α-半乳糖苷酶(α-Galactosidase, α-GAL)试剂盒说明书

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LacZ染色试剂盒使用说明书

华越洋⽣生物提供 QQ: 1733351176LacZ染⾊色试剂盒使⽤用说明书β-‐Galactosidase S taining K it M annual编号名称产品规格北京华越洋生物RS3601-‐23 LacZ染色试剂盒 250次分析基本信息：大肠杆菌中的LacZ基因是应用极广的报告基因之一，被用来检测表达载体介导的基因转移效率，也用于基因启动子研究。

LacZ编码β-‐半乳糖苷酶，该物质非常稳定，能抵抗蛋白酶的水解，并且可以利用许多底物，包括X-‐gal。

X-‐Gal是β-‐半乳糖苷酶（β-‐galactosidase）的显色底物，在β-‐半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物，所以可以轻易的检测出LacZ基因的表达。

The LacZ gene from E. coli is one of the most commonly used reporter genes f or t esting t he e fficiency o f e xpression v ector m ediated g ene t ransfer and for studying the regulation of promoters of genes. The LacZ gene encodes the enzyme β-‐galactosidase, which is very stable, resistant to proteolytic d egradation, c an u tilize a v ariety o f s ubstrates a nd c an b e e asily assayed in situ. The β-‐Galactosidase staining kit utilizes X-‐gal as the substrate.产品说明：华越洋的β-‐半乳糖苷酶染色试剂盒利用X-‐gal作为底物，配合试剂盒内提供的其他试剂，可以完成250次染色反应。

alpha-galactosidase 分子式

alpha-galactosidase 分子式alpha-半乳糖苷酶(Alpha-galactosidase)，也被称为α-半乳糖苷酶，是一种酶蛋白，具有水解α-半乳糖苷键的能力。

它广泛存在于天然界中，包括微生物、植物和动物中，对生物体的消化系统发挥着重要的作用。

这篇文章将详细介绍alpha-半乳糖苷酶的分子式及其在生物学中的重要性。

alpha-半乳糖苷酶的化学式为C36H62O31，其分子质量约为约970克/摩尔。

它是一种酶蛋白，属于水解酶中的一种，通过加速α-半乳糖苷键的水解反应来催化底物分子的分解。

在这个过程中，底物分子中的α-半乳糖苷键被酶催化水解成单糖分子，具体来说就是将底物中的α-半乳糖释放出来，使得底物能够在生物体内得以消化。

alpha-半乳糖苷酶的产生主要来源于微生物、植物和动物。

在微生物中，特别是在许多细菌和真菌中广泛表达。

一些常见的微生物来源包括大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和黄酵母等。

植物中，alpha-半乳糖苷酶主要存在于种子中，用于帮助种子中的碳水化合物储存和供应。

动物中，alpha-半乳糖苷酶主要存在于消化道中，尤其是在小肠和结肠中。

alpha-半乳糖苷酶在生物学中具有重要的作用。

它对食物中的α-半乳糖含量较高的食物进行水解，有助于消化和吸收。

一些食物，如豆类、豆制品、全麦谷物和某些蔬菜，含有较高水平的α-半乳糖，这些食物在人体内的消化过程中，需要alpha-半乳糖苷酶的参与，才能被有效地消化和吸收。

因此，alpha-半乳糖苷酶被认为是食物消化和营养吸收的关键酶之一。

除了在食物消化方面的作用外，alpha-半乳糖苷酶还被广泛应用于食品工业中。

由于某些食物中的α-半乳糖会导致胃肠道不适，如腹胀和气体的产生，所以alpha-半乳糖苷酶被用作食品添加剂，用于降低食物中α-半乳糖的含量，从而减轻食物引起的不适反应。

