植物组织DNA的提取和鉴定
植物的DNA提取与鉴定
电泳结束后，取出凝胶板，在波长为254nm的凝胶成像系统下，观察电泳图谱，如果电泳条带清晰(如果EB染色看到桔黄色荧光条带，GV染色则看到绿色荧光条带)，将凝胶照相。根据标准DNA的电泳图谱，可以得知样品DNA的分子大小。
（3） 再加两倍体积的预冷异丙醇，混匀静止10分钟以上，在4℃下10000rpm/分钟离心10分钟后，弃上清。
（4） 用600μL70%乙醇洗涤沉淀，重复一次，在室温下倒置晾干。
（5）沉淀用TE溶液溶解DNA，再加入RNase至终浓度50μg/mL，在37℃下保温半小时，将DNA样品放入冰箱保存。
Ⅱ 植物DNA 纯度的鉴定——紫外分光光度计法
一、原理
由于核酸中的碱基都具有共轭双键，所以具有紫外光吸收性质。核酸在紫外光谱区有一条典型的吸收曲线，其吸收高峰在260nm处，吸收低谷在230nm处。蛋白质在紫外区的吸收高峰在280nm处，所以核酸的紫外吸收光谱数据是鉴定核酸的重要依据之一。但紫外法不能区分DNA和RNA，只能用来鉴定核酸的纯度和含量。
在DNA提取过程中必须始终注意以下几个关键问题：
（1）DNA的二级结构和双链易受多种因素（如强酸、强碱、加热、低盐浓度、有机溶剂、酰胺类、尿素等）的影响引起双链解开，即“变性”，因此抽提时避免使用变性的条件。
（2）抑制内外源DNase的活力。DNase就象一把刀，它能把大分子的DNA切成碎片，所以要加以杜绝，现可以通过多种途径来做到这一点：a、低温操作；b、调节pH，使偏碱（pH8.0）；c、抽提液中加表面活性剂；d、加螯合剂（EDTA）除去酶的铺助因子（Mg2+），使酶活性丧失。
纯度鉴定时，需测定在230、260和280nm处的消光值，经验数据表明，
植物基因组DNA的提取及分析
植物基因组DNA的提取及分析一、植物基因组DNA提取的步骤：1.样本的准备：从植物中选择健康和新鲜的组织样本，如叶片、茎、根等。
样本选择要避免含有大量的绒毛、叶色不正常等因素的部位。
2.细胞破碎：将样本放入液氮中迅速冷冻，然后用研钵和研钉对样本进行研磨，直至样本完全破碎。
3.细胞裂解：将研磨的样本加入裂解缓冲液，边振荡边研磨使样本均匀混合。
4.蛋白质去除：使用酚/氯仿提取法去除蛋白质。
加入等体积的酚/氯仿/异丙醇混合液，轻轻混合，然后离心离心管以分离上清和下层。
5.DNA沉淀：将上清转移至新的离心管中，加入等体积的冷乙醇进行DNA沉淀。
静置一段时间后，离心离心管以沉淀DNA。
6.DNA洗涤：将DNA沉淀物用70%乙醇洗涤一至两次，去除残留的盐和其他杂质。
7.DNA溶解：用适量的稳定缓冲液溶解DNA，使其达到一定浓度并避免降解。
二、植物基因组DNA分析的方法：1.PCR扩增：PCR技术可以通过放大DNA片段来研究特定基因或DNA 序列。
首先选择适当的引物，然后将DNA样本与引物、核酸酶、dNTPs等反应液混合，进行多次循环的变温扩增反应。
2.聚丙烯酰胺凝胶电泳：将PCR扩增的产物与DNA分子量标记物置于聚丙烯酰胺凝胶中，然后进行电泳。
电泳结束后，通过紫外线照射或染色剂染色，观察电泳图谱，可以得到DNA片段的大小和数量。
3.酶切电泳：使用限制性内切酶切割DNA片段，然后将切割后的DNA 片段进行电泳分析。
根据DNA片段的大小和相对迁移速度，可以进行DNA 的分析和比较。
4.南方杂交：将DNA样本与标记了放射性同位素或荧光染料的DNA探针进行杂交反应。
通过探针与目标DNA片段的互补配对，可以检测目标DNA的存在和数量。
5.DNA测序：通过测序技术获得DNA序列信息，可以揭示基因组的结构和功能。
通过以上方法，我们可以提取和分析植物基因组DNA，更好地了解植物基因组的组成和功能，为植物的遗传改良和研究提供重要的信息。
实验一 植物组织DNA的提取与琼脂糖凝胶电泳检测
实验一植物组织DNA的提取与琼脂糖凝胶电泳检测一、实验目的（1）掌握用氯仿-异戊醇-核糖核酸酶法提取植物组织DNA的基本操作。
（2）掌握植物基因组DNA的提取方法。
（3）了解琼脂糖凝胶电泳检测核酸的原理和操作。
二、实验原理利用液氮对植物组织冻干脆化进行研磨，从而破碎细胞。
细胞提取液能溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使蛋白质变性而沉淀下来，核裂解液能使细胞核裂解释放DNA。
EDTA 抑制 DNA 酶的活性，氯仿、异戊醇能使蛋白质乳化沉淀去除蛋白，得到的 DNA 溶液经乙醇沉淀。
琼脂糖凝胶电泳是用于分离、鉴定和提纯DNA片段的标准方法。
琼脂糖是一种线性多糖聚合物。
浓度越高，空隙越小，其分辨能力就越强。
DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。
在一定电场强度下，DNA分子的迁移速度与相对分子质量的对数成反比。
溴化乙锭（EB）可嵌入DNA分子碱基对间形成荧光络合物，经紫外线照射后，可分出不同的区带，达到分离的目的。
三、材料、器材及药品1．材料玉米或水稻幼嫩的叶片2．药品十六烷基三乙基溴化铵（CTAB）、山梨醇、三羟甲基氨基甲烷（Tris）、盐酸（HCl）、乙二胺四乙酸（EDTA）、十二烷基肌氨酸钠、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、液氮、氯仿、异戊醇、异丙醇、乙酸钠、无水乙醇、RNA酶（RNase A）、乙酸、硼酸、溴酚蓝、溴化乙锭等。
3．器材研钵、研杵、玻璃棒、50mL离心管、1.5mL离心管、水浴锅、离心机、—20℃冰箱、高压灭菌锅、超净工作台、微量移液器及吸头、电泳仪、电泳槽及灌胶模具等。
