孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程
血型不完全抗体检测卡—母体IgG抗体效价检测
5）37°C孵育15分钟；
6 ）离心5分钟（9rpm2分钟，15rpm3分钟）；
7）肉眼观察结果。
结果判定：
阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。
5、试剂卡应放在18-25C储存，如若长期放在4C冰箱，建议每1-2个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。
6、每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。
7、红细胞悬液的浓度控制在0.5% - 0.8%之间。
**医院文件编号:
**
输全抗体检测卡一母体IgG抗体效价检测=r八 =n =—
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反应原理
微柱凝胶免疫反应的本质是红细胞凝集试验，也可称之微柱凝胶血凝试验（MicrocolumnGel Heamagglutination As，aMGHA ）。
试剂材料：
1、DTT （或2-Me）应用液2、妻子血清3、效价检测卡4、丈夫0.5-0.8%工细胞悬液
阴性结果：红细胞抗原无相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的尖底部，为阴性反应。
反应强度：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面，为强阳性反应；复合物在胶中，为弱阳性反映；愈靠近胶底部颗粒愈小，反应愈弱。
完全溶血凝胶和液体无凝集或未凝集的红细胞，液体出现透明清澈红色
不完全溶血残留红细胞在胶表面、胶中或胶底部，液体出现透明清澈红色
混合凝集红细胞复合物位于凝胶表面和凝胶底部
注意事项
1、血清标本：血清标本必须充分去除纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍红细胞沉淀，呈假阳性反应。
母体IgG抗体效价检测卡操作规程
孕妇血清IgG抗体效价检测操作规程[样本要求]：血样标本最好采用EDTA抗凝（也可以用枸橼酸钠等抗凝），用血清代替血浆进行检测时，用前离心，2000g×10min，防止纤维蛋白干扰反应结果。
[样品准备]：试剂配制：用985ulPH7.4的PBS(或者生理盐水)溶解15ul二巯基乙醇（2-Me）,即为0.2M(2-Me)应用液,密封，避光，置2---6℃保存.红细胞标本的制备：用生理盐水配置红细胞悬液，红细胞最终浓度为1%左右.血清标本的制备：将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中,10分钟后离心取上清;或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中,4℃放置12小时,或37℃放置2小时后离心,2000Rpm,10分钟,取上清.该上清不得有絮状物或沉淀；[配套试剂]：孕妇IgG抗体效价卡，标准A、B、O红细胞（取决于父亲血型），0.2M(2-Me)应用液[实验步骤]1、试剂卡室温平衡，离心一次，标记编号；2、配制中和血浆：先取待检者血浆200微升与生理盐水600微升做4倍稀释，然后取稀释后的标本和0.2M巯基乙醇(2-Me)应用液各200ul，混匀，37℃孵育30---60分钟，（充分破坏标本中IgM类抗体）既得到孕妇的中和血浆。
34、在所有孔中加入50ul健康人O型1%红细胞悬液(测定孕妇ABO血型系统以外IgG血型抗体)或所有孔中加入50ul健康人A型或B型1%红细胞悬液(测定孕妇ABO血型系统IgG血型抗体)，然后加入上述表格中稀释的中和血浆各50ul5、把加有血浆和红细胞的微柱卡置37 ℃专用孵育器孵育15分钟；6、用专用离心机离心5分钟（900r/min2分钟1500r/min3分钟）。
判定结果。
[结果判定]效价值：产生3+凝集的最高稀释度，其倒数即为效价。
[参考值]1、RH系统抗体效价16有临床意义2、ABO系统抗体效价64有临床意义[注意事项]1.据文献报道微柱凝胶法检测出的母体效价值比常规聚凝胺和抗人球蛋白试管法高出1-2个滴度（根据P.L.Mollison所著教材《临床医学中的输血（Blood Transfusion in Clinical Medicine）》）2. 红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。
妊娠妇女体内IgG抗体效价的检测及临床意义
抗 体 水平 是 预 防 ＨＤ 的 主要 手段 ， 般 认 为 妊 娠 妇女 血 清 中 ｌＧ 抗 Ａ 妇 女 血中 ｌＧ抗 Ａ和 （ ） Ｂ抗体 升 高 而且 ｌＧ分 子量 小 ， Ｎ 一 ｇ ｇ 或 抗 ｇ 可通 过胎 （ ） 价 ≥ １： ４时 ， 儿 有 可 能 受 害 ［ 。 现 对 本 院 ２ ０ Ｂ效 ６ 胎 ０ ９以来 检 测 的 盘 进 入 胎儿 血 液循 环 ， 胎 儿 红 细 胞 上存 在相 关 抗 原 ， 原 抗 体 反 应 则 若 抗