此外，alpha-半乳糖苷酶也被广泛应用于生物工程和制药工业中。

在生物工程中，alpha-半乳糖苷酶可用于生产高纯度的半乳糖和低半乳糖食品，如乳糖和婴儿配方奶粉。

α-半乳糖苷酶清除猪细胞表面的α-Gal抗原

ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒｃｅｌｌｓ（ＳＴ）ａｎｄｃｅｌｌｓｉｎｐｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅｏｆｉｆｂｒｏｂｌａｓｔｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｏｓｅｏｆ —ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ
ｍｏｖｉｎｇ一Ｇａｌｅｐｉｔｏｐｅｓｏｆｐｉｇｃｅｌｌｓｕｒｆａｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｐｉｇｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓ，ｐｉｇｅｍｂｒｙｏｎｉｃｋｉｄｎｅｙｃｅｌｌｓ（ＰＫ１５），ｐｏｒｃｉｎｅ
ＬＥＴＴＥＲＮＢ１０ＴＥＣＨＮ０Ｌ０ＧＹＶｏｌ・２５Ｎ。ｏ．・６０Ｎｏ１Ｎｏｖ．，Ｚ … ＵＩ４ＴｒＳＩ
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技术通讯 …
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ａｔ２６ ℃ ｆｏｒ２ｈｏｕｒｓ．Ｔｒｅａｔｅｄａｎｄｎｏｎ — ｔｒｅａｔｅｄｃｅｌｌｓｗｅｒｅｌａｂｅｌｌｅｄｕｓｉｎｇ２５ｇ／ｍＬＦＩＴＣ－ＩＢ４，ａｎｄｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｆｌｏｗ
ＬＥＮＧＬｉｎｇ，ＪＩＳｈｏｕ－Ｐｉｎｇ，ＧＡＯＨｏｎｇ — Ｗｅｉ卑，ＧＯＮＧＦｅｎｇ

β-半乳糖苷酶β-galELISA试剂盒使用方法

β-半乳糖苷酶（β-gal）ELISA试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T0.8 pg/ml -35pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定微生物样本中β-半乳糖苷酶（β-gal）含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中β-半乳糖苷酶（β-gal）水平。

用纯化的β-半乳糖苷酶（β-gal）体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入β-半乳糖苷酶（β-gal），再与HRP标记的β-半乳糖苷酶（β-gal）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的β-半乳糖苷酶（β-gal）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中β-半乳糖苷酶（β-gal）浓度。

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

小鼠α半乳糖基抗体(Gal)ELISA试剂盒使用说明书本

小鼠α半乳糖基抗体(Gal)ELISA试剂盒使用说明书本本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中α半乳糖基抗体(Gal)的含量。

试验原理：Gal试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知Gal浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。

先将Gal和生物素标记的抗体同时温育。

小鼠α半乳糖基抗体洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。

再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。

产生颜色。

颜色的深浅和样品中Gal的浓度呈比例关系。

试剂盒组成：自备材料蒸馏水。

加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

振荡器及磁力搅拌器等。

安全性避免直接接触终止液和底物A、B。

一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作注意事项试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。

稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

不用的其它试剂应包装好或盖好。

不同批号的试剂不要混用。

保质前使用。

使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

使用干净的塑料容器配置洗涤液。

使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

底物A应挥发，避免长时间打开盖子。

底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

避免用手接触，有毒。

实验完成后应立即读取OD值。

加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

样品收集、处理及保存方法血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。

使用不含热原和内毒素的试管。

收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

β-半乳糖苷酶染色试剂盒使用说明

β-半乳糖苷酶染色试剂盒使用说明产品简介：β-半乳糖苷酶染色试剂盒(β-Galactosidase Staining Kit)是一种基于衰老时SA-β-Gal(senescence-associatedβ-galactosidase)活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的试剂盒。

在普通的光学显微镜下就可以观测到细胞或组织的衰老情况。

绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力，在不能分裂后就进入衰老状态。

此时细胞仍然是存活的，但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。

衰老细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂，并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊，不同于一些损伤诱导的细胞休眠，也不同于细胞生长接触抑制的情况。

衰老细胞通常体积变会大，表达pH 6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶。

细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式，同时也是生物体老化(aging)的一种潜在原因。

本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测，也可以用于组织切片的衰老检测。

β-半乳糖苷酶染色试剂盒以X-Gal为底物，在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物，光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。

