第五章 卫生指标菌的检测OK
细菌培养新检测方法【可编辑全文】
可编辑修改精选全文完整版细菌培养采样及检查新方法摘录《中华人民共和国国家标准》中《医院消毒卫生标准》一、空气培养菌落总数卫生标准1.标准:(1)产房、门诊人流室:Ⅱ类环境空气平均菌落数≤4.0CFU,暴露时间:15min,(2)母婴同室:Ⅲ类环境空气平均菌落数≤4.0CFU,暴露时间:5min,(3)门诊检普通查室、治疗室、病区:Ⅳ类环境空气平均菌落数≤4.0CFU,暴露时间:5min,2.采样检测方法:(1)产房、门诊人流室空气培养检测方法:设4角及中央1处,共5点,4角的布点部位应距离墙壁1m处,将培养皿放置在各采样点,采样高度为距地面0.8-1.5m,采样时将培养皿盖打开,扣放于培养皿旁,暴露时间15min后盖上培养皿。
(2)母婴同室、门诊检普通查室、治疗室、病区空气培养检测方法:设内、中、外对角线3点,内、外点应距墙壁1m处,采样时将培养皿盖打开,扣放于培养皿旁,暴露时间5min后盖上培养皿。
3.采样结果:送检化验单上报告结果回示:CFU/(皿·暴露时间)。
4.注意事项;(1)每月25日各个部门行空气菌落培养一次。
(2)各个部门应先用含氯制剂擦拭物体表面和拖地,再用动态消毒机消毒2小时或是紫外线灯照射2小时后,在从事医疗活动前,取空气菌落培养。
(3)送检化验单上,必须注明暴露时间,产房注明暴露时间15min,其他部门注明暴露时间5min,现未注明时间不出检查结果。
(4)采样后,立即对样品进行送检,送检时间不超4小时。
二、物体表面菌落总数卫生标准1.标准:(1)产房、门诊人流室:物体表面平均菌落数≤5.0CFU/cm2(2)母婴同室:物体表面平均菌落数≤10.0CFU/cm2(3)门诊检普通查室、治疗室、病区:物体表面平均菌落数≤10.0CFU/cm22.采样时间:各个环境做空气培养后,任选一常用物体表面3.采样方法:用5cm×5cm灭菌规格板放在被检物体表面,用浸有无菌缓冲液的棉拭子1支,在规格板内横竖往返各涂抹5次,并随之转动棉拭子,连续采样1-4个规格板面积,剪去手接触部分,将棉拭子放入装有10ml,采样液的试管中送检。
水环境卫生细菌学检测—细菌菌落总数的测定
2.2 平板涂布法
先制作平板；
取样品（无菌水）0பைடு நூலகம்1ml放入平板 上，涂抹棒均匀涂抹平板表面，直至 无残存样品（无菌水）；
翻转放置。
平板涂布
2. 3注意事项
保证无菌操作要求，同时注意不得影响样品中的微生物（培养基不得 太烫，取样时不要离火焰太近）；
制作平板时培养基不得沾附底面之外的侧面甚至盖上，未凝固前不得 翻转；
混匀器
四、接种培养
1.培养数量
不稀释样：样品、无菌水（无菌对照），共2 个培养，每个培养需培养3个平板（重复）；
需稀释样：最大稀释样及前两个稀释样、无 菌水，共4个培养，每个培养需培养3个平板 （重复）；
预先在培养皿底面标记清楚培养稀释度、操 作人、时间等信息。
培养皿标记
2. 接种平板
2.1 混合平板法
三、样品的稀释
主要针对样品中含较多微生物的水样（水源水、污水）；
自来水、饮用水一般不需稀释，可直接取样培养。
1. 分装无菌水 取数支无菌试管，标记10－1、10－2、……,每试管分装9ml无菌水 或无菌生理盐水。 （也可分装好后再灭菌）
稀释所需的数量级根据样品中微生物量的估计而定，一般轻度 污染水稀释到10－3，重度污染水可稀释到10－5、10－6。
对于不利于细菌生长的污染物，常需检测对应专门微生物及污染 物含量的直接检测。
二、稀释平板培养计数法
细菌的个体微小，直接观察、计数困难； 单个细菌经过培养可长成肉眼可见的菌落； 要设法避免多个细菌长成1个菌落，常需对 样品进行稀释处理。
稀释平板培养菌落
1.测定的程序：
样品稀释 接种平板 培养 菌落计数 报告
不同稀释度不得使用同一移液管，防止交叉影响及污染；
第5章 食品卫生微生物学检验方法
第七节 鲜乳中抗生素残留检验
检验方法：
第一法：嗜热链球菌抑制法 第二法：嗜热脂肪芽孢杆菌抑制法
原理、检验程序、操作步骤见讲义。 特别注意： 1、两种方法检测的抗生素都有最低检出限，当结果 可疑时，建议重新检测一次。 2、报告方式：抗生素残留阳性或阴性。
二、检验方法
第一法：平板菌落计数法 第二法：菌落总数PetrifilmTM测试片法(2010版已删)
检验程序、操作步骤见讲义。 特别注意： 1、菌落总数的计算方法。 2、计算菌落总数的公式：N=∑C/（n1+0.1n2）d
n1和n2代表的是平板数，而不是菌落数！ 3、菌落总数的报告中有关数字的修约原则。 4、菌落总数的报告方式：是以每克（或每毫升）样 品中细菌的菌落形成单位（CFU）数来表示的。
(2010版已删)
检验程序、操作步骤见讲义。
特别注意：
