微生物学实验讲义
《大学课件：微生物学实验技术》
1
菌落计数
学习使用菌落计数法来估算微生物的
培养曲线
2
数量。
了解培养曲线的特点和分析方法，研
究微生物的生长动力学。
3
生长速率
掌握计算微生物生长速率的方法和相 关参数。
常见微生物的培养和鉴定方法
革兰氏染色
掌握革兰氏染色技术，区 分细菌的阳性和阴性特征。
特定培养特性
了解某些微生物的特定培 养特性，如产气、荧光等。
1 增殖速率
了解细胞增殖的原理和 速率控制因素。
2 细胞计数
学习使用显微镜和自动 计数器进行细胞计数。
3 生物量分析
了解生物量分析的方法 和应用，如干重法和荧 光法等。
无菌操作技术
1
消毒与灭菌
学会对培养皿、培养工具和培养基进
传递培养物
2
行消毒灭菌。
掌握无菌操作技术，避免细菌和真菌
的污染。
3
环境监测
了解微生物实验室的环境监测方法和 标准。
纯培养基的制备
琼脂平板制备
液体培养基制备
学习制备琼脂平板和琼脂斜板， 作为微生物培养的基础。
掌握液体培养基的制备方法， 用于大规模培养微生物。
学会正确的洗手、穿戴实验服和佩戴防护设备等个人卫生常识。
4 废物处理
了解废物处理的规定和流程，保护环境。
微生物实验室的安全与保护
生物安全级别
了解微生物实验室的安全 级别分类，确保实验室的 安全性。
防护措施
学习使用防护设备和采取 预防措施来保护自己和实 验环境。
危险物质处理
熟悉处理危险物质的方法 和相应的应急措施。
生物化学测试
学习常见的生物化学测试 方法，如氧化-发酵试验等。
微生物学实验ppt课件
器材与试剂的选用原则
03
如无菌操作、适用性、经济性等
02
细菌形态与结构观察
细菌培养及形态特征
01
02
03
细菌培养方法
包括需氧培养、厌氧培养 和兼性厌氧培养等，不同 种类的细菌需要不同的培 养条件。
细菌菌落特征
观察细菌在固体培养基上 形成的菌落，了解其形状、 大小、颜色、透明度等特 征。
细菌细胞形态
05
微生物代谢活性测定
生长曲线测定方法
直接计数法
通过显微镜直接观察并计数微生物数量，适用于较大微生物如细 菌、酵母菌等。
比浊法
利用微生物生长引起培养液浊度变化来测定生长曲线，操作简便 但易受杂质干扰。
平板菌落计数法
将待测样品稀释后涂布于固体培养基表面，培养后计数形成的菌 落数，适用于可形成菌落的微生物。
原理
病毒必须寄生在活细胞内才能增 殖，通过提供适宜的细胞环境， 使病毒在细胞内复制并产生子代
病毒。
病毒检测技术及应用
免疫学方法
利用抗原抗体特异性结合的原理，通过酶联免疫吸附试验 （ELISA）、免疫荧光技术等检测病毒抗原或抗体。
分子生物学方法
基于病毒核酸的特异性，利用PCR、实时荧光定量PCR等技术扩增 并检测病毒核酸。
微生物学实验ppt课件
contents
目录
• 实验基础知识 • 细菌形态与结构观察 • 真菌形态与结构观察 • 病毒培养与检测技术 • 微生物代谢活性测定 • 微生物遗传与变异研究 • 微生物生态学及环境因子影响研究
01
实验基础知识
微生物学概述
类生活中的作用：如 生态平衡、发酵工业 等
生理生化鉴定
利用真菌的生理生化特性，如营养需 求、代谢产物等，进行进一步的分类 鉴定。
医学微生物学实验课件
《医学微生物学实验课件》xx年xx月xx日contents •实验一：细菌的分离与培养•实验二：细菌的形态学观察•实验三：细菌的生化试验•实验四：病毒的分离与鉴定•实验五：抗体的制备与检测•实验六：微生物的耐药性测定目录01实验一：细菌的分离与培养掌握细菌分离与培养的基本方法和技能。
学习如何进行细菌的分离、纯化及培养。
了解细菌的生长繁殖及代谢过程。
实验目的实验原理01细菌分离培养是微生物学实验的基本技术之一，通过分离培养可以将混合菌群中的单一菌种分离出来，以便进行鉴定和研究。
02细菌的生长繁殖是微生物学研究的重要内容，通过观察细菌的生长曲线可以了解其生长规律和繁殖方式。
03细菌的代谢过程是微生物学研究的另一个重要方面，通过观察细菌的代谢过程可以了解其代谢类型和能量产生方式。
1. 准备实验器材：培养皿、接种环、培养基、显微镜等。
2. 将培养基倒入培养皿中，用接种环取菌种划线接种于培养基上。
3. 将接种后的培养皿放入恒温器中进行培养。
4. 观察记录细菌的生长情况，包括菌落的形态、大小、颜色等。
5. 进行菌种的纯化及鉴定，包括革兰氏染色、生化反应等。
实验步骤02实验二：细菌的形态学观察实验目的掌握细菌的基本形态学特征。
学习使用显微镜观察细菌的方法。
了解不同类型细菌的形态学特点。
细菌是一种单细胞微生物，具有多种形态，如球形、杆状、螺旋形等。
显微镜是观察细菌形态学特征的重要工具，通过观察不同倍数下的细菌形态，可以识别和区分不同类型的细菌。
细菌的形态学特征与其分类、致病性及对药物的敏感性有关。
实验原理实验步骤2. 将细菌样本涂抹在载玻片上，用盖玻片轻轻盖上。
3. 将载玻片放置在显微镜载物台上，调整焦距，使细菌形态清晰可见。
5. 清洗载玻片和盖玻片，并妥善保存。
4. 观察不同倍数下的细菌形态，记录其特征。
1. 准备实验材料：显微镜、细菌样本、显微镜油、擦镜纸等。
03实验三：细菌的生化试验实验目的掌握细菌生化试验的原理和方法。
微生物学讲义
绪论一、什么是微生物非分类学上名词，来自法语“Microbe”一词。
是形体微小、单细胞或个体结构简单的多细胞、甚或无细胞结构的低等生物的通称。
一般只有借助显微镜才能其进行观察。
三界（域）系统Woese提出将生物分成为三界(后来改称三个域)：古细菌、真细菌和真核生物。
