母体IgG抗体效价检测卡操作规程

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抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程

抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程

抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程1.目的规范抗核抗体谱(IgG)检测,保证结果的准确性。

2.适用范围检验科免疫组工作人员。

3.试剂规格名称与组成型号名称:ANA 谱 1靶抗原:nRNP/Sm,Sm,SS-A,Ro-52,SS-B,Scl-70,Jo-1,CENP B,dsDNA,核小体,组蛋白,核糖体 P 蛋白类型:规格:164.、Scl-70、IgG5.6.及核糖蛋性率在风湿疾病—多肌炎/7.8.储存条件及有Array效期:2-8°C 保存,不要冷冻。

未开封前,除非特别说明,试剂盒自生产日起可稳定 18 个月。

稀释后的酶结合物和清洗缓冲液需在一个工作日内用完。

9.样本要求样本:人血清或EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝的血浆。

稳定性:待检患者样本于 2-8°C 可稳定 14 天,稀释后的样本应在同一个工作日内检测。

样本稀释:患者样本用样本缓冲液匀。

10.10.12-8°C-- 稀释如:- 酶结合物:10 倍浓缩。

使用时用干净的吸管从瓶中吸取所需酶结合物,并用样本缓冲液 1:10 稀释。

如需温育一条检测膜条,用 1.35 ml 样本缓冲液稀释 0.15 ml 酶结合物。

已稀释的酶结合物应在同一个工作日用完。

- 样本缓冲液:直接使用。

- 清洗缓冲液:10 倍浓缩。

使用时用干净的吸管从瓶中吸取需要量用蒸馏水 1:10 稀释。

如需温育一条膜条,用 9ml 蒸馏水稀释 1ml 浓缩缓冲液。

稀释后的缓冲液应在同一个工作日用完。

- 底物液:直接使用,对光敏感,使用后应立即盖紧瓶盖。

10.2操作流程预处理:取出所需的膜条,将其放入温育槽内。

膜条上有编号的一面朝上。

在温育槽中分别加入 1.5ml 样本缓冲液,于室温在摇摆摇床上温育 5 分钟后,吸去温育槽中的液体。

血清温育第一次:在温育槽中分别加入 1.5 ml 已稀释的血清样本,在摇摆摇床上室温(18°C-25°C)温育 30 分钟。

孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程

孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程

孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程【原理】新生儿溶血病HDN发生的主要原因在于母子血型不合,血型系统最主要的类型为ABO血型系统,本实验采用微柱凝胶检测孕妇血清中的抗A(B)IgG抗体效价。

【试剂】6%牛血清白蛋白;生理盐水;凝胶卡【标本采集】孕妇静脉血3毫升,肝素钠抗凝,孕妇爱人静脉血3毫升,肝素钠抗凝。

将孕妇标本制作成血清标本,孕妇爱人标本制成0.5%红细胞标本(用生理盐水洗涤后配制)。

本文来源于中华检验医学网【操作步骤】1.取孕妇血清标本50微升加入等体积的牛血清白蛋白,37度水浴温育30~60分钟;2.将血清倍比稀释成9管,依次为1:4、8、16、32、64、128、512、1024、2048管;3.将卡作好标记,在所有孔中加入经处理好的孕妇血清标本50ul;4.然后在所有孔中加入50ul的孕妇爱人0.5%红细胞标本;5.37度孵育15分钟(专用孵育箱);6.专用离心机离心5分钟;900rpm2分钟,1500rpm3分钟;7.取出判定结果;【结果判定】阳性结果:红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中;阴性结果:红细胞完全沉降到胶底部,在凝胶管底部形成红细胞扣。

【结果报告】产生1+阳性凝集的最高稀释度,其倒数即为效价。

【注意事项】1.红细胞标本一定不能被细菌污染,否则出现假阳性反应,尽可能应用当日采集的新鲜血做本实验。

如不得不用过夜血或陈旧血,则必须首先用该标本做阴性对照试验,以确定该标本是否可以做本试验。

2.血清标本:血清标本必须充分去除纤维蛋白,否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出,阻碍红细胞沉淀,呈假阳性反应。

3.如在微柱凝胶中出现溶血现象,强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应,也不排除其他原因所臻溶血,故对此标本一定认真分析,并向上级主管技术人员报告并讨论。

4.本凝胶卡价格不菲,成本较高,请您节约使用。

【临床意义】有人观察1632例孕妇血清中IgG抗A(B)≥1:64者249例;ABO-HDN发生率随IgG抗A(B)效价升高而上升;HDN与妊娠史的频率有关,随着年龄上升,孕妇个体IgG抗A(B)抗体效价也随之上升。

