化学发光+技术手册(注释)
化学发光SOP
第 1 页全自动化学发光免疫分析仪标准化操作规程第1版第 1次修改生效日期：2012年1月1日标题一. 封面雅培I 1000全自动化学发光免疫分析仪标准化操作规程（SOP）文件编号01是否受控是/否持有人签字XXXXXXXX医院2010年3月1日批准人质量负责人编写人生效日期第 2 页全自动化学发光免疫分析仪标准化操作规程第1版第 1次修改生效日期：2012年1月1日标题二 . 目录一 . 封面 1二 . 目录 2三. 标本的采集及保存 3四. 检验标准化操作规程 4五. 各项试剂 10批准人质量负责人编写人生效日期第 3 页全自动化学发光免疫分析仪标准化操作规程第1版第 1次修改生效日期：2012年1月1日标题三. 标本的采集及保存一、标本的采集及保存1.1 原始样本类型血清（真空干燥采血试管或带分离胶的真空采血管分离的血清）、血浆或全血（应用抗凝剂为EDTA-K3）1.2 样本量单次全套乙肝血清标志物检测需全血样本5ml1.3 患者准备•严禁使用接受过鼠单克隆抗体诊断或治疗的病人样品,因其体内含有人抗鼠抗体（HAMA），当这些样品在使用含鼠单克隆抗体分析试剂进行测试时会引起值假的升高或降低。
•对于一些有药物干扰的分析，注意避免（详情参阅试剂说明书）1.4 标本采集方法一般采用静脉采血1.5 标本采集要求•避免过度溶血，必须在无菌条件下采集•确保离心的速度（10000转/分钟）和时间（10分钟），避免颗粒物质的干扰•避免样品的反复冻融，融解后的样品需低速震荡或轻轻颠倒混匀以获得稳定的结果，当样品中有颗粒物质，红血球或浑浊物时必须离心使其澄清后再进行测试1.6 样品的稳定期和保存•上机3小时内完成检测•2︒C —8︒C ，标本可保存1~14天•如长期保存，必须将血清分离出来，冷冻保存（-10︒C或更冷）•-20︒C可稳定3个月。
标本可冻融5次。
•注意：冻融过的标本、有沉淀的标本、反复测定过的标本使用前需离心。
化学发光介绍-PPT
肿瘤标志物
组织多肽抗原（TPA） 临床意义：主要见于恶性肿瘤；也可见于急性肝炎、胰腺炎、肝 炎等，但增高程度较轻。 前列腺特异性抗原（PSA） 临床意义：主要见于前列腺癌，是前列腺癌首选和最有应用价值 的肿瘤标志物。前列腺增生、前列腺炎、良性前列腺瘤、肾脏和泌 尿生殖系统疾病时，PSA可轻度升高
乙肝五项标志物的检测 3、HBeAg和HBeAb（HBeAg作为乙肝病毒复制增殖的间接指标） HBeAg阳性：说明病毒复制活跃，传染性强，是乙肝患者具有传
染性指标。可见于急、慢性乙肝和乙肝病毒携带者，如持续阳性， 表明乙肝转为慢性迁延性肝炎 HBeAb 在急性肝炎时，此抗体阳性表明乙肝复制缓解或终止，在慢性肝 炎或肝硬化患者，此抗体阳性说明乙肝病毒DNA与肝细胞发生整 合，提示病情较长，预后不佳。
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肿瘤标志物
游离前列腺特异抗原（F-PSA）与F-PSA/PSA比值 临床意义：F-PSA 见于前列腺增生和前列腺癌，但前列腺癌增高 程度不如前列腺增生明显。 F-PSA/PSA降低 见于前列腺癌和前列腺增生，但前列腺癌的降低 程度明显高于前列腺增生 前列腺酸性磷酸酶（PAP） 临床意义：见于前列腺癌、前列腺增生，但前列腺癌增高更明显
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肿瘤标志物
甲胎蛋白（AFP）
临床意义：常见于原发性肝炎、大多数卵巢和睾丸胚胎性肿瘤或 畸胎瘤，生殖腺外生殖细胞瘤，肝母细胞瘤，肝细胞瘤，转移性肝 癌等，也可见于婴幼儿肝炎，肝硬化、急性肝炎、重症肝炎恢复等， 但多为一过性升高，胎盘梗塞、剥离、羊水栓塞、高危妊娠、母儿 血型不合、糖尿病孕妇等血清AFP也升高。
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感染性疾病检测
乙肝五项标志物的定量检测
4、HBcAb
阳性：表示既往感染乙肝病毒，如高抗体水平持续存在提示乙肝 病毒可能还在复制，乙肝病毒感染后，此抗体是最早出现的标志 性抗体，持续时间长，并且几乎所有患者均产生抗体，所以此抗 体是流行病学调查指标。
化学发光法的原理技术要点及评价应用 PPT
第一节 发光与化学发光剂
一、发光 一种物质由电子激发态回复到基态时， 释放出的能量表现为光的发射。
1.光照发光:发光剂经短波长入射光照射后进入激 发态，当回复至基态时发出较长波长的可见光。
2.生物发光:反应底物在荧光素酶的催化下利用 ATP产能，生成激发态的氧化荧光素，后者在回 复到基态时多余的能量以光子形式放出。
技术要点
1.抗原抗体结合反应 将包被McAb的磁颗粒和待 测标本加入到反应管中，标本中待测Ag与磁珠 上Ab结合，再加上AE标记Ab，经过温育，形成 磁珠Ab-Ag-AE标记Ab复合物。
2.分离技术 在电磁场中进行2-3次洗涤后，很快 地将未结合的多余Ag和标记Ab洗去。