1990年，他为了避免把古细菌也看作是细菌的一类，他又把三界(域)改称为：Bacteria(细菌)、Archaea(古生菌)和Eukarya(真核生物)。
并构建了三界(域)生物的系统树。
微生物无处不在，我们无时不生活在“微生物的海洋”中。
微生物是人类的朋友微生物是自然界物质循环的关键环节；体内的正常菌群是人及动物健康的基本保证；微生物可以为我们提供很多有用的物质；微生物是现代生物技术使用的重要宿主和工具。
少数微生物也是人类的敌人！认识微生物的四大障碍：个体过于微小；群体外貌不显；种间杂居混生；形态与作用后果很难被认识。
二、人类对微生物世界的认识过程（一）、微生物的发现——形态学时期荷兰人列文虎克（1632-1723）首次观察到了细菌。
（二）、微生物学的奠基——生理学时期法国人巴斯德（1822-1895）（1）证实了微生物活动和否定了微生物自然发生学说。
（2）免疫学——预防种痘（3）发酵的研究——相信一切发酵作用都和微生物的存在及繁殖有关。
不同的发酵是由不同的微生物引起的。
（4）发明巴斯德消毒法。
德国人柯赫（1843-1910）1、建立微生物学研究基本技术（1）分离和纯化细菌：划线法，混合倒平板法。
（2）设计了培养细菌用的肉汁胨培养液和营养琼脂培养基。
（3）设计了细菌染色技术2、证实疾病的病原菌学说，提出了柯赫准则。
柯赫准则（1）某一种微生物，当被怀疑是病原体时，它一定伴随着病害而存在。
（2）必须能自原寄主分离出这种微生物，并培养成为纯培养。
（3）用已纯化的纯培养微生物，人工接种寄主，必须能诱发与原来病害相同病害。
(4) 必须自人工接种发病的寄主内，能重新分离出同一病原微生物并培养成纯培养。
微生物学实验介绍
实验安排
实验一： 实验器材的准备与干热灭菌 实验二：培养基的配制与高压蒸汽灭菌 实验三：空气洁度、手指等微生物学检查与微生物接种技术训练 实验四：土壤微生物的分离 实验五：土壤中芽孢杆菌的分离和环境微生物检测 实验六：微生物菌落观察，放线菌与酵母插片培养法 实验七：放线菌与酵母菌形态观察 实验八：细菌形态观察；各种染色法；油镜的使用 实验九：微生物计数与大小的测量 实验十：生长曲线测定 实验十一：生理生化测定：（一）配制培养基，接种 实验十二：生理生化测定：（二）糖醇类发酵实验及结果观察 实验十三：噬菌体的转导实验 实验十四：微生物拮抗实验；药物敏感试验
步骤： 1. 将包装好的玻璃器皿放入干热灭菌器内，即烘箱。 2. 关门加热。 3. 当温度上升至160～170℃时，保持此温度1-2小时。
>180C,纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。 4. 停止加热，待温度下降至40℃以下时，将门打开，取出
灭菌器皿备用。
下周实验内容
培养基的配制与高压蒸汽灭菌
9. 实验结束，凡带菌用具均需经灭菌后才能清洗。
10. 实验完毕，应将仪器放回原处，擦净桌面，收拾整齐， 得到老师同意后方可离开。离开实验室前，请用肥皂洗 手。值日生负责清洁桌面、地面等，关闭门、窗、灯、 火、煤气等。
11. 每次实验结果，应以实事求是的态度填写实验报告，及 时交给指导教师批阅。
12. 学期末的时候请务必把各自的玻璃器皿清洗干净。
微生物学实验注意事项
1. 为保证实验室的整洁和实验顺利进行，非必要的物品请勿 带入室内。室内严禁吸烟或饮食。
2. 实验前请预习实验教材，明确实验的目的要求、原理和操 作步骤。
3. 实验进行时，应尽量避免在室内走动，以免染菌。同时请 勿高声说话，保持室内安静。
制药工程专业微生物实验讲义
（怀化学院微生物学课程组）微生物学实验室学生要求为了营造一个安全有效、秩序良好的实验室环境，达到“科学、规范、安全、高效”的目的，特对进入微生物学实验室进行实验的学生作如下要求。
1.按已分好的班级组次，按时参加实验，并完成实验项目。
2.进入实验室前，要求穿戴整齐，需穿好实验服，不能穿人字拖类拖鞋进入实验室。
3.上课前要求上交当堂课程的实验预习报告。
4.要求独立或以小组为单位完成实验项目，实验期间保持实验室安静，不能大声喧哗，并及时记录好实验数据。
5.实验完成后及时对实验结果进行分析并完成实验报告。
6.实验完成后需及时清洗实验器皿，清洁和整理实验台，做好卫生，保持实验室干净整洁。
授课教师：刘卫今、黎晓英（以下实验内容仅供参考，具体内容以相应教材为准）实验一培养基的制备与灭菌一、实验目的1．掌握培养基配制的原理。
2．通过对牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、马铃薯培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。
3．解高压蒸汽灭菌的基本原理及操作方法。
二、实验原理1．什么是培养基，一般培养基应具备哪些营养要素？2．培养基有哪些类型，为什么培养不同的微生物需要的培养基不同，培养基为什么要调节pH 值，配制好的培养基为什么要立即灭菌？3．高压蒸汽灭菌的原理是什么？三、实验材料和用具牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖（或蔗糖）、链霉素、1mol/L NaOH、1mol/LH Cl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O 试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布和玻璃漏斗等。