抗体效价检测步骤

抗体效价检测步骤

抗体效价检测步骤抗体效价检测是一种常用的方法,用于评估抗体样品的质量和活性。

该检测可以确定抗体样品中所含抗体的浓度以及其与靶标结合的能力。

以下是抗体效价检测的一般步骤:1. 制备样品和控制组:首先需要准备抗体样品和相应的阳性和阴性对照物。

阳性对照物是对于靶标已知有高亲和力的抗体样品,而阴性对照物则是不包含任何抗体的样品。

2. 稀释样品:将抗体样品进行连续稀释,通常从高浓度开始,以便确定抗体效价的范围。

每一次稀释应按照一定比例进行,如1:2或1:10等。

3. 设置试验板:将稀释好的抗体样品、阳性和阴性对照物,以及含有靶标的试验物添加到试验板中的孔中。

每个样品应设置多个孔,以获得平均效价。

4. 孵育:将试验板置于孵化器中,在适当的温度和时间下进行孵育。

这有助于抗体与靶标结合,并形成固定复合物。

5. 洗脱:将试验板的孔洗脱干净,以去除未结合的抗体。

这可以通过重复洗涤孔中添加和去除缓冲液来实现。

6. 反应:加入检测抗体,这是一种能与固定复合物中的抗原结合的二抗。

检测抗体通常被标记,以便进行可视化。

典型的标记物包括酶,如辣根过氧化物酶(HRP),或荧光染料,如荧光素等。

7. 反应孵育:将试验板放回孵化器中,在合适的温度下进行孵育。

这有助于检测抗体与固定复合物结合,并形成更大的复合物。

8. 洗脱:类似于步骤5,洗涤试验板的孔,以去除未结合的检测抗体。

9. 可视化:根据检测抗体的标记物,对于酶标记的检测抗体可以加入亮色底物,并观察色素的产生。

对于荧光标记的检测抗体,则可以在荧光显微镜下直接观察发光信号。

10. 数据分析:根据样品和对照组的可视化结果,测定抗体效价。

通常使用半最大抗体效价(EC50)来表示抗体效价,即抗体浓度在50%时与靶标结合。

抗体效价检测是一个常见的实验技术,它在抗体研究和生物医学领域有着广泛的应用。

通过正确执行上述步骤,可以准确地确定抗体样品的效价和活性,进一步支持科研和临床应用。

孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程

孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程

孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程1、目的为规范输血科红细胞血型抗体效价测定的技术操作,确保检测结果准确,依据《输血实验室管理程序》4.1.9条款的要求制定本规程。

2、适用范围本文件适用于本院输血科测定IgG抗-A(B)抗体效价,用以评估胎母血型不合妊娠时发生胎儿及新生儿免疫溶血性疾病(HDN)的风险程度及其他临床需要。

3、职责:输血科技术人员负责本实验的技术操作。

4、原理将受检血清(如检测IgG类红细胞血型抗体,先用2-巯基乙醇处理)经连续倍稀释后与表达检测目标抗体对应抗原的试剂红细胞反应,以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价。

5、试剂:生理盐水,0.2mol/L的2-巯基乙醇(2-Me)应用液,博迅的微柱凝胶抗人球蛋白卡,0.8%的A和B型标准试剂红细胞。

6、仪器:XTL-4.7细胞洗涤离心机,博研微术凝胶卡专用孵育器及离心机,电热恒温水浴箱。

7、操作步骤与方法:7.1准备试剂:观察微柱凝胶卡的外观,如有干胶、杂质、气泡不可使用,之后将卡放置室温(18-25℃)平衡,再用专用离心机离心5分钟。

吸取2-Me15μl,加生理盐水至1ml为0.2M 2-Me 应用液。

7.2血清/血浆标本的制备:取血清50ul和150ul的生理盐水作1:4的稀释后再加入0.2M 2-Me应用液200ul混匀,密封试管口,37℃水浴60分钟。

灭活母体血清中IgM时,必须将试管口密封,并经常摇晃试管,以保证灭活效果。

同时用单克隆抗A或抗B作为对照,用来确认2-Me是否有效灭活IgM抗体。

7.3取7只干净试管,做好标记;在第1管中加入处理后的血清200ul和200ul生理盐水,混匀(为1:16稀释);第2-7管中依次加200ul的生理盐水和前一管中的血清/血浆200ul,做倍比稀释。

7.4将抗人球蛋白卡标记好,从第7管开始到第2管依次将倍比稀释后的相应50ul血清分别加入标记孔中。

抗体效价检测步骤

抗体效价检测步骤

抗体效价检测步骤抗体效价检测是一种测定抗体的浓度及活性的方法,通常用于评估抗体的质量和效能。

以下是抗体效价检测的一般步骤,供您参考。

1. 制备样本:首先,从动物体内或培养物中收集抗体样本。

例如,可以从实验动物体内收集抗体样本,或从培养的细胞上清液中收集抗体样本。

确保样本的收集过程在符合生物安全标准的条件下进行。

2. 稀释样本:抗体样本通常会被稀释,以确保在合适的浓度范围内进行测定。

稀释倍数的选择应根据抗体的预计浓度和检测方法的灵敏度来确定。

3. 样本预处理:根据实验的需要,可能需要对样本进行一些处理。

例如,可以对样本进行加热、酶处理或亲和纯化等步骤。

4. 准备控制组:在进行抗体效价检测之前,还需要准备一些控制组。

这些控制组可以包括阴性对照、阳性对照和参考标准,用于确保检测结果的准确性和可靠性。

5. 测定方法选择:根据实验的需要和可用的设备/试剂,选择适合的抗体效价测定方法。

常见的方法包括ELISA、Western blot、免疫组化等,可根据实验目的选择不同的方法。

6. 进行测定:按照选定的方法操作,将稀释的样本和控制组加入适当的载体(如微孔板)中,与相应的检测试剂反应。

通过适当的信号检测方法,如吸光度测定、荧光测定或放射免疫测定等,测量不同样本的信号强度。

7. 数据分析:使用适当的软件或计算方法,对测定结果进行数据分析。

根据标准曲线、控制组和参考标准的结果,计算样本中抗体的浓度或抗体效价。

8. 结果解释:根据测定结果,对抗体样本的浓度或效价进行解释。

可以根据人体抗体效价的标准范围,判断抗体活性和质量的好坏。

9. 结果验证:为了确保结果的准确性,可以进行结果的验证实验。

例如,可以通过再次测定部分样本或使用其他独立的方法进行验证。

以上是抗体效价检测的一般步骤,实际操作中可能会有些差异,具体步骤可能会根据实验目的、检测方法和设备要求等因素进行调整。

在进行抗体效价检测时,一定要严格按照实验操作规程进行,确保结果的准确性和可靠性。

血型抗体效价测定标准操作规程(sop)

