第五章中药制剂的卫生学检查

二、微生物限度检验原则
（一）环境 1．洁净度1万级以下局部100级的单向流空气区域内进行 ； 2．检验过程严格无菌操作； 3．严防第二次污染。
课堂互动 中国药品生产洁净级别有哪些？其标准要求是什么？
（二）供试品抽样、保存及检验量 按批号随机抽样，抽样量为检验用量的3倍。每批抽样应至 少含有2个以上最小包装单位。 检验量系指每次检验所需的供试品量(g、ml或cm2)。 固体和半固体制剂的检验量为10g；液体制剂10ml； 膜剂为100cm2 (不得少于4片)。
贴膏剂供试品
其制备方法按药典规定操作。
4.具抑菌活性供试品：采用培养基稀释法、离心沉淀集菌法、 薄膜过滤法、中和法等消除其抑菌活性。 注意：供试液制备若需加温时，应均匀加热，温度不超过 45℃，时间不得超过30分钟。 （四）检验条件 培养温度：细菌及控制菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母 菌培养温度为23～28℃。 阴性对照：以确定无菌技术的可靠性 阳性对照：检查供试品对控制菌生长有无干扰，培养条件是 否适宜
菌液保存 制备好的菌液以当天使用为宜。若在室温下放置，应在2小 时内使用；若保存在 2～8℃，可在24小时内使用。黑曲霉 孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。
3.适用性检查
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各50～100cfu， 分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌 平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48小时，计数； 取白色念珠菌、黑曲霉各50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立 即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混 匀，凝固，置23～28℃培养72小时，计数； 取白色念珠菌50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注酵母 浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，平行制备2个平皿，混匀，凝固， 置23～28℃培养72小时，计数。 用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
（一）计数培养基的适用性检查
1.菌种（5种） 传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻 干燥菌种为第0代） 大肠埃希菌（Escherchia coli） 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus） 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 白色念珠菌(Candida albicans) 黑曲霉(Aspergillus niger)
贵重药品、微量包装药品的检验量可酌减。要求检查沙门菌 的供试品，其检验量应增加20g或20ml
（三）供试液制备
采用规定的适宜方法制备 1．液体供试品： 供试品10ml+pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 定容至100ml 混匀 1:10供试液 油剂可加入适量无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀； 水溶性液体制剂可用混合的供试品原液作为供试液。
2．固体供试品： 供试品10g+pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 定容至100ml 混匀 匀浆仪或其他适宜方法 1: 温，使供试品分散均匀。
3．需用特殊方法制备的供试品
非水溶性供试品 膜剂供试品 肠溶或结肠溶制剂供试品 气雾剂、喷雾剂供试品
2.验证方法 (1)试验组：1ml最低稀释级供试液+50～100cfu试验菌 (2)菌液组：测定所加的试验菌数
(3)供试品对照组：规定量的供试液
(4)稀释剂对照组：稀释液+试验菌（加入了入乳化剂、分 散剂及中和剂等除稀释液外的试剂或需薄膜过滤处理时）
3.结果判断 在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌数回收率应 均不低于70%。 若试验组的菌数回收率均不低于70%，则计数方法可靠； 若任一次试验中试验组的菌数回收率低于70%，则应消除 供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证
4.结果判断 同时满足以下两个条件可判定培养基的适用性检查符合规 定：
①
②菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。
（二）计数方法的验证 1.菌种与菌液的制备 2. 验证方法 同培养基的适用性检查。
验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算 各试验菌每次试验的回收率；
可与供试品的细菌，霉菌及酵母菌计数同时进行。
《中国药典》规定：
1.各种非规定灭菌制剂应进行微生物限度检查法； 2.无菌制剂应依法进行无菌检查； 3.静脉滴注用注射剂应进行无菌、热原及细菌内毒 素检查
一、基本知识
（一）基本概念 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、 辅料受微生物污染程度的方法。 非规定灭菌制剂主要指口服制剂、一般外用制剂。 （二）检查项目 1．染菌量（细菌数、霉菌数及酵母菌数） 2．控制菌检查 （包括大肠埃希菌、大肠菌群、沙门 菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌以及白色念 珠菌等）
上述培养基用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为 50～100cfu（“Colony forming units”的缩写，菌落形成单 位，代表含有的菌落数）的菌悬液。
2.菌液制备 接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中， 培养5～7天，加入3～5ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌 氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后吸出孢子悬液至无菌试管 中，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～ 100cfu的孢子悬液。
（一）计数培养基的适用性检查 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 营养琼脂培养基
白色念珠菌
黑曲霉 白色念珠菌
玫瑰红营养琼脂
酵母浸出粉葡萄糖琼脂
2. 菌液制备
接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌的新 鲜培养物至营养肉汤或营养琼脂培养基中，培养18～24 小时； 接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良 马丁琼脂培养基中，培养24～48小时。
三、细菌、霉菌及酵母菌计数
（一）计数培养基的适用性检查
（二）计数方法的验证
（三）检查方法 （四）注意事项
（一）计数培养基的适用性检查
基本知识 计数用培养基：营养琼脂、玫瑰红营养琼脂和酵母浸出 粉葡萄糖琼脂 对照培养基：系指培养基处方特别制备、质量优良的培 养基，由中国药品生物制品鉴定所研制及分发。 检查方法：通过检验用培养基与对照培养基的比较，以 阳性菌的生长状态或特征来评价检验用培养基是否符合 检验要求。