四、操作步骤(一)牛肉膏蛋白胨培养基的配制牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。
其配方如下:牛肉膏3g，蛋白胨l0g，NaCl5g，琼脂15-20g, 水1000mL，pH 7.4～7.61. 称量：按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。
实验课6 ——【医学微生物学精品讲义】
TRUST (toluide red unheated serum regain test)
材料：TRUST试剂盒、病人血清
反应卡
1
2
3
Positive Negative Experimental control control group
（4）复染：稀释复红30sec，水洗，甩干水份。
（四）浅部真菌病标本的检查
1. 实验材料 （1）发癣或足癣患者的毛发或皮屑。 （2）10～20%NaOH溶液。 （3）载玻片、盖玻片等。
奋森螺旋体(革兰染色)
梅毒螺旋体(镀银染色)
钩端螺旋体(镀银染色)
暗视野显微镜下苍白密螺旋体 （暗视野，放大1000倍）
（二）梅毒血清学诊断试验
非螺旋体抗原试验：查反应素，特点是敏感性高, 但 易出现假阳性。 反应素是指非特异性抗类脂质抗体。当苍白螺旋体侵 入人体后,便会诱发人体产生两种相对应的抗体,即具 有种和属特异性的IgM和IgG抗体,另一种是非特异性抗 类脂质抗体称为反应素，它不是由螺旋体所产生而是 在螺旋体破坏人体组织过程中所释放的物质间接产生 的这种具有抗体特性的物质称为反应素。这种抗体主 要是IgE。
操作程序：
1. 将待检血清及TRUST抗原于试验前置（23-29℃）中平衡 片刻。
2. 分别吸取阴性和阳性对照各1滴（50μl）加到反应卡的二 个圆圈内并铺匀。
3. 吸取待检血清或血浆（不需灭活）1滴，分别滴加于卡片 上的另一个圆圈内并铺匀。
4. 轻轻摇匀抗原，用专用滴管针头垂直滴加抗原各1滴于 圈内。
真菌
（一）真菌的形态
真菌（fungi）大多为多细胞，仅少数为单细胞。单细 胞型真菌呈圆形或椭圆形，如酵母菌或类酵母型真菌。
生物技术微生物学实验讲义
实验一革兰氏染色实验一、目的要求1、学习并初步掌握革兰氏染色法2、了解革兰氏染色的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。
二、基本原理革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。
它是1884年由丹麦医师Gram创立的。
革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。
细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。
革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料（basic dye）初染液；媒染剂（mordant）；脱色剂（decolorising agent）和复染液（counterstain）。
碱性染料初染液的作用象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫（crystal violet）。
媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘（iodine）是常用的媒染剂。
脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95％的酒精（ethanol）。
复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，从而将细胞区分成G+和G-两大类群，常用的复染液是番红。
微生物学实验讲稿
微生物实验讲稿实验一显微镜的使用及微生物形态观察一. 实验目的1. 了解普通光学显微镜的构造,学习显微镜的使用方法和保养.(高,低倍镜的使用)2. 观察细菌,霉菌,酵母菌个体形态,学会生物图的绘制.二实验原理根据凸透镜成像原理，在物镜一倍焦躁之外二倍焦距之内形成一个倒立放大的实像，成像在目镜一倍焦距之内，形成一个正立放大的虚像，如果利用一组透镜观察物体，能提高上千倍。
特别是油镜的使用，油镜的放大倍数最大(100),故镜头焦距短,直径小,但所需光照强度却最大.从标本片透过的光线是从玻片进入空气,再进入镜头.由于玻璃和空气的介质密度不同,有些光会因折射或反射而不能进入镜头.物象就显现不清.为了不使通过的光线有所损失,在镜头和所观察物体之间加入折射率和玻璃(n=1.52)相仿的香柏油(n=1.515). 根据D=λ/ 2N.A.= λ/ 2 n·s i n α/ 2，可以增加视野的明亮度，提高折射率，增大分辨率。
其中数值孔径: N.A. = n·s i n α/ 2 ，n —玻片和物镜之间的折射率.α—光线最大射入角.分辨率(最大可分辨距离)=λ/ N.A. ，λ—波长，数值孔径是反应显微镜性能的主要参数。
