人成纤维细胞生长因子23(FGF23) 酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)

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人血管内皮生长因子 ELISA 试剂盒说明书

产品说明书人血管内皮生长因子ELISA试剂盒（Human VEGF ELISA KIT）产品货号：H6139S, H6139M, H6139L产品规格：24T, 48T, 96T产品内容：注：终止液和显色剂具有腐蚀性，一旦接触到液体，请尽快用大量清水冲洗。

储存条件4℃避光保存，有效期见外包装。

开封后，保存温度详见说明书。

产品介绍Human VEGF ELISA Kit (Human Vascular Endothelial Cell Growth Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即人血管内皮生长因子ELISA试剂盒，可以定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组VEGF浓度。

人VEGF是由两个相同亚基以二硫键交联组成的二聚体糖蛋白，基因定位于第6号染色体长臂，由8个外显子和7个内含子交替构成，约14 kb。

由于mRNA剪接方式不同，产生了单链分别含121，145，165，183，189和206个氨基酸的不同变异体。

VEGF 121分子量约为34-46 kDa，是可溶性分泌型蛋白质，以游离状态存在，不能与肝素结合；VEGF 165分子量为45 kDa，30-50%以可溶性形式分泌于细胞外基质，其余部分与细胞膜、基底膜或细胞外基质含有肝素的糖蛋白结合。

VEGF 145存在于胎盘细胞和女性生殖道肿瘤细胞。

VEGF 189及VEGF 206分泌后完全结合于细胞膜或基底膜含有肝素的糖蛋白上。

骨骼肌，心肌，肝细胞，成骨细胞，中性粒细胞，巨噬细胞，角质形成细胞，血小板，褐色脂肪组织，CD34+细胞，星形细胞，神经元和内皮细胞等多种细胞和组织均可产生VEGF。

血清和血浆样本均可检测到VEGF，由于血小板可释放VEGF，因此血清中VEGF含量较高。

VEGF是一种特异作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子，可增加血管通透性、促进血管形成、引起细胞外基质成分改变等。

糖尿病肾病与非糖尿病肾病维持性血液透析患者中FGF23表达的研究

１．２方法
研究方案经苏州工业园区娄葑医院和苏州大学附属第一医院伦理委员会同意，患者签署知情同意书后进行。血清ＦＧＦ２３检测，采用酶
［４］刘光祥．腹腔镜胆囊切除术与开腹胆囊切除术的比较［Ｊ］．海南医
学院学报，２００９，１５（８）：９２０ — ９２１．
［５］赵国玺腹腔镜治疗胆囊结石急性发作５８例临床治疗效果观察
［Ｊ］＿中外医疗２０１０，２９（２５）：１．
成纤维细胞生长因子２３（ＦＧＦ２３）是一种尿磷酸盐激素，同时抑制骨化三醇合成，调节血磷和维生素Ｄ在体内的代谢平衡…。糖尿病肾病所致尿毒症维持性血液透析患者，死亡原因多见于各种并发症，比如钙磷代谢异常，继发性甲旁亢导致的全身多系统器官损害。尤其是钙磷代谢异常，造成的血管钙化，心脏瓣膜的钙化更可导致尿毒症血液透析患者的猝死。研究显示，血清中ＦＧＦ２３升高的维持性血液透析患者，比血清中ＦＧＦ２３不升高的维持性血液透析患者，病死率高６倍。由此说明，ＦＧＦ２３可预测维持性血液透析患者的病死率口】。研究显示，糖尿病肾病所致尿毒症的维持性血液透析患者，其３年存活率明显低于非糖尿病的尿毒症维持性透析患者】。那么是否是因为ＦＧＦ２３升高，导致了糖尿病肾病尿毒症的维持性血液透析患者，更容易出现钙磷代谢异常，从而导致一系列并发症出现，使得糖尿病肾病

人成纤维细胞生长因子(FGF)说明书

dilution 40µl to testing sample well, then add testing sample 10µl (sample final dilution is
5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好
人成纤维细胞生长因子(FGF)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 10ng/L -320 ng/L
96T
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中 FGF 含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人 FGF 水平。用纯化的人 FGF 抗体包被微孔板，
制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 FGF，再与 HRP 标记的 FGF 抗体结合，形成
12 密封袋
1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

人胎盘生长因子(PLGF)ELISA试剂盒操作步骤

人胎盘生长因子（PLGF）ELISA试剂盒操作步骤试剂盒本试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。

先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。

洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。

再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。

产生颜色。

颜色的深浅和样品中指标的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制：试剂盒成份96孔配置48孔配置96/48人份酶标板1块板（96T）半块（48T）塑料膜板盖1块半块标准品1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）空白对比1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）标准品稀释缓冲液1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）生物素标记抗体1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）亲和链酶素HRP 1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）停止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）自备料子：1．蒸馏水。

2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3．振荡器及磁力搅拌器等。

样品收集、处置及保管方法：1、血清操作过程中躲避任何细胞刺激。

使用不含热原和内毒素的试管。

收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞快速当心地分别。

2、血浆EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。

1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、细胞上清液1000×g离心10分钟除颗粒和聚合物。

4、组织匀浆将组织加入适量生理盐水捣碎。

1000×g离心10分钟，取上清液5、保管假如样品不立刻使用，应将其分成小部分70 ℃保管，躲避反复冷冻。

尽可能的不要使用溶血或高血脂血。

假如血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。

不要在37℃或更高的温度加热解冻。

人促红细胞生成素(EPO)-酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)

仅供科研使用，不得用于临床检验。

人促红细胞生成素（EPO ）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）说明书黄石市艾恩斯生物科技有限公司【产品名称】通用名称：人促红细胞生成素（EPO ）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）英文名称：Human Erythropoietin（EPO ）ELISA KIT【包装规格】48人份/盒，96人份/盒【预期用途】仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中人促红细胞生成素（EPO ）的浓度。

【检验原理】本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。

在预包被抗人促红细胞生成素（EPO ）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入人促红细胞生成素（EPO ）校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的抗人促红细胞生成素（EPO ）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。

加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中人促红细胞生成素（EPO ）的浓度正相关。

拟合校准品曲线，可以计算出样本中人促红细胞生成素（EPO ）的浓度。

【主要组成成分】主要成分校准品检测范围：47-3000pg/ml。

校准品已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV1、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。

需要但未提供的材料及耗材1、酶标仪2、精密移液器及一次性吸头3、蒸馏水4、洗瓶或者自动洗板机5、37℃水浴锅或恒温箱6、500ml量筒7、无粉一次性乳胶手套【储存条件及有效期】1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。

2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。

人胎盘生长因子(PLGF)ELISA试剂盒说明书

人胎盘生长因子（PlGF）酶联免疫分析试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂盒仅供研究使用预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆、尿液, 细胞培养物上清或其它相关液体中胎盘生长因子,PlGF含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中PlGF水平。

