β-半乳糖苷酶测定试剂盒使用说明
LacZ染色试剂盒使用说明书
华越洋⽣生物提供 QQ: 1733351176LacZ染⾊色试剂盒使⽤用说明书β-‐Galactosidase S taining K it M annual编号 名称 产品规格北京华越洋生物RS3601-‐23 LacZ染色试剂盒 250次分析基本信息：大肠杆菌中的LacZ基因是应用极广的报告基因之一，被用来检测表达载体介导的基因转移效率，也用于基因启动子研究。
LacZ编码β-‐半乳糖苷酶，该物质非常稳定，能抵抗蛋白酶的水解，并且可以利用许多底物，包括X-‐gal。
X-‐Gal是β-‐半乳糖苷酶（β-‐galactosidase）的显色底物，在β-‐半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物，所以可以轻易的检测出LacZ基因的表达。
The LacZ gene from E. coli is one of the most commonly used reporter genes f or t esting t he e fficiency o f e xpression v ector m ediated g ene t ransfer and for studying the regulation of promoters of genes. The LacZ gene encodes the enzyme β-‐galactosidase, which is very stable, resistant to proteolytic d egradation, c an u tilize a v ariety o f s ubstrates a nd c an b e e asily assayed in situ. The β-‐Galactosidase staining kit utilizes X-‐gal as the substrate.产品说明：华越洋的β-‐半乳糖苷酶染色试剂盒利用X-‐gal作为底物，配合试剂盒内提供的其他试剂，可以完成250次染色反应。
小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA试剂盒使用说明书本
小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA试剂盒使用说明书本本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中β半乳糖苷酶(βGAL)的含量。
试验原理：βGAL试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知βGAL浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将βGAL和生物素标记的抗体同时温育。
小鼠β半乳糖苷酶ELISA试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中βGAL的浓度呈比例关系。
试剂盒组成：自备材料蒸馏水。
加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振荡器及磁力搅拌器等。
安全性避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
底物A应挥发，避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
避免用手接触，有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。
使用不含热原和内毒素的试管。
收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
X-gal(20mgml)
北京雷根生物技术有限公司
X-gal(20mg/ml)
产简介：
5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-Galactopyra- noside ，X-gal)是β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的显色底物，在β-半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物。
X-gal(20mg/ml)由X-gal 、二甲基甲酰胺组成，常用于β-半乳糖苷酶的原位染色检测以及蓝白斑筛选。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 按实验具体要求操作。
注意事项：
1、 避免反复冻融。
2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关：
编号 名称 CM0265 CM0265 Storage X-gal(20mg/ml) 1ml 5ml -20℃ 避光 使用说明书 1份
编号 名称 CC0005 磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,无钙镁) DH0006 苏木素伊红(HE)染色液 DM0007
瑞氏-姬姆萨复合染色液 PE0080
Tris-HCl 缓冲液(1mol/L,pH6.8) PT0013
考马斯亮蓝快速染色液 PW0040
Western blot 一抗稀释液 TC0699 葡植物总糖和还原糖检测试剂盒(硝基水杨酸法)。
