草甘膦残留的酶联免疫分析方法的建立

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酶联免疫吸附分析法测定食品中有机磷农药残留

第34卷第8期2018年8月科技通报BULLETIN OF SCIENCE AND TECHNOLOGYVol．34No．8Aug．2018酶联免疫吸附分析法测定食品中有机磷农药残留邢玮玮1，陈燕敏2（1．郑州工商学院公共基础教学部，郑州451400；2．郑州师范学院化学化工学院，郑州450000）摘要：以食品中有机磷农药残留为目标，通过酶联免疫吸附分析法对其进行测定。

将几类常见的蔬菜和水果作为实验样本，对采集的样品进行萃取处理。

介绍了酶联免疫吸附分析法的基本原理和标准曲线。

给出抗原设计与人工抗原合成过程，介绍了抗体的类型和选择制备的抗体。

考虑有机溶剂对酶联免疫吸附法的条件进行优化。

通过酶联免疫吸附分析法对几类有机磷农药标准工作曲线进行绘制，依据标准曲线测定食品样本中有机磷农药残留。

给出采用酶联免疫吸附分析法得到的样本中有机磷农药残留，将其和气相色谱法和高效液相色谱法相比，发现酶联免疫吸附分析法测定结果更加可靠。

关键词：酶联免疫吸附分析法；测定；食品；有机磷；农药残留中图分类号：S481.8文献标识码：A文章编号：1001－7119（2018）08－0050－04DOI ：10.13774/j．cnki．kjtb．2018.08.009收稿日期：2017－10－14基金项目：河南省科技攻关项目（152102310397）作者简介：邢玮玮（1985－），女，河南安阳人，硕士研究生，讲师，研究方向：免疫分析。

Determination of Organophosphorus Pesticide Ｒesidues inFood by Enzyme Linked Immunosorbent AssayXing Weiwei 1，Chen Yanmin 2（1．Faculty of General Education ，Zhengzhou Technology and Business University ，Zhengzhou 451400China ；2．Zhegzhou Normal University ，School of Chemistry and Chemial Engineering ，Zhengzhou 450000，China ）Abstract ：the organophosphorus pesticide residues in food were determined by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA ）．Several common vegetables and fruits were taken as experimentalsamples ，and the samples were extracted．The basic principle and standard curve of enzyme －linked immunosorbent assay （ELISA ）are introduced．The antigen design and artificial antigen synthesis process were introduced．The types of antibodies and the antibodies were introduced．Considering the conditions of ELISA for organic solvents were optimized．The standard working curves of several organophosphorus pesticides were drawn by enzyme －linked immunosorbent assay ，and organophosphorus pesticide residues in food samples were determined on the basis of standard curves．The organophosphorus pesticide residues in the samples obtained by enzyme linked immunosorbent assay （ELISA ）were given．It was found that the results of ELISA were more reliable than those obtained by gas chromatography and high performance liquid chromatography．Keywords ：Enzyme linked immunosorbent assay （ELISA ）；determination ；food ；organophosphorus ；pesticide residues第8期邢玮玮等．酶联免疫吸附分析法测定食品中有机磷农药残留51目前，很多食品中都残留一定的农药，长期食用含有农药的食品将严重影响人或动物的健康，甚至会危及生命［1］。

