实验一 CTAB法提取植物基因组DNA
实验一-DNA提取
实验一-DNA提取实验一DNA的小量制备小量法提取植物基因组DNA（CTAB法）1 实验目的：随着基因工程等分子生物学技术的迅速发展及广泛应用，人们经常需要提取高分子量的植物DNA，用于构建基因文库、基因组southern 分析、酶切及克隆等，这是研究基因结构和功能的重要步骤。
本实验目的是学习从植物材料中提取和测定DNA 的原理并掌握CTAB 提取DNA 的方法，进一步了解DNA 的性质。
2 实验原理细胞中的DNA 绝大多数以DNA-蛋白复合物（DNP）的形式存在于细胞核内。
提取DNA 时，一般先破碎细胞释放出DNP，再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质，最后用乙醇把DNA 从抽提液中沉淀出来。
DNP 与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。
以NaCl 溶液为例：RNP 在0.14mol/L NaCl中溶解度很大，而DNP 在其中的溶解度仅为纯水中的1％。
当NaCl 浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP 的溶解则随之不断增加。
当NaCl 浓度大于1mol/L 时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2 倍，因此通常可用1.4mol/L NaCl 提取DNA。
为了得到纯的DNA 制品，可用适量的RNase 处理提取液，以降解DNA 中搀杂的RNA。
关于植物总DNA 的提取主要有两种方法：1．CTAB 法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide, 简称CTAB）：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/LNaCl）是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB 与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB 与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB 能溶解于乙醇中。
实验一 CTAB法提取植物基因组DNA
实验一CTAB法提取植物基因组DNA实验目的:学习从植物组织中(幼叶)提取基因组DNA的基本原理与方法。
实验原理:采用机械研磨的方法破碎植物的组织与细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其就是氧化酶类),其对DNA的抽提产生不利的影响,所以在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。
在液氮中研磨,材料易于破碎,并减少研磨过程中各种酶类的作用。
CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),就是一种阳离子去污剂,可溶解细胞膜并与核酸形成复合物。
该复合物在高盐的溶液中(>0、7mol/L NaCl)就是可溶的,通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀(CTAB能溶于乙醇)即可使核酸分离出来。
CTAB溶液在低于15度时会形成沉淀洗出,因此再将其加入冰冷的植物材料中之前必须预热(65度),且离心温度不要低于15度。
实验步骤:1、取幼嫩的植物叶片(3-5g)剪碎液氮研磨成粉,转入1、5ml离心管内。
加入等体积的65℃预热的DNA提取缓冲液置于65℃的恒温水浴摇床上1-2h(1、5h)。
2、加入等体积的氯仿:异戊醇(24:1),轻轻上下颠倒5分钟,静置5分钟,之后于12000rpm离心10分钟。
3、吸取上层水相,重复步骤2一次。
4、吸取上层水相,加入预冷2/3体积的异丙醇,轻缓颠倒2分钟并置-20℃冰箱内10min,待DNA沉淀后于12000rpm离心收集,收集的DNA于70%乙醇中洗2-3次。
将弃去乙醇风干后的DNA加适量水使其溶解。
5、待DNA完全溶解后加入1-2μl不含RNAaseA(10mg/ml),37℃保温1h以除去DNA中的RNA。
6、于Eppendorf管中加入1mL氯仿:异戊醇(24:1)轻轻上下颠倒10分钟后10000rpm离心10分钟。
7、吸取上层水相并先后加入1/10体积的3M醋酸钠及2倍总体积的预冷的无水乙醇,接着置于-20℃冰箱,10分钟后10000rpm离心10分钟,弃去无水乙醇,加入70％乙醇洗涤2-3次,风干,最后将DNA溶于适量(200-500μl) TE中。
实验一 DNA提取
实验一DNA的小量制备小量法提取植物基因组DNA（CTAB法）1 实验目的：随着基因工程等分子生物学技术的迅速发展及广泛应用，人们经常需要提取高分子量的植物DNA，用于构建基因文库、基因组southern 分析、酶切及克隆等，这是研究基因结构和功能的重要步骤。