3.化学发光反应 经洗涤的磁珠中，加入H2O2和 pH纠正液NaOH，这时AE不需要催化剂即分解并 发光，由集光器接收，经光电倍增管放大，记 录1S内所产生的光子能，其积分与被测物含量
体料是通包微 利过被珠 光用酶强度对标 记 的发抗 光测体 定底而物样抗 本原催直接化进作A M行用P P定而D 量直。接发光，
电化学发光原理图
• 这一过程可在电极表面周而复始地进行 • 产生许多光子，使光信号增强
TPA+●
电极
●
TPA
R u ( b p y )33 +
R u ( b p y )32 +
常用试剂：吖啶酯（acridinium，AE）
CH 3
N+
- HO 2
CO
O
R
CH 3 N
O CO O
R
CH 3 N
O CO O
+ CO2+ 光
化学发光免疫分析试剂操作规范
化学发光免疫分析试剂操作规范化学发光免疫分析试剂操作规范化学闪光免疫分析试剂操作规范一、试剂盒的保存1.保存条件:1.1试剂盒应放置于2~8℃冰箱中存放。
1.2试剂盒在取用过程中禁止颠倒,以避免试剂被污染。
1.3有特殊要求的试剂应严酷按照操作说明书要求的保存条件保存。
2.保存时间:2.1未开封试剂盒于2~8℃保存时,可在有用期以内正常使用。
2.2已开封试剂盒每次使用后需及时放回2~8℃冰箱内保存,应尽可能在开封后1个月内使用。
(按说明指示的开封的半制品有用期计算,尽量在半制品最短的有用期内用完)一、标本的处置惩罚以及保存1.标本收罗1.1.要注意避免出现严重溶血。
血红卵白中含有血红素基团,其有类似过氧化物的活性,因此,在以HRP为标记酶的酶促化学闪光测定中,如血清标本中血红卵白液体浓度较高,则其就很容易在温育过程中吸附于固相,从而使后面加入的HRP底物反应值偏高。
1.2.样本的收罗及血清分离中要注意尽量避免细菌污染,一则细菌的生长,其所分泌的一些酶可能会匹敌原抗体等卵白产生分解作用;二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶自己会对用相应酶作标记的测定要领产生非特异性干扰。
1.3.常规项目对标本收罗的要求:晨起空腹、安静状态下、或者休息半小时后收罗。
1.4.如无特殊说明,源德公司试剂盒合用的标本类型均为血清;故采血时应选用非抗凝采血管。
采血后应尽早离心,将血清分离后单独保存。
1.5.建议接纳真空采血管及蝶形针具,以免直接接触血液。
收罗器皿最好为一次性无菌密闭器皿。
采血后将真空采血管颠倒、轻轻混匀3~4次,不宜过猛,以避免溶血。
1.6.标本收罗时间及患者准备根据检测项目不同对标本的收罗要求也不相同,具体内部实质意义参见试剂盒说明书。
1.6.1激素:可的松峰值在早晨4~6点之间;生长激素、促黄体激素(LH)以及促卵泡激素(FSH)均以阵发性方式释放,须在密切相连的时间间隔内采取数份血样本,以资中心值为测定值。
化学发光仪英文软件操作手册
Luminoskan Ascent化学发光仪软件操作手册1.安装将随机附送的软件光盘插入光驱，确认默认的安装路径及选择正确的仪器类型(图1)，按提示输入单位名及任意的序列号（图2）,一路按”next”进行安装。
完成后在桌面上自动生成快捷图标。
如图（1）,(2)所示。
图1图22.操作双击图标打开软件，点“session”下拉菜单，选择“new”编新程序或“open”打开已有的程序。
如图3所示。
选择荧光或化学发光的检测方法图3按“new”编新程序，先选择酶标板类型，一般选择第一个选项。
如图4所示。
图4点击general，分别有area definition,鼠标点击可用来定义检测的范围，如图5。
按下代表不选中，然后用鼠标拖拉按下代表选中，然后用鼠标拖拉图5点击layout,可设置对应于试剂盒的标准品，测试样本，空白和对照等。
设置方法为先用鼠标点击所要设置的位置，下拉”type”菜单，选择所定义的类型，再点击”apply”。
如图6。
图6点击“settings”可设置仪器相关的一些参数。
详细情况可见图7。
图7然后可根据实验的实际情况，按次序设置实验步骤，这些步骤包括“measure(测量步骤)，incubate(温控步骤)，shake(振荡步骤)，dispense(单独分液步骤)，dispense and measure(分液并检测步骤，适合于发光时间极短的反应)等。
如图8。
图8测量步骤见图9。
控制进板控制出板温控步骤，先设置仪器起始温度，如图10。
待仪器达到起始温度再设置“incubate ”。
如图11。
图10图11分液步骤，如图12。
图12振荡步骤，如图13设置温控时间设置温度，需与起始温度一致图13加液并检测步骤，如图14，此步骤是指对每孔先加液，然后马上检测，适合于发光时间很短的实验。
图14设置完步骤后，就可保存程序，如图15。
可指定程序名及保存路径。
设置总振荡时间 振荡开启时间振荡关闭时间设置振荡速度保存键图15最后按“start”开始检测，如图16。
罗氏2010化学发光SOP
