贴壁细胞传代-消化过程图示.
干细胞的消化传代技术
干细胞的消化传代技术一、贴壁细胞的消化常用的消化方法主要有酶消化法、离子螯合剂、物理法和冷冻法。
其中最常用的是酶消化法。
1、酶消化法贴壁干细胞酶消化传代时通常采用两种方式：1）、加入胰酶等干细胞脱落后，再加培养基中止胰酶作用，离心传代；2）、加入胰酶后，镜下观察待干细胞开始脱落时，弃去胰酶，加入培养液并分瓶。
但前者太麻烦，而后者有可能对干细胞施加胰酶选择，因为总是贴壁不牢的干细胞先脱落。
常用的消化酶有:1）、胰酶这是用得最多的。
一般浓度在0.25-0.5%。
作用时间根据干细胞种类、作用温度等因素而变化很大，从几分钟到几十分钟不等。
0.25%的胰酶作用于单层贴壁的干细胞，在37度条件下，一般消化1-5分钟就足够了。
终止是用血清。
主要作用于干细胞间。
配制时不能用含钙、镁的平衡液，否则影响活性。
保存于-20度。
2）、胶原酶这种方法比较少，一般是用原代培养时，从组织消化下干细胞。
这种方法作用温和，对干细胞损伤较小，但是，价格也较贵。
中止同样是用血清。
胰酶的质量是影响干细胞的消化的关键因素之一，如果配的比较标准，消化的时候就容易消化，反之就不易消化。
还要在你看到消化过头的情况下，如果干细胞下来的比较多了，这时可以连同CMF或PBS加上营养液一起传。
营养液中有血清，胰酶遇到血清就会自动终止消化，但这样操作对干细胞是有一定的影响的。
对于容易消化的干细胞，加入PBS缓冲液洗去血清或加入胰酶，先中和血清的作用（30s），弃之，再加入适量胰酶作用10s-40s（根据细胞消化的难易程度），弃之，这样依赖残余的胰酶就可将干细胞消化单细胞。
在此介绍一种简单省事并且效果好、不损失干细胞的方法：倒掉旧培养液，加入少量胰酶冲洗一下，倒掉，再加入0.125-0.25%胰酶约6-10滴或1ml（25ml bottle）消化，再加入适量新培养基中和并分瓶。
这里，胰酶消化的程度是一个关键：消化过度则对干细胞的活性损伤较大，并有部分干细胞漂浮，随弃去的胰酶流失；消化不足则干细胞难于从瓶壁上吹下，反复吹打同样也会损伤干细胞活性。
2.4传代培养
细胞传代培养
传代培养
传代培养方法
消化法传代 贴壁生长的细胞
直接吹打或用硅胶软刮 直接吹打 悬浮细胞 自然沉降法
一、贴壁细胞的消化传代方法
二、悬浮细胞传代方法
直接传代
让悬浮细胞自然沉降 弃掉1/2~1/3上清
离心法传代 将培养液转移到离心管中
离心收集细胞 弃去上清
用吸管轻轻吹打制备成细胞悬液
加新的培养液吸管吹 打制备成细胞悬液
分装培养
分装培养
1）细胞生长密度不高时，不能急于传代。
首
次 传
2 ）原代培养的贴壁细胞需控制消化时间。
代 应
3 ）吹打已消化的细胞应减少机械损伤。
注 意
4 ）首次传代时细胞接种数量要多一些。
事
项 5 ）首次传代培养的pH应偏低些。小牛血清
浓度可1.贴壁细胞传代时采用何种方法？其技术 关键是什么？
贴壁细胞传代培养步骤
贴壁细胞传代培养步骤
一、必要预备材料：
1.黏贴培养基；
2.细胞品系；
3.无菌棉签；
4.注射器；
5.脱硫酸盐卤素灯；
6.无菌细胞刀；
7.培养皿；
二、准备培养基:
1. 将黏贴培养基进行解冻，准备好用于细胞传代培养；
2. 用无菌棉签从瓶口处取出50 µl 培养基，用注射器注入培养皿中；
3. 使用脱硫酸盐卤素灯查看培养皿内的培养基，待培养基稳定后，将其置入培养箱中培养。
三、传代培养：
1. 进行一代细胞培养：将100 μl 细胞品系加入培养基，置入培养箱中培养；
2. 收集细胞：在品系培养至90%~100%阶段时，用无菌细胞刀将培养基连同其中的细胞一起取出；
3. 再生细胞：将细胞回收液均匀分散于新培养皿中，培养至细胞分裂
成熟；
4. 用冷冻融解法进行传代：将细胞悬液的容量加入超净水稀释，冷冻至-80℃后融解，充分混匀均匀后加入培养基中，开始进行传代培养。