免疫分析技术在草甘膦残留检测中的应用

doi:10.3969/j.issn.1000⁃484X.2018.02.028免疫分析技术在草甘膦残留检测中的应用①李燕虹　王　耀　裴亚峰　樊振江②　曹金博　吴佳蓓(河南科技大学食品与生物工程学院/食品加工与安全国家实验教学示范中心,洛阳471023) 中图分类号　R446.61 文献标志码　A 文章编号　1000⁃484X (2018)02⁃0291⁃05①本文受国家级大学生创新创业训练计划项目(201610464035)㊁河南科技大学大学生研究训练计划项目(2016064)和河南科技大学博士科研启动基金项目(13480062)资助㊂②漯河食品职业学院,漯河462300㊂作者简介:李燕虹,女,在读硕士,主要从事食品安全免疫检测方面的研究,E⁃mail:chengaifeiyang@㊂通讯作者及指导教师:王　耀,男,博士,讲师,主要从事食品安全免疫检测方面的研究,E⁃mail:wangyao @㊂[摘　要]　草甘膦作为一种高效除草剂,越来越广泛地被应用于农业生产㊂与此同时,草甘膦的残留问题及其潜在危害也逐渐引起人们密切关注㊂近年来,针对草甘膦残留的检测方法已成为研究热点,其中荧光免疫㊁酶联免疫吸附㊁免疫传感器等免疫分析方法因具有灵敏㊁特异㊁快速的特点而发展迅速㊂本文主要对草甘膦残留的免疫分析技术进行综述,为草甘膦残留快速检测深入研究提供参考㊂[关键词]　草甘膦;残留;免疫分析Application of immunoassay techniques in glyphosate residue detectionLI Yan⁃Hong ,WANG Yao ,PEI Ya⁃Feng ,FAN Zhen⁃Jiang ,CAO Jin⁃Bo ,WU Jia⁃Bei .Henan University of Science and Technology ,College of Food and Bioengineering /National Demonstration Center for Experimental Food Processing and Safety Education ,Luoyang 471023,China[Abstract ]　Glyphosate is widely used in agricultural production as an efficient herbicide.At the same time,the residualproblems of glyphosate and its potential harm are gradually attracting people′s close attention.In recent years,glyphosate residue detection method has become a research hotspot,fluorescence immunoassay,enzyme⁃linked immunosorbent assay and immunosensor are developed rapidly by sensitive,specific and fast characteristics.This paper reviews the immunoassay techniques of glyphosate residue and provides a reference for the rapid detection of glyphosate residue.[Key words ]　Glyphosate;Residue;Immunoassay 随着农作物种植中除草剂的使用越来越广泛,农药残留对环境㊁动植物及人体健康造成的威胁越来越凸显㊂草甘膦(Glyphosate)是美国孟山都公司在1971年开发的一种广谱灭生性水溶性除草剂,能够非选择性地有效抑制多种一年生或多年生杂草[1],目前已成为使用最广泛㊁用量最大的除草剂之一[2],并且其在全球的使用量正以每年20%的速度递增[3]㊂虽然草甘膦的毒性较低,但长期大量使用会在环境和生物体内不断富集,并通过食物链进入人体,对人体健康造成潜在威胁[4,5]㊂因此,很多国家和地区对于草甘膦残留提出了限量要求,针对草甘膦残留的检测研究也逐渐展开,目前较为成熟的检测方法包括气相色谱㊁液相色谱以及联用技术,但这些传统方法在样品处理㊁分析时间上都存在一些不足,不适宜于大批量筛查以及推广应用㊂近年来,随着免疫分析技术在草甘膦残留检测中的逐步应用,检测效率大大提高㊂本文将对这些免疫检测方法进行综述,以期为免疫分析技术在草甘膦残留检测中的深入应用提供一定的技术参考㊂1　草甘膦概述1.1　性质及其作用机理　草甘膦是一种有机酸,化学名为N⁃膦羧甲基甘氨酸,商品名为镇草宁㊁农达等,化学式为C 3H 8NO 5P,分子量为169,结构式图1所示㊂纯品为白色结晶,无臭,无挥发性,但草甘膦纯品易吸湿,不易保存㊂草甘膦主要存在形态为酸及以草甘膦异丙胺盐为主的盐类,在水中的溶解度为1.2%(25℃),难溶于无水乙醇㊁乙醚㊁苯等有机溶剂中,其异丙胺盐完全溶解于水㊂草甘膦是一种内吸传导型除草剂,能被植物的茎叶吸收并向下传导,杀死多年生深根植物深埋地下的根茎;也可以在同一植株的不同分蘖间进行传导,杀死未接触到药剂的分蘖或分枝㊂草甘膦的除草作用是通过抑制莽草酸途径中的5⁃烯醇式丙酮莽草酸⁃3⁃膦酸合成酶(EPSPS)活性来实现的,因EPSPS 在芳香氨基酸如苯丙氨酸㊁酪氨酸和色氨酸的生物合成中具有很重要的作用,而草甘膦抑制EPSPS 的活性使莽草酸途径堵塞,使蛋白质合成受到抑制,从而导致高等植物消耗芳香族氨基酸,致使植物死亡,达到除草目的[6]㊂1.2　限量标准　由于草甘膦的使用量逐年增多,其引起的水体污染㊁土壤污染㊁食品残留等问题也在逐年增加㊂台湾地区食药署2016年燕麦产品抽检结果显示,总计抽检的市售36款燕麦片产品中有10款燕麦片检出草甘膦[7]㊂德国慕尼黑环境研究所2016年公布的一份实验室检测报告显示,德国最受欢迎的14种啤酒中被检测出含有不同程度的农药残留物草甘膦,这些啤酒中的草甘膦含量值介于0.46至29.74μg /L [8]㊂吴晓刚等[9]和诸力等[10]利用高效液相色谱法对部分市售茶进行检测,部分样本也检出了草甘膦残留㊂已有研究证实草甘膦具有一定的动物毒性作用[11],Guilherme 等[12]通过彗星实验和红细胞核图1　草甘膦结构式Fig.1　Structure of glyphosate异常实验验证了草甘膦对欧洲鳗鱼具有潜在的遗传毒性,能够引起血细胞DNA 损伤㊂Prasad 等[13]研究发现草甘膦会导致小鼠骨髓细胞染色体变异和微核增加㊂因此,很多国家和地区都将草甘膦的残留限量列入相关法规与标准中,我国以及美国的饮用水标准中都规定草甘膦的最大残留限量为0.7mg /L,我国2014年修订的食品安全国家标准‘食品中农药最大残留限量“(GB2763⁃2014)中对草甘膦在食品中的最大残留限量作出了更为详细的规定,如表1所示㊂2　免疫分析技术目前,对于环境及农产品中草甘膦残留的检测多以液相或气相色谱及其联用技术为主[14⁃17],色谱技术在灵敏度㊁准确度等方面具有优势,但其需要一定的前处理以及严苛的操作,不能很好地满足批量样品的快速筛查,不利于推广应用㊂近年来,免疫分析技术在食品安全检测领域发展迅速,以免疫学反应的特异性为基础,在满足检测灵敏度的需求下,大大提高了检测效率[18]㊂用于草甘膦残留检测的免疫分析方法较为有限,仍有较大的发展空间㊂2.1　荧光免疫法　荧光免疫法是标记免疫分析技术中发展较早的一种㊂该方法是将特定荧光素或荧光示踪物与已知抗体或抗原标记制成荧光标记物,再利用这种荧光标记物与抗原或抗体产生特异性反应,通过荧光强度对抗原或抗体进行定位与分析[19]㊂该方法具有较强的特异性和灵敏度,且无放射性污染㊂Biagini 等[20]制备聚苯乙烯㊁二乙烯苯和甲基丙烯酸制备红色荧光微球,并将草甘膦与卵清蛋白偶联物链接至荧光微球,利用兔源抗体建立竞争模式的荧光微球免疫方法㊂该方法用于水质中草甘膦残留的检测,具有较高的灵敏度㊂但该类方法表1　GB2763⁃2014规定的食品中草甘膦的最大残留限量Tab.1　Maximum residue limits of glyphosate in foods of GB2763⁃2014Food categoryMaximumresidue limit(mg /kg)Food categoryMaximumresidue limit(mg /kg)CerealsUnhulled rico 0.1FruitCitrus fruits(except citrus)0.1Wheat5Citrus0.5Wheat flour 0.5Kernel fruits(except apple)0.1Whole wheat flour5Apple 0.5Corn 1Drupa fruits 0.1Oil and grease Cottonseed oil 0.05Berries and other small fruits0.1Sugar crop Sngarcane 2Tropical and subtropical fruits0.1DrinkTea1Melon fruits0.1的建立过程较为复杂,且荧光物质易受样品基质的干扰,影响方法稳定性,因此相关报道较少㊂2.2　ELISA 法　ELISA 是将抗原和抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合的一种高敏感免疫分析方法㊂该方法首先将抗体或抗原固定于固相载体,检测时将样品和酶标抗原或抗体混合并与固相载体表面的抗体或抗原反应,然后洗涤除去游离成分,加入酶反应底物引发显色反应,最后终止反应根据显色程度进行分析㊂ELISA 方法经过40多年的发展,已经成为食品分析领域主要的免疫分析方法之一,该方法具有成本低廉㊁简便快速㊁敏感特异且不需大型仪器设备等优点,对于样品纯度要求不高,非常适合批量样品的快速筛查[21]㊂Clegg等[22]最先利用草甘膦兔源多克隆抗体作为特异性识别抗体,建立了间接竞争ELISA 方法检测水样中草甘膦残留,原理图如图2所示,该方法检测限为7.6μg /ml㊂潘熙萍等[23]同样制备了草甘膦兔源多克隆抗体,所建立的间接竞争ELISA 方法可有效地用于测定玉米粉和小麦粉中草甘膦的残留㊂Selvi 等[24]则通过制备禽类抗体建立食品中草甘膦残留的间接竞争ELISA 方法,获得了更高的检测灵敏度㊂由于ELISA 方法操作简便,程序化强,目前国外已出现了一些商品化的ELISA 试剂盒,其中Abraxis 公司的ELISA 试剂盒已被成功用于水质以及食品检测[25⁃28],将这种快速筛查方法与传统色图2　间接竞争ELISA 原理图Fig.2　Schematic diagram of indirect competitiveELISA图3　免疫传感器原理图Fig.3　Schematic diagram of immune sensor谱方法相结合,能够有效提高检测效率㊂2.3　免疫传感器法　免疫传感器是将高灵敏的传感技术(光㊁电㊁热等信号)与特异性免疫反应相结合,用以分析抗原抗体反应的一类生物传感器,其原理如图3所示㊂该方法具有特异性强㊁灵敏度高㊁操作简单及低成本等优点,其应用已涉及临床医学检验㊁食品分析㊁环境监测等领域[29⁃31]㊂González⁃Martínez 等[32]利用草甘膦兔源多克隆抗体和草甘膦辣根过氧化物酶(Horesradish peroxidase,HRP)标记物建立了一种竞争型免疫传感器,用于分析水质及土壤中草甘膦残留㊂检测时样品中的草甘膦将与HRP 标记物竞争结合抗体,然后通过加入底物引起显色反应,最终根据反应产物的荧光峰值对草甘膦残留进行间接分析,该方法的检测限可以达到0.021μg /L㊂Lee 等[33]制备了一种双探针DNA 金纳米颗粒,并将草甘膦与DNA 探针结合形成复合物,然后将草甘膦兔源多克隆抗体固定于修饰后的玻璃基板,建立夹心型免疫传感器,如图4所示,检测时复合物与待测草甘膦竞争结合抗体,洗脱金纳米颗粒后形成抗体⁃草甘膦⁃单探针DNA 复合物,然后分析260nm 处单探针DNA 的紫外吸收,从而间接测定样品中的草甘膦,该方法的检测范围为0.01~100μg /ml㊂微流控芯片具有集成化㊁微型化㊁高通量的特点,能够大大缩短分析时间㊁降低检测成本[34],将其与免疫传感相结合便形成了一种新型㊁快速㊁成本低廉的草甘膦残留免疫传感检测方法㊂程锴萍等[35]利用微流控芯片检测环境中的污染物,在此基础上建立了一种适合现场快速检测草甘膦的免疫传感器法,该方法基于竞争免疫吸附反应,如图4所示,首先将草甘膦与酶连接,形成酶结合物,检测时游离草甘膦与酶结合物竞争与抗体反应,然后与吸附在微珠表面的二抗结合,最后可以根据加入底物后的荧光反应强度来分析检测结果,该方法的检测范围为0.075~4ppb㊂图4　竞争免疫吸附反应原理图Fig.4　Schematic diagram of competitive immunoso⁃rbent reaction3摇小结及展望草甘膦既可直接残留于农作物,污染农产品,也可经雨水冲刷进入土壤㊁河流,扩大污染,进而经食物链对动物及人体产生潜在危害㊂随着人们对草甘膦残留的日益关注,草甘膦残留的检测技术研究就显得尤为重要㊂现有检测技术中,化学分析法的准确度和灵敏度较低;分光光度法虽操作简便,但易受其他离子的干扰;色谱及其联用技术灵敏度高,但操作过程繁琐,仪器昂贵且对实验人员要求较高,不适于大批量样品筛查㊂相比之下,免疫分析技术在准确性㊁特异性㊁稳定性㊁适用范围和分析容量㊁检测速度快及费用等方面都具有一定的优势,是草甘膦残留检测中最具发展前景的检测技术㊂免疫分析技术虽已广泛应用于疾病诊断和控制㊁食品安全及环境检测领域㊂但该技术对抗体质量要求非常高,抗体的免疫学特性将直接影响检测方法的灵敏度㊁特异性㊁稳定性等指标,因此免疫分析技术研究的关键就在于抗体的制备,目前所开发的草甘膦残留免疫检测方法大都利用的是多克隆抗体,而单克隆抗体的亲和力和特异性都优于多克隆抗体,所以单克隆抗体的研制将是今后草甘膦免疫分析方法研究的一个主要内容㊂另外,ELISA方法仍是草甘膦残留免疫检测的主要方法,其他免疫检测方法报道相对较少㊂草甘膦作为一种使用量极大的农药,国内外对其残留量要求日益严格,对检测方法的要求也在不断提高,因此检测方法的创新尤为必要,而诸如免疫层析㊁时间分辨免疫检测㊁荧光偏振免疫检测等已在其他农药残留检测中成熟,应用方法仍未在草甘膦残留检测中得到应用,所以快速㊁灵敏和高效的新型免疫检测方法的研究也将是今后草甘膦免疫分析技术的主要研究方向㊂参考文献:[1]　Guerrero Schimpf M,Milesi MM,Ingaramo PI,et al.Neonatalexposure to a glyphosate based herbicide alters the development of the rat uterus[J].Toxicology,2017,376:2⁃14.[2]　周垂帆,李　莹,张晓勇,等.草甘膦毒性研究进展[J].生态环境学报,2013,22(10):1737⁃1743.Zhou CF,Li Y,Zhang XY,et al.Research advance in ecotoxicity of glyphosate[J].Ecol 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酶联免疫分析技术在兽药残留检测中的应用