罗氏诊断Elecsys 2010SOP文件运行条件ROCHE（罗氏）Elecsys 2010全自动电化学发光免疫分析仪1、环境条件为了确保系统操作的正常运转，应该保证以下的条件：∙无灰尘的、良好通风的环境∙无直接日照∙地面水平(角度：<1/200 º)∙地面足够坚硬能够承受仪器的重量∙温度：18~32摄氏度∙当系统启动时，温度的改变应该小于2度/小时∙屋内湿度：20%~85%∙电源电压没有明显的波动∙在附近没有会产生电磁波的仪器∙有接地的三相电源∙噪音应该小于65分贝2，水质要求∙无菌 (< 10 cfu/ml)，去离子水∙ 1.5 MΩ电阻值 (最大1.0 Ms/cm)∙15-25 磅/英寸2 (0.5~3.5 kg/cm2或 49~343 kpa)安全注意事项尤其要注意以下安全注意事项。
如果忽视了这些安全注意事项，则操作人员可能遭受重伤或致命伤害。
每个注意事项都很重要。
操作人员资格操作应在技术人员的监督之下进行，该技术人员曾于销售代理指定的实验室培训过。
认真遵守操作手册中规定的程序进行系统操作和维护。
本操作手册中没有说明的维护应由经过培训的罗氏技术支持人员进行。
安装要求安装由罗氏诊断代表进行。
客户负责提供必要的设施。
接通仪器在停机后1秒内不要接通电源。
电气安全注意事项对于任何电子设备，可能出现触电的危险。
不要企图接近标有该标签的仪器部件。
不要企图在任何电子室中工作。
只有经过授权的和具备资格的人员才能进行安装、维护和修理。
固体和液体废物与废液接触会导致感染。
在进行维护时，要确保佩带防护设备。
如果废液与皮肤接触，立即用水冲洗并加以消毒剂。
向内科医生咨询。
运动部件在仪器操作期间，不要将手放入仪器中。
接触标本机构、试剂移液机构、搅拌机构或其它机构可造成伤害。
在开始操作或维护/检查之前，要保证关闭并锁紧顶盖。
不要在操作期间，打开顶盖。
在打开顶盖进行维护和检查时，要保证遵循本手册中提供的程序。
罗氏电化学发光ECL2010中文操作手册
3.光标移到POS栏。输入所需样本位置号，按ENTER。将样本放入指定位置。
4.如果以多样本盘形式运行，按第一个样本盘的POS，输入样本盘号（0－9），按ENTER。
5.按屏幕上试验项目键进行试验项目的选择。当某一项目被选择，此项目键变蓝色。
释放/拒绝定标：
A.按CALIBRATIONDATA屏幕上的试验键
B.按RALEASE或REJECT
C.按OK
红色:表明定标失败。
8.保养
8.1日常保养
注意不要清洗搅拌器
清洗样本/试剂针(S/R):
在关机状态下手工移动S/R针到方便擦拭的位置用纱布沾70%酒精擦拭针表面
注意:针的尖端部分不能擦拭
擦拭外表面 小心尖端部分
6.如需要，按SAMPLECUPNORMAL键转变成REDUCED而使样本死腔量减少。REDUCED
只是针对样品杯或试管顶部而言。
注:只有当样本稀释液在机,自动稀释功能才有效.按DILUTION FACTOR选择相应稀释倍数
7.按REGISTER键储存当前样本信息。
光标回到SAMPLEID栏。
顺序号被自动累加。
材料准备:
清洗液:SysClean
清洗液容器: SysClean adapter
将9ml左右清洗液倒入清洗液容器
放在系统试剂位3如左图位置:
进入Util-maintenance-liquid flow cleaning-start
完成清洗后将清洗液容器用蒸馏水冲洗干净,仪器废液桶也用次氯酸钠泡洗干净
♥C.按BC♥CARD♥SCAN。SCANNING出现在状态线上。在分析仪未回到STAND－BY
ADVIACentaur化学发光中文操作手册
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质控
1、定义质控 单击 Quality Control 下 Control Definition 显示下图：
增加新质控：单击 Add 键，在 Control 下输入质控名称。在 Type 下选择质控类 型 Routine，在 Lot 下输入质控批号，在 Expiration 下输入有效期(DD MMM YY) 在 Test 栏中选择一个项目，输入均值和 2SD 值，按 Save Test 键。 重复选择另一个项目，直至输入所有项目后保存。 编辑旧质控：选择需要编辑的质控名称和批号，单击 Edit 键，选择需要添加或 修改的项目名称，输入均值和 2SD 值，按 Save Test 键。选择要删除的项目名 称，按 Delete Test 键。 2、编排质控工作表做质控 详见操作中编排质控样品。 3、查阅质控数据 单击 Quality Control 下 Data 显示下图：
7
选择样品类型：Patient。 选择编排方式：Schedule by SID 或 Schedule by Rack。 在 SID 框下输入病人编号，在 Rack 框下输入试管架号，后加 A-E，按回车。 若是急诊标本，选择 ! Stat (样品架从急诊通道放入)。 选择测试项目或组合，按 SAVE 保存。 样品稀释： 若样品需要稀释，在选择架号和项目后，选择 Dilutions 键，显示下图：
固相：氧化铁（Fe2o3）
特点： 磁性微粒极小，比包被管或包被珠的反应面积增大 50 倍，减少了扩散时间， 增加了捕获效率。同时结合动力保证了较大的灵敏度。
反应类型：
双抗体夹心法 竞争法 抗体捕获法
化学发光免疫分析临床应用手册2012..