1、大肠菌群的报告方式：大肠菌群MPN计数是以每克（或每毫 升）样品中大肠菌群的MPN 值（最可能数）来表示的。大肠菌 群平板计数和大肠菌群测试片法是以每克（或每毫升）样品中大 肠菌群菌落形成单位（CFU）数来表示的。 2、查看大肠菌群MPN检索表时，表内数字要根据检样量不同作 相应调整。 3、大肠菌群平板菌落计数的结果应注意要通过证实试验后的阳 性比例进行校正。 4、大肠菌群平板计数和大肠菌群测试片法中的菌落数的选择： 大肠菌群平板计数选择菌落数在30~150之间的平板；大肠菌群 测试片法选择菌落数在15~150之间的测试片。
2、O抗原的鉴定
用A～F多价O血清做玻片凝集试验，同时用生理盐水做 对照。在生理盐水中自凝者为粗糙形菌株，不能分型。
被A～F多价O血清凝集者，依次用O4；O3、10；O7； O8；O9；O2和O11因子血清做凝集试验。根据试验结 果，判定O群。被O3、10血清凝集的菌株，再用O10、 O15、O34、O19单因子血清做凝集试验，判定E1、E2、 E3、E4各亚群。
微生物学理论指导：大肠杆菌的卫生细菌学检查
⼤肠杆菌不断随粪便排出体外，污染周围环境和⽔源、⾷品等。
取样检查时，样品中⼤肠杆菌越多，表⽰样品被粪便污染越严重，也表明样品中存在肠道致病菌的可能性越⼤。
故应对饮⽔、⾷品、饮料进⾏卫⽣细菌学检查。
1.细菌总数：检测每毫升或每克样品中所含细菌数，采⽤倾注培养计算。
我国规定的卫⽣标准是每毫升饮⽔中细菌总数不得超过100个。
2.⼤肠菌数指数：指每⽴升中⼤肠菌群数，采⽤乳糖发酵法检测。
我国的卫⽣标准是每1000ml饮⽔中不得超过3个⼤肠菌群；瓶装汽⽔、果汁等每100ml⼤肠菌群不得超过5个。
食品卫生微生物指标及微生物检测
环节存在交叉污染。
02
微生物检测方法
传统检测方法
培养法
01
通过培养基培养微生物，观察菌落形态、颜色等特征，确定微
生物种类。
镜检法
02
使用显微镜观察微生物的形态、大小、染色反应等特征，进行
初步分类。
生理生化试验
大肠菌群主要来自人和动物的粪便，其指标的卫生学意义是表示食品受人 和动物粪便污染的程度。
大肠菌群超标可能意味着食品生产、加工、运输和销售过程中卫生条件不 达标，或者食品储存、销售环节存在交叉污染。
致病菌
1
致病菌是指能够引起人类疾病的细菌、病毒、真 菌和寄生虫等生物因子，是评价食品卫生质量的 重要指标之一。
2
常见的致病菌有沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡 萄球菌等。
3
致病菌超标可能意味着食品生产、加工、运输和 销售过程中卫生条件不达标，或者食品储存、销 售环节存在交叉污染。
霉菌和酵母菌
霉菌和酵母菌是指一类丝状真菌和单细胞真菌，它们 在自然界中广泛存在，也是食品中常见的微生物。
霉菌和酵母菌在一定条件下可能产生毒素，对人体健 康造成危害。
03
通过检测微生物的生理生化特性，如氧化酶、糖发酵等，进行
鉴别。
快速检测方法
01
02
03
免疫学方法
利用抗原-抗体反应的特异 性，通过免疫学技术快速 检测食品中的微生物。
生物发光技术
利用某些细菌能够发光的 特性，快速检测食品中的 细菌数量。
电阻抗法
通过测量培养基中电阻的 变化，快速判断食品中是 否存在微生物。
基因检测方法
食品卫生微生物指标及微生物检测
食品卫生微生物指标及微生物检测食品安全是人们生活中的关键问题之一，好的食品安全管理体系可以大大降低食品病毒、细菌等微生物污染问题的发生几率，从而保障消费者的健康。
微生物指标是对食品中的微生物污染程度的一种标准，而微生物检测则是判断是否合格的一个重要手段，下面将对食品卫生微生物指标及微生物检测进行详细的讨论。
一、什么是食品卫生微生物指标食品卫生微生物指标是对不同类型的食品所允许的微生物类别、数量和指标值的一种标准，多数是基于食品的营养、水分、pH值等相关特性而制定的。
微生物污染是主要的食品安全问题之一，也是食品加工过程中无法完全避免的问题。
所以，设定合理的微生物指标可以帮助监测食品质量，并进行及时的管理和控制。
不同国家和地区对食品卫生微生物指标的设定也有所不同，主要基于食品的用途、生产加工条件和消费者的期望值。
比如，在中国，鲜活肉类、乳制品、糕点类食品等的微生物指标都有所不同，而其他国家或地区则可能有不同的标准。
二、常见的食品卫生微生物指标及作用常见的食品卫生微生物指标包括总生菌数、大肠菌群、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等。
这些指标的主要作用就是判断食品微生物污染的情况，如果超过标准则需要采取相应的措施来控制和管理微生物污染。
其中，总生菌数作为最基本的微生物指标，可以评估食品的卫生质量，是监测食品微生物安全的重要手段。
而大肠菌群作为食品中可能存在的致病菌群之一，对于人体健康存在很大的威胁。
沙门氏菌则是一种常见的肠道致病菌，经常与家禽抗议有关，消费者如果不注意卫生，很容易感染沙门氏菌引起疾病。
金黄色葡萄球菌是一种能产生多种毒素的致病菌，主要与肉制品、蛋制品以及面制品等有关。
在食品安全管理中，这些微生物指标可以进行系统监控，确保食品中微生物污染的质量安全。