量越大、分子结构越复杂则免疫原性越强。兽药大多
应，生成抗体（抗原）一待测抗原（抗体）一酶标记抗体是小分子物质。属于半抗原．因此通常要与分子量较成有色产物．待测抗原（抗体）的定量与有色产物量大的载体（一般为蛋白质）偶联，形成兽药——载体蛋白结合物免疫原，即形成完全抗原。相同大小的分
测试手段相结合而建立的一种超微量的测定技术。目前已广泛应用于临床医学、兽医学、生物学等领域。ＥＬＩＳＡ检测技术具有操作简单、前处理简化、检测快速、准确、敏感、成本低、容量大，并可同时进行
大批量样品检测等优点．这种学科交叉技术正逐渐成为兽药残留检测的一个热点
０ｃｔｏｂｅｒ２０１３
酶联免疫分析技术在兽药残留检测中的应用
张泽英
（武汉生物工程学院食品工程系，武汉４３０４１５）
摘要：介绍了酶联免疫吸附分析方法的原理、类型以及在兽药残留检测中的关键技术环节和国内外应用现状，讨论了酶联免疫吸附分析技术应用于兽药残留检测所存在的问题和发展前景。
湖北畜牧兽医
要环节理想的免疫半抗原一方面应尽量具备与待测物有类似的化学特征．另一方面与载体连接后应尽量保证该特征结构最大程度地被免疫活性细胞识
隔臂 ” ），目前大多数学者认为．较适宜的间隔臂长度为４－６个碳链长度（０．５～０．８ｎｍ）．能较好的突出与