美国贝克曼库尔特化学发光免疫分析临床应用手册【2012版】贝克曼库尔特商贸（中国）有限公司广州市沃克贸易有限公司(粤北总代理)前言标记免疫分析实现了医学生物学超微量的分析，对许多疾病的临床诊断、危险分层、治疗方案选择和预后评估具有重大意义。
化学发光免疫分析技术发展于上世纪90年代，通过对标记的化学发光物质发光的控制及测量，检测相应的生物标志物，因具有灵敏度高、检测快速、试剂稳定无生物毒性、易全自动化，成为非放射性免疫分析技术中最具有发展前景的方法之一。
美国贝克曼库尔特是这一检测技术领域的先锋，其系列发光免疫分析系统采用最新的第三代辉光型发光物质-AMPPD，结合优秀的仪器设计，以方法学先进、灵敏度高（可达10-21mol/L）、线性范围宽、菜单丰富和检测速度快等优点，成为现代临床诊断的有力助手！手册旨在对其临床应用起抛砖引玉的作用，鉴于收集的资料及经验有限，不足之处在所难免，恳请有关专家和同道批评指正。
甲状腺功能总三碘甲状腺原氨酸（T3）总甲状腺素（T4）游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）游离甲状腺素（FRT4）促甲状腺激素（超敏）（hTSH）甲状腺球蛋白（Tg）抗甲状腺球蛋白抗体（ThgAb）甲状腺激素摄取率（TU）抗甲状腺过氧化物酶抗体（TPO-Ab）生殖／内分泌激素绒毛膜促性腺激素（β-HCG）促卵泡生成激素（FSH）促黄体生成激素（LH）垂体泌乳素（PRL）孕酮（Prog）雌二醇（E2）未结合雌三醇（uE3）睾酮（T）硫酸脱氢表雄酮 (DHEA-S)心肌标志物肌钙蛋白-Ⅰ（aTnI）肌酸激酶同工酶（CK-MB）肌红蛋白（Mb）地高辛（Dig）肿瘤标志物甲胎蛋白（AFP）癌胚抗原（CEA2）前列腺特异抗原（PSA）游离前列腺抗原（free PSA）糖类抗原CA-125（OV）糖类抗原CA15-3（BR）糖类抗原CA19-9（GI）骨代谢甲状旁腺激素（iPTH）骨碱性磷酸酶(Ostase)人生长激素（hGh2）贫血标志物铁蛋白（SF）维生素B12（VB12）叶酸（Fol2/RBC2）内因子抗体(IF Ab)促红细胞生成素（EPO）糖尿病超敏胰岛素 (Ins)唐氏产前筛查炎症总免疫球蛋白E（T IgE）白介素-6（IL-6）甲状腺功能总三碘甲状腺原氨酸（Tot T3）临床意义Tot T3是判断甲状腺功能亢进首选指标之一，对甲状腺功能紊乱进行确诊。
自身抗体 化学发光法 说明书
自身抗体化学发光法说明书全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：自身抗体是人体免疫系统产生的一种重要免疫蛋白，对抵抗细菌、病毒、真菌等病原体具有重要作用。
在医学实验室中，检测人体内特定自身抗体水平可以帮助诊断自身免疫性疾病。
化学发光法是目前常用的一种高灵敏度、高特异性的检测技术，能够快速准确地检测自身抗体水平。
一、实验原理化学发光法是一种通过化学反应产生化学发光来检测分子的技术。
该技术利用免疫学原理，将样本中的自身抗体与特定的标记抗体结合，形成免疫复合物。
接着，将化学试剂添加到反应体系中，激发光信号的发射。
通过测量发射的光信号强度，可以准确计算出目标自身抗体水平的含量。
二、试剂及设备准备1. 样本：血清、血浆等体液样本2. 试剂盒：化学发光自身抗体检测试剂盒3. 仪器：化学发光检测仪4. 取样器：用于取样本的吸管或移液器5. 实验用品：试管、离心管等实验室常用耗材三、操作步骤1. 样本处理：将样本离心分离，获取上清液样本。
2. 准备标准曲线：使用标准品制备系列浓度的标准曲线。
3. 试剂配置：按照试剂盒说明书中的要求，配置好实验所需的各类试剂。
4. 取样：使用取样器将样本加入反应试剂中，进行充分混合。
5. 反应：根据试剂盒说明书的要求，进行免疫反应的孵育时间。
6. 检测：将反应混合液加入化学发光仪中进行检测，记录光信号值。
7. 计算结果：根据标准曲线和样本的光信号值，计算出目标自身抗体的含量。
四、注意事项1. 操作过程中应注意无菌操作，避免污染。
2. 每个步骤的操作时间和温度要严格控制，以免影响实验结果。
3. 试剂存储要在规定的温度和条件下保存，避免失效。
4. 严格按照试剂盒说明书的要求进行操作，以确保实验结果的准确性。
5. 实验过程中如有异常情况出现，应及时停止并寻找解决方法。
通过化学发光法检测自身抗体水平，能够帮助医生准确诊断自身免疫性疾病，指导治疗方案的制定。
化学发光法具有操作简便、操作时间快、结果可靠等优点，成为目前常用的一种自身抗体检测技术。
化学发光hcv试剂说明书
化学发光hcv试剂说明书一、产品概述化学发光HCV试剂是一种用于检测丙型肝炎病毒(HCV)的试剂。
本试剂采用化学发光免疫分析技术，能够快速、精准地定性和定量检测人体血液中的HCV抗体。
二、产品组成化学发光HCV试剂包括以下成分：1. HCV抗原液：用于与血液中的HCV抗体发生特异性反应。
2. 特异性标记物：用于标记与HCV抗体结合的复合物。
3. 化学发光底物：用于产生化学发光信号。
三、试剂使用方法1. 取出化学发光HCV试剂盒，并根据包装上的说明书，将所需试剂恢复至室温。
2. 将待测试样(血清或血浆)与HCV抗原液共孵育，使其中的HCV 抗体与HCV抗原发生特异性结合反应。
3. 加入特异性标记物，产生HCV抗原-抗体-标记物的复合物。
4. 加入化学发光底物，启动化学反应，产生化学发光信号。
5. 通过化学发光免疫分析仪，测定样品中化学发光信号的强度，根据标准曲线，判断样品中是否存在HCV抗体。