。
结 果 ：１ 血 清 中 ＩＧ 抗 体 效价 的异 常检 出率 为 ３． １ ２ １６ ３ 。不 同年 龄妊 娠 妇女 血 清 抗 Ａ 和抗 Ｂ抗 体 阳性 率 比较 有显 著 性 差异 （ ６ ３份 ｇ ９ ３ ％（ ４ ／１ ） Ｘ
＝１． ８ ５ ７ Ｐ＜ ００ ） 结论 ：妊娠 妇 女产 前检 测 ｌＧ抗 Ａ（ ） 体 的效 价对 于预 防新 生 儿溶 血 具有 重 要意 义 ， 且 随着妊 娠 妇 女 年 龄 的增 大， ． １ ｇ Ｂ抗 并 其发 生
ｇｏ ｌ ｔ ｄ ｏ ｅ ｉｔｎ ｅａ ａｎ ｔＢ ＩＧ ｈ Ｏ ｌｏ ｒｕ ｎｉｏ ｙｔｔｒｄ ｔｃｉｎ Ｒｅｕｔ： ｅ ｕ ＩＧ １ ｎｔ ｏ ｙｔ ｅ ａｅ ｔ ｂ ｏ— ｌｂｕｉ ｍｅｈｏ ｒｒｓｓａ ｃ ｇ ｉｓ ｇ ｔ ｅＡＢ ｂｏ ｄｇｏ ｐａ ｔ ｄ ｉ ｅｅ ｔ ． ｓｌｓ Ｏｆｓ ｒ ｍ ｇ ６ ３ａ ｉ ｄ ｉ ｒｃ ｓ ｓｗｉｈａ ｎ ｒ ｎ ｂ ｅ ｏ ｂ ｔ
ｗｉｈ ｔ ｅ ｉ ｃ ｅ ｓ ｆｗｏ ｅ ｇ ｉｓ ｏ ｃ ｒ ｅ ｃ ｆ ｎ ｏ ｔ ｌｈ ｍｏ ｙ ｉ ． ｔ ｈ ｎ ｒ ａ ｅ ｏ ｍ ｎ ａ ｅ， ｃ ｕ ｒ ｎ ｅ ｏ ｅ ｎａ ａ ｅ ｌ ｓｓ ｔ
BIOVUE母亲IgG效价测定操作规程
母亲IgG抗体（抗A/抗B）效价检测操作规程一、项目名称、检验方法名称1．项目名称：母亲IgG抗体（抗A/抗B）效价检测2．检验方法名称：柱凝集二、临床意义当母亲血清中存在高效价的IgG型抗A/抗B抗体时，其ABO血型不合胎儿有可能发生新生儿溶血。
母亲血清IgG型抗A/抗B抗体效价测定，有助于预测NHD的发生，因而可以指导临床对NHD进行相应的防治。
三、方法学原理ABO新生儿溶血症常见于母亲为O型的非O型的新生儿，是由于母体含有对抗新生儿血型抗原的IgG型抗A/抗B抗体，该抗体可以通过胎盘进入胎儿体内，从而破坏胎儿的红细胞。
因为人血清中的抗A/抗B抗体通常是IgM型的，要单独测定IgG型抗A/抗B抗体，必需先去除IgM的干扰，所以待检血清先用2-巯基乙醇（2-Me）预先处理，灭活IgM抗体，剩下的IgG型抗体则可通过间接抗人球蛋白试验进行检测。
经过孵育，IgG抗体先致敏A型/B型红细胞，预置在试剂柱中的抗人球蛋白再与IgG抗体的Fc段结合，形成桥连，致敏红细胞因桥连作用而出现凝集反应，经过离心处理，凝集的红细胞被阻隔在分离柱的上方而被判为阳性。
将经过2-Me预处理的待检血清进行倍比稀释，将出现阳性反应的最大稀释度血清的稀释度倒数作为血清抗体效价。
该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。
正常具有抗原的人红细胞将与相应的抗体发生凝集反应，BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。
加入红细胞并将试剂卡离心后，发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面，而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。
四、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物1．试剂卡品牌：美国强生奥索2．代号：BioVue －poly Cassettes3．包装规格：400卡/箱试剂卡(707300);100卡/箱试剂卡(707350)4．试剂成分：抗人球蛋白(lgG,C3b/C3d)检测卡有6根微柱组成，每一柱中含有缓冲液，其成分为牛血清蛋白，大分子增强剂以及0.1％叠氮钠，0.01M的EDTA.成分描述第1～6柱：抗人球蛋白、抗-lgG、-C3d;多特异性抗－lgG(兔)抗－C3b(鼠单克隆)(克隆F7G3) 抗－C3d(鼠单克隆)(克隆C4C7) FD＆C1＃蓝色染料FD＆C5＃黄色染料5．试剂的储存与效期：储存条件：2～25℃环境保存。
孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程
孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程1、目的为规范输血科红细胞血型抗体效价测定的技术操作，确保检测结果准确，依据《输血实验室管理程序》4.1.9条款的要求制定本规程。
2、适用范围本文件适用于本院输血科测定IgG抗-A(B)抗体效价，用以评估胎母血型不合妊娠时发生胎儿及新生儿免疫溶血性疾病（HDN）的风险程度及其他临床需要。
3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。
4、原理将受检血清（如检测IgG类红细胞血型抗体，先用2-巯基乙醇处理）经连续倍稀释后与表达检测目标抗体对应抗原的试剂红细胞反应，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价。
