血清蛋白电泳(醋酸纤维薄膜法)
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白【实验目的】掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白的原理和方法。
【实验原理】蛋白质是两性电解质。
在pH值小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH值大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。
血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，故可利用电泳法将它们分离。
血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。
由表可知，血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0，所以在pH8.6的缓冲液中，它们都电离成负离子，在电场中向阳极移动。
表1 人血清中各种蛋白质的等电点及相对分子质量蛋白质名称等电点相对分子质量白蛋白 4.88 69000α1-球蛋白 5.06 200000α2-球蛋白 5.06 300000β-球蛋白 5.12 90000~150000γ-球蛋白 6.85~7.50 156000~300000 在一定范围内，蛋白质的含量与结合的染料量成正比，故可将蛋白质区带剪下，分别用0.4mol/L NaOH 溶液浸洗下来，进行比色，测定其相对含量。
也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，测定其相对含量。
肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。
肾病时α1、α2、β球蛋白升高，γ-球蛋白降低。
肝硬化时α2、β-球蛋白降低，而α1、γ-球蛋白升高。
【实验器材及试剂】器材：醋酸纤维薄膜，人血清或牛血清，烧杯，培养皿，镊子，载玻片，盖玻片，电吹风，电泳槽，直流稳压电泳仪，剪刀，手套，滤纸；试剂：巴比妥-巴比妥钠缓冲液（pH8.6，离子强度0.06mol/L）染色液（可重复使用，使用后回收）漂洗液（100ml每组）：95%乙醇45ml，冰乙酸5ml，水50ml透明液（20ml每组）：无水乙醇14ml+冰乙酸4ml，混匀【操作方法】1. 薄膜浸泡：将醋酸纤维薄膜在缓冲液中浸透（30min），取出后用滤纸吸去多余缓冲液。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果一、前言醋酸纤维薄膜电泳是一种常见的分离血清蛋白的方法，它能够将复杂的血清样品中的蛋白质分离出来，从而便于进行后续的研究。
本文将详细介绍醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果。
二、实验方法1. 样品制备将血清样品加入到离心管中，并进行离心处理，去除其中的颗粒物和红细胞等杂质。
然后取出上清液，进行下一步处理。
2. 薄膜电泳将制备好的样品加入到电泳槽中，并在两端接上电极。
然后通过调节电场强度和时间等参数，使得不同分子量的蛋白质在电场作用下向不同方向移动，并最终被分离开来。
3. 银染将分离好的样品进行银染处理，使得其中存在的蛋白质能够被显色。
然后观察显色效果，并对其进行记录和分析。
三、实验结果经过以上实验步骤，我们成功地得到了血清样品中的蛋白质分离结果。
具体结果如下：1. 蛋白质谱图通过醋酸纤维薄膜电泳分离出来的血清蛋白质谱图如下图所示：（图片略）从图中可以看出，我们成功地将血清样品中的蛋白质分离成了不同的条带，并且这些条带在电泳过程中向不同方向移动，最终被分离开来。
2. 蛋白质种类通过对分离出来的蛋白质进行银染处理后，我们可以看到其中存在多种不同种类的蛋白质。
具体包括：（1）白蛋白（2）球蛋白（3）免疫球蛋白（4）转铁蛋白等。
3. 调整实验参数对结果的影响在实验过程中，我们还尝试了调整一些实验参数，以观察其对结果的影响。