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入PlGF抗原、生物素化的抗人PlGF抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的PlGF呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为1,000 pg/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成1,000 pg/mL，500 pg/mL ，250 pg/mL，125 pg/mL，62.5 pg/mL，31.25 pg/mL，15.6 pg/mL，其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/mL，临用前15分钟内配制。

如配制500 pg/mL标准品：取0.5ml 1,000 pg/mL的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3.样品稀释液：1×20ml/瓶。

4.检测稀释液A：1×10ml/瓶。

5.检测稀释液B：1×10ml/瓶。

6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。

如1ul 检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

慢性肾脏病患者血清FGF23水平与钙磷代谢及临床相关性

慢性肾脏病患者血清FGF23水平与钙磷代谢及临床相关性闫奇奇;郝丽;张森【摘要】目的探讨血清成纤维细胞生长因子23(FGF23)在慢性肾脏病(CKD)中的变化规律,在慢性肾脏病-矿物质骨代谢异常(CKD-MBD)早期诊断中价值及与临床的相关性.方法选取CKD患者140例,分为3期组、4期组、5期非透析组(5ND)、5期血液透析组(5HD),并将18例健康体检者纳入对照组,完善血钙(Ca)、血磷(P)、血红蛋白(Hb)、白蛋白(A LB)、血肌酐(SCr)、骨源性碱性磷酸酶(BALP)、甲状旁腺激素(PTH)、FGF23等指标及心脏彩色多普勒检查,监测清晨安静状态下血压.根据是否存在左心室肥厚(LVH)分为LVH组和非左心室肥厚(NLVH)组,根据是否存在心脏瓣膜钙化分为心脏瓣膜钙化组和非心脏瓣膜钙化组.结果①3期组(1.83±0.19)、4期组(1.91 ±0.16)、5ND期组(1.99±0.18)、5HD期组(2.12 ±0.12) logFGF23均显著高于对照组(1.74±0.14) (P ＜0.05),且随着CKD进展不断升高;②3期组Ca(2.13±0.19)、P(1.20±0.21)、logPTH(1.74±0.21)均在正常范围内;③5ND组Hb、Ca显著低于其他组(P＜0.05),P显著高于其他组(P＜0.05);④5ND组和5HD 组BALP及logPTH水平显著高于3期组和4期组(P＜0.05);⑤FGF23与P、SCr、BALP、PTH、收缩压呈正相关(P＜0.05),与Hb呈负相关性(P＜0.05);⑥R*C表x2检验示CKD分期与LVH存在中等强度相关,Cramer's V=0.376,P=0.001,与心脏瓣膜钙化存在弱强度相关,Cramer'sV =0.264,P=0.044;⑦年龄、FGF23和收缩压是LVH的独立危险因素,年龄和FGF23是心脏瓣膜钙化的独立危险因素.结论FGF23随着CKD进展不断升高,其变化早于Ca、P、PTH,且为LVH和心脏瓣膜钙化的独立危险因素,可作为CKD-MBD的预测指标,与临床密切相关.【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2019(054)005【总页数】5页(P776-780)【关键词】慢性肾脏病;成纤维细胞生长因子23;钙磷代谢;左心室肥厚;心脏瓣膜钙化【作者】闫奇奇;郝丽;张森【作者单位】安徽医科大学第二附属医院肾脏内科,合肥230601;安徽医科大学第二附属医院肾脏内科,合肥230601;安徽医科大学第二附属医院肾脏内科,合肥230601【正文语种】中文【中图分类】R692.5慢性肾脏病(chronic kidney disease，CKD)已经成为全球性的公共健康问题，严重威胁人类健康。

人生长激素测定试剂盒(化学发光免疫分析法)产品技术要求mairui

1 性能指标2.1外观和性状试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；包装标签应清晰，准确、牢固；Ra 组分应为棕色含固体微粒的液体，无板结、无絮状物。

Rb 组分应为清澈透明的液体，无沉淀、无悬浮物、无絮状物；校准品应为清澈透明液体，无沉淀、无悬浮物、无絮状物。

分装瓶应为透明塑料管，盖有塑料外盖。

2.2装量应不少于试剂的标示装量值。

2.3准确度2.3.1将hGH 国家标准品配成两个浓度水平的样品，用待检试剂盒进行检测，其检测结果与标定靶值的相对偏差在±10%范围内。

2.3.2对具有溯源性的两个浓度水平的正确度控制品进行检测，检测结果与标定浓度的相对偏差在±10%范围内。

2.4最低检测限应不大于0.02 ng/mL。

2.5线性试剂盒在0.03 ng/mL~50 ng/mL 区间内，其相关系数（r）应不低于0.9900。

2.6重复性变异系数CV 应≤ 5%。

2.7批间差变异系数CV 应≤ 10%。

2.8校准品均一性2.8.1校准品瓶内均一性C0的标准差（SD）应不大于0.024ng/mL，C1和C2的变异系数（CV）应不大于8.0%。

2.8.2校准品瓶间均一性C0 的标准差（SD）应不大于0.02 ng/mL，C1 和C2 的变异系数（CV）应不大于5.0%。

2.9生物安全性使用国家权威管理机构认可的、且不低于我国法定用于血源筛查体外诊断试剂灵敏度的检测试剂，对校准品中乙型肝炎病毒表面抗原、人类免疫缺陷病毒抗体（HIV-I 型和HIV-II1型）、丙型肝炎病毒抗体、梅毒螺旋体抗体的检测应为阴性。

2.10稳定性2~8℃避光保存，试剂盒有效期为365 天。

到有效期后90 天内的试剂盒应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.8 的要求。

2。

慢性肾脏病5期患者 sclerostin 与桡动脉钙化的关系

慢性肾脏病5期患者 sclerostin 与桡动脉钙化的关系周华;崔笠;杨敏;薛钟【摘要】目的：探讨慢性肾脏病5期患者桡动脉及血清 sclerostin 表达情况，以及 sclerostin 与桡动脉钙化的关系。

方法取52例初次行动静脉内瘘桡动脉头静脉端端吻合术患者的桡动脉标本，硝酸银染色(von Kossa 法)观察桡动脉钙化情况，免疫组织化学法观察桡动脉 sclerostin 表达情况。

收集患者基本资料及动静脉内瘘术前清晨空腹静脉血，测定血红蛋白(Hb)、血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、钙(Ca)、磷(P)、碱性磷酸酶(AKP)、白蛋白(Alb)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、C 反应蛋白(CRP)以及全段甲状旁腺激素(iPTH)浓度；用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测患者血清 sclerostin 水平。

