人生长激素结合蛋白GHBP酶联免疫分析
人生长激素结合蛋白的结构及功能
人生长激素结合蛋白的结构及功能【关键词】人生长激素结合蛋白随着医学界对人生长激素(human gowth hormone，hGH)促生长、发育等生理机制研究的深入，生长激素胰岛素样生长因子(insulin like growth factor，IGF)轴的功能、机制也越来越被人们所重视。
现已证实，GH在体内的生理功能主要是通过结合人生长激素受体(human growth hormone receport，hGHR)，受体二聚后启动信号转导来完成。
但还涉及到与人生长激素结合蛋白(human growth hormone binding protein，hGHBP)的功能联系，则需进一步探讨。
hGHBP由hGHR 胞外段经蛋白水解酶水解获得[1，2]。
其确切的生理功能还不十分清楚，一般认为它主要是与hGH结合，延长hGH半衰期，降低GH的体内清除率[3]。
而越来越多的研究表明它与GH、GHR间的功能联系紧密，除了能够调节GH的生物活性外，还可能参与调节GHR基因的表达和转录，核内信号转导等[4]。
本文就hGHBP的形成、结构及功能等方面做一综述。
1 人生长激素受体已获人、兔、小鼠、大鼠、羊、牛、猪、鸽子、猴等共十几个种属GH受体cDNA克隆。
人GHRcDNA共编码638个氨基酸，其中包括一个由18个氨基酸组成的信号肽。
成熟的人GHR分子是一个含620个氨基酸的单链糖蛋白，其中N端246个氨基酸含5个潜在的糖基化位点，位于细胞外，构成激素结合结构域;第247270为强疏水性氨基酸构成的跨膜区;C端350个氨基酸位于胞内，构成信号转导域[5]。
与INS、PDGF等生长因子受体不同的是其胞内区不具有内在的Tyr蛋白激酶活性。
基于cDNA推导的氨基酸序列，GHR分子量应为70KD，但事实上共价交连技术所证实的人IM9淋巴细胞表面GHR分子量为104KD，人肝细胞表面GHR分子量为124KD，这种表观分子量上的差异是由N糖基化和泛肽引起的[6]。
血清生长激素(GH)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和胰岛素生长因子结合
血清生长激素(GH)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和胰岛素生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)对诊断儿童矮小症中的临床应用价值发表时间：2009-12-15T09:18:15.903Z 来源：《中外健康文摘》第26期供稿作者：潘景良[导读] 随着人们的保健意识越来越高，特别是现在每个家庭只生一个小孩，家长对小孩的健康、生长发育等方面尤其重视潘景良（广东省佛山市第一人民医院检验科广东佛山 528000）【中图分类号】R725 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085(2009)26-0117-02【摘要】目的探讨血清生长激素（GH）、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）和胰岛素生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）在诊断矮小症儿童中的临床应用价值。
方法用化学发光法检测50例（3—13岁）矮小症儿童(男29例、女21例)血清GH、IGF-1和IGFBP-3的浓度，GH激发试验采用左旋多巴和精氨酸激发分别在0、30、60、90分钟抽血检测。
并与正常对照组儿童血清GH、IGF-1和IGFBP-3比较。
结果矮小症患儿血清GH、IGF-1和IGFBP-3均明显低于对照组儿童，且在50例矮小症患儿中，GH激发试验的GH峰值<10ug/ml的有46例，占92%。
结论检测血清生长激素（GH）、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）和胰岛素生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）对临床早期诊断矮小症患儿有较重要意义。
【关键词】 GH IGF-1 IGFBP-3 矮小症儿童随着人们的保健意识越来越高，特别是现在每个家庭只生一个小孩，家长对小孩的健康、生长发育等方面尤其重视。
由于矮小症患儿能否得到及时准确治疗可影响其本人一生，因此越来越受到家长及临床医生的重视。
本组试验通过检测矮小症儿童血清生长激素(GH)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和胰岛素生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)的浓度，为临床早期诊断、治疗矮小症儿童提供较重要的依据。
高效人抗生长激素抗体(GHAb)