三. 实验器材1. 光学显微镜2. 示范片:曲霉,青霉,酵母菌,细菌四. 实验内容(一) 显微镜的构造和使用方法1. 构造机械部分: 镜筒(双筒,两筒间距离可调,上装有目镜)转换器(3孔,装有物镜)载物台(中央圆孔,弹簧夹,移动器)调节器(粗调,细调)镜臂(支撑作用)镜座(上有光源,亮度可调)光学部分:目镜(10×,16×)物镜(低倍镜10×,高倍镜40×,油镜100×)聚光器(内有光圈调节)光源(光量可调)显微镜放大倍数= 目镜放大倍数×物镜放大倍数物镜上的标识: 1 .25 (0.65,0.25) 100(40,10) 160 0.17数值孔径放大倍数镜筒长盖玻片厚度2. 显微镜的使用低倍镜的使用(1)双手取出显微镜置于实验台上,接上电源,打开开关,调节合适光量.(2)转动转换器,将低倍镜移至正下方.调节两目镜镜筒间的距离.(3)将载玻片放在载物台上夹住,移动观察对象于圆孔正中.(4)侧视物镜,转动粗调将载物台上移,至载玻片距物镜头约5mm时停止.(5)双眼向目镜里观察,同时旋转粗调节器使载物台缓慢下移,若标本显出但不清晰,可用细调节器调至清晰.若粗调旋转太快,超过焦点没有看到标本,则必须重复(4), (5)步骤.不能在眼睛观察目镜的同时旋转粗调,以防物镜与载玻片相碰撞,造成损坏.1-5高倍镜的使用在用低倍镜找到观察目标后,若需要进一步放大观察,将其移到视野中央.用转换器将高倍镜移到镜筒下方,将光量调大一点.若标本不清晰,用细调上下转动使之清晰.(此时不再动粗调) 3.显微镜的维护(1)将载物台降至最低,取下标本片.(2)将光量调至最小,关上电源.(3)用镜头纸先檫目镜,物镜,再擦显微镜其它部分.(4)将显微镜放入镜箱,还原.4微生物形态的观察1. 用低倍镜和高倍镜观察细菌,曲霉,青霉,酵母菌,放线菌,示范片.五. 实验报告1画出微生物形态图,并标明显微镜的放大倍数.如10 ╳10实验二微生物的染色一. 目的1. 学习微生物的染色技术,掌握微生物的单染色法和革兰氏染色法.2. 复习油镜的操作.二.实验原理作为染料必须具备两个条件：一是具有颜色；二是要与被染对象之间有亲和力。
微生物学实验
微生物学实验微生物学实验是研究微生物的生长、活动和相互作用的一种科学实验。
通过实验可以了解微生物的生理特性和遗传特性，探究微生物与环境的关系，以及微生物对人类健康和环境的影响。
本文将介绍微生物学实验的常见内容和方法，并举例说明其应用。
1. 常见（1）微生物的培养与分离：将微生物样品接种于培养基上，提供适宜的环境因素使其生长繁殖。
利用孵育箱或培养皿进行培养，观察微生物的孢子、菌丝和菌落等形态特征，通过分离与鉴定，确定微生物的种类和数量。
（2）微生物的生长曲线：利用培养皿或发酵罐等装置，监测微生物在不同时间内的生长情况，绘制生长曲线。
通过分析曲线上的不同阶段，了解微生物的生长特性，包括潜时期、对数期、平稳期和死亡期等。
（3）微生物的代谢分析：通过测定微生物培养过程中的代谢产物，如酸、气体、酶等，分析微生物的代谢途径和代谢产物对生物工艺和环境的影响。
常用的方法包括气相色谱、质谱和高效液相色谱等技术。
（4）微生物的遗传分析：通过构建基因工程菌株或利用遗传标记技术，研究微生物的基因表达、突变和遗传传递等现象。
例如，利用PCR技术检测微生物的特定基因序列，分析其在不同环境条件下的表达水平。
2. 微生物学实验方法（1）杀菌与消毒：在进行微生物实验前，需要对实验器材、培养基和试剂等进行杀菌和消毒处理，以防止外源菌的污染。
常用的方法有高温高压灭菌、酒精喷雾消毒和过滤器材消毒等。
（2）无菌技术：在进行微生物的培养和分离实验时，需要避免外界细菌的污染。
常用的无菌技术包括细菌装液的操作在无菌台上进行，采用无菌培养皿、培养基和工具，以及穿戴无菌手套等措施。
（3）微量液体处理：有些微生物实验需要处理微量的液体，如微生物菌液的接种、稀释和移液等。
在这种情况下，需要使用微量吸管、微量移液器和微量离心机等微量操作工具，保证实验的准确性和可重复性。
（4）统计分析：微生物学实验的数据分析通常需要进行统计处理，以确定实验数据的可靠性和显著性差异。
微生物学实验讲义全
实验四显微测微技术与细菌运动性观察一、目的要求1．了解测微尺的构造和使用，学会测量微生物细胞大小的方法。
2．学习悬滴法观察细菌运动性技术二、实验原理(一)显微测微技术微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。
其大小的测量需在显微镜下用目镜测微尺来进行，但由于测量的是放大后的图像，故目镜测微尺在不同放大倍率下每格实际代表的长度也随之变化，因此，需用物镜测微尺来校正在不同放大倍率下目镜测微尺每格所代表的实际长度。
物镜测微尺是中央刻有精确刻度的载玻片，一般是将1 mm等分为100格，每格长0.01mm，即10 pm，它不直接用于测量细胞大小，而是用于校正目镜测微尺的每格的相对长度。
目镜测微尺是一个可放人接目镜的直径均为1.75 mm的圆形玻片，其中央有精确的等分刻度(有50格和100格两种)测量时，需将其放人接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物象。
(二)细菌运动性在显微镜下观察细菌的运动性，也可以初步判断细菌是否有鞭毛。
通常使用压滴法或悬滴法观察细菌的运动性。
观察时，要适当减弱光线，增加反差，如果光线很强，细菌和周围的液体就难以辨别。
三、实验器材1．活材料：培养12-16h的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母2．试剂：香柏油、二甲苯、凡士林等。
3．器材：目镜测微尺，物镜测微尺、凹载玻片、盖玻片、镊子、接种环、滴管、擦镜纸、显微镜。