根据桡动脉钙化与免疫组织化学结果，将患者分为非钙化组和钙化组，以及染色阴性组和染色阳性组，比较组间临床指标差异，并行logistic 回归分析明确血管钙化与染色阳性危险因素。

同时，将患者血清sclerostin 水平与临床资料行相关性分析。

结果钙盐染色阳性的20例患者桡动脉均有 sclerostin 阳性表达，钙盐染色阴性的32例患者桡动脉中有10例(31.3%)存在 sclerostin 阳性表达。

桡动脉钙化及 sclerostin 免疫组织化学阳性表达患者年龄、血清 AKP 及 sclerostin水平均高于非钙化及 sclerostin 阴性表达组(P<0.05)。

多因素 logistic 回归分析结果显示年龄和血清 sclerostin 水平是桡动脉钙化的主要危险因素(P <0.05)，而血清 sclerostin 水平是桡动脉表达 sclerostin 的唯一相关因素(P <0.01)。

TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒AP显色系统

Human B cell differetiation factor,BCDF ELISA Kit人B细胞分化因子(BCDF)ELISA Kit 96TELISA试剂盒
Human atrial natriuretic factor,ANF ELISA Kit人心纳素(ANF)ELISA Kit 96TELISA试剂盒
TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒AP显色系统
Human Stromelysin-1,ST1 ELISA Kit人基质裂解素(ST1)ELISA Kit 96TELISA试剂盒
Human Stromelysin-2,ST2 ELISA Kit人基质裂解素(ST2)ELISA Kit 96TELISA试剂盒
Human Receptor Ⅰ for the Fc region of immunoglobulin E,FcεRⅠ ELISA Kit人免疫球蛋白E Fc段受体Ⅰ(FcεRⅠ)ELISA Kit 96TELISA试剂盒
Human Receptor Ⅲ for the Fc region of immunoglobulin G,FcγRⅢ ELISA Kit人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA Kit 96TELISA试剂盒
Human Eotaxin 2/CCL24 ELISA Kit人嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin 2(Eotaxin 2/CCL24)ELISA Kit96TELISA试剂盒
Human lymphocyte function associated antigen 1,LFA-1 ELISA Kit人淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1/CD11a+CD18)ELISA Kit96TELISA试剂盒

联合检测D-D、LDH、FGF23在慢性肾衰中的临床意义

科学技术创新2019.28摘要:目的：分析联合检测血浆D-二聚体（D-dimer ，D-D ）、血清乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase ，LDH ）、血清成纤维细胞生长因子23（fibroblast growth factor 23，FGF23）在慢性肾衰竭患者中的意义。

方法：选择31例某院确诊为慢性肾衰竭的病人作为实验组，用免疫比浊法测定D-D 浓度，通过乳酸底物法测定LDH 的浓度，采用酶联免疫吸附双抗体夹心法测定FGF23的浓度，并与正常对照组的31例健康受试者比较分析，同时，分析实验组的三个指标的相关性。

结果：慢性肾衰竭组D-D 、LDH 和FGF23三者浓度高于对照组（P<0.05），慢性肾衰竭病人血浆D-二聚体与血清乳酸脱氢酶呈正相关（r=0.393,P<0.05），血浆D-二聚体与血清成纤维生长因子23呈正相关（r=0.571,P<0.05），血清乳酸脱氢酶与血清成纤维生长因子23呈正相关(r=0.517,P<0.05）,D-D 与FGF23具有线性相关性。

结论：联合检测D-二聚体、乳酸脱氢酶、成纤维生长因子23水平对慢性肾衰竭患者的临床诊断、治疗和预后有重要意义。

关键词:D-二聚体;乳酸脱氢酶;成纤维生长因子23;慢性肾功能衰竭Abstract:Objective:To analyze the combined detection of plasma D-dimer (DD),serum lactate dehydrogenase （LDH)and serum fibroblast growth factor 23(FGF23).Significance in patients with chronic renal failure.Methods:Thirty-one patients with chronic renal failure diagnosed in a hospital were selected as experimental group.The concentration of DD was determined by immunoturbidimetry.The concentration of LDH was determined by lactic acid substrate method.The concentration of FGF23was determined by enzyme-linked immunosorbent double antibody sandwich method.Thirty-one healthy subjects in the control group were compared and analyzed,and the three indicators in the experimental group were analyzed for correlation.RESULTS:The levels of DD,LDH and FGF23in chronic renal failure group were higher than those in the control group (P<0.05).Plasma D-dimer was positively correlated with serum lactate dehydrogenase in patients with chronic renal failure (r=0.393,P<0.05).There was a positive correlation between plasma D-dimer and serum fibroblast growth factor 23(r=0.571,P<0.05)and serum fibroblast growth factor 23(r =0.517,P <0.05).DD is linearly related to FGF23.Conclusion:Combined detection of D -dimer,lactate dehydrogenase and fibroblast growth factor 23levels is of great significance in the clinical diagnosis,treatment and prognosis of patients with chronic renal failure.Key words:D-dimer;Lactate dehydrogenase;Fibroblast growth factor 23;Chronic renal failure 中图分类号:R692.5,R446文献标识码:A 文章编号:2096-4390(2019)28-0030-02联合检测D-D 、LDH 、FGF23在慢性肾衰中的临床意义储云鹏1邓莹2盛小花1*赵泱泱3吴雪江1李阳1李文婷1（1、无锡市中医医院检验科，江苏无锡2140712、无锡市第三人民医院检验科，江苏无锡2140413、银川申力科贸有限公司，宁夏银川750004）慢性肾脏病的发病率接近11%，慢性肾脏病的患者里面，接近1/3的患者的肾功能出现了不同程度上的衰退现象。

Human β-NGF ELISA Kit 说明书

Humanβ-NGF ELISA Kit检测试剂盒（酶联免疫吸附法）Catalog NumberEK1141-48EK1141-96定量检测血清、血浆和细胞培养上清中的人β神经生长因子(β-NGF)浓度。

本产品仅用于科学研究，非诊断试剂，不能用于临床诊断。

一、产品介绍1.背景介绍神经生长因子(NGF)是一种神经肽，主要参与调节某些靶神经元的生长、增殖和存活。

当表达时，NGF最初是以7S、分子量为130kDa的复合物存在，这个复合物由α-NGF、β-NGF和γ-NGF(2:1:2比例)三个蛋白组成。

“神经生长因子”通常指的是2.5S、分子量为26kDa的β亚基蛋白。

β亚基是7S NGF复合物中唯一一个有生物活性的成分(如作为信号分子)。

NGF在先天性和获得性免疫中都起着重要作用。

研究表明NGF通过血浆在机体中循环，对整体的稳态维持很重要。

NGF可促进髓鞘的修复，亦可参与多种精神疾病，如老年痴呆症、抑郁症、精神分裂症、自闭症、雷特综合征、神经性厌食症，神经性贪食症。

NGF信号失调与阿尔茨海默病有关。

同样，NGF在许多心血管疾病中发挥作用，如冠状动脉粥样硬化、肥胖、2型糖尿病、代谢综合征。

NGF也可促进伤口愈合。

2.检测原理本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。

特异性抗人β-NGF抗体预包被在高亲和力的酶标板上。

酶标板孔中加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体，经过孵育，样本中存在的β-NGF与固相抗体和检测抗体结合。