三、微生物检测方法食品微生物检测是判断食品卫生质量的一种关键手段，能够对食品中的微生物污染情况进行准确和及时的监测，同时可用于食品加工过程中各个阶段的监测和控制。
手卫生微生物学检测的标准
手卫生微生物学检测的标准
手卫生微生物学检测的标准主要包括细菌菌落总数的合格标准。
普通手卫生的细菌菌落数应≤10cfu/cm²，而外科手消毒的细菌菌落数应≤5cfu/cm²。
这意味着在手卫生消毒后，每平方厘米的手部皮肤上，细菌的数量不应超过这些标准。
此外，手卫生消毒效果的监测还应考虑不同环境下的手合格标准。
例如，在Ⅰ类和Ⅱ类区域，细菌菌落总数应≤5cfu/cm²；在Ⅲ类区域，细菌菌落总数应≤10cfu/cm²；在Ⅳ类区域，细菌菌落总数应≤15cfu/cm²。
这些标准旨在确保手部卫生在不同环境下都能达到一定的卫生标准，从而减少细菌感染的风险。
总的来说，手卫生微生物学检测的标准是确保手部清洁和卫生，减少细菌数量，以降低感染的风险。
医务人员和公众都应遵循这些标准，并定期进行手部卫生检测，以确保手部的卫生状况符合要求。
细菌的一般检验方法
细菌的一般检验方法细菌的检验是微生物学中非常重要的一环，它可以帮助我们了解细菌的种类、数量和特性，为疾病的预防和治疗提供重要依据。
而细菌的一般检验方法则是我们进行细菌检验的基础，下面将为大家介绍几种常用的细菌检验方法。
首先，我们来介绍细菌培养法。
这是一种最常见的检验方法，通过在适当的培养基上培养细菌，观察其形态、生长速度、产生的色素等特征来进行鉴定。
细菌培养需要严格控制培养条件，包括温度、湿度、氧气浓度等，以保证细菌能够正常生长。
在培养基上形成的细菌菌落可以通过形态学和生理生化试验来进一步鉴定。
其次，酶标记法也是一种常用的细菌检验方法。
这种方法利用细菌产生的特定酶来进行检测，常见的有氧化酶、还原酶、水解酶等。
通过对细菌培养基添加特定底物，观察产生的色素变化或气体释放等现象，可以判断细菌的种类和数量。
另外，PCR法也是一种快速而准确的细菌检验方法。
PCR法是一种利用DNA聚合酶链式反应来扩增细菌DNA的技术，通过特定引物引导下，可以在短时间内扩增出目标细菌的DNA片段，再通过电泳或其他方法进行鉴定。
除了上述方法，还有一些免疫学方法也常用于细菌的检验，比如ELISA法和免疫胶体金法。
这些方法利用细菌与抗体的特异性结合来进行检测，具有高灵敏度和高特异性。
细菌的一般检验方法虽然多种多样，但每种方法都有其适用的范围和局限性。
在进行细菌检验时，我们需要根据具体的情况选择合适的方法，并结合多种方法进行综合分析，以确保检验结果的准确性和可靠性。
总的来说，细菌的一般检验方法是微生物学研究的基础，它为我们提供了解细菌特性和行为的重要手段。
通过不断的研究和实践，我们可以不断完善和发展细菌检验方法，为保障公共卫生安全和疾病防治提供更可靠的技术支持。
希望本文所介绍的内容能够对您有所帮助，谢谢阅读！。
菌落总数的检测方法
菌落总数的检测方法一、菌落总数介绍：菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。
当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。
因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。
菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
二、检验方法菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。
基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。
国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。
检验方法参见：GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验菌落总数测定》SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品菌落计数》三、说明（一）样品的处理和稀释：1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。
菌的检测方法
菌的检测方法菌是一类微生物，广泛存在于自然界的各种生物体中，对人类健康和环境具有重要影响。
为确保食品安全、环境卫生和医疗卫生的需要，菌的检测成为必要的工作。
本文将介绍几种常用的菌的检测方法。
二、传统培养法传统培养法是一种常见的菌的检测方法。
其主要步骤包括样品采集、接种培养基、培养、菌落计数等。
首先，从待测样品中采集菌落并转移到培养基上。
然后，将培养基置于适宜的温度和湿度条件下，培养一定时间后观察菌落的形成和生长情况。
最后，通过菌落计数来确定待测样品中菌落的数量并进行分析。
