时间分辨免疫荧光技术ppt课件

钌 无 无 28种临床, 无科研试剂 高
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时间分辨免疫荧光技术优点总结
零本底、灵敏度高 线性范围宽 试剂有效期长 标准曲线稳定性好 易于自动化 对环境及人体没有任何影响
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时间分辨免疫荧光技术的应用
甲状腺功能检测
根据荧光强度和相对荧光强度比值，判断反应体系中分析物的浓 度，达到定量分析的目的
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什么是时间分辨免疫荧光技术？
例如：
三价稀土离子包括有铕(Eu)，钐（Sm)，铽 (Tb) ，镝 (Dy)等，它们的荧光 光谱具有特异性强﹑ Stokes位移大﹑寿命长的特点；
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特点
技术上的先进性
时间、光谱分辨
特异性荧光与非特异 性荧光分离度高
发射荧光与激发荧 光分离度高
零背景、高特异性
解离、增强
荧光性大大提高 稳定的荧光螯合物
线性范围更宽 重复性更好
标记位点 标记方法
标记位点多 对标记物结构及活性影响小 无衰变 受环境影响小
高稳定性，高精确度 试剂保存时间长 标准曲线保留时间长
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什么是免疫荧光技术？
基本原理：
免疫荧光技术是将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记 技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。
以荧光素作为标记物，与已知的抗体或抗原结合、但不影响其 免疫学特性。然后将荧光素标记的抗体作为标准试剂，用于检 测和鉴定未知的抗原。
T3、T4、FT3、FT4 、TSH-U、TBG 、 Ab 、TPO Ab
内分泌检测 糖尿病指标检测
胰岛素、C－肽
意义：
生长激素检测
hGH（生长激素）
甲状腺疾病也是目前最常见最多发一种内分泌疾病，以上各项目的联合检测，
为临床医生对病患者甲状腺功能的评价提供更基础、全面的依据
用于区分胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)和非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)和用于
胰岛素瘤的诊断
对诊断肢端肥大症是一项特异的方法
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时间分辨免疫荧光技术的应用
妇产科检查：
hCG
绒毛膜促性腺激素
LH-Spec 黄体生成素(特异性)
FSH
促卵泡激素
PRL
催乳素
E2
雌二醇
Testo 睾酮
Prog
孕酮
SHBG 性激素结合球蛋白
意义：
检测这些激素的含量对于生殖生 理的研究、疾病的诊断、治疗、随 访及计划生育工作的开展具有重要 的意义。
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通过时间延迟，将特异性荧光 与非特异性荧光分辨开来
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时间分辨免疫荧光技术的优势是什么？
精确度上的优势:
放射免疫 （精度：10-12mol/L） 酶联免疫 （精度：10-9 mol/L） 胶体金标记 （精度：10-15mol/L） 化学发光 （精度：10-15mol/L） 电化学发光 （精度：10-17mol/L） 时间分辨荧光（精度：10-18mol/L） 生物芯片 （精度：10-18mol/L）
在荧光显微镜下，可以直接观察呈现特异性荧光的抗原抗体复 合物及其存在的部位。
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什么是时间分辨免疫荧百度文库技术？
概念： 时间分辨免疫荧光技术指利用具有双功能基团结构
的螯合剂，将镧系元素标记到抗体（或抗原）上，经 免疫反应形成复合物，由于镧系元素能发出荧光，故 分离除去未结合的成分后，利用时间分辨荧光仪即可 测定荧光强度，从而推测待测物含量。
单、双标记 同一试剂盒可同时测多个项目
多标记
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时间分辨免疫荧光分析相较于化学发光的优势
• 发光效率 • 重复检测 • 本底噪声 • 灵敏级数 • 标记物 • 标记位点 • 标准曲线 • 多标记 • 科研开发
时间分辨荧光
95% 可无数次 零本底 10-18 原子 可达20个/抗体 稳定达一年以上 最多可达四标记 有
化学发光
1% 不可重复 干扰大 10-15 大分子化合物 1个/抗体 稳定 2 到 4周 无 无
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时间分辨荧光和电化学发光比较的优势
• 标记物 • 多标记技术 • 做科研 • 试剂种类 • 试剂价格
时间分辨荧光
电化学发光
Eu, Sm, Te, Dy 有 能 58种临床,24种科研 低
时间分辨免疫荧光技术
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主要内容
目前有哪些标记免疫学分析方法？ 什么是免疫荧光技术？ 什么是时间分辨免疫荧光技术？ 时间分辨免疫荧光技术的优势是什么？ 时间分辨免疫荧光技术可应用于哪些方面？
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目前有哪些标记免疫学分析方法？
免疫荧光分析(Coons, 1941) 放射免疫分析(Berson和Yalow, 1960) 酶联免疫分析 (Engvall, 1971) 胶体金标记免疫分析(Faulk和Taylor, 1971) 化学发光免疫分析(Arakawa， 1977) 时间分辨荧光免疫分析(Soini和Hemmila，1979) 电化学发光免疫分析(Leland, 1990) 生物芯片(美国Luminex公司, 1997)
采用异硫氰酸苄基二亚乙基三胺四乙酸铕(DTTA-Eu)为双功能螯合试剂，其 一端螯合Eu3+，另一端可与蛋白质的-NH2 连接；
在中性或接近中性pH 条件下，DTTA 与Eu3+具有足够的螯合稳定性，而在 增强液（呈酸性）作用下，DTTA-Eu 又能将螯合的Eu3+迅速、彻底地释放 出来并与增强液中的配体螯合﹑进入胶束的疏水内核，使Eu3+荧光得以成千 万倍地放大。
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什么是时间分辨免疫荧光技术？
基本原理：
用三价稀土离子及其螯合物作为示踪物，代替荧光物质、同位素、 酶和化学发光物质，标记抗原、抗体、激素、核酸探针等物质；
当免疫反应发生后，根据稀土离子螯合物的荧光光谱的特点 （特 异性强、荧光光谱的Stokes位移、寿命长），用时间分辨荧光分 析仪，测定免疫反应最后产物的荧光强度；