血型抗体效价测定标准操作规程(sop)

血型抗体效价测定标准操作规程一、目的为规范红细胞血型抗体效价测定的技术操作,保证结果的准确性从而为临床疾病的诊断和治疗做出正确的评估。

二、适用范围输血科负责红细胞血型抗体效价测定的技术人员。

三、原理:将受检血清(如检测IgG类红细胞血型抗体效价须先用巯基试剂裂解其中的IgM型抗体)经连续倍比稀释后与表达目标抗体对应的抗原红细胞试剂反应,以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价,同时根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分。

四、步骤和方法(1)盐水介质法测定IgM类红细胞血型抗体效价1、排试管12支,编号,以第1支试管为原倍进行生理盐水倍比稀释受检血清,第12支试管为2048倍,稀释后容积定为100微升。

2、分别往12支试管加入3%目标抗体对应的抗原红细胞试剂50微升,轻摇混匀。

3、用专用离心机120g离心1min,观察有无溶血和凝集情况。

4、结果判断:镜检呈“1+”凝集的最高稀释倍数的倒数为目标抗体的效价,再根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分。

(2)IgG类红细胞血型抗体效价测定1、取200微升受检血清加入0.2mol/L二巯基乙醇(2—Me)应用液200微升混匀,将试管口密封,37℃孵育30min。

2、排11支试管,编号,进行生理盐水倍比稀释2—Me处理过的血清。

由于第1支已经进行了稀释,所以第11支试管为2048倍,稀释后容积定为100微升。

3、凝聚胺法检测时,往11支试管加入3%目标抗体对应的抗原红细胞试剂50微升,轻摇混匀,按照凝聚胺法操作步骤进行试验。

4、抗球蛋白法测定时,往11支试管加入3%目标抗体对应的抗原红细胞试剂50微升,轻摇混匀后置37℃孵育30min后,按照抗球蛋白法操作步骤进行试验。

5、结果判断:镜检呈“1+”凝集的最高稀释倍数的倒数为目标抗体的效价,再根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分。

(1)评分标准根据稀释血清各管凝集强度进行评分,凝集强度与评分标准为:4+为12分,3+为10分,2+为8分,1+为5分,+/-或W+为2分,阴性为0分,稀释各管评分之和为积分。

母体效价SOP

母体效价SOP

新生儿溶血病检测卡标准操作程序(SOP)一、准备工作(一)微柱凝胶试剂卡的准备:观察外观,如有干胶、杂质、气泡不可使用,之后将卡放置室温(18-25℃)平衡,再用专用离心机离心5分钟。

(二)试剂的制备:6%牛血清白蛋白(盐水稀释)(三)标本采集:采集被检对象静脉血,将该同一人血液分别制备成红细胞标本和血清标本。

(四)红细胞标本的制备:用红细胞稀释液配制红细胞悬液,红细胞最终浓度为0.8%-1%。

(五)血清标本的制备:将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中,10分钟后离心,取上清;或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中,4℃放置12小时,或37℃放置2小时后离心,2000rpm,10分钟,取上清。

该上清不得有絮状物或沉淀。

(六)放散试验:1、充分洗涤红细胞至少三次,取同体积洗涤后的压积血和6%牛血清白蛋白混匀,置于56℃孵育10分钟,期间不断摇动,离心1000rpm,2-3分钟,取上清。