四、操作步骤(—)显微测微技术1．装目镜测微尺：取出接目镜，把目镜上的透镜旋下，将目镜测微尺刻度朝下放在目镜镜筒的隔板上，然后旋上目镜透镜，再将目镜插人镜筒。
2．校正目镜测微尺(1) 将物镜测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上(2) 先用低倍镜观察，将镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央，调节焦距，当清晰地看到镜台测微尺的刻度后，转动目镜使目镜测微尺刻度与物镜测微尺的刻度平行。
利用移动器移动物镜测微尺，使两尺的第一条刻度线相重合，再向右寻找另外两条重合的刻度线，分别数出两重合线之间物镜测微尺和目镜测微尺所占的格数，由下列公式算出目镜测微尺每格所代表的长度。
微生物学实验讲义
实验一玻璃器皿的洗涤、包扎与灭菌一、目的要求1、熟悉微生物实验所需的各种常用器皿名称和规格；2、掌握对各种器皿清洗方法；3、掌握玻璃器皿的干热灭菌操作过程；4、了解手提式高压蒸汽灭菌锅的结构、使用方法和操作要点。
二、基本原理为了保证实验顺利进行，要求把实验用器皿清洗干净。
保持灭菌后无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行妥善包扎。
试管和三角瓶要做棉塞。
这些工作看来很普通，如操作不当或不按规定要求去做，会导致实验的失败。
因此应看作是微生物实验的基本操作。
灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物的营养体，包括芽胞和孢子。
灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。
本实验主要介绍物理方法的一种，即加热灭菌。
加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。
通过加热使菌体内蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。
细胞内的蛋白质凝固变性与其自身含水量有关，含水量越高，其凝固所需要的温度越低。
在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强；湿热的蒸汽有潜热存在，从而增加灭菌效力。
三、实验器材1、吸管，试管，三角瓶，试管刷，棉花，报纸、包扎绳、去污粉等；2、手提式高压蒸汽灭菌锅。
四、实验步骤1、玻璃器皿的洗涤清洁的玻璃器皿是实验得到正确结果的先决条件，因此，玻璃器皿的清洗是实验前的一项重要准备工作。
1）不能用有腐蚀作用的化学试剂，也不能使用比玻璃硬度大的物品来擦拭玻璃器皿；新的玻璃器皿应用酸性溶液（2%的盐酸溶液）浸泡数小时，再用自来水冲洗干净。
2）用过的器皿应立即洗涤。
3）强酸，强碱，琼脂等能腐蚀，阻塞管道的物质不能直接倒在洗涤槽内，必须到在废物缸内。
一般的器皿都可用去污粉，肥皂或配成5%的热肥皂水来清洗。
油脂很重的器皿应先将油脂擦去。
沾有煤膏，焦油及树脂一类物质，可用浓硫酸或40% 氢氧化钠或用洗液浸泡；沾有蜡或油漆物，可加热使之熔融后揩去，或用有机溶剂（苯，二甲苯，汽油，丙酮，松节油等）揩去。
微 生 物 学 实 验 讲 义 - 武汉工业学院
生物学实验讲义课程组人员:缪礼鸿胡申才代江红周帼萍曾驰武汉工业学院生物与制药工程学院生物工程教研室录实验须知 (1)实验一普通光学显微镜的使用和细菌的简单染色 (2)实验二革兰氏染色法 (5)实验三细菌芽孢和荚膜染色法 (7)实验四放线菌、蓝细菌、藻类和原生动物的形态观察 (9)实验五霉菌的形态观察 (11)实验六酵母菌的形态观察、死活鉴别及大小测定 (12)实验七微生物的数量测定 (14)实验八玻璃器皿的洗涤、包扎、灭菌及无菌操作台的使用 (16)实验九培养基的制备与灭菌 (18)实验十芽孢杆菌的分离纯化及观察 (20)实验十一抗稻瘟霉的芽孢杆菌的分离筛选 (22)实验十二食品或水中大肠菌群的检测 (23)实验十三大肠杆菌生长曲线的测定 (27)实验十四细菌质粒的接合转移与检测 (28)实验十五微生物菌种保藏技术 (29)实验须知普通微生物学实验课的目的是：训练学生掌握微生物学最基本的操作技能；了解微生物学的基本知识；加深理解课堂讲授的某些微生物学理论。
同时，通过实验，培养学生观察、思考、分析问题和解决问题的能力；实事求是、严肃认真的科学态度以及勤俭节约、爱护公物的良好作风。
为了上好微生物学实验课，并保证安全，特提出如下注意事项：1．每次实验前必须对实验内容进行充分预习，以了解实验的目的、原理和方法，做到心中有数，思路清楚。
2．认真及时做好实验记录，对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验，则需记下每次观察的现象和结果，以便分析。
3．实验室内应保持整洁，勿高声谈话和随便走动，保持室内安静。
4．实验时小心仔细，全部操作应严格按操作规程进行，万一遇有盛菌试管或瓶不慎打破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时，应立即报告指导教师，及时处理，切勿隐瞒。
5．实验过程中，切勿使酒精、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。
如遇火险，应先关掉火源，再用湿布或沙土掩盖灭火。
必要时用灭火机。
6．使用显微镜或其他贵重仪器时，要求细心操作，特别爱护。
微生物学实验讲义