4．试剂配制（1）DNA提取缓冲液：0.35mol/L山梨醇，0.1mol/L Tris-HCl（pH7.5）（用前需灭菌）。
（2）核裂解缓冲液：0．2mol/L Tris-HCl（pH7.5），0．05mol/L EDTA，2mol/L NaCl，2%CTAB（用前需灭菌）。
（3）5%十二烷基肌氨酸钠（用前需灭菌）。
植物基因组DNA的提取与检测
生命科学学院专业生物技术 2016级生技班666组姓名余梓棋同实验者黄剑宇黄少凯 2018年 5 月 8日题目：植物基因组DNA的提取与检测一．实验目的:1.了解真核生物基因组DNA提取的一般原理；2.掌握基因组DNA提取的方法和步骤。
二．实验原理1.液氮研磨：液氮能迅速将植物组织温度降到零度以下，使组织细胞变得脆而易碎，此时对植物组织进行研磨，能大大提高研磨的效率，植物组织迅速变为粉末状，增大表面积，提高提取植物DNA的效率。
2.SDS等离子型表面活性剂处理：SDS等离子型表面活性剂能溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使核蛋白解聚，从而使DNA游离出来，且使DNA保持溶解溶液状态，易于分离3.苯酚和氯仿处理：苯酚和氯仿等有机溶剂能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质；4.异丙醇处理：上清液中加入异丙醇使DNA沉淀，离心后DNA沉淀于离心管底部，便于移去提取液。
而后将沉淀DNA溶于TE缓冲液中，即得植物基因组DNA溶液；5.DNA的琼脂糖凝胶电泳鉴定：带电荷的物质，在电场中的趋向运动称为电泳。
DNA的琼脂糖凝胶电泳可以分离长度为200bp至近50kb的DNA分子。
DNA的迁移率（U）的对数与凝胶浓度（T）之间存在反平行线性关系。
因此，要有效地分离不同大小的DNA片生命科学学院专业生物技术 2016级生技班666组姓名余梓棋同实验者黄剑宇黄少凯 2018年 5 月 8日段，选用适当的琼脂糖凝胶浓度是非常重要的。
三．实验材料及设备1.实验材料：新鲜的植物幼嫩叶片2.实验仪器：（1）研磨皿，10、100、1000μL取液器各一支，台式高速离心机，漩涡器；（2）电泳仪，电泳槽，样品槽模板（梳子），有机玻璃内槽，水平仪，取液器，微波炉，凝胶成像系统。
3.实验试剂：（1）植物DNA提取a.细胞提取液：100mmol/L Tris-HCl, pH8.0, 5mmol/L EDTA,500mmol/L NaCl, 1.25% SDS，1%β-巯基乙醇（去除酚类）；b.氯仿:异戊醇（24:1）；c.其它试剂：液氮、无水乙醇、 TE缓冲液、异丙醇、洗涤缓冲液；作用：氯仿可使蛋白质变性，有助于液相与有机相的分离。
植物dna提取方法
植物dna提取方法
提取植物的DNA可以通过以下几个步骤：
1. 植物材料准备：选择新鲜的植物组织，如叶片、茎、根或花朵。
使用刀片将组织切碎，将其放入离心管或试管中。
2. 细胞破碎：可以使用物理或化学方法将细胞破碎，以释放DNA。
常用的方法有研钵法、冻融法或特定的细胞破碎缓冲液。
3. DNA溶出：将细胞破碎液加入含有溶出缓冲液的试管中，使DNA从细胞中溶出。
溶出缓冲液通常含有EDTA、盐和洗涤剂等成分。
4. 蛋白质消化：加入蛋白酶K等蛋白质消化酶，去除DNA溶液中的蛋白质。
蛋白酶K可以在高温下活性化，并能降解多种蛋白质。
5. DNA沉淀：加入等体积的冷乙醇或异丙醇，使DNA分子沉淀。
可以通过离心沉淀DNA，并将上清液倒掉。
6. DNA纯化：用70%的乙醇洗涤DNA沉淀物，以去除杂质。
然后用适量的缓冲液重新溶解DNA。
7. DNA检测：可以使用紫外光谱仪或凝胶电泳等方法检测DNA的浓度和质量。
注意事项：
- 实验操作时应注意无菌条件，以避免污染。
- 建议在化学通风橱等无菌环境下进行DNA提取。
- 每个步骤中所用试剂和设备应事先消毒或经过无菌处理。
- DNA提取过程中应尽量避免DNA的降解，可以采取低温、迅速和轻柔的操作方式。
植物组织中dna的提取及鉴定实验报告
植物组织中dna的提取及鉴定实验报告实验目的：1、了解植物组织中DNA的提取和鉴定方法；2、学习DNA凝胶电泳和显色的实验操作；3、掌握实验数据处理和分析方法。
实验原理：DNA提取：DNA提取是从生物体组织中分离出DNA分子的过程。
植物组织的DNA提取主要采用CTAB法，其基本步骤如下：1. 将植物样本冷冻在液氮或在-80℃的冰箱中保存。
2. 取出植物组织并磨碎，用盐水淋洗去表面的杂质。
3. 加入抑制物质，如PVP（聚乙烯吡咯烷酮）和β-多聚糖。
4. 加入CTAB提取缓冲液，破解细胞壁并溶解细胞质。
5. 加入丙酮使DNA沉淀。
6. 安排离心管，离心沉淀。
7. 用乙醇洗涤、重悬DNA。
DNA鉴定：鉴定常用的方法包括电泳、吸光度法、荧光PCR 等。
本实验采用琼脂糖凝胶电泳法，基本步骤如下：1. 制备琼脂糖凝胶。
2. 调制电泳缓冲液。
3. 加载DNA样品。
4. 进行电泳。
5. 显色染色。
实验材料：1、植物样本（如玉米叶片、小麦胚芽等）2、CTAB提取缓冲液（含CTAB，EDTA，NaCl，Tris-HCl等）3、琼脂糖4、电泳缓冲液5、DNA标准品6、DNA分子量标记实验步骤：1. 取少量植物样本，将其用盐水淋洗，除去表面污垢和杂质。
2. 装入离心管并加入CTAB提取缓冲液，放在60℃水浴中孵育20分钟。
3. 加入冷丙酮沉淀DNA，离心5分钟。
4. 加入70%乙醇，洗涤DNA，离心5分钟。
5. 将DNA重悬于1 x TE缓冲液中，放在冰箱中储存。
6. 取一定体积的DNA样品，加入适量电泳缓冲液稀释。
7. 制备含DNA分子量标记的DNA样品，混合后加入琼脂糖凝胶槽中。
