酶学实验
酶水解实验报告
一、实验目的1. 了解酶水解反应的基本原理和实验方法。
2. 掌握酶活性测定、酶促反应速率和底物浓度关系等实验技术。
3. 探讨不同酶对同一底物的催化效率。
二、实验原理酶是一种生物催化剂，具有高效、专一、可逆和温和反应条件等特点。
酶水解反应是指酶催化底物分子发生断裂、降解等反应，生成新的物质。
本实验以淀粉酶和蛋白酶为例，探讨酶水解反应。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：淀粉、蔗糖、蛋白质、淀粉酶、蛋白酶、斐林试剂、双缩脲试剂、蒸馏水、NaOH、盐酸、酚酞指示剂等。
2. 实验仪器：恒温水浴锅、天平、烧杯、试管、试管架、滴定管、移液管、酒精灯、火焰、显微镜等。
四、实验步骤1. 淀粉酶水解实验（1）取两支试管，分别加入2%淀粉溶液和2%蔗糖溶液。
（2）向两支试管中加入等量的淀粉酶，放入恒温水浴锅中，控制温度为37℃。
（3）每隔一定时间，取出一支试管，用斐林试剂检测淀粉酶水解产生的还原糖。
（4）重复步骤（2）和（3），观察并记录淀粉酶对淀粉和蔗糖的水解效果。
2. 蛋白酶水解实验（1）取两支试管，分别加入2%蛋白质溶液和2%淀粉溶液。
（2）向两支试管中加入等量的蛋白酶，放入恒温水浴锅中，控制温度为37℃。
（3）每隔一定时间，取出一支试管，用双缩脲试剂检测蛋白酶水解产生的氨基酸。
（4）重复步骤（2）和（3），观察并记录蛋白酶对蛋白质和淀粉的水解效果。
3. 酶活性测定（1）取一定量的淀粉酶，用蒸馏水稀释至一定浓度。
（2）取一支试管，加入一定量的淀粉溶液，用滴定管加入淀粉酶溶液。
（3）放入恒温水浴锅中，控制温度为37℃。
（4）每隔一定时间，取出一支试管，用斐林试剂检测淀粉酶水解产生的还原糖。
（5）重复步骤（2）和（4），观察并记录不同浓度淀粉酶的水解效果。
4. 底物浓度与酶促反应速率关系（1）取三支试管，分别加入不同浓度的淀粉溶液。
（2）向三支试管中加入等量的淀粉酶溶液，放入恒温水浴锅中，控制温度为37℃。
（3）每隔一定时间，取出一支试管，用斐林试剂检测淀粉酶水解产生的还原糖。
酶的性质的实验报告
一、实验目的通过本实验，加深对酶性质的认识，了解酶的专一性、温度、pH值对酶活性的影响及其检测方法，掌握其原理及检测方法。
二、实验原理酶是一种生物催化剂，具有高效性、专一性和可调节性等特点。
酶的活性受多种因素的影响，包括温度、pH值、底物浓度等。
本实验通过观察不同条件下酶的活性变化，探讨影响酶活性的因素。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 酶制剂- 底物- pH缓冲液- 温度计- 移液器- 试管- 恒温水浴箱2. 仪器：- 酶活性测定仪- 紫外可见分光光度计四、实验方法1. pH对酶活性的影响：- 将酶制剂和底物分别加入不同pH值的缓冲液中，混合均匀。
- 将混合液置于恒温水浴箱中，在不同温度下保温一定时间。
- 使用酶活性测定仪检测酶活性。
2. 温度对酶活性的影响：- 将酶制剂和底物分别加入同一pH值的缓冲液中，混合均匀。
- 将混合液置于不同温度下保温一定时间。
- 使用酶活性测定仪检测酶活性。
3. 底物浓度对酶活性的影响：- 将酶制剂和不同浓度的底物分别加入同一pH值的缓冲液中，混合均匀。
- 将混合液置于恒温水浴箱中，在不同温度下保温一定时间。
- 使用酶活性测定仪检测酶活性。
五、实验结果与分析1. pH对酶活性的影响：- 随着pH值的升高，酶活性逐渐增加，达到最适pH值后，酶活性逐渐降低。
- 最适pH值因酶的种类而异，如胃蛋白酶的最适pH值为1.8-2.2，胰蛋白酶的最适pH值为7.0-8.0。
2. 温度对酶活性的影响：- 随着温度的升高，酶活性逐渐增加，达到最适温度后，酶活性逐渐降低。
- 最适温度因酶的种类而异，如胃蛋白酶的最适温度为37℃，胰蛋白酶的最适温度为40℃。
3. 底物浓度对酶活性的影响：- 随着底物浓度的增加，酶活性逐渐增加，达到一定浓度后，酶活性不再增加。
- 酶活性与底物浓度的关系呈饱和曲线。
六、结论1. 酶的活性受pH值、温度、底物浓度等多种因素的影响。
2. 酶的最适pH值和最适温度因酶的种类而异。
酶的分离提纯实验原理
酶的分离提纯实验原理酶的分离提纯是指从复杂的混合物中获得纯净的酶样品的过程。
此过程旨在去除其他杂质，并提高酶的比活性和纯度。
酶的分离提纯实验原理可以分为以下几个方面：1. 根据酶的生理特性进行分离：酶的分离可依据酶对pH值、温度、离子浓度、底物特异性等因素的敏感性进行。
常用分离方法包括离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析、电泳等。
2. 分离的物理性质利用：酶可根据其分子大小、电荷、溶解度等物理性质进行分离。
例如，凝胶过滤层析通过选用合适的孔径筛选凝胶，使大分子酶无法进入凝胶孔隙，进而实现分离。
3. 分离的化学性质利用：酶可通过与其他物质的特异性相互作用来实现分离。
亲和层析是一种常用的方法，利用酶与某些配体（如某种金属离子、亲合剂等）的特异性结合来分离酶。
在实验中，通常采用以下步骤进行酶的分离提纯：1. 细胞破碎：从生物体中获得酶源，如细胞、组织、分泌物等。
通常使用超声波破碎、搅拌破碎、离心等方法破碎细胞，并保持样品低温以防止酶的失活。
2. 酶提取：将破碎的细胞溶液用适当的缓冲液进行提取，并添加必要的辅助物质（如阻聚剂、金属离子等）以保持酶的稳定和活性。
3. 初步分离：通常先进行粗提，包括沉淀、超滤、离心、酒精沉淀等方法，目的是将酶与其他细胞组分分离开来。
4. 层析：根据酶的物理性质或化学性质选择适当的层析方法。
离子交换层析是常用的方法之一，根据酶与离子交换基质之间的相互作用进行分离。
5. 亲和层析：利用酶与特定配体之间的结合进行分离。
例如，选择性地将酶与亲和基质（如亲和剂或金属离子）结合，然后利用特定条件（如改变pH值或添加竞争性配体）来解离酶。
