原微生物对于有一种或某一类的抗菌药物的敏感度，通过临床的指导来科学合理的选择抗菌药物的使用以及实验，在使用抗菌药物之前，科学准确的进行药敏试验，能够选取合适的抗菌药物投入使用，进行药敏试验不仅能够减少抗生素的使用时间，也能减少病原体的抗药性，同时提升药物治疗效果。
你知道吗？解禁的河豚鱼
解禁的河豚鱼今年4月，国家卫计委发布了一个重要消息，“河豚鱼解禁了”！在过去，有种说法叫“拼死吃河豚”，意思就是说吃河豚得冒着生命的危险，那么毒的河豚鱼，现在为什么解禁了？在我国，历年都有河豚毒死人的报道。
可就在今年的4月29日，国家卫计委发布了消息，一些指定的河豚鱼，居然解禁了。
在北京市朝阳区三里屯的一家料理店，随着河豚鱼的解禁，一套新的菜品也推了出来，主要食材就是来自深海养殖的河豚鱼。
很多人来这儿就是奔着河豚鱼来的，但是，你知道吗，河豚鱼虽然美味，却隐藏着剧毒，这河豚到底有多毒呢？说到毒，日常生活里也并不少见，比如说、发芽的马铃薯、没炒熟的杏仁，或者鲜艳的蘑菇，可这些我们常见的毒素，那要是和河豚的毒素一比，那真是小巫见大巫了。
河豚鱼在以前之所以一直是禁止食用的，就因为河豚的毒素实在是太厉害了，河豚毒素总结起来有三大特点：毒性大、毒性稳定、在河豚鱼体内分布复杂。
毒性大。
要想知道河豚毒素有多毒，100毫克的河豚毒素，就可以要50个人的命！再看看河豚毒素的第二个特点：毒性稳定。
不管你是盐腌还是太阳晒，煎、炒、烹、炸，火烧、碳烤，就算使出看家本领，把十八般武艺全拿出来，这河豚毒素依旧非常稳定，结构难以破坏。
日常生活中，好多食物是有毒的，但是通过一些常规的烹饪手法，就可以将它的毒素消除，比如说臭名昭著的食品致病菌“肉毒素”，他的弱点就是最怕高温，在100℃的温度下，煮个一两分钟就会失去毒性。
但是您要是河豚毒素，那我就告诉你不能这样吃，你一定要避开，因为你们家里面所有的高压锅都用上的话，你是解决不了这个问题的。
河豚毒素的第三个特点，就是在河豚鱼体内分布复杂，在不同的河豚体内毒素的分布也不同。
河豚鱼有120多个品种，有不少品种外表长的差不多，但内在的毒性分布却是天差地别。
有的河豚鱼内脏部分有剧毒，肌肉部分是没毒的，可有的河豚鱼，全身上下，连皮带肉全都有毒，没有任何一个部分可以食用。
还有些鲀类，比如我们说虫纹东方鲀、铅点东方鲀，这些东方鲀类，他们的肌肉里头就有毒，所以野生的，特别是我们在没法辨别它种类的时候，那是绝对不能吃的。
水产动物常见病原菌的耐药性分析及中草药体外抑菌活性的检测_张传亮
近年来, 随着水产养殖品种的增多、集约化程度 的提高和养殖环境的恶化, 各类病害亦频繁发生, 严 重制约了水产养殖业的持续发展。通过病原学研究 发现弧菌 ( V ibrio ) 、气单胞菌 ( A erom onas ) 、类志 贺邻 单胞菌 ( P lesiom onas shigelloides) 和假单胞菌 ( P seudom onas)是引起安徽省水产动物细菌性疾病常见的 4 种病原菌 [ 1] 。目前抗生素仍是防治这些细菌性疾病 的主要手段, 但是抗生素长期使用所致的细菌耐药性 问题和药 物残留 所致 的水产 品安全 问题愈 来愈 突 出 [ 2] 。因此, 加强某地区水产动 物常见病原菌的 耐
药性监测, 了解其耐药现状和耐药机制, 减缓耐药菌 株的产生, 同时研究开发既能有效防治细菌性疾病, 又能解决药物残留和细菌耐药性问题的渔用中草药
具有重要意义。本研究对安徽省水产动物常见病原 菌的耐药性进行了系统测定, 分析了其耐药现状和耐 药机制, 在此基础上选取 27种单味中草药和 5 个中 草药复方配伍测定其对常见病原菌耐药菌株的体外
aerug inosa stra ins in a ll de tected pa thogens m ight produce ESBLs and the rate of ESBL s was 8. 69% . Rh izoma cop tid is,
Rheum officinale, F los lonicerae, Sp ica p runellae, Euphorbia hum ifusa, Cortex M outan, Por tu laca oleracea L. and Fructus for-
耐药率均为 100% 。供试菌中仅检出 2株铜绿假单胞菌为 产 ESBL s株, 检出率为 8. 69% 。黄连、大黄、金银花、夏枯
千万别再冒死吃河豚了
千万别再冒死吃河豚了*导读：我们国家目前共有30多种以上的河豚，基本上所有种类的河豚都是含有河豚毒素。
因为肉的味道鲜美，所以是很多人的向往。