本实验目的是学习从植物材料中提取和测定DNA 的原理并掌握CTAB 提取DNA 的方法，进一步了解DNA 的性质。
2 实验原理细胞中的DNA 绝大多数以DNA-蛋白复合物（DNP）的形式存在于细胞核内。
提取DNA 时，一般先破碎细胞释放出DNP，再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质，最后用乙醇把DNA 从抽提液中沉淀出来。
DNP 与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。
以NaCl 溶液为例：RNP 在0.14mol/L NaCl中溶解度很大，而DNP 在其中的溶解度仅为纯水中的1％。
当NaCl 浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP 的溶解则随之不断增加。
当NaCl 浓度大于1mol/L 时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2 倍，因此通常可用1.4mol/L NaCl 提取DNA。
为了得到纯的DNA 制品，可用适量的RNase 处理提取液，以降解DNA 中搀杂的RNA。
关于植物总DNA 的提取主要有两种方法：1．CTAB 法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide, 简称CTAB）：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/LNaCl）是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB 与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB 与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB 能溶解于乙醇中。
试验一植物基因组DNA提取
实验一植物基因组DNA提取目的：了解植物细胞的特点，掌握植物基因组DNA分离、纯化的原理。
原理：用植物基因组DNA提取液处理研磨、收集后的样品，提取液中的乙二胺四乙酸二钠（EDTA）能螯合金属离子，以防止破碎细胞的脱氧核糖核酸酶对DNA 的降解作用，而细胞破碎液中的蛋白酶K在37℃温浴过程中还能降解蛋白质，从而减少了蛋白质对DNA的污染。
然后用CTAB处理，在特定的盐浓度下，CTAB 使基因组DNA处于溶解状态，而蛋白质仍为沉淀。
经细胞破碎液获得的DNA 粗提取液再用酚、氯仿、异戊醇处理，其中酚是高效的蛋白变性剂，可进一步将蛋白、脂类和细胞碎片去掉，然后用氯仿、异戊醇处理，一方面可达到去蛋白的目的，另一方面还可去除残留的酚。
一、材料植物的根、茎、叶。
二、设备移液管，高速冷冻离心机，台式离心机，水浴锅。
三、试剂1、CTAB或Nacl溶液：4.1克NaCl溶解于80ml水，缓慢加入10克CTAB，加水至100ml。
2、其它试剂：氯仿、异戊醇（24：1），酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），异丙醇，TE，10%SDS，蛋白酶K（20mg/ml），5mol/LNaCl。
四、操作步骤1、选新鲜无病虫害的叶片用自来水冲洗吸干，用蒸馏水洗两次，然后用超纯水洗一遍，吸干，剪碎称0.5-0.25克。
2、将所取材料放入预冷的研钵（研钵提前要灭菌），研成粉末后置于7ml离心管内（可以换为将样品放置到7ml离心管中800ulＣＴＡＢ后用玻棒捣碎）。
3、加入2.4ml 65℃预热的CTAB，充分混合后65℃水浴90min以上，冷却到室温，加入等体积氯仿异戊醇（24：1），轻轻颠倒混匀4℃离心6000g×10min，取上清加入2/3体积的-20℃预冷的异丙醇轻轻混匀，-20℃度放置20min，4℃离心5000g×5min，去上清。
4、再沉淀中加入0.6ml的65℃CTAB温育30min，待沉淀充分溶解，加入等体积氯仿异戊醇充分混匀，4℃离心6000g×5min，去上清加入2/3体积的-20℃预冷的异丙醇，轻轻混匀-20℃放置20min。
CTAB法提基因组
植物基因组DNA提取在提取过程中用到的吸头、研钵、提取缓冲液等先高压灭菌20 min，取出后待用，按照下述步骤提取基因组DNA。
（1）在65°C水浴中预热CTAB提取液。
（2）在液氮中研磨2～3 g新鲜或-20°C冷冻的样品材料。
注意，要研成很细的粉末，动作要快。
（3）迅速加入CTAB提取液，混匀，倒入离心管中，65°C水浴30 min。
其间不断轻轻摇动离心管。
（4）加入5mol/L的乙酸钾充分混匀，在冰浴中放置30 min中，4°C 12000 rpm离心5 min，吸上清。
注意，对于幼嫩叶片此步可以省略。
对成熟的老叶片需采用。
（5）加入等体积的氯仿/异戊醇，混匀，放置10 min，12000 rpm 常温离心10 min。
（6）吸上清到新离心管中，用氯仿/异戊醇重复抽提一次。
（7）吸上清到新离心管中，加入2.5倍体积的无水乙醇，混匀，-20°C 放置10～30 min沉淀DNA。