8. 加载DNA样品，与分子量标记一起进行琼脂糖凝胶电泳。
9. 进行电泳10-20分钟，直至DNA分子离子迁移完毕。
10. 取出琼脂糖凝胶，进行染色与分析。
实验结果：通过电泳可见DNA样品的带状图谱，观察带状图谱的大小、稠密程度、条带间距和条带的清晰度等特征，进而分析DNA样品的品质和纯度。
植物和动物的核酸dna和rna提取方法
提取植物和动物的核酸DNA和RNA是生物学研究中的重要步骤，它们可以帮助科学家们更深入地了解生物的遗传信息和基因表达。
本文将介绍植物和动物核酸DNA和RNA的提取方法，让读者对这一过程有一个清晰的认识。
一、植物核酸DNA提取方法1. 细胞破碎：需要将植物组织破碎，以释放细胞内的DNA。
这可以通过磨粉或切碎的方法来实现。
2. 细胞裂解：接下来，使用裂解缓冲液来裂解细胞膜和细胞壁，释放DNA分子。
裂解缓冲液的配方可以根据不同植物的特性进行调整。
3. 蛋白质沉淀：通过向裂解液中加入溴化苯酚等物质，可以沉淀掉大部分蛋白质，使得DNA分子得以分离。
4. 乙醇沉淀：将裂解液中的DNA用乙醇沉淀，这样可以将DNA分子从溶液中提取出来。
5. 溶解和纯化：将沉淀的DNA分子溶解在适当的缓冲液中，并进行进一步的纯化和浓缩处理，得到纯净的DNA溶液。
二、植物核酸RNA提取方法1. 细胞破碎：与DNA提取类似，首先需要将植物组织破碎，以释放细胞内的RNA。
2. 细胞裂解：使用特制的裂解缓冲液来裂解细胞膜和细胞壁，释放RNA分子。
不同植物组织的RNA特性可能有所不同，需要根据具体情况进行优化。
3. 蛋白酶处理：加入蛋白酶来降解蛋白质，使RNA得以更好地纯化。
4. 酚-氯仿提取：利用酚-氯仿混合液可以有效地将RNA从裂解液中提取出来，与DNA提取类似。
5. 洗涤和纯化：对得到的RNA进行洗涤和纯化处理，得到纯净的RNA溶液。
三、动物核酸DNA提取方法1. 组织裂解：将动物组织进行细胞破碎，释放细胞内的DNA。
2. 细胞裂解：使用特制的裂解缓冲液来裂解细胞膜，释放DNA分子。
对于硬质组织，可能需要较强的裂解条件。
3. 蛋白酶处理：加入蛋白酶来降解蛋白质，使DNA得以更好地纯化。
4. 酚-氯仿提取：利用酚-氯仿混合液可以有效地将DNA从裂解液中提取出来，与植物DNA提取类似。
5. 溶解和纯化：对得到的DNA进行溶解和纯化处理，得到纯净的DNA溶液。
分子鉴定植物流程
分子鉴定植物流程好的呀，那咱们就开始聊聊分子鉴定植物的流程吧。
一、取样。
植物分子鉴定的第一步当然就是取样啦。
这就像是要认识一个新朋友，得先找到这个朋友在哪里一样。
你得从你想要鉴定的植物上取一部分组织下来。
这个组织呢，可以是叶片呀，茎段呀，甚至是根的一小部分。
不过要注意哦，取样的时候要尽量保证取到的组织是健康的，没有病虫害的。
如果取到了生病或者被虫子咬得乱七八糟的组织，就像你要认识一个新朋友，结果找到的是个病恹恹的或者被欺负得很惨的人，那肯定是不太好的啦。
而且取样的工具也要干净，避免把其他杂质或者微生物带到样品里去，就像你去见新朋友，可不能带着一身脏东西去呀。
二、提取DNA。
取好样之后呢，就该提取DNA啦。
这可是个很神奇的过程呢。
你要把植物细胞里的DNA给弄出来，就像是从一个小宝藏盒子里把宝藏取出来一样。
这个过程有好多小步骤。
首先得把植物组织弄碎，把细胞打破，这样DNA才能跑出来呀。
可以用研磨的方法，就像把东西磨成粉一样，不过要很小心，可不能把DNA也给磨坏了。
然后呢，要加一些特殊的溶液，这些溶液就像是魔法药水一样，能把DNA和其他东西分开。
最后经过离心等操作，就能得到比较纯净的DNA啦。
这时候的DNA就像一个小精灵，静静地待在溶液里，等着我们去研究它呢。
三、选择合适的分子标记。
有了DNA之后，我们得选择合适的分子标记来鉴定植物。
这就好比给这个植物找一个独特的标签。
比如说，有一些常见的分子标记像SSR、RAPD之类的。
不同的植物可能适合不同的分子标记。
这就需要我们根据植物的种类、我们想要得到的鉴定结果的准确性等因素来选择。
如果选错了分子标记，就像给植物贴错了标签，那可就会得出错误的结果啦。
这就像是你把一个男生的名字标签贴到了女生身上，那不是乱套了嘛。
四、进行PCR扩增。
选好分子标记之后，就进入PCR扩增这个环节啦。
PCR扩增就像是一个复印机，不过它复印的是DNA。
它能把我们想要研究的那部分DNA大量地复制出来。
实验1植物基因组DNA的提取
实验1 转基因植物PCR 检测一、植物DNA 的提取技术(CTAB 法)一、实验目的1.掌握用CTAB 法提取植物总DNA 的方法和基本原理。
2.学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA 抽提方法。
二、原理CTAB 法[十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide ，简称为CTAB)]是一种快速简便的提取植物总DNA 的方法。
通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，然后加入CTAB ，CTAB 是离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使核酸(DNA 、RNA)得以游离出来。
再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA 、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。
上清液中加入无水乙醇使DNA 沉淀，沉淀DNA 溶于TE 溶液中，即得植物总DNA 溶液。