衰老相关β-半乳糖苷酶染色
衰老相关β-半乳糖苷酶染色细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒产品编号产品名称规格BL133A细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒100 T产品简介：细胞衰老时，SA-β-Gal (senescence-associated β-galactosidase)活性水平会上调，此时本试剂盒可以对衰老的细胞或组织进行染色检测。
正常细胞经过有限次数的分裂后停止分裂，出现不可逆的生长停滞，此时细胞仍然是存活的，但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化，通常表现为细胞体积变大，与衰老相关的β-半乳糖苷酶为活化状态。
β-半乳糖苷酶是细胞溶酶体内的水解酶，通常在pH 4.0时表现活性，但在衰老细胞内该酶在pH 6.0条件下表现活性。
本试剂盒即是基于此现象及原理，以X-Gal为底物，衰老细胞特异性β-半乳糖苷酶催化该底物生成蓝色产物，表现为细胞胞质有蓝色沉积物，在光学显微镜下即可很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。
本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测，也可以用于组织切片的衰老检测。
本试剂盒仅染色衰老细胞，对衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞等不会染色。
产品组成:组分名称规格BL133A-1β-半乳糖苷酶染色固定液100 mLBL133A-2β-半乳糖苷酶染色液A100 mLBL133A-3β-半乳糖苷酶染色液B 1.2 mLBL133A-4DMF（二甲基甲酰胺） 5 mlBL133A-5X-Gal（粉末）100 mg使用方法：见说明书注意事项：1、X-Gal粉末配制成溶液后，分装成小份-20℃保存，3个月内有效，X-Gal溶液需室温完全解冻混匀后再使用。
2、β-半乳糖苷酶染色液A和B需提前恢复至室温后再使用，配制好的染色工作液需充分混匀无沉淀方可使用。
3、衰老细胞β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH条件，不能在CO2培养箱中进行孵育显色，否则会影响染色工作液的pH，导致染色失败。
动物细胞β半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒产品说
动物细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途动物细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂是一种旨在使用化学方法，快速有效地裂解动物细胞，通过高速离心，获得澄清细胞裂解悬液，在β-半乳糖苷酶反应体系里，以人工合成的二恶二酮类化合物作为发光底物，水解所产生的发光产物，通过发光探测仪（Luminometer）测定其相对冷光单位（RLU）的变化，以此进行测算酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
广泛应用于基因组学、蛋白质组学和其它分子生物学研究。
其适用于转基因后的活体细胞外源性以及衰老细胞内源性半乳糖苷酶活性分析。
产品即到即用，性能稳定，参数优化，操作简便、高度敏感。
技术背景大肠杆菌的标志基因Lac Z编码β-半乳糖苷酶（β-galactosidase ；β-gal），在其催化作用下，半乳糖可从乳糖的水解作用中得到。
β-半乳糖苷酶非常稳定，对蛋白水解降解作用抗性强，且容易测试。
因此β-半乳糖苷酶成为目前最常用的报告基因，以评价载体转染的效果。
在衰老细胞内，显示β-半乳糖苷酶活性。
甲氧基二恶二酮氯代金刚烷苯基吡喃半乳糖苷（3- (4-methoxyspiro [1, 2-dioxetane-3, 2'- (5'-chloro) tricyclo [3.3.1.13,7]-decan]-4-yl-phenyl -ß-D-galacto pyranoside），是一种二恶二酮（dioxetane）类发光底物，以替代乳糖，在β-半乳糖苷酶（pH7.8）的催化下，去糖基化后，产生二恶二酮，进而在多聚苯甲基乙烷乙烯基苯甲氯化铵和荧光素钠（poly (benzyldimethylvinylbenzyl) ammonium chloride and sodium fluorescein）的启动反应作用下，同时pH调整到12，由此二恶二酮分解，发出冷光，在冷光仪（475nm波长）下，检测发光信号，来测定β-半乳糖苷酶的活性。
β-半乳糖苷酶β-galELISA试剂盒使用方法
β-半乳糖苷酶（β-gal）ELISA试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T0.8 pg/ml -35pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定微生物样本中β-半乳糖苷酶（β-gal）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中β-半乳糖苷酶（β-gal）水平。