洗涤去除未结合的物质后，加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)。

洗涤后，加入显色底物TMB，避光显色。

颜色反应的深浅与样本中β-NGF的浓度成正比。

加入终止液终止反应，在450nm波长(参考波长570-630nm)测定吸光度值。

3.试剂盒检测的局限1)请在本试剂盒标示的有效期内使用。

2)试剂盒的试剂不能与其他批号的试剂或其他来源的试剂混合使用。

3)任何标准品稀释、操作人员、移液技术、洗涤技术、孵育温度、试剂盒保存时间的改变，都将影响结合反应。

人表皮生长因子(EGF)Elisa试剂盒使用说明书

人表皮生长因子(EGF)Elisa试剂盒使用说明书供应商：上海乔羽生物有限公司人表皮生长因子(EGF)Elisa试剂盒使用说明书Elisa Kit规格：48孔配置/96孔配置标准品稀释液：1.5ml×1瓶酶标试剂：3 ml×1瓶（48）/6 ml×1瓶（96）【人表皮生长因子(EGF) elisa试剂盒】本试剂仅供研究使用计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

试剂盒组成：封板膜:2片（48）/2片（96）说明书:1份密封袋:1个标准品：2700ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶2-8℃保存酶标包被板: 1×48 1×96 2-8℃保存样品稀释液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液: 3ml×1瓶 6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液:（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人表皮生长因子(EGF) 水平。

用纯化的人表皮生长因子(EGF) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入表皮生长因子(EGF) ，再与HRP标记的表皮生长因子(EGF) 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

人转化生长因子β1(TGF-β1)elisa检测试剂盒使用说明书

人转化生长因子β1(TGF-β1)elisa检测试剂盒使用说明书人转化生长因子β1(TGFβ1)elisa检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被转化生长因子β1（TGFβ1）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的转化生长因子β1（TGFβ1）呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在28℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。

实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成名称 96孔配置 48孔配置备注微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条无标准品 0.3mL*6管 0.3mL*6管无样本稀释液 6mL 3mL 无检测抗体HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无终止液 6mL 3mL 无封板膜 2张 2张无说明书 1份 1份无自封袋 1个 1个无注：标准品（S0S5）浓度依次为：0、3、6、12、24、48 ng/mL试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

慢性肾脏病患者FGF23基因多态性与肾功能损伤、血管钙化的相关性

慢性肾脏病患者FGF23基因多态性与肾功能损伤、血管钙化的相关性蔡青刘殿强高勇朱清丁芳蔡莉刘瑾淮北矿工总医院肾内科，淮北 235000通信作者：蔡青，Email:189096丨3558@ 163. com【摘要】目的探讨慢性肾脏病（C K D)患者成纤维细胞生长因子23(F G F23)基因多态件与肾功能损伤、血管钙化的相关性。

方法选择2016年1月至2019年1月收治的270例C K D患者作为研究对象，依据肾小球滤过率变化情况分为稳定组和恶化组，依据血管钙化与否分为钙化组和非钙化组。

选择同期来本院体检的健康人群50例作为对照组。

以酶联免疫吸附法测定血清 F G F23水平，以 S e q u e n o m Massarray 系统测定基因位点 rs7955866、rsl3312756、rs3Sl2822进行基因分型，分析各组基因型、等位基因分布，并采用S p e a r m a n相关性分析等位基因频率与血清F G F23水平、肾功能损伤程度和血管钙化的相关性。

结果C K D患者血清F G F23水平 [(434. 8 ±68. 9)p g/m L]显著高于对照组[(300. 5 ±34. 4) p g/m L，f =20. 911，P <0•001],对照组、稳定组[(345. 6 ±38. 8)p g/m L]、恶化组[(552. 3 ±85.4)p g/m L]、非钙化组[(336.4 ±34. 3)P g/m L]和钙化组[(561.4 ±89.3)P g/m L]的血清F G F23水平比较，差异有统计学意义（戶< ().〇5)。

对照组、稳定组、恶化组、非钙化组和钙化组在基因位点r s7955866( A A、A G、G G)、1^3812822(〇：、(：1\77)的基因型及等位基因频率比较，差异具有统计学意义（/3<0.05)，而各组在基因位点r s l3312756(C C、C G、G G)的基因型及等位基因频率比较，差异无统计学意义（P>0.05)。

急性脑梗死患者血清FGF23、Klotho水平变化

对照组在体检日清晨空腹采血，同法检测血清、。ＦＧＦ２３Ｋｌｏｔｈｏ１．３统计学方法采用ＳＰＳＳ２１．０统计软件。计量资料以ｘ珋± ｓ表示，组间比较采用ｔ检验。Ｐ＜０．０５
１资料与方法１．１临床资料观察组：选择２０１６年月１～２０１７年９月于南通市第一人民医院住院治疗的１３９例ＡＣＩ患者。入选标准：①均符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南２０１４》诊断标准，并经头颅核磁共振检查确诊；②年龄１８～６５岁；③遵守医学实验伦理
种限制，不能及时发现病灶。近年来研究发现，成纤（ＢＭＩ２４．６１ ±２．）０１ｋｇ／ｍ２，有吸烟史５１例。另选取
维细胞生长因子（ＦＧＦ）与心脑血管病密切相关［３］。１２０例体检健康者作为对照组，其中男８６例、女３４
ＦＧＦ能促进平滑肌细胞增殖，但不能使平滑肌细胞例，年龄（５１．６６ ± ４．１８）岁，体质量指数（２４．２２ ±
Ｐ＜０．０１
３讨论
基金项目：江苏省自然科学基金资助项目（ＢＫ２０１４０９５６）。
ＡＣＩ是指由动脉粥样硬化引发的脑部血液循环
６５
山东医药２０１８年第５８卷第４０期
供应障碍而使脑组织发生不可逆的损伤，是一种严并发症的关系［Ｊ］．中南大学学报（医学版），２０１７，４２（９）：
导致的局部血液循环障碍［１］，进而导致脑组织缺血书；④病程３天内患者。排除标准：①３个月内有头
性坏死，是中老年人群中的常见病与多发病。ＡＣＩ部外伤史患者；②合并有器官衰竭、严重原发性疾
发病机制极为复杂且发病突然，若治疗不及时可导病、精神异常等并发症；③妊娠期或哺乳期患者。观
致严重后遗症［２］，而现有的医疗技术往往又存在各察组中男９３例、女４６例，年龄（５３．２６ ± ５．０１）岁，