（8）10000 rpm常温离心10 min。
（9）倒掉乙醇，用400 μL70%乙醇洗沉淀，然后用400μL100%乙醇洗沉淀，吹干后用200～500 μL TE溶解DNA。
（10）溶解后的DNA再用氯仿/异戊醇抽提一遍。
（11）吸上清到新离心管中，加入2.5倍体积的无水乙醇，混匀，-20°C放置10～30 min ,沉淀DNA。
（12）离心，弃上清，70%乙醇洗沉淀，再用100%乙醇洗沉淀，吹干后，用200 μLTE 溶解DNA。
用紫外分光光度计测定浓度后，按要求的浓度（如200 μg·μL-1）再向DNA溶液中加入适量TE。
在-20°C 冰箱中可长期保存。
注意，提取的DNA的质量由它的长度和纯度决定。
轻轻操作DNA 溶液和快速冷冻植物组织对减轻机械剪切力和核酸酶切割非常重要，不能振荡，不能使用太细口的吸头，也不能吸得太快。
多糖、蛋白质及木本植物中的酚类物质是植物DNA抽提中的主要污染物，提取材料要尽量使用幼嫩叶片。
植物基因组dna的提取实验报告
植物基因组dna的提取实验报告植物基因组DNA的提取实验报告。
植物基因组DNA的提取是分子生物学实验中的一项重要步骤，对于研究植物的遗传特性和基因表达具有重要意义。
本实验旨在通过提取植物细胞中的DNA，为后续分子生物学实验提供基础支持。
在本次实验中，我们选择了小麦叶片作为实验材料，采用CTAB法提取植物基因组DNA，并对提取的DNA进行质量评估。
首先，我们收集了新鲜的小麦叶片样品，并将其置于液氮中迅速冷冻保存，以保持DNA的完整性。
接着，将叶片样品磨成细末状，并加入预冷的CTAB提取液中，进行细胞破裂和DNA的溶解。
随后，通过酚/氯仿提取法分离DNA与蛋白质，最终得到DNA的沉淀物。
在实验过程中，我们注意到了一些关键的操作细节。
首先，样品的冷冻保存和研磨过程需要迅速进行，以防止DNA的降解。
其次，在加入CTAB提取液后，充分混合样品并保持恒温，有助于细胞破裂和DNA的溶解。
最后，在进行DNA的沉淀时，需要注意避免将上清液一同转移，以保证提取得到的DNA纯度。
提取得到的DNA样品经过紫外分光光度计检测，结果显示其纯度较高，吸光比值（A260/A280）约为1.8，符合DNA的纯度要求。
随后，我们进行了琼脂糖凝胶电泳实验，观察到明显的DNA条带，并通过对照DNA分子量标准品的迁移情况，初步评估了提取得到的DNA片段大小。
通过本次实验，我们成功地提取到了小麦叶片样品中的基因组DNA，并对其质量进行了评估。
下一步，我们将利用提取得到的DNA样品，开展进一步的分子生物学实验，包括PCR扩增、基因克隆等，以深入研究小麦的遗传特性和基因表达。
本次实验为我们提供了可靠的DNA样品，为后续实验奠定了坚实的基础。
总之，植物基因组DNA的提取是分子生物学研究中的重要步骤，本次实验通过CTAB法成功提取了小麦叶片样品中的DNA，并对其进行了质量评估。
提取得到的DNA样品具有较高的纯度和完整性，为后续实验提供了可靠的基础支持。
CTAB法提取植物DNA和RNA
1)取0.1~0.2 g幼叶片放入液氮预冷的研钵液氮种研磨成粉。
加入含有65℃预热的1 000 μl CTAB裂解液和20 μlβ-巯基乙醇的2 ml离心管中，65℃水浴裂解40~60 min，每隔10min颠倒混匀一次。
然后常温12 000 r/min离心10 min。
2)取上清，加入2 ml离心管中，加入等体积氯仿：异戊醇(24：1), 旋涡混匀，4℃, 12 000 r/min, 离心10 min。
重复这一步骤至界面清晰。
3)取上清，加入到1. 5 ml离心管, 加入两倍体积-20℃预冷的无水乙醇和1/10体积3M的NaAc(pH=5.2), 小心颠倒均匀，-20℃沉淀10~30 min。
4)4℃, 12 000 r/min, 离心10 min。
弃上清，用70%的乙醇洗2~3次。
室温干燥30 min。
5)加入1μl 10 mg/ml RNase，37℃温浴30-60 min去除RNA。
6)溶于40μl灭菌的ddH2O，琼脂糖凝胶检测。
注：无水乙醇、NaAc、70%的乙醇预冷7)取0.1~0.2 g植物材料放入液氮预冷的研钵液氮种研磨成粉。
加入含有65℃预热的1 000 μl CTAB裂解液和20 μlβ-巯基乙醇的2 ml 离心管中，65℃水浴裂解40~60 min，每隔10min颠倒混匀一次。
8)加入等体积氯仿：异戊醇(24：1), 旋涡混匀静置3 min，4℃, 12 000r/min, 离心10 min。
9)取上清800 μl于2 ml离心管中，加入等体积氯仿：异戊醇(24：1), 旋涡混匀冰上静置3 min，4℃, 12 000 r/min, 离心10 min。
10)取上清600μl，加入1/30体积的NaAc（3M，pH=5.2）和1/10体积的无水乙醇（均预冷），混匀，在冰上静置10 min，再加入等体积氯仿：异戊醇(24：1)，4℃，12 000 r/min, 离心10 min。
CTAB法提取基因组DNA
CTABt[30]提取玉米（或其它植物）基因组DNA1）取~1 g玉米叶片，加入液氮粉碎，加入2mL2%65C保温的2X CTAB抽提液, 混匀，65r保温30〜60min。