6. 离心和浓缩：通过离心和浓缩等操作，将目标酶进一步分离和提纯。
7. 再结晶：通过结晶或沉淀等方法进行酶的最终纯化。
8. 活性测定和纯度检验：测定酶的比活性，评估酶的纯度和活性。
总之，酶的分离提纯实验原理基于酶对物理、化学条件的敏感性，通过适当的分离方法和步骤，去除杂质，提高酶的纯度和比活性。
酶学实验实验报告结果
一、实验目的1. 了解酶的专一性。
2. 掌握验证酶的专一性的基本原理及方法。
3. 学会排除干扰因素，设计酶学实验。
4. 探究温度、pH值对酶活性的影响。
5. 了解酶的激活剂和抑制剂的作用。
二、实验原理酶是一种具有催化功能的蛋白质，具有高效性和专一性。
酶的专一性指的是酶只能催化特定的底物或底物类别进行反应。
本实验中，我们以唾液淀粉酶为例，探讨其专一性以及温度、pH值对酶活性的影响。
三、实验材料与仪器1. 材料：唾液、淀粉、蔗糖、班氏试剂、NaOH、HCl、蒸馏水、温度计、pH计、恒温水浴锅、试管等。
2. 仪器：试管、试管架、滴管、移液器、量筒、恒温水浴锅、pH计、温度计等。
四、实验方法1. 酶的专一性实验：- 将唾液用蒸馏水稀释，配制成一定浓度的酶液。
- 将淀粉和蔗糖溶液分别加入两支试管中，作为底物。
- 向两支试管中分别加入等量的酶液，混匀。
- 将两支试管放入恒温水浴锅中，在37℃下反应一段时间。
- 分别用班氏试剂检测两支试管中的反应产物。
2. 温度对酶活性的影响实验：- 将唾液用蒸馏水稀释，配制成一定浓度的酶液。
- 将淀粉溶液加入试管中，作为底物。
- 分别将酶液在不同温度（如30℃、37℃、50℃、60℃）下与淀粉溶液反应，观察反应产物。
3. pH值对酶活性的影响实验：- 将唾液用蒸馏水稀释，配制成一定浓度的酶液。
- 将淀粉溶液加入试管中，作为底物。
- 分别用NaOH和HCl调节酶液和淀粉溶液的pH值（如5.0、6.0、7.0、8.0），观察反应产物。
4. 酶的激活剂和抑制剂实验：- 将唾液用蒸馏水稀释，配制成一定浓度的酶液。
- 向酶液中加入适量的激活剂（如MgCl2）或抑制剂（如氟化钠），观察酶活性的变化。
五、实验结果与分析1. 酶的专一性实验：- 实验结果显示，淀粉溶液在唾液淀粉酶的作用下，产生了明显的还原性产物，而蔗糖溶液则没有产生还原性产物。
这说明唾液淀粉酶具有专一性，只能催化淀粉的水解。
检验科常见酶学检测项目解读
检验科常见酶学检测项目解读酶学检测是临床实验室中常用的一种检测方法，通过对体内酶的活性及相关指标的检测，可以提供一系列与机体各个系统功能相关的重要生理信息。
本文将详细介绍检验科常见的酶学检测项目及其解读。
一、丙氨酸氨基转移酶（ALT）ALT是一种存在于细胞质中的酶，主要分布在肝脏、心肌、肾脏及骨骼肌等组织中。
当细胞受到损伤时，ALT会释放到血液中，因此，血清ALT水平的升高常常是肝功能损害的指标。
正常成人血清ALT水平一般较低，男性参考范围为10-40 U/L，女性为7-35 U/L。
超出正常范围的ALT水平可能表示肝脏炎症、肝细胞坏死或药物性肝损伤等。
二、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）AST也是一种存在于多个组织中的酶，与细胞内的氨基酸代谢有关。
AST相对于ALT而言，其升高程度较低，因此AST常作为肝功能损害的辅助指标。
正常成人血清AST水平参考范围为10-34 U/L。
AST升高可见于多种疾病，如急性肝炎、心肌梗死、肝肿瘤或药物性损伤等。
三、乳酸脱氢酶（LDH）LDH是一种参与糖代谢的酶，广泛存在于多个组织和细胞中。
血清LDH主要源于组织损伤，LDH水平的升高常常提示组织坏死、炎症或缺血等情况。
正常成人血清LDH水平参考范围为109-245 U/L。
LDH的特异性较低，因此需要结合其他指标综合分析。
四、γ-谷氨酰转肽酶（GGT）GGT主要存在于肝脏、胆道和肾脏等组织中，具有很高的组织特异性。
血清GGT水平的升高常提示肝功能障碍、酒精性肝病、胆道梗阻或药物性肝损害等情况。
正常成人血清GGT水平参考范围为0-50 U/L，男性稍高于女性。
GGT的升高还可能与肥胖以及某些药物的使用有关。
五、碱性磷酸酶（ALP）ALP主要存在于肝脏、骨骼、胆道和肾脏等组织中，与细胞膜的磷酸化作用有关。
血清ALP水平的升高可提示肝胆道疾病、骨疾病或肿瘤扩散等情况。
正常成人血清ALP水平参考范围为45-125 U/L，男性稍高于女性。
酶学实验中的条件和影响因素
酶学实验中的条件和影响因素酶学是研究酶的性质和功能的学科，也是生物化学中极为重要的一个分支。
酶学实验是指通过实验手段研究酶的性质和功能的过程，而酶学实验中的条件和影响因素则是影响实验结果的关键因素之一。
一、温度酶在不同的温度下的活性有很大的差别，温度过高或过低都会影响酶的活性。
实验中如何确定适宜的温度才是一项关键任务。
通常采用以下方法来测定酶的适宜温度：1、测定酶的最适温度最适温度是指酶活性最高的温度，通常用酶活性与温度曲线来测定。
实验中选择不同的温度，分别测定酶的反应速率，绘制酶活性与温度的曲线，最后找出酶的最适温度。
2、测定酶的热稳定性和热失活温度热稳定性是指酶在高温下能保持一定活性时间的能力，而热失活温度则是指在该温度下酶的活性完全丧失的温度。
通常通过将酶在不同的温度下放置一定时间（如10分钟、30分钟），然后测定其活性，绘制酶活性与温度曲线，找出热失活温度。
二、pH值酶在不同的pH值下的活性也有较大的差异。
每种酶都有一个最适pH值，该值是使酶活性达到最高的pH值。
与温度类似，通常通过分别在不同pH值下测定酶的活性来测定其最适pH值。
另外，有些酶只有在一定pH值范围内才会保持稳定，如胃蛋白酶只有在pH 1.5～2.5时才能维持其稳定性。
三、底物浓度底物浓度是指在反应中起到底物作用的物质的浓度。
底物浓度对酶的活性也有很大的影响。
在底物浓度极低的情况下，酶活性受限于底物的供应；当底物浓度增加到一定程度时，酶活性达到最大值；而当底物浓度再增加时，酶活性反而会下降，这是由于过高的底物浓度可能会干扰酶与底物的结合。