河豚同时……我们国家目前共有30多种以上的河豚，基本上所有种类的河豚都是含有河豚毒素。
因为肉的味道鲜美，所以是很多人的向往。
河豚同时又是一种毒性很强的食物。
曾经有人测定过河豚毒素的毒性，据称，它的毒性相当于剧毒药品氰化钠的1250倍。
1克河豚毒素能使500人致命。
春季的河豚毒性更甚，一旦误食，食用者死亡率高达50%。
中毒死亡通常发生在发病后4～6小时，最快的可在发病后10分钟死亡。
而慢性中毒多在食用河豚后24～48小时发病。
一般来说，河豚肌肉里毒素较少。
最毒的部分是卵巢、肝脏，其次为肾脏、血液、眼睛、鳃和皮肤。
河豚一受到惊吓，毒素就会由肝脏进入全身血液、器官，使得全身都带有剧毒。
此外，春季为雌鱼的卵巢发育期，卵巢毒性最强，再加上肝脏毒性也在春季最强，所以春季最易发生河豚中毒事件。
人误食河豚毒素后，轻则面部潮红、头痛、恶心、呕吐、腹痛、腹泻，继而感觉神经麻痹;重则四肢肌肉无力、舌头麻木、语言不清，甚至因全身麻木而瘫痪;严重者因呼吸衰竭而死亡。
目前，一些消费者对河豚常常会有以下错误的认识。
认为烧炖的时间越长越安全。
而根据专家的试验，即便将河豚在130℃高温下炖11个小时，也只能分解20%～30%的毒素。
河豚菜肴上席后，厨师先尝，以示安全，食客就认为无毒。
而专家表示，河豚毒素在人体内发生反应的时间有长有短，最多的大约半小时至40分钟才有所反应，所以就算厨师尝过没事，也不能保证鱼就安全。
认为吃河豚时嘴里微微发麻，对身体的保养效果最佳。
而事实是，一旦有了发麻的感觉，说明毒素已经进入机体很深了。
有人认为吃河豚中毒过一次，第二次就不会中毒了。
实际上，人体对河豚的毒素不会产生免疫力。
一起渔药事件引发的思考
４ 渔药 市场无序 竞争 ，管理混乱 据 了解 ，福建 ．
省 兽药 店约 有 ２ ０ 多个 ，渔 药经 营企 业数 大约只 有 ００
４ ６ ，大 部分 的渔 药均在兽 药店销售 。销售人 员仅 ０家
ＩＩ匦 匝蚕
旦堡 茎 旦
色发 白，解剖腹 内有黄水 ，肝颜 色正常，胆 监色增 大变形 ，肠 内有 的无食或 少食 ，各脏 器边缘 完整。发
算经济损失额 ２ 万～３ 万元 。 ０ ０
２％ ０ 、肠道修复剂等 的药 品来治疗鲍鱼和鱼类 的疾病 。
２ 渔 药管 理体 系不健 全 ，渔 药监 管 配套 规章 缺 ．
乏 尽管 《 兽药管理条例》第七 十四条 规定：水产养 殖 中的兽药使用、兽药残 留检测和监 督管理 以及水产 养殖 过程 中违法用药 的行政处 罚，由县 级以上人 民政 府渔 业主 管部 门及其 所属 的渔政监 督管理机 构负责 。 但第三条规 定：国务院兽医行政管理部 门负责全 国的 兽医监督管 理工作 。县级 以上地方人 民政府兽 医行政 管理部 门负责本行政区域 内的兽 医监督 管理工 作。 由 于渔药 管理 工作隶属于兽药管理部 门，渔业主 管部门 对渔药店无监 管职 责 ，养殖户在养殖过程 中使用渔 药 发生事故后投诉 的处理牵 涉多个部 门，互相之 间沟通
缺乏 ，根本没有 做到对症 下药 ，甚 至销售禁 用渔药 。 虽 然我 国渔药 企 业 开始 ＧＰ认证 和 “ 标 ”升 “ Ｍ 地 国 标 ”丁作 ，为渔药 的规范生产创造 了条件 ，但 也出现
了一 些 混 乱 。
２加 大水产规范用药 宣传力度 ，推广健康 养殖模 ．
式 进 一步加大水产规 范用药 的宣传 力度 ，结合科技 下乡、村 级渔 民技术员培训等工作 ，推广健康 的养殖 技术 ，提 高渔 民健康 养 殖理念 和 水产 品质 量安 全意
鱼类对药物产生抗药性的原因及对策
邓 笙易生 夕 望
,
药结果
,
寄生 虫的 残 存个 体 数 量 减 少 了
。
但
主
;
加强 饲 养 管理
、
,
放 养 鱼种
;
(
包括 轮 放补
这 些 个 体的 耐 药 力 更 强
。
它 们的繁 殖 后 代所
,
种)
投饵 及 水质 等均 须严 格 消 毒 掌握准确
以 及 定时 检 查 病原 体
,
形成 的 群体 具 有更 强 的抗 药 性 药 物 无效
2
、
最 终将 使该
的施 药 量 和 施 药 技 术 与 抗 药性 的 监 测
,
以便 在 现 有药物 对 某 些 病
制 定 出轮 换 或 更换 药 物
一
由施 药 技术 弓 !起
, ,
。
不 正 确的 施 药 技
,
原 体尚 未失效 之前 等 对 策措 施
名
、 。
术
,
不仅会 浪费 药物
降 低 药效
,
而 且还易
如 对 中华骚
,
、
物 如 吠 喃哇 酮
,
大 蒜 素 等溶 解 度 甚低
“
就是
,
,
水 娱 蛤 等可 用 灭 虫 精
、
、
灭
漂 白粉 也微 溶 J 水 因 而 极 易产生 不 均 匀 的分