四、试剂存储与保存1. 试剂盒应在2-8摄氏度的冰箱中保存，避免阳光直射。
2. 未使用的试剂保质期为1年。
3. 试剂开封后，建议尽快使用，避免反复冻融。
五、注意事项1. 本试剂仅用于临床实验室研究，不能用于诊断用途。
2. 使用本试剂前，确保操作人员具备相关技术培训，并遵循操作规程，以确保结果的准确性。
3. 使用过程中请注意个人防护，避免接触试剂直接进入眼睛、口腔或鼻腔。
4. 试剂过期、变质或包装破损的，禁止使用。
5. 请按照法律法规和伦理要求正确处置已使用的试剂及试剂盒。
六、结果解读1. 阳性结果：化学发光免疫分析仪测定结果显示化学发光信号强度大于检测阈值，表明样品中存在HCV抗体。
2. 阴性结果：化学发光免疫分析仪测定结果显示化学发光信号强度小于检测阈值，表明样品中不存在HCV抗体。
七、质量控制1. 每次试验中应包括阴性对照品和阳性对照品，用于验证实验操作和试剂组分的稳定性。
2. 阳性对照品应显示出阳性结果，阴性对照品应显示出阴性结果，以确保结果的准确性。
化学发光第一部分教材
法有很好应用前景。
12.4电生试剂化学发光反应体系
电生试剂化学发光分析
Co(Ⅲ) + quinine (Red) → Co(Ⅱ) + quinine (OX)* Quinine (OX)* → quinine (OX ) + hυ (540mm)
还原剂 氧化产物
e-
Ru(bpy)32+
Ru(bpy)32+*
Ru(bpy)32+
发光 （620nm）
12.2 鲁米诺电化学发光体系
• 在电极上所产生氧化性物质来氧化鲁米诺产生化学发光。在电极上施加 一定的电压，从而使溶液中的溶解氧还原成H2O2，H2O2进一步反应产生 一些具有强氧化性的氧自由基，这些活性氧与鲁米诺反应产生化学发光
Sample Pump
a
V
E
b
JH2C
F D
Waste
PC
Fig.1
WC
Inlet
MM
Fig.2
Outlet
1 3 、 荧 光 素 （ luciferine)- 荧 光 素 酶 （luciferase-磷酸三腺苷（ATP）体系
化学发光和生物发光 I
一、引言
• 公元前亚里士多德
真菌类和死鱼的发光
• 1668年，罗伯特.波义耳 BL需要氧参与
• 19世纪80年代末，Dubois命名荧光虫素酶和荧光虫素
• 1877年，Radziszewski发现洛汾碱的CL
• 1928年，Albrecht发现luminol的CL
• 1935年，光泽精的CL
Mn3+
化学发光项目-SOP
一、人绒毛膜促性腺激素β亚单位测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/01二、黄体生成素测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/02三、卵泡刺激素测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/03四、雌二醇测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/04五、非结合雌三醇测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/05六、催乳素测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/06七、孕酮测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/07八、睾酮测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/08九、前列腺特异性抗原测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/09十、游离前列腺特异性抗原测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/10十一、癌胚抗原测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/11十二、甲胎蛋白测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/12十三、皮质醇测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/13十四、总IgE测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/14十五、胰岛素测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/15十六、总甲状腺素T4测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/16十七、游离甲状腺素测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/17十八、总三碘甲状腺氨酸测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/18十九、游离三碘甲状腺氨酸测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/19二十、促甲状腺素测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/20二十一、甲状腺球蛋白测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/21二十二、铁蛋白测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/22二十三、叶酸测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/23二十四、维生素B12测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/24一、人绒毛膜促性腺激素β亚单位测定标准操作规程第 1页共 5 页1 检验申请单独检验项目申请：人绒毛膜促性腺激素β亚单位测定（缩写βhCG）；组合项目申请：肿瘤标志物检查组合。