实验中往往构建不同底物浓度的反应体系，通过测定反应速率来绘制底物浓度与反应速率之间的关系图。
四、抑制因素有些物质能够抑制酶的活性，称为抑制因子。
抑制因素可以分为两类：一类是可逆性抑制因子，即其影响可以通过增加底物浓度来克服；一类是不可逆性抑制因子，即其影响是永久性的。
实验中常采用诸如还原剂、重金属离子、化学物质等方法添加抑制剂，来观察其对酶的活性的影响。
酶的生化实验报告
实验名称：酶的催化活性及其影响因素实验日期：2023年X月X日实验目的：1. 了解酶的催化作用及其特性。
2. 探究温度、pH值、抑制剂对酶活性的影响。
3. 比较不同酶的催化效率。
实验原理：酶是一种生物催化剂，能够显著提高化学反应速率，而自身的化学性质和数量在反应过程中不发生变化。
本实验通过观察不同条件下酶的催化活性，探究影响酶活性的因素。
实验材料：1. 酶制剂：淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等。
2. 底物：淀粉、蛋白质、脂肪等。
3. pH缓冲液：pH 3、5、7、9、11。
4. 温度控制装置：恒温水浴箱。
5. 抑制剂：氟化钠、碘化物等。
实验方法：1. 酶活性测定：采用比色法，通过测量底物消耗量或产物生成量来判断酶的催化活性。
2. 温度对酶活性的影响：在pH 7条件下，分别在不同温度（0℃、25℃、37℃、50℃、75℃）下测定酶活性。
3. pH值对酶活性的影响：在25℃条件下，分别在不同pH值下测定酶活性。
4. 抑制剂对酶活性的影响：在25℃、pH 7条件下，分别加入不同浓度的抑制剂测定酶活性。
5. 不同酶的催化效率比较：在相同条件下，分别测定淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶的催化活性。
实验步骤：1. 准备实验材料，包括酶制剂、底物、pH缓冲液、温度控制装置、抑制剂等。
2. 设置实验条件，包括温度、pH值、抑制剂浓度等。
3. 按照实验步骤进行酶活性测定，记录实验数据。
4. 分析实验数据，绘制酶活性与温度、pH值、抑制剂浓度的关系曲线。
5. 比较不同酶的催化效率。
实验结果：1. 温度对酶活性的影响：酶活性随温度升高而增加，在适宜温度范围内达到最大值，过高或过低的温度会导致酶活性下降。
2. pH值对酶活性的影响：酶活性随pH值变化而变化，在适宜pH值范围内达到最大值，过高或过低的pH值会导致酶活性下降。
3. 抑制剂对酶活性的影响：抑制剂浓度增加，酶活性下降，在一定范围内呈负相关。
4. 不同酶的催化效率比较：淀粉酶的催化效率最高，其次是蛋白酶，脂肪酶的催化效率最低。
酶的活性测定实验
酶的活性测定实验酶是一类具有生物催化作用的蛋白质，广泛存在于生物体内。
通过测定酶的活性，可以更好地了解酶在生物体内的功能和作用。
本文将介绍一种常用的酶活性测定实验方法。
一、实验目的本实验旨在通过测定酶的活性，了解酶的催化作用和酶动力学特性。
二、实验原理本实验采用间接法测定酶的活性。
在反应过程中，酶与底物反应生成产物，产物的形成量与酶的活性呈正相关关系。
三、实验材料和仪器1. 酶溶液（待测）：使用酶提取物或商用酶溶液。
2. 底物溶液：适当浓度的底物溶液，可以根据实验需要选择不同的底物。
3. 反应液：含有酶溶液、底物溶液和缓冲溶液的混合液。
4. 停反液：酸性或碱性溶液，用于停止酶的活性。
5. 试管或微量离心管：用于容纳反应液和停反液。
6. 恒温水浴：用于控制反应的温度。
7. 分光光度计：用于测定反应液的吸光度变化。
四、实验步骤1. 准备反应液：根据实验需要，将适量的酶溶液、底物溶液和缓冲液按一定比例混合，制备反应液。
2. 设定反应温度：使用恒温水浴，将反应液恒温至所需的实验温度。
3. 开始实验：将预先准备好的反应液加入试管或微量离心管中，立即放入预热恒温水浴中开始反应。
4. 反应时间控制：根据酶活性的快慢，控制反应时间，一般可选择1-10分钟不等。
5. 停反应：反应结束后，立即加入适量的停反液，停止酶的活性。
6. 吸光度测定：将停止反应后的混合液取出一部分，使用分光光度计测定其在特定波长下的吸光度。
五、数据记录与分析1. 记录吸光度测定结果：将吸光度测定的结果记录下来，分别对应不同的测定时间点。
2. 绘制反应曲线：将吸光度与测定时间点进行绘制，得到反应曲线。
3. 计算反应速率：根据反应曲线的斜率，计算反应速率。
4. 测定酶活性：根据反应速率的计算结果，测定酶的活性，一般以单位时间内产生单位底物的量表示。
六、实验注意事项1. 实验过程中要严格控制温度，避免温度的变化对实验结果的影响。
2. 底物浓度和反应时间要根据实验需要进行适当选择，过高或过低的浓度和时间都会对实验结果产生影响。
酶学实验实验报告唾液
一、实验目的1. 了解唾液淀粉酶的生物学特性及其在消化过程中的作用。
2. 掌握酶活性测定的基本原理和方法。
3. 通过实验观察和分析唾液淀粉酶活性受温度、pH值等因素的影响。
二、实验原理唾液淀粉酶是一种消化酶，主要存在于唾液中，负责将食物中的淀粉分解为麦芽糖，为后续消化提供能量。
酶活性是指酶催化反应的能力，受多种因素的影响，如温度、pH值、底物浓度等。
本实验通过测定不同条件下唾液淀粉酶对淀粉的分解速率，观察酶活性变化。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 新鲜唾液- 淀粉溶液- 碘液- pH试纸- 温度计- 烧杯- 试管- 移液器2. 实验仪器：- 恒温水浴箱- 酶标仪- 移液器四、实验步骤1. 唾液淀粉酶活性测定：（1）取两只试管，分别加入2mL淀粉溶液。
（2）用移液器取1mL唾液，加入第一只试管中，混匀。
（3）将第一只试管放入37℃恒温水浴箱中，观察淀粉分解情况。
（4）每隔5分钟，用移液器取1mL反应液，加入碘液中，观察颜色变化。
（5）记录淀粉分解所需时间。