三、分子生物学方法近年来，随着分子生物学技术的发展，分子生物学方法也被广泛应用于菌的检测中。
其中，聚合酶链反应（PCR）是一种常用的分子生物学方法。
该方法通过特定引物选择性地扩增待测样品中的目标基因序列，然后使用凝胶电泳等技术进行目标基因的检测和分析。
相比传统培养法，分子生物学方法具有更高的灵敏度和特异性，能够检测到更低浓度的菌，并且不受菌种生长条件的限制。
四、免疫学方法免疫学方法是另一种常用的菌的检测方法。
该方法基于菌体表面的抗原与特异性抗体的结合，通过免疫反应来检测菌的存在。
常见的免疫学方法包括酶联免疫吸附测定法（ELISA）和免疫荧光技术。
这些方法具有快速、准确的特点，可以进行大规模样品的高通量检测。
五、快速检测方法为了满足现代社会对快速、便捷、准确的菌检测需求，一些快速检测方法也被提出和发展。
比如，基于光学传感技术的生物传感器，利用菌体与传感器之间的相互作用来快速检测菌的存在。
同时，一些生物芯片技术也应用于菌的检测中，通过微小芯片上的微阵列来同时检测多个菌种。
综上所述，菌的检测是确保食品安全、环境卫生和医疗卫生的关键环节。
传统培养法、分子生物学方法、免疫学方法以及快速检测方法都是常用的菌的检测方法。
在选择适合的方法时，需要考虑样品的特点、检测的目的以及实验条件等因素。
在未来，随着技术的不断进步和创新，菌的检测方法将更加多样化和高效化，为人类保障健康提供更强有力的支持。
卫生环境检验指标
卫生环境检验指标卫生环境检验指标是指对特定环境下的生物学、化学和物理指标进行检验，以评估该环境是否符合卫生标准。
这些指标广泛应用于各个领域，包括食品卫生、水质检测、室内空气质量等。
下面将详细介绍一些常见的卫生环境检验指标。
一、生物学指标1.细菌总数：用于评估环境中的微生物负荷情况，通常以大肠杆菌为指示菌，通过采样、培养和计数来确定环境中的细菌数目。
2.霉菌总数：用于评估环境中霉菌的负荷情况，通常以接种培养基来培养霉菌，然后通过计数来确定霉菌的数目。
3.细菌群落结构：通过分析环境中的细菌DNA，可以了解细菌群落的组成和结构，进一步评估环境的微生物多样性。
二、化学指标1.pH值：用于评估液体环境的酸碱度，pH值越低表示酸性越强，pH 值越高表示碱性越强。
2.溶解氧：用于评估水体中的氧气含量，生物在水中需要氧气进行呼吸，溶解氧低可能导致水体富营养化和水生生物死亡。
3.悬浮物质：用于评估液体中的颗粒物含量，高水平的悬浮物质可能导致水体浑浊以及水体富营养化。
4.重金属：用于评估环境中重金属元素的含量，一些重金属如铅、汞等对人体有害，超标可能导致健康问题。
三、物理指标1.温度：用于评估环境中的温度状况，高温或低温都可能对生物和人体造成不利影响。
2.湿度：用于评估环境中的湿度状况，不同环境对湿度有不同的要求，过高或过低的湿度可能导致问题。
3.光照强度：用于评估环境中的光照状况，不同生物对光照的要求不同，过强或过弱的光照都可能对生物产生不利影响。
4.噪声：用于评估环境中的噪声水平，长期暴露在高噪声环境下可能导致听力问题和其他健康问题。
以上仅是一些常见的卫生环境检验指标，实际应用中还会根据具体情况选择适合的指标进行检测。
另外，各个国家和地区对于卫生环境的标准和要求也会有所不同，因此在进行环境检验时需要参考相关的法律法规和标准要求。
简述食品中微生物的卫生检测指标及其食品卫生学意义。
简述食品中微生物的卫生检测指标及其食品卫生学意义食品中微生物的卫生检测指标是用来评估食品是否符合卫生标准的一系列微生物指标。
这些指标通常用于检测食品中的微生物污染程度，包括细菌、真菌和病毒等微生物。
常见的食品微生物卫生检测指标包括：1. 总大肠菌群：这是一类细菌，常用来评估食品中可能存在的粪便污染情况。
其检测结果能够提供食品是否符合卫生标准的重要信息。
2. 大肠杆菌：大肠杆菌是一类常见的肠道细菌，其存在于食品中可能表明潜在的粪便污染。
某些大肠杆菌的菌株还可以引起食源性疾病，因此对其进行检测具有重要的食品卫生学意义。
3. 沙门氏菌：沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌，存在于被污染的食品中。
检测沙门氏菌可以评估食品是否存在食源性疾病的潜在风险。
4. 霉菌：霉菌是一类真菌，某些霉菌产生的毒素可能对人体健康有害。
因此，在食品中检测霉菌的存在和毒素含量对食品卫生至关重要。
食品中微生物的卫生检测指标具有重要的食品卫生学意义，包括以下几个方面：1. 食品安全评估：微生物的卫生检测指标提供了评估食品是否安全和符合卫生标准的依据。
高水平的微生物污染可能导致食源性疾病的发生，因此检测指标的合格与否对食品安全至关重要。
2. 卫生管理与监管：食品生产和加工环节中的微生物污染控制是卫生管理和监管的重要内容。
通过检测微生物指标，可以及时发现和解决食品生产和加工过程中的污染问题，保证食品的卫生质量。
3. 食品质量保证：微生物指标检测也对食品的质量保证起着重要作用。
食品中的微生物污染可能导致食品的变质和质量下降，通过对微生物的检测，可以及时发现问题并采取相应的措施，保证食品的质量。