人抗生长激素抗体(GHAb) IgG酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E09563h特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人GHAb IgG抗体，且与其他相关抗体无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法测定人血清、血浆或其它相关生物液体中人GHAb IgG抗体。
说明1.试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用LH抗原包被酶标板，制成固相载体。
向微孔中分别加入待测样品，然后再加入辣根过氧化物酶标记抗人IgG进行反应，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的GHAb IgG抗体呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品中抗体的效价（抗血清最终能显色的最高稀释倍数记为效价）。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。
2.样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。
3.辣根过氧化物酶标记抗人IgG（HRP-anti-human IgG）：1×120μl/瓶（1：100）。
4.辣根过氧化物酶标记抗人IgG稀释液（HRP-anti-human IgG Diluent）：1×10ml。
5.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
6.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
7.终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
需要而未提供的试剂和器材1.标准规格酶标仪2.高速离心机3.电热恒温培养箱4.干净的试管和Eppendof管5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器6. 蒸馏水，容量瓶等标本的采集及保存1.血清：全血标本请于37° C放置1小时或4° C过夜后于1000 x g离心15分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
酶联免疫法(ELISA)测定植物激素含量
酶联免疫法（ELISA）测定植物激素含量姓名：李希东专业：植物学学号：200808201 日期：09.5.10 成绩：一、实验目的：掌握间接法测定植物激素的原理和方法；了解逆境对玉米根系ABA和IAA含量的影响。
二、实验原理：酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbert assay，简称ELISA)是在免疫酶技术(immuno enzymite technique)的基础上发展起来免疫测定技术。
其建立在两个重要的生物化学反应基础之上的，即①抗原抗体反应的高度专一性和敏感性；②酶的高效催化特性。
ELISA把这二者有机地结合在一起，即被分析物先与其相应的抗体或抗原反应，然后再检测抗体或抗原上酶标记物的活性，从而达到定性或定量测定的目的。
间接法是将过量的与蛋白质连接的待测植物激素(实验前将该激素与牛血清白蛋白等蛋白质连接成[激素一蛋白质复合物])吸附在固相支持物上，然后加入待测植物激素和相应抗体，使抗体与待测植物激素及激素蛋白质复合物结合，再加入酶标抗体(标记酶与非特异第二抗体的复合物)，就形成〔蛋白质·激素·第一抗体·第二抗体·酶复合物〕，加入底物后就生成有色产物，测定其吸光率，可计算待测抗原的量。
如果抗体、激素一蛋白质复合物和酶标抗体的量一定，并且[激素·蛋白质复合物]和待测激素的总量超过抗体的量，那么生成的[蛋白质·激素·第一抗体·第二抗体·酶复合物]的量就受待测激素含量的限制，因此待测抗原的量将与吸光率成反比。
图A表示间接酶联免疫方法的基本原理：A.间接酶联免疫原理示意图示反应板（固相载体）示激素特异抗体（一抗）示激素（抗原）示非特异二抗示蛋白质·激素复合物示标记酶本实验所采取的方法，则是利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体的竞争性结合反应，它的原理可用下式表示:Ab十H十HP=AbH十AbHP其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素一蛋白质复合物。
酶联免疫方法检测细胞因子步骤
酶联免疫方法检测细胞因子步骤酶联免疫方法是一种常用的实验技术，用于检测细胞因子的含量和活性。
这种方法结合了酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫印迹（Western blot）的优点，可以准确、快速地检测细胞因子的表达和分泌水平。
下面我们将详细介绍酶联免疫方法检测细胞因子的步骤。
第一步：收集样本在进行酶联免疫方法检测细胞因子之前，首先需要收集样本。