2. 温度对唾液淀粉酶活性的影响：（1）设置不同温度（如25℃、37℃、50℃、65℃）的水浴箱。
（2）重复步骤1，观察不同温度下淀粉分解所需时间。
3. pH值对唾液淀粉酶活性的影响：（1）用pH试纸测定唾液的pH值。
（2）调整唾液的pH值至不同水平（如4、5、6、7、8、9）。
（3）重复步骤1，观察不同pH值下淀粉分解所需时间。
五、实验结果与分析1. 唾液淀粉酶活性测定：在37℃恒温水浴箱中，淀粉分解所需时间为10分钟。
2. 温度对唾液淀粉酶活性的影响：随着温度升高，淀粉分解所需时间逐渐缩短，说明唾液淀粉酶活性随温度升高而增强。
在50℃时，淀粉分解所需时间最短，说明50℃为唾液淀粉酶的最适温度。
3. pH值对唾液淀粉酶活性的影响：随着pH值升高，淀粉分解所需时间逐渐缩短，说明唾液淀粉酶活性随pH值升高而增强。
在pH值为7时，淀粉分解所需时间最短，说明pH值为7为唾液淀粉酶的最适pH值。
酶活性的影响实验报告
一、实验目的了解酶活性受哪些因素的影响，探究不同因素对酶活性的影响程度，为后续酶学实验提供理论依据。
二、实验原理酶是一种生物催化剂，具有高效性、专一性和可调节性。
酶活性受多种因素影响，如温度、pH值、底物浓度、酶浓度、激活剂和抑制剂等。
本实验通过探究不同因素对酶活性的影响，了解酶活性的变化规律。
三、实验材料1. 试剂：淀粉酶、蔗糖酶、淀粉、蔗糖、NaOH、HCl、pH试纸、蒸馏水、斐林试剂等。
2. 仪器：试管、烧杯、量筒、胶头滴管、恒温水浴锅、pH计等。
四、实验方法1. 温度对酶活性的影响（1）将淀粉酶溶液分别置于0℃、25℃、40℃、60℃、80℃的恒温水浴锅中，保温5分钟。
（2）取等量淀粉加入各试管中，分别加入等量淀粉酶溶液。
（3）观察并记录各试管中淀粉水解的程度。
2. pH值对酶活性的影响（1）用pH试纸测定不同pH值（如3、5、7、9、11）的NaOH和HCl溶液。
（2）将淀粉酶溶液分别置于不同pH值的溶液中，保温5分钟。
（3）取等量淀粉加入各试管中，分别加入等量淀粉酶溶液。
（4）观察并记录各试管中淀粉水解的程度。
3. 底物浓度对酶活性的影响（1）将淀粉酶溶液分别置于25℃恒温水浴锅中。
（2）取不同浓度的淀粉溶液加入各试管中，分别加入等量淀粉酶溶液。
（3）观察并记录各试管中淀粉水解的程度。
4. 酶浓度对酶活性的影响（1）将淀粉酶溶液分别稀释成不同浓度。
（2）将淀粉酶溶液分别置于25℃恒温水浴锅中。
（3）取等量淀粉加入各试管中，分别加入不同浓度的淀粉酶溶液。
（4）观察并记录各试管中淀粉水解的程度。
5. 激活剂和抑制剂对酶活性的影响（1）在淀粉酶溶液中加入适量的激活剂（如金属离子）。
（2）在淀粉酶溶液中加入适量的抑制剂（如氟化物）。
（3）取等量淀粉加入各试管中，分别加入加入激活剂或抑制剂的淀粉酶溶液。
（4）观察并记录各试管中淀粉水解的程度。
五、实验结果与分析1. 温度对酶活性的影响随着温度的升高，淀粉酶活性逐渐增强，在40℃时达到最大值，之后随着温度的继续升高，酶活性逐渐降低。
第五章酶学基本知识实验
第十四章常用酶类测定第一节氧化还原酶类氧化还原酶能够催化氢氧原子或电子从一种底物转移到另一种底物上，它包括一大类酶如脱氢酶、氧化酶、过氧化物酶以及加单氧酶等。
目前临床诊断中常用的氧化还原酶主要有乳酸脱氢酶及其同工酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、铜蓝蛋白、单胺氧化酶和超氧化物歧化酶等。
实验92 连续监测法测定乳酸脱氢酶总活性(L-P反应法)乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LD)是糖酵解和糖异生的一个重要酶，含有锌离子，广泛分布于人和动物组织、植物和微生物中，能可逆地催化乳酸(L)和丙酮酸(P)之间的氧化还原反应。
乳酸+NAD+ 丙酮酸+NADH+H+其中L→P为正向反应，P→为逆向反应。
正反两向反应的最适pH不同，其中正向反应最适pH为8.8～9.8，偏碱，能使平衡偏向生成丙酮酸的方向。
其优点是乳酸和NAD+稳定性好，且NAD+纯品易得、价格较低，过量乳酸对LD活性的抑制较小，反应线性较好。
缺点是需要较高的底物浓度，反应速度较慢。
逆向反应的最适pH为7.4～7.8，与生理性pH相同。
其显著的优点在于NADH用量少，仅为正向反应的3%左右，而反应速度比前者约快3倍，灵敏度高。
但丙酮酸于NADH的稳定性较差，过量的丙酮酸对LD活性的抑制作用较大。
LD活性测定时正向反应和逆向反应都可以运用，但1996年中华医学会检验学会酶学组专家推荐选择正向反应。
【原理】LD催化下述反应：+++NADHNADL LD丙酮酸乳酸-H+−→+−在反应过程中，乳酸氧化生成丙酮酸，同时使NAD+还原为NADH。
NADH在340nm处有吸收峰，因此反应会引起340nm吸光度的增高，并且吸光度增加的速率与样本中LD活性呈正比的关系。
【试剂与器材】1．Tris-乳酸锂缓冲液(含Tris 52.5mmol/L ，乳酸锂52.5mmol/L) 称取Tris 6.34g ，乳酸锂5.04g ，溶于约800ml 蒸馏水中，置37℃水浴箱，使温度达到平衡后，在pH 计下用1mol/L 的HCl(约加入45ml)调节pH 至8.9，再加入蒸馏水至1 000ml ，冰箱保存。
认识酶的实验报告
认识酶的实验报告一、实验目的本实验旨在通过探究酶的性质和功能，加深对酶作用的认识，并进一步了解酶的作用机制。
二、实验原理1. 酶的定义：酶是一种能够加速生物体内生物化学反应速率的蛋白质。
2. 酶的特性：酶具有专一性、高效性和可逆性。
3. 酶促反应：酶与底物发生特异性结合，形成酶底物复合物，通过酶的催化作用，反应速率得到加快。
三、实验步骤1. 实验材料准备：酶溶液、底物溶液、试管、试管架、试管夹、显色剂等。
2. 实验步骤：- 步骤一：取两支试管，分别加入相同体积的酶溶液和底物溶液，并将其放入不同的试管架中。
- 步骤二：将试管架放入恒温槽中，保持温度恒定。
