血栓与止血检验实验诊断(课件)

5、D-二聚体测定（仪器分析法）
【原理】免疫比浊法
将待测物质相对应的单克隆抗体包被在聚苯乙烯胶乳颗 粒上，当标本中含有D-二聚体时，单克隆抗体即与交联纤维 蛋白降解产物（D-二聚体）的交联区域结合。单克隆抗体能 触发凝集反应，引起浊度的增加。仪器在800nm处通过对浊度 改变的监测，将吸光度转换成浓度值，由此获得样本中D-二 聚体的含量。 【参考值】 0 - 1 mg/L
1、凝血酶原时间测定（prothrombin time，PT）
世界卫生组织（WHO）推荐 应用口服抗凝剂时 【INR的允许范围】： 非髋部外科手术前 1.5-2.5; 髋部外科手术前 2.0-3.0; 深静脉血栓形成 2.0-3.0; 治疗肺梗塞 2.0-4.0; 预防动脉血栓形成 3.0-4.0; 人工瓣膜手术 3.0-4.0
血栓与止血检验 实验诊断
高科
随着血栓与止血检验在临床科室的广 泛应用，凝血项目的检测已成为出血性疾 病和血栓性疾病的常规检验项目；也成为 手术患者术前筛查有无凝血系统疾病的常 规检验项目；也是判断抗凝和溶栓治疗监 测的关键指标。
内容导读
一、血栓及止血基本理论 二、凝血项目测定的原理及临床意义 三、全自动凝血分析仪的检测方法及原理 四、凝血标本采集的注意事项 五、凝血检测相关问题
4、纤维蛋白原（Fibrinogen FIB 或Fbg）测定：
【测定原理】 Clauss法，也叫凝血酶法。 为WHO推荐的测定Fbg的参考方法。 即在被检血浆中加入过量的凝血酶，血浆即凝固， 其凝固时间与纤维蛋白原浓度呈负相关，从国际标准品 Fbg参比血浆测定的标准曲线中可获得Fbg浓度。
【参考范围】：2.00-4.00 g/L
接触因子
因子XIII 纤维蛋白稳定因子
因子II、VII、IX、X都是在肝脏合成的，合成时需维生 素K参与，因此也称为维生素K依赖因子。
3、凝血过程
包含：三条途径或两个系统
① 内源性凝血途径：指由因子XII被激活到IXa-VIIIaCa2+-PF3复合物形成的过程。 ② 外源性凝血途径：指从组织因子(TF)释放入血到TF-VIIaCa2+复合物形成的过程。 ③ 共同途径：指从因子X的激活到纤维蛋白形成的过程，它 是内、外源凝血系统的共同凝血阶段。
2、仪器检测方法：
全自动血凝分析系统CA-7000用于凝血、抗 凝、纤维蛋白溶解系统因子的检测，系统采用 以下三种检测方法： 1）、 凝固法 2）、 发色底物法 3）、 免疫分析法
注：凝固法采用了散射光加百分比凝固测定原理， 能有效地避免来自百度文库血、脂血和及黄疸标本对凝固分析 测定干扰
观察凝固时间.
【参考值】正常对照为20～35s,超过正常对照10s以上为异常。
2、活化部分凝血活酶时间测定
（Activated partial thromboplastin time，APTT） 【分析流程】
50μl血浆
50μlAPPT试剂
50μl的氯化钙溶液
1分钟加热
3分钟加热-----------检测
【参考值】 PT （凝血酶原时间）: 10-14s PTA（活动度）：80%-120% PTR（比值）：0.8-1.2 INR（国际标准化比值）：0.8-1.5
1、凝血酶原时间测定（prothrombin time，PT）
【结果报告形式】 凝血酶原时间（PT）：大于正常3秒以上为异常。 凝血酶原活动度（PTA）= PTR×100% PT比值（PTR）=患者PT/正常对照PT 国际标准化比值（INR）=PTRISI
2、活化部分凝血活酶时间测定
（Activated partial thromboplastin time，APTT）
【临床应用】 1、是检查内源性凝血系统是否正常的筛查试验。 2、用于证实先天性或获得性凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ是否缺陷。 3、是普通肝素治疗监测的首选指标。
2、活化部分凝血活酶时间测定
（Activated partial thromboplastin time，APTT)
二、凝血项目测定的原理及 临床意义