虫灵
或 敌百 虫
、 、
,
由 车轮 虫 引起 的 白头 白嘴 敌 敌 畏 或 氯化 钠
,
布
这 抚 为 抗药 性 种群 提 供 了生 存 的条件
、
各 地 渔民 也反映
,
一例红鳍东方鲀皮肤溃烂病的诊治
旦 塑 旦 夔
上 ，２ ８ ￣ Ｃ倒置 培养 ２ ４ 小时 。体表 溃疡 病灶 处 的病原 分离经 灭菌 生理盐水冲洗后进行 ， 以避 免水体 中常在 菌 的干扰 。结果显示 ，在所有病鱼 体表病 灶 中均分离 到一种 圆形 、黄色、不透 明、中间隆起 、边缘整齐 的
可严 重影 响病 鱼生 长 ，部分病 鱼在 发病 ２ ０ 天 左右 死 亡 。该病 已连续 多年 发生 ，通 常到 ７ 月底 逐渐 减轻 ，
病 情较轻病鱼可逐步恢复 。
二 、 实 验 室 检 查
豚鱼 已连续 多年 出现类似病 情 ，病情 通常持续 １ 月左 右 ，病情 严重者 可死亡 ，病 情较轻者 到 ７ 月底 可逐步 恢复 。这与 此前报 道红鳍东方鲍 皮肤 溃烂病主要发生 于秋 季 不 同 ，表 明河豚 鱼皮 肤溃 烂 病主 要与 水温 有
分 离鉴定确定为哈维弧菌感染 。 由于该病与此前报道 的河 豚鱼相关疾病 的症状 以及病 原的药物敏感性均有
一
定差异，为帮助大家做好河豚 鱼相关疾病 的诊 治与 发病情 况
防控工作 ，现将 该病的诊治情况予 以报道 。
一
、
２ ０ １ ６ 年６ 月 ，辽 宁某养殖场 海上 网箱养 殖的红鳍 东方纯 发生严重的皮肤溃烂病例 ，且有 部分病情严重
化并不 明显 、死亡 率也不是特别高 ，与此前报 道 的哈
虫病） 最 为常见 ，可 引起 河豚 鱼生长不 良甚至 大量死 亡 ，常造成较大损 失 。２ ０ １ ６ 年７ 月初 ，大连海洋大 学 海珍 品疾病防控重 点实验 室接诊 辽宁某养殖场送诊 的
一
河 豚鱼体表严重溃烂病 例 ，经 实验室检查 以及病 原
治疗 。
河鲀毒素药学应用的研究进展
河鲀毒素药学应用的研究进展作者：黄海枫孙桂清夏鑫郗艳娟闫丽来源：《河北渔业》2021年第12期摘要：河鲀毒素是从河鲀卵巢、肝脏分离出来的非蛋白质神经毒素，广泛分布于海洋类及陆生动物中。
河鲀毒素具有神经通道阻断作用，作为生理学和神经药理学的有用工具，河鲀毒素受到了极大的实验关注。
本文综述了河鲀毒素的基本性质、药用机理以及河鲀毒素在药用方面的研究。
关键词：河鲀毒素;作用机理;药学应用人类对河鲀毒素（Tetrodotoxin，TTX）展开研究已历百年，自1909年日本学者田原良纯从河鲀鱼中提取得到粗品河鲀毒素[1]以后，TTX的多种临床应用应运而生，有关药用开发方面的研究也层出不穷。
20世纪30年代到40年代，很多旨在医药开发上的研究报道相应发表。
在临床应用上涉及到内科、外科、皮肤科和眼科等多种医用领域。
到20世纪50年代，TTX的临床应用进一步扩大，除了可用于治疗关节炎、风湿病、瘙痒、阳萎、遗尿、破伤风、百日咳、气喘、头痛等之外，也可以用作镇痛药来代替吗啡、杜冷丁、阿托品和南美简箭毒等，并且在神经痛的治疗方面有著良好的效果，因此河鲀毒素在镇痛领域的研究逐渐成为热点。
本文就河鲀毒素的基本性质、药用机理及镇痛作用进行综述。
1 河鲀毒素的基本性质河鲀毒素是一种非蛋白质、氨基过氢喹啉类毒素，白色晶体，无臭无味，分子式为C11H17N3O8，分子量为319.27，拥有一个碳环、1个胍基、6个羟基，C-5和C-10位有一个半醛糖内酯连接着的分开的环[2]，其化学结构如图1所示。
TTX易溶于酸性水或醇溶液，几乎不溶于其他溶剂。
在碱水溶液中易分解，于90～100 ℃ 5%的KOH溶液中可分解为黄色结晶2-氨基-6-羟甲基-8-羟基-喹唑啉[3]。
最初，人们认为TTX只存在于鲀科鱼类的卵巢、肝脏和皮肤中，然而，进一步研究发现TTX广泛存在于其他海洋和陆地动物中，如贝类、软体动物、节肢动物、爬行动物和两栖动物等[4-6]。
水产养殖“抗药性”的外因内因
水产养殖“抗药性”的外因内因近几年，有越来越多的养殖老板在养殖过程中对于曾经一些“百试百灵”的水产药品渐渐地失去了耐心，人们对抗生素随意而广泛的使用导致越来越多的病菌产生耐药性。
抗药性外因伴随厄尔尼诺现象的愈演愈烈，北方地区持续干旱少雨，气温不断攀升，盐度持续走高，也加剧了池塘中藻类和弧菌的滋生。
同样的药品，同样的用量，显然在这种环境下它所背负的使命更大了，压力也更大了。
另外，有些老板在投饵上毫无节制，缺乏防患意识，往往直到养殖中出现问题时才想到使用药物来解决，通常到了这个阶段只能增加使用甚至数倍于常规用药量的药物，过分依赖水产药品在水产养殖中所起到的作用。