四、最终传代注意事项：
1. 使用消毒过的相关器具，保证细胞不受污染；
2. 使用玻璃制品，避免细胞停滞或污染；
3. 确保培养箱的清洁，以免细胞污染；
4. 要保证培养条件的稳定,合理检查、温度、湿度及其他有效细胞培养条件；
5. 按时调整培养液、细胞活力，确保细胞传代培养质量。
细胞传代、铺板 、冻存、复苏等细胞培养相关操作步骤和注意事项
细胞传代的步骤（贴壁细胞为例）
首先，镜下观察细胞密度，90%以上即可传代培养（为了细胞的稳定，距离上 一次传代至少间隔一天。）。
准备工作：无菌枪头、培养瓶、离心管、废液桶等所需物品，培养基、血清、 PBS、胰酶等试剂类，可根据情况，提前放入生物安全柜，进行紫外灭菌；
细胞传代的步骤（贴壁细胞为例）
培养液量 （ml）
0.1 0.2 0.5 1 2 2 5 10 5 15-30
100%细胞量（105） （约） 1 2.5 5 10 25 20 52 137 50 200
培养板需要加入的细胞量
细胞培养板中加入细胞的数量，需要考虑一下几点： 1. 常规实验的设计：转染siRNA（约30%-50%），转染质粒（约70%-
结合镜下观察，调整浓度。 ❖2. 计数细胞：参考前文中各种规格中100%满时细胞的大概数量，再根据实验的
要求，计算加入的细胞的数量。（使用计数板）
细胞计数板的使用
细胞计数板
0.1ul
干净的盖玻片
细胞计数板的使用
10-20 ul 细胞悬液 注意: 避免有气泡！
数上不数下，数左不数右
计算公式： n/4 x104 （个/ml）
4.其他：轻轻移动他人的细胞，轻轻关闭培养箱的门等
细胞冻存
准备工作：FBS，完全培养基，DMSO，或无血清冻存液，冻存管，冻存盒。 常规的细胞传代步骤，至细胞消化后离心完毕，根据细胞的量以及需要冻存的管
数配制冻存液； 冻存液： 10%DMSO+90%FBS/完全培养基（A），或者无血清冻存液（B）。 冻存程序： A ： 1. 使用冻存盒：可直接放入-80℃冰箱，第二天转移入液氮罐中。
把细胞转移到生物安全柜中，吸去培养基，加入无菌PBS（只要没过即 可），轻轻摇动清洗细胞，尽量弃尽PBS。
实验-细胞传代
细胞传代培养
Байду номын сангаас
实验原理
贴壁细胞 细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将
细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实
验的必经过程。 悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
实验器材试剂
器材： 倒置显微镜、超净工作台、培养箱、水浴锅 试剂： 培养基（生长液+维持液）（含血清） PBS缓冲溶液 消化液（0.25%胰酶）
实验方法
细胞传代培养的步骤(一) 先观察贴壁细胞的状态，等到全部长满细胞瓶壁，即可进行传代培养。 75%酒精消毒（擦拭细胞瓶口、瓶身）。 打开细胞瓶盖，弃去原细胞培养液。 PBS缓冲溶液清洗两遍。
实验方法
细胞传代培养的步骤（二） 加入37℃预热的消化液，轻轻摇晃，使消化液覆盖贴壁细胞。 弃去消化液，将细胞瓶置于37℃培养箱反应2-5min后，观察消化情况。 消化完成后，加入培养液，摇匀，分装到其余新的细胞培养瓶中。
注意事项
传代培养时要注意严格的无菌操作，并防止细胞之间的交叉污染。 酶解消化过程中要不断观察，消化过度会对细胞造成损害，消化不够则难于将细
胞解离下来。 传代后每天观察细胞生长情况，了解细胞是否健康生长：健康细胞的形态饱满，
折光性好。 掌握好代传代时机：健康生长的细胞生长致密，即将铺满瓶底时，即可传代。
实训报告
试述传代培养的步骤和注意事项，并指出哪些是关键步骤。 画出消化之前和消化之后，显微镜下细胞图 课后思考题