5、试剂：生理盐水，0.2mol/L的2-巯基乙醇（2-Me）应用液，博迅的微柱凝胶抗人球蛋白卡，0.8%的A和B型标准试剂红细胞。
6、仪器：XTL-4.7细胞洗涤离心机，博研微术凝胶卡专用孵育器及离心机，电热恒温水浴箱。
7、操作步骤与方法：7.1准备试剂：观察微柱凝胶卡的外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。
吸取2-Me15μl,加生理盐水至1ml为0.2M 2-Me 应用液。
7.2血清/血浆标本的制备：取血清50ul和150ul的生理盐水作1：4的稀释后再加入0.2M 2-Me应用液200ul混匀，密封试管口，37℃水浴60分钟。
灭活母体血清中IgM时，必须将试管口密封，并经常摇晃试管，以保证灭活效果。
同时用单克隆抗A或抗B作为对照，用来确认2-Me是否有效灭活IgM抗体。
7.3取7只干净试管，做好标记；在第1管中加入处理后的血清200ul和200ul生理盐水，混匀（为1:16稀释）；第2-7管中依次加200ul的生理盐水和前一管中的血清/血浆200ul，做倍比稀释。
7.4将抗人球蛋白卡标记好，从第7管开始到第2管依次将倍比稀释后的相应50ul血清分别加入标记孔中。
O型RhD阳性的孕妇血清IgG抗A(B)抗体效价的检测分析
O型RhD阳性的孕妇血清IgG抗A（B）抗体效价的检测分析目的探讨妊娠对O型KhD阳性的孕妇血清IgG抗A（B）抗体效价的影响。
方法选择丈夫血型为非O型的RhD阳性，自身血型为O型RhD阳性的孕产妇1036例，分为两组，对照组为680例首次妊娠妇女，观察组为356例非首次妊娠妇女，两组患者同时进行血清IgG抗A抗体和抗B抗体的效价检测。
结果对照组发现IgG抗A（B）抗体效价>1：64的孕妇154例，占比22.65；观察组发现IgG抗A（B）抗体效价>1：64的孕妇246例，占比69.1%。
结论丈夫血型为非。
型的RhD阳性的情况下，O型RhD阳性的孕妇血清IgG抗A（B）抗体效价有随妊娠次数的增加而增高的趋势。
标签：孕妇；不规则抗体；效价；IgG抗A（B）抗体；新生儿溶血病新生儿溶血病（hemolytie disease of the newbom，HDN）是由于母婴血型不合，母亲体内缺乏胎儿的红细胞血型抗原，当胎儿红细胞通过胎盘进入母体循环后，使母体产生相应的免疫抗体，此抗体又径胎盘进入胎儿血液循环，并与胎儿红细胞膜表面的相应抗原结合，这些被免疫抗体覆盖的红细胞随之在网状内皮系统被巨噬细胞及自然杀伤细胞释放的溶酶体酶溶解而破坏导致的一种溶血病。
ABO血型不合所致的HDN多见于O型母亲所生的A或B型新生儿，這主要是因为O型母亲所产生的抗A或抗B抗体[抗A（B）抗体]为IgG抗体，可通过胎盘进入胎儿循环Ⅲ。
除红细胞外，ABO血型物质广泛存在于自然界，母亲还可通过输血、预防接种、某些食物或细菌的刺激等途径产生IgG抗A（B）抗体。
本研究拟通过研究妊娠次数对O型RhD阳性的孕妇血清IgG抗A（B）抗体效价的影响，探讨IgG抗A（B）抗体效价检测对新生儿溶血病的预防意义，以期为临床提供参考依据。
1.资料与方法1.1一般资料选择丈夫血型为非0型（A型、B型或AB型）的RhD陽性，自身血型为0型RhD阳性的妊娠28 w左右的孕妇1036例，其中首次妊娠的孕妇为680例，非首次妊娠（再次或多次妊娠）的孕妇356例，年龄为21-42岁。
孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程
孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程1、目的为规范输血科红细胞血型抗体效价测定的技术操作，确保检测结果准确，依据《输血实验室管理程序》4.1.9条款的要求制定本规程。
2、适用范围本文件适用于本院输血科测定IgG抗-A(B)抗体效价，用以评估胎母血型不合妊娠时发生胎儿及新生儿免疫溶血性疾病（HDN）的风险程度及其他临床需要。
3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。
4、原理将受检血清（如检测IgG类红细胞血型抗体，先用2-巯基乙醇处理）经连续倍稀释后与表达检测目标抗体对应抗原的试剂红细胞反应，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价。
5、试剂：生理盐水，0.2mol/L的2-巯基乙醇（2-Me）应用液，博迅的微柱凝胶抗人球蛋白卡，0.8%的A和B型标准试剂红细胞。
6、仪器：XTL-4.7细胞洗涤离心机，博研微术凝胶卡专用孵育器及离心机，电热恒温水浴箱。
7、操作步骤与方法：7.1准备试剂：观察微柱凝胶卡的外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。
吸取2-Me15μl,加生理盐水至1ml为0.2M 2-Me 应用液。