2）加入等体积的氯仿/异戊醇（24: 1）,轻缓颠倒混匀，10000r/min ,离心5min< 3）取上清，加入1/10体积（约）的65E的10X CTAB/NaC溶液，颠倒混匀。
4）用等体积的氯仿/异戊醇（24: 1）抽提，10000r/min ，离心5min。
5）取上清，加入（正好）等体积的CTAB沉淀液，颠倒混匀，如沉淀可见，继续做下步，否则，65 r保温30min。
6）4r，2700 r/min ，离心5min。
7）去上清，用高盐的TE buffer重悬（〜）。
（可65E保温30min,至大部分溶解）。
8）加入体积的异丙醇沉淀核酸，充分混匀，4r，10000 r/min ，离心15min。
9）去上清，80%乙醇洗涤沉淀，干燥，用尽可能少的TE buffer 重悬。
高盐的TE buffer终浓度配制50ml10mM ,(1M母液）0.1mM EDTA,(0.5M母液）1M NaCl 1.8g室温可保存几年CTA B提取液终浓度配制200ml2%(W/V) CTAB4g100mM ,20ml(1M母液）20mM EDTA,8ml(0.5M母液）1.4M NaCl10.22g室温可保存几年10 X CTAB/NaC溶液（10%CTAB/0.7M NaCl）在80ml H2O中溶解4.1g NaCl，缓慢加入10g CTAB同时加热并搅拌。
如果需要，可加热至65 r溶解。
定容至100ml。
CTAB沉淀液终浓度 配制 100ml室温可保存几年CTABt 提取植物干品（或真菌）基因组 DNA （自己改进版）10） 取0.2g 叶片，加入液氮粉碎，加入 800卩L 2% 65C 保温的2X CTAB 抽提液， 混匀，65C 保温30〜60min 。
植物DNA的提取(CTAB法)
实验一、植物DNA的提取（CTAB法）实验内容采用CTAB法从植物叶片中提取基因组DNA，并进行纯度分析和琼脂糖凝胶电泳。
目的要求掌握CTAB法从植物叶片提取DNA的原理和方法。
实验原理CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。
在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB 与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
DNA的浓度测定和纯度分析紫外光吸收法：纯的DNA的A260/A280在1.8左右，纯的RNA的A260/A280在2.0左右。
试剂和器材：(1) CTAB分离缓冲液2% CTAB，2% PVP，0.15M EDTA，2.1M NaCl, 0.1M Tris-Base(pH8.0), 1%巯基乙醇，pH 8.0。
(2) 洗涤缓冲液75%乙醇，75mL无水乙醇，加水到100mL。
(3) TE缓冲液 10mmol/L Tris-HCL （pH7.4），1mmol/L EDTA(4) 氯仿-异戊醇（24：1）。
(5) 液氮。
(6) 研钵，恒温水浴（37-100℃），离心机，离心管。
操作方法：(1) 将CTAB分离缓冲液，置于65摄氏度水浴中预热。
(2) 称取约10g叶片，置于预冷的研钵中，倒入液氮，尽快将叶片研碎。
(3) 取粉末于10ml离心管，加预热的CTAB分离缓冲液4ml，轻轻转动混匀。
65℃保温30分钟。
(4) 加等体积（4mL）的氯仿-异戊醇，轻轻颠倒混匀，4度下12000rpm离心10分钟。
(5) 取上清液转移至新管，重复（5）(6) 取上清液转移至新管,加入2倍体积预冷的无水乙醇，常温静置5min，用无菌牙签挑出DNA，转至新管，用70%乙醇洗涤3次，(7) 去净所有液体，风干，用适量的无菌水溶解DNA。
(8) 取2uL稀释500-1000倍，测定A260，A280，A230吸光度，判断DNA纯度。
实验1植物基因组DNA的提取
实验1 转基因植物PCR 检测一、植物DNA 的提取技术(CTAB 法)一、实验目的1.掌握用CTAB 法提取植物总DNA 的方法和基本原理。
2.学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA 抽提方法。
二、原理CTAB 法[十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide ，简称为CTAB)]是一种快速简便的提取植物总DNA 的方法。
通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，然后加入CTAB ，CTAB 是离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使核酸(DNA 、RNA)得以游离出来。
再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA 、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。
上清液中加入无水乙醇使DNA 沉淀，沉淀DNA 溶于TE 溶液中，即得植物总DNA 溶液。