本试剂盒仅染色衰老细胞，对衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞等不会染色。

对于组织切片或组织块，可以检测的样品数量视样品的大小而定，对于普通的切片也至少足够检测100个样品，使用6孔板测定，足够测定100个样品。

产品组成：试剂(C):β-半乳糖苷酶染色液A1ml4℃避光试剂(D):β-半乳糖苷酶染色液B1ml4℃避光试剂(E):β-半乳糖苷酶染色液C100ml4℃避光使用说明书1份自备材料：1、PBS或HBSS2、细胞培养器皿3、显微镜操作步骤(仅供参考)：(一)贴壁细胞染色：1、对于6孔板中培养的细胞，吸除细胞培养液，用PBS或HBSS洗涤1次，加入1ml β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定15min。

人α葡萄糖苷酶α-glucosidase试剂盒使用方法

人α葡萄糖苷酶（α-glucosidase）试剂盒使用方法检测范围：96T7 U/L -200 U/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中α葡萄糖苷酶（α-glucosidase）含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人α葡萄糖苷酶（α-glucosidase）水平。

用纯化的人α葡萄糖苷酶（α-glucosidase）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入α葡萄糖苷酶（α-glucosidase），再与HRP标记的α葡萄糖苷酶（α-glucosidase）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的α葡萄糖苷酶（α-glucosidase）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人α葡萄糖苷酶（α-glucosidase）浓度。

试剂盒组成1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

β-半乳糖苷酶（β-Galactosidase）活性的整体封片免疫组化检测实验

β-半乳糖苷酶（β-Galactosidase）活性的整体封片免疫组化检测实验β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）是一种水解酶，催化β-半乳糖苷水解成单糖。

使β-半乳糖苷酶作用的底物包括神经节苷脂GM1、乳糖苷、乳糖、各种糖蛋白。

准备大组织的厚切片进行β-半乳糖苷酶染色材料：小鼠或鸡的整个胚胎、组织或外植体试剂（盒）：磷酸盐缓冲液（PBS) 冰冷β-半乳糖苷酶固定剂β-半乳糖苷酶洗涤缓冲液β-半乳糖苷酶染色液仪器、耗材：5毫升或10毫升的聚苯乙烯或聚丙烯帽盖的试管或1.5~2 毫升的离心管;转动平台;染色用密闭箱;附有盖玻片的下陷载玻片或箱式载玻片;纤光照明的解剖显微镜;照相显微镜步骤⑴在冰冷的PBS里解剖胚胎或组织。

置β-半乳糖苷酶固定剂，室温至合适的时间。

固定小鼠胚胎和组织：外植体和E 6.5~E 7.5胚胎5~10 分钟；E 8~E 9.5胚胎或尾巴切面 15~30 分钟；E 10 ~ E 12.5 胚胎 30 ~90分钟;E 13~ E 14.5 胚胎 2 小时;E 15.5 或更大的组织则需要解剖出来或切一半，然后固定2小时。

新生幼鼠或更大的小鼠的灌注需要在解剖特定组织染色之前进行。

⑵用β-半乳糖苷酶洗涤缓冲液室温洗涤3次，每次15 分钟 (针对小胚胎或尾巴切面），或每次30分钟(针对Ell胚胎和大组织），头尾相接地轻柔转动。

⑶将组织置于β-半乳糖苷酶染色液中（室温，30℃或37℃取决于β-半乳糖苷酶表达丰度），在5 毫升或10 毫升的帽盖的试管或1. 5~2毫升的离心管中孵育，以防蒸发。