微生物学实验讲义（2008级基地班）任课教师：熊芳教授教化时数：15学时实验周数：4周生物学实验教授教化中间微生物实验目次（15学时）微生物实验差不多常识介绍实验一：培养基的配制与灭菌（4学时）实验二：泥土自生固氮菌的分别纯化（5学时）实验三：显微镜的应用和简单染色（3学时）实验四：革兰氏染色和荚膜染色（3学时）第一次实验：微生物学实验差不多常识一、实验目标1.熟悉实验室规矩和安稳守则，精确应对实验中显现的不测变乱；2.熟悉微生物学实验室常用仪器和有关试剂的全然常识；3.操纵实验申报的精确书写。
二、实验内容1.实验室规矩；2.实验室安稳守则；3.实验室中不测变乱处理；4.常用器皿及器具；5.显微镜及有关常识；6.实验预习、实验记录和实验申报。
实验一培养基的配制和高压蒸汽灭菌设备培养基的全然流程如下：原料称量→消融→调剂pH值→过滤澄清→分装→塞硅胶塞和包扎→灭菌培养基的配制原则一、养分成分1. 依照不合微生物的养分须要配制不合的培养基，如自养型微生物的培养基完全能够（或应当）由简单的无机物质构成。
异养微生物的培养基至少须要含有一种有机物质。
碳源物质的功能：构成细胞物质；为机体供给全部心理活动所须要的能量（异养微生物）。
氮源(nitrogen source) 凡是供给微生物养分所需的氮元素的养分源，称为氮源。
氮源物质的重要感化是合成细胞物质中含氮物质，少数自养细菌能应用铵盐、硝酸盐作为机体进展的氮源与能源，某些厌氧细菌在厌氧与糖类物质缺乏的前提下，也能够应用氨基酸作为能源物质。
能源指能为微生物的生命活动供给最初能量来源的养分物或辐射能。
2. 留意各类养分物质的浓度与配比养分物的浓度：在一样情形下，浓度合适的养分物质才对微生物表示出优胜感化，浓度大年夜时对微生物进展起克制造用，浓度小时不克不及知足微生物进展的须要。
各养分物质之间的浓度比：培养基中各养分物质之间的浓度比直截了当阻碍微生物的进展与滋长和（或）代谢产品的形成与积聚，专门是碳氮比（C／N）（碳氮比一样指培养基中元素碳与元素氮的比值，有时也指培养基中还原糖与粗蛋白两种成分含量之比）的阻碍更为明显。
微生物实验讲义
微生物学实验讲义绪论实验课的目的与要求1.普通微生物学实验的目的掌握微生物的基本操作技能, 了解微生物学的基本知识；加深对课堂理论的理解。
同时培养同学认真观察思索、分析解决问题的能力和严肃认真的科学态度。
2.普通微生物学实验课的要求a、实验预习了解实验的目的和原理, 做到每一步实验都心中有数。
b、实验观察和记录微生物实验的连续性较强, 实验中也较常出现突发情况, 所以要求同学认真细致观察, 如实记录。
c、实验结果要求同学实事求是地填写实验结果, 交给老师评阅。
d、爱护公共财物并维护公共秩序:公用的仪器药品用后放回原处。
对精密仪器（显微镜、天平）细心维护, 轻拿轻放。
从冰箱或温箱取放物品时要随时关门。
对消耗性的材料、用品、药品要厉行节约（擦镜纸、滤纸条等）。
3.实验室规则微生物实验不同于动、植物实验, 我们会经常接触到一些致病菌或条件致病菌, 所以希望大家严格遵守无菌操作, 为保证自身及他人的健康, 以防污染或感染。
a、实验室的整洁非必需书、物品请勿带入实验室, 不得在室内吸烟、进食, 实验后收拾、擦净桌子。
b、实验时的需小心如遇到盛菌试管打破或皮肤破伤要及时处理。
c、实验培养的材料标明自己的组别、处理方式, 放入教师指定地点培养。
d、实验后的灭菌所用物品可进行3%来苏水浸泡消毒或高压灭菌。
e、实验前后工作之前先洗手, 工作后用肥皂洗手。
f、离开实验室一定关闭、水、电、门、窗。
第一部分微生物的染色与形态结构的观察基本原理: 虽然可以用相差显微镜等直接观察微生物的形态特征, 但其应用有局限性；用电子显微镜可以观察到微生物的各种形态结构, 但因其价格昂贵、设备条件要求高、操作也较复杂, 应用上也受一定限制。
所以, 一般实验室仍常用普通光学显微镜来进行微生物形态学特征的观察。
然而, 微生物（尤其是细菌）细胞小而透明, 当把细菌悬浮于水滴内, 用光学显微镜观察时, 由于菌体和背景没有显著的明暗差, 因而难以看清它们的形态, 更不易识别其结构, 所以, 用普通光学显微镜观察细菌时, 往往要先将细菌进行染色, 借助于颜色的反衬作用, 可以更清楚地观察到细菌的形状及其某些细胞结构。
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实验二实验器具的灭菌一、实验目的1.学习并初步掌握和各种实验器具的包扎及高压蒸汽灭菌的方法。
2.了解其他灭菌方法。
二、基本原理高压蒸汽灭菌法可杀灭包括芽胞在内的所有微生物，是灭菌效果最好、应用最广的灭菌方法。
其基本原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加，在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃，在此温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。
三、器材1、高压蒸汽灭菌锅2、牛皮纸3、棉绳4、仪器和其他用具四、操作步骤1、包扎将各种实验器具进行合理规范包扎后，要用牛皮纸覆盖，最后用棉绳系紧。
2、加热烧开待高压锅内的水烧开，将包扎好的器具放入锅内的桶内，最后放入高压锅。
3、升压完全排除锅内空气后，关闭放弃阀，待压力上升到0.1MPa时，开始计时，维持压力0.1~0.15MPa 20分钟。
