试论贴壁细胞悬浮培养的特点及其体系的建立
贴壁细胞和悬浮细胞传代方法上有什么不同培训
贴壁细胞和悬浮细胞传代方法上有什么不同培训
首先，在细胞生长形态上，贴壁细胞通常呈现典型的单层或多层附着
细胞的形态，细胞扩张生长速度较慢，细胞形态变化较小。
而悬浮细胞则
以单个细胞或细胞集合体的形式存在于液体培养基中，生长速度较快，细
胞形态较为多样化。
其次，在培养条件上，贴壁细胞需要在培养基中添加黏附分子或包袋
来增加其附着能力，以保持细胞在培养皿底部的黏附和生长。
而悬浮细胞
则需要在培养基中添加抗聚集剂或搅拌设备来避免细胞结块，以保持细胞
的均匀悬浮和生长。
再次，在传代方法上，贴壁细胞传代通常采用单层脱离法或酶消化法。
单层脱离法利用细胞与培养皿表面的非共价键结合进行脱离，可通过物理
刮擦或液体冲击等方法将细胞从培养皿上收集下来。
酶消化法则通过加入
蛋白酶等酶类物质分解黏附细胞与基质之间的胶原纤维等结构，使细胞能
够从培养皿表面脱离。
而悬浮细胞传代则更为简单，通常只需要将培养基
中的细胞离心沉淀后，将上清液中的细胞重新悬浮于新的培养基中即可。
此外，在培养基的选择上，贴壁细胞通常需要使用固体培养基，例如
含有胶原蛋白、明胶或滤纸等的培养基。
而悬浮细胞则需要使用液体培养基，例如含有血清或植物基因表达培养基等。
最后，在细胞应用方面，贴壁细胞通常用于细胞粘附、增殖和分化等
研究领域，如肿瘤细胞、成纤维细胞和内皮细胞等。
而悬浮细胞则常用于
细胞悬浮培养、蛋白质表达和病毒培养等研究领域，如白细胞、骨髓细胞
和病毒感染细胞等。
悬浮细胞培养技术在生物研究中的优势与应用
悬浮细胞培养技术在生物研究中的优势与应用随着科技的不断发展，现代生物学研究中的工具和技术也变得越来越复杂和精细。
在这些技术中，悬浮细胞培养技术成为了许多生物学家们关注的焦点。
这种技术可以为生物学研究提供许多优势，从而使得生物学研究在各个方面都得到了突破。
本文将探讨悬浮细胞培养技术在生物研究中的优势和应用，并解析该技术的工作原理以及一些常见的应用案例。
1、什么是悬浮细胞培养技术悬浮细胞培养技术是一种在液体培养基中培养生长的技术。
这种技术主要用于处理无法附着在培养皿上的生物细胞，例如在血液中的白细胞和红细胞等。
这种技术的原理是通过在液体培养基中悬浮细胞生长来探索细胞的各种生物过程。
2、悬浮细胞培养技术的优势悬浮细胞培养技术有以下的优势：(1) 可以处理细胞数量巨大的样本：现代生物研究中，有时需要处理成千上万个细胞样本。
传统的培养技术很难同时处理如此多的细胞数量，但悬浮细胞培养技术能够轻松完成此任务。
(2) 可以监测细胞的各种生物过程：悬浮细胞培养技术提供了一种非常便利和有力的方法，可以研究细胞的各种生物过程，例如分裂、生长、凋亡、和代谢等等。
(3) 可以高效地进行筛选和分离：悬浮细胞培养技术可以使得分离和筛选细胞变得更加高效和便利。
借助一些配合的工具和仪器，可以对样本中的多种细胞类型进行精确分离和筛选。
(4) 可以更好地研究癌细胞：悬浮细胞培养技术被广泛应用于癌症研究中。
癌细胞通常更容易通过悬浮细胞培养技术进行研究。
3、悬浮细胞培养技术的应用悬浮细胞培养技术在生物学研究中有广泛的应用，例如：(1) 抗体生产：悬浮细胞培养技术可以用于生产单克隆抗体。
这种方法可以用于制备高质量的抗体。
(2) 新药筛选：悬浮细胞培养技术可以用于药物筛选的测定。
这种方法可以用来筛选新药物。
(3) 基因表达：悬浮细胞培养技术可以被用来研究基因表达和转录等相关的生物学过程。
(4) 细胞功能研究：悬浮细胞培养技术可以用于探索细胞的生物功能，例如减速的代谢、分裂和凋亡等等。
悬浮与贴壁洗胞培养观察-2023年学习资料
■游离期：-细胞接种后在培养液中呈悬浮状态.也称悬浮-期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。-10分钟一4小时
■贴壁期：-细胞附着于底物上，游离期结束。细胞株平均在10分钟一4-小时贴壁。-底物：胶原、玻璃、塑料、其 细胞等-血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素、胶原等糖蛋-白（生长基质），这些带正电荷的糖蛋白的促贴壁 子先吸附于-底物上，悬浮细胞再与吸附有促贴壁因子的附着。-进口塑料培养瓶涂有生长基质（化学合成的功能基团》
消化液：-胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽健-除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞骨架，从而使-细胞 离。-胰蛋白酶液浓度越高，作用越强，但超过一定限-度会损伤细胞。-胰蛋白酶是一种黄白色粉末，用无Ca2+、 g2+的-PBS缓冲液配制常用的胰蛋白酶液浓度是0.25%。用-滤器过滤除菌-胰蛋白酶液消化时间：2-10 钟。-■用含血清培养液终止其对细胞的消化作用