- 步骤三：同时开始计时器，并在不同的时间点分别取出试管，加入显色剂。
- 步骤四：观察试管中颜色的变化，并记录下时间和变化情况。
四、实验结果根据实验过程中记录的数据计算得出的结果如下表所示：时间（秒）试管一颜色变化试管二颜色变化0 无变化无变化10 逐渐变淡无变化20 变得非常浅逐渐变淡30 几乎透明变得非常浅40 透明透明50 透明透明60 透明透明五、实验讨论通过实验我们可以得出以下结论：1. 酶的作用是加速生物体内生物化学反应的速率，同时具有专一性、高效性和可逆性。
2. 本实验中，试管中的酶溶液通过与底物的特异性结合，催化反应，使底物的颜色变淡或透明。
3. 随着时间的增加，试管一和试管二中的底物都逐渐变淡或透明，说明酶的催化作用随时间的增加而增强。
六、实验总结通过本次实验，我们更加深入地理解了酶的性质和功能。
酶作为生物体内的催化剂，在代谢和生产过程中起着非常重要的作用。
同时，我们也学会了如何进行酶的活性检测实验，通过观察底物的变化情况来评估酶的催化效果。
然而，本次实验的结果可能受到实验条件的限制，如实验温度、酶浓度等因素。
因此，在今后的实验中，我们应该更加精确地控制实验条件，以获取更准确的实验结果。
总之，通过认识酶的实验，我们进一步了解了酶的作用机制，提高了对酶的认识和理解，并为今后的研究和应用提供了基础。
04 实验四 酶的性质
⑶ 稀释的唾液
【实验操作】
1．漱口后收集唾液，用小漏斗加脱脂棉过滤，用蒸馏水稀释5～20 倍(根据各人的酶活性而定)，混匀后备用。
2．取试管2支，各加稀释唾液2ml，一管直接加热煮沸，另一管置 冰浴中预冷5分钟。
3．另取4支试管，编号序号，按下表添加试剂：
步骤
1
试管编号
2
3
4
第一步
加1%淀粉液 20滴
本实验以蛋白酶和淀粉酶对相应底物蛋白质及淀粉的作用为例。来观察酶的特异性，实验 结果的检查根据酪蛋白水解生成酪氨酸，酪氨酸与福林试剂呈蓝色反应，淀粉能与碘起蓝色或
兰紫色反映来确定。
【实验材料】
1. 实验器材 试管及试管架；移液管； 烧杯；恒温水浴锅； 温度计 2. 实验试剂 ⑴ 1% 淀粉溶液：将1g淀粉溶解于100ml蒸馏水中。
实验四 酶的性质
酶学实验优化参数
酶学实验优化参数：酶学实验是利用酶进行化学反应的实验，是生物化学和分子生物学中的重要手段。
酶学实验的优化参数主要包括：
酶的活性：酶的活性是指酶在反应中的能力，是酶学实验的关键因素。
酶的活性受到很多因素的影响，如pH值、温度、抑制剂和促进剂等。
因此，在酶学实验中，应当选择合适的酶，并优化反应条件，以提高酶的活性。
酶的用量：酶的用量也是酶学实验中的重要参数。
过低的酶用量可能会导致反应速率过慢，而过高的酶用量则可能会导致酶耗尽，影响反应效率。
因此，在酶学实验中应当适当调整酶的用量，以达到最佳的反应效率。
过渡态反应：酶学实验过程中，反应速率会随着反应时间的增加而变化。
通常在反应初期速率较快，随后逐渐降低，最后又会再次升高。
这种变化称为过渡态反应。
在酶学实验中，应当尽可能避免过渡态反应，以保证反应速率的稳定。
反应温度：反应温度是影响酶活性的重要因素。
通常情况下，酶的活性随着温度的升高而增加，但超过一定温度后会发生酶蛋白质的热解，导致酶的活性下降。
因此，在酶学实验中应当选择适当的反应温度，以保证酶的最佳活性。
反应pH值：酶的活性也与反应pH值有关。
每种酶都有其最适宜的pH值，在该pH值范围内酶的活性较高。
因此，在酶学实验中应当选择适当的pH值，以保证酶的最佳活性。
酶学实验优化参数是提高反应效率和保证实验质量的关键因素。
在进行酶学实验时，应当根据实验要求和酶的特性，合理调整上述参数，以保证实验的成功。
酶学实验报告
酶学实验报告酶学是研究酶的性质、结构和反应机制的学科，其研究范围涉及酶的产生与合成、酶的性质和功能、酶的组成和结构、酶的催化反应机制、酶的应用等。
在酶学实验中，我们通过对不同酶的酶活性和稳定性等方面进行测定和分析，可以更好地了解酶的特性和催化机制，为酶的应用和开发提供理论依据和实验基础。
本次实验旨在通过测定蛋白酶的活性、比较不同温度对酶的影响、分析不同pH值下酶的活性，以及评估酶的热稳定性和储藏稳定性等方面，探究蛋白酶的特性和性质。
一、实验原理1.酶的活性酶是一种催化生物反应的蛋白质，通过加速化学反应的速率来起到催化作用。
酶的活性是指酶催化某种反应的速率和效果，是衡量酶催化能力的重要指标。
酶活性的测定常采用比色法、电泳法等方法进行。
2.温度对酶的影响温度是影响酶活性的重要参数之一，酶活性在一定温度范围内随温度的升高而增大，在超过一定温度后则会造成酶的变性。
酶的最适温度是在一定温度范围内酶活性最高的温度，一般情况下，不同酶的最适温度是有差异的。
pH值是指溶液中氢离子浓度的负对数。
不同酶对pH值的敏感度不同。
酶的酸碱敏感性是由其结构和催化机制决定的。
pH值对于酶的特性和稳定性都有显著的影响，一般情况下，不同酶的最适pH值也不同。
4.酶的热稳定性和储藏稳定性酶的热稳定性指酶在一定时间内在不同温度下的稳定性，衡量的是酶的热耐受性。
储藏稳定性指酶的储藏过程中的稳定性，衡量的是酶的保存性能。
二、实验步骤将0.1ml的pH 7.0的酶溶液、1.0ml的0.5%凝固玉米淀粉溶液和4.9ml的缓冲液混合搅拌，分别在50℃和60℃下孵育10分钟，加入5ml的双碘栗色液，比色计读取吸光度，计算出酶的活力。
分别将酶溶液分别置于不同温度下孵育1小时，测定酶的活性，同时分别将酶溶液置于4℃和-20℃中保存一定时间后测定酶的活力，比较其活性变化情况。
三、实验结果温度（℃）活力（U/ml）50 12.9660 6.33四、实验分析根据实验结果，可以看出温度对酶的活力有较大的影响，酶在较高的温度下会受到较大的抑制作用，酶的活性明显下降。
酶的特异性实训报告
一、实训目的1. 了解酶的特异性和作用机理。
2. 掌握酶的制备、分离和纯化的方法。
3. 通过实验验证酶的特异性，加深对酶学知识的理解。