三、实验材料大豆幼苗[材料的采集与保存对提取DNA 的产量和质量有很大影响。
通常应尽可能采集新鲜、幼嫩的组织材料，采集过程中应尽可能保持组织材料所含的水分。
通常的做法是取样时立即用浸湿的纱布包裹采集到的组织材料，放置在带有冷藏功能的采集箱中，这样通常使组织材料在3-5d 内仍然保持新鲜。
野外远距离采集样本时，在可能的条件下应冷冻保存（如放置于液氮中）；当不具备冷冻条件时，最好用盛有无水CaSO4的瓶子分别保存，使其迅速干燥，这种方法可将材料保存数月，返回后应尽快进行DNA 的提取工作。
那些具有大量次生代谢产物（如单宁、酚类、醌类等）的植物材料，应尽可能采集幼嫩组织。
]四、试剂4.1 CTAB 提取缓冲液：100 mmol/L Tris-HCl （pH8.0），20 mmol/L EDTA-Na 2，1.4mol/L NaCl （如表1），2% CTAB ，使用前加入0.1%（V/V ）的β-巯基乙醇。
表1 CTAB 提取缓冲液配制4.2 TE 缓冲液：10mmol/L Tris-HCl, 1mM EDTA （ pH8.0）。
CTAB法提取植物基因组DNA
CTAB法抽提植物组织DNA
1、准备工作：
（1）将玻璃瓶，药匙，镊子，研钵，滤纸，枪头，水浴锅准备好；
（2）准备CTAB溶液：
2×CTAB buffer（50mL）
CTAB Powder（2%） 1.0g
1M Tris-HCl（pH8.0，100mM） 5.0mL
0.5M EDTA（20mM） 2.0mL
5M NaCl（1.4M）14.0mL
（3）将水浴锅调到65℃；
（4）事先准备好要用的氯仿，Tris饱和酚（1:1），异丙醇。
无水乙醇放在-20℃冰箱。
2、提取方法
（1）称取0.5 g 新鲜植物叶片，置于研钵中，加入液氮迅速研磨成粉末，用小药匙迅速转移至1.5 mL Eppendorf 管中；
（2）加入700 μL 2×CTAB/巯基乙醇缓冲液，颠倒混匀；
（3）将离心管置于65℃水浴中保温1h，中间不时颠倒混匀；
（4）加入700 μL氯仿：Tris饱和酚（1:1），温和颠倒5min；
（5）室温，12000×g，离心10min；
（6）取上清（约700μL）于一新的Eppendorf管中（切勿扰动界面），加入氯仿：异戊醇（24:1）700μL，轻轻颠倒混匀；
（7）室温，12000×g，离心10min；
（8）取上清500 μL，加入500 μL-20℃预冷的无水乙醇，混匀。
-20℃放置30min；
（9）室温，12000×g，离心10min；
（10）弃上清，用70%乙醇将沉淀小心清洗两遍；
（11）铺一块吸水纸于超净台中，将离心管开口向下置于滤纸上，室温下吹干10min左右；
（12）溶于适量水或TE溶液中（约50 μL）。
利用CTAB法提取植物基因组DNA
利用CTAB法提取植物基因组DNA植物基因组DNA提取是分子生物学领域中常用的技术之一。
目的是为了获取高质量的DNA样品，以便进行PCR、测序、基因克隆以及染色体制备等实验。
目前，CTAB法是植物基因组DNA提取中广泛采用的方法之一。
本文将介绍利用CTAB法提取植物基因组DNA的步骤及注意事项。
1. 准备植物组织样品首先需要准备好待提取的植物组织样品，这些样品可以是叶子、花、芽、根等。
样品应该分别收集、标记，冷藏保存并尽快进行提取。
2. 样品研磨取一小段样品，用液氮将其冷冻，然后用研钵和研杵将其研磨成细碎的粉末状。
如果样品过多，则可以用离心管研磨器等仪器进行批量高效研磨。
3. 细胞壁裂解将磨细的植物组织加入CTAB裂解缓冲液中，加热至65℃，开启混合器磁子，同时混合2-3分钟左右，以破坏细胞壁，释放出DNA。
4. 除去蛋白质加入一定量的氯仿，并短暂的混合均匀，待混合物静置后，可以观察到混合液结成两层。
上层为水相，在此基础上加入同体积的异丙醇，沉淀出DNA进行洗涤和离心。
离心后，上清液含有蛋白质，可以废弃，而下沉淀可以进行枸橼酸溶解。
5. 获取DNA加入枸橼酸缓冲液后，可以分别进行洗涤和沉淀。
最后，通过乙醇提取，可以得到纯度较高的基因组DNA样品。
注意事项：1. 必须严格控制植物组织样品的数量，避免混入过多的杂质干扰提取效果。
2. 在DNA分离过程中，所有试剂、试管和磨具等物品都必须干燥无水，以免水分对提取质量产生干扰。
3. CTAB裂解缓冲液中的NaCl浓度和pH值的调节必须准确，其浓度和pH值直接关系到DNA的结晶和浓度。
4. 在进行DNA纯化过程中，必须注意所有材料的稳定性和纯度，同时要充分保护目标DNA，避免DNA被降解。
总之，CTAB法提取植物基因组DNA是一种安全、高效、可靠的方法。
在实际操作中，应充分掌握其原理、步骤和注意事项，以获取高质量的DNA样品，为后续的实验打下良好的基础。
ctab法提取植物基因组dna资料
ctab法提取植物基因组dna资料一、实验原理CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种去污剂，可溶解细胞膜并能与核酸形成复合物，该复合物在高离子强度（0.7mol/L）的溶液里是可溶的，通过离心可将复合物同蛋白质、多糖类物质分开。