综上所述，食品中微生物的卫生检测指标是评估食品卫生质量的重要依据，它们对食品安全评估、卫生管理与监管以及食品质量保证起着重要作用。
通过对这些指标的检测，可以确保食品的卫生安全，保护公众健康。
卫生指标菌的检测OK
11.02.2021
29
EMB平板照片及原理
呈深紫黑色或中心深紫色，圆形，稍凸起，边缘整 齐，表面光滑，常有金属光泽
11.02.2021
30
麦康凯琼脂平板 Age of culture is 24 h
呈桃红色或中心桃红、圆形，扁平，光滑湿润
11.02.2021
31
四、大肠菌群检验方法及操作方法
煌绿乳糖胆盐（Brilliant Green Lactose Bile，
BGLB）肉汤
11.02.2021
33
大肠菌群检验中常用的抑菌剂
胆盐、洗衣粉、SDS、煌绿、结晶紫、孔雀绿 等。
我国常用胆盐作为抑菌剂，猪、牛、羊3种胆 盐检验效果无差别。
3号胆盐、混合胆盐、去氧胆酸钠、兔胆盐会 影响大肠菌群的检验结果。
革兰氏阳性
革兰氏阴性无芽胞 产气
不产气
大肠杆菌阴性 报告
大肠杆菌阳性 大肠杆菌阴性
报告
报告
37
检 释样
稀
初 发 酵
分 养离
培
各加入1ml 各加入10ml
1:100
1:10
双料乳糖胆 盐发酵管
单料乳糖 胆盐发酵
管
各加入1ml
单料乳糖 胆盐发酵
管
检样量1g/ml
检样量0.1g/ml
检样量0.01g/ml
11.02.2021
10
（二）培养
➢ 倒放平板 ➢ 普通食品：36 ℃±1℃ 48h±2h ➢ 水产品: 30℃±1℃ 72h±3h
如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥
漫生长的菌落时，可在凝固后的平板计数 琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约 4mL），凝固后翻转平板，按上步条件进 行培养。
公共卫生测定微生物的检测标准
公共卫生测定微生物的检测标准
公共卫生测定微生物的检测标准涉及到多个方面的指标，主要包括以下几类：
1. 菌落总数：这是指示公共卫生状况的重要指标之一，用于评估样品中总微生物的数量。
2. 大肠杆菌计数：大肠杆菌是肠道中的一种细菌，其数量可以反映肠道健康状况。
3. 大肠菌群计数：大肠菌群包括一些对人体无害的细菌，但其数量过多也可能表明卫生问题。
4. 肠道致病菌（沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌）：这些细菌是导致肠道疾病的主要病原体，检测它们有助于预防和控制疾病传播。
5. 单核细胞增生李斯特氏菌、双岐杆菌、副溶血性弧菌、空肠弯曲菌等其他致病菌：这些也是常见的病原体，需要定期检测以确保公共卫生安全。
6. 霉菌计数和酵母计数：霉菌和酵母过多可能表明环境卫生状况不佳，也可能对人体健康产生影响。
在具体实施检测时，应遵循相关标准和规范。
例如，对于微生物限度检验仪的标准可参考JB/T；对于微生物肥料的标准可参考NY和GB等。
请注意，这些只是一些常见的检测指标和标准，具体的检测项目和标准可能会根据地区、行业和特定情况而有所不同。
因此，在实际操作中，应遵循当地的相关法规和标准，以及专业人员的指导。
细菌、霉菌、酵母菌检查标准操作规程
细菌、霉菌、酵母菌检查标准操作规程全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：细菌、霉菌、酵母菌检查是食品安全和环境卫生领域中非常重要的一项工作。
为了确保检查结果的准确性和可靠性，需要遵守一系列标准操作规程。
下面将介绍一份关于细菌、霉菌、酵母菌检查的标准操作规程，以供参考。
一、检测方法选择在进行细菌、霉菌、酵母菌检查之前，首先需要确定检测的目的和样品种类。
根据具体情况选择适合的检测方法，一般可以选择培养基法、PCR法、免疫学法等方法进行检测。
不同方法的灵敏度和准确度有所差异，需要根据具体要求选择合适的检测方法。
二、样品采集在进行细菌、霉菌、酵母菌检查之前，需要首先采集样品。
样品的采集应该遵循以下原则：1. 样品应该代表性，能够反映整个检测对象的真实情况；2. 样品的采集方法应该符合标准操作规程，避免污染；3. 采样器具和容器应该经过消毒处理，避免样品受到外界干扰。
三、样品处理在采集到样品后，需要进行样品处理以提取目标微生物。
样品处理的方法应该符合标准操作规程，避免样品受到外界污染。
常用的样品处理方法包括过滤法、萃取法、富集法等。
四、培养条件设置对于细菌、霉菌、酵母菌的检测，需要设置合适的培养条件以促进目标微生物的生长。
培养条件的设置应该考虑到目标微生物的生长特性和适宜条件，并严格控制培养环境的温度、湿度和氧气等因素。
五、培养基选择在进行微生物检测时，需要选择适合的培养基以促进目标微生物的生长。
不同微生物对培养基有不同的选择性，需要选择适合的培养基进行培养。