具体包括：（1）电场强度：当电场强度较大时，不同分子量的蛋白质能够更快地向两端移动，并且更容易被分离开来。
但是，如果电场强度过大，也会导致蛋白质的断裂和聚集，从而影响分离效果。
（2）电泳时间：当电泳时间较长时，不同分子量的蛋白质能够更充分地被分离开来，并且条带也更加清晰。
但是，如果电泳时间过长，也会导致蛋白质的断裂和聚集，从而影响分离效果。
四、结论通过以上实验结果的观察和分析，我们可以得出以下结论：1. 醋酸纤维薄膜电泳是一种有效的血清蛋白质分离方法。
醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质
生物化学实验醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质一、实验目的掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法二、实验原理蛋白质是两性电解质。
在pH值小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH值大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。
血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，故可利用电泳法将它们分离。
血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。
由表可知，血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0，所以在剪下，分别用0.4mol/L NaOH溶液浸洗下来，进行比色，测定其相对含量。
也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，测定其相对含量。
肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。
肾病时α1、α2、β球蛋白升高，γ-球蛋白降低。
肝硬化时α2、β-球蛋白降低，而α1、γ-球蛋白升高。
三、实验器材1、醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）2、人血清；3、烧杯及培养皿数只；4、点样器；5、竹镊子；6、玻璃棒；7、电吹风；8、试管六只；9、恒温水浴锅；10、电泳槽；11、直流稳压电泳仪；12、7220型分光光度计；13、剪刀四、实验试剂1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液：取两个大烧杯，分别称取巴比妥钠和巴比妥溶解于500ml 蒸馏水中；2、染色液，可反复使用；3、漂洗液：取乙醇45ml ，冰醋酸10ml ，混匀；4、浸出液：0.4mol/L NaOH 溶液；5、透明液：取冰醋酸25ml 、无水乙醇75ml ，混匀。
五、实验操作1、准备和点样取一条醋酸纤维薄膜，浸入缓冲液中，完全浸透后，用镊子轻轻取出，将薄膜无光泽的一面向上，平放在干净滤纸上，再放一张干净滤纸吸取多余的缓冲液；用玻棒蘸取少量血清，涂在点样器上，然后轻轻于距纤维薄膜一端1.5cm 处接触，样品即呈一条状突于纤维膜上。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳原理以醋酸纤维薄膜为支撑物，浸入pH8.6的缓冲液后吸去多余液体。
将微量血清点于膜上，电泳后，将薄膜置染色液中使蛋白质固定并染色，洗去多余染料。
操作1．准备与点样(1)将薄膜切成2.5×8cm的小片。
在薄膜无光泽面(正面)的一端约2cm 处用铅笔划一线，以标明点样位置。
同时在一端边沿写上实验者的学号或姓名。
(2)将薄膜无光泽面向下，漂浮于巴比妥缓冲液面上(缓冲液盛于培养皿中)，使膜条自然浸湿下沉；(3)将充分浸透(膜上没有白色斑痕)的膜条取出，用滤纸吸去多余的缓冲液，把膜条两端各贴于两块玻片上使点样线架空。
(4)用血色素吸管吸取新鲜血清3~5ul，涂于载玻片末端处，或用载玻片在血清上蘸一下，使载玻片下端粘上一薄层血清，然后紧按在薄膜点样线上，待血清全部透入膜内，移开载玻片。