三、实验材料大豆幼苗[材料的采集与保存对提取DNA 的产量和质量有很大影响。
通常应尽可能采集新鲜、幼嫩的组织材料，采集过程中应尽可能保持组织材料所含的水分。
通常的做法是取样时立即用浸湿的纱布包裹采集到的组织材料，放置在带有冷藏功能的采集箱中，这样通常使组织材料在3-5d 内仍然保持新鲜。
野外远距离采集样本时，在可能的条件下应冷冻保存（如放置于液氮中）；当不具备冷冻条件时，最好用盛有无水CaSO4的瓶子分别保存，使其迅速干燥，这种方法可将材料保存数月，返回后应尽快进行DNA 的提取工作。
那些具有大量次生代谢产物（如单宁、酚类、醌类等）的植物材料，应尽可能采集幼嫩组织。
]四、试剂4.1 CTAB 提取缓冲液：100 mmol/L Tris-HCl （pH8.0），20 mmol/L EDTA-Na 2，1.4mol/L NaCl （如表1），2% CTAB ，使用前加入0.1%（V/V ）的β-巯基乙醇。
表1 CTAB 提取缓冲液配制4.2 TE 缓冲液：10mmol/L Tris-HCl, 1mM EDTA （ pH8.0）。
dna的粗提取实验报告
dna的粗提取实验报告DNA的粗提取实验报告引言DNA（脱氧核糖核酸）是生物体中负责遗传信息传递的分子，它的提取是进行分子生物学实验的基础步骤之一。
本实验旨在通过简单的方法提取DNA，并观察提取效果。
材料与方法材料：- 植物组织（如洋葱、豆芽等）- 高渗盐溶液（含有盐分的溶液，如食盐溶液）- 咖啡过滤纸- 酒精（酒精浓度为70%）- 水方法：1. 将植物组织切碎，使细胞破裂，释放DNA。
2. 将切碎的植物组织放入一个容器中，加入高渗盐溶液，搅拌均匀。
3. 将搅拌后的溶液过滤，使细胞碎片和其他杂质被滤掉，得到澄清的液体。
4. 将澄清的液体倒入一个试管中，加入等量的酒精，并缓慢倾斜试管，使酒精与液体缓慢混合。
5. 观察酒精与液体的交界面，可以看到白色的DNA沉淀。
6. 使用酒精漂浮在DNA沉淀上方的方法，将DNA转移到另一个容器中。
7. 加入适量的水，溶解DNA。
结果与讨论通过上述方法，我们成功地从植物组织中提取到了DNA。
观察到的白色沉淀物就是DNA，其形状呈线状或颗粒状。
实验过程中，我们注意到以下几个现象：1. 细胞破裂：切碎植物组织的过程中，细胞膜被破坏，使DNA从细胞内释放出来。
这一步骤的重要性在于提供了DNA的来源。
2. 高渗盐溶液：高渗盐溶液的作用是破坏细胞膜和核膜，使DNA从细胞内释放出来。
高渗盐溶液中含有盐分，可以改变细胞内外的渗透压，进而破坏细胞膜和核膜。
3. 过滤：通过过滤，我们可以去除细胞碎片和其他杂质，得到澄清的液体。
这一步骤的目的是减少后续操作中DNA沉淀的杂质。
4. 酒精沉淀：加入酒精后，DNA会从溶液中沉淀出来。
酒精与溶液的混合过程中，DNA会聚集在交界面上形成白色沉淀物。
这是因为DNA在酒精中不溶，而且比较重，所以会沉淀下来。
5. DNA的溶解：将DNA从酒精中转移到水中后，加入适量的水，使DNA溶解。
DNA在水中溶解后，呈现出透明的溶液。
本实验采用的是粗提取方法，所得到的DNA并不纯净。
植物基因组DNA的提取和定性、定量分析范文
《分子生物学》实验报告实验一植物基因组DNA的提取及其定性、定量分析【实验目的】通过本实验学习利用CTAB法从植物组织中提取DNA并通过琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度法对DNA进行定性定量分析。
【实验原理】CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)是一种阳离子型去污剂，可溶解细胞膜，在高离子强度下(大于0.7 M NaCl)，与蛋白和中性多糖形成复合物沉淀出来。
利用液氮对植物组织进行研磨，从而破碎细胞。
然后加入CTAB缓冲液将DNA溶解出来，再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白，最后经乙醇沉淀得到DNA。
琼脂糖凝胶电泳是分离和纯化DNA片段的常用技术。
把DNA样品加入到一块包含电解质的多孔支持介质(琼脂糖凝胶)的样品孔中，并置于静电场上。
DNA分子在高于等电点的pH 溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。
由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此，在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构型。
DNA分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系，分子量小的DNA 分子比分子量大的DNA分子迁移速率快，迁移距离远，由此得到分离。
凝胶电泳也可以分离相对分子质量相同，但构型不同的DNA分子，超螺旋质粒DNA(cccDNA)泳动最快，其次为线状DNA(L DNA)，最慢的为开环质粒DNA(ocDNA)。
核酸分子(DNA或RNA)由于含有嘌呤环和嘧啶环的共轭双键，在260 nm波长处有特异的紫外吸收峰，其吸收强度与核酸的浓度成正比，这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础。
1 OD260相当于dsDNA 50 μg/mL，ssDNA 33 μg/mL和ssR NA 40 μg/mL。
可以此来计算核酸样品的浓度。
紫外分光光度法不但能确定核酸的浓度，还可通过测定260 nm和280 nm 的紫外线吸收值的比值(A260/A280)估计核酸的纯度，若DNA的A260/A280比值高于2.0，则可能有RNA污染，低于1.8则有蛋白质污染。