培养基-培养基（培养液）是维持体外细胞生存和生长的溶液，-分天然培养基和合成培养基。-天然培养基：-天然培 基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和-牛胚浸液-优点：营养成分丰富，培养效果好-缺点：来源受限。-成分复 ，影响对某些实验产物的提取和实验-结果的分析。-易发生支原体污染
合成培养基-合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数-量，用人工方法模拟合成的。目前已设计出许多种培-养 ，如TC199、MEM、RPMI-1640、DMEM等。-合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化-合物 无机盐和其它一些辅助物质。-■-优点：标准化生产，组分和含量相对固定。-成本低-缺点：缺少某些成分，不能完 满足体外细胞生-长需要。
其它物品-细胞冻存管
超净台-■超净工作台的工作-原理是利用鼓风机驱-动空气遁过高效滤器-除去空气中的尘埃颗-粒，使空气得到净化 -净化空气徐徐通过工-作台面，使工作台内-构成无菌环境。
悬浮细胞培养
悬浮细胞培养介绍悬浮细胞培养是一种将细胞以悬浮状态培养的方法。
相对于贴壁细胞培养，悬浮细胞培养能够更好地模拟细胞在体内自由悬浮的环境，适用于许多细胞类型的培养和研究。
悬浮细胞培养技术在生物学、医学和生物工程领域得到了广泛应用。
本文将介绍悬浮细胞培养的基本原理、培养条件和常用的培养方法。
基本原理悬浮细胞培养的基本原理是将细胞以悬浮状态培养在培养基中，培养基提供了细胞生长所需的营养物质和环境因素。
在悬浮培养中，培养基通常包含以下主要组分：1.基础培养液：如DMEM（Dulbecco’s Modified EagleMedium）或RPMI 1640（Roswell Park Memorial Institute 1640），提供细胞生长所需的营养物质，如糖类、氨基酸和维生素等。
2.补充物：根据细胞类型的不同，可以添加血清、生长因子、细胞因子等，以促进细胞生长和增殖。
3.pH缓冲剂和非酶性胎牛血清：用于稳定培养基的pH值和提供额外的营养和辅助因子。
在悬浮细胞培养过程中，细胞应保持以单个细胞的形式悬浮在培养基中，以避免细胞聚集和堆积。
为了实现这一点，通常需要采取一些措施，如定期的细胞传代、培养器皿的选择和培养条件的调节等。
培养条件悬浮细胞培养需要适宜的培养条件来维持细胞的健康生长和增殖。
以下是一些常见的悬浮细胞培养条件：1.培养温度：通常在37°C下培养，但也有一些细胞需要较低的温度，如4°C或30°C。
2.CO2浓度：大多数悬浮细胞培养需要保持适宜的CO2浓度，通常在5%左右。
CO2能够调节培养基的pH 值，提供适宜的细胞生长环境。
3.氧气浓度：氧气浓度对悬浮细胞的生长和代谢有重要影响。
不同类型的细胞对氧气浓度的要求有所不同，一些细胞需要低氧（如2-5%）环境才能生长，而另一些细胞则需要高氧环境。
4.搅拌：悬浮细胞培养过程中需要进行适当的搅拌来保持细胞的均匀分布和培养基中氧气、营养物质的均匀分布。
贴壁细胞和悬浮细胞的特点
贴壁细胞和悬浮细胞的特点一、引言在细胞培养领域，贴壁细胞和悬浮细胞是两种常见的细胞类型。
它们在生长方式和特点上存在显著的差异。
本报告将详细分析这两种细胞类型的特点，并通过实例说明它们在应用中的优劣。
二、贴壁细胞的特点1. 贴壁依赖性：贴壁细胞在培养过程中需要附着在培养瓶或培养皿的壁上才能生长。
2. 生长速度慢：相对于悬浮细胞，贴壁细胞的生长速度通常较慢。
3. 形态各异：贴壁细胞的形态因种类和生长条件的不同而异，可以呈现为扁平、立方体、柱状或不规则形状。
4. 附着依赖性：贴壁细胞的生长和存活依赖于与培养瓶或培养皿的接触，这可能导致细胞的遗传特性和表型表达发生变化。
实例分析：以肺癌细胞为例，贴壁肺癌细胞在培养过程中需要附着在培养瓶的壁上才能生长，且生长速度较慢。
通过对贴壁肺癌细胞进行基因表达分析，发现与悬浮肺癌细胞相比，贴壁肺癌细胞的基因表达谱存在明显的差异。
这表明贴壁状态可能会影响细胞的生物学特性。
三、悬浮细胞的特点1. 悬浮生长：悬浮细胞在培养过程中不需要附着在固定的表面上，而是在培养液中自由悬浮生长。
2. 生长速度快：相对于贴壁细胞，悬浮细胞的生长速度通常较快。
3. 形态相似：悬浮细胞的形态相对较为一致，一般呈圆形或球形。
4. 遗传稳定性：悬浮细胞在培养过程中不易发生遗传特性和表型表达的变化。
实例分析：以肝癌细胞为例，悬浮肝癌细胞在培养过程中不需要附着在培养瓶的壁上，而是在培养液中自由悬浮生长。