样本可以是细胞培养上清液、血清、血浆、组织匀浆等。
在收集样本的过程中，需要注意避免污染和降解，以保证后续实验的准确性和可靠性。
第二步：制备样品收集到样本后，需要进行样品的制备工作。
对于细胞因子的检测，通常需要进行细胞裂解或离心等步骤，以获得纯净的样品。
此外，还需要对样品进行稀释或浓缩处理，以确保在检测过程中细胞因子的浓度在可检测范围内。
第三步：选择合适的试剂盒在进行酶联免疫方法检测细胞因子之前，需要选择合适的试剂盒。
试剂盒的选择要根据要检测的细胞因子种类和检测方法来确定。
一般来说，试剂盒中包含了抗体、标记物、基质和洗涤缓冲液等试剂，可以满足细胞因子的检测需求。
第四步：进行酶标记接下来需要进行酶标记的过程。
酶标记是酶联免疫方法的关键步骤，通过在抗体或抗原上标记酶，可以实现细胞因子的特异性检测。
常用的酶包括辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。
在酶标记过程中，需要严格控制反应条件和时间，以确保标记的稳定性和活性。
第五步：进行反应在准备好标记的抗体或抗原后，就可以进行酶联免疫反应了。
首先将标记的抗体或抗原加入到微孔板或膜上，然后加入待测样品，进行孵育反应。
在孵育反应过程中，细胞因子将与其特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物。
然后进行洗涤，以去除非特异性结合的物质。
第六步：显色反应经过洗涤后，就可以进行显色反应了。
显色反应是检测细胞因子含量的关键步骤，通过在酶作用下的底物转化，可以产生可检测的颜色或荧光信号。
根据试剂盒中所提供的底物种类和反应条件，可以确定最适合的显色方案。
植物激素的酶联免疫吸附测定法(ELISA)
结果计算： 曲线的横坐标用激素标样各浓度（ng/ml ）的自然对 数表示，纵坐标用各浓度显色值的logit值表示。Logit 值的计算方法如下： B/B0 B Logit（B/B0）=ln———— =ln———— 1-B/B0 B0-B 其中B0是0ng/ml孔的显色值，B是其它浓度的显色 值。 待测样品可根据其显色值的logit值从图上查出其所 含激素浓度（ng/ml）的自然对数，再经过反对数即可 知其激素的浓度（ng/ml）。 求得样品中激素的浓度后，再计算样品中激素的含量 （ng/g•fw）。
材料、试剂及设备
(1) 磷酸盐缓冲液（PBS）：称取8.0g NaCl, 0.2g KH2PO4 , 2.96g Na2HPO4 •12H2O，用量筒加1 000 ml蒸馏水，pH为7.5。 (2) 样品稀释液：500 ml PBS中加0.5 ml Tween-20， 0.5g明胶（稍加热溶解）。 (3) 底物缓冲液：称取5.10g C6H8O7•H2O（柠檬酸）， 18.43g Na2HPO4•12H2O，用量筒加1 000ml蒸馏水， 再加1 ml Tween-20，pH为5.0。 (4) 洗涤液：1000ml PBS加1mlTween-20。 (5) 终止液：2mol/L H2SO4。
实验步骤
一、竞争：即加标准物、待测样和抗体。 加标样及待测样： 取适量所给标样用样品稀释液配成： IAA标准曲线的最大浓度为100ng/ml。然后再依ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ2倍 稀释8个浓度（包括0ng/ml ）。将系列标准样加入96孔 酶标板的前两行，每个浓度加2孔，每孔50μl,其余孔加 待测样，每个样品重复两孔，每孔50μl。 加抗体：在5ml样品稀释液中加入一定量的抗体,混匀 后每孔加50μl，然后将酶标板加入湿盒内开始竞争。 竞争条件37℃左右0.5h。
酶联免疫方法检测细胞因子步骤
酶联免疫方法检测细胞因子步骤酶联免疫方法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）是一种广泛应用于生物医学研究领域的检测技术，它能够快速、准确地检测细胞因子等生物大分子的含量。
细胞因子是一类在调节和介导细胞间相互作用中发挥重要作用的细胞因子，它们在免疫反应、炎症反应和细胞信号传导等生理过程中具有重要的调节作用。
本文将对酶联免疫方法检测细胞因子的步骤进行详细介绍，让读者对该技术有一个全面的了解。
第一步：样品处理在进行酶联免疫法检测细胞因子之前，首先需要对样品进行处理。
样品处理的目的是提取细胞因子，并将其置于适宜的条件下以便后续的检测。
对于细胞因子的提取可采用离心、超声波破碎等方法，以获取高纯度的样品。
同时，对于血清、血浆等液体样品，还需通过凝胶过滤、醋酸纤维素柱层析等步骤进行净化处理，以去除样品中可能存在的干扰物质。
第二步：酶标记抗体的制备酶联免疫法的关键之一是酶标记抗体的制备。
酶标记抗体一般是通过将抗体与酶（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）进行共价结合而得到的。
在制备酶标记抗体时，需要考虑到抗体与酶的比例、结合条件等因素，并通过一系列的实验来优化制备条件，以确保酶标记抗体的稳定性和活性。