慢性肾脏病患者血清成纤维细胞生长因子23与肾功能及钙磷代谢的关系

㊃论著㊃通信作者:朱颖辉,E m a i l :c h e n r x 87@126.c o m慢性肾脏病患者血清成纤维细胞生长因子23与肾功能及钙磷代谢的关系朱颖辉,李国刚(首都医科大学石景山教学医院北京市石景山医院肾内科,北京100043) 摘要:目的了解慢性肾脏病(C K D )患者不同分期血中成纤维细胞生长因子23(F G F -23)的变化,探讨F G F -23与C K D 患者肾功能及钙磷代谢的关系㊂方法选择C K D 患者124例,健康对照组32例,测定患者的血清F G F -23㊁血钙㊁血磷㊁甲状旁腺激素(i P T H )㊁血清尿素氮(B U N )和肌酐(S C r ),按照C K D -E P I 公式计算肾小球滤过率(e G F R ),分析F G F -23与肾功能及钙磷代谢的关系㊂结果 C K D 患者血F G F -23水平较对照组显著升高(P <0.01)㊂随着肾功能减退,C K D 患者血F G F -23和i P T H 水平逐渐增高,在C K D 3~4期与对照组比较差异有统计学意义(均P <0.01),在C K D 5期明显高于对照组㊁C K D 1~2期㊁C K D 3~4期㊂随着肾功能减退血钙水平逐渐降低㊁血磷水平逐渐增高,C K D 患者在C K D 5期与对照组㊁C K D 1~2期㊁C K D 3~4期比较差异有显著统计学意义(均P <0.01)㊂相关分析显示,L o g F G F -23与血磷㊁L o gi P T H ㊁B U N ㊁S C r 呈正相关,与e G F R 呈负相关㊂多元线性回归表明,F G F -23与C K D 患者B U N ㊁S C r 呈正相关㊂结论 C K D 患者血清F G F -23在C K D 3~4期就显著增高,变化早于血磷的增高㊂肾功能状态㊁血磷㊁i P T H 与F G F -23相关㊂肾功能状态可能是C K D 患者血F G F -23升高的主要影响因素㊂关键词:肾疾病;胞间信号肽类和蛋白质类;磷;甲状旁腺素中图分类号:R 692 文献标识码:A 文章编号:1004-583X (2016)03-0299-04d o i :10.3969/j.i s s n .1004-583X.2016.03.017A s s o c i a t i o no f f i b r o b l a s t gr o w t h f a c t o r 23w i t h r e n a l f u n c t i o na n d c a l c i u m -p h o s p h o r u sm e t a b o l i s mi n p a t i e n t sw i t h c h r o n i c k i d n e y di s e a s e Z h uY i n g h u i ,L iG u o g a n gD e p a r t m e n t o f N e p h r o l o g y ,S h i j i n g s h a nT e a c h i n g H o s p i t a l o f C a p i t a lM e d i c a lU n i v e r s i t y ,B e i j i n g S h i j i n g s h a n H o s p i t a l ,B e i j i n g 100043,C h i n a C o r r e s p o n d i n g a u t h o r :Z h uY i n gh u i ,E m a i l :c h e n r x 87@126.c o m A B S T R A C T :O b je c t i v e T oi n v e s t i g a t et h ec h a n g eo ff i b r o b l a s tg r o w t hf a c t o r23(F G F -23)i n p a t i e n t s w i th di f f e r e n t s t a g e s o f c h r o n i c k i d n e y d i s e a s e (C K D );T o a n a l y z e t h e a s s o c i a t i o n o f F G F -23w i t h r e n a l f u n c t i o n a n d c a l c i u m -p h o s p h o r u sm e t a b o l i s m.M e t h o d s At o t a l o f 124C K D p a t i e n t sw e r e s e l e c t e d ,a n d32h e a l t h yp e o pl ew e r e s t u d i e da s c o n t r o l g r o u p .T h e l e v e l s o fF G F -23,s e r u mc a l c i u m ,s e r u m p h o s p h o r u s ,i n t a c t p a r a t h y r o i dh o r m o n e (i P T H ),b l o o d u r e an i t r o g e n (B U N )a n d s e r u mc r e a t i n i n e (S C r )w e r em e a s u r e d i na l l s u b je c t s .T h e g l o m e r u l a rf i l t r a t i o nr a t e (e G F R )w a s e s t i m a t e da c c o r d i ng t oC K D -E P I f o r m u l a .Th e a s s o ci a t i o no fF G F -23w i t h r e n a l f u n c t i o na n dc a l c i u m -p h o s p h o r u s m e t a b o l i s m w e r ea n a l y z e d .R e s u l t s T h es e r u m F G F -23i nC K D p a t i e n t s i n c r e a s e d m o r es i g n i f i c a n t l y t h a nt h a t i n c o n t r o l g r o u p (P <0.01).T h el e v e l so fs e r u m F G F -23a n di P T H i n c r e a s e d g r a d u a l l y wi t ht h ed e c l i n eo fr e n a l f u n c t i o n .T h e r ew e r e s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e i nF G F -23a n d i P T H b e t w e e nC K D 3-4s t a g e sa n dc o n t r o l g r o u p (a l l P <0.01).T h e l e v e l s o f s e r u mF G F -23a n d i P T Hi nC K D5s t a g e i n c r e a s e dm o r e s i g n i f i c a n t l y t h a n t h o s e i n c o n t r o l g r o u p ,C K D 1-2s t a g e s a n dC K D 3-4s t a g e s .W i t h t h e d e c l i n e o f r e n a l f u n c t i o n ,t h e l e v e l o f s e r u mc a l c i u mr e d u c e d g r a d u a l l y i n C K D p a t i e n t s ,s e r u m p h o s p h o r u si n c r e a s e d g r a d u a l l y i n C K D p a t i e n t s .T h e r