二、实训内容1. 酶的制备与分离2. 酶的活性测定3. 酶的特异性实验三、实训原理酶是一种生物催化剂，具有高效、专一、可逆等特点。
酶的特异性是指酶对底物的专一性，即一种酶只能催化一种或一类底物。
酶的特异性主要表现为酶的活性中心对底物的空间结构和化学性质的专一性。
本实训主要研究蛋白酶对蛋白质底物的特异性。
四、实训步骤1. 酶的制备与分离（1）实验材料：蛋白酶、牛血清蛋白、SDS-PAGE凝胶、考马斯亮蓝G250等。
（2）实验步骤：① 将蛋白酶溶解于适量的磷酸盐缓冲溶液（pH 7.0）中，制备酶溶液。
② 将牛血清蛋白溶解于磷酸盐缓冲溶液中，制备底物溶液。
③ 采用SDS-PAGE技术对酶溶液和底物溶液进行分离。
④ 用考马斯亮蓝G250对分离后的酶和底物进行染色。
2. 酶的活性测定（1）实验材料：蛋白酶、底物溶液、显色剂、酶标仪等。
（2）实验步骤：① 将蛋白酶与底物溶液混合，在一定条件下进行反应。
② 在反应过程中，每隔一定时间取出一小部分反应混合液，加入显色剂，用酶标仪测定吸光度。
③ 以吸光度随时间的变化曲线来表示酶的活性。
3. 酶的特异性实验（1）实验材料：蛋白酶、不同类型的底物（如淀粉、蔗糖、蛋白质等）、显色剂、酶标仪等。
（2）实验步骤：① 将蛋白酶分别与不同类型的底物混合，在一定条件下进行反应。
② 在反应过程中，每隔一定时间取出一小部分反应混合液，加入显色剂，用酶标仪测定吸光度。
③ 比较不同底物对酶活性的影响，验证酶的特异性。
五、实验结果与分析1. 酶的制备与分离实验结果显示，SDS-PAGE技术能够有效地将酶溶液和底物溶液分离，且酶和底物在凝胶上呈现不同的迁移速度，表明酶的分子量与底物存在差异。
2. 酶的活性测定实验结果显示，酶的活性随时间延长而增加，表明蛋白酶具有一定的催化活性。
酶的基本性质实验——底物专一性、激活剂和抑制剂、最适温度
因此它们与Benedict试剂无呈色反应。
淀粉被淀粉酶水解，产物为葡萄糖；蔗糖被蔗糖酶水解，其产物为果糖和葡
萄糖，它们都为具有自由半缩醛羟基的还原糖，与Benedict试剂共热，即产生
红棕色Cu2O沉淀。本实验以此颜色反应观察淀粉酶、蔗糖酶对淀粉和蔗糖的水 解作用。
三、实验材料与试剂 1、实验材料 ⑴ 蔗糖酶液(样品Ⅳ）; ⑵ 新鲜唾液（含唾液淀粉酶）； 2、实验试剂 ⑴ 蔗糖酶液
在酶促反应过程中，酶的活性常受某些物质的影响，有些物质能使酶的 活性增加，称为激活剂；某些物质它们并不引起酶蛋白变性，但能使酶 分子上的某些必需基团（主要是指酶活性中心上的一些基团）发生变化， 因而引起酶活力下降，甚至丧失，致使酶反应速度降低，称为酶的抑制 剂。
酶的激活剂种类： 1、一些简单的无机离子，如Mg2+、Cl-等；
有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种，而对另一种则 全无作用。如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型 的糖。
本实验以唾液淀粉酶、蔗糖酶对淀粉、蔗糖水解反应的催化作用来观察 酶的专一性。采用Benedict试剂检测反应产物。
Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖
蒸馏水 Benedict试剂
记录观察结果
(ml) (ml)
3
2
2
2
摇匀，置沸水浴煮沸2～3min
注： ①检查目的：试剂是否有干扰因素存在。 ②也可对蔗糖酶液、唾液淀粉酶液进行检查是否也有干扰因素存在，请自己设计。
检查试剂
试管编号：
1
2
3
㈡淀粉酶的专一性 取三支试管，按下表操作：
试剂处理
试管编号
1
温度与酶活力的关系测定是选择一定的条件，把底物浓度、酶浓度、反应 时间、pH等固定在最适状态下，然后在一系列不同温度条件下，进行反应初 速度测定，以酶反应初速度对温度作图，可以得一个钟罩形的曲线，即为温 度—酶活性曲线，在某温度有一酶活力最大值，这个温度即为最适温度。
酶学实验实验报告
一、实验目的1. 了解酶的专一性原理和实验方法。
2. 掌握验证酶专一性的基本操作步骤。
3. 分析实验结果，加深对酶专一性的理解。
二、实验原理酶是一种生物催化剂，具有高度的底物专一性，即一种酶只能催化一种或一类底物发生反应。
本实验以唾液淀粉酶为例，探讨其专一性。
唾液淀粉酶能够催化淀粉水解生成麦芽糖，但对蔗糖无催化作用。
三、实验材料1. 试剂：唾液、淀粉溶液、蔗糖溶液、班氏试剂、碘液、氢氧化钠溶液、盐酸溶液、蒸馏水。
2. 仪器：试管、试管架、恒温水浴、移液器、滴管。
四、实验步骤1. 取三支试管，分别标记为A、B、C。
2. 向A、B、C试管中分别加入2ml淀粉溶液。
3. 向A试管中加入2滴唾液，混合均匀。
4. 向B试管中加入2滴蔗糖溶液，混合均匀。
5. 将A、B试管置于37℃恒温水浴中反应5分钟。
6. 取两支新的试管，分别标记为D、E。
7. 向D、E试管中分别加入2ml淀粉溶液。
8. 向D试管中加入2滴唾液，混合均匀。
9. 向E试管中加入2滴碘液，混合均匀。
10. 观察A、B、D、E试管中溶液颜色的变化。
11. 向F试管中加入2ml淀粉溶液，加入2滴氢氧化钠溶液，混合均匀。
12. 向G试管中加入2ml淀粉溶液，加入2滴盐酸溶液，混合均匀。
13. 将F、G试管置于37℃恒温水浴中反应5分钟。
14. 观察F、G试管中溶液颜色的变化。
五、实验结果与分析1. A试管中溶液颜色变浅，说明唾液淀粉酶能够催化淀粉水解生成麦芽糖。
2. B试管中溶液颜色未发生变化，说明唾液淀粉酶对蔗糖无催化作用，验证了酶的专一性。
3. D试管中溶液颜色变浅，说明唾液淀粉酶在碱性条件下仍具有活性。
4. E试管中溶液颜色未发生变化，说明唾液淀粉酶在酸性条件下活性降低。
5. F、G试管中溶液颜色未发生变化，说明pH值对唾液淀粉酶的活性有影响。
六、结论1. 唾液淀粉酶具有专一性，只能催化淀粉水解生成麦芽糖。
2. 唾液淀粉酶在碱性条件下活性较高，在酸性条件下活性降低。
酶学实验
