时间分辨临床意义(..

时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）在乙肝两对半定量检测的临床意义一、极大地提高了检测灵敏度TRFIA检测HBsAg灵敏度可达到0.2ng/ml，而酶标（ELISA）检测HBsAg灵敏度是2ng/ml，也就是说血清中的HBsAg达到2ng/ml酶标才会呈阳性。

1、缩短急性乙肝HBsAg检测"窗口期"。

2、如病毒发生变异后，表达量较低，常规ELISA检测不出抗原，而TRFIA定量具有极高的灵敏度，可发现并极有可能检测出HBsAg和HBsAb。

3、可发现低浓度的HBsAg携带者。

特别是一些群体，如医护工作者、病人家属等，由于长期密切接触，但又非直接经血传播感染成急性乙肝，而是长期少量感染，并刺激机体产生一定的免疫力，可能呈低浓度感染，特别应当引起人们的足够重视，密切关注并采取措施防止发展成乙肝或慢性携带者。

二、动态观察疗效和病情监疾病的发生、发展、疗效、预后是一个动态的变化过程，TRFIA定量检测乙肝"两对半"各标志物的浓度变化可对乙肝的病程、治疗、预后起一个全程动态检测的作用，能够为医生对病情疗效作出合理的解释提供依据，指导治疗。

1、定量分析HBsAg和HBsAb的浓度变化，可以预见急性乙肝是否处于恢复期。

如HBsAg浓度降低，HBsAb的浓度逐渐升高，可说明病情正在往恢复期发展。

反之，HBsAg 浓度处于较高水平或上升趋势，而HBsAb一直处于较低水平，则容易发展为慢性乙肝或携带者。

2、定量分析HBeAg和HBsAb的浓度变化，可以反映病情变化和治疗效果。

明确检测HBeAg向HBsAb转换的时期，即表现为HBeAg浓度下降和HBsAb浓度的升高的过程。

高浓度的HBeAg还可间接提示病毒处于高复制状态，具有较高的传染性。

高浓度的HBsAb 一方面提示病情的好转，而在某些时候（如肝功能指标很差）可能与肝坏死、肝硬化、肝癌有关。

3、HBsAb浓度的高低可以反映病毒感染的状态。

乙肝急性感染常呈现高浓度的HBsAb，恢复期浓度降低。

慢性乙肝呈HBsAb持续高浓度。

低浓度的HBsAb一般为恢复期或既往感染。

4、有利于对慢性肝炎活动性和非活动性的判断。

非活动性慢性乙肝各项指标相对稳定，活动性往往呈进行性变化。

三、血清HBV-DNA荧光定量PCR测定可以直接反映病毒复制状态，具有很多临床应用价值，但不能完全反映病毒复制静息期肝细胞内HBV病毒状态。

HBV-DNA阴性并不完全代表体内HBV已被清除，结合"两对半"各项指标更能客观反映体内HBV病毒状态，正确判断预后和治疗。

四、HBsAb的定量测定能够对抗体是否真正具有"中和"HBV的免疫力作出正确评价，对乙肝的预防起到监督作用。

HBsAb的含量在10mIU/ml以上病人在用ELISA检测就可呈HBsAb"阳性"结果，但并不提示机体都一定具有免疫力，而HBsAb的含量在10 ～100mIU/ml之间的样本，定性虽为"阳性"，但此时机体以对HBV的免疫力弱，甚至不能预防HBV感染，仍有感染HBV的危险只有HBsAb的含量达到100mIU/ml以上。

时才能确定具有抵抗HBV入侵的作用。

HBsAb的含量越高，机体抵抗HBV入侵的能力越强，持续保护时间越长。

作定量测定根据HBsAb 的含量可判断机体对HBV的免疫状态及乙肝疫苗的免疫效果，HBsAb的含量较低，应该加强注射一针乙肝疫苗，使HBsAb的浓度提高起到保护作用。

同时，乙肝疫苗接种后机体产生免疫力因个体差异而不同，有的可产生高浓度的抗体并持续数十年。

而有的人产生的抗体浓度不是很高，且持续时间也不长，数年后就逐渐消失，这部分人应及时关注HBsAb浓度变化，必要时也应加强注射一针乙肝疫苗（但也有人认为机体在受到病毒感染时，会产生记忆反应，迅速提高免疫力）。