2．电泳将点样后的膜条置于电泳槽架上，放置时，无光泽面(即点样面)向下，点样端置于阴极槽架上以四层滤纸作桥垫，膜条与滤纸需贴紧，待平衡5分钟后通电，电压为110V，电流为0.4~0.6mA/cm，通电1小时左右关闭电源。
3．染色通电完毕后用镊子将薄膜取出，直接浸于盛有氨基黑10B的染色液中，染5分钟取出，立即浸入盛有漂洗液的培养皿中，反复漂洗数次，直至背景漂净为止。
用滤纸吸干薄膜。
4．定量本实验不要求进行定量分析，如有需要，可采用薄层扫描仪进行扫描定量，或采用洗脱后再进行比色的方法进行定量。
5．计算光密度总和T=A+α1+α2+β+γ各部分蛋白质的百分数为：临床意义1．正常值：白蛋白57~72%α1球蛋白2~5%α2球蛋白4~9%β球蛋白6.5~12%γ球蛋白12~20%2．肝硬化时白蛋白显著降低，γ球蛋白升高2~3倍；肾病综合症时白蛋白降低，α2和β球蛋白升高。
试剂与器材1．电泳仪：包括直流电源整流器和电泳槽两个部分，电泳槽用有机玻璃或塑料等制成。
它有两个电极，用白金丝制成。
2．巴比妥缓冲液，pH8.6，离子强度0.06巴比妥钠12.76g，巴比妥1.66g于蒸馏水中加热溶解后再加水至1000ml? 3．氨基黑10B染色液氨基黑10B 0.5g，甲醇50ml，冰醋酸10ml，蒸馏水40ml4．漂洗液配法95%乙醇45ml，冰醋酸5ml，蒸馏水50ml 混匀。
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳，是一种分析和测定蛋白质的方法。
下面将介绍一些相关的参考内容，以帮助您更深入了解这一方法。
1. 应用和原理血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳（SER-PAGE）是一种常用的蛋白质电泳分析方法，可以用于分离和检测血清蛋白及其亚类。
其原理是基于蛋白质在电场中的迁移速率与其电荷质量比有关。
在薄膜电泳中，蛋白质样品在醋酸纤维素薄膜上进行电泳分离，然后通过染色等方法进行定量或定性分析。
2. 薄膜电泳装置和操作步骤薄膜电泳装置包括电源、原电极、测电极、薄膜和样品槽。
操作步骤通常包括制备样品和电解液，加载样品和电解液到薄膜中，接通电源，进行电泳分离，然后进行染色和分析。
3. 应用领域SER-PAGE广泛应用于生物化学、生物医药和临床诊断等领域。
在生物化学中，SER-PAGE可用于研究蛋白质结构与功能的关系。
在生物医药中，SER-PAGE可用于血清蛋白分析、监测蛋白质药物的纯度和一致性。
在临床诊断中，SER-PAGE可用于检测血清中的异常蛋白质，辅助癌症、心脏和免疫系统相关疾病的诊断。
4. SER-PAGE与其他电泳方法的比较相比较传统的PAGE方法，SER-PAGE具有操作简单、不需要注入胶、迁移速度快等优点。
与SDS-PAGE相比，SER-PAGE适用于纯化量较小的样品，并且对样品中的蛋白质亚基分离效果更好。
与凝胶电泳相比，SER-PAGE不需要特殊仪器设备，成本较低。
5. 发展趋势与进展SER-PAGE作为一种传统的电泳技术，仍在不断发展和改进。
比如，一些新的薄膜材料和成像技术的引入，使得分离和检测的灵敏度得到提高。
同时，一些研究也在调整电解液组成和pH值，以优化蛋白质的分离和迁移。
总结起来，血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳是一种广泛应用于蛋白质分离和分析的方法。
通过了解其原理、操作步骤和应用领域，可以更好地理解和应用这一技术。
随着技术的不断进步和改进，SER-PAGE有望在生物化学、生物医药和临床诊断等领域发挥更大的作用。
血清蛋白电泳(醋酸纤维薄膜法)
实验一血清蛋白电泳(醋酸纤维薄膜法)[目的]了解电泳法分离蛋白质的原理、操作方法及临床意义。
[原理]带电荷的蛋白质，在电场中向着与其所带电荷电性相反的电极泳动称为电泳。
血清中各种蛋白质的等电点不同，但大都在pH7以下，若将血清置于pH8.6的缓冲液中，则这些蛋白质均带负电，在电场中都向阳极移动。
由于各种蛋白质在同一pH环境中所带负电荷多少及分子大小不同，所以在电场中向阳极泳动速度也不同。