第三步：微板上样品的包被完成样品的处理和酶标记抗体的制备之后，下一步是将样品包被到微板上。
微板是一种通常由聚苯乙烯、聚碳酸酯等材料制成的微量反应容器，其表面具有一定的亲和性，可以吸附蛋白质等生物分子。
在将样品包被到微板上时，需注意包被的时间、温度等因素，以使样品能够均匀地吸附到微板上，并且保持其天然的构象和生物活性。
第四步：酶标记抗体的添加将样品包被到微板上之后，接下来就是添加酶标记抗体。
酶标记抗体作为二抗，可以与包被在微板上的靶分子结合，形成特异性的抗原-抗体复合物。
为了确保酶标记抗体的特异性和灵敏度，通常需要对酶标记抗体进行适当的稀释，并加入到微板上进行孵育。
第五步：底物的加入与反应在酶标记抗体添加完毕后，需要加入底物并进行反应。
生长激素(GH)测定试剂盒(磁微粒化学发光免疫分析法)产品技术要求runnuosi
生长激素（GH）测定试剂盒（磁微粒化学发光免疫分析法）适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清中生长激素的含量。
1.1规格50测试/盒、100测试/盒、200测试/盒。
1.2主要组成成分表1 试剂盒装量及组成2.1 外观2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；2.1.2 磁分离试剂摇匀后为均匀悬浊液，无明显凝集；2.1.3 液体组分应澄清，无沉淀或絮状物；2.1.4 包装标签应清晰，无磨损。
2.2准确度检测浓度为5 ng/ml（允许偏差为±20%）的国家药品标准物质（编号：140635），其检测结果的相对偏差应在±10%范围内；2.3空白检测限应不大于0.01 ng/ml。
2.4线性在（0.05，40）ng/ml的检测范围内，试剂盒的相关系数r应≥0.99。
2.5重复性用两个质控品作为样本各重复检测10次，其变异系数（CV）均应≤10%。
2.6质控品测值质控品检测结果均应在质控范围内。
2.7批间差用三个批号试剂盒分别检测质控品1和质控品2，两个质控品检测结果的批间变异系数（CV）均应≤15.0%。
2.8分析特异性将潜在交叉物质添加到含有18ng/ml（允许偏差为±15%）生长激素（GH）的基础样本中使其达到下表浓度，添加前后检测值偏差在±15%范围内，则认为本试剂盒与该物质没有明显交叉。
表2 潜在交叉物质浓度及交叉率要求2.9溯源性根据GB/T21415-2008及有关规定提供所用生长激素（GH）校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，溯源至生长激素（GH）国际参考物质(WHO98/574)。
2.10稳定性试剂盒2℃～8℃储存，避免阳光直射，有效期为12个月，取失效后两个月内的样品进行检测，应符合2.1～2.6的要求。
胰岛素样生长因子结合蛋白3 定量测定试剂盒(酶联免疫法)使用说明书
人类血清干粉包含IGFBP-3。每瓶1 mL，每盒2瓶。 7．HCL – 终止液 ( REF AC-STOP):
0.5M盐酸，每瓶14 mL。 8．TMB – TMB底物 ( REF AC-TMB):
15-16
47
2155
1569 -3000
17-18
54
2116
1110 -2857
19-20
49
2161
1513 -3578
21-30
45
2681
1627-5619
31-40
44
3001
1700 -5205
41-50
75
2481
1284 -4330
51-60
173
2335
1448 -3567
61-70
微量板被羊抗IGFBP-3单克隆抗体连接到聚苯乙烯微量孔的内部表面，8X12板条孔带干燥剂。 4．AB BIOTIN – 抗体生物素 ( REF AC-1903):
磷酸盐缓冲液包含连接生素素的兔抗IGFBP-3多克隆抗体，蛋白，酶稳定剂和0.05%防腐剂。每瓶12 mL。 5．ENZYMCONJ – 酶结合物 ( REF AC-1904):
IDS IGFBP-3 ELISA 试剂盒是一个纯化的单克隆绵抗-IGFBP-3 抗体包被在聚苯乙烯微量孔的内表面（固相或抗 体捕获）。标准，稀释质控和稀释病人样本然后与生物素多克隆兔抗-IGFBP-3 在抗体包被的微量孔中孵育并震荡， 在室温下放置两个小时。清洗微量孔和加入酶标生物素的复合物（辣根过氧化物酶）。进一步清洗后，加入单一的成 份的显色底物（四甲基联苯胺）形成颜色。终止混合物的反应，吸光度在微量板读数仪上读取，颜色的强度与样本 中 IGFBP-3 的数量成正比关系。 【主要组成成份】 1．CAL┃0– 标准 O/样本稀释 ( REF AC-1901A):
生长激素检查报告怎么看
生长激素检查报告怎么看生长激素检查是一项常见的检查项目，在临床中被广泛应用于评估儿童是否存在生长发育障碍、判断是否患有生长激素缺乏症等方面。
然而，面对生长激素检查报告，许多人并不知道该如何解读。
因此，本文将就生长激素检查报告进行解读，以帮助读者更好地了解该项检查。
一、生长激素检查报告包含哪些内容生长激素检查报告通常会包含以下内容：1.胰岛素样生长因子-1（IGF-1）：IGF-1是生长激素的主要效应分子，是一种由肝脏合成的类胰岛素样生长因子。