3． Km的求法----双倒数作图法 Km的求法----双倒数作图法 的求法---因上述曲线为一渐近线，Vm不便得到 因上述曲线为一渐近线，Vm不便得到 准确的数值，若把米准确的数值，若把米-曼方程式的两边取倒 数，则方程式变为 ： 1 V Km 1 × ＋ [S] Vm 1 Vm
以1/V对1/[S]作图，可以得到一直线， 1/V对1/[S]作图，可以得到一直线， 作图 该直线在纵轴上的截距为1/Vm 1/Vm， 该直线在纵轴上的截距为1/Vm，横轴上的 1/Km，斜率为Km/Vm Km/Vm。 截距是 -1/Km，斜率为Km/Vm。 1/V 1/Vm
V Vm
零级反应期 混合反应期 一级反应期
0
[S]
一级反应期： 一级反应期：反应速度与底物浓度成 正比。 正比。 零级反应期： 零级反应期：底物浓度远远大于酶浓 反应速度达极限值， 度，反应速度达极限值， V=Vm。 即V=Vm。 混合反应期： 混合反应期：介于零级反应期与一级 反应期之间 之间。 反应期之间。
4． 激活剂和抑制剂 凡能提高酶活力的物质都称为激活剂。 凡能提高酶活力的物质都称为激活剂。 大部分为无机离子和简单的有机化合物。 大部分为无机离子和简单的有机化合物。 酶分子中活性中心上的基团的性质受 到某些化学物质的影响而发生改变， 到某些化学物质的影响而发生改变，导致 酶活性的降低或丧失，称为抑制作用。而 酶活性的降低或丧失，称为抑制作用。 这些物质则称为抑制剂。 这些物质则称为抑制剂。
五．动力学参数 1． Km的意义 Km的意义 由米-曼方程式可知： Vm时 由米-曼方程式可知：当V = 1/2 Vm时， [S]， 就是酶促反应速度V Km = [S]，故 Km 就是酶促反应速度V等于 最大反应速度Vm一半时的底物浓度。 Vm一半时的底物浓度 最大反应速度Vm一半时的底物浓度。 注意：Km有单位，单位同[S] 注意：Km有单位，单位同[S]，用mol/L或 [S]， mol/L或 有单位 mmol/L表示 它是酶的特征性常数。 表示。 mmol/L表示。它是酶的特征性常数。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验一、木瓜蛋白酶活性测定实验(明胶法)(一)实验原理木瓜蛋白酶从明胶中分解出氨基酸和肽，其氨基型氮可用甲醛复分解，产生氢离子，浓度可用氢氧化钠溶液滴定。
(二)定义一个木瓜蛋白酶单位相当于在规定条件下分解1ug分子量的肽键时所需的酶量。
(三)试剂1. 底物明胶2. 柠檬酸盐缓冲液(pH5.0) 取70.000g一水柠檬酸溶于720mL 1mol/L氢氧化钠溶液中。
用1mol/L氢氧化钠溶液将pH调至5.0，用蒸馏水定容至1000mL。
3. 37%甲醛溶液4. 酚酞溶液取0.5g酚酞溶于95%的乙醇中，并定容至50mL。
5. 0.1mol/L氢氧化钠溶液取4.0克氢氧化钠置于洁净干燥的烧杯中，加纯水稀释、搅拌溶解，将溶液移入1000ml洁净容量瓶中定容至刻度。
6. 酶溶液用蒸馏水溶解酶，每毫升配制溶液应含有40U左右。
酶的称量一定得按以下原则确定：用于主值和空白值试验的耗量之差应在1.8～2.2mL这一范围内。
此外需用一个合适的称量重复测定几次。
(四)操作步骤称取500mg明胶放入一只100mL锥形烧瓶内，加8mL蒸馏水，加热后明胶溶解。
待明胶完全溶解加2.0mL柠檬酸盐缓冲液，置于水浴中冷却至40℃。
加5.00mL已预热至40℃的酶溶液，于40℃下保温60min，加10.0mL甲醛溶液终止反应。
加0.5mL酚酞溶液后用0.1mol/L氢氧化钠溶液滴定，直至第一次出现明显的粉红色为终点。
用同样方法测定空白值，只是这里在添加酶溶液之前先添加甲醛溶液。
在空白值测定方面耗去大约5mL 0.1mol/L氢氧化钠溶液。
(五)计算用以下公式计算酶活性：酶活力(U/mg)=(H-B)/E W×100式中：H-用于主值的滴定耗量(mL)；B-用于空白值的滴定耗量(mL)；100-相当于1mL0.1mol/L氢氧化钠溶液；E W-每5.0mL所用酶液中含有酶的重量(mg)。
举例：测定一个木瓜蛋白酶样品。
从样品中称取68.2mg，定容100mL。
5 mL此溶液中含有3.41mg样品。
8.52mL滴定耗于空白值试验，10.57mL耗于主值试验。
则酶活性为：(10.57-8.52)×100/3.41=60.1 U/mg实验二、木瓜蛋白酶在肉类嫩化中的应用动物肉类是人类生活不可缺少的食品。
在肉的全部质量特征中，嫩度是影响其食品质量的重要特征。
决定肉硬度的最主要因素是肌原纤维和结缔组织，而肉的总嫩度基本上是由结缔组织中胶原蛋白含量决定。
通过添加蛋白酶、使肉类胶原蛋白中的肽键和交联发生断裂，破坏蛋白质严密的空间结构，可使肉嫩化。
生产中最常用的是木瓜蛋白酶，它是一种含巯基的内切酶，半酰氨基蛋白酶，具有广谱的水解活性。
主要在烹调过程中起作用。
它能在酸、碱和中性环境下降解肌原纤维和结缔组织的蛋白质，将肌动球蛋白和胶原蛋白降解成小分子的多肽和氨基酸，令肌丝和筋键断裂，使肉类变嫩。
(一)操作步骤将选取牛肉剔出可视的结缔组织和脂肪，切成3cm×3cm×1cm的小块。
分别用0%、0.002%和0.005%浓度的木瓜蛋白酶溶液浸泡，将肉块在4℃贮存30min。
置于恒温水浴锅内，水温恒定在80 ℃。
当肌肉中心温度达70 ℃时，取出，冷却至室温，用直径为1 cm的空心取样器钻取肉柱(避开筋腱)，用C-LM嫩度仪测定其剪切力值。
每个肉样测定6个重复，取平均值。
实验三、唾液淀粉酶活性测定一、实验目的1．了解淀粉酶对不同底物的专一性； 2．了解温度对酶的影响；3．掌握测定淀粉酶活力的原理和基本方法。
二、实验原理淀粉酶能作用于淀粉中的α-1,4葡萄糖苷键，使淀粉分解为麦芽糖。
反应方程式如下：2（C 6H 10O 5）n + n H 2On C 12H 22O 11但是淀粉酶不能作用于蔗糖分子的α-D 吡喃葡萄糖的C1和b-D-呋喃果糖的C2之间的糖苷键。