即放散液。

2、充分洗涤红细胞至少三次,用博讯公司生产的酸性放散试剂盒做室温放散。

参见酸性放散试剂盒使用说明书。

二、实验步骤1、取新生儿的红细胞0.8%-1%悬液50ul分别加入卡1中的1-6孔中。

2、使用专用离心机离心5分钟,900rpm 2分钟,1500 rpm 3分钟。

3、取出,判读结果。

4、第二卡1-3孔分别加入50ul新生儿血清,4-6孔分别加入50ul新生儿红细胞放散液。

5、将A型红细胞悬液50ul分别加入1号、4号;将B型红细胞悬液50ul分别加入2号、5号;将O型红细胞悬液50ul分别加入3号6号孔中。

6、37℃孵育15分钟。

7、取出,使用专用离心机离心5分钟(900rpm2分钟,1500 rpm3分钟),取出,判读结果。

结果判定阳性结果:红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中。

表明被检者血清中含有对应其抗原的抗体或血细胞被致敏。

阴性结果:红细胞完全沉降到凝胶底部,在凝胶管底部形成红细胞扣。

表明血清中无相应抗原免疫的抗体或血细胞没有被致敏。

免疫球蛋白G(IgG)测定标准操作程序SOP文件

免疫球蛋白G(IgG)测定标准操作程序SOP文件
准备:直接使用。
定标频率:A试剂批号更换
B由质控结果决定
ABCD医院
生化实验室
文件编号:
ABCD-SOP-04-44
免疫球蛋白G(IgG)测定
版序:ABCD
页码:第2页,共3页
4.3质控物
来源:Precinorm protein (罗氏蛋白正常值质控)
Precipath protein (罗氏蛋白病理值质控)
4.2校准物
来源:ROCHE配套校准物,符合WHO标准,CRM470,具体如下:
S1:0.9%的NaCl
S2-6:Preciset Serum protein
批特异的定标液的靶值乘以下列的转换因子,用来计算定标曲线。
S2:0.10
S3:0.25
S4:0.50
S5:1.00
S6:2.00
贮存条件:校准物在2-8℃保存可保存至有效期。
3标本
血清及肝素-Li、Na-肝素或EDTA抗凝血浆,处理方法见标本处理程序。
稳定性:20-25℃3个月
4-8℃3个月
-20℃6个月
4试剂
4.1试剂
来源:ROCHE配套试剂(详见试剂说明书)。
贮存条件及稳定性:未打开试剂盒:2-8℃储存至效期末
R1:打开后机上稳定90天
R2:打开后机上稳定90天
准备:直接使用。
IgG是再次免疫应答的主要抗体,具有吞噬调理作用、中和毒素作用、中和病毒作用及激活补体经典途径。IgG是唯一可以通过胎盘的免疫球蛋白,并且对胎儿及新生儿有保护作用。婴儿在6个月左右建立免疫系统,在18个月左右达到成人水平。
多克隆IgG水平的升高见于系统性红斑狼疮、慢性肝炎及传染性疾病中。单克隆IgG水平的升高见于骨髓瘤。

孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程

孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程

孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程
【原理】新生儿溶血病HDN发生的主要原因在于母子血型不合,血型系统最主要的类型为ABO血型系统本实验采用微柱凝胶检测孕妇血清中的抗A、BIgG抗体效价。

【试剂】 6%牛血清白蛋白生理盐水凝胶卡
【标本采集】孕妇静脉血3毫升、孕妇爱人静脉血3毫升EDTA-NA抗凝。

将孕妇标本制作成血清标本孕妇爱人标本制成0.5%红细胞标本用生理盐水洗涤后配制【操作步骤】
1.取孕妇血清标本50微升加入等体积的牛血清白蛋白,37度水浴温育60分钟
2.将血清倍比稀释成9管依次为1 4、8、16、32、64、128、512、1024、2048管
3.将卡作好标记在所有孔中加入经处理好的孕妇血清标本50ul
4. 然后在所有孔中加入50ul的孕妇爱人0.5%红细胞标本
5. 37度孵育15分钟专用孵育箱
6.专用离心机离心5分钟 900rpm2分钟 1500rpm3分钟
7. 取出判定结果
【结果判定】
阳性结果红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中
阴性结果红细胞完全沉降到胶底部在凝胶管底部形成红细胞扣。

【结果报告】产生1+阳性凝集的最高稀释度其倒数即为效价。

【注意事项】 1.红细胞标本一定不能被细菌污染否则出现假阳性反应尽可能应用当日采集的新鲜血做本实验。

如不得不用过夜血或陈旧血则必须首先用该标本做阴性对照试验以确定该标本是否可以做本试验。

2.血清标本血清标本必须充分去除纤维蛋白否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出阻碍红细胞沉淀呈假阳性反应。

3.如在微柱凝胶中出现溶血现象强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应也不排除其他原因所臻溶血故对此标本一定认真分析并向上级主管技术人员报告并讨论。

红细胞血型抗体效价测定标准操作规程

红细胞血型抗体效价测定标准操作规程

红细胞⾎型抗体效价测定标准操作规程红细胞⾎型抗体效价测定标准操作规程⼈⾎清中抗-A、抗-B主要为IgM型,⼩部分为IgG型。

IgM型分⼦由5个辐射状排列的单体组成,单体间通过µ链倒数第⼆位的⼆硫键与J链互相连接,单体间的⼆硫键⽐单体内的链间及链内⼆硫键容易被巯基试剂破坏。

IgM型分⼦经巯基试剂处理后,裂解为6~7s亚单位,仍保持与抗原结合的能⼒,但已失去其与红细胞凝集的作⽤。

IgG抗体分⼦则不被巯基试剂灭活,保持与相应红细胞致敏的⾎清学特性。

1.⽬的为规范红细胞⾎型抗体效价测定的技术操作,依据《输⾎实验室管理程序》的要求制定本章程。

2.适⽤范围适⽤于医疗机构输⾎科(⾎库)测定IgG抗-A、IgG抗-B及IgG或IgM类红细胞不规则抗体效价,⽤以评估母婴⾎型不合的新⽣⼉溶⾎病的风险程度及产前检查等其他临床需要。

3.职责医疗机构输⾎科(⾎库)技术⼈员负责红细胞⾎型抗体效价测定。

4.原理检测IgM类红细胞⾎型抗体,将受检⾎清经连续倍⽐稀释后与表达检测⽬标抗体对应抗原的试剂红细胞反应,以受检⾎清凝集试剂红细胞的最⾼稀释倍数的倒数作为受检⾎清中检测⽬标抗体的效价,并根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分,完成对IgM类红细胞抗体效价的测定。