用纯化的β-半乳糖苷酶（β-gal）体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入β-半乳糖苷酶（β-gal），再与HRP标记的β-半乳糖苷酶（β-gal）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的β-半乳糖苷酶（β-gal）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中β-半乳糖苷酶（β-gal）浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
β-半乳糖苷酶活性测定方法
β-半乳糖苷酶活性测定方法β-半乳糖苷酶活性测定（β-galactosidase assays）1、将过夜培养的菌液按1%接种量到新鲜培养基中培养，待OD600至0.6时取出，放置于冰上；（或可检测不同OD600时，菌的酶活性）2、取50-100μl 菌液至1.5 ml 的离心管中，加370-420μl Z buffer；3、加20 μl 氯仿和10 μl 0.1% SDS，振荡混匀，裂解细胞，放置于冰上30分钟；4、向离心管中加入100 μl 浓度4 mg/ml 的ONPG，混匀后立即置于30℃反应30-60分钟；5、待颜色变黄后，加入250 μl 1 M Na2CO3中止反应，准确记录变色反应的时间；6、取200μl上清，测定420 nm 和550 nm 处的吸光度；7、计算β-半乳糖苷酶酶活力：Miller Units = 1,000×[(OD420－ 1.75×OD550)] / (t×V×OD600)，其中，OD420和OD550----显色后的反应液读数；OD600----用于显色分析的培养液的细菌密度；t ----显色反应时间(单位min)；V ----用于显色分析的培养液体积(单位ml)。
Z buffer (总体积100 ml)：Na2HPO4·12H2O 100mM 3.5814 gNaH2PO4·H2O 40mM 0.624gKCl 10mM 0.07455gMgSO4·7H2O1mM 0.0246gβ-mercaptoethanol 5.4μl / ml 540μl加水到总体积90 ml，待试剂溶解后调pH 至7.0，最后定容到100 ml，4℃储存。
Substrate solution(总体积10ml)----现用现配Na2HPO4·12H2O 60mM 0.215 g NaH2PO4·H2O 40mM 0.0624g ONPG 4mg/ml 0.04g终止液（100ml）：Na2CO3 1M 10.6g。
β-半乳糖苷酶(β-Galactosidase, β-GAL)试剂盒说明书
货号：MS2615 规格：100管/48样β-半乳糖苷酶（β-Galactosidase, β-GAL）试剂盒说明书微量法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：β-GAL(EC 3.2.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能够催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷键水解，此外还具有转半乳糖苷的作用。
β-GAL不仅可为植物的快速生长释放储存的能量，还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解，释放自由的半乳糖。
测定原理：β-GAL分解对-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL活性。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入2.5mL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存。
试剂二：液体4mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体13mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、培养液等液体样本：直接检测测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
β―半乳糖苷酶标记试剂
β―半乳糖苷酶标记试剂
β—半乳糖苷酶标记试剂
β—半乳糖苷酶已被广泛用于酶标记免疫分析，但主要用于免疫细胞化学。
一种较好的底物是5—溴—4—氯—3—吲哚—β—D—吡喃型半乳糖苷(BCIG)，它可以产生一种深蓝色的产物。
此产物在乙醇和水中稳定，不溶解。
1．需要的溶液、试剂和特殊设备
BCIG；
N，N—二甲基甲酰胺；
1mmol／LMgCl2；
3mmol／L亚铁氰化钾用溶解，DPX。
光学显微镜(通常带有照相机以便于记录结果)。
2．操作步骤
(1)用0．1mlDMF溶解4．9mgBCIG。
(2)加0．1mlBCIG溶液至10ml含有1 mmol／L MgCl2 3retool／L亚铁氰化钾的中。
(3)滤纸过滤。
(4)加此溶液至标本，在室温孵育10～40min，用水冲洗终止反应。
(5)优化：如果需要，进行复染。
(6)用DPX封片。
β-半乳糖苷酶染色试剂盒使用说明
β-半乳糖苷酶染色试剂盒使用说明产品简介：β-半乳糖苷酶染色试剂盒(β-Galactosidase Staining Kit)是一种基于衰老时SA-β-Gal(senescence-associatedβ-galactosidase)活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的试剂盒。
在普通的光学显微镜下就可以观测到细胞或组织的衰老情况。
绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力，在不能分裂后就进入衰老状态。
此时细胞仍然是存活的，但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。
衰老细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂，并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊，不同于一些损伤诱导的细胞休眠，也不同于细胞生长接触抑制的情况。
衰老细胞通常体积变会大，表达pH 6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶。
细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式，同时也是生物体老化(aging)的一种潜在原因。
本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测，也可以用于组织切片的衰老检测。
β-半乳糖苷酶染色试剂盒以X-Gal为底物，在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物，光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。
本试剂盒仅染色衰老细胞，对衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞等不会染色。
对于组织切片或组织块，可以检测的样品数量视样品的大小而定，对于普通的切片也至少足够检测100个样品，使用6孔板测定，足够测定100个样品。
产品组成：试剂(C):β-半乳糖苷酶染色液A1ml4℃避光试剂(D):β-半乳糖苷酶染色液B1ml4℃避光试剂(E):β-半乳糖苷酶染色液C100ml4℃避光使用说明书1份自备材料：1、PBS或HBSS2、细胞培养器皿3、显微镜操作步骤(仅供参考)：(一)贴壁细胞染色：1、对于6孔板中培养的细胞，吸除细胞培养液，用PBS或HBSS洗涤1次，加入1ml β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定15min。
β-半乳糖苷酶活性测定方法
β-半乳糖苷酶活性测定（β-galactosidase assays）1、将过夜培养的菌液按1%接种量到新鲜培养基中培养，待OD600至0.6时取出，放置于冰上；（或可检测不同OD600时，菌的酶活性）2、取50-100μl 菌液至1.5 ml 的离心管中，加370-420μl Z buffer；3、加20 μl 氯仿和10 μl 0.1% SDS，振荡混匀，裂解细胞，放置于冰上30分钟；4、向离心管中加入100 μl 浓度4 mg/ml 的ONPG，混匀后立即置于30℃反应30-60分钟；5、待颜色变黄后，加入250 μl 1 M Na2CO3中止反应，准确记录变色反应的时间；6、取200μl上清，测定420 nm 和550 nm 处的吸光度；7、计算β-半乳糖苷酶酶活力：Miller Units = 1,000×[(OD420－1.75×OD550)] / (t×V×OD600)，其中，OD420和OD550----显色后的反应液读数；OD600----用于显色分析的培养液的细菌密度；t ----显色反应时间(单位min)；V ----用于显色分析的培养液体积(单位ml)。
Z buffer (总体积100 ml)：Na2HPO4·12H2O 100mM 3.5814 gNaH2PO4·H2O 40mM 0.624gKCl 10mM 0.07455gMgSO4·7H2O1mM 0.0246gβ-mercaptoethanol 5.4μl / ml 540μl加水到总体积90 ml，待试剂溶解后调pH 至7.0，最后定容到100 ml，4℃储存。
Substrate solution(总体积10ml)----现用现配Na2HPO4·12H2O 60mM 0.215 gNaH2PO4·H2O 40mM 0.0624gONPG 4mg/ml 0.04g终止液（100ml）：Na2CO3 1M 10.6g。
β-半乳糖苷酶β-galELISA试剂盒使用方法
β-半乳糖苷酶（β-gal）ELISA试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T0.8 pg/ml -35pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定微生物样本中β-半乳糖苷酶（β-gal）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中β-半乳糖苷酶（β-gal）水平。
用纯化的β-半乳糖苷酶（β-gal）体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入β-半乳糖苷酶（β-gal），再与HRP标记的β-半乳糖苷酶（β-gal）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的β-半乳糖苷酶（β-gal）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中β-半乳糖苷酶（β-gal）浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