在酚仿变性的条件下，去除残留的CTAB和蛋白质等杂质，然后利用异戊醇或无水乙醇将DNA分子从上清溶液中沉淀出来，最后用TE溶解DNA，并加入RNA酶以去除基因组中的RNA，置于-20℃备用。
因此，CTAB可以用于从大量产生粘多糖的有机体中提取核酸，例如：植物的叶片组织。
二、实验材料及试剂实验材料：新鲜植物叶片。
试剂与溶液：CTAB提取缓冲液，Tris-饱和酚，氯仿-异戊醇（24:1），异丙醇，70%乙醇，含RNase的TE溶液。
CTAB提取缓冲液：2%（M/V）CTAB，1.4MNaCl，100mMTris-Cl （pH8.0），20mMEDTA，pH8.0，2%（V/V）β-巯基乙醇（使用前加入）。
三、实验步骤取0.5g新鲜植物叶片置于研钵中，加入适量液氮，迅速研磨成均匀粉末。
将粉末移入1.5mL离心管，加入800μLCTAB分离缓冲液，上下颠倒离心管，混合均匀。
将盛有样品的离心管置于65℃水浴中保温30min，其间每隔3-4min轻摇混匀。
低温12000rpm离心5min，将上层水相转移至新的离心管中。
加入等体积的Tris-酚和氯仿异戊醇，上下颠倒离心管，混合均匀；低温12000rpm离心5min，将上层水相转移至新的离心管中。
加入等体积的氯仿异戊醇上下颠倒离心管，混合均匀；低温12000rpm离心5min，将上层水相转移至新的离心管中。
加入0.6倍体积的异丙醇，轻轻混匀，置于-20℃沉淀30min。
低温12000rpm离心5min去上清，加入500μL70%乙醇洗涤沉淀，常温12000rpm2min，去上清，沉淀尽量干燥。
加入适量含有RNase的TE（20μL）溶解沉淀，37℃水浴30min，消化RNA。
实验一--CTAB法提取植物基因组DNA.doc
实验一--CTAB法提取植物基因组DNA.doc
CTAB法是一种提取植物基因组DNA的标准技术，它是将植物组织或细胞固定剂与有机溶剂混合溶解后，利用高通量PCR技术显微镜适用的植物DNA提取方法，将病毒与细菌遗
传学上的DNA提取技术应用到植物DNA提取上来。
CTAB法的提取策略主要是先收缩细胞壁，然后分解细胞质，使DNA与蛋白质、核酸等其他物质分离。
有两种方法可以用于收缩细胞壁，一种是使用脱水剂，另一种是使用温和
的柱状体破碎物质，这两种方法可以使细胞壁被开裂。
随后，有机溶剂被用来分离DNA，
有机溶剂会与蛋白质和核酸结合，然后消除组织成份，使DNA易于收集。
在有机溶剂洗涤后，用CTAB溶液在冰上半小时沉淀DNA，紧接着用脱盐水冲洗，最后用70%的乙醇对DNA
进行沉淀。
最后，DNA可以被收集，净化，脱水或冻存，随时可用。
此外，为了获得精确的结果，在使用CTAB法提取植物基因组DNA时也有一些需要考
虑的因素，其中包括样本所处的第一步，样品消毒，采取合适的收缩细胞壁和有机溶剂剂量，CTAB溶液沉淀时间，脱盐水洗涤次数，乙醇沉淀次数，DNA注射缓冲液等，如果这些
步骤都能得到恰当的处理，则可以保证获得的 DNA 极为纯净。
为了提高植物DNA提取效率，CTAB法在提取植物基因组DNA时也可以使用DNA限制酶，例如酸性磷酸酶和热胡萝卜素变性酶之类的酶，这种方法可以使细胞壁更易被分解，从而
使DNA更容易被收集。
总而言之，CTAB法提取植物基因组DNA是一种比较有效的方法，能够获得更高质量的DNA，但是在使用这种技术提取植物DNA时，需要注意一些关键的步骤及酶的使用，以确
保获得的DNA有较高的纯度。
CTAB法提取植株基因组DNA
CTAB法提取植株基因组DNA（1）采摘健康幼叶作为提取植株基因组DNA的材料，用蒸馏水洗净，用纸吸干。
（2）取新鲜的叶片150mg置于1.5ml离心管中，使用MM301细胞破碎仪进行研磨破碎。
（若样品暂时不用，应保存于-80°C）（3）加入已预热的2×CTAB提取缓冲液700µl浸透粉末并倒转离心管，使粉末充分散开，于65℃水浴60 min，其间轻柔混合2-3次。
（65°C预热CTAB，准备1000μl枪头，新离心管，镊子，厚手套，-20°C预冷异丙醇、无水乙醇）（4）取出离心管，冷却至室温，加入700µl的氯仿/异戊醇（24/1），轻缓颠倒混匀，静置10 min。
（5）13000rpm离心10min。
（离心温度不可过低，CTAB低于15°C会析出沉淀）（6）取上清600µl转移至新离心管中，加入等体积的氯仿/异戊醇(24/1)，轻缓颠倒混匀，室温放置10min。
（取上清时一定要小心，不可将杂质混入，上清不够则少提）（7）13000rpm离心10min，取上清400µl转移至新离心管中，加等体积已预冷的异丙醇，保存于-20℃，静置20 min。
（8）13000rpm离心10min，将离心管倒置于吸水纸上，控干上清，用600µl 70%的乙醇洗涤沉淀2次，室温下微干。
加入300µl去离子水溶解沉淀。
（沉淀一定要充分溶解，可用枪头将沉淀从离心管底部弹起，放于4°C 0.5h—1.0h）（9）加入1µl RNase（10mg/ml）置于37℃水浴60 min，每个离心管加300µl去离子水，加入等体积的氯仿/异戊醇抽提2次。