谢谢观看
贴壁细胞生长传代操作流程
贴壁细胞生长传代操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!贴壁细胞生长传代操作流程如下：1. 细胞培养：首先，将细胞置于适宜的培养皿中，加入适量的培养基。
贴壁细胞传代的步骤
贴壁细胞传代的步骤
嘿，朋友！今天咱们来唠唠贴壁细胞传代那些事儿。
你知道吗，贴壁细胞就像一群喜欢“扎堆”的小伙伴，它们紧紧地贴在培养瓶或者培养皿的壁上生长。
当它们越来越多，密密麻麻的时候，就得给它们搬个新家，让它们能继续开开心心地长大，这就是传代啦。
那怎么给它们传代呢？咱们得准备好要用的东西。
比如新的培养瓶或者培养皿，胰蛋白酶或者其他能让细胞从壁上下来的东西，还有培养基等等。
然后，咱们把培养瓶或者培养皿从培养箱里拿出来，放在超净工作台里。
这时候可千万要小心，别让不干净的东西跑进去捣乱。
再然后，就轮到胰蛋白酶登场啦。
往里面加适量的胰蛋白酶，让它和细胞们接触一会儿。
这时候细胞就会慢慢从壁上松开，变得圆滚滚的。
等细胞都松开得差不多了，咱们就赶紧加培养基进去，把胰蛋白酶中和掉。
不然胰蛋白酶待久了，会伤害到细胞的。
然后呢，用吸管或者移液器把细胞混悬液吸起来，轻轻吹打几下，让细胞们分散得更均匀。
接着，把一部分细胞混悬液吸到新的培养瓶或者培养皿里。
加多少细胞混悬液，得看你想要多少细胞继续生长。
加完后，再往新的培养瓶或者培养皿里加新的培养基，让细胞们能吃得饱饱的。
把新的培养瓶或者培养皿放到培养箱里，让细胞们在温暖舒适的环境里继续生长。
怎么样，贴壁细胞传代是不是也没有那么难？多做几次，你就会熟练啦！希望咱们的细胞宝宝们都能茁壮成长，为咱们的实验或者研究出一份力！。
细胞传代PPT演示课件
表1 清洁液配方
配方成 常用方 分
重铬酸 100 钾（g） 清水(ml) 800
浓硫酸 200 (ml) 硫酸浓 20 度(%)
弱酸 50 1000 90 8
次强酸 强酸
100
60
1000 200
160
800
14
80
9
清洁液的配制和使用注意事项 ①选用耐酸塑料桶或不锈钢桶配制为宜。 ②先将重铬酸钾溶于水（用玻璃棒搅拌助溶，有时不
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（二）塑料器皿的处理
组织培养常用的塑料器皿包括各种培 养板、培养皿及培养瓶等。这些产品 主要为进口的一次性物品，供应商提 供给用户时已消毒灭菌并密封包装， 打开包装即可使用。
一些不是无菌包装的塑料器皿，如枪 头、离心管等，只要包装消毒就可以 使用了。
14
如果要重复使用塑料器皿，可以按以下 步骤处理:
加入3mlD-Hanks轻轻晃动后去液体。 加入胰蛋白酶5滴，翻转培养瓶，使消化液浸
没细胞。(一般消化时间为1到5分钟，镜下观 察发现细胞质回缩，胞体变圆) 加入3mlD-Hanks液，轻轻吹打细胞生长面， 使细胞脱离瓶壁后形成细胞悬液。吹打时动 作要轻柔不要用力过猛。
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将细胞悬液移至15ml离心管中， 1500rpm*5min离心。
实验总体安排
一.细胞培养的基本技术
实验前准备
细胞传代
细胞冻存与复苏
细胞计数与接种孔板
1
二.专题 1.MTT实验 2.细胞凋亡： JC-1 检测线粒体膜电位 3.免疫荧光技术：核蛋白（PCNA)的免疫荧
光 4.流式细胞仪的应用：细胞周期的检测 5.电镜
2
实验内容
细胞实验(传代、换液、消化组织贴壁细胞、冻存、复苏)
细胞实验乳腺组织块贴壁迁出细胞后胰酶消化：先把培养液、pbs、胰酶消化液放37℃水浴锅，倒掉培养液，加入0.25%（0.125%也可以）胰酶3 min，镜下观察细胞消化情况。
