T细胞培养标准操作规程

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百利药业生物药研发部

标准操作规程

题目:293T细胞传代培养操作规程

编号:SOP-M-e-003-

制定者:(签名)日期:年月日批准者:(签名)日期:年月日生效日期:年月日

题目:293T细胞培养操作规程

1 目的 293T细胞是常用于包装和扩增病毒载体的工具细胞,因此做好293T细胞的培养,为保证相关实验的正常进行提供必要条件。

2 适用范围本部门293T细胞培养

3 操作方法

将移液器和移液枪、15ml离心管、离心管架、75cm2新的细胞培养瓶放于生物安全柜中,按照生物安全柜的标准操作规程,将生物安全柜的紫外开启半小时。

将含10%胎牛血清和100U/ml双抗的DMEM及PBS放于37℃水浴锅中预热。

培养箱中取出,先用75% 3.2.1将已长到80%-90%的293T细胞培养瓶从37℃,5%的CO

2

的酒精喷洒于瓶表面,将细胞培养瓶旋转放于生物安全柜中,用无菌的移液管吸净其中的培养基,加5ml的预热的PBS洗涤一次,吸净PBS。

3.2.2将含%tyption用PBS稀释两陪到五倍,向该75cm2的细胞瓶中加入3ml稀释好的%tyption,让其充分平铺于细胞表面。盖好瓶盖,将细胞瓶放在显微镜下观察,直到细胞变圆,加含10%胎牛血清的DMEM终止反应,用移液管轻轻将瓶上的细胞吹下,将细胞液移到15ml无菌的离心管中,1000rpm离心3分钟。

3.2.3将离心上清吸弃掉,用手指轻轻拍打离心管底将底部细胞分散开,再加3mlDMEM 培养基将分散的细胞重悬稀释开,取一定量的细胞液进行n倍稀释后计数,按照细胞计数标准操作规程进行。

3.2.4计数好之后细胞传代密度按照2~5×104个细胞/cm2进行传代培养,每个75cm2的

培养箱中培养。

培养瓶中加10mlDMEM培养基,放于37℃,5%的CO

2

3.2.5 24小时后观察细胞状态,待细胞长到80%-90%时进行下一次传代培养。

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