通过对悬浮肝癌细胞进行基因表达分析，发现与贴壁肝癌细胞相比，悬浮肝癌细胞的基因表达谱较为一致，且遗传稳定性较高。
这表明悬浮状态可能有利于维持细胞的生物学特性。
四、总结观点综上所述，贴壁细胞和悬浮细胞各有其特点。
贴壁细胞在形态和生物学特性上具有较高的多样性，但生长速度较慢且容易受到环境因素的影响。
悬浮细胞则具有较高的生长速度和遗传稳定性，但在形态和生物学特性上相对较为一致。
选择使用哪种类型的细胞主要取决于研究目的和研究领域的需求。
有关贴壁型细胞与悬浮型细胞的介绍
有关贴壁型细胞与悬浮型细胞的介绍体外培养大多培养在瓶皿等容器中，按照它们是否能贴附在支持物上生长的特性，可分为悬浮型和贴壁型两大类。
（一）悬浮型细胞简称悬浮细胞。
在体外培养时，这些细胞属于非贴壁依靠的细胞，这些细胞的细胞质膜也会与培养液底发生黏连，但最多不超过5％的表面与培养液底发生类似于细胞衔接样的黏连，显微视场下细胞往往呈球形。
悬浮型细胞主要是来源于血液、淋巴组织的细胞，骨髓瘤构建的各种杂交瘤细胞，某些肿瘤细胞和转化细胞。
细胞呈圆形，普通不贴于支持物上，呈悬浮生长。
这类细胞简单大量繁殖。
体外培养的细胞类型中，少数细胞种类在培养时不贴附于支持物上，而以悬浮状态生长，包括一些取自血、脾或骨髓的原代细胞，尤其是血液白细胞，以及一些肿瘤细胞。
某些来源于此类细胞的细胞株或细胞系也呈悬浮状态生长。
细胞悬浮生长时可以呈单个细胞或细小的细胞团，胞体为圆形。
其优点是在培养液中生长，生存空间大，允许长时光生长，便于大量繁殖。
属于悬浮型细胞频繁的细胞株系有小鼠腹水瘤S180、小鼠瘤NS1和SP2/0，人造血系肿瘤细胞U937、HL60、K562等。
（二）贴壁型细胞简称贴壁细胞。
在体外培养时，贴壁型细胞就是那些贴壁依靠的细胞，在汇集成单层生长以前，它们的细胞质膜超过30％的表面与培养液底发生类似与细胞衔接样的黏连，显微视场下细胞普通为扁平状的各种形态。
需要注重的是，贴壁型细胞汇集生长形成单层以后，失去接触抑制的那些细胞株或细胞系的细胞培养物中，经常可见或多或少的悬浮样细胞浮现。
贴壁型细胞包括大多数哺乳动物的淋巴和血液以外的组织细胞，以及多数肿瘤细胞。
需要贴附在带适量正电荷的固体或半固体表面才干正常生长和分裂。
大多数培养细胞均为贴壁型，它们必需贴附在支持物表面生长，这类细胞在体内时各自具有其特别的形态，但在体外培养时贴附于支持物后形态上表现单一化而失去体内原有的某些特征，多呈上皮样或成纤维细胞样。
正常贴壁型细胞具有接触抑制和密度抑制的双重特性，细胞互相接触后可抑制细胞的运动，因此细胞第1页共2页。
大规模培养常用方法(贴壁培养、悬浮培养与固定化培养)-1
大规模培养常用方法（贴壁培养、悬浮培养与固定化培养）-1根据动物细胞的类型，可采用贴壁培养、悬浮培养和固定化培养等三种培养方法进行大规模培养。
一、动物细胞生长特性及培养温度1. 细胞生长缓慢，易污染，培养需用抗生素2.细胞大，无细胞壁，机械强度低，环境适应性差3.需氧少，不耐受强力通风与搅拌4. 群体生长效应，贴壁生长（锚地依赖性）5.培养过程产品分布细胞内外，成本高6.原代培养细胞一般繁殖50代即退化死亡依据在体外培养时对生长基质依赖性差异，动物细胞可分为两类：●贴壁依赖型细胞：需要附着于带适量电荷的固体或半固体表面才能生长，大多数动物细胞，包括非淋巴组织细胞和许多异倍体细胞均属于这一类。
●非贴壁依赖型细胞：无需附着于固相表面即可生长，包括血液、淋巴组织细胞、许多肿瘤细胞及某些转化细胞。
培养细胞的最适温度相当于各种细胞或组织取材机体的正常温度。
人和哺乳动物细胞培养的最适温度为35~37℃。
偏离这一温度，细胞正常的代谢和生长将会受到影响，甚至死亡。
总的来说，培养细胞对低温的耐力比高温高。
温度不超过39℃时，细胞代谢强度与温度成正比；细胞培养置于39~40℃环境中1h，即受到一定损伤，但仍能恢复；当温度达43℃以上时，许多细胞将死亡。
当温度下降到30~20℃时，细胞代谢降低，因而与培养基之间物质交换减少。
首先看到的是细胞形态学的改变以及细胞从基质上脱落下来。
当培养物恢复到初始的培养温度时，它们原有的形态和代谢也随之恢复到原有水平。
二、贴壁培养（attachment culture）是指细胞贴附在一定的固相表面进行的培养。
1. 生长特性：贴壁依赖型细胞在培养时要贴附于培养（瓶）器皿壁上，细胞一经贴壁就迅速铺展，然后开始有丝分裂，并很快进入对数生长期。
一般数天后就铺满培养表面，并形成致密的细胞单层。
2.贴壁培养的优点：●容易更换培养液；细胞紧密黏附于固相表面，可直接倾去旧培养液，清洗后直接加入新培养液。
细胞悬浮培养的方法和特点1
生长曲线