农药残留的酶联免疫检测技术研究进展

交叉污染，而且应尽量保证半抗原与载体的大分子复合物的特征结构能最大限度地被免疫活性细胞所识别。要达到这一点，必须做到活性基团与载体之间具备一定长度的间隔臂，般为４一～６个碳链长度，
也称半抗原。ＬＳ法是在荧光免疫和放射免疫分ＥＩＡ析的基础上发展起来的，将具高度特异性抗原抗它体反应结合酶对底物的高度催化效应，对受检样品中的酶标免疫反应的试验结果，用现代光学分析采仪器进行光度测定。在ＥＳ检测过程中，ＩＡＩ酶催化具有高度的放大作用，多种酶分子每分钟能催化许
ＥＩＡ的核心技术是抗原抗体的特异性反应。ＬＳ抗原有两个特性，即免疫原性和反应原性。具有免既疫原性又具有反应原性的抗原称为完全抗原，只而
具有反应原性没有免疫原性的抗原称不完全抗原，
共价结合到载体上的一个活性基团（氨基、基、如羧
气相色谱法（ＧＣ）高效液相色谱法（Ｌ后，、ＨＰＣ）已
有越来越多的农药残留采用ＥＩＡ进行分析，种ＬＳ这学科交叉技术应用于农药残留分析将成为世界各国的学术研究和开发研究的新热点］。
１０，０００而一般农药的分子量小于１００不具备刺０，激机体产生针对农药抗原决定簇的特异性抗体，因

草甘膦残留的酶联免疫分析方法的建立

草甘膦残留的酶联免疫分析方法的建立摘要：通过碳化二亚胺法将草甘膦（Ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅ，ＧＬＹ）分别与卵清蛋白（ＯＶＡ）和牛血清白蛋白（ＢＳＡ）偶联制备免疫原和包被原。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ）检测表明，草甘膦与牛血清白蛋白和卵清蛋白的偶联比分别为１１∶１和９∶１。

合成的免疫原作用新西兰大白兔制备出草甘膦多克隆抗体，ＥＬＩＳＡ检测抗体溶液效价为１∶１×１０７，该抗体不与草甘膦的结构类似物增甘膦和双甘膦起交叉反应。

以此抗体建立了草甘膦间接竞争ＥＬＩＳＡ检测方法（ｃｉＥＬＩＳＡ），其线性范围为０．７８～１００μｇ/ｍＬ，线性回归方程为ｙ＝１５．８５１０ｌｎｘ＋７．７８０５，Ｒ２＝０．９９３８。

草甘膦的检测限为ＩＣ１０＝１．１５μｇ／ｍＬ，ＩＣ５０＝１４．３５μｇ／ｍＬ。

在添加回收试验中，草甘膦添加值５和１０μｇ／ｇ时，玉米粉中的草甘膦回收率为１０４．１２％和８１．３７％，小麦粉中的回收率则分别为１１８．９４％和为１０９．３９％。

结果表明，采用所制备的多克隆抗体而建立的草甘膦ｃｉＥＬＩＳＡ方法可有效地应用于玉米粉和小麦粉中草甘膦的残留检测。

关键词：草甘膦（Ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅ，ＧＬＹ）；多克隆抗体；间接竞争酶联免疫吸附法Establishment ｏf ｔｈｅＥｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄＩｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔAssay for ＧｌｙｐｈｏｓａｔｅＲｅｓｉｄｕｅｓＡｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｄｉｉｍｉｎｅｃａｒｂｏｎｉｚａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｉｍｍｕｎｏｇｅｎａｎｄｃｏａｔｉｎｇａｎｔｉｇｅｎｂｙｇｌｙｐｈｏｓａｔｅｂｅｉｎｇｃｏｎｊｕｇａｔｅｄｔｏｏｖａｌｂｕｍｉｎ（ＯＶＡ）ａｎｄｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎ（ＢＳＡ），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈｅｒａｔｉｏｓｏｆｈａｐｔｅｎｔｏＢＳＡａｎｄＯＶＡｗｅｒｅ１１∶１ａｎｄ９∶１ｂｙｍａｔｒｉｘ－ａｓｓｉｓｔｅｄｌａｓｅｒｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ-ｔｉｍｅｏｆｆｌｉｇｈｔｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ）．ＴｈｅｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｇａｉｎｓｔｇｌｙｐｈｏｓａｔｅｗｅｒｅｐｒｏｄｕｃｅｄｔｈｒｏｕｇｈｉｍｍｕｎｉｚｉｎｇＮｅｗＺｅａｌａｎｄｗｈｉｔｅｒａｂｂｉｔｓｗｉｔｈｔｈｅｉｍｍｕｎｏｇｅｎ．Ｔｈｅｔｉｔｅｒｏｆａｎｔｉｂｏｄｙａｇａｉｎｓｔｇｌｙｐｈｏｓａｔｅｗａｓ１∶１×１０７ｂｙｔｈｅｔｅｓｔｏｆｔｈｅｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）．Ｔｈｅｇｌｙｐｈｏｓａｔｅｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｄｉｄｎｏｔｃｒｏｓｓ－ｒｅａｃｔｗｉｔｈｇｌｙｐｈｏｓｉｎｅａｎｄＮ－（Ｐｈｏｓｐｈｏｎｏｍｅｔｈｙｌ）ｉｍｉｎｏｄｉａｃｅｔｉｃ．ＡｎｉｎｄｉｒｅｃｔｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅＥＬＩＳＡ（ｃｉＥＬＩＳＡ）ｗａｓｄｅｖｅｌｏｐｅｄｆｏｒｇｌｙｐｈｏｓａｔｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｗｈｉｃｈｈａｓａｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔ（ＩＣ１０）ｏｆ１．１５μｇ／ｍＬａｎｄａｌｉｎｅａｒｗｏｒｋｉｎｇｒａｎｇｅｏｆ０．７８～１００μｇ／ｍＬｗｉｔｈａｎＩＣ５０ｖａｌｕｅｏｆ１４．３５μｇ/ｍＬ．Ｔｈｅｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎｅｑｕａｔｉｏｎｗａｓｙ＝１５．８５１０ｌｎｘ＋７．７８０５，Ｒ２ｗａｓ０．９９３８．Ｗｈｅｎ５ａｎｄ１０μｇ／ｇｇｌｙｐｈｏｓａｔｅｗａｓａｄｄｅｄｉｎｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｙｅｘｅｐｅｒｉｍｅｎｔｓ，ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓｏｆｇｌｙｐｈｏｓａｔｅｗｅｒｅ１０４．１２％ａｎｄ８１．３７％ｉｎｃｏｒｎｍｅａｌｓａｍｐｌｅｓ，ｗｈｉｌｅ１１８．９４％ａｎｄ１０９．３９％ｉｎｗｈｅａｔｆｌｏｕｒｂｌａｎｋｓａｍｐｌｅｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｒｅｓｕｌｔｓｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｔｈｅｃｉＥＬＩＳＡｏｎｔｈｅｂａｓｉｓｏｆｔｈｅｐｒｅｐａｒｅｄａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｇａｉｎｓｔｇｌｙｐｈｏｓａｔｅｗａｓａｂｌｅｔｏｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｄｅｔｅｃｔｔｈｅｇｌｙｐｈｏｓａｔｅｒｅｓｉｄｕｅｓｉｎｃｏｒｎｍｅａｌａｎｄｗｈｅａｔｆｌｏｕｒｓａｍｐｌｅｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅ；ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ；ｉｎｄｉｒｅｃｔｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ草甘膦（Ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅ，ＧＬＹ）化学名为Ｎ－（膦酸甲基）甘氨酸，是一种非选择性广谱除草剂，是当前世界上应用最广、生产量最大的除草剂，也是目前我国使用量最大的除草剂［１］。