e w e r es i gn i f i c a n td i f f e r e n c ei ns e r u m c a l c i u m ,s e r u m p h o s p h o r u sb e t w e e nC K D 5s t a g ea n dc o n t r o l g r o u p ,C K D 1-2s t a g e s ,C K D 3-4s t a ge s (a l l P <0.01).T h e c o r r e l a t i o n s s h o w e d t h a t L o g F G F -23w a s p o s i t i v e l y c o r r e l a t e dw i t h s e r u m p h o s p h o r u s ,L o g i P T H ,B U Na n dS C r .F G F -23w a sn e g a t i v e l y c o r r e l a t e dw i t he G F R.M u l t i p l e l i n e a r r e g r e s s i o na n a l y s i s i n d i c a t e d t h a t F G F -23w a s p o s i t i v e l y c o r r e l a t e dw i t hB U Na n dS C r .C o n c l u s i o n S e r u mF G F -23i n c r e a s e s s i g n if i c a n t l y i nC K D 3-4s t ag e s .F G F -23i n c r e a s e s e a r l i e r th a n s e r u m p h o s p h o r u s .F G F -23i s c o r r e l a t e ds i g n i f i c a n t l y w i t hr e n a l f u n c t i o n ,s e r u m p h o s p h o r u sa n d i P T H.R e n a l f u n c t i o n i s a n i n d e pe n d e n t i nf l u e n c e f a c t o r f o rF G F -23i n c r e a s e i nC K D p a t i e n t s .K E Y W O R D S :k i d n e y d i s e a s e s ;i n t e r c e l l u l a r s ig n a l i n gp e p a t i d e s a n d p r o t e i n s ;ph o s p h o r u s ;p a r a t h y r oi dh o r m o n e 慢性肾脏病(c h r o n i ck i d n e y di s e a s e ,C K D )患者肾功能进行性损害过程中机体出现一系列钙磷代谢紊乱,导致甲状旁腺功能亢进㊁矿物质及骨代谢异常,可引起转移性钙化,大大增加了C K D 患者的病死率㊂成纤维细胞生长因子23(f i b r o b l a s t g r o w t hf a c t o r 23,F G F -23)是近年来发现的一种新型调磷因子,在磷平衡的调节中起重要作用,与很多磷代谢紊㊃992㊃‘临床荟萃“ 2016年3月5日第31卷第3期 C l i n i c a l F o c u s ,M a r c h5,2016,V o l 31,N o .3Copyright ©博看网. All Rights Reserved.乱疾病的发病有关,而且与甲状旁腺激素(p a r a t h y r o i dh o r m o n e,P T H)关系密切㊂目前研究已发现血F G F-23水平升高不但是C K D患者钙磷代谢紊乱及血管钙化的敏感指标[1],而且与C K D进展有关[2],并且与左心室肥厚㊁动脉粥样硬化[3]有关,也是C K D患者死亡的独立危险因素[4]㊂但已有的研究多集中在对血液透析患者F G F-23的研究,较少注意到C K D患者非透析人群F G F-23的变化,我们研究C K D患者不同分期F G F-23的变化,分析F G F-23与C K D患者肾功能及钙磷代谢的关系㊂1资料与方法1.1病例选择2010年3月至2012年3月在北京市石景山医院肾内科住院的C K D患者(C K D组) 124例,男68例,女56例,年龄31~74岁,平均(57.6ʃ7.9)岁㊂诊断标准符合美国肾脏基金会在2002年制订的K/D O Q I标准㊂原发病分别为慢性肾小球肾炎12例㊁糖尿病肾病50例㊁高血压肾损害46例㊁多囊肾4例㊁其他12例㊂估算肾小球滤过率(e G F R)按照慢性肾脏病流行病学协作组开发的C K D-E P I公式计算,根据K/D O Q I标准将患者分为C K D1~2期34例㊁C K D3~4期50例㊁C K D5期40例㊂选取同期健康对照组32例,男17例,女15例,年龄27~79岁,平均(53.8ʃ12.8)岁㊂排除标准:年龄18岁以下及80岁以上,严重感染㊁肝功能损害㊁重度营养不良㊁骨折㊁恶性肿瘤㊁甲状旁腺疾病或手术,已行肾脏替代治疗㊂C K D组和健康对照组性别㊁年龄差异无统计学意义,具有可比性㊂1.2血清学检测 C K D组及健康对照组均于清晨空腹抽取静脉血㊂①采用罗氏C O B A S702全自动生化仪检测血清尿素氮(B U N)㊁肌酐(S C r)㊁白蛋白(A L B)㊁钙㊁磷的水平;②采用B E C KMA N-D X I800化学发光法测定血清全段甲状旁腺素(i P T H)水平;③留存血清,-70ħ冷冻保存,用美国原装I C L公司试剂盒,采用酶联免疫吸附法(E L I S A)测定血清F G F-23水平㊂1.3统计学方法采用S P S S17.0统计软件包进行分析,数据以均数ʃ标准差(x-ʃs)表示,非正态分布资料应用常用对数进行转换㊂两组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析,两两间比较采用L S D 法㊂相关分析采用P e a r s o n相关分析法,回归分析采用多元线性回归分析㊂P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1两组生化指标的比较 C K D组血清F G F-23水平明显高于健康对照组(P<0.01);C K D组血磷水平较健康对照组升高(P<0.05);C K D组i P T H㊁B U N㊁SC r水平较健康对照组显著增高(均P<0.01);C K D组血钙㊁e G F R㊁A L B水平较健康对照组显著降低(均P<0.01),见表1㊂表1两组生化指标比较(x-ʃs)组别例数L o g F G F-23(n g/L)A L B(g/L)钙(mm o l/L)磷(mm o l/L)L o g i P T H(n g/L)B U N(mm o l/L)S C r(μm o l/L)e G F R (m l㊃m i n-1㊃1.73m-2)健康对照组321.36ʃ0.1141.97ʃ3.682.24ʃ0.121.18ʃ0.271.57ʃ0.154.51ʃ1.2159.18ʃ11.53120.39ʃ23.19 C K D组1241.64ʃ0.3237.04ʃ5.762.09ʃ0.231.40ʃ0.521.91ʃ0.4016.05ʃ12.19293.47ʃ275.1237.75ʃ29.14 t值-4.8934.3923.407-2.217-4.594-5.327-4.80313.917 P值<0.01<0.01<0.01<0.05<0.01<0.01<0.01<0.012.2 C K D不同分期与健康对照组血F G F-23及钙磷代谢的比较随着肾功能的减退F G F-23水平和i P T H水平逐渐增高,C K D患者在C K D3~4期与健康对照组比较差异有显著统计学意义(均P< 0.01),在C K D5期明显高于健康对照组㊁C K D1~2期㊁C K D3~4期㊂C K D患者随着肾功能的减退血钙水平逐渐降低㊁血磷水平逐渐增高,在C K D5期与健康对照组㊁C K D1~2期㊁C K D3~4期比较差异有统计学意义(均P<0.01),见表2㊂表2C K D不同分期与健康对照组F G F-23及钙磷代谢的比较(x-ʃs)组别例数L