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第一节 细胞悬浮培养的方法和特点
4，悬浮培养细胞生长的计量 细胞计数 细胞密实体积 细胞重量
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第一节 细胞悬浮培养的方法和特点
4，悬浮培养细胞生长的计量
4.1 细胞计数 虽然悬浮培养细胞比较分散，但远没有达到单 细胞分散的水平，因此，需要采用方法使细胞 团分散成为单细胞才能够进行细胞计数。 使细胞团分散的方法有两种，即铬酸法和果胶 酶法。分散后，在显微镜下计数。
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第一节 细胞悬浮培养的方法和特点
4，悬浮培养细胞生长的计量
例，铬酸法的实验方法 取1份培养细胞（用滤纸吸除表面水分）
加入2份容积的8%的三氧铬酸溶液中，在70 C 加热5-15分钟；冷却后用力振动10分钟分散细 胞团成为单细胞，然后用血球计数板在显微镜 下计数。
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第一节 细胞悬浮培养的方法和特点
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第一节 细胞悬浮培养的方法和特点
3，细胞悬浮培养的特点
3.1 不用使用琼脂等培养基固化剂，不仅减少 成本而且能使培养结果不受固化剂中杂质的影 响。 3.2 便于更换培养基的操作，借此可以减少人 工劳力。 3.3 在液体培养条件下植物组织失去了生长的 方向性。
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第一节 细胞悬浮培养的方法和特点
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第一节 细胞悬浮培养的方法和特点
1，细胞悬浮培养的方法
摇床有两种摇荡的形式，一种是往复式的（来回 移动，运动面上的每一个点的轨迹都是一条直 线），另一种是涡旋式的（不是旋转，运动面上 的每一个点的轨迹都是一个直径相同的圆圈）。 衡量摇床工作状态的两个参数是每分钟的摇荡频 率和摇荡的位移距离。此外，运转是否平稳和承 载重量是购买时需要考虑的指标。
第一节 细胞悬浮培养的方法和特点
悬浮培养技术
悬浮培养技术嘿，朋友们！今天咱来聊聊这个神奇的悬浮培养技术呀！你说这悬浮培养技术，就像是一个魔法盒子，打开之后充满了惊喜和奇妙。
它呀，能让细胞在培养液中自由地悬浮着生长，就好像一群小精灵在欢快地跳舞呢！想象一下，一个个小小的细胞，脱离了附着物的束缚，在培养液里自由自在地飘荡、生长、分裂。
这是多么神奇的画面呀！这可不简单哦，它需要精准的条件和细致的呵护。
温度要适宜，营养要充足，环境要稳定，就跟咱人一样，得在舒适的环境里才能茁壮成长呀。
悬浮培养技术在很多领域都大显身手呢！在生物医药领域，它为药物研发和疾病治疗提供了有力的支持。
通过它培养出来的细胞，可以用来测试药物的效果，帮助科学家们找到更有效的治疗方法。
这不就像是给医生们配备了一把更锋利的宝剑，去战胜疾病这个大怪兽嘛！在农业领域，悬浮培养技术也能发挥大作用呢！可以用来培育优良的种苗，让农作物长得更壮实，结出更多更美味的果实。
咱以后能吃到更甜的水果、更饱满的粮食，说不定都有它的一份功劳呢！它还在科研领域有着重要的地位。
科学家们通过悬浮培养技术来研究细胞的特性和功能，探索生命的奥秘。
这就好像是在黑暗中点亮了一盏明灯，指引着我们去了解那些未知的世界。
而且呀，悬浮培养技术还在不断发展和进步呢！随着科技的日新月异，它的应用范围也会越来越广，给我们的生活带来更多的惊喜和改变。
说不定未来的某一天，我们能通过它攻克一些现在无法解决的难题呢，那该有多棒呀！咱再回过头来想想，这悬浮培养技术不就是人类智慧的结晶嘛！科学家们通过不断地尝试和探索，才让它变得如此神奇和有用。
我们真应该为他们点赞呀！总之呢，悬浮培养技术真的是太有意思、太重要啦！它就像一颗闪闪发光的星星，在科技的天空中绽放着独特的光芒。
让我们一起期待它在未来能带给我们更多的精彩吧！怎么样，朋友们，你们是不是也对这悬浮培养技术有了更深的了解和认识呀？。
细胞悬浮培养的方法和特点1
4.3，生物学诱变 这是一类通过分子生物学手段的诱变方法，包 括： T-DNA tagging； Transposon tagging； Sense or antisense RNA inactivation； RNA interference
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第二节 无性系变异及突变体的用途