酶联免疫吸附分析技术在食品农药残留检测中的应用探究

分析与检测在检测技术中，酶联免疫吸附技术（简称ELISA），是较为先进的，这一检测方法的核心是免疫酶。

在早期，该技术主要使用在病毒以及细菌的检测中。

自二十世纪七十年代起，该技术又被应用在抗原以及抗体的检测中。

现在，自动化免疫技术日渐成熟，这也提升了ELISA的精准性，极大地弥补了设备检测、化学检测等方法的不足，因此，该技术被充分应用在食品检测中。

1　ELISA概述目前，ELISA已被广泛使用在检测领域，例如，重金属检测领域、病原微生物检测领域、生物毒素检测领域等，它的作用原理就是：先让固相载体与带有特意酶标记的免疫活性抗原（抗体）结合，然后使其与样品中的待测抗体（抗原）发生特异性反应，再添入酶反应底物，即可生成有色产物，通过检测颜色变化，达到检测的目的。

针对于没有免疫活性或者具有较低分子量的物质而言，要先将该物质与蛋白质结合，然后再使用ELISA检测。

按照反应途径，可以把ELISA分为三种：第一种是间接法，第二种是竞争性抑制法，第三种是双抗体夹心法，上述技术，都有自己的缺点和优势，要结合检测的具体用途以及检测对象来做好检测技术的科学选用。

该技术在食品检测领域的应用扩大了检测的范围，大大提升了检测效率，提高了检测的灵敏度，同时也降低了检测费用。

在目前的食品检测技术中，ELISA 成为首选技术。

2　ELISA在食品农药残留检测中的应用2.1　在拟除虫菊酯类农药残留中的检测应用这种杀虫剂结构与天然除虫菊素相似，当下，也有着非常高的使用量。

此类杀虫剂有着很强的神经毒性，如果长期食用用含有此类农药残留的食物，可能会出现慢性中毒，其对人体有着十分严重的潜在威胁。

可应用碳二亚胺法偶联半抗原等，生成免疫原，如此，即可建立针对联苯菊酯农药残留的酶联免疫检测方法，在各项条件都相对适宜的条件下，此类农药的检出限可降低到0.016 mg/L左右，并且，和其他菊酯农药之间也不会发生任何交叉反应。

学者余向阳等人采用兔抗拟除虫菊酯类农药抗体作为研究对象，并利用辣根过氧化物酶对其进行标记，研究出来了能够同时检测出蔬菜中多种此类农药的直接竞争ELISA，并在某市市场中，随机抽取了107个样本组织了检测，同时还将这一方法和气相色谱法进行了对比，得出的结论是：此法的阳性检出率高达8.46%，而后者阳性检出率为3.74%[1]。

酶联免疫分析方法在有机磷农药残留检测中的应用研究进展

酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫原性又保留酶的活性。在测定时，把待测的
收稿日期：０１－５—２修回日期：０１— ９—１２１０５：２１０３
基金项目：贵州省农业科技攻关项目（黔科合ＮＹ字［ｏ８３５）中药现代化科技产业研究开发专项［２ｏ］０３；黔科合中药字（００５１２１）Ｏ７号］
山地农业生物学报
３（）５７～５，００６：４５３２１１
ＪｕｎｌｏＭｏｎａｎｏｒａｆｕｔｉＡｇｉｕｔｒａｄＢｏｏｙｒｌｅｎｉｌｇｃｕ
文献综述・
・
酶联免疫分析方法在有机磷农药残留检测中的应用研究进展术
１酶联免疫分析方法（ＬＳ的基本原理及类型ＥＩＡ）
ＥＩＬＳＡ是将抗原、抗体的免疫反应和酶的高效催化反应有机结合而发展起来的一种综合性技术。其
原理是将一部分抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性，使另一部分抗原或抗体与某种
有机磷农药具有广谱、高效、用量小以及作用方式多、使用方便、半衰期短等优点，广泛应用于农业、工业、医药等领域。然而这类农药长期施用，会发生残留，不仅对土壤、食品、水、大气、生态环境造成极其严重的污染和影响，还严重威胁人类的健康和生存。随着我国与国际社会的接轨，产品的贸易壁垒被打农破，农药残留成了制约我国农产品发展的重要因素。因此，了加大绿色农药的开发研制外，除更要建立快速、简便、准确的农药残留检测方法，这对于保护生态环境、障人类健康具有重大意义。目前，保应用于检

酶联免疫法在农药残留分析中的应用PPT课件

酶联免疫法的发展趋势
自动化与智能化
随着技术的进步，酶联免疫分析将逐渐实现自动化和智能化，提高检测效率。
高灵敏度与高特异性
通过改进抗体质量和优化实验条件，提高酶联免疫法的灵敏度和特异性。
多残留检测
发展多残留检测技术，实现对多种农药残留的同时检测。
酶联免疫法在农药残留分析中的未来发展方向
现场快速检测
开发便携式酶联免疫分析设备，满足现场快速检测的需求。
生物传感器技术结合
将酶联免疫法与生物传感器技术结合，提高检测的实时性和灵敏度。
生物信息学应用
利用生物信息学技术对酶联免疫数据进行处理和分析，挖掘更多有价值的信息。
提高酶联免疫法的灵敏度和特异性的方法
优化抗体质量
01
筛选高亲和力和高特异性的抗体，提高检测的灵敏度和特异性。
敏度较高。
特异性好
酶联免疫法利用抗体与抗原的特异性结合，能够准确地检测出目标农
药残留。
操作简便
酶联免疫法的操作相对简单，所需设备较少，
适合现场快速检测。
成本较低
酶联免疫法的试剂成本相对较低，检测成本较
低。
酶联免疫法在农药残留检测中的局限性
交叉反应
酶联免疫法可能会与其他结构类似的农药产生交叉反应，影响检测结果的准确性。
慢性危害
长期摄入低剂量的农药残留可能对人体的多个系统产生慢性危害，如神经系统损伤、免疫系统异常、生殖系统毒性等。
致癌风险
部分农药残留被认为具有致癌性，长期接触可能增加患癌症的风险。
农药残留对环境的危害
01
02
03
生态破坏
农药残留进入土壤和水体后，可能对土壤生物和水生生物造成毒害，破坏生态平衡。