7.2血清/血浆标本的制备：取血清50ul和150ul的生理盐水作1：4的稀释后再加入0.2M 2-Me应用液200ul混匀，密封试管口，37℃水浴60分钟。
灭活母体血清中IgM时，必须将试管口密封，并经常摇晃试管，以保证灭活效果。
同时用单克隆抗A或抗B作为对照，用来确认2-Me是否有效灭活IgM抗体。
7.3取7只干净试管，做好标记；在第1管中加入处理后的血清200ul和200ul生理盐水，混匀（为1:16稀释）；第2-7管中依次加200ul的生理盐水和前一管中的血清/血浆200ul，做倍比稀释。
7.4将抗人球蛋白卡标记好，从第7管开始到第2管依次将倍比稀释后的相应50ul血清分别加入标记孔中。
孕妇血清IgG抗A（B）抗体效价的检测与分析
孕妇血清IgG抗A（B）抗体效价的检测与分析【摘要】目的了解血型抗体效价异常在孕妇中所占比率及临床意义。
方法用抗人球蛋白法进行IgG抗A或抗B的ABO血型抗体效价检测。
结果523份血清中IgG抗体效价大于1∶64者有197例，异常检出率为37.67%。
不同孕次、不同年龄孕妇血清抗A和抗B抗体阳性率比较差异有高度显著性(P<0.01)。
结论在产前保健孕妇中进行ABO血型抗体效价检测，及早发现，及时治疗，可减少由于母婴血型不合引起的溶血病发生。
【关键词】幼红细胞增多症，胎儿；IgG抗体；血型目前，由于母婴ABO血型不合致使母体血液中的IgG抗A（B）效价增高而引起的新生儿溶血病（HDN）占整个新生儿溶血病比例的90%以上。
检测孕妇血清中IgG血型抗体水平是间接监测胎儿情况指标之一，是预防HDN的主要手段。
笔者对本院2006年2月以来检测的523例O型孕妇血清IgG抗A（B）抗体检测资料进行分析，报道如下。
1 资料和方法1.1 一般资料2006年2月～7月，在我科实验室检查的O型血孕妇523例，配偶均为非O 型血。
孕妇年龄20～38岁，孕20～35周，身体健康，无肝、肾、血液等方面疾病，无输血史。
主诉第一次妊娠者283例，2次及2次以上妊娠者240例。
其中，1次妊娠者按孕妇年龄分为A组20～29岁共197例，B组30～38岁86例。
1.2 试剂与方法采用深圳市伯劳特生物制品有限公司生产的IgG抗A（B）抗体快速检测试剂盒，其操作步骤严格按其配套使用说明书操作。
1.3 结果判断孕妇血清中抗A或抗B效价≥1∶64为阳性。
1.4 统计学方法计数资料采用χ2检验。
2 结果2.1 受检孕妇血清中IgG抗A（B）效价分布523例孕妇血清中IgG抗A（B）效价≥1∶64者197例，占37.67%，其中≥1∶128者54例，占10.33%，≥1∶256者15例，占2.87%。
两种方法检测孕妇产前血清中ABO血型IgG抗体效价的结果分析
平 均年 龄 ２ ． 。 经 产 妇 ２ ８ ９岁 ３例 ，初 产 妇 无 妊 娠 史 ２ ９例 ， 初 产 妇有 妊 娠 史 ４ ４例 。 １２ 材 料 ：本 实验 所 用 抗 人 球 蛋 白试剂 由上 海 血 液 生 物 医 ．
随机 抽 取 ２ １ ００年 ４月—８月期 间在 本 院产 前检 查 Ｏ 型 孕妇 ９ ６例 ，分 别 运 用微 柱 凝 胶 抗 人 球 蛋 白法 和 经 典 抗 人
球 蛋 白法检 测 其 血 清 中 Ｉ ｇ Ｇ抗 一 Ａ、抗 一 体 效 价 ，并 对 结 果进 行 比较 分 析 。 结 果 前 一种 方 法 比后 一 种 方 法判 读 结 果 Ｂ抗
目前 检测 孕 妇 产前 Ａ Ｏ血 型 ＩＧ抗 体 效 价 仍 然 是 预 防 Ｂ ｇ Ａ Ｏ血 型 系统 新 生 儿 溶 血 病 发 生 的 一 个 重 要 参 考 指 标 ，微 Ｂ
规程》 标准判读 结果 。微 柱凝胶 抗人球 蛋 白法按公 司提
供 的操 作 说 明 书 进 行结 果 判 读 。
・
４ ８・
广
州
医
药 ２ １ 年第 ４ 鲞箍 鱼 ００ Ｌ
・
医学 检 验 ・
两 种方 法检测 孕妇 产前 血 清 中 Ａ Ｏ血型 ＩＧ抗 体效 价 的结果 分 析 Ｂ ｇ
高 小华 胡永 红 陈 小 洁
广州 市第一人 民医院输血科 （ １ １０ ５０８ ）
【 摘
方法
要 】 目的 探讨运用微 柱凝胶技术检测孕妇产前血 清中 Ａ Ｏ血 型 ＩＧ抗体效价的可行性及 参考值设定。 Ｂ ｇ
抗一 Ｂ抗体效价的结果 ，探讨运用微柱凝胶技 术检测孕妇 产
微柱凝胶法检测孕妇IgG抗-A(B)抗体效价结果的判定
ＤＯＩ １ ． ９ ９ ｊ ｉｓ ． ６ ３ ４ ３ ． ０ ２ １ ． ３ ： ０ ３ ６ ／．ｓ ｎ １ ７ — １ ０ ２ １ ． １ ０ ０
文献标识码 ： Ａ
文 章 编 号 ： ６ ３ ４ ３ （ ０ ２ １ － ３ ７０ １ ７ — １ ０ ２ １ ） １ １ ４ —３
１ 资 料 与 方 法
１ ３ ２ 试 管 法 抗 人 球 蛋 白试 验 ．．
取 上 述 １： ～ １：１ ２ ２ ０ ４稀 释
度 血 清 各 ｌ０“ 严 格 按 《 国 临床 检 验 操 作 规 程 》 作 ， 果 Ｏ Ｌ， 全 操 结 以显 微 镜 观 察 到 “ ＋ ” 集 的 最 高 稀 释 度 为 抗 体 效 价 。 以 １ 凝 １： ４ 价 作 为 临 床 参 考 界 值 。 ６效