但是如果脱离环境因素谈药效，对于水产药品而言真的有点儿勉为其难。
再者解决方案较为单一，所有底质、水质问题都习惯用同一类型药物进行治疗。
滥用药品，不仅增加养殖成本，而且还会陷入用量越来越多，效果越来越差的恶性循环。
不如定期预防，防患于无。
抗药性内因现在池塘中的有害藻类越来越难杀了，近海藻类种群更迭频繁，甚至出现了很多以前不曾出现的藻类，这说明了水源环境正在发生变化。
如果人们能够认可水体富营养化这个说法，那么这个问题就不难解答。
首先水体富营养化的主要人为因素就是农田化肥及农药的流失对于水体的污染，农药的毒性绝对不会小于水产药品对于养殖动物及海洋藻类的毒性。
如果是在这种环境下生存并能闯进池塘里的藻类，常规药物很难杀灭。
有些养殖老板喜欢用动物粪便进行池塘肥水，所有养殖动物粪便中都有抗生素残留，尽管不多但奈何不了天长地久。
人们不妨将池塘水环境和近海水环境进行类比，在近海污染水环境中突围幸存下来的藻类，在进入池塘后便会“如鱼得水”，池塘中丰富的营养源促进了它们的大量繁殖。
另一方面因池塘内部环境远不及近海水环境污染那么严重，所以有些藻类在相对“舒适”的环境中变得更加有恃无恐，对于常规消杀“视而不见”。
抗药性的思考常规消杀药物面临的挑战越来越大，而微生物制剂在当今社会生活中得到了越来越广泛的应用。
河鲀鱼的功效与作用
河鲀鱼的功效与作用关于《河鲀鱼的功效与作用》，是我们特意为大家整理的，希望对大家有所帮助。
河鲀鱼是中药材中普遍的一种，具备许多不一样的作用，能够对身体的一些病症开展调养，下边就要我们来了解一下它的实际的作用有什么吧。
特异别称生产鲀鱼、气泡鱼、斑圆鲀、眼斑河豚鱼、河鲀、河豚鱼、虫纹东方鲀、廷巴鱼、气泡鱼、红鳍东方鲀特异来源于生产鲀形目鲀科鲀鱼Spheroides ocellatus （Osbeck）；虫纹东方鲀Fugu vermicularis （Temm. et Schl.），肉及肝脏中常含的河鲀内毒素各自当药。
特异环境要素遍布生产南海沿海地区及通海的河流中下游；东海、南海、江海、渤海湾。
特异有机化学成分生产内脏器官含河鲀内毒素（tetrodonine）、河鲀酸（tetrodonic acid）、河鲀子宫卵巢内毒素（tetrodotoxin）、河鲀肝毒（hepatoxin）等。
特异药用价值生产从河鲀鱼的精巢中可获取鱼素（ecmolinum）。
它对痢疾杆菌、伤寒杆菌、葡萄球菌、链球菌感染、霍乱弧菌有抑制效果，它能增加青霉素在机体内的药力時间，而且毒副作用小，无溶血性，可阻拦病菌耐药性的产生。
鱼素是由精氨酸、组氨酸、壳氨酸三种碳水化合物所构成的鱼精蛋白。
特异功效与作用生产肉：滋补养生健壮。
主冶腰脚酸痛，食不限定。
特异备注名称生产（1）河鲀类型较多，其肝脏、子宫卵巢、肠、胃、皮肤及血液均有有毒，误吞可至死，取肉时应非常想法，务必去净内脏器官、血、皮及一等，决不可掺杂。
特异摘抄生产《全国中草药汇编》根据以上详细介绍，让我们能掌握河鲀鱼的有关专业知识，假如我们能充分发挥河鲀鱼的功效，能够协助我们处理一些人体病症，因而很多人都将它视作自身健康保健人体的挑选。
河豚鱼、鳗鱼中18种磺胺残留量的测定液相色谱
河豚鱼、鳗鱼中18种磺胺残留量的测定液相色谱2.2.1.1适用范围用于河豚鱼、级鱼中18种磺胺(、、磺胺吡啶、碳胺甲基嘧啶、磺胺-6-甲氧嘧啶、碳胺甲噻二唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、、碳胺氯哒嗪、磺胺甲基异噁唑、碳胺邻二甲氧嘧啶、碳胺二甲基异噁唑、磺胺苯酰、磺胺氯吡嗪、磺胺苯吡唑、磺胺间二甲氧嘧啶、)残留量液相色谱-串联质谱测定。
办法检出限均为5.0ug/kg。
2.2.1.2办法原理河豚鱼、鳗鱼中磺胺类药物残留用提取，离心，上清液经无水硫酸钠脱水后，用氮气浓缩仪吹至近干，残渣用乙腈-0.01mo/L溶液溶解，用正己烷脱脂，过0.2um滤膜后，样品溶液供液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。
2.2.1.3试剂和材料甲醇、乙腈、甲酸、正己烷：色谱纯；乙酸铵：优级纯；无水硫酸钠：分析纯，经650℃灼烧4h，置于干燥器中备用。
0.01mol/L乙酸铵溶液：称取0.77g乙酸铵溶于1000mL水中。
定容液：乙腈-0.01mol/L乙酸铵溶液(3+22，v/v)，量取12mL乙腈和88mL乙酸铵溶液混合匀称；0.1%甲酸溶液：吸取1.0mL甲酸，用水稀释至1000mL。
18种磺胺标准物质：纯度≥99%。
0.1mg/mL标准储备溶液：精确称取适量的每种磺胺标准物质，用甲醇分离配成0.1mg/mL的标准储备溶液，该溶液在4℃保存。