因此定量测定对乙肝疫苗免疫力的评价和高危人群预防免疫具有重要意义，特别是在少年儿童预防乙肝方面。

高度的特异性TRFIA、EMIA、ELISA法检测HBV—M结果分析广州市第一人民医院检验科（510180）雷秀霞陈小辉徐邦牢陈英姿【摘要】目的比较MEIA、TRFIA、ELISA三种方法在测定HBV-M时结果的符合程度、灵敏度、特异性，了解TRFIA法测定HBV-M的准确性和可行性。

方法分别用ELISA和TRFIA法测定170份随机血清样本乙肝两对半并计算结果符合率；用三种不同方法对56份强阳性或临界值血清作HBsAg、HBsAb、HBeAg三项指标测定。

结果TRFIA、ELISA法测定170份随机样本HBV-M结果符合率较高，阴阳结果经配对资料的卡方检验，无显著性差异，P>0.05。

但资料同时显示，对HBeAg为临界值的血清，TRFIA有1.92%的漏检率；ELISA有9.62%的漏检率，同时ELISA还易出现假阳性反应。

结论 TRFIA法测定HBV-M特异性、灵敏度及结果符合率较ELISA法高，TRFIA是定量的方法，可为临床疗效的观察及乙肝疫苗的接种提供依据。

关键词时间分辨荧光免疫分析法乙肝病毒标志物微粒子酶免疫分析法酶联免疫吸附试验我国是乙型肝炎高感染的国家，据统计，全国人口10%以上为HBsAg携带者，乙型肝炎病毒的总感染率达35.5~61.1%，有报道[1]用目前常用的方法检测出HbsAg阴性的人群中，有11.0%HBV-DNA呈阳性反应，也就是说，常规的检测方法可能有11.0%的漏检率，究其原因主要是由于抗原含量低于现行方法的可检出水平。

再者，传统的检测方法只能提供定性结果，最高也只能进行滴度的分析，放在临床使用上有一定的局限性，特别是在疗效观察和疫苗注射后抗体产生情况的观察上存在着明显的不足，故需要一种新的既灵敏快捷准确又不太昂贵的方法来填补这一缺陷，本实验用三种不同的方法检测了三种HBV-M（乙肝病毒标志物），旨在与同行探讨一下三种检测方法在日常工作中的可行性及相关性。

现将实验结果报告如下。

1．材料与方法1．1 标本来源：检测血清标本均取自本院住院病人和门诊病人，共226例。

1．2 仪器和试剂微粒子酶免疫分析法(MEIA)使用美国Abbott试剂和美国Abott公司AXSYM全自动酶免发光分析系统；ELISA法使用北京万泰药业公司生产的试剂；时间分辨荧光免疫分析法（Time-Resolved Fluoroimmunoassay 简称TRFIA）使用上海新波生物技术有限公司生产的ANYTEST2000型时间分辨荧光免疫检测系统及配套试剂。

洗板机为北京天石医疗用品制作所ZMX-96III型自动酶标洗板机；酶标仪为奥地利CliniBio128C自动酶标仪。

1．3 检测方法：170份随机标本同时用TRFIA及ELISA法作乙肝两对半测定。

56份强阳性或临界血清分别用TRFIA、ELISA、EMIA法检测HBsAg、HBsAb、HBeAg，严格按试剂、仪器操作说明判断结果，专人操作。

2 结果2．1 以美国Abbott试剂为标准，用ELISA、TRFIA两种不同方法测定56例强阳性或临界血清结果的相对灵敏度、相对特异性和结果符合率，结果见表1。

2.1 .1从表1可见，ELISA、TRFIA法测定HBsAg以MEIA法为标准，其灵敏度和结果符合率都很高，而特异性TRFIA法则明显高于ELISA法（依次为100%，83.83%），说明ELISA 法测HBsAg较易出现假阳性、假阴性反应。