农药残留的酶联免疫分析检测技术研究

农药残留的酶联免疫分析检测技术研究作者：张鹏来源：《农业与技术》2017年第24期摘要：酶联免疫分析检测技术具有灵敏度高，特异性强以及操作简单等优势，因此，在对农药残留进行检测的过程中，酶联免疫分析检测技术的应用十分广泛。

本文将对酶联免疫分析检测技术在农药残留检测中应用的具体内容进行深入的分析探究。

关键词：农药残留；酶联免疫分析检测技术；应用中图分类号：F767.2 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20171233044前言酶联免疫分析检测技术是将免疫技术和现代化测试技术进行融合后产生的新型技术形式，因其较高的灵敏性以及操作性，在许多领域都得到了有效的应用。

从20世纪90年代开始，酶联免疫分析检测技术在农药残留检测中得到应用，逐渐成为农业残留检测中不可缺少的技术类型之一。

酶联免疫分析检测技术涉及到了多个学科知识的综合应用，农药残留检测技术的发展创新提供了更加广阔的思路。

1 酶联免疫分析检测技术的内涵分析酶联免疫分析检测技术本质上是免疫技术和现代化检测技术的综合应用，因此其原理基本上就是免疫技术的原理，即抗原和抗体的特异性反应。

抗原的特性可以分为免疫原性以及反应原性两种类型，同时拥有上述两种特性的抗原被称作完全抗原，仅仅拥有反应原性的抗原则被称作不完全抗原。

而通过对抗原和特异性反应这一原理的应用，人们在免疫分析检测的基础上融合了更加现代化的检测技术之后，研发出了酶联免疫分析检测技术，相对于前者，酶联免疫分析检测技术的检测结果具备较高的精确度。

在酶联免疫分析检测技术应用于农药残留检测时，在开始检测之前，必须做好相应的准备工作。

准备好检测使用的抗原。

需要注意的是，该技术使用的是不完全抗原。

农药残留的分子量要远远小于免疫原性物质拥有的分子量，因此，残留的农药根本不足以使机体生成针对农药的抗体。

在这样的情况下，必须将残留的农药和大分子载体进行偶联，使其产生免疫原性。

对于抗原，必须结合农药的类型有针对性的进行准备；人工合成免疫抗原。

酶联免疫法在农药残留检测中的应用

酶联免疫法在农药残留检测中的应用作者：刘凤昝苏海涛贾军燕魏峰来源：《农业工程技术·农产品加工》2013年第06期摘要：酶联免疫法（ELISA）是以酶标记抗体或抗原为主要试剂的一种标记免疫分析技术，其结合了抗原抗体反应的高度特异性和酶的高效催化作用，具有灵敏度高、特异性强、准确性好、检测成本低、迅速等优点，该方法近年来被广泛应用于食品安全中农药残留的检测。

关键词：酶联免疫法食品安全农药残留检测应用古语有云：“民以食为天”，随着人们生活水平的提高和经济的发展，人们不只是关注食品的口味和营养，而对食品的品质与安全更加重视。

如何快速、有效检测食品中的污染物残留，确保食品的安全性成为食品行业面临的重要课题。

酶联免疫吸附技术（ELISA）是在免疫荧光和放射免疫分析技术基础上形成的一种免疫分析方法。

目前用于食品安全检测的方法有很多，如气相色谱、高效液相色谱、薄层色谱和质谱等。

这些方法准确，但速度慢，且设备昂贵，检测费用高，难以推广使用。

而酶联免疫分析法不仅特异性高、灵敏度高、干扰小、简单迅速、安全性高、不需要昂贵仪器设备，特别适合于对大量样本的筛检工作，能广泛用于多个领域[1]。

1 酶联免疫法概述ELISA是1971年Engvell[2]等人建立在免疫酶基础上的一种新型免疫测定技术，该技术的建立被认为是血清学实验的一场革命，是令人瞩目的有发展前途的一种新技术。

20世纪90年代末期，ELISA技术不断发展以及全自动酶标分析仪的应用，使其特异性与灵敏度有很大提高，在食品检测领域中的应用大大扩展。

ELISA的基本原理将抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。

抗原或抗体再与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。

在测定时，把受检标本（测定的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体反应。

用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。

免疫分析法在除草剂残留分析中的应用

杂，留问题一直亟待监督控制。目，气相色谱残前（Ｃ和高效液相色谱（ＰＣ及其连用技术仍然是Ｇ）ＨＬ）
大分子载体偶联后才具有免疫原性，即成为抗原。常用的载体蛋白有牛血清白蛋白（Ｓ、牛血清丙ＢＡ）种球蛋白（Ｇ）ＢＧ、卵清蛋白（Ａ）Ｏ、鸡丙种球蛋白
维普资讯
东
北
农
业
大学
学
报
第３卷７
２２１多克隆抗体的加工．．
建立。用荧光素对抗原或抗体进行标记，然后用荧
光显微镜观察所标记的荧光以分析示踪相应的抗原
免疫动物多选择４６个月龄性健康新西兰兔。 — 先进行基础免疫，初次免疫需加入等量弗氏完全佐剂，采取皮内、皮下多点注射为主。间隔一定时间后进行多次的增强免疫，免疫剂量逐渐加大［３１。选择
氨酸（Ｌ）ＰＬ等。要实现与大分子物质的偶联，半抗原分子上必须具备能共价结合到载体上的一个活性基团（如氨基、羧基、羟基和巯基等），经常采用的偶
联反应有重氮化法、碳二亚胺法、混合酸酐法、戊
１基本原理及理论依据
免疫分析法（ｍｕｏｓａ，Ａ是将化学合成、ｉｎａｓｙＩ）ｍ
除草剂残留分析的主要手段。但是，气相和液相色
谱法仪器昂贵、提取纯化费时，还需要专业人员操作，给技术普及带来难度。除草剂化合物免疫化学分析技术具有特异、灵敏、准确、廉价等特点，因
此，具有广泛的发展前景。
（Ｇ）ＣＧ、钥孑嘁血蓝蛋白（Ｌ及人工合成多聚赖ＬＫＨ）