植物基因组dna的提取、扩增及电泳鉴定
从植物DNA中找到奥妙：提取、扩增与电泳鉴定植物基因组的研究是揭示植物遗传特性以及开展植物基础科学研究的重要手段。
在开展植物DNA研究前，需要实施植物基因组DNA的提取、扩增及电泳鉴定等步骤。
以下是生物科技领域的一些灵活和有趣的技巧，可以助您成功进行植物基因组研究。
一、提取植物基因组DNA1. 细胞破碎法植物组织通常蕴含大量的细胞壁，因此破碎细胞壁是提取植物基因组DNA的一个重要步骤。
通过粉碎植物组织，然后用试剂将细胞排出来即可提取发现植物DNA，从而用于后续步骤。
2. CTAB法这是一种常用的植物基因组DNA提取方法，包括使用CTAB（己基三甲基溴化铵）试剂破解细胞壁。
CTAB法需前期准备，但提取到的DNA质量均很高。
二、扩增植物基因组DNAPCR（聚合酶链反应）是一个非常有用的技术，可使选定DNA序列扩增成百万甚至更多的分子，使它们可用于植物基因组研究。
FBP（前向单一引物PCR）可以用于检测植物基因组单个位点的多态性，这可以用于检测种内个体之间的遗传差异。
三、植物基因组DNA电泳鉴定分子量相似的DNA分子可以通过电泳鉴定分离，因此，DNA电泳成为提纯DNA的主要方式，促进扩大研究样本大小范围的同时又允许研究DNA随时间变化的结果。
电泳是植物DNA研究中必不可少的步骤。
考虑到复杂的操作流程和数据分析过程，实施植物基因组研究的关键是建立一个可重复和可靠的实验流程。
尽管一些方法已经得到确定，但基础技术并没有发展完全需要依靠科研者们的努力和实践。
让我们一起研究植物DNA的提取、扩增及电泳鉴定，加深紧密的交流与学习，与令我们感到兴奋的植物DNA世界同在！。
分子实验-植物DNA提取
0 1 实验原理
1、破壁：在液氮中对植物组织进行研磨，破碎细胞。并减少 研磨过程中各种酶类的作用。
2、溶解：CTAB离子型表面活性剂能溶解膜蛋白而破坏细胞膜， 使核蛋白解聚，从而使DNA游离出来。
3、分离：苯酚和氯仿等有机溶剂能使蛋白质变性，并使抽提 液分相，因核酸水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去 细胞碎片和大部分蛋白质。
三、主要仪器及耗材： 研钵及研钵棒、水浴锅、移液枪及配套枪头、2.0ml离心管、 离心机、 电子天平、通风橱、冰箱、电泳仪、 凝胶成像系统、超微量核酸蛋白测 定仪系统。
04
PART FORE
操作步骤
0 4 操作步骤
1.配置试剂： （1）10 ml 4% CTAB提取缓冲液
CTAB NaCl 1 M Tris- HCl(pH 8.0) 0.5 mol/L EDTA(pH 8. 0) ddH2O
(二)琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA:
1、将溶液加入样品槽时，勿划破或戳破加样孔，勿带入气泡; 2、使用干净的电泳溶液。
THANKS
心管，使之充分作用15 min。
0 4 操作步骤
10.重复第7步骤。 11.在上清液中，加入2倍体积预冷的无水乙醇，轻柔颠倒，充分混匀，
室温放置 10min。 12.12 000 r/min 离心 5 min，弃上清，用70%的乙醇洗涤沉淀2次。 13.室温挥发乙醇5-10min，加入适量的ddH2O溶解。 14.电泳检测。取3 μL提取的植物总DNA，加入 1μL 6x Loading buffer，
0.4g 1.64g 20ml 0.8ml 7.2ml
（2）10ml 70%乙醇
无水乙醇
7ml
水
3ml
0 4 操作步骤
植物提取dna的方法
植物提取dna的方法
植物提取DNA的方法通常包括以下步骤：
1. 样品收集：选择新鲜的植物组织（如叶片、根部、种子等），避免使用死亡或腐烂的组织。
2. 组织破碎：将植物组织切碎或研磨，以释放DNA。
可以使用刀片、搅拌器、搅拌器研磨器等工具。
3. 细胞破裂：将组织样品置于研磨缓冲液中，并使用低温（如液氮）或高温（如加热至95C）进行热处理，破坏细胞壁以释放DNA。
4. 清理组织混合物：将组织破碎液通过滤纸等过滤，除掉固体残渣，获得纯净的液体样品。
5. 提取DNA：使用DNA提取试剂盒或自制的DNA提取缓冲液，根据试剂盒说明书或简单的化学反应步骤，将DNA从提取液中分离出来。
6. 纯化DNA：通过酒精沉淀、洗涤和干燥等步骤，去除可能存在的杂质和污染物，提高DNA的纯度和浓度。
7. DNA定量和质量检测：使用紫外吸收光度计或荧光探针等方法，测量提取得
到的DNA的浓度和纯度，确保其适合后续实验应用。
需要注意的是，不同植物物种的DNA提取方法可能存在差异，具体步骤和试剂使用可以根据研究目的和样品特点进行调整和优化。
同样，商业化的DNA提取试剂盒也提供了一种方便和快速的方法，避免了自制试剂的繁琐操作和优化步骤。
实验一`植物DNA的提取及凝胶电泳分析
实验一、植物DNA的提取及凝胶电泳分析一、植物DNA的提取原理利用基因组DNA较长的特性，可以将其于细胞器或质粒等小分子DNA分离。
当加入一定量的异丙醇或乙醇，基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团漂浮其中，可用玻璃棒将其取出，而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部，从而达到分离提取的目的。
分离基因组DNA应尽量在温和的条件下操作。
二、实验试剂CTAB 氯仿乙戊醇乙醇异丙醇酚NaAc Tris碱EDTA RnaseANaCl等三、操作步骤（一）简易提取1.在50ml带盖离心管（放在-20度预冷）中加入20ml提取缓冲液I，60℃水浴预热。