β-半乳糖苷酶（LACZ）酶活测定
β-半乳糖苷酶（LACZ）酶活测定警示：在我们的手册中介绍的实验可能具有潜在的危险性，要求操作人员具有相当的安全训练、特殊装备、以及相关安全部门的监督。
作为实验操作员的你承担全部的责任、义务和由于实施安全步骤和措施带来的危险。
麻省理工大学没有责任、义务或承担由于实施本材料中内容所引起的危险。
法律声明β-半乳糖苷酶（LAC Z）酶活测定1. 在冰上解冻样品，同时准备裂解液（见下面关于裂解液样品的收集和准备的注意事项）。
2. 准备若干(至少每个样品3个和空白一支)透明的塑料比色皿，每支装有500μl的碳酸钠终止液。
你可以在比色皿上标明测试样品的名称和使用的时间。
3. 在微量离心试管中加入如下试剂：400μl 磷酸钠盐缓冲液（pH 7.5）133μl ONPG溶液6μl 镁离子溶液4. 把反应混合物放置在37°C的水浴中或者加热垫上预温育。
5. 一旦预热后，加入如下物质：60μl 细胞萃取物比较明智的做法是同时做阴性对照，即用抽提物或不表达β-半乳糖苷酶的细胞抽提物代替前述的细胞抽提物。
6. 留心观察每个反应试管里黄色（o-硝基酚）的出现，在适当的时间点，从每种反应混合物中等量移取100μl的溶液，把它加到装有碳酸钠终止液的比色皿中。
7. 当完成所有时间点测定后，在420 nm处测光密度，记录吸光值，并且计算吸光值与时间的斜率。
斜率和β-半乳糖苷酶的活性成正比。
注意：若在420nm处吸光值高于1.0，则不能采信。
8. 在计算其实际活性时，先制作o-硝基酚标准曲线图，然后根据样品的吸光值在曲线上找出对应的浓度。
一个酶活力单位是指酶在37oC每分钟可催化产生1 μmol的o-硝基酚。
收集和裂解细胞的注意事项细胞培养物的收集1. 在适当的培养时间，取出1.6 ml的培养物放入微量离心管中，并把它置于冰上。
2. 迅速将1.6 ml样品在涡旋混匀器上振荡，然后移出100μl放入已装有900 μL新鲜培养基的比色皿中。
细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶检测试剂盒产品说明书(中文版)
细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶检测试剂是一种旨在以X-Gal为底物，通过细胞内β-半乳糖苷酶在酸性条件下稳定表达，催化生成深蓝色的沉积产物，从而在光学显微镜下观察到蓝色表达的细胞作为细胞复制性衰老（replicative senescence）的分子特征来识别和探测衰老细胞的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
广泛应用于细胞生物学研究。
其适用于各种人体和动物细胞或活体内（in vivo）检测。
产品即到即用，性能稳定，参数优化，着色敏感，堪称国际上同类产品最佳。
技术背景细胞复制性衰老是细胞控制其生长潜能的保障机制。
衰老细胞停滞在细胞周期的G1期，表现出细胞扁平、胀大、颗粒增多的形态特征，尤其在酸性条件下，细胞内β-半乳糖苷酶活性增加，而成为细胞衰老的生物学标记。
产品内容清理液（Reagent A）毫升固定液（Reagent B）毫升酸性液（Reagent C）毫升稀释液（Reagent D）毫升染色液（Reagent E）毫升产品说明书 1份保存方式保存染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；稀释液（Reagent D）和染色液（Reagent E）用铝箔封裹，避免光照；有效保证6月用户自备2毫升离心管：用于配制染色工作液15毫升锥形离心管：用于配制染色工作液恒温培养箱：用于染色孵育光学显微镜：用于观察染色后的细胞实验步骤操作一、25cm2细胞培养瓶染色实验开始前，将试剂盒里的染色液（Reagent E）从－20℃的冰箱里取出，放进冰槽里等待溶化。
然后移取xx毫升稀释液（Reagent D）到2毫升离心管，加入xx微升染色液（Reagent E），混匀后，放进37℃恒温水槽里预热，标记为染色工作液。
然后进行下列操作：1．小心抽去25cm2细胞培养瓶里的培养液2．小心加入xx毫升清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面3．小心抽去清理液4．小心加入xx毫升固定液（Reagent B），覆盖整个生长表面5．在室温下孵育5分钟6．小心抽去固定液7．小心加入xx毫升酸性液（Reagent C），清洗细胞表面8．小心抽去酸性液9．重复实验步骤7和8一次10．小心加入xx毫升染色工作液，覆盖整个细胞表面11．放进37℃培养箱，孵育3小时至16小时，或细胞呈现蓝色（注意：避免液体蒸发）12．在光学显微镜下观察和计数：表达衰老特异性β- 半乳糖苷酶的细胞为阳性细胞，呈现蓝色。
PH1124 β-半乳糖苷酶染色试剂盒实验操作方法
PH1124|β-半乳糖苷酶染色试剂盒β-Galactosidase Staining KitCatalog No：PH1124Size：☐100T Store at4℃简介β-半乳糖苷酶染色试剂盒(β-Galactosidase Staining Kit)是一种基于衰老时SA-β-Gal(senescence-associatedβ-galactosidase)活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的试剂盒。
在普通的光学显微镜下就可以观测到细胞或组织的衰老情况。
绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力，在不能分裂后就进入衰老状态。