若检测IgG类红细胞⾎型抗体,则先⽤巯基试剂2-Me 裂解其中的IgM型抗体,经巯基试剂2-Me处理后再测定IgG类红细胞⾎型抗体。

5.所需材料和设备5.1.材料3%~5%的A、B型反定型试剂红细胞、0.2 mol/L⼆巯基⼄醇(2-Me)应⽤液、抗球蛋⽩试剂、待检者⾎标本、微柱凝胶抗球蛋⽩卡。

5.2.设备普通离⼼机、普通显微镜、电热恒温⽔浴箱、⾎型⾎清学专⽤离⼼机、微柱凝胶卡专⽤孵育器及离⼼机。

6.检测环境室温应控制在18-27℃,湿度应控制在30%-70%。

7.步骤与⽅法7.1.盐⽔介质法测定IgM类红细胞⾎型抗体效价:7.1.1.排试管12⽀,编号,第2⾄第12管每管加⽣理盐⽔0.1ml,在第1管及第2管加受检者⾎清各0.1ml,将第2管混匀后吸出0.1ml,移⾄第3管内,以此类推,连续倍⽐稀释⾄第12管(2048倍)。

免疫球蛋白(IgG)定量测定试剂盒标准操作程序

免疫球蛋白(IgG)定量测定试剂盒标准操作程序

免疫球蛋白(IgG)测定标准操作程序1.摘要本试剂盒适用于体外临床检验,用于测定人血清中免疫球蛋白IgG的含量。

IgG的主要功能是与抗原结合,并进一步触发抗原的分解。

2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中IgG的浓度。

3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定IgG浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理;本SOP的改动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的免疫球蛋白(IgG)试剂盒采用的是免疫透射比浊法。

5.原理样本中的IgG与试剂中相应的抗体相遇,立即形成抗原抗体免疫复合物,在特定的缓冲环境中形成浊度,其浊度在合适的抗体浓度存在时与抗原含量成正比,与相同条件下操作的校准品比较,即可求出样品中IgG的含量。

6.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源:上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分:磷酸缓冲液(PH7.2)、Tween20、PEG、NaN3、羊抗人IgG抗体。

7.3试剂稳定性:试剂避光保存于2-8℃,若无污染,可稳定至失效期,本试剂有效期为12个月。

试剂不可冰冻。

R1、R2:打开后冷藏于分析仪中可稳定28天。

7.4试剂准备:试剂为即用式。

8.标准品和质量控制8.1校准程序:使用上海科华生物工程股份有限公司试剂盒内提供的标准品对自动分析仪进行校准。

由a、b、c、d、e五只组成,浓度见瓶签。

校准品可溯源至国际参考物质ERM470。

8.2质控品使用某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。

每日在测定前做一次质控。

该质控品为干粉包装,在2-8℃冰箱可稳定到失效期,使用前用5ml去离子水复溶,待质控物充分溶解(大约30分钟)后使用。

8.3质控数据管理:按程序对检验后的质控结果进行转换,对质控数据进行分析处理,如出现失控值,应及时分析失控原因,并填写好相关失控记录。

医院IgG抗A(B)测定规程

医院IgG抗A(B)测定规程

医院IgG抗A(B)测定规程1.试剂和材料1.1.0.2mol/L巯基乙醇应用液:以pH7.4PBS(KH2PO41.73g,Na2HPO4˙12H2O19.35,NaCl8g加蒸馏水至100ml)稀释到100ml,用热合机分装到塑料管中,每段含0.25ml,保存冰箱备用。

1.2.5%A型和B型红细胞悬液1.3.抗球蛋白血清。

2 .操作2.1.吸取受检者血清0.2ml,加巯基乙醇应用液0.2ml,混合,将试管口塞紧,置37℃水浴中2h.2.2.排列小试管一排(10支),每管加pH7.4PBS0.2ml。

2.3.第一管加巯基乙醇应用液处理的血清0.2ml,混合,吸取0.2移至第二管内,混和,以此类推,作倍比稀释至第10管,每管内留有1:4, :8,1:16,…1:2048不同稀释度血清。

2.4.每管各加5%A(或B)型红细胞悬液0.2ml,置37℃致敏一小时。

2.5.结果观察,如在前几管内发现有红细胞凝集者,是由于高效价IgG抗A(B)或IgA抗A(B)所引起,2.6.其余红细胞未见凝集的试管,再以PH7.4PBS洗涤3次,除去洗涤液,留取压积红细胞。

2.7.各管各加pH7.4PBS2滴,混合。

2.8.每管各取1滴,分别移至另一排小试管中,再各加最适稀释度的抗球蛋白血清1滴,混合。

2.9.1000r/min离心1min。

2.10轻轻摇动试管,观察结果,红细胞凝集的最高稀释度的倒数即为IgG抗A(B)效价。

3.附注:3.1 0.01mol/L二硫苏糖醇(DDT)盐水溶液也可用于灭活IgM抗体。

3.2当母亲血清中IgG抗A(B)效价大于1:64时提示婴儿有受害的机会,大于1:128时提示婴儿很可能受害,大于1:512时几乎100%发病。

3.3当父亲血型为AB时,应排列小试管两排,第一排加5%A 型红细胞悬液, 第二排加5%B型红细胞悬液,分别测抗A、抗B效价。

抗体效价测定操作规程

抗体效价测定操作规程

抗体效价测定操作规程 Hessen was revised in January 2021抗体效价测定操作规程操作步骤:一.IgG类1.IgG类抗体效价滴定,须取适量血清200μL加等体积2—Me溶液混合,封口,置37℃水浴箱作用60分钟,先稀释血清:200L病人血清600L生理盐水备用,排列6支试管按顺序编号。