2.水稻幼苗或叶子5~10g，剪碎，在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中，剧烈摇动混匀，60℃水浴保温30~60分钟（时间长，DNA产量高），不时摇动。
3.加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液，颠倒混匀（需带手套，防止损伤皮肤），室温下静止5~10分钟，使水相和有机相分层（必要时可重新混匀）。
4.室温下5000rpm离心5分钟。
5.仔细移取上清液至另一50ml离心管，加入一倍体积异丙醇，混匀，室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。
6.在1.5ml eppendorf 管中加入1ml TE。
用钩状玻璃棒捞出DNA絮团，在干净吸水纸上吸干，转入含TE的离心管中，DNA很快溶解于TE。
7.如DNA不形成絮状沉淀，则可用5000rpm离心5分钟，再将沉淀移入TE管中。
这样收集的沉淀，往往难溶解于TE，可在60℃水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。
8.将DNA溶液3000rpm离心5分钟，上清液倒入干净的5ml离心管。
9.加入5μlRNaseA（10μg/μl）,37℃10分钟，除去RNA（RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。
10.加入1/10体积的3mol/L NaAc 及2×体积的冰乙醇，混匀，-20℃放置20分钟左右，使DNA形成絮状沉淀。
【2024版】[课件]实验七-植物DNA的提取与纯度鉴定PPT
![【2024版】[课件]实验七-植物DNA的提取与纯度鉴定PPT](https://img.taocdn.com/s3/m/ec44a4e28662caaedd3383c4bb4cf7ec4bfeb660.png)
提醒 不同种类或同一种类的不同组织因其细
胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差 异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照 文献和经验建立相应的提取方法，以获得可 用的DNA大分子，尤其是组织中的多糖和酚 类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的 抑制作用，因此用富含这类物质的材料提取 基因组DNA时，应考虑除去多糖和酚类物质。
CTAB法实验原理
• 离子型表面活性剂如十六烷基三甲基溴化铵 (hexadyltrimethyl ammomum bromide，简称为 CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate， 简称SDS)等可以有效裂解植物细胞壁，且与DNA 形成可溶于高盐溶液的复合物，当降低盐浓度时 DNA又可沉淀析出，从而与蛋白质及多糖等分离。
实验步骤（2）
• 3、 最后一次加液氮磨样后，立即加入预热的CTAB抽提 液，每克叶片加入8 mL CTAB抽提液，再加入160 L 2－ 巯基乙醇（2-Me）（终浓度2％（v/v））。继续研磨待 CTAB抽提液溶化后，将研磨液转入50 mL离心管；
• 4、 65℃水浴锅温浴0.5-1小时，每10-20分钟摇动一次离心 管；同时65℃预热CTAB/NaCl； 注意：离心管盖子应轻轻搭在管口，千万不能盖紧， 以防加热使盖子冲出，最好离心管壁和盖子同时做好标记。
实验试剂及其配置
4 CTAB/NaCl (10% CTAB, 0.7 M NaCl) （要求配50mL）
•
CTAB
•
NaCl
20 g 8.2 g
• 加入160 mL ddH2O，加热至65℃溶解，补dd H2O定容至200 mL，高压灭菌。
• 注意：此溶液很粘稠，使用时需加热至65℃。
实验8植物组织总DNA的提取
04 结果与数据分析
DNA的检测与鉴定
检测方法
使用紫外分光光度计检测DNA的浓度和纯度，通过观察DNA在260nm和280nm 处的吸光度值，判断DNA的含量和蛋白质污染程度。
鉴定结果
提取得到的DNA样品在紫外分光光度计下显示出明显的吸收峰，说明成功提取出 了DNA。
DNA质量的评估
完整性评估
02
植物基因组DNA相对较大，由多个重复序列和基因组成。
03
通过破碎植物细胞，释放出细胞核中的DNA，再经过一系列的沉淀、洗涤和纯化 步骤，可以获得较纯的植物基因组DNA。
实验步骤概览
1. 准备实验材料和试剂。 2. 选取新鲜的植物组织，清洗并切成小块。 3. 用液氮或预冷的研钵将植物组织研磨成粉末。
干燥
将洗涤干净的DNA沉淀物 进行干燥处理，以便于后 续的溶解与储存。
DNA的溶解与储存
选择合适的溶解方法
根据实验要求选择适当的溶解方法，如水浴溶解、加热溶 解等。
控制溶解条件
确保溶解过程中使用的温度、时间和溶液浓度等条件适宜， 以避免对DNA造成损伤。
储存与保存
将溶解后的DNA溶液进行分装，并选择适当的储存容器和 条件进行保存，确保DNA的稳定性和长期保存。
实验步骤概览
4. 加入缓冲液和酶混合物，破碎细胞 并释放出细胞核。
6. 将上清液转移至新的离心管中，加 入等体积的酚-氯仿混合液，充分混匀。
5. 通过离心分离出细胞核和细胞碎片。
实验步骤概览
7. 通过离心分离出上层水相和 下层有机相。
8. 将上层水相转移至新的离心 管中，加入等体积的异丙醇，
沉淀DNA。
3
释放细胞核