１１ 一般资料 ．
２１ ０ ０年 ９ 至 ２ １ 月 ０ １年 １ 月 在 本 院 进 行 产 前 ２
检 查 ， 丈 夫 ＡＢ 血 型 不 合 的 Ｒｈ Ｄ） 性 的 ０ 型 待 产 孕 妇 与 Ｏ （ 阳
凝胶 法 ３ 凝 集 报 告 与试 管 法 阳 性 率 差 异 无 统 计 学 意 义 （ ＞ ０ ０ ） ＋ Ｐ ． ５ 。微 柱 凝胶 法 以 凝 集 １ 、＋ 报 告 ， ＋ ３ 与传 统 试 管 法 结 果相 关 系
数 分 别 为 ０ ８ ７ ０ ９ ９ 均 高度 相 关 。 以 微 柱 凝 胶 法 １ 凝 集 判 定 结 果 、 价 １： ５ ． ９ 、． １ ， ＋ 效 ２ ６为 决 定 值 和 以 ３ 凝 集 判 定 结 果 、 价 ｌ：６ ＋ 效 ４
分 另 为 ｌ：２ ｌ：４ ｌ ：８ １：１ 、 、 、 、 ６ １：３ 、 ２ １：６ 、 ４ １：１ ８ ２、
18-抗人球蛋白检测卡(效价测定)操作---作业指导书
1.1 微柱凝胶试剂卡的准备观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，将卡放置平衡至室温，使用前置离心机3000r/min 1 min离心。
1.2 检测标本的准备
1.2.1 待检标本的准备：将待检全血标本离心分离红细胞与血浆（血清），取上清（该上清不得有絮状物或沉淀）。
取待检血清和2-Me(二巯基乙醇)应用液各200微升，充分混匀，℃水浴2小时（以充分破坏血清中的IgM类抗体）。
1.2.2 红细胞悬液的制备：将标准红细胞配成1%生理盐水悬液。
操作步骤
2.1 取7支干净试管排于试管架上；将第一管加入100微升灭活血清和700微升生理盐水（原液为1:1稀释，此时稀释比例为1：16）。
2.2 第2－7管中分别加入400微升生理盐水；从第一管中吸出400微升的液体加入第二管，混匀，在从第二管吸出400微升加入第三管混匀，依次倍比稀释。
2.3 取抗人球蛋白检测卡，撕去铝箔，在4管中个依次加入4-7管（1:128 – 1：1024
生科抗人球蛋白检测卡检测建议参考值：孕妇IgG(抗A/抗B)效价＜256。
注意事项
3.1 检测卡若在冰箱储存，使用前须放置实验室平衡至室温。
3.2 检测卡试验前，应3000r/min, 离心1 min，正立放置待用。
3.3 如因运输过程产生的气泡，可将检测卡放置在漩涡震荡器上震荡，使气泡漂移至胶面为止，3000r/min, 离心2 min。
3.4 细菌污染、纤维蛋白析出，抗凝不佳的血，可产生假阳性。
3.5 离心速度过快、时间过长，试剂失效等因素均可导致假阴性。
孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程
孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程
【原理】新生儿溶血病HDN发生的主要原因在于母子血型不合,血型系统最主要的类型为ABO血型系统本实验采用微柱凝胶检测孕妇血清中的抗A、BIgG抗体效价。
【试剂】 6%牛血清白蛋白生理盐水凝胶卡
【标本采集】孕妇静脉血3毫升、孕妇爱人静脉血3毫升EDTA-NA抗凝。
将孕妇标本制作成血清标本孕妇爱人标本制成0.5%红细胞标本用生理盐水洗涤后配制【操作步骤】
1.取孕妇血清标本50微升加入等体积的牛血清白蛋白，37度水浴温育60分钟
2.将血清倍比稀释成9管依次为1 4、8、16、32、64、128、512、1024、2048管
3.将卡作好标记在所有孔中加入经处理好的孕妇血清标本50ul
4. 然后在所有孔中加入50ul的孕妇爱人0.5%红细胞标本
5. 37度孵育15分钟专用孵育箱
6.专用离心机离心5分钟 900rpm2分钟 1500rpm3分钟
7. 取出判定结果
【结果判定】
阳性结果红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中
阴性结果红细胞完全沉降到胶底部在凝胶管底部形成红细胞扣。
【结果报告】产生1+阳性凝集的最高稀释度其倒数即为效价。
【注意事项】 1.红细胞标本一定不能被细菌污染否则出现假阳性反应尽可能应用当日采集的新鲜血做本实验。
如不得不用过夜血或陈旧血则必须首先用该标本做阴性对照试验以确定该标本是否可以做本试验。
2.血清标本血清标本必须充分去除纤维蛋白否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出阻碍红细胞沉淀呈假阳性反应。
3.如在微柱凝胶中出现溶血现象强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应也不排除其他原因所臻溶血故对此标本一定认真分析并向上级主管技术人员报告并讨论。
血清效价测定实验报告
一、实验目的本实验旨在学习血清效价测定的原理和方法，掌握间接ELISA技术的操作步骤，并了解微柱凝胶法检测孕妇血清中IgG抗A（B）抗体效价的室内参考值。