5.0ug/mL磺胺混合标准工作溶液：分离吸取各标准储备溶液0.5mL移至10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成5.0ug/mL 混合标准工作溶液。
该溶液在4℃保存。
磺胺内标物质：磺胺甲基异噁唑-D4、磺胺嘧啶-D4、磺胺噻唑-D4。
纯度≥99%。
5.0ug/mL磺胺甲基异噁唑-D4、碳胺嘧啶-D4、磺胺噻唑-D4内标标准储备溶液：称取适量磺胺甲基异噁唑-D4，磷胺嘧啶-D4，磺胺噻唑-D4标准物质，用甲醇分离配成0.1mg/mL，该溶液在4℃保存。
磺胺混合内标工作溶液：分离吸取磺胺甲基异噁唑-D4，磺胺嘧啶-D4，磺胺噻唑-D4储备溶液0.5mL移至10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成浓度为5ug/mL 混合内标工作溶液。
脊椎动物基因研究的理想模式生物_河豚鱼
脊椎动物基因研究的理想模式生物——河豚鱼 中国协和医科大学基础医学院 中国医学科学院基础医学研究所 (北京 100005)刘山鸣 杨 立综述 刘国仰 杨焕明审校提要 模式生物对于人类基因组研究具有重要意义。
大肠村菌、线虫、果蝇、小鼠等模式生物在比较定位(co m-par ative mapping)、比较测序(co mparat ive sequencing)、基因结构与功能的比较研究中起了重大作用。
但前四者在形态学、个体发生、发育等方面与脊椎动物相差甚远,基因组差异很大,而小鼠的基因组都丝毫不比人的简单,理想的人类基因组模式生物应该具有小而简单且基因数目与人类接近的基因组。
河豚鱼就是这样一种新的模式生物。
其基因组特点是大小只有300～400M b(为人类基因组的1/7～1/8),重复序列少且成簇排列,基因间序列少而小,内含子普遍比人的小,基因数目却与人的大致相当。
河豚鱼作为脊椎动物基因组研究的模式生物在比较测序、基因分离、基因结构功能的研究、基因转移等方面有着极高的科学价值和广泛的应用前景。
二十世纪90年代开始启动的“人类基因组计划”(HGP)是人类自然科学史上最伟大的项目之一。
该计划的重点内容之一就是对模式生物的研究。
被HGP正式列为模式生物的有酵母、线虫、果蝇和小鼠。
模式生物占有如此重要的地位是由其历史贡献和科学价值决定的。
酵母是最简单的真核生物,是研究真核生物基因的结构、功能、表达和调控的模型。
线虫是细胞分化和组织发育研究的最重要的材料。
从经典遗传学的连锁律的确立到细胞遗传学中多线染色体的发现,以至分子遗传学最重要的发现之一,同源盒基因的发现,都离不开对果蝇的研究。
小鼠一直是遗传、药理、病理等研究的模式生物,在人类疾病,特别是在遗传病基因的研究中有着无法替代的地位。
但是对HGP的主题——人类基因组研究本身而言,这些模式生物都有其不足之处。
酵母、虫、果蝇在进化上与人类相距甚远,其基因组与人类基因组差异太大,小鼠在进化上与人类虽然很近,但其基因组与人类基因组一样复杂。
鱼类的抗药性研究
鱼类的抗药性研究摘要：研究资料显示，我国鱼类细菌性疾病的危害率非常高，一般水产养殖领域用于对抗细菌性病害的防治措施主要是使用化学药物。
药物使用缺乏科学性，导致鱼类病原菌的耐药性日益增强。
本文以鱼类的抗药性研究为出发点，系统的阐述鱼类耐药性机制和耐药性来源以及扩散途径，以期为我国的鱼类养殖行业提供指导性意见。
关键词：鱼类；细菌性疾病；抗药性中图分类号：S948 文献标识码：A DOI编号：10.14025/jki.jlny.2015.15.035上世纪中期，国外研究人员成功使用化学药物治愈了鳟鱼疥疮疾病，开启了鱼类养殖领域使用抗菌药物的大门。
研究资料表明，化学药物对鱼类细菌性疾病防治工作起到了重要的作用，显著减少了水产养殖细菌性病害率，但是由于药物滥用现象发生频繁，鱼类病原菌的抗药性呈现出逐渐增强的趋势。
普通的鱼类病原菌最少能够耐受一种抗原药物，基于这一现象，国内外众多研究人员投身于研究鱼类的抗药性课题。
1国内外抗药性研究进展国际上水产养殖相关的研究资料表明，水产动物的致病菌高达百余种，其中能对水产动物造成严重危害的就有数十种，主要为弧菌属种类以及气单胞菌数种类。
根据出现的水产养殖细菌性病害日益严重的现象，水产养殖领域采取了多种对抗措施，主要有中草药防治和生态预防以及疫苗等免疫治疗方法。
其中使用最多的，效果最显著的治疗手段为采取化学药物进行鱼类的细菌性病害的防治，但是药物的滥用现象和水质条件的恶化造成鱼类病原菌的抗药性越来越强，治疗效果越来越差。
