血栓与止血检验实验诊断(课件)

【参考值】 PT （凝血酶原时间）: 10-14s PTA（活动度）：80%-120% PTR（比值）：0.8-1.2 INR（国际标准化比值）：0.8-1.5
1、凝血酶原时间测定（prothrombin time，PT）
【结果报告形式】 凝血酶原时间（PT）：大于正常3秒以上为异常。 凝血酶原活动度（PTA）= PTR×100% PT比值（PTR）=患者PT/正常对照PT 国际标准化比值（INR）=PTRISI
2、活化部分凝血活酶时间测定
（Activated partial thromboplastin time，APTT） 【原理】在抗凝血浆中，加入足量的活化接触因子激活剂和部分凝 血活酶（代替血小板的磷脂），再加入适量的钙离子即可满足内源 性抗凝血的全部条件。从加入钙离子到血浆凝固所需的时间即称为 活化部分凝血活酶时间。 【步骤】血浆＋FXII激活剂＋部分凝血活酶＋钙离子
1、仪器检测功能：
Sysmex CA-7000及CS-5100全自动凝血分析仪检测项 目有十几种，常规的检验项目有PT、APTT、TT、Fbg、D二聚体、FDP等。两台仪器检测原理相同，具有全自动浓 度稀释分析功能、自动再检、自动连锁筛选等功能，全自 动进样架进样、全能随机分析、急诊随时插入分析。采用 高频振荡混匀技术，能够保证样本和试剂充分混匀，四组 检测波长能够满足不同厂家试剂的需求。
2、凝血因子及其命名
概念：把在血液和组织中直接产凝血的物质统称为凝血因子 因子I 因子II 纤维蛋白原 因子VIII 抗血友病因子甲 凝血酶原 因子IX 抗血友病因子乙
因子III 因子IV
因子V 因子VII
组织因子 钙离子
易变因子 稳定因子
因子X 因子XI
因子XII
前期加速素、Stuart因子 血浆凝血活酶前质
观察凝固时间.
【参考值】正常对照为20～35s,超过正常对照10s以上为异常。
2、活化部分凝血活酶时间测定
（Activated partial thromboplastin time，APTT） 【分析流程】
50μl血浆
50μlAPPT试剂
50μl的氯化钙溶液
1分钟加热
3分钟加热-----------检测
血栓与止血检验 实验诊断
高科
随着血栓与止血检验在临床科室的广 泛应用，凝血项目的检测已成为出血性疾 病和血栓性疾病的常规检验项目；也成为 手术患者术前筛查有无凝血系统疾病的常 规检验项目；也是判断抗凝和溶栓治疗监 测的关键指标。
内容导读
一、血栓及止血基本理论 二、凝血项目测定的原理及临床意义 三、全自动凝血分析仪的检测方法及原理 四、凝血标本采集的注意事项 五、凝血检测相关问题
3、凝血酶时间测定（Thrombin time，TT）
【异常意义】 1、延长： ①见于肝素增多或类肝素抗凝物质增多。 如SLE、肝病、肾病等，低（无）纤维蛋白血症。 ②纤维蛋白原降解产物（FDP）增多、 如DIC、原发性纤溶等。 ③肝素抗凝治疗、体外循环、血液透析等。 2、缩短： 见于血标本有微小凝块或钙离子存在时。
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固（瀑布学说）
该学说认为血液凝固过程基本上是一系列凝血因 子有限水解的过程，凝血过程一旦开始，各个凝血因 子便一个激活另一个，形成一个“瀑布”样的反应链 直至血液凝固。每个凝血因子都被其因子或其他有关 因素激活，最后生成纤维蛋白。

一、血栓及止血基本理论
1、血液凝固 2、凝血因子及其命名 3、凝血过程 4、瀑布学说 5、抗凝及溶栓治疗监测的指标
1、血液凝固
血液凝固是血液由液体状态转为凝胶状 态的过程，简称为凝血。
机体的凝血系统是非常精妙的平衡系统，由凝血 与抗凝两方面组成，正常生理状态下两者维持着动态 平衡，血液在血管中维持着流动状态，而血管损伤时 便快速形成凝块，当止血功能障碍时便发生血栓栓塞 或出血现象。
2、仪器检测方法：
全自动血凝分析系统CA-7000用于凝血、抗 凝、纤维蛋白溶解系统因子的检测，系统采用 以下三种检测方法： 1）、 凝固法 2）、 发色底物法 3）、 免疫分析法
注：凝固法采用了散射光加百分比凝固测定原理， 能有效地避免溶血、脂血和及黄疸标本对凝固分析 测定干扰
1、凝血酶原时间测定（prothrombin time，PT）
世界卫生组织（WHO）推荐 应用口服抗凝剂时 【INR的允许范围】： 非髋部外科手术前 1.5-2.5; 髋部外科手术前 2.0-3.0; 深静脉血栓形成 2.0-3.0; 治疗肺梗塞 2.0-4.0; 预防动脉血栓形成 3.0-4.0; 人工瓣膜手术 3.0-4.0
4、纤维蛋白原（Fibrinogen FIB 或Fbg）测定：
【测定原理】 Clauss法，也叫凝血酶法。 为WHO推荐的测定Fbg的参考方法。 即在被检血浆中加入过量的凝血酶，血浆即凝固， 其凝固时间与纤维蛋白原浓度呈负相关，从国际标准品 Fbg参比血浆测定的标准曲线中可获得Fbg浓度。