常用的培养基包括普通培养基、选择性培养基、差异培养基等。
六、检测结果解读在检测完成后，需要进行检测结果的解读。
根据实验结果判断目标微生物的存在与否，对结果进行合理解读和分析。
检测结果应该符合标准操作规程的要求，确保检测结果的准确性和可信度。
七、结果报告在完成检测后，需要对检测结果进行报告。
检测报告应该包括检测方法、样品信息、检测结果、结论和建议等内容。
细菌的一般检验方法
细菌的一般检验方法细菌是一类微生物，其存在对人类和动植物的生长发育、食品的加工贮藏和环境的卫生安全等方面都具有重要的影响。
因此，对细菌的检验成为了保障公共卫生安全和食品安全的重要手段。
细菌的一般检验方法包括了样品采集、预处理、培养、鉴定和计数等步骤。
首先，样品采集是细菌检验的第一步。
样品的采集应当严格按照规范进行，以避免外界污染的介入，影响检验结果的准确性。
不同类型的样品需要采用不同的采集方法，比如空气中的微生物可以通过空气采样器进行采集，而食品和水样则需要进行样品的取样和保存。
其次，样品的预处理是为了提高细菌的检出率。
预处理的方法包括了样品的稀释、过滤、离心、酶处理等。
这些方法可以去除样品中的干扰物质，使得细菌更容易被检测出来。
然后，培养是细菌检验的关键步骤。
将样品接种在含有营养物质的培养基上，利用恒温箱进行培养，有利于细菌的生长和繁殖。
不同的培养条件可以选择不同的培养基，比如选择富含营养物质的富养分琼脂培养基用于一般微生物的培养，选择含有特定抑菌剂的培养基用于选择性培养。
接下来是鉴定，即对培养后的细菌进行鉴定和分类。
鉴定的方法包括了生化试验、形态学观察、生理生化特性检测、分子生物学方法等。
通过这些方法，可以对细菌的种属进行初步鉴定，从而为后续的处理和控制提供依据。
最后是计数，通过计数可以了解样品中细菌的数量。
常用的计数方法包括了平板计数法、膜过滤法、MPN法等。
这些方法可以对样品中的细菌数量进行定量分析，为后续的风险评估和控制提供依据。
总的来说，细菌的一般检验方法包括了样品采集、预处理、培养、鉴定和计数等步骤。
这些方法的准确性和可靠性对于保障公共卫生安全和食品安全具有重要的意义，因此在实际操作中需要严格按照规范进行操作，以确保检验结果的准确性和可靠性。
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(四) 检验注意事项
6、为防止细菌增殖产生片状菌落，在检液加入平皿后， 应在20min倾入琼脂，并立即使之与琼脂混合均匀。 (在平面上先左右摇动，后顺时针和逆时间旋转) 7、加入平皿内的检样稀释液有时带有检样颗粒，需加 做平皿放在4℃的环境中，以便计数时排除颗粒的 影响。 8、稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈 多。如出现逆反现象，不可作为检样计数报告的 依据。
第五章 卫生指标细菌 的检验
第一节 食品中菌落总数的测定
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一、菌落总数
概念：是指食品检样经过处理，在一
定条件下培养后,单位质量（g）、容积 （mL）或表面积（cm2）内所形成的好氧 或兼性厌氧细菌菌落的总数。
是活菌计数，需氧菌数； 不代表实际所有的细菌总数。
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属
代表种
致病性 肠道外感染， 急性腹泻 细菌性痢疾
埃希氏菌属 （Escherichia） 大肠埃希氏菌 (E.coli) 志贺氏菌属 （Shigella） 痢疾志贺氏菌 (Sh.dysenteriae)
爱德华氏菌属 （Edwardsiella）
沙门氏菌属 （Salmonella） 枸橼酸杆菌属 (Citrobacter) 克雷伯氏菌属 (Klebsiella) 阴沟肠杆菌(Enterobacter) 哈夫尼亚菌属 (Hafnia)
国家标准(2003版)： 三步法：乳糖胆盐发酵试验→分离培养→证实试 验(乳糖发酵试验) 行业标准： 两步法：推测试验→证实试验 国家标准(2010版)： 两步法：LST发酵→BGLB复发酵
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GB 4789.3-2010
月桂基硫酸盐胰蛋白胨 （Lauryl Sulfate Tryptose，LST）肉汤 煌绿乳糖胆盐（Brilliant Green Lactose Bile， BGLB）肉汤
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三、大肠菌群的生物学特性
1. 形态与染色：革兰氏染色阴 性，无芽胞杆菌。 2. 发酵乳糖产酸产气
3. 培养特性： 在EMB琼脂上的典型菌落:呈深紫黑色或中心深紫色， 圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，常有金属光泽； 在麦康凯琼脂上的典型菌落: 呈桃红色或中心桃红、 圆形，扁平，光滑湿润。