4、减压，取出器具到达保压时间后，即可切断电源，压力降到0.5MPa时，可缓慢放出蒸汽，注意不要使压力降低太快，以致引起激烈的减压沸腾，使容器中的液体四溢。
当压力降到零后，才能开盖。
五、思考题（1）、你认为那些环节会影响高压灭菌的效果？如果影响，请简述其中最关节的环节是什麽？实验三牛肉膏蛋白胨培养基的配制—、目的要求1、明确培养基的配制原理2、通过对基础培养基的配制，掌握培植基的一般方法和步骤。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏 3.0g蛋白胨10.0gNaCI 5.0g水1000mIpH 7.4～7.6三、器材1、溶液和试剂牛肉膏，蛋白胨，NaCI,琼脂，1 moI/L NaOH, 1 moI/L HCI。
2、仪器和其他用品试管，三角瓶，烧杯，量筒，破棒，培养基分装器，天平，牛角匙，高压蒸气灭菌锅，pH试纸（pH5.5～9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
四、操作步骤1、称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨，NaCI放入烧杯中。
牛肉膏常用破棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水融化后倒入烧杯。
也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时，如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。
（蛋白质很易吸湿，在称取时动作要迅速，另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品。
瓶盖也不要盖错。
）2、溶化在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，或在磁力搅拌器上加热溶解。
将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积，如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放入已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。
在制备用三角瓶盛固体培养基时，一般也可先将一定量的液体培养基分装于三角瓶中，然后按1.5％~2.0％的量将琼脂直接分别加入各三角瓶中，不必加热溶化，而是灭菌和加热溶化同步进行，节省时间。
3、调pH在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LnaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达7.6。
反之，用1mol/LHCl进行调节。
4、分装按照实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角瓶内。
5、加塞培养基分装完毕后，在试管口或三角瓶口上塞上棉塞（或泡沫塑料塞），以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。
6、包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。
用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
7、灭菌将上述培养基以0.103Mpa，121℃，20min高压蒸汽灭菌。
8、搁置斜面和倒平板将灭菌的试管培养基冷至50℃左右（以防斜面上冷凝水太多），将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜，冷凝；倒入平板适当量培养基，冷凝。
9、无菌检查将灭菌培养基放入37℃的温度中培养24～48h，以检查灭菌是否彻底。
五、思考题你认为在加热融化琼脂的过程中应注意哪些环节？实验四微生物的接种和培养一、实验目的1、掌握各种接种方法。
2、掌握无菌操作基本环节。
二、基本原理微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必需从中把它们分离出来。
在保存菌种时不慎受到到污染也需予以分纯。
微生物分离和纯化的方法很多，但基本原理却是相似的，即将待分离的样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。
然而上述工作又离不开接种，即将一种微生物移到另一灭过菌的培养基上的过程。
三、器材1、恒温培养箱。
2、接种环、玻璃棒、吸管、酒精灯。
3、培养基（上次实验配制的）。
4、大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌。
四、操作步骤1、斜面接种（接金黄葡萄球菌）（1）操作前，先用75%酒精擦手，待酒精挥发后点燃酒精灯。
（2）将菌种管和斜面握在左手大姆指和其它四指之间，使斜面和有菌种的一面向上，并处于水平位置。
（3）先将菌种和斜面的棉塞旋转一下，以便接种时便于拔出。
（4）左手拿接种环（如握钢笔一样），以火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管其余部位也过火灭菌。