其水平可间接反映出生长激素分泌的情况。
2.生长激素（GH）：生长激素是脑下垂体分泌的一种激素，它的主要作用是促进骨骼生长，影响体内蛋白质、脂肪和碳水化合物的代谢，同时也参与调节能量平衡和免疫功能。
3.其他指标：有些生长激素检查报告还会包括IGFBP-3、GHBP、GHARG等指标，这些指标都是用来评估生长激素水平和其活性的。
二、如何解读生长激素检查报告1.IGF-1水平：IGF-1水平的正常范围因年龄和性别而异。
对于儿童和青少年来说，这个范围通常是100-500ng/mL。
对于成年人来说，一般是100-250ng/mL。
如果IGF-1水平低于正常范围，可能意味着存在生长激素缺乏症或其他生长发育障碍。
2.生长激素水平：生长激素水平的正常范围因年龄、性别和时间而异。
在血液测试中，生长激素通常以ng/mL或IU/L为单位进行报告。
在青春期前，正常生长激素水平通常为0.1-8.0ng/mL。
在青春期后，正常水平则通常为0.1-30.0ng/mL。
如果生长激素水平过低，可能会导致生长迟缓或其他生长发育问题；如果生长激素水平过高，则可能会导致乳腺增生、巨人症等疾病。
3.其他指标：在一些生长激素检查报告中，还可能包括其他指标。
例如，IGFBP-3是一种与IGF-1有关联的蛋白质，其水平也可以反映出生长激素的活性。
通常来说，IGFBP-3水平与IGF-1水平是一致的。
GHBP是生长激素结合蛋白的缩写，它可以影响血中生长激素的波动。
IGF—1与IGFBP—3在未青春发育特发性矮小儿童生长激素治疗中的意义
IGF—1与IGFBP—3在未青春发育特发性矮小儿童生长激素治疗中的意义目的探讨血清胰岛素样生长因子-1（IGF-1）和胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）在未青春发育特发性身材矮小（ISS）患儿重组人生长激素（rhGH）治疗过程中的变化及意义。
方法观察组50例ISS患儿行国产rhGH治疗，采用酶联免疫分析技术测定其治疗前及治疗7 d、1个月及6个月时的血清IGF-1和IGFBP-3水平。
对照组为20例正常儿童。
结果观察组治疗前血清IGF-1、IGFBP-3水平均低于对照组（P 0.05）。
治疗期间及治疗6个月结束时50例患儿均未进入青春发育。
2.2 观察组血清IGF-1和IGFBP-3水平变化情况与对照组比较，观察组治疗前血清IGF-1、IGFBP-3水平均低于对照组（P 0.05）。
见表3。
2.3 观察组血清IGF-1和IGFBP-3水平与生长指标的关系3 讨论ISS一般是指暂无可认知的原因所致的身材矮小，也可称为正常矮小或非生长激素缺乏性矮小，其共同特点是在整个生长时期出现生长迟缓，因此在自然生长下大部分ISS儿童的最终成人身高将低于遗传靶身高，甚至未能达到正常平均身高；其相关问题已得到诸多儿科内分泌专业医师的密切关注。
由于生长发育阶段儿童的生长迟缓主要表现为骨骼生长发育异常，而骨骼生长影响因素颇多，主要由甲状腺轴、性腺轴和GH-IGF-1轴调控，尤其是GH-IGF-1轴，在儿童生长方面起着关键作用。
近年来国内外均有研究报道ISS患儿血GHBP水平及IGF-1水平低下[3-5]。
ISS儿童存在IGF-1不足为ISS儿童的GH治疗提供了理论基础。
但由于ISS病因各不相同，对ISS儿童采用GH治疗存在明显多样性[6]。
目前国内外研究中有关ISS的GH疗效以肯定的意见居多[7-9]。
本研究中未青春发育的ISS儿童GH治疗6个月后GV、HtSDSCA、HtSDSBA均得到明显改善，BA/CA 改变不明显，亦无任何儿童治疗结束时提前进入青春发育，因此可以认为其疗效肯定。
人生长激素测定试剂盒(化学发光免疫分析法)产品技术要求mairui
1 性能指标2.1外观和性状试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；包装标签应清晰，准确、牢固；Ra 组分应为棕色含固体微粒的液体，无板结、无絮状物。
Rb 组分应为清澈透明的液体，无沉淀、无悬浮物、无絮状物；校准品应为清澈透明液体，无沉淀、无悬浮物、无絮状物。
分装瓶应为透明塑料管，盖有塑料外盖。
2.2装量应不少于试剂的标示装量值。
2.3准确度2.3.1将hGH 国家标准品配成两个浓度水平的样品，用待检试剂盒进行检测，其检测结果与标定靶值的相对偏差在±10%范围内。
2.3.2对具有溯源性的两个浓度水平的正确度控制品进行检测，检测结果与标定浓度的相对偏差在±10%范围内。
2.4最低检测限应不大于0.02 ng/mL。
2.5线性试剂盒在0.03 ng/mL~50 ng/mL 区间内，其相关系数（r）应不低于0.9900。
2.6重复性变异系数CV 应≤ 5%。
2.7批间差变异系数CV 应≤ 10%。
2.8校准品均一性2.8.1校准品瓶内均一性C0的标准差（SD）应不大于0.024ng/mL，C1和C2的变异系数（CV）应不大于8.0%。