破碎细胞组织后，通过洗涤、离心等方法将细胞 核内的DNA释放出来。
实验一植物组织总DNA的提取及DNA的浓度测定
实验一植物组织总DNA的提取及 DNA的浓度测定
六、注意事项
（1）叶片磨得越细越好。 （2）移液器的使用。 （3）由于植物细胞中含有大量的DNA酶，因此，除 在抽提液中加入EDTA抑制酶的活性外，第一步的操 作应迅速，以免组织解冻，导致细胞裂解，释放出 DNA酶，使DNA降解。
实验一植物组织总DNA的提取及 DNA的浓度测定
•
DNA的吸收光谱峰在260 nm处，据计算，测
定此波长下DNA溶液的OD值，当OD260=1时，双 链DNA含量约为50 µg/ml，据此可用紫外分光光
度计测定溶液中DNA含量。
• 由于蛋白质的吸收峰在280 nm处，在测定 DNA含量时，还常计算OD260/OD280之值，如该值 为1.8-2.0时，认为已达到较高的纯度，如低于此 值，表明其内含杂质较多，可能影响酶切反应。
实验一植物组织总DNA的提取及 DNA的浓度测定
CTAB法流程图
植物材料
裂解液
异丙醇沉淀
液氮研磨
抽提
离心洗涤
DNA溶液
细胞裂解
上层溶液
干燥溶解
实验一植物组织总DNA的提取及 DNA的浓度测定
五、实验方法
1. DNA的提取
(1) 2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。 (2)取少量叶片（约0.2 g）置于研钵中，用液氮磨至粉状； (3) 在液氮挥发将尽而植物组织尚未解冻时迅即加入700 µl的 2%CTAB抽提缓冲液，轻轻搅动； (4) 将磨碎液分倒入1.5 ml的灭菌离心管中，磨碎液的高度约 占管的三分之二； (5) 置于65℃的水浴槽或恒温箱中，每隔10 min轻轻摇动， 40 min后取出；
DNA粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定2 .操作过程⑴操作流程选取材料一破碎细胞，获取含DNA的滤液一去除滤液中的杂质—DNA的析出与鉴定。
⑵材料的选取：选用DNA含量相对较高的生物组织。
⑶破碎细胞①动物细胞：易破碎，可通过吸水破裂。
②植物细胞：加入洗涤剂、食盐后研磨。
⑷除去杂质的方法方法一：利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度的不同，通过调节NaCl溶液的浓度除去溶于和不溶于NaCl溶液中的杂质。
方法二：利用DNA对酶的耐受性，直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10〜15 min,嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质，而不会破坏DNA。
方法三：利用DNA对高温的耐受性，将滤液放在60〜75 ℃的恒温水浴箱中保温10〜15 min,使蛋白质变性沉淀而DNA分子还未变性。
⑸DNA的析出：向处理后的滤液中加入与滤液体积相等的、冷却的酒精溶液体积分数为95%）,静置2〜3 min,溶液中会出现白色丝状物，用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分。
⑹DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。
易错警示（1）本实验不能用哺乳动物成熟红细胞作实验材料，原因是哺乳动物成熟红细胞无细胞核。
可选用鸡血细胞作材料。
⑵实验中两次使用蒸馏水，第一次的目的是使成熟的鸡血细胞涨破释放出DNA,第二次的目的是稀释NaCl溶液，使DNA从溶液中析出。
1 •下图表示以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取与鉴定的操作程序，请分析回答下列问题:(1)步骤一中，向鸡血细胞液中加入并搅拌，可使鸡血细胞破裂。
⑵步骤二中，过滤后收集含有DNA的。
⑶步骤三、四的操作原理是 _______________________________________________________________________________________________________ ；步骤四中，通过向溶液中加入调节NaCl溶液的物质的量浓度至_____________________ mol/L时，DNA 将会析出，过滤去除溶液中的杂质。
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拟南芥T-DNA插入突变体的鉴定
实验目的
1.通过实验学习并掌握用CTAB来提取DNA的方法。
2.了解CTAB的成分及作用。
3.学习PCR的原理并掌握其方法。
4.学习琼脂糖凝胶电泳的原理与方法。
实验原理
植物组织中绝大部分是核DNA，它和组蛋白、非组蛋白结合在一起，以核蛋白（即染色质或染色体）的形式存在于细胞核内。
CTAB(十六烷基三甲基溴化铵，简称CTAB)：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中(0.7mol/L NaCl)是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度(0.3mol/L NaCl)时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇中。
DNA是遗传信息的载体和基本遗传物质，它在遗传变异、代谢调控等方面起着重要作用，是分子生物学和基因工程研究的对象，但无论是研究植物DNA的结构和功能，还是开展外源DNA的转化、转导的研究，首先要做的就是从植物组织中提取天然状态的高分子量的纯化DNA。