可用肉眼或解剖显微镜调节染色程度。

⑷得到预期的信号背景比之后（1~48 小时)，在PBS中洗涤组织3次，每次30 分钟。

⑸通过解剖镜观察和拍摄样本染色的组织，使用低功率的物镜和来自侧面和顶端的光纤照明。

为了得到最好的结果，将组织放置在附有盖玻片的下陷载玻片或箱式载玻片，用足够的PBS覆盖组织。

α-淀粉酶(α-amylase,α-AL)试剂盒说明书

α-淀粉酶（α-amylase，α-AL）试剂盒说明书α淀粉酶（αamylase，αAL）试剂盒说明书微量法100管/48样注意：正式测定前请取23个预期差异较大的样本做预测定测定意义：淀粉水解酶，包括α淀粉酶和β淀粉酶。

αAL (EC 3.2.1.1)随机催化淀粉中α1,4糖苷键水解，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。

测定原理：淀粉水解酶催化淀粉水解生成还原糖，还原糖还原3,5二硝基水杨酸生成棕红色物质，在540 nm有吸收峰；通过测定540 nm吸光度增加速率，计算淀粉酶活性。

αAL耐热，但是β淀粉酶可在70℃钝化15min。

因此粗酶液经过70℃钝化15min，就只有αAL能够催化淀粉水解。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵和蒸馏水。

试剂的组成和配制：试剂一：液体15mL×1瓶，室温保存。

若有黄色晶体析出，可90℃加热溶解后再用。

试剂二：液体7.5mL×1瓶，4℃保存。

若有沉淀析出，可70℃加热溶解后使用。

粗酶液提取：组织：称取0.1~0.2g样本（建议称取约0.1g样本），加1 mL 蒸馏水匀浆；将匀浆倒入离心管中，在室温下放置提取15min，每隔5min振荡1次，使其充分提取；3000g，25℃离心10min，吸取上清液并且加蒸馏水定容至10 mL，摇匀，即为淀粉酶原液。

血清（浆）：直接检测。

操作步骤和加样表（在EP管中依次加入下列试剂）：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长到540 nm，蒸馏水调零。

2、试剂一和试剂二40℃预热10min。

3、测定步骤：试剂（μL）对照管测定管α‑淀粉酶原液757570℃水浴15min左右，流水冷却。

蒸馏水75试剂二75在40℃恒温水浴中准确保温5min试剂一150150混匀，95度水浴5min，冷却，取200μL 至微量石英比色皿或96孔板中，540nm处读取吸光值，计算ΔA=A测定管A对照管。

β-半乳糖苷酶染色试剂盒说明书

细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒产品简介：细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒(Senescence β-Galactosidase Staining Kit)是一种基于衰老时SA-β-Gal (senescence-associated β-galactosidase)活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的试剂盒。

在普通的光学显微镜下就可以观测到细胞或组织的衰老情况。

本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测，也可以用于组织切片的衰老检测。

绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力，在不能分裂后就进入衰老(senescence)状态。

此时细胞仍然是存活的，但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。

衰老(senescence)的细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂，并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊，不同于一些损伤诱导的细胞休眠，也不同于细胞生长接触抑制的情况。

衰老细胞细胞通常体积变大，表达pH 6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶。

细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式，同时也是生物体老化(aging)的一种潜在原因。

碧云天生产的细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒，以X-Gal为底物，在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物。

从而在光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。

本试剂盒仅染色衰老细胞，不会染色衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞。

如果使用6孔板检测，足够测定100个样品；使用24孔板测定，足够测定400个样品；使用96孔板测定，足够测定1000个样品。

对于组织切片或组织块，可以检测的样品数量视样品的大小而定。

对于普通的切片也至少足够检测100个样品。

保存条件：-20℃保存，一年有效。

其中X-Gal溶液需避光保存。

注意事项：β-半乳糖苷酶染色固定液有一定的腐蚀性和毒性，操作时请注意防护。

LacZ染色试剂盒使用说明书

LacZ编码β-‐半乳糖苷酶，该物质非常稳定，能抵抗蛋白酶的水解，并且可以利用许多底物，包括X-‐gal。

X-‐Gal是β-‐半乳糖苷酶（β-‐galactosidase）的显色底物，在β-‐半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物，所以可以轻易的检测出LacZ基因的表达。