此时细胞仍然是存活的，但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。
衰老细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂，并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊，不同于一些损伤诱导的细胞休眠，也不同于细胞生长接触抑制的情况。
衰老细胞通常体积变会大，表达pH6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶。
细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式，同时也是生物体老化(aging)的一种潜在原因。
本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测，也可以用于组织切片的衰老检测。
β-半乳糖苷酶染色试剂盒以X-Gal为底物，在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物，光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。
本试剂盒仅染色衰老细胞，对衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞等不会染色。
对于组织切片或组织块，可以检测的样品数量视样品的大小而定，对于普通的切片也至少足够检测100个样品，使用6孔板测定，足够测定100个样品。
组分Componets100T StorageReagent(A):β-半乳糖苷酶染色固定液100ml4℃Reagent(B):X-Gal溶液5ml-20℃避光Reagent(C):β-半乳糖苷酶染色液A1ml4℃避光Reagent(D):β-半乳糖苷酶染色液B1ml4℃避光Reagent(E):β-半乳糖苷酶染色液C100ml4℃避光自备材料：1、PBS或HBSS；2、细胞培养器皿；3、显微镜|有效期：12个月。
C0602 细胞衰老beta-半乳糖苷酶染色试剂盒
表1. 染色工作液的配制方法。
β-半乳糖苷酶染色液A
10 μl
β-半乳糖苷酶染色液B
10 μl
β-半乳糖苷酶染色液C
930 μl
X-Gal溶液
50 μl
说明：对于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的简单的判定方法是：聚丙烯容器可以高温高压灭菌；而聚苯乙烯容器不适合
高温高压灭菌，一旦高温高压处理就会严重变形。
聚苯乙烯(polystyrene)容器中进行，例如普通的6孔板就可以用作染色的容器。 需自备PBS或HBSS(Hanks Balanced Salt Solution)。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 对于贴壁细胞： a. 对于6孔板中培养的细胞，吸除细胞培养液，用PBS或HBSS洗涤1次，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定 15分钟。对于其它类型的培养板，固定液及后续溶液的用量参照此比例进行操作。 b. 吸除细胞固定液，用PBS或HBSS洗涤细胞3次，每次3分钟。 c. 吸除PBS或HBSS，每孔加入1毫升染色工作液。使用聚丙烯(polypropylene)容器，不能使用聚苯乙烯(polystyrene)容器 配制染色工作液。染色工作液的配制方法参考表1。
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产品名称 β-半乳糖苷酶染色固定液
β-半乳糖苷酶(LACZ)酶活测定
警示：在我们的手册中介绍的实验可能具有潜在的危险性，要求操作人员具有相当的安全训练、特殊装备、以及相关安全部门的监督。
作为实验操作员的你承担全部的责任、义务和由于实施安全步骤和措施带来的危险。
麻省理工大学没有责任、义务或承担由于实施本材料中内容所引起的危险。
法律声明β-半乳糖苷酶（LAC Z）酶活测定1. 在冰上解冻样品，同时准备裂解液（见下面关于裂解液样品的收集和准备的注意事项）。
2. 准备若干(至少每个样品3个和空白一支)透明的塑料比色皿，每支装有500μl的碳酸钠终止液。
你可以在比色皿上标明测试样品的名称和使用的时间。
3. 在微量离心试管中加入如下试剂：400μl 磷酸钠盐缓冲液（pH 7.5）133μl ONPG溶液6μl 镁离子溶液4. 把反应混合物放置在37°C的水浴中或者加热垫上预温育。
5. 一旦预热后，加入如下物质：60μl 细胞萃取物比较明智的做法是同时做阴性对照，即用抽提物或不表达β-半乳糖苷酶的细胞抽提物代替前述的细胞抽提物。
6. 留心观察每个反应试管里黄色（o-硝基酚）的出现，在适当的时间点，从每种反应混合物中等量移取100μl的溶液，把它加到装有碳酸钠终止液的比色皿中。
7. 当完成所有时间点测定后，在420 nm处测光密度，记录吸光值，并且计算吸光值与时间的斜率。
斜率和β-半乳糖苷酶的活性成正比。
注意：若在420nm处吸光值高于1.0，则不能采信。
8. 在计算其实际活性时，先制作o-硝基酚标准曲线图，然后根据样品的吸光值在曲线上找出对应的浓度。
一个酶活力单位是指酶在37ºC每分钟可催化产生1 μmol的o-硝基酚。
收集和裂解细胞的注意事项细胞培养物的收集1. 在适当的培养时间，取出1.6 ml的培养物放入微量离心管中，并把它置于冰上。