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第一节 细胞悬浮培养的方法和特点
1，细胞悬浮培养的方法
摇床有两种摇荡的形式，一种是往复式的（来回 移动，运动面上的每一个点的轨迹都是一条直 线），另一种是涡旋式的（不是旋转，运动面上 的每一个点的轨迹都是一个直径相同的圆圈）。 衡量摇床工作状态的两个参数是每分钟的摇荡频 率和摇荡的位移距离。此外，运转是否平稳和承 载重量是购买时需要考虑的指标。
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第一节 细胞悬浮培养的方法和特点
1，细胞悬浮培养的方法
1.1，摇床和三角瓶 一般细胞增殖、营养生理等研 究、细胞分裂同步化、细胞再分化（胚胎发生）的 研究、原生质体供体材料的准备等。 1.2，转轮和试管液体培养 与1.1相似但较少用
1.3，悬滴培养 单细胞或少量的原生质体或原生 质体融合后的杂种细胞等； 1.4，发酵罐培养 用于进行次生代谢物质生产的 悬浮培养；
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第一节 细胞悬浮培养的方法和特点
5，悬浮培养体系的应用
5.1，悬浮培养细胞的同步化 化学的方式有饥饿法和抑制法两种方法。 饥饿法是对细胞断绝供应一种细胞分裂所必需的营 养成分或激素，使细胞停滞在G1或G2期，然后，重 新在培养基中加入这种限制因子，这些静止的细胞 就会同时进入细胞分裂的相同阶段。 抑制法是加入一些抑制性的物质使细胞分裂停止进 行，然后除去这些物质使细胞同时重新开始分裂。
因此， 如果是不会被液体淹没的大块组 织，可以考虑采用浅层液体培养基静止，这时 不需要摇床。
贴壁培养与悬浮培养的区别
人大肠上皮粘膜癌细胞
人小气道上皮细胞
游走细胞型
生长特点：呈散在生长，一般不 连成片，胞质常突起，呈活跃游 走或变形运动，方向不规则。此 型细胞不稳定，有时难以 和其他细胞相区别。
小鼠腹腔分离的单核巨噬细胞
多型细胞型
生长特点：有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的 形态，可统归于此类。
大鼠皮质神经细胞
悬浮细胞培养
温度ห้องสมุดไป่ตู้
植物悬浮细胞系：23-27℃
pH
哺乳动物系：7.0-7.4 成纤维细胞系：7.4-7.7
植物细胞：5.6-6.0
培养基
需血清
悬浮培养基可不需血清
5 细胞形态
贴壁培养细胞：成纤维细胞型 上皮细胞型 游走细 胞型 多型细胞型 悬浮培养细胞：悬浮型
成纤维细胞型 名称：凡在培养中形态与成纤维 细胞类似的。 来源：由中胚层间充质组织起源 的组织如：真正的成纤维细胞， 心肌，平滑肌，成骨细胞，血管 内皮。 形态：似体内成纤维细胞的形态， 胞体梭形或不规则三角形，胞质 向外伸出2—3个长短不等的突起， 中有卵圆形核。 生长特点：排列成放射状，漩涡 状，并不紧靠连成片，细胞—细 胞接触易断开而单独行动，游离 的单独的成纤维样细胞，常有几 个伸长的细胞突起。
晃动培养液时细胞也随着漂动利用酶或机械方法解离细胞无需通过酶或机械方法解离细胞需要使用经过组织培养处理的容器可使用未经组织培养处理的容器但需进行搅动以便进行充分的气体交换可连续收获产物用于细胞学研究等多种研究领域可批量收获产物用于蛋白质的大量生产及多种研究领域细胞生长受表面积限制细胞生长受培养基中浓度的限制由于人类活动或者自然过程引起某些物质进入大气中达到足够的浓度滞留足够的时间并因此导致大气环境质量下降影响人类生活的现象
悬浮与贴壁洗胞培养观察
无菌细胞培养室
其它物品
细胞冻存管
超净台
超净工作台的工作
原理是利用鼓风机驱 动空气遁过高效滤器 除去空气中的尘埃颗 粒，使空气得到净化。 净化空气徐徐通过工 作台面，使工作台内 构成无菌环境。
滤 器
CO2培养箱
CO2培养箱设定的条件为37
℃，
5％CO2 。
使用CO2培养箱培养细胞时应注
合成培养基
合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数 量，用人工方法模拟合成的。目前已设计出许多种培 养基，如TC199、MEM、RPMI-1640、 DMEM等。
合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化 合物、无机盐和其它一些辅助物质。 优点：标准化生产，组分和含量相对固定。 成本低 缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生 长需要。