2.8.2校准品瓶间均一性C0 的标准差（SD）应不大于0.02 ng/mL，C1 和C2 的变异系数（CV）应不大于5.0%。
2.9生物安全性使用国家权威管理机构认可的、且不低于我国法定用于血源筛查体外诊断试剂灵敏度的检测试剂，对校准品中乙型肝炎病毒表面抗原、人类免疫缺陷病毒抗体（HIV-I 型和HIV-II1型）、丙型肝炎病毒抗体、梅毒螺旋体抗体的检测应为阴性。
2.10稳定性2~8℃避光保存，试剂盒有效期为365 天。
到有效期后90 天内的试剂盒应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.8 的要求。
2。
生长激素缺乏症
父母身高均矮，患儿身高常在第3百分位数左右，但其生长速率＞5cm/年，骨龄和实际年龄相称，智能和性 发育正常。
体质性生长及青春期延迟
多见于男孩。青春期开始发育的时间比正常儿童迟3-5年，青春期前生长缓慢，骨龄也相应落后，但身高与 骨龄一致，青春期发育后其最终身高正常。父母一方往往有青春期发育延迟病史。
病因
遗传性生长激素缺乏
GH1基因缺陷引起单纯性生长激素缺乏症，而垂体Pit-1转录因 子缺陷导致多种垂体激素缺乏症，临床上表现为多种垂体激素 缺乏。生长激素缺乏症按遗传方式分为I、II、III3型。此外， 还有少数矮身材儿童是由于GH分子结构异常、GH受体缺陷或 IGF受体缺陷所致，临床症状与生长激素缺乏症相似，但呈现 GH抵抗或IGF-1抵抗，血清GH水平不降低或反而增高，是较罕 见的遗传性疾病。
病因
原发性
• 下丘脑-垂体功能障碍 • 遗传性生长激素缺乏
继发性
多为器质性，常继发性下丘脑、垂体或其 他颅内肿瘤、感染、细胞浸润、放射性损 伤和头颅创伤等
暂时性
体质性生长及青春期延迟、社会心理性 生长抑制、原发性甲减等均可造成暂时 性GH分泌功能低下，在外界不良因素消 除或原发疾病治疗后即可恢复正常。
生长激素的合成、分泌和功能
GH可以直接作用于细胞发挥生物效应，但其大部分功能必须通过胰岛素样生长因子（IGF） 介导。 IGF是一组具有促进生长作用的多肽，人体内有两种IGF，即IGF-1和IGF-2。 IGF-1是分子量为7.5kD的单链多肽，其编码基因位于12q22-q24.1，长约85kb，有6个外显 子和5个内含子。分泌细胞广泛存在于肝、肾、脾、肺、心、脑和肠等组织中，各组织合 成的IGF-1大都以自分泌或邻分泌方式发挥其促生长作用。但循环中的IGF-1主要是由肝脏 分泌的，其合成主要受GH的调节，亦与年龄、性别、营养状态等因素有关。GH通过肝脏生 长激素受体促进肝脏IGF-1基因的表达，从而促进IGF-1的合成和释放。 IGF-2的作用尚未完全阐明。
人FAB蛋白FAB酶联免疫分析
人FAB蛋白(FAB)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T16pg/ml-400pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中FAB蛋白(FAB)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人FAB蛋白(FAB)水平。
用纯化的人FAB蛋白(FAB)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入FAB蛋白(FAB)，再与HRP标记的FAB蛋白(FAB)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的FAB蛋白(FAB)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人FAB蛋白(FAB)浓度。
标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
免疫分析技术基本原理
免疫分析技术基本原理利用抗原、抗体之间的特异性结合来测定、分析特定物质的方法✧抗原：可诱导动物免疫系统产生免疫应答的物质。
按其引起免疫应答的能力分半抗原、抗原、超抗原。
✧抗体：由动物免疫系统产生，可特异性结合某种物质的免疫球蛋白。
分IgG、IgM、IgE、IgA、IgD五个亚型。
不同亚型针对同一抗原表位的结合位点的结构相同。
不同亚型出现的先后顺序不同，在血清中的含量不同，在机体中出现的地点不同。
抗原抗体反应的特性1可逆性抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡，其反应式为：Ag+Ab→Ag·Ab抗体的亲和力（affinity），可以用平衡常数K表示：K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab] ,Ag·Ab的解离程度与K值有关。
高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合，两者结合牢固，不易解离。
解离后的抗原或抗体均能保持原有的结构和活性2特异性抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位点之间。