2. 迅速将1.6 ml样品在涡旋混匀器上振荡，然后移出100μl放入已装有900 μL新鲜培养基的比色皿中。
离心剩下的1.5ml样品，去掉上层清液，把沉淀迅速放在-80°C冷藏。
β-半乳糖苷酶活性检测
β-半乳糖苷酶活性检测材料及试剂准备：材料准备：1.5ml无菌离心管若干、计时器等。
试剂准备：（1）ONPG（O-nitrophenyl β-D-galactopyranoside）：4 mg/mL 溶于Z buffer，混匀，调节至pH 7.0。
ONPG 需要1-2 h 溶解，每次使用时必须配制新鲜的溶液，且需避光存放。
（2）Z buffer：16.1 g Na2HPO4· 7H2O，5.50 g NaH2PO4· H2O，0.75 g KCl，0.246 g MgSO4· 7H2O，ddH2O定容至1000 mL，调节至pH 7.0，121℃灭菌20 min，室温可存放一年，根据需要使用前可加β-巯基乙醇2.7 mL。
（3）YPD 培养基：20.0 g Peptone，10.0 g Yeast Extract，20.0 g Glucose，蒸馏水定容至1000 mL，调节至pH 5.8，121℃灭菌20 min。
（4）SD 培养基： 1.7 g YNB (Yeast Nitrogen Base w/o Amino Acids and Ammonium Sulfate)，5.0 g (NH4)2SO4，20.0 g Glucose，100 mL 10×Dropout 溶液，ddH2O 定容至1000 mL，调节至pH 5.8，115 ℃灭菌20 min。
（5）Na2CO3溶液： 1 mol/L实验步骤：(1)准备5 mL在液体SD筛选培养基中过夜培养的待测菌液。
(2) 实验当天，提前准备4 mg/mL的ONPG 溶液，用Z buffer 溶解，在摇床上摇1-2 h。
(3) 混匀过夜培养物，迅速将2 mL培养物加入8 mL YPD 培养基中，30℃，220 r/min 培养3-5 h（使OD600 值达到0.5-0.8），记录收集细胞时的OD600值。
(4) 取3个1.5 mL离心管，每个离心管内收集1.5 mL的培养物，14000 r/min 离心30 s。
β-半乳糖苷酶染色试剂盒说明书
细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒产品简介：细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒(Senescence β-Galactosidase Staining Kit)是一种基于衰老时SA-β-Gal (senescence-associated β-galactosidase)活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的试剂盒。
在普通的光学显微镜下就可以观测到细胞或组织的衰老情况。
本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测，也可以用于组织切片的衰老检测。
绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力，在不能分裂后就进入衰老(senescence)状态。
此时细胞仍然是存活的，但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。
衰老(senescence)的细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂，并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊，不同于一些损伤诱导的细胞休眠，也不同于细胞生长接触抑制的情况。
衰老细胞细胞通常体积变大，表达pH 6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶。
细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式，同时也是生物体老化(aging)的一种潜在原因。
碧云天生产的细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒，以X-Gal为底物，在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物。
从而在光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。
本试剂盒仅染色衰老细胞，不会染色衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞。
如果使用6孔板检测，足够测定100个样品；使用24孔板测定，足够测定400个样品；使用96孔板测定，足够测定1000个样品。
对于组织切片或组织块，可以检测的样品数量视样品的大小而定。
对于普通的切片也至少足够检测100个样品。
保存条件：-20℃保存，一年有效。
其中X-Gal溶液需避光保存。
注意事项：β-半乳糖苷酶染色固定液有一定的腐蚀性和毒性，操作时请注意防护。
LacZ染色试剂盒使用说明书
华越洋⽣生物提供 QQ: 1733351176LacZ染⾊色试剂盒使⽤用说明书β-‐Galactosidase S taining K it M annual编号 名称 产品规格北京华越洋生物RS3601-‐23 LacZ染色试剂盒 250次分析基本信息：大肠杆菌中的LacZ基因是应用极广的报告基因之一，被用来检测表达载体介导的基因转移效率，也用于基因启动子研究。