国际上众多研究人员十分重视水产养殖动物的抗药性研究，我国有关研究人员也相继发表了关于动物病原菌抗药性的监测资料。
根据国内外学者的研究结论，鱼类病原菌的抗药性问题不容乐观，病原菌抗药性水平相当高，水产养殖常用的化学药物如磺胺类和四环素药物的抗药性水平非常高；另一方面，病原菌的抗药性基因的传递和积累导致鱼类病原菌的多重抗药性问题越来越严重。
根据学者的研究资料，我国各个地区的鱼类病原菌对于抗菌药物的抗药性程度基本不同，但是共同点在于普遍耐受青霉素类药物。
河豚鱼基因组序列片段和多药耐药基因序列分析
河豚鱼基因组序列片段和多药耐药基因序列分析姓名学号组号日期年月日1.研究背景和文献阅读1)阅读刘勇博士论文，简述该论文的研究目的、研究方法和主要研究结果。
2)阅读河豚鱼基因组测序计划相关论文，说明河豚鱼基因组特点。
3)阅读NCBI免费书架提供的ABC转运蛋白超家族（The Human ATP-Binding Cassette(ABC) Transporter Superfamily）网络书籍及其它相关论文，简述ABC转运蛋白超家族分类和功能，说明人ABCB1家族（即多药耐药基因家，Mutidrug Resistance）的基因结构、染色体定位、序列特征和主要功能。
4)阅读Molecule of the Month有关多药耐药蛋白的文章，说明哺乳动物和细菌多药耐药蛋白的异同。
2.数据库检索和序列分析1)检索UniProtKB序列数据库中ABCB1基因家族，列表说明已经过人工审阅的序列条目；对上述序列进行多序列比对，说明比对结果。
2)浏览人多药耐药基因蛋白质注释信息、文献报道和数据库交叉链接，说明其功能、亚细胞定位、组织特异性、互作蛋白、结构域特征、剪接变体、序列特征、基因结构、基因组定位、表达特异性等。
3)检索核酸序列数据库中人ABCB1 基因的mRNA序列，提取其编码区核苷酸序列，并将其翻译成蛋白质序列。
3.河豚鱼柯氏质粒基因组序列片段分析1)提取GenBank中刘勇等提交的柯氏质粒河豚鱼基因序列片段全长序列，用点阵图方法确定其中是否包含重复片段。
2)用多种方法预测上述河豚鱼基因组重复片段基因结构，比较它与人ABCB1基因结构的异同。
3)分析上述重复序列的全长基因DNA序列、编码区序列及其翻译得到的氨基酸序列的相似性，说明分析结果。
4)用WebLab中coderet程序提取上述柯氏质粒河豚鱼基因组序列条目中所有基因的编码区序列和所编码的氨基酸序列。
5)用点阵图方法分析上述提取的序列中第一个基因（即多药耐药基因MDR2）所编码的氨基酸序列，说明是否有重复结构域。
中国破译河豚基因 河豚中毒应如何急救
中国破译河豚基因河豚中毒应如何急救*导读：中国破译河豚基因，这意味着什么？中国破译河豚毒素靶点基因，吃河豚中毒将有药可救。
我们知道食用河豚中毒的死亡率很高，中国破译河豚基因将有很大的帮助。
*中国破译河豚基因记者28日从南开大学获悉，该校药物化学生物学国家重点实验室率领研究团队，利用猴子单倍体神经干细胞成功破译了河豚毒素的两个靶点基因，并通过基因敲除试验，让神经类细胞获得了河豚毒素抗药性，这一研究将使河豚中毒者有药可救，相关成果在最新一期干细胞与神经发育领域学术期刊《Development》上在线发表。
河豚美味，然而河豚毒素却奇毒无比，常令误食者瞬间死亡，其作用靶点和毒理机制迄今不为人知。
既有研究认为，河豚毒素是一类神经类毒素，其毒理可能为使神经细胞内的钠钾离子通道受阻进而起到毒害作用。
那么，能否利用猴子单倍体神经干细胞来筛查河豚毒素对神经系统的作用点呢？率领团队反向出发，借助近年来新兴的单倍体细胞工具培养技术，通过采取初始态多能性培养体系，使猴子单倍体胚胎干细胞具有更好的单倍体维持和体外分化过程中的细胞存活能力，并在世界范围内首次获得了具有体外增殖能力的猴子单倍体神经干细胞。
实验中，科研人员随即将所获得的猴子单倍体神经干细胞进行高通量的全基因组随机突变，并将突变后的细胞系进行河豚毒素毒杀实验。
最终，通过生物信息学分析和基因编辑实验证实，河豚毒素的关键靶点基因为B4GALT6和SCN5A。
从遗传学的角度，由于直接找到了具体行使毒性功能的功能基因，理论上只要将这些靶点基因敲除，神经类细胞便可获得河豚毒素的抗药性。
据介绍，由于猴子等灵长类动物和人类基因相似度非常高。
对于人类而言，找到靶点基因就可以通过服用基因抑制剂起到解毒作用。
这也意味着，不久的将来，中了河豚毒的人将不再无药可救。
*河豚中毒应如何急救河豚中毒的死亡率很高，一旦发现食用河豚中毒的患者应该马上送医进行急救，尽快洗胃、灌肠以排除胃肠道的残留毒素。
养殖河豚鱼弧菌病原菌的鉴定和生物学特性分析
