专题五DNA和蛋白质技术
专题五DNA和蛋白质技术
专题5 DNA和蛋白质技术【课题目标】本课题通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质，理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理。
【课题重点与难点】课题重点：DNA的粗提取和鉴定方法。
课题难点：DNA的粗提取和鉴定方法。
【知识要点】1.DNA的物理化学性质，尤其是DNA的溶解性；2. 2.二苯胺法鉴定DNA的方法和原理。
[学习导航]DNA和蛋白质技术，包括DNA的提取、蛋白质的提取、DNA片段的扩增等，是开展分子生物学研究的基本技术。
本专题将从基础入手，学习DNA的粗提取、PCR技术和血红蛋白的提纯。
学习这些技术，不仅能够帮助学生初步了解分子生物学的基本实验方法，而且能够巩固必修课中学习的有关DNA和蛋白质的理论知识。
本专题的3个课题相对独立，没有严格的先后顺序。
课题1的操作难度不高，学生比较容易获得结果。
课题2的操作难度也不高，但PCR技术的原理是难点，学生要充分利用教材的图文资料，并且在教师的引导下进行实验操作。
课题3的操作难度比较大，所以学生一定要在教师的精心指导下完成操作。
课题1 DNA的粗提取与鉴定[导学诱思]1．提取DNA的方法提取生物大分子的基本思路是。
对于DNA的粗提取而言，就是要利用、等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。
1）DNA的溶解性DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。
图5—1是DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线，请根据曲线图，思考：①在什么浓度下，DNA的溶解度最小？DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？此外，DNA不溶于溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。
利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步的分离。
2）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解，但是对没有影响。
人教版高中生物选修一专题五《DNA和蛋白质技术》知识点归纳
专题五ＤＮＡ和蛋白质技术课题一ＤＮＡ的粗提取与鉴定一、提取DNA的溶解性原理包括哪些方面？1.DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精。
①DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度有何特点？要使DNA溶解，需要使用什么浓度？要使DNA析出，又需要使用什么浓度？在0.14mol/L时溶解度最小；较高浓度可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析出。
②在溶解细胞中的DNA时，人们通常选用2mol/LNaCl溶液；将DNA分子析出的方法是向溶有DNA的NaCl溶液中缓慢注入蒸馏水，以稀释NaCl溶液。
酒精是一种常用有机溶剂，但DNA却不能溶于酒精（特别是95％冷却酒精），但细胞中蛋白质可溶于酒精。
2.从理论上分析，预冷的乙醇溶液具有以下优点。
一是抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解；二是降低分子运动，易于形成沉淀析出；三是低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂。
3.采用DNA不溶于酒精的原理，可以达到什么目的？将DNA和蛋白质进一步分离。
4.提取DNA还可以利用DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性原理。
利用该原理时，应选用怎样的酶和怎样的温度值？蛋白酶，因为酶具有专一性，蛋白酶只水解蛋白质而不会对DNA产生影响。
温度值为60～80℃，因为该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA不会变性。
补充：DNA的变性是指DNA分子在高温下解螺旋，其温度在80℃以上，如在PCR技术中DNA变性温度在95℃。
5.洗涤剂在提取DNA中有何作用？洗涤剂将细胞膜上的蛋白质，从而瓦解细胞膜。
6.当鉴定提取出的物质是否是DNA时，需要使用什么指示剂进行鉴定？在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺呈现蓝色。
原理总结：通过利用不同浓度NaCl溶液溶解或析出DNA，可以从细胞中提取和提纯DNA；再利用酒精进一步将DNA与蛋白质分离开来，达到提纯的目的；最后利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是DNA。
二、实验材料的选取不同生物的组织中DNA含量不同。
DNA粗提取与鉴定实验总结
DNA粗提取与鉴定实验总结袁开米222010317011032DNA粗提取与鉴定是高中生物选修一专题五——DNA与蛋白质技术中课题1中的内容，该实验内容在中学生物教学中具有重要意义。
虽然学生在必修课中学习了与DNA相关的知识，对DNA的结构与功能有了一定的了解，但就像“雾里看花，水中望月”，总隔着一层，因此，本实验对学生来说有着很大的价值，给他们一次直接从生物体内直接提取DNA的机会，对DNA有了一定的现实及情感体验！为了很好的锻炼与提升自己的实验教学技能，我们组的成员都十分重视本次实验教学。
在接到实验任务后，组长进行了合理而严密的分工，充分发动小组成员为本次实验教学做准备。
每个小组成员都进行资料查询与整理，制定出自己的实验设计方案，然后进行小组讨论敲定本次实验教学的最终教学方案及教学设计等。