化学发光仪(AlphaFluorChemQ)操作说明书
化学发光仪（Alpha FluorChem Q）操作说明书一、仪器使用注意事项1．请勿频繁开关CCD，一天开关一次；2．样品分析之前，请先打开仪器和软件，必须等CCD的温度降至-20℃才可以进行样品成像操作；3．分析样品前，请在托盘上铺一张干净的保鲜膜；4．仪器使用完毕后，请清洁仪器的内部和外部；请用自来水冲洗样品托盘，切勿使用抹布、刷子和纸巾擦拭托盘；5．此台仪器不能用于照EB胶；6．如实填写仪器使用记录，爱护仪器。
二、化学发光成像操作步骤1．开机：依次打开电脑、插线板开关、仪器开关（在仪器后下方），软件；关机：依次关闭软件、仪器开关、插线板开关、电脑。
图1-12．打开电脑桌面上的FluorChem Q软件，单击Acquire按钮，仪器进入降温状态，待温度降至-20℃才可以进行使用（仪器温度降至-20℃且稳定30min后使用，效果会更好）。
3．准备样品：铺一张干净保鲜膜在托盘上，把western blotting膜放在托盘白色框内，加入试剂。
图1-24．打开仪器门，把托盘放入仪器内第1层；关闭仪器门，打开仪器上方小门（左推即开），调节光圈数至0.95。
图1-35．预览结果方法设置（也可以不预览结果，直接进行下面第6步操作）：5.1 左键单击Live按钮5.2 Protocal：Chemi High-Med5.3 Display：选中Chemi Display和Show Saturati5.4 Speed/Resolution: Medium/HighNoise reduction: Level 25.5 单击Preview预览结果5.6 想采集预览图片信息，点击Acquire按钮开始采集图片信息图1-46．根据预览结果设定采集信号的方法：6.1 左键单击MovieMode按钮6.2 设定采集照片总数Total fr.，例如设为106.3 选中Stack Frames6.4 不选中Auto exposure，设定手动曝光时间Exposure，例如设为20s（根据信号强弱设定）6.5 按照图1-4选择其它选项6.6 左键单击Copy to En按钮6.7 点击Go按钮即开始采集图片信息图1-57．保存图片7.1点击要保存的照片，点击图标保存单张图片，点击图标保存所有图片照片最好以Tiff格式保存，方便发表文章用；7.2 或者点击要保存的照片，单击File，单击Save保存原始图片；7.3 或者点击要保存的照片，单击File，单击Save Modified保存图片（此方式保存的图片所有图片软件都能打开）。
化学发光法技术概要
对于测定不同浓度的标本，至少在试剂盒标准曲线 范围内能明显区分两者的RLUs。
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Байду номын сангаас
市场上主要全自动仪器机型及应用（1）
雅培公司
Axsystem: 基于粒子的荧光偏振技术。
Architect系列：基于磁分离的化学发光检测。
拜尔公司
ADVIA Centaur：基于磁分离的化学发光检测。
➢ 抗原-抗体反应
抗体能够特异性识别相对应的抗原，并与之结合，这种反应称之为 抗原抗体反应。
抗原-抗体反应具有特异性、敏感性、可逆性等特点。
➢ 酶促底物发光
将检测试剂中的抗原或抗体用碱性磷酸酶（AP）加以标记，通 过发光底物测定相对光子数（RLUs值），来检测目标抗体或抗 原的浓度。
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样品加量10µl~200 µl，试剂加量50µl~200 µl， 随检测项目不同而有所增减。
洗涤液加量不小于350 µl。 发光检测恒温为宜。PMT能达到实验所需要求。 带有内置计算浓度功能及校准功能。
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需要解决的关键点（1）
洗涤模块：
洗涤次数？洗涤液种类？洗涤液体积？洗涤是否带 超声？洗涤流速？是否预洗？加液速度？
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化学发光法反应介质
✓ 固相介质：磁珠 ✓ 酶标记物：碱性磷酸酶（AP） ✓ 发光底物：AMPPD
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磁珠
基本材质：Fe3O4/Fe2O3，褐色磁性物质 直径大小：1μm左右
磁珠类型： 分为氨基磁珠、羧基磁珠、苯甲磺酰基磁珠和链霉亲和素 磁珠等四种磁珠