LacZ编码β-‐半乳糖苷酶，该物质非常稳定，能抵抗蛋白酶的水解，并且可以利用许多底物，包括X-‐gal。
X-‐Gal是β-‐半乳糖苷酶（β-‐galactosidase）的显色底物，在β-‐半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物，所以可以轻易的检测出LacZ基因的表达。
The LacZ gene from E. coli is one of the most commonly used reporter genes f or t esting t he e fficiency o f e xpression v ector m ediated g ene t ransfer and for studying the regulation of promoters of genes. The LacZ gene encodes the enzyme β-‐galactosidase, which is very stable, resistant to proteolytic d egradation, c an u tilize a v ariety o f s ubstrates a nd c an b e e asily assayed in situ. The β-‐Galactosidase staining kit utilizes X-‐gal as the substrate.产品说明：华越洋的β-‐半乳糖苷酶染色试剂盒利用X-‐gal作为底物，配合试剂盒内提供的其他试剂，可以完成250次染色反应。
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β-半乳糖苷酶测定试剂盒使用说明
分光光度法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
货号：BC2580
规格：50管/24样
产品内容：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入5mL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存。
试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体80mL×1瓶，4℃保存。
标准液：液体1ml×1支，4℃保存，10μmol/ml对硝基苯酚溶液。
产品说明：
β-GAL(EC3.2.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能够催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷键水解，此外还具有转半乳糖苷的作用。
β-GAL不仅可为植物的快速生长释放储存的能量，还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解，释放自由的半乳糖。
β-GAL分解对-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL活性。
自备用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；
15000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，
加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
15000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、标准液的处理：用试剂二将标准液稀释至200、100、50、25、12.5、6.25、0nmol/ml.
二、测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）：
试剂名称（μL）测定管对照管标准管
试剂一200
蒸馏水200
试剂二250250
样本5050
迅速混匀，放入37℃准确水浴30min
标准液500
试剂三100010001000充分混匀，400nm处测定吸光值A，计算ΔA=A测定-A对照。
每个测定管需设一个对照管。
三、β-GAL活性计算：
根据标准管的吸光度（x）和浓度（y，nmol/ml）建立标准曲线，将△A带入标准曲线中，计算样品生成的产物量（nmol/ml）。
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL活力(nmol/h/mg prot)=(y×V反总)÷(V样×Cpr)÷T
=20×y÷Cpr
需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL活力(nmol/h/g鲜重)＝(y×V反总)÷(W×V样÷V样总)÷T
=20×y÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL活力(nmol/h/104cell)=(y×V反总)÷(500×V样÷V样总)÷T
=0.04×y
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；V反总：反应体系总体积，0.5mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万；T：反应时间，0.5h。