2.1.2 TRFIA法测HBsAb灵敏度为100%，结果符合率为92%，高于ELISA法（95.35%和84%）。

由于本项目实验选取的标本大多数为ELISA法弱阳性标本，阴性标本太少，故未作特异性计算。

2.1.3 TRFIA法测HBeAg灵敏度、特异性、结果符合率（依次为94.44%、100%、98.08%）均高于ELISA法（依次为76.47%、91.43%、88.46%）。

ELISA、TRFIA法测临界值HBeAg均有不同程度的漏检，ELISA的漏检率为9.62%(5/52), TRFIA的漏检率为1.92%(1/52),ELISA 法还出现5.77%(3/52)的假阳性结果。

2.1.4 三种方法阴阳结果经配对资料的卡方检验，均无显著性差异，P>0.05。

2.2 170份随机标本TRFIA与ELISA法测定结果符合率的比较见表2。

就随机样本而言，两方法的结果符合率均在90%以上，尤其HBsAg、HBeAg结果符合率达99.41%和98.8%，各检测项目阴阳性结果经配对资料卡方检验均无显著性差异，P＞0.05。

而对于临界值血清，ELISA法测定HBV-M出现假阳性、假阴性反应明显高于TRFIA法。

2．讨论有报道[2]用ELISA法测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb结果与MEIA法的结果符合率依次为96%、97%、98%、89%、93%，与本实验170份随机标本用ELISA及TRFIA法结果符合率相符(99.41%、94.12%、98.8%、93.53%、91.76%)，资料显示，测定五项HBV-M的灵敏度及特异性ELISA法普遍低于TRFIA法，究其原因，可能与两法反应原理不同密切相关。

TRFIA用三价稀土原子（Eu3+）及其鳌合物作示踪物，代替酶和标记抗原、抗体，并且当免疫反应结束后，根据Eu3+离子鳌合物的荧光光谱的特点，采用解离-增强技术放大有效荧光，最后用时间分辨荧光分析仪，测定免疫反应最后产物的荧光强度，根据已知浓度确定的标准曲线来判断未知样品的浓度值，以达到定量分析的目的。

朱艳冰等曾用Eu3+建立双抗体夹心的TRFIA法测定HBsAg，获得了满意结果，灵敏度高于ELISA法且具有不受样品背景荧光干扰，精确度高，线性范围宽（0~100ng/ml）等优点，且标记物制作稳定，显示出良好的应用前景[3]。

TRFIA为定量方法，经统计，该法测得三种HBV-M含量与MEIA法比较有良好的线性关系，尤其是HBsAb， r＝0.918。

由于HBsAb为保护性抗体，在含量达到一定时，对机体有免疫保护作用，因此，良好的测定线性关系对于决定病人是否需要接受疫苗接种，提供了可靠的指标。

HBsAg含量多少在一定程度上反映乙肝患者的病情，故定量的测定方法对于临床疗效的观察有一定参考价值。

TRFIA作为一种灵敏度高、特异性及重复性好的定量免疫测定方法，近年来应用范围不断扩大[4、5]。

对于大型的实验室，应用各种非放免标记、非发色酶标的自动化设备来进行分析，是技术发展的趋势，相信在不久的将来，TRFIA法在各大实验室的普及将成为必然。

参考文献[1] Pao cc，et al.Am J Clin Pathol 1991；95：591[2] 黄波，张国元.ELISA法测定乙肝两对半中两种判断结果探讨.川北医学院学报，2003，18（1）：112[3] 朱艳冰，李庆国，王桂兰等.新型铕络合物用于HBsAg的时间分辨荧光免疫.标记免疫分析与临床，2002，9（3）：157[4] 顾爱萍，朱雪明，单卫民，等.丙型肝炎病毒抗体的时间分辨荧光分析法检测.临床检验杂志，2001，19（4）：215[5] 黄飚，肖华龙，朱利国，等.糖蛋白抗原19-9时间分辨荧光免疫分析.中华检验医学杂志,2000，23（3）：171时间分辨荧光免疫测定技术在HBV-M 定量检测及临床应用分析蔡意和 2004-7-24 15:34:00 中华中西医杂志2004年3月第5卷第6期【摘要】目的研究乙肝病毒感染者血清免疫学标志物，利用时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）检测其含量结果与ELISA法结果的符合程度、灵敏度、特异性;了解TRFIA测定HBV-M的准确性、可行性及临床应用价值。