磁珠特性： 不同供应商的不同类型磁珠，亲水性不同，在溶液中 的状态也不同，所需的磁吸时间也不同。磁吸时间过 短，会造成丢磁；磁吸时间过长，会造成磁珠聚集， 不宜分散。
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试剂盒评价标准 从临床应用角度考核检验试剂的可靠性，是以其能否区分健康与疾病的能力作为依据的。目前还很难找到 100%可靠的试验，任何试验都会出现假阴性或假阳性。以下指标为评价一个试剂盒的常用指标，不同的试 剂盒将根据不同的标准进行评价。 （1） 准确性 准确性是指测定所得值与真值的一致性。 （2） 精密性 精密度是指对同一份样品重复测定，每次测定结果和均值的接近程度。 （3） 灵敏度 灵敏度是指某种试验检出极低免疫物质的能力。 （4） 特异性 特异性是指以无病者试验，其阴性的百分率。 （5） 稳定性 是指试剂盒在有效期内保持稳定的程度。 【试剂盒操作注意事项】 （1） 发光反应最适温度在 25~28℃，为保证试验测定的准确性，应严格控制实验室温度在 18~25℃。 （2） 发光反应灵敏度很高，因此需要严格按照说明书要求，控制每步反应时间，操作应紧凑。 （3） 处理试剂和样品时需戴一次性手套，操作后应彻底洗手。 （4） 所有标本应视为潜在的传染性物质，废弃处理时，请按照当地政府和有关国家规定进行。 （5） 操作前仔细阅读使用说明书，不同批号的试剂不得混用。 （6） 包被条打开后，应将剩余包被条用密封保存，以免受潮。 （7） 加样头不可混用，以免交叉感染。 （8） 建议各实验室根据自己实际条件建立临界值范围。本试剂盒仅作其他诊断方法的辅助手段之一，
（2）与酶免（ELISA）产品比较 灵敏度与可测范围远远高于酶免产品，兼具 ELISA 法简便的操作方法与较短的反应时间。
（3）与进口全自动发光比较 试剂成本远远低于进口全自动发光试剂，为开放体系，也可适用其他发光检测仪器检测。
【应用】 发光免疫分析作为一种非放射性免疫标记技术，除了具有灵敏、特异、标记物稳定等特点外，其检测
[酶类标志物] 酶及同工酶是最早出现和使用的肿瘤标志物之一。肿瘤状态时，机体的酶活力就会发生较大变化，这主要 是因为①肿瘤细胞或组织本身诱导其他细胞和组织产生异常含量的酶；②肿瘤细胞的代谢旺盛，细胞通透 性增加，使得肿瘤细胞内的酶进入血液，或因肿瘤使得某些器官功能不良，导致各种酶的灭活和排泄障碍。 例：前列腺特异性抗原（prostate specific antigen, PSA）
如图 1.2 双抗体夹心法反应原理示意图
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化学发光系统的原理在于免疫反应中的酶作用于发光底物。发光底物在酶的作用下，底物发生化学反 应并释放出大量的能量，产生激发态的中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射 出光子。利用发光信号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与样品中的待测物质的量成正比。由 此可以建立标准曲线并计算样品中待测物质的含量。
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二、 化学发光免疫分析技术
【概述】 本世纪 70 年代中期 Arakawe 首次报道用发光信号进行酶免疫分析，利用发光的化学反应分析超微量
物质，特别是用于临床免疫分析中检验超微量活性物质。目前，这一技术已从实验室的稀有技术过渡到临 床医学的常规检测手段。化学发光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）是将化学发光或生 物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。其检测原理与放 射免疫（RIA）和酶免疫（EIA）相似，不同这处是以发光物质代替放射性核素或酶作为标记物，并藉助其 自身的发光强度直接进行测定。
神经原特异性烯醇化酶（neuron-specificenolase, NSE）
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[激素类标志物] 当具有分泌激素功能的细胞癌变时，就会使分泌的激素量发生异常。这种现象被称为正位激素异常。而正 常情况下不能生成激素的那些细胞，转化为肿瘤细胞后所产生的激素，或者是那些能产生出激素的细胞癌 变后，分泌出的是其他激素细胞所产生的激素，这种现象被称为异位激素异常。衡量异位激素异常的条件 是：①有非内分泌腺细胞合成的激素；②某种内分泌细胞却分泌其他分泌腺细胞的激素；③肿瘤患者同时 伴有分泌异常综合征；④这类肿瘤细胞在体外培养时也能产生激素；⑤肿瘤切除或经治疗肿瘤消退时，此 种激素含量下降，内分泌综合征的症状改善。 例：人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonagotropin,HCG）
具体说来，我们采用的是碱性磷酸酶（AP）催化AMPPD 底物发光系统，如图所示。
该底物系统，发光快，强度高，发光平台期长，临床测试效果稳定可靠。
（1）与放免（RIA）产品比较 与放射免疫试剂（RIA）比较，化学发光避免了放射性核素的污染以及对操作人员的伤害，大大缩 短了反应时间，同时兼具高灵敏度的优势。
供医生参考。 （9） 试剂请在有效期内使用。
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第二章 肿瘤标志物检测