第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L,在第一管和第二管中各加入稀释血清200L,第二管混匀后移出200L转至第三管,以同样操作第六管,从第六管吸出200L暂时保留在另一试管中(可做为第七管),以备必要时作进一步稀释。

这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256。

2.加红细胞悬液(自配红细胞悬液同反定型试剂)每管各加2%相应红细胞悬液200L,混匀。

(如待检血清抗体为抗A,则加入A型标准红细胞悬液;如待检血清抗体为抗B,则加入B型标准红细胞悬液;如待检血清中既有抗A又有抗B,则倍量稀释两份血清,一份加入A型标准红细胞悬液,另一份加入B型标准红细胞悬液;)3.先直接观察离心结果,之后在每管分别加入凝聚胺试剂盒中的R1液3d,混合30S均匀后,在各加R2液2滴,操作方法同凝聚胺交叉配血法,然后判读结果。

通常以肉眼观察到的第一个“±”的凝集管作为判断的终点,终点血清稀释度的倒数为效价(Titer),或称滴度。

二.IgM1.血清连续倍量稀释法先稀释血清:100L病人血清+700L生理盐水备用,排列6支试管按顺序编号。

第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L,第一管和第二管中各加入稀释血清200L,第二管混匀后移出200L转至第三管,以同样操作第六管,从第六管吸出200L暂时保留在另一试管中(可做为第七管),以备必要时作进一步稀释。

这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256。

血型不完全抗体检测卡—母体IgG抗体效价检测

血型不完全抗体检测卡—母体IgG抗体效价检测
4)在所有孔中分别加入50µl父亲(或父亲同型)的0.5-0.8%红细胞悬液(ABO血型系统IgG血型抗体)或在所有孔中分别加入50µl标准O型0.5-0.8%红细胞悬液(测定孕妇ABO血型系统以外IgG血型抗体);
5)37℃孵育15分钟;
6)离心5分钟(900rpm2分钟,1500rpm3分钟);
7)肉眼观察结果。
结果判定:
阳性结果:红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中,为阳性反应。
阴性结果:红细胞抗原无相应的抗体结合,不出现特异性抗原抗体复合物,红细胞沉于微柱凝胶的尖底部,为阴性反应。
反应强度:特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面,为强阳性反应;复合物在胶中,为弱阳性反映;愈靠近胶底部颗粒愈小,反应愈弱。
操作步骤:
1)在试管中分别加入200µl母体血清和200µl DTT(或2-Me)应用液,然后置于37℃水浴30-60分钟。以充分破坏血清中IgM类抗体;
2)取6只干净试管,分别做好标记。将处理后的血清做倍比稀释;
3)将准备好的母体IgG抗体效价检测卡做好标记,依次将50µl倍比稀释血清分别加入标记卡中;
3、每日试验前,先取出微柱凝胶卡放置至室温。
4、红细胞悬液的浓度控制在0.5%-0.8%之间。
5、试剂卡应放在18-25℃储存,如若长期放在4℃冰箱,建议每1-2个月取出,用专用离心机离心一次,以防止干胶或产生气泡。
6、每日试验前,先取出微柱凝胶卡放置至室温。
7、红细胞悬液的浓度控制在0.5%-0.8%之间。
**医院
输血科文件编号:**血型不完全抗体检测卡—母体IgG抗体效价检测
版序:2007-12
页码:第1页,共1页
反应原理

BIOVUE母亲IgG效价测定操作规程

BIOVUE母亲IgG效价测定操作规程

母亲IgG抗体(抗A/抗B)效价检测操作规程一、项目名称、检验方法名称1.项目名称:母亲IgG抗体(抗A/抗B)效价检测2.检验方法名称:柱凝集二、临床意义当母亲血清中存在高效价的IgG型抗A/抗B抗体时,其ABO血型不合胎儿有可能发生新生儿溶血。

母亲血清IgG型抗A/抗B抗体效价测定,有助于预测NHD的发生,因而可以指导临床对NHD进行相应的防治。

三、方法学原理ABO新生儿溶血症常见于母亲为O型的非O型的新生儿,是由于母体含有对抗新生儿血型抗原的IgG型抗A/抗B抗体,该抗体可以通过胎盘进入胎儿体内,从而破坏胎儿的红细胞。

因为人血清中的抗A/抗B抗体通常是IgM型的,要单独测定IgG型抗A/抗B抗体,必需先去除IgM的干扰,所以待检血清先用2-巯基乙醇(2-Me)预先处理,灭活IgM抗体,剩下的IgG型抗体则可通过间接抗人球蛋白试验进行检测。

经过孵育,IgG抗体先致敏A型/B型红细胞,预置在试剂柱中的抗人球蛋白再与IgG抗体的Fc段结合,形成桥连,致敏红细胞因桥连作用而出现凝集反应,经过离心处理,凝集的红细胞被阻隔在分离柱的上方而被判为阳性。

将经过2-Me预处理的待检血清进行倍比稀释,将出现阳性反应的最大稀释度血清的稀释度倒数作为血清抗体效价。

该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。

正常具有抗原的人红细胞将与相应的抗体发生凝集反应,BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。

加入红细胞并将试剂卡离心后,发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面,而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。