8、结果观察 一般情况下，传代后的贴壁细胞在2h后贴壁，2~4d可 在瓶底形成单层，需要再次进行传代。 细胞培养过程中，需要每天在倒置显微镜下进行观察， 重点注意以下几点： 1） 观察细胞是否污染。注意培养液的颜色变化与澄 清与否。 2） 观察细胞是否增殖，细胞密度是否发生变化。 3） 观察细胞形态特征。 4） 对活细胞占细胞总数的比例，可用0.5%台盼蓝染 液进行染色。
1 细胞的营养需要 2 细胞的生存环境 温度: 37 ℃ O2 CO2: 5% CO2 +H2O ← →H2CO3 ← →H+ + HCO3pH: 7.2-7.4 渗透压 3 无污染 4 无毒
实验准备
实验用品：
超净工作台，压力蒸汽消毒器，电热干燥箱，滤器， 酸缸 CO2培养箱 倒置显微镜 酶标仪、微孔板震荡器 液氮罐 自动双重纯水蒸馏器，纯水仪 耗材：培养瓶，吸管，电动吸引器，培养板， 冻存管
贴壁-悬浮培养
动物细胞培养的操作方式
• 1、分批式操作 • 一种是将细胞和培养基一次性加入反应器内进
行培养，此后细胞不断增长，产物不断形成和 积累，最后将条件培养基（conditioned medium），即经培养已含有细胞产物的培养基， 或连同细胞一并取出，培养结束。
• 另一种是先将细胞和培养 基加入反应器，待细胞生 长至一定密度后，向反应 器内加入诱导剂或病毒等， 经一端时间作用后，将反 应物取出，如产生Namalwa 干扰素和疫苗等。
• 80年代以后发展的多孔微载体或微球，有商品出售。
• （2）包埋或微囊培养：将细胞包埋或包裹在 凝胶载体或微囊内。一般载体材料为：人工合 成的polymer、糖类如纤维素等、蛋白质如胶原、 纤维蛋白等。此方法的优点之一是可采用多种 生物反应器进行大规模培养。
• （3）结团培养：利用细胞本身形成结团的特点，相互结团后再 用悬浮的方法培养，操作简培养）
（1）微载体培养：创造大的贴附面积，供细胞贴 附生长增殖，载体体积小，比重较轻，在轻度搅 拌下即可携带细胞自由地悬浮在培养基内，充分 发挥悬浮培养的一切优点。
理想的微载体应具备：生物相容性、无毒性、表面 惰性、比重适当（1.030~1.045g/mL）、粒径均一， 在60~250m之间（溶胀后）、光学透明、柔软、 耐高压灭菌温度、反复多次使用、制备简单、原料 充分。
悬浮细胞培养书籍
悬浮细胞培养悬浮细胞培养是一种在无固体基质支持下，以液体培养基中的细胞为主要培养对象的技术方法。
与传统的附着细胞培养相比，悬浮细胞培养具有许多独特的特点和优势。
本文将对悬浮细胞培养的基本原理、方法和应用进行介绍。
基本原理悬浮细胞培养利用培养基提供的营养物质和适宜的环境条件，使细胞在液体中增殖和生长。
与附着细胞培养不同，悬浮细胞培养无需使用固体基质（如培养皿或培养板）来承载细胞。
相反，细胞直接悬浮在培养基中，形成一个细胞悬浮液。
悬浮细胞培养中的培养基通常包含碳源、氮源、无机盐、生长因子和其他必需营养物质。
这些营养物质提供了细胞生长所需的能量和原料。
悬浮细胞培养中还需要注意细胞密度的控制。
过高的细胞密度可能导致营养物质和氧气不足，从而限制细胞生长和代谢功能。
因此，定期进行细胞的传代是悬浮细胞培养的重要步骤之一。
培养方法悬浮细胞培养可采用多种方法和技术。
以下是一些常见的悬浮细胞培养方法：1.摇床培养：将细胞培养瓶放置在摇床上，通过不断地摇动使细胞均匀分散在培养基中。
这种方法适用于某些细胞生长较为缓慢的情况。
2.搅拌培养：使用搅拌器或搅拌磁子等设备，使细胞悬浮液在培养过程中保持均匀的搅拌，促进养分和氧气的均匀分布。
这种方法适用于需要高细胞密度和高代谢活性的细胞。
3.自由悬浮培养：将细胞置于旋转式培养器、气液接触器或气体扩散装置中，通过不断的旋转或通风来提供氧气和细胞所需的气体交换。
这种方法适用于需要大规模培养和细胞团块培养的情况。
应用领域悬浮细胞培养在生物医学研究和工业生产中具有广泛的应用。
以下是一些常见的应用领域：1.细胞生物学研究：悬浮细胞培养提供了研究细胞增殖、分化、凋亡、代谢等生物学过程的重要工具。
通过调控培养条件和添加特定刺激物，可以模拟细胞在体内的生理和病理过程，从而加深对细胞生物学的理解。
2.疫苗和药物研发：悬浮细胞培养可用于大规模生产疫苗和药物。
例如，使用悬浮细胞培养技术可以制备病毒疫苗、抗体药物和基因工程药物。
悬浮细胞培养方法
悬浮细胞培养方法悬浮细胞培养方法是细胞生物学研究中的一种重要方法，主要适用于脆弱或敏感的细胞类型。
它与传统的固定细胞培养方法相比，可以提供更好的细胞生长环境，使细胞在自然状态下进行生长和分化。
本文将对悬浮细胞培养方法进行详细介绍。
一、悬浮细胞培养方法的原理悬浮细胞培养方法是在不使用固定基质支持的情况下，将细胞直接在培养基中生长、增殖、分化的一种方法。
培养基应包括所有细胞所需的生长和分化因子，以及适量的营养物质和金属离子等。
这种方法使细胞获得最自然的生长环境，可以实现更高效的细胞增殖和分化。