一、肿瘤标志物简介
近年来，肿瘤已成为危害人类生命健康的常见病、多发病。肿瘤根据来源可分为瘤和癌，按照性质可 分为良性和恶性。
肿瘤的发生直接影响机体的代谢，如改变糖的代谢途径，改变蛋白质与核酸的合成，改变代谢过程中 关键酶的活性，以及引起激素代谢异常等。以蛋白质为例，肿瘤组织中的蛋白质含量要比正常组织高。作 为可用于肿瘤标志检测蛋白质来讲，属于肿瘤组织自身增值中合成的标志蛋白质或酶均见增高，而属于肿 瘤细胞分化标志的蛋白质或酶，其合成往往成减低趋势。并且通过研究发现，在哺乳类动物胚胎期所具有 蛋白质，随着年龄增长其结构有所改变，当人体出生后或随着年龄变化，某些基因被关闭，不再表达或很 少表达该基因的活性，当癌变时，某些细胞退化成为分化较差的、近似于胚胎细胞时，使得某些基因失活， 某些基因被激活，重新合成一些胚胎蛋白，如甲胎蛋白、癌胚抗原等，这一现象称为返祖现象。这即为肿 瘤标志物的检测建立了科学基础。所谓肿瘤标志物（tumormarker,TM），是指由肿瘤组织产生的存在于肿 瘤组织本身，或分泌至血液或其他体液，或因肿瘤组织刺激，由宿主细胞产生而含量明显高于正常参考值 的一类物质。
20 世纪
60 年代 70 年代
90 年代
时间
图 1.1 免疫学检测发展阶段
尽管免疫诊断在临床诊断中占据着非常重要的地位，但是从我国临床免疫诊断现状来看，无论是临床 应用方面，还是产业化角度，都处于相对比较落后的状态，亟待改进。下表１.１就此做一比较：
表 1.1 中国免疫诊断现状
放射免疫法 （ＲＩＡ）
[肿瘤胚胎性抗原标志物] 该类蛋白质即前文所提到的因返祖现象的出现，而产生的肿瘤标志物。虽然该类标志物与肿瘤组织不一定 具有特定的相关性，但与肿瘤的发生存在着内在的联系。 例：甲胎蛋白（alpha-fetoprotein, AFP）
癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA） [糖类抗原标志物] 该类物质是肿瘤细胞表面的抗原物质，或肿瘤细胞所分泌的物质。这类标志物的出现为临床肿瘤的诊断带 来方便，但其命名无规律可言。有些是肿瘤细胞株编号，有些是抗体物质的编号。该类标志物又可分为两 类 1．糖类高分子粘蛋白抗原 例：癌抗原 CA125 癌抗原 CA15-3 2．血型类抗原 例：癌抗原 CA19-9 癌抗原 CA50
人胎盘催乳素（PRL） [其它蛋白质类标志物] 另外还有一些早期发现的蛋白类肿瘤标志物，特异性稍差，但检测方法相对比较容易，因而常作为常规检 测项目，用以肿瘤普查。 例：β2-微球蛋白（β2-microglobulin,β2-MG）
血清铁蛋白（Serum Ferritin,SF）
三、肝癌及甲胎蛋白（AFP）
原发性肝癌是指由肝细胞或肝内胆管细胞癌变所形成的恶性肿瘤，是我国常见的恶性肿瘤。近年来国 内外原发性肝癌的发病率，均有不断增高的趋势。从世界范围来看，各地区发病有较大差别，欧美国家发 病率较低（1.9～3.4 人/10 万人），亚非国家发病率较高（4.6～98.2 人/10 万人）。根据我国一些地区的 普查，我国的发病率为 14.5～53 人/10 万人,可见我国亦属原发性肝癌的高发区。男性肝癌的死亡率仅次 于胃癌和食管癌，占各种恶性肿瘤的第三位，女性则仅次于胃癌、宫颈癌和食管癌，为第四位。肝癌的发 病率呈一定的地区分布，沿海高于内地，东南和东北高于西北、华北和西南部，沿海岛屿和江河海口又高 于沿海其他地区。肝癌多见于男性，男女发病之比为 2～5:1，年龄大多为 40～49 岁。越是肝癌高发区， 这种性别差异就越明显，发病年龄也越早。原发性肝癌起病隐匿，早期症状不明显，一旦出现临床病状和 体征，诊断多属晚期，难以治疗。因此临床上迫切需要一种能够早期诊断原发性肝癌的检查方法。
化学发光免疫分析既具有放射免疫的高灵敏度，又具有酶联免疫的操作简便、快速的特点，易于标准 化操作。且测试中不使用有验诊断工作，成 为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。 【原理】
在化学发光免疫分析中包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光系统。免疫反应系统，其基本原理 同酶联免疫技术（ELISA），常采用双抗体夹心法、竞争法、间接法等反应模式，如图 1.2，1.3，1.4 所示。
化学发光技术 手册
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内容提要
第一章 化学发光技术 一、 免疫学检测发展阶段 二、 化学发光免疫分析技术 三、 技术优势 四、 产品介绍 第二章 肿瘤标志物检测 一、肿瘤标志物简介 二、瘤标志物的分类 三、肝癌及甲胎蛋白（AFP） 四、前列腺癌及其肿瘤标志物 五、卵巢癌及癌抗原 CA125 六、乳腺癌及癌抗原 CA15-3 七、消化道肿瘤及癌抗原 CA19-9 八、人绒毛膜促性腺激素（HCG）检测及癌症诊断 九、肿瘤普查 十、肿瘤标志物检测图谱 第三章 甲状腺激素检测 一、甲状腺基本知识 二、甲状腺功能的血清学检查 第四章 生殖激素检测 一、概述
．导入于 20 世纪 90 年代，现个别较大 医院开展个别项目； ．产品处于导入期或成长期； ．无厂商开发生产，完全依赖进口。
．兴起于 20 世纪 80 年代，现已被临床 普遍使用，成为临床免疫诊断的支柱方 法； ．产品处于成熟期； ．厂商试剂与仪器共同开发，仪器自动 化程度高，试剂系列化状态好。