四、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物1.试剂卡品牌:美国强生奥索2.代号:BioVue -poly Cassettes3.包装规格:400卡/箱试剂卡(707300);100卡/箱试剂卡(707350)4.试剂成分:抗人球蛋白(lgG,C3b/C3d)检测卡有6根微柱组成,每一柱中含有缓冲液,其成分为牛血清蛋白,大分子增强剂以及0.1%叠氮钠,0.01M的EDTA.成分描述第1~6柱:抗人球蛋白、抗-lgG、-C3d;多特异性抗-lgG(兔)抗-C3b(鼠单克隆)(克隆F7G3) 抗-C3d(鼠单克隆)(克隆C4C7) FD&C1#蓝色染料FD&C5#黄色染料5.试剂的储存与效期:储存条件:2~25℃环境保存。

母体效价检测卡

母体效价检测卡

新生儿溶血病母体IgG抗体效价检测卡标准操作程序(SOP)一、准备工作(一)微柱凝胶检测卡的准备:观察外观,如有干胶、杂质、气泡不可使用,之后将卡放置室温(18-25℃)平衡,再用专用离心机离心5分钟。

(二)试剂配制:吸取2-Me14.7μl,加pH7.2磷酸盐缓冲液至1ml为0.2M 2-Me应用液;密封,避光,保存于4℃冰箱内,可使用3个月。

(三)标本采集:抽取孕妇静脉血5ml,一般为不抗凝血,无需空腹。

同时,提供3-4ml胎儿父亲的抗凝血,对判断母子血型的配合与否是十分有益的。

(四)红细胞标本的制备:用红细胞稀释液(或生理盐水)配制红细胞悬液,红细胞最终浓度为0.8%。

(五)血清/血浆标本的制备:取同体积的血清/血浆和2-Me(DTT)混匀,密封试管口,37℃水浴30~60分钟。

二、操作步骤1.在试管中加入200ul母体血清/血浆和200ul 2-Me应用液,混匀,密封试管口,置37℃水浴30—60分钟,以充分破坏血清中的IgM类抗体。

2. 取6只干净试管,做好标记;第1管中加入处理后的血清/血浆50ul和350ul生理盐水,混匀(为1:16稀释);第2-6管中依次加200ul的生理盐水和前一管中的血清/血浆200ul,做倍比稀释。

3. 将卡标记好,依次将倍比稀释后的相应50ul血清/血浆分别加入标记孔中。

4. 在所有孔中加入50ul父亲的0.8%红细胞悬液(或与父亲同型的A型或B型0.8%红细胞悬液),测定孕妇ABO血型系统IgG血型抗体;在所有孔中加入50ul标准O型 0.8%红细胞悬液,测定孕妇ABO血型系统以外IgG血型抗体。

5. 加样后的检测卡,置37℃孵育器中孵育15分钟。

6. 用专用离心机离心5分钟(900rpm 2分钟,1500rpm 3分钟), 取出,判定结果。

结果判定:产生1+凝集的最高稀释度,其倒数即为效价1. 阳性结果:红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中。

2. 阴性结果:红细胞完全沉降到胶底部,在凝胶管底部形成红细胞扣。

医院检验中心HCVIgG操作规程

医院检验中心HCVIgG操作规程

医院检验中心HCVIgG操作规程
[步骤]
1、稀释:样品稀释液100ul加待检标本10ul,阴性对
照,阳性对照各两滴,封板混匀.
2、温育37℃30分钟
3、甩干,洗板5次扣干
4、加酶标试剂100ul,封板混匀
5、水育37℃20分钟
6、洗板6次,扣干
7、加显色剂A,B各1滴,混匀后室温放置10分钟
8、终止液100ul,混匀,于450nm处测OD值
[结果判定]
目测:
在白色背景下观察各孔显色情况,无色或比阳性对照孔蓝色明显更浅者为HBeAg阳性:与阴性对照孔颜色相近或深于对照者为HBeAg阴性。

酶标仪检测:
临界值(cut off)=阴性对
照OD+0.1
样品OD小于临界值为阴性
样品OD大于临界值为阳性。

母体效价检测卡

母体效价检测卡

新生儿溶血病母体IgG抗体效价检测卡标准操作程序(SOP)一、准备工作(一)微柱凝胶检测卡的准备:观察外观,如有干胶、杂质、气泡不可使用,之后将卡放置室温(18 - 25C)平衡,再用专用离心机离心5分钟。

(二)试剂配制:吸取2-Me14.7卩I,加pH7.2磷酸盐缓冲液至1ml为0.2M2-Me应用液;密封,避光,保存于4C冰箱内,可使用3个月。

(三)标本采集:抽取孕妇静脉血5ml, 一般为不抗凝血,无需空腹。

同时,提供3-4mI胎儿父亲的抗凝血,对判断母子血型的配合与否是十分有益的。

(四)红细胞标本的制备:用红细胞稀释液(或生理盐水)配制红细胞悬液,红细胞最终浓度为0.8%。

(五)血清/血浆标本的制备:取同体积的血清/血浆和2-Me (DTT )混匀,密封试管口,37C水浴30~60分钟。

二、操作步骤1.在试管中加入200ul母体血清/血浆和200ul 2-Me 应用液,混匀,密封试管口,置37C水浴30—60分钟,以充分破坏血清中的IgM类抗体。

2.取6只干净试管,做好标记;第1管中加入处理后的血清/血浆50ul和350ul生理盐水,混匀(为1:16 稀释);第2-6管中依次加200ul的生理盐水和前一管中的血清/血浆200ul,做倍比稀释。