1、凝血酶原时间测定 2、活化部分凝血活酶时间测定 3、凝血酶时间测定 4、纤维蛋白原测定 5、D-二聚体测定
1、凝血酶原时间测定（prothrombin time，PT）
【原理】在受检血浆中加入过量的组织凝血活酶（人脑、兔脑、 胎盘及肺组织等的浸出液）和钙离子，使凝血酶原变为凝血酶， 后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。观察血浆凝固所需时间即凝 血酶原时间。 【步骤】 血浆＋组织因子＋钙离子 观察凝固时间
2、活化部分凝血活酶时间测定
（Activated partial thromboplastin time，APTT） 【原理】在抗凝血浆中，加入足量的活化接触因子激活剂和部分凝 血活酶（代替血小板的磷脂），再加入适量的钙离子即可满足内源 性抗凝血的全部条件。从加入钙离子到血浆凝固所需的时间即称为 活化部分凝血活酶时间。 【步骤】血浆＋FXII激活剂＋部分凝血活酶＋钙离子
PT 测定值 INR = PT 正常人均值
INR: 国际标准化比值 ISI: 国际敏感指数
ISI
1、凝血酶原时间测定（prothrombin time，PT）
【分析流程】
样品量
试剂量
50μl血浆
血浆
PT试剂
50μl
100μl
100μl PT试剂
温育3分钟------检测
1、凝血酶原时间测定（prothrombin time，PT）
5、D-二聚体测定（仪器分析法）
【临床意义】 1、D-二聚体被视为DIC早期诊断的首选标志物。 2、D-二聚体可做为溶栓疗效观察的一个特异性指标。 3、D-二聚体含量的升高幅度与肝炎病情的严重程度密切相关。 4、D-二聚体是唯一反映凝血和纤溶的理想指标。 5、D-二聚体是目前鉴别原发性和继发性纤溶的理想指标。 6、D-二聚体被视为体内高凝状态和纤溶亢进的分子标志物。 7、D-二聚体升高不能诊断血栓的形成部位却能够提示体 内是否有血栓的形成。
3、凝血酶时间测定（Thrombin time，TT）
【异常意义】 1、延长： ①见于肝素增多或类肝素抗凝物质增多。 如SLE、肝病、肾病等，低（无）纤维蛋白血症。 ②纤维蛋白原降解产物（FDP）增多、 如DIC、原发性纤溶等。 ③肝素抗凝治疗、体外循环、血液透析等。 2、缩短： 见于血标本有微小凝块或钙离子存在时。
血凝四项手工法操作步骤（试管法）
项目 PT APTT TT
血浆
APTT
100ul
—
100ul
100ul
100ul
—
混匀后将试剂和标本置于37°水浴箱 PT CaCl2 TT 200ul — — — 100ul — — — 200ul
观察凝固时间
三、全自动凝血分析仪的检测 方法及原理
1、仪器检测功能 2、仪器检测方法及原理
凝血过程
4、凝血过程（瀑布学说）
5、抗凝及溶栓治疗监测的指标

1、口服抗凝药监测: PT，（华法林，香豆素类等） ： 2、肝素治疗监测: APTT，TT ，AT-III（抗凝血酶III） 3、溶栓治疗监测：（链激酶，尿激酶，蛇毒等） 一级监测：PT，TT，FIB 二级监测：D-Dimer（D-二聚体），FDP（纤维蛋白 降解产物）PLG（纤溶酶原）, a2-AP（a2-抗纤溶酶）。
【临床应用】 1、在溶栓时、抗凝治疗时、手术前监测凝血功能。 2、是预防血栓形成的独立因素。 3、肿瘤病人化疗后监测Fbg，防止Fbg降低时出现大出血。 【异常意义】 1、减低：(<1.5g/L) 见于肝脏疾病、DIC中晚期、原 发性纤溶亢进、低（无）纤维蛋白原血症、溶栓治疗等。 2、增高：纤维蛋白原是一种急性时相蛋白,其增加往 往是机体的一种非特异反应。常见于下列疾病：急性感 染，恶性肿瘤、心机梗塞、外科术后、血栓前状态或血 栓性疾病。
【分析流程】
样品量 试剂量 血浆 凝血酶试剂 50μl 100μl
50μl血浆
100μl凝血酶试剂
温育3分钟------检测
3、凝血酶时间测定（Thrombin time，TT）
【临床应用】 1、用于判定血栓前状态或血栓性疾病的筛查项目。 2、用于纤维蛋白形成障碍或怀疑重度纤维蛋白原缺乏的筛查。 3、肝素诱导凝血酶时间延长和纤维蛋白形成障碍的鉴别诊断。。