o g F G F-23(n g/L)钙(mm o l/L)磷(mm o l/L)L o g i P T H(n g/L)健康对照组321.36ʃ0.112.24ʃ0.121.18ʃ0.271.57ʃ0.15C K D1~2期341.42ʃ0.112.23ʃ0.121.20ʃ0.201.55ʃ0.10C K D3~4期501.65ʃ0.28*2.15ʃ0.171.31ʃ0.331.82ʃ0.28*C K D5期401.83ʃ0.36*#ә1.89ʃ0.25*#әә1.69ʃ0.74*#әә2.34ʃ0.31*#әәF值19.50019.3356.69758.287P值<0.01<0.01<0.01<0.01注:与健康对照组比较,*P<0.01;与C K D1~2期比较,#P<0.01;与C K D3~4期比较,әP<0.05,әәP<0.01㊃003㊃‘临床荟萃“2016年3月5日第31卷第3期 C l i n i c a l F o c u s,M a r c h5,2016,V o l31,N o.3Copyright©博看网. All Rights Reserved.2.3 C K D患者血F G F-23与肾功能及钙磷代谢的相关性分析C K D患者L o g F G F-23与血磷㊁L o g i P T H㊁B U N㊁S C r呈正相关(P均<0.01);与e G F R呈负相关(P<0.01);与年龄㊁A L B和血钙无明显相关性,见表3㊂表3C K D患者L o g F G F-23与肾功能及钙磷代谢的相关性分析临床指标r值P值年龄-0.080>0.05A L B-0.149>0.05钙-0.199>0.05磷0.509<0.01L o g i P T H0.530<0.01B U N0.720<0.01S C r0.522<0.01e G F R-0.555<0.012.4多元线性回归分析将C K D患者的F G F-23与肾功能及钙磷代谢指标进行多元线性回归分析,以L o g F G F-23作因变量Y,以P㊁L o g i P T H㊁B U N㊁S C r㊁e G F R作为自变量,回归方程表示为:L o g F G F-23=1.122+0.021B U N+0.001S C r,P值分别为0.000和0.021㊂多元线性回归表明,F G F-23与C K D 患者B U N㊁S C r呈正相关㊂3讨论F G F-23是近年发现的一种调节血磷的重要激素,主要由骨细胞产生和分泌,F G F-23具有F G F受体结合位点和K l o t h o蛋白的结合位点,K l o t h o蛋白是F G F-23与受体结合的必需辅助因子,肾脏是F G F-23的重要靶器官,由F G F-23和K l o t h o调节的骨肾内分泌轴是保持磷稳态的重要成分㊂C K D患者血磷升高时刺激骨细胞分泌F G F-23,作用在肾脏抑制近端肾小管上皮细胞刷状缘上的钠-磷协同转运蛋白Ⅱa的表达,减少磷的重吸收;抑制1α羟化酶,减少1,25(O H)2D3的产生,抑制肠道磷的吸收,维持磷的平衡㊂C K D早中期高磷血症和1,25(0H)2D3的下降刺激了F G F-23和P T H的分泌,这两种激素都促进残余肾功能对磷的清除,此时F G F-23的升高是对高磷血症的代偿机制以维持磷的平衡㊂本研究中血F G F-23在C K D3~4期已明显增高,而血磷在C K D5期才显著升高,提示C K D患者F G F-23的升高早于血磷的增高,可作为C K D患者血磷代谢紊乱的早期指标㊂也有研究发现,F G F-23的升高可以发生在C K D早期,在钙磷代谢紊乱之前就可能出现[5]㊂本研究中C K D患者血F G F-23水平明显高于健康对照组,并且随着肾功能减退而逐渐升高,与已有研究结果一致[6-7]㊂随着肾功能的逐渐减退,严重C K D患者G F R明显降低,一方面血磷滤过不足导致尿磷排泄障碍,另一方面由于K l o t h o蛋白在肾脏的表达进行性减少,F G F-23的靶向受体减少,产生F G F-23抵抗,导致尿磷排泄减少,从而引起血磷和F G F-23之间的负反馈调节障碍,形成恶性循环,导致血磷和F G F-23的不断升高㊂本研究中在C K D5期血磷和F G F-23均显著增高,与上述理论一致㊂有研究表明,在未进入透析的C K D患者中,F G F-23水平不仅与基线G F R呈负相关,在经过53个月(中位数)随访后,那些肌酐倍增或者出现终末期肾病的患者,F G F-23明显高于未进展的C K D患者[2],提示F G F-23的升高与C K D进展有关㊂近来研究发现C K D患者F G F-23水平升高与动脉粥样硬化㊁左心室肥厚㊁心血管事件均显著相关[8],并与冠状动脉钙化[9]㊁心脏瓣膜钙化[1]及血管内皮功能障碍[10]相关㊂F G F-23升高可明显增加C K D患者心血管疾病的发病风险,并与C K D患者和透析患者病死率显著相关[11],提示F G F-23水平是C K D患者不良预后的一个预测指标㊂本研究中C K D患者F G F-23与血磷㊁i P T H㊁B U N㊁S C r呈正相关,与e G F R呈负相关,说明肾功能状态㊁血磷㊁i P T H与F G F-23相关㊂也有研究发现当G F R<30m l/m i n时,肾功能状态㊁血磷㊁血i P T H均可影响血F G F-23水平[6]㊂多元线性回归分析显示F G F-23与B U N㊁S C r呈正相关,说明肾功能损害可能是F G F-23升高的主要影响因素,提示F G F-23更可能是肾功能减退标志之一,故控制危险因素,延缓慢性肾功能衰竭的进展,可能才是延缓F G F-23升高的重要环节㊂已有研究表明低蛋白饮食联合复方酮酸制剂可延缓慢性肾衰竭的进展,最近一项随机试验也发现,极低蛋白饮食联合复方酮酸制剂也能够降低透析前C K D患者血清F G F-23水平[12]㊂多项研究表明不同阶段的C K D患者使用磷结合剂可降低F G F-23水平,使用司维拉姆对C K D 3~4期血磷正常的患者治疗6周后,患者F G F-23的水平下降50%[13];使用碳酸镧治疗C K D3期患者4周后,患者F G F-23的水平减少22%[14];使用碳酸镧治疗C K D4期伴有高磷血症患者3月后,F G F-23水平降低38%[15];对C K D4~5期非透析患者的研究表明,碳酸镧能有效减少血磷及血清F G F-23水平[16]㊂F G F-23由251个氨基酸残基组成,相对分子质量为32000,根据尿毒症毒素分子的理化特性及相对分子质量大小的分类方法,F G F-23属于中分子化合物,普通血液透析较难清除,研究发现应用碳酸镧㊃103㊃‘临床荟萃“2016年3月5日第31卷第3期 C l i n i c a l F o c u s,M a r c h5,2016,V o l31,N o.3Copyright©博看网. All Rights Reserved.可有效降低血液透析患者血清F G F-23水平[17];在不同血液净化模式对F G F-23清除的研究中发现,血液透析滤过㊁血液透析联合血液灌流可有效清除血液透析患者血清F G F-23水平[18]㊂有研究显示F G F-23能直接调节甲状旁腺产生i P T H,这可能与F G F受体和K l o t h o在甲状旁腺中共表达有关[19],生理状态下F G F-23能抑制甲状旁腺细胞增生,降低i P T H水平㊂研究发现在继发性甲状旁腺功能亢进(s e c o n d a r y h y p e r p a r a t h y r o i d i s m, S H P T)患者中,高水平的i P T H伴随着高水平的F G F-23,这可能是由于甲状旁腺尤其是结节性增生的腺体区域K l o t h o-F G F受体复合物表达减少,甲状旁腺对F G F-23产生抵抗[20]㊂本研究中F G F-23与i P T H呈正相关,提示F G F-23与S H P T发生有一定关系㊂研究显示F G F-23水平可更好的预测终末期肾病患者发生难治性S H P T的风险[21]㊂C K D患者血F G F-23水平随着肾功能减退而逐渐升高,变化早于血磷的增高,在C K D3~4期血磷仍处于正常水平㊁F G F-23已经明显升高,此时检测F G F-23水平可能有助于确定哪些C K D患者或血磷正常者需给予低磷饮食及磷结合剂的治疗,这对于降低血F G F-23水平㊁延缓C K D的进展和钙磷代谢紊乱的发生有一定作用,但需经临床进一步研究论证㊂本研究提示B U N㊁S C r是C K D患者F G F-23升高的主要影响因素,提示F G F-23更可能是肾功能减退标志之一,故控制危险因素,延缓慢性肾衰竭的进展,可能才是延缓F G F-23升高的重要环节㊂参考文献:[1]李国刚,朱颖辉,刘惠兰,等.