（5）用右手的无名指、小指和手掌将菌种管和待接斜面试管的棉花塞或试管帽同时拔出，然后让试管口缓缓过火灭菌（切勿烧过烫）。
（6）将灼烧过的接种环伸入菌种管内，接种环在试管内壁或未长菌苔的培养基上接触一下，让其充分冷却，然后轻轻刮取少许菌苔，再从菌种管内抽出接种环。
（7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。
从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。
有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。
（8）接种完毕后抽出接种环灼烧管口，塞上棉塞。
（9）将接种环烧红灭菌。
放下接种环，再将棉花塞旋紧。
2、穿刺接种把菌种接种到固体深层培养基中，此法用于嫌气性细菌接种或为鉴定细菌时观察生理性能用。
（1）操作方法与上述相同，但所用的接种针应挺直。
（2）将接种针自培养基中心刺入，直刺到接近管底，但勿穿透，然后尚原穿刺途径慢慢拔出。
3、液体接种（1）由斜面培养基接入液体培养基，此法用于观察细菌的生长特性和生化反应的测定，操作方法与前相同，但使试管口向上斜，以免培养液流出接入菌体后，使接种环和管内壁磨擦几下以利洗下环上菌体。
接种后塞好棉塞将试管在手掌中轻轻敲打，使菌体充分分散。
（2）由液体培养基接种液体培养基，菌种是液体时，接处除用接种环外尚用无菌吸管或滴管。
接种时只需在火焰旁拔出棉塞,将管口通过火焰,用无菌吸管吸取菌液注入培养液内,摇匀即可。
五、思考题（1）接种前和接种后为什么要灼烧接种环？（2）为什么要接种环冷却后才能用其与菌种接触？是否可以将接种环放在台子上待其冷却？你怎样才能知道它是否已经冷却？附一无菌操作环节（1）接种室应保持清洁，用煤粉酚皂液擦洗台面及墙壁，定期用乳酸或甲醛熏蒸。
每次使用前，均应用紫外灯灭菌。
定期对接种室作无菌程度的检查。
（2）进入接种室前，应先做好个人卫生工作，在缓冲间内要更换工作鞋帽、工作衣、戴口罩。
工作衣、工作鞋、口罩只准在接种室内使用。
不准穿到其它地方去，并要定期更换、消毒。
（3）接种的试管、三角并瓶等应做好标记，注明培养基、菌种的名称、日期。
移入接种室内的所有物品，均须在缓冲室用70%酒精擦试干净。
（4）接种前，双手用70%酒精或新洁尔消毒，操作过程不离开酒精灯火焰；棉塞不乱放；接种工具使用前后均需火焰灭菌。
（5）培养箱应经常清洁消毒。
附二接种室的消毒方法1、紫外线灭菌接种室使用前打开紫外灯照射约30分钟，就能使空气和室壁表面基本上无菌。
为了加强灭菌效果，在开灯以前可以在接种内喷洒石炭酸溶液，使空气中附有微生物的尘埃降落，并杀死一些微生物。
接种室的台面等，可以用2-3%的来苏尔擦洗。
紫外线对人体皮肤，尤其对眼睛具有杀伤力，因皮不要直视开着的紫外灯，也不能在开着灯的情况下工作。
2、喷洒石炭酸将石炭酸水浴，稍热，使之溶解。
用吸耳球通过吸管吸取该溶液，配成5%溶液。
对于小房间，可用喷雾器由上至下、由里至外顺序进行喷雾，并门，稍等片刻即可使用。
石炭酸对皮肤有较强的毒害作用，使用时不要接触皮肤。
3、福尔马林熏蒸（1）用量：市售福尔马林是37-40%的甲醛水溶液。
常用量按每立方空间2-6ml计算。
（2）熏蒸方法：用福尔马林熏蒸有两种方法：①加热熏蒸：按熏蒸空间计算,量取甲醛溶液,放在酒精灯上方的小铁筒或烧杯中,点燃酒精灯,关闭室门。
酒精灯最好在甲醛蒸完后即自行熄灭。
②氧化熏蒸：在一瓷杯里铺一张报纸，放入高猛酸钾（其用量为1/2甲醛量），再取定量的甲醛溶液，倒在盛有高猛酸钾的容器里，立即关门。
几秒钟后，由高猛酸钾氧化甲醛反应所产生的热将其余的甲醛蒸为气体。
由于甲醛对人眼、鼻有强烈的刺激作用，熏蒸后相当时间内不能进入室内工作。
因此，接种室至少在使用前24小时进行熏蒸，房间应密闭，保持12小时。
之后可取与甲醛等更是的氨水，倒在一个瓷碗里，放入熏蒸过的接种室，以减少甲醛对人的刺激作用。
用氨水中和，至少应在工作前2小时进行。
4、过滤除菌近几年来，多采用一种称之为超净工作台的接种室，其原理是借助于一鼓风机将普通空气鼓入，通过粗滤、超滤纤维过滤后，进入工作台内的空气即为无菌空气。
整个工作室内要求清洁无尘，这样可延长超净工作台的使用寿命。
新的超净工作台使用前，要进行无菌试验，确定合格方可使用，接种前，应先将工作台开启5-6分钟。
附三接种室无菌程度检查取无菌的营养琼脂平板，在接种室内台上和台下各放一套，把皿盖打开15min，然后盖好，倒置37℃恒温培养24-28小时，如果每个皿内菌落不超过4个，则可以认为无菌程度良好，若菌落很多，则应对接种室进一步灭菌。
实验五稀释涂布平板菌落计数法－、目的的要求学习平板菌落计数的基本原理和方法二、基本原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单落菌也可能来自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板落计数的结果，现在已使用菌落形成单位（coIony—forming units,cfu）而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因数的影响，但是，由于核计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水（包括水源水）等的含菌指数或污染程度的检测。