3.将卡标记好,依次将倍比稀释后的相应50ul血清/血浆分别加入标记孔中。

4.在所有孔中加入50ul父亲的0.8%红细胞悬液(或与父亲同型的A型或B型0.8%红细胞悬液),测定孕妇ABC血型系统IgG血型抗体;在所有孔中加入50ul标准O型0.8%红细胞悬液,测定孕妇ABO血型系统以外IgG血型抗体。

5.加样后的检测卡,置37C孵育器中孵育15分钟。

6.用专用离心机离心5分钟(900rpm 2分钟,1500rpm 3分钟),取出,判定结果。

结果判定:产生1+凝集的最高稀释度,其倒数即为效价1.阳性结果:红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中。

2.阴性结果:红细胞完全沉降到胶底部,在凝胶管底部形成红细胞扣。

18-抗人球蛋白检测卡(效价测定)操作---作业指导书

18-抗人球蛋白检测卡(效价测定)操作---作业指导书

1.1 微柱凝胶试剂卡的准备观察外观,如有干胶、杂质、气泡不可使用,将卡放置平衡至室温,使用前置离心机3000r/min 1 min离心。

1.2 检测标本的准备
1.2.1 待检标本的准备:将待检全血标本离心分离红细胞与血浆(血清),取上清(该上清不得有絮状物或沉淀)。

取待检血清和2-Me(二巯基乙醇)应用液各200微升,充分混匀,℃水浴2小时(以充分破坏血清中的IgM类抗体)。

1.2.2 红细胞悬液的制备:将标准红细胞配成1%生理盐水悬液。

操作步骤
2.1 取7支干净试管排于试管架上;将第一管加入100微升灭活血清和700微升生理盐水(原液为1:1稀释,此时稀释比例为1:16)。

2.2 第2-7管中分别加入400微升生理盐水;从第一管中吸出400微升的液体加入第二管,混匀,在从第二管吸出400微升加入第三管混匀,依次倍比稀释。

2.3 取抗人球蛋白检测卡,撕去铝箔,在4管中个依次加入4-7管(1:128 – 1:1024
生科抗人球蛋白检测卡检测建议参考值:孕妇IgG(抗A/抗B)效价<256。

注意事项
3.1 检测卡若在冰箱储存,使用前须放置实验室平衡至室温。

3.2 检测卡试验前,应3000r/min, 离心1 min,正立放置待用。

3.3 如因运输过程产生的气泡,可将检测卡放置在漩涡震荡器上震荡,使气泡漂移至胶面为止,3000r/min, 离心2 min。

3.4 细菌污染、纤维蛋白析出,抗凝不佳的血,可产生假阳性。

3.5 离心速度过快、时间过长,试剂失效等因素均可导致假阴性。

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孕妇血清IgG抗体效价检测操作规程
[样本要求]:血样标本最好采用EDTA抗凝(也可以用枸橼酸钠等抗凝),用血清代替血浆进行检测时,用前离心,2000g×10min,防止纤维蛋白干扰反应结果。

[样品准备]:
试剂配制:用985ulPH7.4的PBS(或者生理盐水)溶解15ul二巯基乙醇(2-Me),即为0.2M(2-Me)应用液,密封,避光,置2---6℃保存.
红细胞标本的制备:用生理盐水配置红细胞悬液,红细胞最终浓度为1%左右.
血清标本的制备:将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中,10分钟后离心取上清;或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中,4℃放置12小时,或37℃
放置2小时后离心,2000Rpm,10分钟,取上清.该上清不得有
絮状物或沉淀;
[配套试剂]:孕妇IgG抗体
效价卡,标准A、B、O红细
胞(取决于父亲血型),
0.2M(2-Me)应用液
[实验步骤]
1、试剂卡室温平衡,
离心一次,标记编
号;
2、配制中和血浆:先取待检者血浆200微升与生理盐水600微升做4倍稀释,然后取稀释后的标本和
0.2M巯基乙醇(2-Me)应用液各200ul,混匀,37℃孵育30---60分钟,(充分破坏标本中IgM类抗体)
既得到孕妇的中和血浆。

3
4、在所有孔中加入50ul健康人O型1%红细胞悬液(测定孕妇ABO血型系统以外IgG血型抗体)或所有孔
中加入50ul健康人A型或B型1%红细胞悬液(测定孕妇ABO血型系统IgG血型抗体),然后加入上述表格中稀释的中和血浆各50ul
5、把加有血浆和红细胞的微柱卡置37 ℃专用孵育器孵育15分钟;
6、用专用离心机离心5分钟(900r/min2分钟1500r/min3分钟)。

判定结果。

[结果判定]效价值:产生3+凝集的最高稀释度,其倒数即为效价。

[参考值]
1、RH系统抗体效价16有临床意义
2、ABO系统抗体效价64有临床意义
[注意事项]
1.据文献报道微柱凝胶法检测出的母体效价值比常规聚凝胺和抗人球蛋白试管法高出1-2个滴度
(根据P.L.Mollison所著教材《临床医学中的输血(Blood Transfusion in Clinical Medicine)》)
2. 红细胞标本一定不能被细菌污染,否则出现假阳性反应。

尽可能应用当日采集的新鲜血做本实验。

如不
得不用过夜血或陈旧血,则必须首先用该标本做阴性对照试验,以确定该标本是否可以做本实验。

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