若消化不完全则继续消化，消化完全则加入等量培养液终止消化，反复吹打，将液体加入1.5 ml离心管。
对于一次难以消化下来的组织块，可以多加几次胰酶，每次消化后都要加入pbs洗一洗，然后再加入胰酶继续消化。
将离心管1000 rpm离心5分钟，去上清，加入培养液，重悬，置于合适的培养皿。
细胞换液：将pbs、培养液放37度水浴锅预热。
取出细胞镜下观察生长情况和杂质多少，倒掉原有培养液，用pbs洗一遍（杂质较多时可洗两遍），从壁上加入培养液。
细胞传代：先把培养液、pbs、胰酶消化液放于37℃水浴锅，取出细胞镜下观察生长情况和杂质多少，倒掉原有培养液。
加入0.25%胰酶，消化3 min，镜下观察消化情况。
消化完全则加入等量培养液终止消化，加入离心管内，1000 rpm离心5 min，去上清，加入培养液，重悬，置于合适的培养皿。
标记传了第几代。
注意：（1）293T细胞只需用胰酶消化大概1 min，不用放入培养箱；（2）293T 细胞不需要用PBS重悬，直接加培养液重悬。
对于加入裂解液或者原代培养的细胞需要PBS重悬来洗杂质；（3）加入6孔板时，用1 ml培养液重悬后，每孔加入100 μl。
可根据细胞数量调整加入的量。
细胞复苏：1.调节水温至37℃，取出细胞（4#5号第四格），放入手套中再浸入水中解冻；2.1000 rpm离心5 min，弃上清，用PBS清洗1遍（做磁珠的话用Buffer洗），加入培养液培养。
细胞冻存：需冻存的细胞先用PBS洗一遍，再加入胰酶消化3 min，1050 rpm离心5 min。
沉淀用细胞冻存液重悬，加入冻存管，-80℃保存过夜，第二天转移到液氮罐（4#5号第四格）。
注意：1.配置10% DMSO细胞冻存液：900 μl过滤的血清+100 μl DMSO。
细胞传代
贴壁细胞传代-消化过程时间:2009-10-12 22:21来源:生物吧作者:刘浩点击: 311 次贴壁细胞细胞在培养瓶长成致密单层后，继续生长的空间不足，培养基中的营养成份也消耗较多，同时代谢废物也有较多堆积，需要分瓶培养，对细胞进行传代扩增。
对于贴壁不太紧的贴壁细胞细胞在培养瓶长成致密单层后，继续生长的空间不足，培养基中的营养成份也消耗较多，同时代谢废物也有较多堆积，需要分瓶培养，对细胞进行传代扩增。
对于贴壁不太紧的细胞如293，可以直接吹散后分瓶。
而对于贴壁较紧的细胞如CHO，则需要以胰酶消化后再吹散分瓶，一般过程为（以下操作均按无菌操作的要求进行）：将长成致密单层细胞的细胞瓶中原来的培养液弃去；加入0.25%胰酶溶液，视细胞瓶的大小加入体积为0.5ml或更多，以使充分浸润；一般消化时间约为1至3分钟，肉眼观察瓶壁半透明的细胞层，当见到出现细针孔空隙时，弃去胰酶溶液，并加入适量的细胞培养液终止消化；视实验要求分入多瓶继续培养，一般为一传二到一传四的比例。
这里，胰酶消化的程度是一个关键：消化过度则对细胞的活性损伤较大，并有部分细胞漂浮，随弃去的胰酶流失；消化不足则细胞难于从瓶壁上吹下，反复吹打同样也会损伤细胞活性。
影响消化速度的因素较多，主要有胰酶溶液的活性（配制条件、冻存或4℃保存时间长短、是否反复冻融、化冻后存放时间及温度等）、消化时的温度（气温、细胞培养瓶及胰酶溶液的温度）以及所加胰酶溶液的多少等。
以笔者的经验，以轻吹或加培养液后轻摇可下较好，但对于经验不太充分的实验者而言是较难判断掌握的。
下面将细胞生长及不同消化程度的光学显微镜照片列出以供参考。
所用细胞为CHO贴壁细胞，培养基为含10%小牛血清的DMEM-F12，倒置显微镜10X40，数码相机300万像素。
取细胞冻存管一支，于40°C水中速融；25ml细胞方瓶中加入含10%COSMIC小牛血清的DMEM-F12培养基10ml，将冻存管中细胞全部洗入瓶中，置37°C 2.5%二氧化碳孵箱中静置培养。
贴壁细胞传代-消化过程图示.