二、实验原理1. 间接ELISA原理：利用间接ELISA技术测定血清效价。
将与抗体相应的抗原固定在载体上，制备固相抗原。
然后加入含有目标抗体的样本，抗体与抗原发生特异性结合。
接着加入酶标二抗，结合到抗原抗体复合物上。
最后加入底物，底物在酶催化下显色。
显色深浅与样本中抗体的含量呈正相关。
2. 微柱凝胶法：通过微柱凝胶法检测孕妇血清中IgG抗A（B）抗体效价。
将样本加入微柱凝胶中，若抗体与抗原结合，则在凝胶中形成可见的凝集现象。
通过观察凝集现象，判断抗体效价。
三、实验材料1. 间接ELISA实验材料：（1）抗原：牛血清白蛋白（BSA）浓度为5mg/ml。
（2）动物：经三次免疫后的BALB/c小鼠。
（3）其他试剂及器材：辣根过氧化物酶标记羊抗鼠lgG抗体、包被液、脱脂奶粉、洗涤液、底物显色液、终止液；手术剪、酒精棉、可拆卸酶标板、聚苯乙烯酶标板条、1.5ml离心管等。
（4）主要设备：离心机、冰箱、酶标仪、微量移液器、恒温箱。
2. 微柱凝胶法实验材料：（1）孕妇血清样本（2）微柱凝胶试剂（3）其他试剂及器材：加样器、离心机、显微镜等。
四、实验步骤1. 间接ELISA实验步骤：（1）包被抗原：将BSA（5mg/ml）稀释到终浓度为1ug/ml，100ul/孔，4℃孵育过夜，洗板3次，拍干。
（2）加入样本：加入含有目标抗体的样本，100ul/孔，37℃孵育1小时。
（3）洗涤：洗板3次，拍干。
（4）加入酶标二抗：加入辣根过氧化物酶标记羊抗鼠lgG抗体，100ul/孔，37℃孵育1小时。
（5）洗涤：洗板3次，拍干。
（6）加入底物：加入底物显色液，37℃孵育30分钟。
（7）终止反应：加入终止液，终止反应。
（8）酶标仪检测：在酶标仪上检测吸光度（OD）值。
2. 微柱凝胶法实验步骤：（1）加样：将孕妇血清样本加入微柱凝胶中。
医院IgG抗A(B)测定规程
医院IgG抗Ａ（Ｂ）测定规程1.试剂和材料1.1.0.2mol/L巯基乙醇应用液：以pH7.4PBS（KH２PO41.73g,Na2HPO4˙12H2O19.35,NaCl8g加蒸馏水至100ml）稀释到100ml,用热合机分装到塑料管中，每段含0.25ml,保存冰箱备用。
1.2.5%A型和B型红细胞悬液1.3.抗球蛋白血清。
2 .操作2.1.吸取受检者血清0.2ml，加巯基乙醇应用液0.2ml,混合，将试管口塞紧，置37℃水浴中2h.2.2.排列小试管一排（10支），每管加pH7.4PBS0.2ml。
2.3.第一管加巯基乙醇应用液处理的血清0.2ml,混合，吸取0.2移至第二管内，混和，以此类推，作倍比稀释至第10管，每管内留有1:4, :8,1:16,…1:2048不同稀释度血清。
2.4.每管各加5%A（或B）型红细胞悬液0.2ml，置37℃致敏一小时。
2.5.结果观察，如在前几管内发现有红细胞凝集者，是由于高效价IgG抗A（B）或IgA抗A（B）所引起，2.6.其余红细胞未见凝集的试管，再以PH7.4PBS洗涤3次，除去洗涤液，留取压积红细胞。
2.7.各管各加pH7.4PBS2滴，混合。
2.8.每管各取1滴，分别移至另一排小试管中，再各加最适稀释度的抗球蛋白血清1滴，混合。
2.9.1000r/min离心1min。
2.10轻轻摇动试管，观察结果，红细胞凝集的最高稀释度的倒数即为IgG抗Ａ（B）效价。
3.附注：3.1 0.01mol/L二硫苏糖醇（DDT）盐水溶液也可用于灭活ＩgM抗体。
3.2当母亲血清中IgG抗A（B）效价大于1:64时提示婴儿有受害的机会，大于1:128时提示婴儿很可能受害，大于1:512时几乎100%发病。
3.3当父亲血型为AB时，应排列小试管两排，第一排加5%A 型红细胞悬液, 第二排加5%B型红细胞悬液,分别测抗A、抗B效价。
抗体效价测定操作规程
抗体效价测定操作规程 Hessen was revised in January 2021抗体效价测定操作规程操作步骤：一．IgG类1.IgG类抗体效价滴定，须取适量血清200μL加等体积2—Me溶液混合，封口，置37℃水浴箱作用60分钟，先稀释血清：200L病人血清600L生理盐水备用，排列6支试管按顺序编号。
第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L，在第一管和第二管中各加入稀释血清200L，第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。
这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256。
2.加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂）每管各加2％相应红细胞悬液200L，混匀。