（此步抽提很重要，一定要避免分离层中的白色薄膜吸入枪头，否则所得到的DNA中会含杂质而呈现乳白色）（10）吸取上清400µl 转入新离心管，加入上清体积1/10的3mol/LNaAC溶液，2.5倍体积的预冷无水乙醇沉淀DNA，置于-20℃，20 min左右，12000rpm离心10min，弃上清。
7植物基因组DNA提取-CTAB法
（NaAc或KAc）？ 为什么用70%乙醇清洗DNA沉淀而不是无水乙醇？
1. 2% CTAB抽提缓冲液
CTAB 2g， NaCl 8.18g ， EDTA-Na2-2H2O 0.74g， 10ml 1mol/L Tris-HCl(pH8.0)， 先用 70ml ddH2O溶解, 再定容至100ml，灭菌, 冷却后 加入0.2% β-巯基乙醇0.2ml。
终浓度： CTAB 2%, NaCl 1.4mol/L（生理平衡 作用）, EDTA20mmol/L(螯合离子作用)，β-巯基 乙醇 100 mmol/L或PVP（聚乙烯吡咯烷酮 ）（降 低氧化酶类的活性，防止酚氧化成醌，有效去除 多酚。）
7.用70%乙醇清洗沉淀两次，吹干后，溶于适量的 灭菌ddH2O或TE缓冲液中。
注意事项
1）选取新鲜、幼嫩的பைடு நூலகம்料，避免研磨困难、材料含 有较多的多酚类物质、提取产物有颜色等；
2）研磨迅速彻底，研磨好的材料应与 CTAB 抽提液 充分混匀；
3）为获得具有生物活性的天然核酸，在分离制备过 程中必须采用温和的条件，避免过酸过碱、剧烈地 搅拌，防止热变性，还要避免核酸降解酶的降解。
（二）获取程序及原理
1. 破壁破膜，释放染色体
利用液氮对植物组织进行研磨，破碎细胞；然后 加入CTAB缓冲液。
有效制备DNA时要考虑两个原则： 防止和抑制内源 DNase 对 DNA的降解； 尽量减少对溶液中DNA的机械剪切破坏。
在液氮冷冻条件下研磨破碎，保证材料在此过程 中DNase无法活动。
四、实验方法与步骤
1 .准备：2%CTAB 抽提缓冲液在65℃水浴中预热
2. 破碎细胞：取少量叶片（约1g）置于研钵中，倒 入液氮尽快研磨至粉状
ctab法提取植物基因组dna[指点]
![ctab法提取植物基因组dna[指点]](https://img.taocdn.com/s3/m/0652dc0f6f1aff00bfd51e11.png)
ctab法提取植物基因组dna[指点] CTAB法提取植物基因组DNA这种方法是由Murray 和Thompson(1980)修改而成的简便方法。
CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中((0.7 mol/L NaCl)是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度(0.3 mol/L NaCl)时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白，多糖类物质分开。
最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA，而CTAB溶于乙醇或异丙醇而除去。
一材料、试剂和仪器1 材料新鲜的组织材料或-80?冻存的材料2 试剂(1)2×CTAB溶液(2)氯仿/异戊醇(24:1)(3)RNaseA 10mg/ml(4)乙醇或异丙醇(5)β-巯基乙醇(6)氯仿/异戊醇(25/24/1)(7)70%乙醇3. 仪器: 离心机，恒温水浴, 台式高速离心机，电泳装置二、实验程序1.在2mL离心管中，加入500μl的2×CTAB和20 μlβ-巯基乙醇, 65?预热。
2嫩的组织材料1-2g,用蒸馏水冲洗干净，再用灭菌ddHO冲洗2次，放入经液氮预冷的研2钵中，加入液氮研磨至粉末状，用干净的灭菌不锈钢勺转移粉末到预热的离心管中，总体积达到1mL混匀后置65?水浴中保温45-60min，并不时轻轻转动试管。
注:冻存材料直接研磨，绝对不能化冻。
而且粉末应在化冻前转移否则内源性Dnase有可能降解基因组DNA。
3加等体积的氯仿/异戊醇，轻轻地颠倒混匀，室温下10 000rpm离心10 min，移上清至另一新管中。
4向管中加入1/100体积的RNase A溶液，置37?20-30min。
5加入2倍体积的100%乙醇或0.7倍体积异丙醇，会出现絮状沉淀，-20?放置30 min或-80?放置10min，12 000rpm离心10-15min回收DNA沉淀。
6 用70%乙醇清洗沉淀两次，吹干后溶于适量的灭菌ddH2O中。
高盐CTAB法提取植物基因组DNA
改良的高盐CTAB法提取植物基因组DNA1 取0.5～1.0克新鲜组织（经洗涤去除杂物）在液氮下研碎，装入50ml离心管中（可高速离心的）加入20ml Extraction Buffer (100mM Tris-HCL PH8.00.35M 山梨醇, 5mM EDTA PH8.0, 1% 2－巯基乙醇用之前加)并置于冰上10分钟。
2 在4度下10000g离心10分钟。
小心去上清，然后用20ml Extraction Buffer 溶解沉淀两次并离心,。
溶解混合时用上下颠倒最佳。
（溶解沉淀一次也可以，两次可能损失的DNA要多一些）。