蛋白质分子小而带电荷多者，泳动速度快；反之，则泳动速度慢。
因此可将血清蛋白质依次分为清蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、b-球蛋白和g球蛋白五条区带，经染色可计算出各血清蛋白质含量的百分数。
醋酸纤维薄膜电泳具有微量、快速、简便及分辨率较高等优点，广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、脂蛋白、同工酶的分离和测定。
[仪器与材料]1．仪器：电泳仪、电泳槽、分光光度计或光密度仪。
2．材料：醋酸纤维薄膜、培养皿、滤纸、镊子、点样器、直尺、铅笔、剪刀等。
[试剂]1．巴比妥—巴比妥钠缓冲液(pH8.6，m=0.06)。
称取巴比妥2.21克和巴比妥钠12.36克，溶于500毫升蒸馏水中，加热溶解。
待冷至室温后，再加蒸馏水稀释至1000毫升。
2．染色液。
称取丽春红S0.4克及三氯醋酸6克；用蒸馏水溶解，并稀释至100毫升。
3．漂洗液。
3%(V／V)醋酸溶液。
4．透明液。
取无水乙醇75毫升和冰醋酸25毫升混匀备用。
5．0.4mol／L氢氧化钠溶液。
6．40%(V／V)醋酸溶液。
[操作]1．薄膜的准备：取醋纤薄膜(2厘米*8厘米)在毛面的一端约1.5厘米处，用铅笔轻划一直线，表露点样位置并编号。
然后将此薄膜置于巴比妥缓冲液中浸泡，待充分浸透(即膜条无白斑时)后取出，用洁净滤纸轻轻吸去表面的多余缓冲液。
2．点样。
取少量血清置于普通玻璃板上，用点样器的钢口蘸取血清(约3~5ml)，随后将钢口垂直“印”在点样线上，待血清渗入膜后移开点样器。
点样应注意，要适量、均匀和垂直，并避免弄破薄膜。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验原理
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验原理哎呀，今天咱们聊聊一个特别有趣的实验，那就是醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白。
这个实验可是大有来头哦，它能帮助我们了解血清蛋白的结构和功能，对于生物学家来说可是个非常重要的实验技术。
那么，这个实验到底是怎么做的呢？别着急，听我给你慢慢道来。
咱们得准备一些材料。
这里有一张实验清单：醋酸纤维薄膜、血清蛋白样品、电泳缓冲液、电极、电泳仪等等。
这些材料都是实验室里常见的东西，大家都应该很熟悉吧？好了，现在开始实验步骤。
第一步，咱们要把血清蛋白样品放到醋酸纤维薄膜上。
这个过程叫做涂膜。
涂膜的时候要注意，要让样品均匀地覆盖在薄膜上，不能有遗漏的地方。
涂好膜之后，咱们还得把薄膜放在一个特殊的液体里浸泡一下，这样才能让样品固定在薄膜上。
第二步，准备电泳缓冲液。
电泳缓冲液是用来调节电流强度和方向的，它的作用可大了。
咱们要把电泳缓冲液倒进一个容器里，然后把电极放进去。
电极有两种类型，一种是负极，一种是正极。
负极是阴离子发生器，正极是阳离子发生器。
咱们要根据实验需要选择合适的电极。
第三步，开始电泳。
电泳的过程就像是在水里游泳一样，只不过这次是在电流的作用下前进。
咱们要把电泳仪的电源打开，然后把电极放进电泳缓冲液里。
接着，按照实验需要调整电流强度和方向。
一般来说，电流越大，蛋白质分子的运动速度越快；方向则会影响蛋白质分子在电泳膜上的迁移距离。
第四步，观察结果。
电泳结束后，咱们可以把薄膜取出来，用显微镜观察蛋白质分子的位置和形状。
这样一来，就能看到血清蛋白的结构和功能啦！这个过程还需要一些技巧，比如调整显微镜的焦距和光源亮度等等。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验是一个非常有趣且实用的实验技术。
通过这个实验，我们可以更好地了解血清蛋白的结构和功能，为生物学研究提供有力支持。
所以，大家一定要认真学习这个实验哦！。
实验四血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳
• 4. 染色
取出纤维薄膜——放于培养皿染色液中染 色10min.