化学结构和空间构型互补关系，具有高度的特异性。
测定某一特定的物质，而不需先分离待检物。
3最适比例4敏感性化学比色法的敏感度为mg/ml水平。
酶反应测定法的敏感度约为5-10μg/ml。
免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿。
标记的免疫敏感度可提高数千倍，达ng/ml水平。
例如，HBsAg，其敏感度可达0.1ng/ml。
固相免疫测定的原理基础:抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。
双抗体夹心法原理此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP等。
只要获得针对受检抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。
双抗原夹心法原理用特异性抗原进行包被和制备酶结合物。
此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。
人生长激素的功能性免疫检测
人生长激素的功能性免疫检测
赵慧;郑文岭;崔东;马文丽
【期刊名称】《临床检验杂志》
【年(卷),期】2004(22)2
【摘要】在临床诊断人生长激素(human growth hormone，hGH)缺乏症的过程中，由于hGH的检测结果存在较大差异，使hGH替代疗法的危险性增加。
导致检测结果差异的原因有：检测用的抗体特异性不强，检测受内源性GH结合蛋白(GH binding protein，GHBP)的干扰，检测方法采用的标准各不相同等。
近年来建立了一些检测hGH的新方法。
如Nb2细胞
【总页数】3页(P149-151)
【作者】赵慧;郑文岭;崔东;马文丽
【作者单位】广州军区广州总医院肿瘤分子生物学研究所,广州,510010;华南理工大学食品与生物工程学院;广州军区广州总医院肿瘤分子生物学研究所,广
州,510010;广州军区广州总医院肿瘤分子生物学研究所,广州,510010;第一军医大学分子生物学研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R446.6
【相关文献】
1.重组人生长激素治疗成人生长激素缺乏症患者疗效的相关基因多态性 [J], 许可;阳洪波;潘慧
2.重组人生长激素在成人生长激素缺乏症的应用 [J], 李丙蓉;郑宏庭;杨泉
3.全自动酶联免疫检测仪与手工酶联免疫检测的比对评价 [J], 朱美芹;王莉莉
4.放射免疫法研究乳糖基重组人生长激素和重组人生长激素的药代动力学 [J], 陈泽莲;李铜玲;庞其捷;何菊英;彭永富;李云春;管昌田
5.乳糖化人生长激素和人生长激素的药代动力学比较研究 [J], 李云春;管昌田;张辉敏;陈泽莲;李铜铃;庞其捷
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使用外源性生长激素对有关指标影响的研究
北京体育大学硕士学位论文使用外源性生长激素对有关指标影响的研究姓名：***申请学位级别：硕士专业：运动生化指导教师：杨天乐;谢敏豪19990401使用外源性生长激素对有关指标影响的研究中文摘要生长激素是一种人体自身分泌的肽类激素。
由于其强有力的促合成代谢作用而被运动员、健身者甚至是学龄期儿童用来提高运动成绩或美化体形。
由于生物食成技术的应用和由此产生的外源性合成生长激素的易得性，使得这种滥用越来越普遍。
为此，国际奥委会早在１９９４年就将生长激素列入违禁药物行列，但由于生长激素是一种内源性的激素，以及它的半衰期短、尿中含量极低等特点，使得至今还没有有效的方法可以用来检测生长激素的滥用。
１９９７年国际上制订了生长激素一２０００计划。
力争在２０００前确立检测生长激素的方法，并正在多个实验室进行有关血液和尿液指标的研究。
本课题着重研究使用外源性生长激素对血清中生长激素、胰岛索样生长因子一ｌ含量以及生长激素的异型性的影响，同时还观测了用药对尿液中生长激素浓度的影响。
受试者为北体大男性学生６人（年龄；２４．５±１．３），连续一周经皮下注射外源性生长激素（６ＩＵ／人／次）后，采集了每人自用药前一天到停药一周后共１６个不同时间点的血样，而后制备成血清。
用放射免疫法测定了这些血清样本中的生长激素、胰岛索样生长因子一１含量。
结果显示：在一次性使用外源性生长激素后，血清中生长激索含量在３—８小时内显著升高，２４小时内回复正常水平。
连续一周使用外源性生长激素并不能使血清中生长激素含量发生更大变化．而一次性使用外源性生长激素后，血清胰岛索样生长因子一１含量没有明显变化，随着用药时间的延长，胰岛索样生长因子一１含量逐渐升高，停药后有所回落，但在停药后一周的时间内，仍高于未用药前的水平。
进一步采用色谱层析分离及酶联免疫吸附测定的方法，对上述６例用药受试者的用药一天后（用药一天组）和一周后（用药一周组）的血清样本进行了研究。
巨人症与肢端肥大症的检查项目有哪些？