二、悬浮细胞培养的优点1. 生长环境更自然悬浮细胞培养不需要使用任何支持材料，细胞直接在培养基中自由生长。
与固定细胞培养方法相比，细胞的生长环境更接近其生理状态，更符合其生长和分化的特性。
2. 容易控制悬浮细胞培养可以实现在相对小的体积中对细胞进行高密度培养，避免了与固定细胞培养中大量基质物质的使用和占用空间的问题。
同时，悬浮细胞培养可以根据需要进行分离和汇集，方便对细胞进行控制和处理。
3. 更适用于敏感细胞许多敏感细胞类型如白血病细胞、肝细胞等比较难以以传统的繁殖方法进行培养。
悬浮细胞培养可以提供更为温和的生长环境，降低了对生长和分化环境的要求，更适用于此类敏感细胞的培养。
4. 更适用于细胞的分化和治疗悬浮细胞培养可以为细胞的分化和治疗提供良好的平台。
对于许多细胞类型，包括例如造血干细胞和细胞治疗应用在内，悬浮细胞培养均可以起到重要的作用。
三、悬浮细胞培养的缺点1. 难度较大悬浮细胞培养需要进行精细的控制和操作，比传统的固定细胞培养方法难度较大。
2. 鹰式问题由于悬浮细胞的特性，其在培养过程中更容易分泌过多的代谢产物，导致培养基中酸碱值发生变化，从而导致细胞受到影响。
为了避免这种情况，需要定期检查酸碱度，并对培养基进行调整。
3. 器材和培养基的成本由于悬浮细胞培养器需配备专业装置，且需要大量配合的培养基和补充物，这些因素均增加了悬浮细胞培养的成本和难度。
悬浮培养工艺
悬浮培养工艺悬浮培养工艺是一种在细胞培养中常用的技术，它通过在含有培养基的培养皿中悬浮细胞，采用动态搅拌和气体通气的方法，以模拟体内细胞在自然环境下的生长状态，从而促进细胞的生长和增殖。
该工艺在细胞培养研究中具有重要意义，可用于生物学、医学和生物工程等领域的研究和应用。
悬浮培养工艺的优势在于能够提供更接近自然环境的细胞生长条件。
相比于传统的贴壁培养方法，悬浮培养可以更贴近细胞在体内的生长环境，从而更好地模拟细胞在体内的生物学特性。
同时，悬浮培养还能够提供更为均匀的培养环境，避免了细胞因与培养皿表面的接触而引起的细胞应激和异质性。
这些优势使得悬浮培养工艺在细胞培养研究中得到了广泛应用。
悬浮培养工艺的具体步骤如下：1. 培养基的制备：根据细胞类型的要求，配制适当的培养基，包括营养物质、生长因子和抗生素等。
有些细胞需要添加血清来提供生长因子和其它必需的成分。
2. 细胞的准备：从培养皿中取出所需数量的细胞，将其收集在离心管中，并用培养基洗涤细胞，去除残留的细胞培养液和血清。
3. 细胞的悬浮：将洗涤后的细胞转移到悬浮培养皿中，加入适量的培养基，控制细胞的浓度和悬浮液的体积。
4. 培养条件的调控：根据细胞类型的要求，调整培养皿的搅拌速度、气体通气速度和培养温度等参数，以提供适宜的细胞生长环境。
5. 培养液的换液：根据需要，定期更换培养液，以保持培养环境的稳定性和细胞的生长状态。
换液时要注意避免对细胞造成机械性损伤。
6. 细胞的采集：根据实验的需要，定期采集培养皿中的细胞，进行细胞计数、细胞活力和细胞形态等的分析。
悬浮培养工艺的应用非常广泛。
在生物学研究中，悬浮培养被用于细胞的增殖和鉴定、细胞代谢和分泌产物、细胞凋亡和生存等研究。
在医学领域，悬浮培养被用于细胞治疗、组织工程和药物筛选等应用。
在生物工程中，悬浮培养被用于生物制药、酿酒和食品发酵等工业生产过程。
总的来说，悬浮培养工艺是一种模拟体内细胞生长环境的重要技术，具有较高的应用潜力。
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试论贴壁细胞悬浮培养的特点及其体系的建立
摘要：文章主要对贴壁细胞悬浮培养进行研究。
本次研究中通过文献资料分析了贴壁细胞悬浮培养的特点，然后对培养中体系建立的要求进行明确。
体系建立的过程中严格依照外植体培养标准及愈伤组织选取标准实施，体系建立非常科学。
该体系的构建对细胞培养学的丰富具有一定的贡献性作用。
关键词：植物细胞；悬浮培养；特点；培养体系
1 贴壁细胞悬浮培养的特点
细胞悬浮培养主要指在培养的过程中将细小的细胞聚集在培养液上实施培养，该操作主要在摇床上完成，可以在短时间内获得大量细胞，培养效果非常显著。
该培养的过程中主要选取植物细胞完成培养过程，通过将植物愈伤组织处理后放置在液体培养基上进行培养操作，可以有效改善愈伤组织的分裂和增殖能力，细胞生长速度大大提升。
植物细胞悬浮培养时一般不需要支持物，生长速度较快，对培养条件要求并不苛刻。
这种培养的过程中植物细胞可以悬浮在培养基中培养，上述状况下植物细胞悬浮培养面积有效提升，培养效果较好。
与此同时，这种培养的过程中植物细胞敏感性一般较低，培养操作中无需加入动物细胞培养过程中的血清、微生物培养过程中的有机物质等，整体培养成本较低，经济效益较好。
其具体培养特点见表1.