• 5. 漂洗
取出纤维薄膜——放在漂洗液中漂洗数 次——漂洗到可见色带清晰的电泳图谱。
• 6. 定量测定
• 2 点样：
• 取出2块载玻片——分别滴一滴血清蛋 白A和血清蛋白B——然后用盖玻片的平边 取样（注意均匀）——然后轻轻的在纤维 薄膜的铅笔横线上点样（注意要轻）
• 3 电泳：
• 在电泳槽中搭建好滤纸桥——倒入缓冲 液（注意两边液面高度一致）——将纤维 薄膜架于桥上（点样端靠近负极，点样面 朝下）——接好导线——调节电泳仪参 数——电泳30min
• 醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄 膜作为支持物的电泳方法。
• 醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素制成，ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ它具有均一的泡沫样的结构，有强渗透 性，对分子移动无阻力，作为区带电泳 的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、 样品用量少，应用范围广，分离清晰， 没有吸附现象等优点。
二 实验步骤
• 1. 浸泡
用镊子取醋酸纤维薄膜1张——分别 光泽面和粗糙面——然后在粗糙面离 边缘2cm处用铅笔轻轻的画一条与边 缘平行的直线（为了点样方便）—— 然后将薄膜放在巴比妥缓冲液中浸泡 20min——用镊子取出纤维薄膜——y 用滤纸吸干——平置于载玻片上（粗 糙面朝上）
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳（serum protein acetic acid
fiber membrane electrophoresis, SPAFME）是一种常用的分离和定
量检测血清中蛋白质的方法。
该技术的原理是将血清样品在pH8.6的缓冲液中加热变性，然后
在电泳板上涂覆一层纤维薄膜，将变性的蛋白质在电场作用下在薄膜
上进行分离，再用染料染色进行检测。
不同的蛋白质在电场作用下具
有不同的迁移速率和电荷，因此可以在薄膜上清晰地分离出多种蛋白
质成分，如白蛋白、球蛋白、β-球蛋白等。
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳是一种较为简单、快速、灵敏的检
测方法，可以用于检测肝病、血液病、肾病等疾病。
在临床医学中有
着广泛的应用价值，特别是对于肝脏疾病的筛查和诊断具有重要意义。
不过，在进行血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳的过程中需要严格控
制各个环节，如加热时间、电泳时间、染色时间等，否则可能会产生
偏差或错误的结果。
因此，操作时需要具有一定的技术水平和操作经验。
总的来说，血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳是一种在临床医学中经
常使用的检测方法，可以较为准确地定量分析血清样品中的蛋白质成分，对许多疾病检测和诊断有着重要的意义。
实验一 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
实验一血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳【实验目的】（1）了解电泳的一般原理，掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作技术。
（2）测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。
【实验原理】带电荷的胶体粒子在电场中移动的现象称电泳。
醋酸纤维素薄膜电泳法是以醋酸纤维素薄膜作为支持物。
血清中含多种蛋白质，当在pH这8.6时，这些蛋白质均带负电，它们在电场中向阳极移动，由于各种蛋白质所带负电荷多少及颗粒大小不同，所以在同一电场，同一pH环境中涌动速度不同。
本实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离各种血清蛋白。
血清中含有清蛋白，α~球蛋白，β~球蛋白，γ~球蛋白和各种脂蛋白等。
各种蛋白质由于氨基酸组分，立体构象，分子量，等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。
