抗血清制备及抗体效价测定

摘要............................................................................. .. (4)

【实验过程】 (5)

PartⅠ. NDV 抗血清制备 (5)

一、实验原理 (5)

二、实验仪器、材料和试剂 (7)

1. 仪器 (7)

2. 材料 (7)

3. 试剂 (7)

三、方法和步骤 (7)

（一）NDV 兔抗血清制备 (7)

1. 家兔捉拿方法 (7)

2. 家兔固定方法 (8)

3. 初次免疫 (9)

4. 二次免疫 (10)

5. 终末免疫 (10)

6. 试血 (10)

7. 颈动脉放血 (10)

8. 血清分离 (12)

9. 抗血清保存 (12)

（二）NDV 鼠抗血清制备 (12)

1. 小白鼠的捉拿和固定 (12)

2. 初次免疫 (13)

3. 二次免疫 (15)

4. 终末免疫 (15)

5. 试血 (16)

6．放血 (18)

7．血清分离 (19)

8．抗血清保存 (19)

Part Ⅱ. 琼脂双扩散实验检测抗体效价 (19)

一、基本原理 (19)

二、实验仪器、材料和试剂 (20)

1. 仪器 (20)

2. 材料 (20)

3. 试剂 (20)

三、方法和步骤 (20)

1. 灭活鸡新城疫病毒 Ulster 2C 株抗原提取 . 20

2. 1%琼脂糖配制 (20)

3. 倒平板 (21)

4. 打孔 (21)

5. 稀释抗血清 (22)

6. 加样 (22)

7. 孵育 (23)

8. 结果观察 (23)

Part Ⅲ. 酶联免疫吸附试验测定 NDV 抗血清效价 (23)

一、基本原理 (23)

二、实验仪器、材料和试剂 (24)

1. 仪器 (24)

2. 材料 (24)

3. 试剂 (24)

三、方法和步骤 (25)

1. 鸡新城疫病毒 Ulster 2C 株灭活抗原提取 . 25

2、抗原包被 (25)

3. 封闭 (25)

4. 洗板 (25)

5. 稀释抗血清 (25)

6. 加抗血清 (26)

7. 洗板 (26)

8. 加酶标二抗 (26)

9. 洗板 (27)

10. 显色 (27)

11. 终止 (27)

12. 读数 (27)

13. 结果判定 (27)

Part Ⅳ. 免疫印迹实验鉴定抗体的特异性 (27)

一、基本原理 (27)

二、实验仪器、材料和试剂 (28)

1. 仪器 (28)

2. 材料 (28)

3. 试剂 (28)

（1）SDS-PAGE 相关试剂： (28)

（2）Western blotting 相关试剂： (29)

三、方法和步骤 (30)

1. SDS-PAGE (30)

2. 转膜 (31)

3. 免疫检测 (33)

（1）膜的封闭 (33)

（2）洗膜 (33)

（3）加入一抗 (33)

（4）洗膜 (33)

（5）与二级抗体作用： (33)

（6）洗膜 (33)

（7）Odessey 近红外成像仪扫描成像 (34)

【实验结果及分析】 (34)

NDV 抗血清制备及抗体效价测定

摘要：抗血清，新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）又称亚洲鸡瘟病毒、伪鸡瘟病毒或禽肺脑炎病毒。在病毒分类学中的位置属于副黏病毒科（Paramyxoviridae）、副黏病毒属（Paramyxovirus）中的一个种。该病毒主要危害鸡、珠鸡和火鸡，在被侵袭的鸡群中迅速传播，强毒株可使鸡群全群毁灭。以新城疫病毒灭活疫苗（Ulster 2C 株）灭活油剂苗多种途径免疫兔和小白鼠，制备新城疫病毒抗血清。也叫免疫血清，是指含有免疫蛋白的血清。抗体效价指抗体的物理状态及其在体内滞留时间，以其与抗原反应的多少来表示其免疫效果。此次实验主要是进行家兔与小鼠的新城疫病毒抗血清的制备过程，并通过酶免疫吸附试验、兔疫印迹实验对其进行抗体效价检测。关键字：NDV 抗血清抗体效价免疫

【实验过程】

本次实验一共分为四个大步骤：

PartⅠ. NDV 抗血清制备

一、实验原理

将具有免疫原性的物质注入健康动物体内后，抗原可刺激机体相应 B 细胞增殖、分化形成浆细胞并分泌特异性抗体。待动物血清中存在大量抗体时，采集动物血液，分离析出血清，便得到所需的抗血

清（免疫血清或抗体）。由于抗原性物质通常具有多个抗原决定簇，可以刺激机体产生多种抗体形成细胞克隆，合成和分泌各种抗原决定簇的抗体，免疫血清中

实际上是含有多种抗体的混合物，所以这种免疫法获得的免疫血清又称为多克隆抗体（Polyclonal antibody，PcAb）。多克隆抗体的制备是一个复杂的过程，为了获得特异性强，

效价高的抗血清，除了抗原的因素外，还需注意动物品系的选择、抗原注射的浓度、剂量、

次数、间隔时间及注射途径等。对于免疫原性较弱的可溶性抗原(如蛋白质类抗原)要加入佐

剂，以增强免疫性。

本实验介绍新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）抗血清的制备过程。新城疫病

毒（Newcastle disease virus，NDV）又称亚洲鸡瘟病毒、伪鸡瘟病毒或禽肺脑炎病毒。在病

毒分类学中的位置属于副黏病毒科（Paramyxoviridae）、副黏病毒属（Paramyxovirus）中的

一个种。该病毒主要危害鸡、珠鸡和火鸡，在被侵袭的鸡群中迅速传播，强毒株可使鸡群全

群毁灭。以新城疫病毒灭活疫苗（Ulster 2C 株）灭活油剂苗多种途径免疫兔和小白鼠，制

备新城疫病毒抗血清。