（如待检血清抗体为抗A，则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B，则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B，则倍量稀释两份血清，一份加入A型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；）3.先直接观察离心结果，之后在每管分别加入凝聚胺试剂盒中的R1液3d，混合30S均匀后，在各加R2液2滴，操作方法同凝聚胺交叉配血法，然后判读结果。
通常以肉眼观察到的第一个“±”的凝集管作为判断的终点，终点血清稀释度的倒数为效价（Titer），或称滴度。
二．IgM1.血清连续倍量稀释法先稀释血清：100L病人血清+700L生理盐水备用，排列6支试管按顺序编号。
第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L，第一管和第二管中各加入稀释血清200L，第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。
这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256。
欧蒙抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程
抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程1.目的规范抗核抗体谱(IgG)检测，保证结果的准确性。
2.适用范围检验科免疫组工作人员。
3.试剂规格名称与组成型号名称：ANA 谱 1靶抗原：nRNP/Sm，Sm，SS-A，Ro-52，SS-B，Scl-70，Jo-1，CENP B，dsDNA，核小体，组蛋白，核糖体 P 蛋白类型：IgG基质：抗原包被的检测膜条规格：16×01(16)4.预期用途：用于体外定性检测人血清或血浆中的抗 nRNP、Sm、SS-A（天然 SS-A 和 Ro-52）、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENP B、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P 蛋白和 AMA M2 共 14 种不同抗原 IgG 类抗体。
5.适应症：夏普综合征（MCTD），系统性红斑狼疮（SLE），干燥综合征，进行性系统性硬化症，多肌炎皮肌炎、重叠综合征、局限型进行性系统性硬化症（CREST 综合征），原发性胆汁性肝硬化。
6.临床意义：抗核抗体识别是各种细胞核组分（细胞核的生化成份）[1,2]，包含核酸、细胞核蛋白及核糖蛋白。
可特征性地出现于许多疾病中，尤其是风湿性疾病[3,4,5]。
在炎症性风湿性疾病中，这些抗核抗体的阳性率在 20%到 100%之间，以风湿性关节炎的阳性率最低，在 20%至40%之间。
因此，ANA 鉴别诊断在对个别风湿疾病的确认十分必要，而且对自身免疫性疾病的进一步诊断也很有价值。
[3,6,7,8,9,10,11]风湿疾病—夏普综合征（混合结缔组织病＝MCTD)[8]—系统性红斑狼疮（SLE)[8, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22]—干燥综合征（原发性干燥综合征）[5],—系统性硬化症（系统性硬皮病,SSc)[1, 23],—局限型系统性硬化症（CREST 综合征） [28]—多肌炎/皮肌炎[12,15]—类风湿性关节炎[5]7.主要组成成分：8.储存条件及有效期： 2-8°C 保存，不要冷冻。
O型孕妇血清IgG抗A(B)抗体效价与新生儿溶血病的相关性研究
O型孕妇血清IgG抗A（B）抗体效价与新生儿溶血病的相关性研究目的研究母亲IgG效价和新生儿溶血病（HDN）的联系。
方法检测227例产母亲IgG效价，比较不同IgG效价HDN发病情况。
结果随着孕妇IgG抗A（B）抗体效价的增高，HDN发生率升高。
和其他组比较，组间差异显著（P ＜0.05）。
对HDN相关因素进行多因素Logistic 回归，结果显示，孕妇IgG抗A （B）抗体效价≥1：256（OR=5.172，95%CI：3.962～18.009）和HDN的发生密切相关，为HDN的独立影响因素。
结论孕妇IgG效价≥1：256为HDN的独立影响因素。
标签：新生儿；溶血病；抗体效价；关系新生儿溶血病（HDN）为自身免疫性疾病，对新生儿健康影响很大[1，2]。
HDN发病危急，通常血型为O型孕产妇所生A、B型婴儿更易发生HDN。
IgG 抗A（B）抗体效价（简称IgG效价）和HDN存在关联。
本文旨在探讨O型孕妇抗体效价与HDN的关系，以为HDN的防治带来帮助。
1资料与方法1.1一般资料选择227例血型为O型孕妇为研究对象，年龄在24～31岁，平均年龄为26.4岁；孕周为26～39w，平均孕周为32.2w。
1.2方法检测母体妊娠期间IgG效价，比较不同IgG效价的HDN的发病情况。
1.3检测方法①试剂由上海血液生物医药公司提供；检测母体IgG效价；②检测婴儿血型，检测HDN情况；③ABO-HDN标准：产妇和子女血型不合，HDN 三项检查阳性。