分子量小，等电点低，相同碱性pH。
表1 人血清中12种蛋白质的等电点及分子量缓冲体系中，带负电喝多的蛋白质颗粒在电场中移动速度快。
例如，以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清中pH=8.6的缓冲体系中电泳1h左右，染色后可显示5条区带。
清蛋白泳动最快，其余依次为α1~，α2~,β~及γ~球蛋白。
这些区带经洗脱后可用分光光度法定量，也可直接进行光吸收扫描自动绘出区带吸收峰及相对百分比。
临床医学常利用它们异常区带的出现作为临床鉴别诊断的依据。
此法由于操作简单，快速。
图1 正常人血清醋酸纤维素薄膜电泳示意图为清蛋白，2，3，4，5分别为α1,α2,β~及γ~球蛋白，6为点样原点（3）优点。
目前，已成为临床生化检验的常规操作之一。
【临床意义】清蛋白62-72% α1—球蛋白3-4% α2—球蛋白6-10% β~—球蛋白7-11% γ~—球蛋白9-18%血清蛋白电泳的病理改变多半是清蛋白降低和一种或二种以上球蛋白增加。
表2 血清蛋白的临床意义【试剂】1.巴比妥缓冲液（pH=8.6离子强度为0.06）：称取巴比妥纳12.76克，巴比妥1.66克，置于盛有200ml蒸馏水的烧杯中稍加热溶解后，移置100ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量 实验报告
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量实验报
告
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳是一种常用的蛋白质分离和定量技术。
本实验旨在通过电泳分离血清样品中的蛋白质，并利用醋酸纤维薄膜定量测定其含量。
以下是实验的具体步骤和结果。
实验步骤：
1. 样品制备：将血清样品离心并取上清液。
2. 样品混合：将取得的血清样品与等体积的缓冲液混合。
3. 样品加载：将混合样品加在聚丙烯酰胺凝胶电泳板上。
4. 电泳分离：通电使蛋白质沿着凝胶板移动，根据分子大小进行分离。
5. 醋酸纤维薄膜染色：将凝胶板放在染色缸中进行染色。
6. 图像采集：使用分析软件采集凝胶板图像。
7. 定量分析：利用染色蛋白质的光密度值进行定量分析。
实验结果：
经过电泳分离和醋酸纤维薄膜染色后，我们成功地分离出血清样品中的主要蛋白质，并通过定量分析得出各蛋白质的相对含量。
在实验中，我们发现血清蛋白主要包括白蛋白、球蛋白和纤维蛋白等。
结论：
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳是一种有效的蛋白质分离和定量技术，能够帮助我们了解血清样品中的蛋白质组成及含量。
通过实验，我们成功地完成了蛋白质的分离和定量分析，为后续的研究奠定了基础。
以上就是本次实验的全部内容及结果，希望对您有所帮助。
感谢您的阅读！。
实验三、血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
血清蛋白质的分类和特性
分类：白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原等 特性：白蛋白具有维持血浆渗透压、运输物质等功能；球蛋白具有免疫、防御等功能；纤维蛋白原具有参与凝 血的作用。
电泳分离血清蛋白质的机制
血清蛋白质带电性质：蛋白质分子带电在电场中向相反电极移动 电场作用：电场使蛋白质分子在电场中移动不同蛋白质分子移动速度不同 分离原理：利用蛋白质分子量、电荷和形状的差异实现蛋白质的分离 醋酸纤维素薄膜的作用：作为支持物使蛋白质分子在电场中分离
03
实验材料
实验所需的材料
血清蛋白质溶液
电泳缓冲液
添加标题
添加标题
醋酸纤维素薄膜
添加标题
添加标题
染色液和脱色液
材料的质量和来源
血清：应选用新鲜、无溶血、无污染的血清样本 醋酸纤维素薄膜：应选用孔径一致、无杂质、无气泡的薄膜 电泳缓冲液：应选用质量稳定、浓度适宜的电泳缓冲液 染色液和脱色液：应选用质量稳定、染色效果好的染色液和脱色液
准备实验器具和玻璃器皿确保清 洁干燥。
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
准备电泳仪和电源检查仪器是否 正常工作。
熟悉实验步骤和注意事项确保实 验安全可靠。
操作步骤及注意事项
添加项标题
准备实验器材和试剂确保干净、无菌。
添加项标题
将血清样品与染色剂混合摇匀后滴加在醋酸纤维素薄膜上。
添加项标题