x-α-gal产品说明

详细信息:X- a-GalX- a-Gal是一种酵母半乳糖苷酶(MEL1的显色底物，用于在培养基上直接检测GAL4系统的酵母双杂交作用。

通过蓝白颜色筛选，快速和简便地识别阳性的蓝色克隆，无需费时的怜半乳糖苷酶报告基因检测。

X-a-Gal检测酵母MEL1基因的激活，MEL1是GAL4酵母双杂交系统的一个报告基因，编码分泌型的a■半乳糖苷酶。

该酶可水解无色的X-a-Gal底物并最终产生蓝色产物。

表达a■半乳糖苷酶的酵母菌落在含有X-a-Gal的培养基上显蓝色，即阳性的双杂交作用。

用途：(1)a-半乳糖苷酶的显色底物，形成蓝色沉淀。

在培养基上直接检测酵母双杂交相互作用，利用此底物可以省去双杂交体系中的怜半乳糖苷酶溶液和filter-lift assays;(2)用于区分肠杆菌科内的不同菌种以及区分双歧杆菌和乳酸菌；(3)在组织化学中用于酶活性的检测；储存液的配制及使用步骤：A)涂布于预制平板：溶解24mg X-a-gal于6 mL DMF,终浓度为4mg/ mL的溶液。

①涂布200ul(15cm)或者100ul (10cm) X-a-gal储存液于预制平板上；②放于37C培养箱至液体被吸收(由于DMF挥发性低，最长可放4小时)；③将转化细菌或酵母涂于平板上，于37C或30C培养直至蓝色菌落出现。

B)直接加入xx中:溶解60mg X-a-gal于3 mL DMF,终浓度为20mg/ mL的溶液。

1 / 2①将已灭菌琼脂培养基冷却至50-55 C ;②往已冷却的培养基中直接加入 2 ml -10 ml 20 mg/ ml X-a-Gal储存液，混匀，快速倒平板。

外观：白色或灰白色结晶粉末，或者无色结晶；溶解度（1%甲醇溶液）：无色，清澈；储存：-15 °C 避光避潮保存；2/ 2。

半乳糖苷酶染色液成分

半乳糖苷酶染色液成分1.引言1.1 概述半乳糖苷酶染色液是一种常用于细胞和组织的染色试剂，用于检测半乳糖苷酶的活性。

半乳糖苷酶是一种重要的酶类，可以催化半乳糖苷键的水解反应，从而使细胞或组织中的半乳糖苷化合物被水解成对应的糖和苷酒。

半乳糖苷酶染色液的主要成分包括染色底物和染色试剂。

染色底物是半乳糖苷酶的底物，一般选择具有易被水解的半乳糖苷化合物，常见的如5-溴-4-氯-3-吡啶-α-L-半乳糖苷（X-半乳糖苷）和5-溴-4-氯-3-吡啶-β-D-半乳糖苷（X-半乳糖苷），这些底物具有较强的可见光吸收性能，可以充分体现半乳糖苷酶的活性。

染色试剂则是为了增强染色效果而添加的物质，常见的染色试剂有硼酸、硼酸盐、缓冲液等。

硼酸可以与酶催化底物反应产生可见色素，从而增强染色效果；硼酸盐与底物产生反应可以形成较稳定的络合物，也能增强染色效果；缓冲液则可以维持染色条件的稳定，使染色反应更加可靠。