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第二节 食品中大肠菌群的检验
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一、大肠菌群
1、 什么是大肠菌群？ 指一群在37℃能分解乳糖产酸、产气，需氧及兼性 厌氧的革兰氏染色阴性无芽胞杆菌。 2、大肠菌群的组成:
大肠埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属(又叫 产气杆菌属，包括阴沟肠杆菌和产气肠杆菌)、克雷伯 氏菌属的一部分和沙门氏菌属的第III亚属。
蛇类等血动物的正常肠道寄居菌，偶见于健康人或 腹泻者粪便内
肠热症、急性肠炎、败血症 条件致病菌，引起继发性感染
肺炎，泌尿系、创伤感染 败血症等
很少引起原发性感染 对人无致病性 条件致病菌，引起泌尿系， 呼吸道及创伤感染 食物中毒，泌尿系、呼吸道感染 等 鼠疫 植物寄生菌，曾从人体肠道及化脓扁桃体中分离到
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EMB平板照片及原理
呈深紫黑色或中心深紫色，圆形，稍凸起，边缘整 齐，表面光滑，常有金属光泽
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麦康凯琼脂平板 Age of culture is 24 h
呈桃红色或中心桃红、圆形，扁平，光滑湿润
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四、大肠菌群检验方法及操作方法
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（二）培养
倒放平板 普通食品：36 ℃±1℃ 48h±2h 水产品: 30℃±1℃ 72h±3h
如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥 漫生长的菌落时，可在凝固后的平板计数 琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约 4mL），凝固后翻转平板，按上步条件进 行培养。
迟纯爱德华氏菌 (E.tarda)
伤寒沙门氏菌 (S.typhi) 弗劳地氏枸橼酸杆菌 (C.freundii) 肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae) 产气杆菌 (E.aerogenes) 蜂窝啥夫尼亚菌 (H.alvei) 粘质沙雷氏菌 (S.marcescens) 普通变形杆菌 (P.vulgaris) 鼠疫耶尔森氏菌 (Y.pestis) 草原居民欧文氏菌 (E.herbicola)
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式中： N——样品中菌落数； ΣC——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之 和； n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数； n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数； d——稀释因子（第一稀释度）。
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注意：旧版标准的做法为：比值小于或等于2取 平均数，比值大于2则其较小数字
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第四节 食品中大肠杆菌计数
大肠杆菌（Escherichia coli），学名大肠埃希 氏菌，被归为肠杆菌科，属于埃希氏菌属，革 兰氏阴性短杆菌，能在44.5℃发酵乳糖、产酸、 产气，IMViC生化试验为++--，或为-+--。
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复习题
1、什么是菌落总数？ 2、测定食品、饮料等产品的菌落总数有什么意 义？ 3、画出平板倾注法测定菌落总数的示意图。 4、在测定菌落总数时，如何选择菌落进行计数？ 5、在菌落总数的检验中，要注意哪些事项？ 6、在菌落总数的检验中，如何根据样品的特性 选择培养温度和时间？
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二、菌落总数测定的意义
1、判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。 2、了解细菌在食品中的繁殖动态。 3、预测食品贮藏期限的长短。