表1 植物贴壁细胞悬浮培养中培养特点
性质微生物植物细胞植物器官大小（μm）1-10 10-200 ≥103
细胞聚集经常发生通常成团毛状根、芽、体胚等倍增时间≤1h 24-150h 几天不等
接种密度小整个体积的5%-20% 大剪切力敏感程度低高、敏感高、敏感
遗传稳定性强弱一般耗氧量一般低高
营养要求简单较复杂较为复杂
产物积累胞外，高常存于液泡中，浓度低多为胞内产物，较高通气量（L/(L.min)）高≥1 低≤0.6 略高，1左右环境敏感性适应范围广可浸没培养长期浸没易玻璃化传统变异筛选技术广泛使用有时使用有时使用
2 贴壁细胞悬浮培养体系的建立
2.1 培养流程
在实施植物细胞贴壁悬浮培养的过程中人员要严格依照培养原则要求，细化细胞培养流
程，保证培养的有效性、合理性、科学性。
该过程中培养人员需要控制从外植体的选取着手，控制好愈伤组织的诱导，合理筛选愈伤组织，从而提升原细胞的分裂分化的控制效果。
贴壁细胞悬浮培养流程主要为：诱导、筛选愈伤组织→液体悬浮培养→形成悬浮体系。
2.2 植物外植体的选取
植物外植体在选取的过程中要控制好以下三项原则：
第一，选取分化程度较低的植物部分，例如植物的幼芽、根系等；第二，选取幼嫩的部位，尽量保证组织类型较为丰富，例如植物的下胚轴、子叶等；第三，严禁选取无分化分裂部位组织细胞，部分组织细胞抑制发育物质较多也不可选取，例如老化叶片。
植物外植体的选取作为影响细胞悬浮培养的重要因素，其选取效益直接影响着后续培养质量，直接限制着植物细胞的培养效益。
上述培养的过程中培养人员必须要严格依照外植体选取标准。
2.3 愈伤组织的诱导筛选
愈伤组织是指外植体在培养过程中经过脱分化、再分化等过程形成的无特定细胞形态的细胞团。
该细胞团具有非常好的增殖分化能力，具有较高的遗传稳定性，是植物组织形成的前提。
在外植体培养获得愈伤组织后，培养人员需要对愈伤组织进行诱导和筛选，从而保证愈伤组织能够依照需求方向进行对应分裂、分化，从而提升细胞培养效益。
具体诱导筛选中要控制好：
（1）培养基的选取：当前细胞培养基除了能够完成细胞培养外还可以实现细胞分离的诱导，是愈伤组织生长分化的重要促进因素。
愈伤组织培养基在选取的过程中可以选取MS、SH、N6等多种类型，需要依照植物细胞特定确定对应培养操作，从而提升植物培养的有效性和合理性。
例如在青钱柳无菌叶愈伤组织诱导和筛选的过程中培养人员可以通过SH培养基完成，在SH培养基中加入MS培养基成分，通过MS培养基中因素实现青钱柳无菌愈伤组织的诱导和继代培养，从而实现诱导和筛选的双管齐下，从本质上提升培养的效果和质量。
（2）激素的选取和配合：激素在选取的过程中要对其组成、配比、浓度等进行全面控制，要依照诱导和分化指标需求进行对应使用。
植物细胞悬浮培养的过程中生长素常选取浓度为0.01-10mg/L左右的2,4-D、NAA、IAA等，细胞分裂素常选取浓度为0.1-10mg/L左右的KT、6-BA、ZT等。
（3）其他条件的选取：在贴壁细胞悬浮培养过程中人员要对其温度进行有效控制，保持恒温状态。
愈伤组织培养中温度一般控制在25-28℃左右，可以依照植物细胞状况适当调整。
部分植物细胞在培养的过程中需要适量光照才能够完成诱导，部分植物在培养的过程中需要进行暗处理才能够完成诱导，培养人员可以依照植物对光的需求对应处理，合理控制光强、光色等光照因素。
3 总结
贴壁细胞悬浮培养可以有效提升细胞的培养质量，通过培养过程中的各项处理提升细胞培养效益，从而形成安全、高性能细胞体系，对我国生物学发展和应用具有至关重要的作用。
当前细胞学发展的过程中我国虽然已经加大了对贴壁细胞悬浮培养的研究，但研究深度不够，仍需进一步挖掘。
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