养殖河豚鱼弧菌病原菌的鉴定和生物学特性分析麻丽丹;王殿夫;于晓婕;吴斌【摘要】从鳍基部、躯干部以及腹面出现斑点状出血的患病河豚鱼病灶处分离出11株优势茵（M1-M11），以体壁肌肉注射方式进行感染实验，证实菌株M2、M3-M6和M10为养殖河豚鱼鳍基部、躯干部以及腹面出现斑点状出血的病原菌，经形态学观察、生理生化特性分析和实时PCR检测，鉴定结果均为河弧菌。
对15种药物的敏感性试验证实该菌株对氯霉素、环丙沙星和诺氟沙星较为敏感。
%Eleven bacterial strains named M1-Mll were isolated from the cultured swellfish with dermahemia in abdominal. pinna and truncal region.The strains M2,M3-M6 and M10 were proved to be pathogen by muscle injection.By meens of morphological observation, physi【期刊名称】《中国动物检疫》【年(卷),期】2011(028)007【总页数】3页(P40-42)【关键词】河豚鱼;皮下充血病;河弧菌;生物学特性;实时PCR【作者】麻丽丹;王殿夫;于晓婕;吴斌【作者单位】丹东出入境检验检疫局,辽宁丹东118000;辽东学院动物科学系,辽宁丹东118000;四川大学生命科学学院,四川成都610065;辽宁出入境检验检疫局,辽宁大连116001【正文语种】中文【中图分类】S941.42近年来，由于河豚鱼出口创汇价值较高，所以河豚鱼的养殖面积正在迅速增多。
河豚鱼的生物学特性较常规养殖鱼类复杂、特殊，且易受外界环境因子的影响，疾病发生率高。
近几年来在规模化育苗和养殖过程中病害日益严重，河豚疾病在河豚养殖过程中降低河豚养殖成活率、同时也降低了河豚外观和品质，从而影响了产品出口及其出口价格，对养殖户造成了严重经济损失，河豚疾病成了限制其发展的主要因素[1]。
江西省食品药品监督管理局办公室关于加强河鲀经营监督管理的通知
江西省食品药品监督管理局办公室关于加强河鲀经营监督管理的通知文章属性•【制定机关】江西省食品药品监督管理局办公室•【公布日期】2017.08.03•【字号】赣食药监办餐〔2017〕32号•【施行日期】2017.08.03•【效力等级】地方规范性文件•【时效性】现行有效•【主题分类】食品安全正文江西省食品药品监督管理局办公室关于加强河鲀经营监督管理的通知赣食药监办餐〔2017〕32号各设区市、省直管试点县（市）食品药品监督管理局：河鲀（俗称河豚）含有剧毒河鲀毒素，如食用加工处理不当的河鲀及其制品，极易造成食物中毒甚至死亡。
为切实保障人民群众身体健康和生命安全，根据《农业部办公厅国家食品药品监督管理总局办公厅关于有条件放开养殖红鳍东方鲀和养殖暗纹东方鲀加工经营的通知》(农办渔〔2016〕53号)，现就加强河鲀经营监督管理工作通知如下：一、严格把握经营政策界限禁止加工经营所有品种的野生河鲀，禁止经营养殖河鲀活鱼，禁止经营未经加工的河鲀整鱼，禁止经营除养殖红鳍东方鲀和养殖暗纹东方鲀加工产品以外的其他河鲀加工产品。
二、有条件放开河鲀加工产品经中国水产流通与加工协会会同中国渔业协会河豚鱼分会审核的养殖河鲀加工企业，使用来源于经农业部备案的养殖河鲀鱼源基地的养殖红鳍东方鲀和养殖暗纹东方鲀，按河鲀加工技术要求去除有毒部位和河豚毒素，河鲀可食部位（皮和肉可带骨）经包装，并经检验合格附检验合格证后方可上市销售。
三、强化进货查验和购销记录管理食品经营者在经营河鲀加工产品时，要严格执行进货查验记录制度和食品销售记录制度，认真查验河鲀包装内容，包装上应附带可追溯二维码，并标明产品名称、执行标准、原料基地及加工企业名称和备案号、加工日期、保质期、保存条件、检验合格信息等内容，同时要索取同批次产品检验合格证明。
建立河鲀加工产品购（销）记录，如实记录产品名称、规格、数量、加工日期、保质期、购（销）货日期、及供（购）货者名称、地址、联系方式等内容，并保存相关凭证，做到来源可溯、去向可追、责任可究。
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讨论
1. 比较基因组重复序列(表格中的A)、编码区序列CDS1和CDS2（表格 中的B）以及蛋白序列PRO1和PRO2（表格中的C）的序列相似性
A
B
C
Indentity 44.8% Similarity 44.8%
• NCBI • GO
致谢
• 梁巍 参考了梁巍同学的答案中polydot部分
• 罗老师
Thank you !