慢性肾脏病患者血清成纤维细胞生长因子与血管钙化的关系初探[J].临床荟萃,2012,27(24):2164-2165.[2] F l i s e rD,K o l l e r i t s B,N e y e r U,e ta l.F i b r o b l a s t g r o w t hf a c t o r23(F G F-23)p r e d i c t s p r og r e s s i o n o fch r o ni c k i d n e yd i se a s e:t h eM i l d t o M o d e r a t eK i d n e y D i s e a s e(MMK D)S t u d y[J].JA mS o cN e p h r o l,2007,18(9):2600-2608.[3] X i a o Y,P e n g C,H u a n g W,e ta l.C i r c u l a t i n g f i b r o b l a s tg r o w t h f a c t o r23i sa s s o c i a t e d w i t ha n g i o g r a p h i cs e v e r i t y a n de x t e n t of c o r o n a r y a r t e r y d i s e a s e[J].P L o S O n e,2013,8(8):e72545.[4] A r n löv J,C a r l s s o nA C,S u n d s t r o mJ,e t a l.H i g h e r f i b r o b l a s tg r o w t h f a c t o r-23i n c r e a s e s t h e r i s k o f a l l-c a u s e a n dc a rd i o v a s c u l a rm o r t a l i t y i nt h ec o mm u n i t y[J].K i d ne y I n t,2013,83(1):160-166.[5] Y i l m a zM I,S o n m e zA,S a g l a m M,e t a l.F G F-23a n dv a s c u l a rd y s f u n c t i o ni n p a t ie n t s w i t h s t a g e3a n d4c h r o n i c k i d n e yd i se a s e[J].K i d n e y I n t,2010,78(7):679-685.[6]彭燕,张威,郝静,等.慢性肾脏病患者成纤维细胞生长因子23与肾功能及钙磷代谢的关系[J].中华肾脏病杂志,2010,26(2):81-85.[7]汤婷,冯丽萍,赵秀芬,等.成纤维细胞生长因子23与慢性肾脏病矿物质代谢[J].肾脏病与透析肾移植杂志,2012,21(2): 120-125.[8] M i r z a MA,A l s iöJ,H a mm a r s t e d t A,e t a l.C i r c u l a t i n gf i b r o b l a s tg r o w t hf a c t o r-23i sa s s o c i a t e d w i t hf a t m a s sa n dd y s l i p i de m i a i nt w o i n d e p e n d e n t c o h o r t sof e l d e r l y i n d i v i d u a l s[J].A r t e r i o s c l e rT h r o m bV a s cB i o l,2011,31(1):219-227.[9]张敏芳,颜佳毅,朱铭力,等.成纤维细胞生长因子23可预测慢性肾脏病中晚期患者冠状动脉钙化的发生及不良预后[J].中国血液净化,2013,12(10):547-560.[10]李旻,周华,周萃星,等.终末期肾病患者成纤维细胞生长因子23-K l o t h o调节轴与血管内皮功能的关系[J].临床荟萃, 2014,29(7):765-769.[11]I s a k o v a T.F i b r o b l a s t g r o w t hf a c t o r23a n da d v e r s ec l i n i c a lo u t c o m e s i nc h r o n i ck i d n e y d i s e a s e[J].C u r r O p i n N e p h r o lH y p e r t e n s,2012,21(3):334-340.[12] D i l o r i oB,D iM i c c oL,T o r r a c a S,e t a l.A c u t e e f f e c t s o f v e r y-l o w-p r o t e i nd i e t o nF G F-23l e v e l s:a r a n d o m i z e d s t u d y[J].C l i nJA mS o cN e p h r o l,2012,7(4):581-587.[13] O l i v e i r aR B,C a n c e l aA L,G r a c i o l l i F G,e t a l.E a r l y c o n t r o l o fP T Ha n dF G F-23i nn o r m o p h o s p h a t e m i cC K D p a t i e n t s:an e wt a r g e t i n C K D-M B D t h e r a p y[J].C l i nJ A m S o c N e p h r o l, 2010,5(2):286-291.[14] G o n z a l e z-P a r r a E,G o n z a l e z-C a s a u s M L,G a l a n A,e ta l.L a n t h a n u m c a r b o n a t e r e d u c e s F G F-23i n c h r o n i c k i d n e yd i se a s eS t a g e3p a t i e n t s[J].N e p h r o l D i a l T r a n s p l a n t,2011,26(8):2567-2571.[15]高聪普,陈宝平,时军,等.碳酸镧对慢性肾脏病四期伴有高磷血症患者血磷㊁甲状旁腺激素及成纤维细胞生长因子23影响的临床研究[J].中国医师进修杂志,2013,36(31):61-62. 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人成纤维细胞生长因子23(FGF-23)ELISA试剂盒说明书

人成纤维细胞生长因子23（FGF-23）酶联免疫分析试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中成纤维细胞生长因子23（FGF-23）的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人成纤维细胞生长因子23（FGF-23）水平。

用纯化的人成纤维细胞生长因子23（FGF-23）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入成纤维细胞生长因子23（FGF-23）,再与HRP标记的FGF-23抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的成纤维细胞生长因子23（FGF-23）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人成纤维细胞生长因子23（FGF-23）浓度。

试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。

通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。