巨人症与肢端肥大症的检查项目有哪些？检查项目：生长激素、性激素六项检查、CT检查、TRH兴奋TSH、PRL试验、生长激素激发试验、四肢的骨和关节平片、血清磷（Pi）1.实验室基本检查(1)血清GH：人GH呈脉冲式分泌，具昼夜节律分泌特征，但受运动、应激及代谢变化的影响。
人的GH分泌每天有5～10个分泌峰，峰值最高可达40µg/L，峰间谷值多小于0.2µg/L。
正常人在运动、应激状态时，或GH分泌高峰时取血，其血GH值偏高(女性明显)。
肢端肥大症患者的GH分泌丧失昼夜节律性，但仍保持着间断的脉冲式分泌，其血浓度的个体差异较大，但垂体GH瘤大多呈GH自主性分泌。
患者分泌GH脉冲频率增加，且血GH基础值与空腹结果均增高(轻症及老年患者取血为分泌峰的谷值时，增高可不明显)，有报道年龄每增加10岁，其血GH值下降7µg/L，而且不同的放射免疫法检测的GH 值相差较大。
故仅1次血GH测定不能作为诊断的依据。
应用放射免疫法测得的血清GH最低值仅1.5～2.0µg/L，其灵敏度虽可达0.5µg/L，但仍有50%～80%的正常人的基础值低于此值。
最新的免疫荧光或免疫发光测定的灵敏度达0.005～0.01µg/L，可准确地测得正常人的血GH基础水平。
放射免疫分析技术是检测GH的免疫反应性水平，而不是生物活性。
GH要发挥其生物效应必须与其特异性受体结合。
用免疫放射受体法测得的结果能更好地反映GH的生物作用。
血清中的GH组分很不均一，含有20kD、22kDGH聚合体等多种形式，钡定血GH谱是确诊GH过度分泌的较佳方法，因可了解血GH增高的组分及其比例。
GH在血中的半衰期为20～25min，故测定血GH 谱时，每5～20min取血1次，连续测1夜或24h。
肢端肥大症患者血GH基础值比正常人升高数倍至数十倍，多在1µg/L以上，GH脉冲分泌峰频率增多2～3倍。
人生长激素结合蛋白的结构及功能
人生长激素结合蛋白的结构及功能【关键词】人生长激素结合蛋白随着医学界对人生长激素(human gowth hormone，hGH)促生长、发育等生理机制研究的深入，生长激素胰岛素样生长因子(insulin like growth factor，IGF)轴的功能、机制也越来越被人们所重视。
现已证实，GH在体内的生理功能主要是通过结合人生长激素受体(human growth hormone receport，hGHR)，受体二聚后启动信号转导来完成。
但还涉及到与人生长激素结合蛋白(human growth hormone binding protein，hGHBP)的功能联系，则需进一步探讨。
hGHBP由hGHR 胞外段经蛋白水解酶水解获得[1，2]。
其确切的生理功能还不十分清楚，一般认为它主要是与hGH结合，延长hGH半衰期，降低GH的体内清除率[3]。
而越来越多的研究表明它与GH、GHR间的功能联系紧密，除了能够调节GH的生物活性外，还可能参与调节GHR基因的表达和转录，核内信号转导等[4]。
本文就hGHBP的形成、结构及功能等方面做一综述。
1 人生长激素受体已获人、兔、小鼠、大鼠、羊、牛、猪、鸽子、猴等共十几个种属GH受体cDNA克隆。
人GHRcDNA共编码638个氨基酸，其中包括一个由18个氨基酸组成的信号肽。
成熟的人GHR分子是一个含620个氨基酸的单链糖蛋白，其中N端246个氨基酸含5个潜在的糖基化位点，位于细胞外，构成激素结合结构域;第247270为强疏水性氨基酸构成的跨膜区;C端350个氨基酸位于胞内，构成信号转导域[5]。
与INS、PDGF等生长因子受体不同的是其胞内区不具有内在的Tyr蛋白激酶活性。
基于cDNA推导的氨基酸序列，GHR分子量应为70KD，但事实上共价交连技术所证实的人IM9淋巴细胞表面GHR分子量为104KD，人肝细胞表面GHR分子量为124KD，这种表观分子量上的差异是由N糖基化和泛肽引起的[6]。
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人生长激素结合蛋白（GHBP）酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T
20 pmol/L -480 pmol/L
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中生长激素结合蛋白（GHBP）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人生长激素结合蛋白（GHBP）水平。
用纯化的人生长激素结合蛋白（GHBP）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入生长激素结合蛋白（GHBP），再与HRP标记的生长激素结合蛋白（GHBP）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的生长激素结合蛋白（GHBP）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人生长激素结合蛋白（GHBP）浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月。