【参考范围】：2.00-4.00 g/L
接触因子
因子XIII 纤维蛋白稳定因子
因子II、VII、IX、X都是在肝脏合成的，合成时需维生 素K参与，因此也称为维生素K依赖因子。
3、凝血过程
包含：三条途径或两个系统
① 内源性凝血途径：指由因子XII被激活到IXa-VIIIaCa2+-PF3复合物形成的过程。 ② 外源性凝血途径：指从组织因子(TF)释放入血到TF-VIIaCa2+复合物形成的过程。 ③ 共同途径：指从因子X的激活到纤维蛋白形成的过程，它 是内、外源凝血系统的共同凝血阶段。
4、纤维蛋白原（Fibrinogen FIB 或Fbg）测定：
【分析流程】 样品量 试剂量 血浆 10μl 凝血酶试剂 50μl Owren’s Veronal 缓冲液 90μl
90ul Owren’s Veronal 缓冲液
10μl血浆
50μl凝血酶试剂
3分钟加热------检测
4、纤维蛋白原（Fibrinogen FIB 或Fbg）测定：
【临床应用】 1、是反映外源性凝血系统最常用的筛查试验。 2、是监测口服抗凝剂的首选指标。 3、是维生素K缺乏的监测指标。
【异常意义】 1、PT延长见于： ①先天性凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ缺乏。 ②后天性缺乏，见于DIC、严重肝病、维生素K缺乏等。 2、PT缩短见于：DIC早期高凝状态、血栓性疾病、心肌梗 死等。 3、口服抗凝剂的监测。
3、凝血酶时间测定（Thrombin time，TT）
【原理】在受检血浆中加入标准化的凝血酶溶液后，
在凝血酶的作用下纤维蛋白原转变成纤维蛋白，记录血 浆凝固所需的时间为凝血酶时间。
【步骤】血浆＋凝血酶
观察凝固时间
【参考值】正常对照为14～21s，大于正常对照3s以上 为异常。
3、凝血酶时间测定（Thrombin time，TT）
5、D-二聚体测定（仪器分析法）
【临床应用】 1、用于弥漫性血管内凝血（DIC）的早期诊断。 2、用于血栓疾病的诊断和溶栓疗效的观察。 3、用于肝炎病情的观察。 4、在血液病方面的临床应用。 5、慢性支气管炎急性发作期合并肺部感染。 6、在深静脉血栓、急性心梗、肺栓塞、脑梗死诊断中 的应用。
2、活化部分凝血活酶时间测定
（Activated partial thromboplastin time，APTT）
【临床应用】 1、是检查内源性凝血系统是否正常的筛查试验。 2、用于证实先天性或获得性凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ是否缺陷。 3、是普通肝素治疗监测的首选指标。
2、活化部分凝血活酶时间测定
（Activated partial thromboplastin time，APTT)
5、D-二聚体测定（仪器分析法）
【原理】免疫比浊法
将待测物质相对应的单克隆抗体包被在聚苯乙烯胶乳颗 粒上，当标本中含有D-二聚体时，单克隆抗体即与交联纤维 蛋白降解产物（D-二聚体）的交联区域结合。单克隆抗体能 触发凝集反应，引起浊度的增加。仪器在800nm处通过对浊度 改变的监测，将吸光度转换成浓度值，由此获得样本中D-二 聚体的含量。 【参考值】 0 - 1 mg/L
血凝四项手工法操作步骤（试管法）
项目 PT APTT TT
血浆
APTT
100ul
—
100ul
100ul
100ul
—
混匀后将试剂和标本置于37°水浴箱 PT CaCl2 TT 200ul — — — 100ul — — — 200ul
观察凝固时间
三、全自动凝血分析仪的检测 方法及原理
1、仪器检测功能 2、仪器检测方法及原理
5、D-二聚体测定（仪器分析法）
【临床意义】 1、D-二聚体被视为DIC早期诊断的首选标志物。 2、D-二聚体可做为溶栓疗效观察的一个特异性指标。 3、D-二聚体含量的升高幅度与肝炎病情的严重程度密切相关。 4、D-二聚体是唯一反映凝血和纤溶的理想指标。 5、D-二聚体是目前鉴别原发性和继发性纤溶的理想指标。 6、D-二聚体被视为体内高凝状态和纤溶亢进的分子标志物。 7、D-二聚体升高不能诊断血栓的形成部位却能够提示体 内是否有血栓的形成。
【异常意义】 1、延长: (1) 见于因子Ⅷ Ⅸ 和Ⅺ水平减低，如甲型血友病、乙型血友病等。 (2) 严重的凝血酶原、 因子Ⅴ、Ⅹ和纤维蛋白原缺乏。如肝脏疾病、阻 塞性黄疸、应用肝素以及低(无)纤维蛋白原血症。 (3)纤容活力增强，如继发性、原发性纤溶以及血循环中含有纤维蛋白(原) 降解物(FDP)。 2、缩短 （1）高凝状态，如DIC的高凝血期，促凝物质进入血流以及凝血因子的活 性增高等。 （2）血栓性疾病，如心肌梗塞、不稳定性心绞痛、脑血管病变、糖尿病伴 血管病变、肺梗死、深静脉血栓形成、妊高征和肾病综合征等。
PT 测定值 INR = PT 正常人均值