检测细胞周期的方法
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检测细胞周期的方法
1. 流式细胞术：
PI能够插入双链DNA中。它被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡的细胞的细胞膜。
(1) 收集细胞（1～5）×10 6个，500～1000r/min离心5min，弃去培养液。
(2) 3ml PBS洗一次。
(3) 离心去PBS，加入冰预冷的70％的乙醇固定，4℃，1h。
(4) 离心弃去固定液，3ml PBS重悬5min。
(5) 400目的筛网过滤1次，500～1000r/min离心5min，弃去PBS。
(6) 用1ml PI染液，4℃避光30min。
(7) 流式细胞仪检测：PI用氩离子激发荧光，激发光波波长为488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光，可分析前散射光对侧散射光的散点图及PI荧光的直方图。
2. 高内涵分析
PI ,即碘化丙锭,可以与细胞内DNA 结合后能被激发产生荧光,通过高内涵检测到的与DNA 结合的PI 的荧光强度可以反映了细胞内DNA 含量的多少。由于细胞周期各时相的DNA 含量不同,通常正常细胞的G1/ G0 期具有二倍体细胞的DNA 含量(2N) ,G2/ M 期具有四倍体细胞的DNA 含量(4N) ,而S 期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。因此,通过高内涵拍照，利用图像分析软件可以将细胞周期各时相区分为G1/ G0 期,S 期和G2/ M 期,并可通过软件计算各时相的百分率。