贴壁细胞传代-消化过程图示贴壁细胞细胞在培养瓶长成致密单层后，继续生长的空间不足，培养基中的营养成份也消耗较多，同时代谢废物也有较多堆积，需要分瓶培养，对细胞进行传代扩增。
对于贴壁不太紧的细胞如293，可以直接吹散后分瓶。
而对于贴壁较紧的细胞如CHO，则需要以胰酶消化后再吹散分瓶，一般过程为（以下操作均按无菌操作的要求进行）：o将长成致密单层细胞的细胞瓶中原来的培养液弃去；o加入0.25％胰酶溶液，视细胞瓶的大小加入体积为0.5ml或更多，以使充分浸润；o一般消化时间约为1至3分钟，肉眼观察瓶壁半透明的细胞层，当见到出现细针孔空隙时，弃去胰酶溶液，并加入适量的细胞培养液终止消化；o视实验要求分入多瓶继续培养，一般为一传二到一传四的比例。
这里，胰酶消化的程度是一个关键：消化过度则对细胞的活性损伤较大，并有部分细胞漂浮，随弃去的胰酶流失；消化不足则细胞难于从瓶壁上吹下，反复吹打同样也会损伤细胞活性。
影响消化速度的因素较多，主要有胰酶溶液的活性（配制条件、冻存或4℃保存时间长短、是否反复冻融、化冻后存放时间及温度等）、消化时的温度（气温、细胞培养瓶及胰酶溶液的温度）以及所加胰酶溶液的多少等。
以笔者的经验，以轻吹或加培养液后轻摇可下较好，但对于经验不太充分的实验者而言是较难判断掌握的。
下面将细胞生长及不同消化程度的光学显微镜照片列出以供参考。
所用细胞为CHO贴壁细胞，培养基为含10％小牛血清的DMEM-F12，倒置显微镜10X40, 数码相机300万像素。
取细胞冻存管一支，于40°C水中速融；25ml细胞方瓶中加入含10%COSMIC小牛血清的DMEM-F12培养基10ml，将冻存管中细胞全部洗入瓶中，置37°C 2.5%二氧化碳孵箱中静置培养。
4小时后倒去全部培养基以去除冻存液，更换10ml培养基，同上静置培养。
经24小时培养后，生长情况为：经48小时培养后，细胞已长成致密单层：致密单层细胞在细胞瓶上呈雾状，使瓶壁呈半透明：弃去培养液，在此可先摇动细胞瓶，使老化死亡贴壁情况不好的细胞随培养液弃去。
总结贴壁细胞消化传代流程
总结贴壁细胞消化传代流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!总结贴壁细胞消化传代流程一、准备工作阶段在进行贴壁细胞消化传代之前，需要做好充分的准备。
如何进行细胞传代
如何进行细胞传代
首先我们需要了解什么是细胞传代？细胞传代是将细胞从现有的培养物分开或分出来开始新的培养，并加入新鲜培养液来促进扩增的常用手段。
根据细胞生长方式的不同，传代方式可分为两种类型。
对于悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代，或用离心法后，加入新培养基后再吹打分散进行传代。
贴壁生长的细胞则用消化法进行传代，下面我们将介绍贴壁细胞消化法进行传代的的基本步骤。
镜下观察细胞密度达80%~90%即可进行传代培养。
Step1：弃去培养瓶内上清，用不含钙离子、铁离子的PBS润洗细胞1~2次。
Step2：向培养瓶内加入2ml消化液——胰蛋白酶，置于37℃孵箱中消化5min左右，于显微镜下观察细胞消化情况至大部分细胞变圆脱落。
Step3：迅速将培养瓶拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml培养基以终止消化。