令人欣慰的是在制定教学方案的过程中我还是发现了自己在很多地方的不足，比如，对DNA的相关知识仍然掌握得不到位，经过本次实验教学后对DNA的基础知识有了一个全方位的归纳与整理，同时也激发了我对DNA前沿知识的学习望，其次，之前我一直认为DNA的粗提取与鉴定这个实验太过简单，其实当自己亲自进行实验教学时发现并不是这么回事！因此，小事情中看大人物的自我体验又让我体验了一遍，也许这点体验在以后的生活中还会多次出现，但我相信，有了这一次小小的体验后，我的做事态度从此之后又是另一种状态，即便仅仅只有一小点变化！实验方案与教学设计敲定后，我们就开始准备预实验！若要说本次实验教学让人感触最深的我认为还是预实验。
说实话，或许是我对该实验比较感兴趣的缘故，我在预实验中充分体验到了实验的乐趣。
刚开始做预实验时，我做的实验材料是香蕉，他们其他人做的预实验材料为菜花，虽然我做了七八次以香蕉为实验材料的DNA粗提取与鉴定实验都没有观察到明显的实验现象，但无论从实验教训、实验态度，还是从经验积累方面来说，我对自己的表现还是感觉欣慰。
我用香蕉为实验材料的实验经验与教训为后面以菜花为材料的预实验积累了经验与教训，使我们在后续实验中进展得相对较顺利！在预实验中，虽然预实验失败后会感觉到有点郁闷，但我喜欢这种感觉，希望以后能够从事这一方面的事业！经过小组成员的不懈能力，我们的预实验顺利结束！一切实验教学准备好后，我们小组进入了实验教学阶段，实验教学阶段开展得很顺利，实验讲解很到位，教学氛围很好，实验过程中同学合作融洽，只是实验现象没有达到预期目标，DNA的鉴定没有观察到明显的现象。
专题5 DNA和蛋白质技术幻灯片课件
（3）DNA的鉴定：
DNA在沸水浴的条件下，遇_二__苯__胺___反应会 呈现__蓝__色____
7
二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计 （一）实验材料的选取 原则上只要含DNA的生物材料都可以，但是选取 DNA含量相对较高的生物组织，成功率更大。 材料：新鲜的鸡血
注意：
本实验中，要往鸡血中加入抗凝剂（柠檬酸钠溶液）
答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中 不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶 解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出 DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质
10
讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？
方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的 DNA与蛋白质分开； 方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同， 从而使蛋白质变性，与DNA分离
3
2、提取DNA分子的基本原理 （1）利用DNA的溶解性 DNA的溶解度
4
DNA不_溶__于____酒精溶液，但是细胞中的某些
蛋 白 质 则 __溶__于___ 酒 精 。 利 用 这 一 原 理 ， 可 将 DNA与蛋白质进一步分离。
5
（2）利用DNA和蛋白质对酶、_温___度___和___洗__涤__剂_的耐受性不同 ①蛋白酶能水解蛋白质，但对_D_N__A____没有影响。 ②大多数蛋白质不能忍受__6_0_-_8_0_℃_____的高温，而 DNA在80℃以上才会变性。 ③洗涤剂能够瓦解__细__胞__膜____，但对_D__N_A____没 有影响。
（5） DNA的直径约为20×10-10 m，实验中出现 的丝状物的粗细是否表示1个DNA分子直径的大小？
答： DNA分子直径只有2 nm。丝状物是多个 DNA子聚在一起形成的
高中生物选修专题课题
课标版·生物·选修1
5．PCR扩增的计算
自 主
理论上DNA扩增呈指数扩增。若只有一个DNA提供模板，
预
习 则复制n次后有2n个；若开始有N0个DNA，则复制n次后获得的
子代DNA数目为N0·2n个。
课 时
作
要
业
点
导
学
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专题五 课题2
与名师对话·系列丛书
课标版·生物·选修1
自 主
PCR需要适宜，但又不同于细胞内复制的条件。比如耐热
预
习 的DNA聚合酶，不需添加解旋酶，不需加生物能量ATP，但需
添加RNA或DNA引物，能够人为控制温度和复制周期等。
课 时
作
要
业
点
导
学
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专题五 课题2
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自
主 预
近十年来，PCR技术(多聚酶链式反应)成为分子生物学实
习
验室里的一种常规手段，其原理是利用DNA半保留复制，在试
习
氢键断裂，形成单链DNA。
课
2．复性：在50℃左右条件下，系统温度降低，两种引物通
时 作
要
业
点 导
过碱基互补配对原则与两条单链DNA结合，形成局部双链。
学
DNA双链变性复性加热缓8慢0～冷1却00℃单链
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专题五 课题2
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3．延伸：在72℃左右条件下在Taq DNA聚合酶的作用下，
学
(2)子链的合成：①需要 引物 ；②合成方向总是从子链
的 5′端向3′端延伸 。
第6页
专题五 课题2
选修一生物技术实践：专题五 DNA和蛋白质技术听写11
You made my day!