T-DNA，转移DNA（transferred DNA ），是根瘤农杆菌Ti质粒中的一段DNA 序列,可以从农杆菌中转移并稳定整合到植物基因组。
人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，获得转基因植株。
除用于转基因以外，T-DNA插入到植物的基因中可引起基因的失活，从而产生基因敲除突变体；T-DNA大多为单拷贝插入，使其利于进行遗传分析。
PCR基本原理：
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)，简称PCR，是一种分子生物学技术，用于在体外快速扩增DNA，具有类似细胞内DNA的复制过程:由一对
引物介导，通过温度的调节，使双链DNA变性为单链DNA、单链DNA能与引物复性（退火）成为引物-DNA单链复合物、以及在dNTPs存在下DNA聚合酶能使引物沿单链模板延伸成为双链DNA（引物的延伸）；这种热变性-复性-延伸的过程，就是一个PCR循环；一般通过20-30个循环之后，就可获得大量的要扩增的DNA 片段。
琼脂糖凝胶电泳：
琼脂糖凝胶电泳是分离、纯化、鉴定DNA片断的典型方法，其特点为简便、快速。
DNA片断琼脂糖凝胶电泳的原理与蛋白质的电泳原理基本相同，DNA分子在高于其等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。
DNA分子在电场中通过介质而泳动，除电荷效应外，凝胶介质还有分子筛效应，与分子大小及构想有关。
对于线形DNA分子，其电场中的迁移率与其分子量的对数值成反比。
在凝胶中加入少量溴化乙锭（有毒！），其分子可插入DNA的碱基之间，形成一种光络合物，在254~365nm波长紫外光照射下，呈现桔红色的荧光，因此可对分离的DNA进行检测。
电泳时以溴酚蓝及二甲苯氰（蓝）作为双色电泳指示剂。
其目的有：①增大样品密度，确保DNA均匀进入样品孔内；②使样品呈现颜色，了解样品泳动情况，使操作更为便利；③以0.5×TBE做电泳液时溴酚蓝的泳动率约与长700bp的双链DNA相同，二甲苯氰（蓝）则与2Kbp的DNA相同。
T-DNA插入突变体PCR鉴定图解：
T-DNA插入突变体的引物位点
PCR电泳图
验仪器材料和试剂
实验材料：
拟南芥叶片
实验仪器：
电热恒温水浴锅；离心机；液氮罐；研钵；离心管；移液管；稳压稳流电泳仪；可调微量移液器；水平电泳槽；暗箱紫外透射仪。
实验试剂：
CTAB分离缓冲液；氯仿/异戊醇；无水乙醇；70％乙醇溶液；NaAc；TE缓冲液；电泳缓冲液；加样缓冲液；溴化乙锭（EB）溶液；琼脂糖凝胶（浓度为1.2%）。
实验步骤
⑴．植物DNA的提取
1.取CTAB分离缓冲液加入离心试管中，于65℃水浴预热；
2.取2-3片新鲜叶片于离心管，加入液氮研磨细粉末；
3.加入600 ul预热的CTAB分离液，轻轻转动，混匀，65℃水浴保温45min；
4.12000rpm离心10min；
5.将上清液转移到新离心管，加入等体积的氯仿/异戊醇，轻轻摇动，混匀；
6.12000rpm离心5-10min，将上清液转移到新离心管；
7.向上清中加入1/10体积3M NaAc，再加入两倍体积预冷的无水乙醇，轻轻混匀，冰上放置10min；
8.12000rpm离心10min，弃上清，加入500 ul70％乙醇溶液洗涤2min；
9.12000rpm离心5min，弃上清吸干残留并干燥；
10.加40 ulTE缓冲液溶解DNA。
⑵．PCR反应
按照下表装填反应体系：
调节PCR仪，使其按照94℃ 5min，94℃ 30s，53℃ 30s，72℃ 1min30s，重复33次，72℃ 10min的方式进行。
⑶．琼脂糖凝胶电泳
1．凝胶板的制备：
取琼脂糖0.48g，加0.5×TBE缓冲溶液40ml，微波熔化，制成1.2%的琼脂糖胶液。
将60℃凝胶不间断倒入胶床，高3－4mm，避免气泡，室温下凝固。
完全凝固后，置于电泳槽中，加入电泳缓冲液，高于胶面1－2mm，从一头轻轻斜拉出梳子，除去产生的气泡。
2．加样：
在两份PCR产物中各加4 ul6×Loading Buffer，在样品DNA中加缓冲液2 ul，混匀，用微量进样器加样，加样量10 l （加样时应防止碰坏样品孔周围的凝胶面以及穿透凝胶底部）。
3．电泳：
120V电压电泳，至少40min。
4．染色、观察、显微照相与记录：
关闭电源，取出胶床，浸入EB溶液中，10min后取出。
在紫外检测仪下观察凝胶中的DNA，并进行显微照相。
实验结果及分析
1.实验结果：
注释：
第一孔道为DL2000 marker；第五至七孔道为本人实验结果（25号样品），依次是PCR前的样品DNA、引物为LP＆RP的PCR产物和引物为BP＆RP的PCR产物。
2.实验分析：
若拟南芥为野生型，即无T-DNA插入，不存在BP位点，因此，电泳时，只有LP＆RP的PCR产物存在，而BP＆RP的PCR产物不存在；
若拟南芥为纯合突变体，即两条链均有T-DNA插入，都存在BP位点，因此电泳时，由于大片段的插入，LP＆RP的PCR产物不存在，只有BP＆RP的PCR 产物存在；
若拟南芥为杂合突变体，即有一条条链有T-DNA插入，其中存在BP位点，因此电泳时，突变的那条链，由于大片段的插入，LP＆RP的PCR产物不存在，只有BP＆RP的PCR产物存在，另外一条链则只存在LP＆RP的PCR产物。
观察图片，两个PCR产物电泳所得的结果均是一条条带。
LP＆RP的PCR产物大小在1000bp左右，BP＆RP的PCR产物大小在800bp左右，与预期结果相符，因此，25号拟南芥为杂合突变体。