淀粉的还原性极小，而唾液淀粉酶（主要含α-淀粉酶）水解淀粉后形成的麦芽糖有还原性，使3,5-二硝基水杨酸（DNS 试剂）还原成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
据此可以检验蔗糖和淀粉有无被唾液淀粉酶水解，从而了解酶作用的专一性。
本实验以一定量的唾液淀粉酶液，于37℃、pH6.8的条件下，在一定的初始作用时间里将淀粉转化为还原糖，然后通过与3,5-二硝基水杨酸试剂（DNS 试剂）作用，比色测定，求得还原糖的生成量，从而计算出酶反应的初速度，即酶的活力。
在一定范围内，反应液的棕色深浅与还原糖的含量成正比，在波长500nm 处测定溶液的吸光度，根据标准液浓度得吸光度，便可求得样品中还原糖得含量。
三、实验器材1．实验材料：淀粉酶液2．实验试剂：可溶性淀粉、二硝基水杨酸、酒石酸钾钠、磷酸缓冲液（0.2 mol/L ，pH6.8）、1mg/ml 标准麦芽糖溶液3．实验设备：刻度试管（25mL×10）、洗瓶、试管架、玻棒、水浴锅、分光光度计、滤纸四、试剂的配制淀粉酶1. 淀粉溶液（0.5%）称取5g可溶性淀粉，溶于1000mL热水中。
（临用前配制）2. 蔗糖溶液（1%）称取蔗糖1g，将之溶于蒸馏水后定容至100ml。
3. 3,5-二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）将5.0g 3,5-二硝基水杨酸溶于200mL 2N NaOH溶液中（不适宜用高温促溶），接着加入500mL含130g酒石酸钾钠的溶液，混匀。
再加入5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解后，定容至1000mL。
暗处保存备用。
4. 磷酸缓冲液（0.2mol/L，pH6.8）A液—0.2mol/L Na2HPO4溶液：称取35.62g Na2HPO4·12H2O，将之溶于蒸馏水后定容至1000ml。
B液—0.1mol/L柠檬酸溶液：称取19.212g无水柠檬酸，将之溶于蒸馏水后定容至1000ml。
取A液14.55ml、B液5.45ml混合而成pH6.8缓冲液。
5. NaOH溶液（2N）量取80 ml去离子水置于100~200 ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。
称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌，待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液定容至100 ml，将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。
6. 1mg/ml 标准麦芽糖溶液：取100mg 麦芽糖溶于100mL超纯水中。
五、实验步骤1．唾液淀粉酶的制备（1）提取：先用水漱口清洁口腔，然后含1小口（约5 ml）蒸馏水于口中轻漱1~2 min。
（2）过滤：将口腔中的酶提取液用滤纸过滤。
（3）稀释：取滤液1 ml，用水定容至50 ml。
作为淀粉酶的样品。
注意：由于不同人或者同一人不同时间收集到的唾液淀粉酶的活性并不相同，稀释倍数可以是50~300倍，甚至超过此范围。
2．唾液淀粉酶的专一性实验取25mL刻度试管4支试管，按表1编号并记录所观察到的颜色。
3．唾液淀粉酶活力的测定用5号空白管做对照：在500nm处测定3、6管的吸收值。
将数据填入表1。
4. 计算根据溶液浓度与光吸光值成正比的关系，即：A标准/A酶=c标准/c酶则c（酶液管中麦芽糖浓度）＝（A酶×c酶）/A标准，（其中c为浓度，A为吸光值）本实验规定：在37℃、pH6.8的条件下，每3min水解淀粉释放1mg麦芽糖所需的酶量为1个酶活单位。
总活力单位＝c酶×n酶（c酶为麦芽糖的浓度；n酶为稀释倍数）六、实验结果记录1．计算酶活。
2．为什么酶促反应要在37℃水浴？沸水浴的目的是什么？3. 本实验验证了酶的哪些特性？附：分光光度计的使用：（1）先了解仪器的各个操作旋钮的功能和电表的读数方法。
（2）开启电源，指示灯亮，选择开关置于“T”，波长调置使用波长。
打开比色皿暗箱盖（光门自动关闭），预热20min后。
（3）将预先装好空白溶液和待测液的比色杯，依次放入暗箱内的比色皿架上。
◆比色杯中所盛溶液不宜过满，大概2/3体积，若不慎使溶液流出比色杯外面，应用滤纸吸干，再用擦镜纸擦净后才能放入比色杯架内。
◆手不能接触比色杯的光滑面，切忌用滤纸等物擦拭比色杯的光滑面。
（4）打开暗箱盖，调节“0”旋钮，使数字显示为“00.0”。
盖上暗箱盖，将对照液处于校正位置，使光电管受光，调节透光率“100”旋钮，使数字显为“100.0”。
连续几次调整“00.0”和“100.0”，仪器即可进行测定工作。
◆如果显示不到“100.0”，则可适当增加微电流放大器的倍率档数，但尽可能使用低倍率档，这样仪器有更高的稳定性。
但改变倍率后必须按步骤4重新校正“00.0”和“100.0”。
（5）将选择开置于“A”，调节吸光度调零旋钮，使得数字显示为“.000”，然后将待测样品移入光路，现实值即为吸光值。
◆测定时尽量使光吸收值不要超过1。
（6）测定完毕，将每个旋钮、开关和调节器等复原和关闭，拔掉电源插头。
◆用完比色杯后立即用自来水冲洗比色杯，再用蒸馏水洗净，将比色杯倒立晾干；每套仪器所配套的比色皿，不能与其他仪器上的比色皿单个调换。
试剂：明胶、一水柠檬酸、氢氧化钠、蒸馏水、甲醛、酚酞、乙醇、酶、可溶性淀粉、蔗糖、3,5-二硝基水杨酸、酒石酸钾钠、结晶酚、亚硫酸钠、Na2HPO4·12H2O、无水柠檬酸、麦芽糖、刻度试管材料：锥形烧瓶、电炉、水浴锅、10mL试管、碱式滴定管、100mL 烧杯、剪刀、1000mL容量瓶、50 mL容量瓶、100 mL容量瓶、10mL 移液管、吸耳球、pH计、电子天平、C-LM嫩度仪、冰箱、牛肉、玻棒、水浴锅、分光光度计。