3 去除上清并用5ml Extraction Buffer 悬浮沉淀，加入3.5ml High Salt CTABBuffer(50mM Tris-HCl PH 8.0, 4M NaCL,1.8% CTAB ,25mM EDTA PH 8.0), 2% pvp和0.3ml 30%Sarkosyl 在55摄氏度下温育60～90分钟。
4 加入等体积的氯仿：异戊醇（24：1），轻摇15分钟，然后离心10分钟（10000g），转移上清于一个新的离心管中。
5 加入2/3体积预冷的混合有1/10体积的乙酸钠的异丙醇，上下颠倒5分钟。
4度10000g离心20分钟。
6 去上清并用冷的75％乙醇洗。
去除乙醇在空气下干燥DNA并用200ul TE溶解。
DNA的纯化:1加入5ul RNase（10mg/ml）在37摄氏度下温育40分钟。
2转移溶液至一个1.5ml 离心管，并用等体积的酚氯仿抽提。
室温下用最大转速离心10分钟（最好13000以上）。
3转上清至一个新的1.5ml管，并用等体积的预冷的100％氯仿沉淀。
室温下用最大转速离心10分钟。
4转上清至新的1.5ml管，用两倍体积的冷的乙醇（混合1/10体积的乙酸钠）沉淀DNA然后放于-20度30分钟。
用最大转速沉淀DNA15分钟。
5用75％冷的乙醇洗并在空气中干燥。
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实验一 CTAB法提取植物基因组DNA
实验目的：
学习从植物组织中（幼叶）提取基因组DNA的基本原理和方法。
实验原理：
采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类（尤其是氧化酶类），其对DNA的抽提产生不利的影响，所以在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂（如巯基乙醇）以降低这些酶类的活性。
在液氮中研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。
CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜并与核酸形成复合物。
该复合物在高盐的溶液中（>0.7mol/L NaCl）是可溶的，通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀（CTAB能溶于乙醇）即可使核酸分离出来。
CTAB溶液在低于15度时会形成沉淀洗出，因此再将其加入冰冷的植物材料中之前必须预热（65度），且离心温度不要低于15度。
实验步骤：
1、取幼嫩的植物叶片（3-5g）剪碎液氮研磨成粉，转入1.5ml离心管内。
加入等体积的65℃预热的DNA提取缓冲液置于65℃的恒温水浴摇床上1-2h(1.5h)。
2、加入等体积的氯仿：异戊醇(24：1)，轻轻上下颠倒5分钟，静置5分钟，之后于12000rpm 离心10分钟。
3、吸取上层水相，重复步骤2一次。
4、吸取上层水相，加入预冷2/3体积的异丙醇，轻缓颠倒2分钟并置-20℃冰箱内10min，待DNA沉淀后于12000rpm离心收集，收集的DNA于70%乙醇中洗2-3次。
将弃去乙醇风干后的DNA加适量水使其溶解。
5、待DNA完全溶解后加入1-2μl不含RNAaseA（10mg/ml），37℃保温1h以除去DNA中的RNA。
6、于Eppendorf管中加入1mL氯仿：异戊醇（24：1）轻轻上下颠倒10分钟后10000rpm 离心10分钟。
7、吸取上层水相并先后加入1/10体积的3M醋酸钠及2倍总体积的预冷的无水乙醇，接着置于-20℃冰箱，10分钟后10000rpm离心10分钟，弃去无水乙醇，加入70％乙醇洗涤2-3次，风干，最后将DNA溶于适量（200-500μl） TE中。
8、待DNA完全溶解后进行1%琼脂糖凝胶电泳，检查DNA的质量并据已知的DNA 分子量标准估计其浓度。
调整浓度后的DNA置于-20℃备用。
实验试剂：
1、1M Tris-HCL（pH8.0）
121.1g Tris溶于800ml无菌水中，加浓HCL调pH到8.0，定容至1L，高压灭菌。
2、0.5M EDTA（pH8.0）
O溶于800ml无菌水中，需用磁力搅拌器剧烈搅动，用NaOH调pH值186.1g EDTA-Na·2H
2
到8.0（约20g），定容至1L，高压灭菌。
3、3.5M NaCL
204.75g NaCL溶于1L无菌水中，高压灭菌。
4、10% CTAB溶液
10gCTAB溶于80ml无菌水中，定容至100mL，高压灭菌。
5、DNA提取液（500ml）
6、氯仿-异戊醇
7、RNAaseA
8、异丙醇
9、无水乙醇
10、3M醋酸钠
11、1×TE缓冲液
实验仪器：液氮罐、1.5ml离心管、1.5ml离心管架、恒温水浴摇床、枪及枪头（1ml和200ul）、离
心机（转速可调至4000rpm和10000rpm）、剪刀
注意事项
（1）叶片磨得越细越好。
（2）移液器的使用。
（3）由于植物细胞中含有大量的DNA酶，因此，除在抽提液中加入EDTA抑制酶的活性外，第一步的操作应迅速，以免组织解冻，导致细胞裂解，释放出DNA酶，使DNA降解。