在进行半乳糖苷酶染色实验时，一般会根据具体的实验目的和需要来选择合适的成分比例和浓度，以达到最佳的染色效果。

此外，还需要注意保持实验条件的稳定，如温度、酸碱度等，以保证实验结果的准确性。

总之，半乳糖苷酶染色液是一种常用的细胞和组织染色试剂，通过使用染色底物和染色试剂可有效检测半乳糖苷酶的活性。

准备和应用合适的染色液成分，以及精确控制实验条件，对于获得可靠的实验结果具有重要意义。

1.2文章结构文章结构部分的内容可以描述文章的整体结构和组织方式。

可以按照以下步骤进行编写：1. 提供文章的整体结构概述：在本节中，我们将介绍本文的整体结构。

本文将分为引言、正文和结论三个部分，每个部分都有具体的内容和目标。

2. 引言部分：引言部分将介绍本文研究的背景和重要性，并提供读者对半乳糖苷酶染色液成分的初步了解。

3. 正文部分：正文部分将详细介绍半乳糖苷酶染色液的成分。

其中，我们将重点关注两个要点。

要点一将介绍半乳糖苷酶染色液的主要成分及其作用机制。

细胞β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒产品说明书(中文版)主要

产品内容
清理液（Reagent A）固定液（Reagent B）稀释液（Reagent C）染色液（Reagent D）产品说明书
毫升毫升毫升毫升份
保存方式
保存染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里；其余的保存在 4℃冰箱里；稀释液（Reagent C）和染色液（Reagent D），用铝箔封裹，避免光照；有效保证 6 月
用户自备
2 毫升离心管：用于配制染色工作液 15 毫升锥形离心管：用于配制染色工作液恒温培养箱：用于染色孵育光学显微镜：观察染色后的组织细胞
1
实验步骤
操作一、25cm2细胞培养瓶染色
实验开始前，将试剂盒里的染色液（Reagent D）从－20℃的冰箱里取出，置入冰槽里等待溶化。然后移取 xx 毫升稀释液（Reagent C）到 2 毫升离心管，加入 xx 微升染色液（Reagent D），混匀后，置入暗室里，室温下，标记为染色工作液。然后进行下列操作：
技术背景
大肠杆菌的标志基因 Lac Z 编码 β-半乳糖苷酶（ß-galactosidase；ß-gal），在其催化作用下，半乳糖可从乳糖的水解作用中得到。β-半乳糖苷酶非常稳定，对蛋白水解降解作用抗性强，且容易测试。因此 β-半乳糖苷酶成为目前最常用的报告基因，以评价载体转染的效果。X-Gal （5-bromo-4-chloro-3-indoyl- ß-D-Galacto pyranoside）是生物化学中常用的一种有机物，β-半乳糖苷酶可以将 X-Gal 转化为蓝色的产物，由此用它作为生色底物，来建立一种简单的目测颜色来确定细胞 β-半乳糖苷酶的活性，从而通过光学显微镜鉴别转染细胞报告基因的存在与否和强弱表现。
1．小心抽去 24 孔细胞培养板里的培养液 2．每孔加入 xx 微升清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面 3．小心抽去每孔里的清理液 4．每孔加入 xx 微升固定液（Reagent B），覆盖整个生长表面 5．在室温下孵育 5 分钟 6．小心抽去固定液 7．每孔加入 xx 微升清理液（Reagent A），清洗细胞表面 8．小心抽去清理液 9．重复实验步骤 7 和 8 一次 10．每孔加入 xx 微升染色工作液，覆盖整个细胞表面 11．放进 37℃培养箱，孵育 3 小时至 24 小时，或直至细胞呈现蓝色（注意：避免液体蒸发） 14．在光学显微镜下观察和计数：表达 β- 半乳糖苷酶活性的细胞为阳性细胞，呈现蓝色 15．（选择步骤）核固红复染：细胞核呈现粉红色（建议使用核固红复染试剂盒―― HL40011 ）