方法和结果
2. 从找到的GeneBank序列中找出重复片段
1）提取FASTA格式的全序列：seqret 文件名
2）dottup将fasta格式的数据进行自我比对，参 数为wordsize=10
方法和结果
方法和结果
3）根据上图结果，用seqret命令将这两段序列分别取出来 （1-12000bp和12001-24000bp），dottup比对 seqret 序列名 –sbegin 1 –send 12000>新序列名
74.5% 74.5%
71.1% 78.5%
A、B、C的相似性逐渐增加，推测是因为在A中存在了大量内 含子，所以相似度最低，B中是编码区序列，C是蛋白序列,C去 除了密码子简并性的影响，因而得到了最好的相似性。
2. BLAST结果分析
• ABC转运体是一个可以帮助代谢物进和出细胞的一个复合 体，主要由四个结构域组成，两个细胞膜相关结构域，和 两个在细胞膜内面的ATP结合结构域组成，这些结构域共 同组成一个跨膜的中心孔。这四个核心的结构域可能作为 分开的多肽编码，也可能以多种方式形成一个多结构域的 多肽（GO: 00431中找出MDR(AF164138)
Ensemble BioMart
有EST的部分序列分析
TrEMBL Results
方法和结果
• 使用软件预测编码序列
Softberry - Comprehensive gene identification server (Commercial) HMMgene - Prediction of vertebrate and C. elegans genes (CBS, Denmark) GenScan - Identification of complete gene structures in genomic DNA (MIT) DIGIT-consensus-based programs
• 根据上一段GO注释，我推测PRO1很有可能是一个同时 含有四个核心结构域的ABC转运体。ABC转运体蛋白家族 是细菌多药物抗性有关的蛋白[1]，由此可以推断原来的大 段基因组序列确实是多药物抗性基因。
跨膜结构预测
TEMPRED 预测跨膜结构
TMHMM 预测
TrEMBL Results
TrEMBL Results
方法和结果
5.利用重复结构域序列BLAST查找其功能
取出PRO1的第一段序列（1-600bp）在NCBI的网站上进行blast， 参数为：程序：BLASTP 2.2.18 、数据库：Non-redundant protein sequences (nr)、矩阵：BLOSUM 62 、Gap Costs：Existence 11， Extension 1。
方法和结果
4. 对AF164138的蛋白序列进行分析
1）用dottup和needle对相应的PRO1和PRO2进行比对。
方法和结果
2）用dottup将pro1自我比对，参数为wordsize=10
方法和结果
3）用dotmatcher进行进一步比较，设置参数为 wordsize=10，threshold=23
方法和结果
• 最高比对结果ABC_MTABC3_MDL1_MDL2 （ABCB6）结构域，它是一个线粒体ATP结合盒 式蛋白，在铁稳态中起作用。MDL1是一个ATP依 赖的渗透酶，且是ATM1的高拷贝抑制子，同时 在氧压耐受性中起作用。
• CydD，ABC转运系统（ATP-binding cassette transporter）和细胞色素bd生物合成和相关，是 渗透酶的组成成分。
• 通过BioLand中整合的EMBOSS软件包中的 needle，water，dottup等工具，以及基因预测程 序GeneScan等，分析该序列片段，选取其中的 功能片段进行blast，以推测其功能。
• 分析表明，该序列片段5’端含两个高度相似的多 药耐药基（Multi-drug Resistance gene，简称 MDR）。
河豚鱼多药耐药基因 柯氏质粒序列片段分析
Analysis of Fugu Cosmid sequence fragment with two Multi-Drug Resistance Genes
徐礼鸣 Xu, Liming Mar 17, 2009
简介
• AF164138 是一个长39757 bp的基因组序列片段, 由协和医科大学刘勇等于1999年从河豚鱼中克隆 到并递交到GenBank。
方法和结果
4）用needle进行比
方法和结果
3. 对AF164138的编码序列的分析
1）使用coderet命令从第一步下载的GeneBank格式的数 据中提取所有CDS,mRNA和蛋白fasta格式的序列信息 （codret 文件名），并用seqretsplit命令将序列分开，得 到CDS、mRNA和蛋白序列各5条（seqretsplit 文件名）。 （注意coderet 和seqret的区别） 2）比较编码区序列
使用cat命令将5个cds序列连成一个文件（cat file1 file2 file3 file4 file5>newfile）
使用polydot分析相似性，wordsize=20.（polydot newfile）
方法和结果
方法和结果
3）分别用dottup（wordsize=10)和needle对cds1和cds2进 行比对
方法和结果
4）根据上图用seqret命令截取两段重复序列1-600bp和7001300bp，再将两者进行dotmatcher
方法和结果
5）将两者进行needle和water比对
方法和结果
• 如果将这两个切下来的半段序列再进行polydot比较可以发 现，这两个半段中前后也比较相似
Polydot by Wei Liang
补充材料
• PRO1的第二段序列的比对结果
ATM也是ABC转运体系统中的一员，与Fe-S簇组装相关， 是渗透酶和ATPase的组成成分。
参考资料
• [1] ATP-binding cassette transporter，From Wikipedia, the free encyclopedia，2008-3-11， /wiki/ATPbinding_cassette_transporter