检测草甘膦残留的免疫层析试纸及其制备方法和应用[发明专利]

专利名称：检测草甘膦残留的免疫层析试纸及其制备方法和应用
专利类型：发明专利
发明人：王耀,裴亚峰,陈秀金,任国艳,樊振江,李兆周,高红丽,李道敏,曹力,李燕虹,曹金博,金东亮
申请号：CN201710877684.7
申请日：20170925
公开号：CN107478819A
公开日：
20171215
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种检测草甘膦残留的免疫层析试纸及其制备方法和应用，涉及草甘膦检测技术领域，本发明提供的检测草甘膦残留的免疫层析试纸，包括设有草甘膦特异性抗体的结合垫及设有检测印迹和对照印迹的印迹膜。

本发明提供的检测草甘膦残留的免疫层析试纸是以竞争性酶联免疫原理为基础，在获得草甘膦特异性抗体的基础上，利用酶联免疫反应的高效放大作用实现草甘膦的高灵敏检测，能够检测1μg/mL以下浓度的草甘膦。

本发明的免疫层析试纸操作简便、灵敏特异、结果准确直观，适用于水质、食品等多种样品中草甘膦残留的快速筛查，易于推广应用。

申请人：河南科技大学
地址：471000 河南省洛阳市洛龙区开元大道263号
国籍：CN
代理机构：北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：齐云
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一种检测多种有机磷农药残留的酶联免疫层析方法及试剂盒[发明专利]

专利名称：一种检测多种有机磷农药残留的酶联免疫层析方法及试剂盒
专利类型：发明专利
发明人：王金爱
申请号：CN201110453805.8
申请日：20111229
公开号：CN102539753A
公开日：
20120704
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种检测植物性农产品生产中药物残留的酶联免疫层析方法及试剂盒，特别涉及检测植物性农产品生产中有机磷农药残留的酶联免疫层析方法及试剂盒。

本发明检测有机磷农药残留的酶联免疫层析方法是利用酶的高敏感特性，采用免疫层析进行检测；与传统的酶联免疫吸附法(ELISA)检测有机磷农药相比，具有操作简便，无需专用仪器设备，结果直观的优点；而与胶体金免疫层析方法相比，本发明具有灵敏度高、特异性强、结合读数仪可准确定量等优点。

申请人：深圳康美生物科技股份有限公司
地址：518057 广东省深圳市南山区科丰路二号通讯工业大厦二楼东侧一号
国籍：CN
代理机构：深圳市深佳知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：唐华明
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食品中草甘膦残留物的检测与控制技术研究

食品中草甘膦残留物的检测与控制技术研究食品是人们日常生活中不可或缺的一部分，而遭受食品污染的问题也越来越引起人们的关注。

草甘膦是一种广泛使用的除草剂，然而其在食品中的残留物成为一个不容忽视的问题。

本文将探讨草甘膦残留物的检测与控制技术研究，以期提供更安全、可靠的食品供给。

首先，我们需要了解什么是草甘膦。

草甘膦是一种非选择性除草剂，主要通过杀死一些常见的杂草来帮助植物的生长。

然而，随着草甘膦使用的普及，越来越多的食品中出现了草甘膦的残留物。

对于草甘膦残留物的检测，目前常用的方法是液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）。

这种方法具有高灵敏度、高准确度和高特异性的优点，可以检测食品样品中极低浓度的草甘膦残留物。

利用该检测方法，可以对大量食品样品进行快速、准确的检测，为食品安全提供可靠的数据支持。

除了传统的检测方法，近年来还出现了一些新兴的检测技术。

例如，基于表面增强拉曼散射光谱的检测方法能够实现非破坏性、快速检测草甘膦残留物。

该方法通过将食品样品与表面增强剂结合，增强了草甘膦的信号，从而实现了对残留物的检测。

这种方法具有检测快速、灵敏度高等优点，有望在食品检测领域得到广泛应用。

除了检测技术的研究，对于草甘膦残留物的控制也是至关重要的。

目前，控制草甘膦残留物的主要方法包括限制使用、加强管理和推广替代品等。

首先，应该严格限制草甘膦的使用，通过严格把关生产和销售环节，减少草甘膦进入食品链的机会。

其次，加强对农民的管理培训，提高农民的科学使用水平，减少草甘膦的使用量。

此外，还应该推广替代品，寻找更安全、环保的除草剂，减少草甘膦的使用。

除了控制草甘膦残留物的技术研究外，食品安全监管部门的加强也至关重要。

政府监管部门应制定更严格的草甘膦残留限量标准，并对市场上的食品进行定期抽检。

同时，加强对食品企业的检查和处罚力度，对于违规生产、销售含有草甘膦残留物食品的企业，需要追究其责任，确保食品安全。

综上所述，食品中草甘膦残留物的检测与控制技术研究是目前食品安全领域中的一个重要课题。

酶联免疫法在农产品质量安全检测中的应用研究进展

酶联免疫法在农产品质量安全检测中的应用研究进展酶联免疫法（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种广泛应用于农产品质量安全检测中的生物技术方法。