4、纤维蛋白原（Fibrinogen FIB 或Fbg）测定：
【分析流程】 样品量 试剂量 血浆 10μl 凝血酶试剂 50μl Owren’s Veronal 缓冲液 90μl
90ul Owren’s Veronal 缓冲液
10μl血浆
50μl凝血酶试剂
3分钟加热------检测
4、纤维蛋白原（Fibrinogen FIB 或Fbg）测定：
1、仪器检测功能：
Sysmex CA-7000及CS-5100全自动凝血分析仪检测项 目有十几种，常规的检验项目有PT、APTT、TT、Fbg、D二聚体、FDP等。两台仪器检测原理相同，具有全自动浓 度稀释分析功能、自动再检、自动连锁筛选等功能，全自 动进样架进样、全能随机分析、急诊随时插入分析。采用 高频振荡混匀技术，能够保证样本和试剂充分混匀，四组 检测波长能够满足不同厂家试剂的需求。
【异常意义】 1、延长: (1) 见于因子Ⅷ Ⅸ 和Ⅺ水平减低，如甲型血友病、乙型血友病等。 (2) 严重的凝血酶原、 因子Ⅴ、Ⅹ和纤维蛋白原缺乏。如肝脏疾病、阻 塞性黄疸、应用肝素以及低(无)纤维蛋白原血症。 (3)纤容活力增强，如继发性、原发性纤溶以及血循环中含有纤维蛋白(原) 降解物(FDP)。 2、缩短 （1）高凝状态，如DIC的高凝血期，促凝物质进入血流以及凝血因子的活 性增高等。 （2）血栓性疾病，如心肌梗塞、不稳定性心绞痛、脑血管病变、糖尿病伴 血管病变、肺梗死、深静脉血栓形成、妊高征和肾病综合征等。
【临床应用】 1、是反映外源性凝血系统最常用的筛查试验。 2、是监测口服抗凝剂的首选指标。 3、是维生素K缺乏的监测指标。
【异常意义】 1、PT延长见于： ①先天性凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ缺乏。 ②后天性缺乏，见于DIC、严重肝病、维生素K缺乏等。 2、PT缩短见于：DIC早期高凝状态、血栓性疾病、心肌梗 死等。 3、口服抗凝剂的监测。
2、凝血因子及其命名
概念：把在血液和组织中直接产凝血的物质统称为凝血因子 因子I 因子II 纤维蛋白原 因子VIII 抗血友病因子甲 凝血酶原 因子IX 抗血友病因子乙
因子III 因子IV
因子V 因子VII
组织因子 钙离子
易变因子 稳定因子
因子X 因子XI
因子XII
前期加速素、Stuart因子 血浆凝血活酶前质
3、凝血酶时间测定（Thrombin time，TT）
【原理】在受检血浆中加入标准化的凝血酶溶液后，
在凝血酶的作用下纤维蛋白原转变成纤维蛋白，记录血 浆凝固所需的时间为凝血酶时间。
【步骤】血浆＋凝血酶
观察凝固时间
【参考值】正常对照为14～21s，大于正常对照3s以上 为异常。
3、凝血酶时间测定（Thrombin time，TT）
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电镜下的血凝块
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电镜下的血凝块
血液凝固（瀑布学说）
该学说认为血液凝固过程基本上是一系列凝血因 子有限水解的过程，凝血过程一旦开始，各个凝血因 子便一个激活另一个，形成一个“瀑布”样的反应链 直至血液凝固。每个凝血因子都被其因子或其他有关 因素激活，最后生成纤维蛋白。
5、D-二聚体测定（仪器分析法）
【临床应用】 1、用于弥漫性血管内凝血（DIC）的早期诊断。 2、用于血栓疾病的诊断和溶栓疗效的观察。 3、用于肝炎病情的观察。 4、在血液病方面的临床应用。 5、慢性支气管炎急性发作期合并肺部感染。 6、在深静脉血栓、急性心梗、肺栓塞、脑梗死诊断中 的应用。

一、血栓及止血基本理论
1、血液凝固 2、凝血因子及其命名 3、凝血过程 4、瀑布学说 5、抗凝及溶栓治疗监测的指标
1、血液凝固
血液凝固是血液由液体状态转为凝胶状 态的过程，简称为凝血。
机体的凝血系统是非常精妙的平衡系统，由凝血 与抗凝两方面组成，正常生理状态下两者维持着动态 平衡，血液在血管中维持着流动状态，而血管损伤时 便快速形成凝块，当止血功能障碍时便发生血栓栓塞 或出血现象。