Step4：轻轻打匀后吸出，转移至离心管，在1000rpm，10℃条件下离心5min
Step5：弃去上清液后加入1ml培养基，轻轻吹匀。
首次传代推荐将细胞悬液按1:2的比例分到新的含6ml培养基的新皿或培养瓶中，建议冻存一支备用，后续传代则根据实际情况按所需比例进行。
Step6：将培养瓶于操作台按倒“8”或“十”字充分混匀后置入孵箱。
传代完成。
基础实验专栏：
如何制备pbmc。
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贴壁细胞传代-消化过程图示
贴壁细胞细胞在培养瓶长成致密单层后，继续生长的空间不足，培养基中的营养成份也消耗较多，同时代谢废物也有较多堆积，需要分瓶培养，对细胞进行传代扩增。
对于贴壁不太紧的细胞如293，可以直接吹散后分瓶。
而对于贴壁较紧的细胞如CHO，则需要以胰酶消化后再吹散分瓶，一般过程为（以下操作均按无菌操作的要求进行）：
o将长成致密单层细胞的细胞瓶中原来的培养液弃去；
o加入0.25％胰酶溶液，视细胞瓶的大小加入体积为0.5ml或更多，以使充分浸润；
o一般消化时间约为1至3分钟，肉眼观察瓶壁半透明的细胞层，当见到出现细针孔空隙时，弃去胰酶溶液，并加入适量的细胞培养液终止消化；
o视实验要求分入多瓶继续培养，一般为一传二到一传四的比例。
这里，胰酶消化的程度是一个关键：消化过度则对细胞的活性损伤较大，并有部分细胞漂浮，随弃去的胰酶流失；消化不足则细胞难于从瓶壁上吹下，反复吹打同样也会损伤细胞活性。
影响消化速度的因素较多，主要有胰酶溶液的活性（配制条件、冻存或4℃保存时间长短、是否反复冻融、化冻后存放时间及温度等）、消化时的温度（气温、细胞培养瓶及胰酶溶液的温度）以及所加胰酶溶液的多少等。
以笔者的经验，以轻吹或加培养液后轻摇可下较好，但对于经验不太充分的实验者而言是较难判断掌握的。
下面将细胞生长及不同消化程度的光学显微镜照片列出以供参考。
所用细胞为CHO贴壁细胞，培养基为含10％小牛血清的DMEM-F12，倒置显微镜10X40, 数码相机300万像素。
取细胞冻存管一支，于40°C水中速融；25ml细胞方瓶中加入含10%COSMIC小牛血清的DMEM-F12培养基10ml，将冻存管中细胞全部洗入瓶中，置37°C 2.5%二氧化碳孵箱中静置培养。
4小时后倒去全部培养基以去除冻存液，更换10ml
培养基，同上静置培养。
经24小时培养后，生长情况为：
经48小时培养后，细胞已长成致密单层：
致密单层细胞在细胞瓶上呈雾状，使瓶壁呈半透明：
弃去培养液，在此可先摇动细胞瓶，使老化死亡贴壁情况不
好的细胞随培养液弃去。
加入2.5%胰酶后，细胞逐渐皱缩变圆，细胞间隙增大不再致密：
刚加入胰酶，细胞仍呈致密单层：
细胞开始皱缩但不明显，仍维持细胞正常形态：
细胞明显皱缩变小，细胞间隙增大不再致密，部分细胞维持
正常形态，部分细胞皱缩变圆：
细胞基本皱缩变圆，此时细胞吹打可下：
细胞完全皱缩变圆，此时应弃去胰酶，加入培养基后轻摇可
将细胞从细胞瓶壁上洗下，将细胞悬液用吸管吹散后传代：
有经验后，可肉眼对光观察帖壁半透明的细胞层，判断消化
程度。
如消化过头，会见到许多细胞脱落随弃去的胰酶溶液流失。
也可以在倒数第二、三步时弃去胰酶，用瓶中残留的胰酶继续作用至最后一步的消化程度，这样略有点过也影响不大。