α-半乳糖苷酶检测方法

α-半乳糖苷酶酶活力的测定方法1.α-半乳糖苷酶酶活力单位定义在pH5.5并37℃条件下，每分钟内底物降解释放1μmol对硝基酚所需要的酶量为一个酶活单位U。

2.测定原理α-半乳糖苷酶能将对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖降解成对硝基酚。

通过400nm比色测定释放的对硝基酚的量，可以计算反应液中α-半乳糖苷酶的活力。

3.试剂与溶液除特殊说明外，所用的试剂均为分析纯，水均符合GB/T6682中规定的三级水。

3.1 0.05mol/L醋酸钠缓冲液：A液：称取无水醋酸钠4.2g定容至1000mL；B液：冰醋酸3.0 mL定容至1000 mL。

用B液调节A液至pH5.5。

3.2 0.2mol/L碳酸钠溶液：准确称取21.198g无水碳酸钠，定容至1000mL。

3.3 对硝基酚标准溶:(10 mmol/ L)称取0. 1391 g对硝基苯酚，精确到0. 001 g ,用碳酸钠溶液定容至100 mL，低温保存。

依次移取对硝基苯酚标准贮备液1 mL 、2 mL 、3 mL 、4 mL 、5 mL 、7 mL 、9 mL ,用碳酸钠溶液定容至100 mL ,配成浓度为0.1 mmol/ L 、0.2 mmol/ L 、0.3mmol/ L 、0.4mmol/ L 、0.5mmol/ L 、0.7mmol/ L 、0.9mmol/ L 的对硝基苯酚标准工作液。

3.4 10mmol/L对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖溶液：称取3.031g对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖，用醋酸钠缓冲液定容至1000mL，置棕色试剂瓶于4 ℃以下保存。

4.仪器与设备4.1实验室用样品粉碎机或碾体。

4.2分样筛：孔径为0.25mm（60目）。

4.3分析天平：感量为0.001g。

4.4 pH计：精确至0.01。

4.5磁力搅拌器：附加热功能。

4.6电磁震荡器4.7烧结玻璃过滤器：孔径为0.45μm。

4.8离心机：2000g以上。

4.9恒温水浴锅：温度控制范围在30-60℃之间，精度为0.1℃。

加A试剂盒使用说明书

编码品名规格单位北京华越洋生物加A试剂盒50次盒GX9133北京华越洋生物加A试剂盒100次盒GX9133产品及特点本产品利用Taq DNA polymerase的不依赖于模板的末端转移酶活性，在只有dATP存在的情况下，在平末端的DNA片段加上一个dA尾巴，使平末端片段也能被T载体克隆。

1.简单, 2X Tailing Buffer 中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。

2.适用于任何平末端的DNA片段，包括Pfu DNApolymerase等酶合成的DNA片段。

3.产物可以直接用于与T载体的连接。

规格及成分成份50 次包装2 X Tailing Buffer 1.25 mLTaq DNA olymerase(5U/uL) 50 uL使用手册1份运输及保存低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

自备试剂PCR片段使用方法一：反应前纯化处理：用Vent, Deep Vent, Pfu, Pwo等具有3到5外切活性的DNA聚合酶扩增得到的DNA片段，必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程（如酚/氯仿抽提或Proteinase K处理），否则它们将在加A反应时，切除掉加上的A尾巴，干扰反应。

可以采取胶回收和酚/氯仿抽提法等常规方法纯化，最后溶解在水或TE中，终浓度以0.1 ug/uL为宜。

二：加A反应在干净的0.5 mL或1.5 mL离心管中，分别加入下列成分：回收的DNA片段(0.2-2 ug)25 uL 2 X dA Tailing Buffer1 uL Taq DNA polymerase（5 U/uL）补水到50 uL72℃保温2小时三：反应后处理加A反应后，Taq DNA polymerase将与DNA末端紧密结合，所以必须酚/氯仿抽提去除。

如果使用Proteinase K处理后再用酚/氯仿抽提效果会更好。

得到的DNA溶于适量水和TE中后即可用于T载体的连接反应。

疑难解答Q：Taq DNA polymerase加尾有特异性吗？A：在有四种核苷酸存在的反应体系中，Taq DNA polymerase加尾特异性跟DNA的3’末端的核苷酸有关。

β-半乳糖苷酶β-galELISA试剂盒使用方法

β-半乳糖苷酶（β-gal）ELISA试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T0.8 pg/ml -35pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定微生物样本中β-半乳糖苷酶（β-gal）含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中β-半乳糖苷酶（β-gal）水平。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的β-半乳糖苷酶（β-gal）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中β-半乳糖苷酶（β-gal）浓度。

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。