它通过利用抗原与特异性抗体的结合来检测目标物质的存在和浓度。

酶联免疫法在农产品质量安全领域的应用研究一直处于不断发展的状态，下面将对其在不同农产品中的应用进展进行简要综述。

在农产品的有害微生物检测中，酶联免疫法是一种简便、快速、敏感和特异性较高的方法。

鲜活水果和蔬菜中常常会存在大肠杆菌和沙门氏菌等致病微生物的污染，这些微生物会引起食物中毒，威胁消费者的健康。

研究者通过制备适当的抗体，可以将酶联免疫法用于检测这些致病菌的存在和浓度。

通过 ELISA 可以在短时间内迅速筛测出微生物污染，并为农产品的质量安全提供及时保障。

在农产品的农药残留检测中，酶联免疫法也发挥了重要作用。

农药的过量使用或残留会对农产品和环境造成不良影响，对农产品中农药残留的监测和控制成为质量安全的重要环节。

酶联免疫法通过制备特异性抗体，可以快速、精确地检测农产品中的农药残留。

研究者利用酶标抗体的高特异性和敏感性，可以实现对不同种类农药残留的同时检测，极大地提高了检测效率。

在农产品的转基因成分检测中，酶联免疫法也有很高的应用潜力。

转基因农产品是通过基因工程技术将外源基因导入到作物中，以改善其特性或产量。

转基因农产品引起了广泛的争议，需要对其安全性进行严格的监管和检测。

酶联免疫法可以通过特异性的抗体对目标转基因成分进行筛查和定量分析，能够准确地检测转基因农产品的各种成分，以及评估其对人体健康和环境的潜在影响。

酶联免疫法在农产品质量安全检测中的应用研究进展丰富多样。

不仅可以应用于有害微生物、农药残留和转基因成分等的检测，还可以结合其他技术方法进一步提高检测的灵敏性和准确性。

随着科学技术的不断发展，酶联免疫法在农产品质量安全领域的应用前景将更加广阔。

酶联免疫法在农药残留分析中的应用

1 将酶标仪后部的电源开关打开，仪器将显示自检。等候分钟预热 2 将打印机开关打开，打印机自检，放置打印纸。 3 检测 3.1 选择程序模式时，先按转换键，确定程序模式后，再按输入键，进入自检并完成。 3.2 选择测量模式：通过测量模式键来选择，可通过↑↓键查看测量模式目录，确定测量模式按输入键确认。 3.3 选择测量参数：通过测量参数键或输入键来选择，也可通过↑↓键和数字键输入新参数。 3.4 选择计算模式：用计算模式键设定。可用↑↓键查看计算模式。 3.5 选择计算参数：用计算参数或输入键设定计算参数。
应用

ELISA进行农药残留检测所需设备简单或不需要设备，液体设备不需前处理，可直接检测；固体食品经抽提剂抽提，浓缩，并溶于水溶液中即可。如，用96孔微量酶标板法可同时完成44 批次的样品检测，检验成本低，非常适合现场检测

酶联免疫吸附剂测定法，简称酶联免疫法，它的中心就是让抗体与酶复合物结合然后通过显色来检测
原理

将特定的抗原-抗体免疫学反应和酶学催化反应相结合，以酶促反应的放大作用来显示初级免疫反应。 ELISA通过在合适的载体上，酶标限定量抗原与未知抗原竞争结合位点，形成抗体复合物，复合物上酶催化底物，生成有色物质，由于酶分解底物与显色成正比，即可用分光光度计定性或定量测定
elisa通过在合适的载体上酶标限定量抗原与未知抗原竞争结合位点形成抗体复合物复合物上酶催化底物生成有色物质由于酶分解底物与显色成正比即可用分光光度计定性或定量测定优点该方法不像传统质谱或色谱那样需要昂贵的设备复杂的方法操作简单前处理简化检测快速可同时进行大批量样品检测
农药残留分析方法

酶联免疫吸附技术在食品农药残留检测

1 ELISA测定原理
抗原抗体的特异免疫反应
可借助吸光度值计算抗原(抗体) 的量在上述反应中,酶促反应只进行一次,而抗原-抗体的免疫反应可进行一次或多次。
待测抗原 (抗体)的定量与有色产物量成正比
材料与方法
仪器与材料 37°C恒温箱、酶标板、酶联免疫试剂盒8、100µl加样器、塑料吸头；酶标抗原、待测抗原、特异抗体、稀释液、阳性对照液、底物。
ELISA检测（竞争法测抗原）
结果预测
空白
阳性
待测
显色
—
+
+
注：“+”无色或极浅；“—”深色。
讨论
样品中的抗原和酶标抗原可竞争与固相抗体结合,待测样品中抗原含量越高,则与固相抗体结合的越多,使得酶标抗原与固相抗体结合的机会就越少,甚至没有机会结合,这样加入底物后就不显色或显色很浅为阳性,显色深者为阴性[8]。 ELISA与其他技术相比,具有灵敏度高,特异性强,仪器设备要求不高,测定成本低, 方法快速、简便,试剂保存时间较长,自动化程度高,无放射性同位素污染等优势; 但同时也存在局限性,比如不能同时分析多种成分,对试剂的选择性高,对结构类似的化合物有一定程度的交叉反应。所以未来的发展趋势就在于开发高度免疫原性的重组抗原,研究多项标记快速测定方法,将酶体外定向进化应用到检测中以及研发种类更多的全自动酶联免疫测定仪这样将扩大检测的范围,提高检测的稳定性,加强标准化, 同时也促进了商品化的应用。同时，提高食品农药残留的检测技术也有助于维持社会的稳定和提升我国在世界个国家中的信誉。
【引用文献】梅平，惠小敏，王雄.农药残留检测中酶联免疫吸附技术的研究进展.长江大学学报.2007,4(1):37-41. 朱正美,刘辉.简明免疫学技术[M].北京,科学出版社.2002. 【3】李玉珍，林亲录，肖怀秋.酶联免疫吸附技术及其在食品安全检测中的应用研究进展.中国食品添加剂.2006,3:108-112. 【4】徐勤惠,荣泰康.苯甲托品人工抗原的制备及结合比的测定.中国免疫学杂志.1991,7(5)：309-311. 【5】MARIAPILARMARCO,SHIRLEY J GEE,HONGMCHENG,et al.Development of an

酶联免疫法在农产品质量安全检测中的应用研究进展

酶联免疫法在农产品质量安全检测中的应用研究进展
酶联免疫法是一种常用的生物化学分析方法，广泛应用于农产品质量安全检测中。

本文将介绍酶联免疫法在农产品质量安全检测中的应用研究进展。

一、酶联免疫法原理和基本方法
酶联免疫法是一种基于免疫学原理的生物化学分析方法，其原理基于特异性抗原抗体相互作用。

它结合了酶的高灵敏性和抗体的高特异性，可用于检测和定量目标物质。

酶联免疫法主要分为间接法、直接法和竞争法。

二、酶联免疫法在农产品中毒素检测中的应用
农产品中存在的毒素对人体健康有潜在的危害，因此及时准确地检测农产品中毒素水平具有重要意义。

酶联免疫法在农产品中毒素检测中具有高灵敏度、高特异性、快速和简单等优点。

三、酶联免疫法在农产品残留农药检测中的应用
农药残留是目前农产品质量安全检测中的重要问题之一。

酶联免疫法可用于检测和定量不同农作物中的农药残留水平，具有灵敏度高、专属性强、操作简单等特点。

四、酶联免疫法在农产品品种鉴定中的应用
农产品品种鉴定对于产品质量的评估以及市场准入的判定具有重要意义。

酶联免疫法可用于鉴定农产品的品种，并可以通过测定特定抗原或特定抗体的表达来实现品种鉴定。

七、酶联免疫法在农产品质量全程监控中的应用
农产品质量的全程监控对于保障产品质量安全具有重要意义。

酶联免疫法可以使用多种抗原或抗体对农产品进行全程监控，从原料采购、加工生产到成品检验，确保产品质量符合标准要求。