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三、菌落总数测定的方法
※ 平板倾注法＃ 平板表面涂布法 平板表面点滴法
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四、平板倾注法测定菌落总数 GB4789.2-2010
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2、平板菌落计数的选择
(1) 选取菌落数在30～300之间的平板（SN标 准要求为25～250个菌落）
若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计 数范围内，计算两个平板菌落数的平均值， 再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g （mL）样品中菌落总数结果。
若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计 数范围内时，按公式（1）计算：
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大肠菌群检验中常用的抑菌剂
胆盐、洗衣粉、SDS、煌绿、结晶紫、孔雀绿 等。 我国常用胆盐作为抑菌剂，猪、牛、羊3种胆 盐检验效果无差别。 3号胆盐、混合胆盐、去氧胆酸钠、兔胆盐会 影响大肠菌群的检验结果。 用量、品牌、规格会影响结果。
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粪大肠菌群检验程序
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六、检验注意事项
1、从制备样品匀液至稀释完毕,全过程不得超过15min。 2、对产酸但未看到气泡的乳糖发酵，用手轻打动试管， 如有气泡沿管壁上浮，应考虑可能有气体产生，应作 进一步试验。 3、不可用其他胆盐代替指定的胆盐。
证 乳糖发酵管 实 试 验2015年10月16日星期五
查MPN表报告结果
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第三节 粪大肠菌群的检验
粪大肠菌群：是大肠菌群的种，又称为 耐热大肠菌群，是指一群需氧及兼性厌氧， 在44.5℃培养24h内能发酵乳糖产酸产气和 分解色氨酸产生靛基质的革兰氏阴性无芽 胞杆菌。
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(四) 检验注意事项
1、对照平板出现几个菌落时，要追加对照平 板； 2、吸管进出瓶子或试管时，吸管口不得触及 瓶口、管口的外围部分； 3、吸管插入试样液内的深度不得小于2.5cm, 调整时要使管尖与容器内壁紧贴; 4、进行稀释时,吸管口不得与稀释液接触; 5、检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用 时间不宜超过20min.
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（2）如均大于300，则取最高稀释度的平均菌落数 乘以稀释倍数报告 （3）如均小于30，则以最低稀释度的平均菌落数 乘稀释倍数报告 （4）如菌落数有的大于300，有的又小于30，不在 30～300之间，以最接近300或30的平均菌落数乘 以稀释倍数报告 （5）如所有稀释度均无菌落生长，则应按小于1乘 以最低稀释倍数报告。
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3、菌落数的报告
① 菌落数在1～100时，按“四舍五入”原则， 以整数报告； ② 如大于100时，则报告前面两位有效数字， 第三位数按四舍五入计算。 ③ 固体检样以克（g）为单位报告，CFU/g; ④ 液体检样以毫升（mL）为单位报告， CFU/mL; ⑤ 表面涂擦则以平方厘米（cm2）报告， CFU/ cm2; 。
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二、大肠菌群检验的卫生学意义
2、以大肠菌群作为粪便指标菌原因
1) 2) 3)
在粪便中数量最大； 在外环境中存活的时间与致病菌大体相同； 检测方法简便容易。
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二、大肠菌群检验的卫生学意义 3、大肠菌群检验的意义
（1）判断食品中否受到粪便污染。 （2）有利于控制肠道传染病的发生和流行。 （3）有利于控制食品在生产加工、运输、保存 等过程中的卫生状况。
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