1.4观察指标记录HDN发病情况1.5 统计学方法使用SPSS 16进行统计分析；采用χ2进行统计整理；P＜0.05为差异有统计学意义。
对HDN影响因素进行Logistic逐步回归分析。
2结果2.1 O型孕妇IgG抗A（B）抗体效价，O型孕妇，其丈夫血型分布見表12.2 O型孕妇IgG抗A（B）抗体效价，孕妇IgG效价≥1：256时，HDN发病最高，高达85.75。
组间差异显著（P＜0.05）。
O型孕妇IgG抗A(B)抗体效价与新生儿溶血病
O型孕妇IgG抗A(B)抗体效价与新生儿溶血病
新生儿溶血病（hemolytic disease of newborn，HDN）一般特指母婴血型不合而引起的胎儿或新生儿免疫性溶血性疾病，当胎儿从父亲方面继承来的红细胞抗原，恰为母亲所缺乏时，即母子间血型不合。
这种胎儿红细胞对母亲来说是一种异抗原，当它通过胎盘进入母体后，可以刺激母体产生相应的血型抗体。
此种抗体中的IgG抗体通过胎盘进入胎儿体内，与胎儿红细胞抗原产生抗原抗体反应，从而破坏胎儿红细胞，引起免疫性新生儿溶血病。
在我国母婴血型不合引起的HDN中，以ABO血型系统最为常见，多为“O”型孕妇所生的A型或B型婴儿，这与“O”型母亲血清中富含高效价的IgG抗 A(B)抗体有关。
孕妇的产前血清IgG抗A（B）抗体效价升高，HDN的发生率也随着增加。
因为在孕早期，由于进入母体的胎儿红细胞相对较少，母体产生的抗体量也少，抗体效价较低。
随着孕期的增加，由于绒毛膜破坏、妊高症、前置胎盘、胎盘早剥、腹部外伤、羊膜腔穿刺或分娩时子宫收缩等均可能会使母体血窦开放，使胎儿的血液进入母体血液循环，以及再次妊娠受到相同抗原的刺激时，可使抗体迅速产生，抗体效价增高。
当抗体效价升高超过机体的保护机制时导致 HDN的发生。
据文献报道，血清IgG抗A（B）抗体效价≥1∶64时，新生儿患HDN的发病率显著增加。
因此对于“O”型孕妇，其丈夫为血型为非“O”型时，建议怀孕16-20周首次检测夫妇抗体效价，母亲血清中IgG抗体效价≥1∶64的孕妇，及早进行预防性治疗，胎儿出生后尽早进行实验室检查，多年来始终是预防新生儿溶血病及严重并发症的有效手段。
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孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程
【原理】
新生儿溶血病HDN发生的主要原因在于母子血型不合，血型系统最主要的类型为ABO血型系统，本实验采用微柱凝胶检测孕妇血清中的抗A（B）IgG抗体效价。
【试剂】
6%牛血清白蛋白；生理盐水；凝胶卡
【标本采集】
孕妇静脉血3毫升，肝素钠抗凝，孕妇爱人静脉血3毫升，肝素钠抗凝。
将孕妇标本制作成血清标本，孕妇爱人标本制成0.5%红细胞标本（用生理盐水洗涤后配制）。
本文来源于中华检验医学网
【操作步骤】
1．取孕妇血清标本50微升加入等体积的牛血清白蛋白，37度水浴温育30～60分钟；2．将血清倍比稀释成9管，依次为1：4、8、16、32、64、128、512、1024、2048管；3．将卡作好标记，在所有孔中加入经处理好的孕妇血清标本50ul；
4．然后在所有孔中加入50ul的孕妇爱人0.5%红细胞标本；
5．37度孵育15分钟（专用孵育箱）；
6．专用离心机离心5分钟；900rpm2分钟，1500rpm3分钟；
7．取出判定结果；
【结果判定】
阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中；
阴性结果：红细胞完全沉降到胶底部，在凝胶管底部形成红细胞扣。
【结果报告】
产生1+阳性凝集的最高稀释度，其倒数即为效价。
【注意事项】
1．红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应，尽可能应用当日采集的新鲜血做本实验。
如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本试验。
2．血清标本：血清标本必须充分去除纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍红细胞沉淀，呈假阳性反应。
3．如在微柱凝胶中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所臻溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论。
4．本凝胶卡价格不菲，成本较高，请您节约使用。
【临床意义】
有人观察1632例孕妇血清中IgG抗A（B）≥1：64者249例；ABO-HDN发生率随IgG抗A（B）效价升高而上升；HDN与妊娠史的频率有关，随着年龄上升，孕妇个体IgG抗A（B）抗体效价也随之上升。
夫妇间ABO血型不合者应及时检查产前血型抗体水平，用于预防不良妊娠的发生；IgG抗A（B）效价的高低与HDN的发病率成正比；孕妇血清IgG抗A（B）效价≥1：64需定期检测抗体效价水平及时用药降低抗体效价，以预防新生儿溶血病的发生。