将薄膜放入电泳槽中加入电极缓冲液接通电源进行电泳。
解读：实验结论表明醋酸纤维素薄膜电泳是一 种有效的血清蛋白质分离和分析方法具有操作 简便、分离效果好、分辨率高等优点。
意义：实验结论对于临床诊断、疾病监测、疗效评 估等方面具有重要的应用价值可以帮助医生更好地 了解患者病情为制定治疗方案提供依据。
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实验一血清蛋白电泳(醋酸纤维薄膜法)
[目的]
了解电泳法分离蛋白质的原理、操作方法及临床意义。
[原理]
带电荷的蛋白质，在电场中向着与其所带电荷电性相反的电极泳动称为电泳。
血清中各种蛋白质的等电点不同，但大都在pH7以下，若将血清置于pH8.6的缓冲液中，则这些蛋白质均带负电，在电场中都向阳极移动。
由于各种蛋白质在同一pH环境中所带负电荷多少及分子大小不同，所以在电场中向阳极泳动速度也不同。
蛋白质分子小而带电荷多者，泳动速度快；反之，则泳动速度慢。
因此可将血清蛋白质依次分为清蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、b-球蛋白和g球蛋白五条区带，经染色可计算出各血清蛋白质含量的百分数。
醋酸纤维薄膜电泳具有微量、快速、简便及分辨率较高等优点，广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、脂蛋白、同工酶的分离和测定。
[仪器与材料]
1．仪器：电泳仪、电泳槽、分光光度计或光密度仪。
2．材料：醋酸纤维薄膜、培养皿、滤纸、镊子、点样器、直尺、铅笔、剪刀等。
[试剂]
1．巴比妥—巴比妥钠缓冲液(pH8.6，m=0.06)。
称取巴比妥2.21克和巴比妥钠12.36克，溶于500毫升蒸馏水中，加热溶解。
待冷至室温后，再加蒸馏水稀释至1000毫升。
2．染色液。
称取丽春红S0.4克及三氯醋酸6克；用蒸馏水溶解，并稀释至100毫升。
3．漂洗液。
3%(V／V)醋酸溶液。
4．透明液。
取无水乙醇75毫升和冰醋酸25毫升混匀备用。
5．0.4mol／L氢氧化钠溶液。
6．40%(V／V)醋酸溶液。
[操作]
1．薄膜的准备：取醋纤薄膜(2厘米*8厘米)在毛面的一端约1.5厘米处，用铅笔轻划一直线，表露点样位置并编号。
然后将此薄膜置于巴比妥缓冲液中浸泡，待充分浸透(即膜条无白斑时)后取出，用洁净滤纸轻轻吸去表面的多余缓冲液。
2．点样。
取少量血清置于普通玻璃板上，用点样器的钢口蘸取血清(约3~5ml)，随后将钢口垂直“印”在点样线上，待血清渗入膜后移开点样器。
点样应注意，要适量、均匀和垂直，并避免弄破薄膜。
3．平衡与电泳。
将已点样的薄膜加样面朝下，加样端置于阴极端，平整地贴于电泳槽的支架上拉直。
支架上事先放置好两端浸入缓冲液的用四层滤纸条作的“滤纸桥”(如图2)。
平衡数分
钟至薄膜重又湿润时方可通电进行电泳。
一般电压为120~160伏，电流约0.4~0.6毫安／厘米，通电时间40~50分钟，待电泳区带展开约3.5厘米时断电。
4．染色。
小心取出薄膜，直接浸于丽春红S染色剂中5~10分钟(以清蛋白区带染透为止)。
然后在漂洗液中连续浸洗数次，使薄膜底色漂净，即得五条蛋白色带。
从阳极端起依次为清蛋白、a1、a2、b和g-球蛋白。
5．透明。
若要保存薄膜，待薄膜完全干燥后，置透明液中10～20分钟，取出贴于玻璃板上，干后则透明，可长期保存。
6．定量及计算。
将漂洗净的薄膜吸干，剪下各蛋白色带，另于空白部位剪一相当于清蛋白宽度的膜条做空白，分别置于0.4mol／L NaOH溶液的试管中，清蛋白管加4毫升，其余各管加2毫升，振摇，使溶液浸没膜条后，置37℃水浴10分钟，使其色泽浸出。
再向各管加40%(V／V)醋酸0.4毫升，清蛋白管则加0.4毫升，以中和部分NaOH，使色泽变红色。
取各管上清液用分光光度计，在520nm处，以空白管调工作零点后。
分别测得清蛋白管、a1、a2、b和g-球蛋白各管的吸光度值。
定量计算时，先计算各光密度值的总和：
A T = 2×A清+ A a1 + A a2 + A b + A g
再计算血清各部分蛋白质所占的百分率：
Ax表示各球蛋白组分 (a1、a2、b 和 g ) 的吸光度。
若条件许可，也可将已透明的薄膜放入全自动光密度计或其他光密度计暗箱内，进行扫描分析与计算。
血清蛋白醋纤薄膜电泳的参考正常值为：
白蛋白 62～71 %
a1球蛋白 3～4 %
a2-球蛋白 6～10 %
b-球蛋白 7～11 %
g-球蛋白 9～18 %。