我们，还在路上……
5. 二苯胺试剂要
，否则会影响鉴定的效果。
6. 盛放鸡血细胞液的容器，最好是 容器。鸡血细 胞破碎以后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附。
7.方法步骤: 鸡血细胞液
加
。（使血细胞吸水涨破）
步骤1
搅拌（使血细胞加速破裂）
1-2层纱布过滤（滤去细胞膜、核膜等） 取滤液
加 mol/L NaCl溶液
步骤2
含DNA黏稠物的NaCl溶液
步骤4
多层纱布过滤（纱布上）
含DNA的黏稠物
步骤5
2mol/L NaCl溶液 沿一个方向搅拌（溶解DNA）
含DNA的NaCl溶液
步骤6 2层纱布过滤
含DNA的滤液
步骤7
加入与 滤液体积相等的、冷却的的酒精（体积分数为95%） 沿一个方向轻缓搅拌
析出DNA丝状物。
•1、所有高尚教育的课程表里都不能没有各种形式的跳舞：用脚跳舞，用思想跳舞，用言语跳舞，不用说，还需用笔跳舞。 •2、一切真理要由学生自己获得，或由他们重新发现，至少由他们重建。 •3、教育始于母亲膝下，孩童耳听一言一语，均影响其性格的形成。 •4、好的教师是让学生发现真理，而不只是传授知识。 •5、数学教学要“淡化形式，注重实质.
含DNA的滤液
步骤7
加入与 沿一个方向轻缓搅拌
析出
。
（体积分数为95%）
1. 大多数蛋白质不能忍受60—80℃的高温，而DNA在 80℃ 以上才会变性。
2. 洗涤剂能够瓦解 细胞膜 ，但对 DNA 没有影响。
3.在 沸水浴 的条件下，DNA与二苯胺反应呈现蓝 色， 因此_二__苯__胺__可以作为鉴定DNA的试剂。
高中生物选修一专题五DNA和蛋白质技术知识点
5 ＤＮＡ和蛋白质技术 ＤＮＡ的粗提取与鉴定1.提取生物大分子的基本思路DNA 的粗提取就是利用DNA 与理和化学性质方面的差异，提取DNA ，去除其他成分。
粗提取的原理：1）DNA同。
所以一般选用NaCl溶液充分溶解NaCl 溶液浓度接近L ，使295%,3.提取DNA还可以利用DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性原理。
1）酶具有专一性，2）温度值为60～80而3）植物细胞提取DNA 时，但对DNA 没有影响。
4.DNA DNA 的存在。
5.选用DNA 含量相对高的生物组织提取DNA ，成功的可能性更大。
哺乳动物成熟的6.实验设计过程：1）实验材料的选取：本实验用鸡血细胞做实验材料有两个原因。
一是因为其而用动物肝脏2）破碎细胞，获取含DNA 的滤液：3）去除滤液中的杂质：往DNA 滤液中加入NaCl 溶液浓度接近4）DNA 的提纯：将析出的DNA 用95%2-3DNA 。
5）DNA 的鉴定：白色丝状物溶于4mL分钟后观察到DNA7.DNA，所以提取DNADNA5.2 多聚酶链式反应扩增DNA 片段1. PCRDNA片段的技术，其复制过程的复制类似。
需要：1DNA 双链）；2供DNA 复制的模板）；3；4化合成DNA 子链）5）引物（使。
2.为了明确地表示DNA 的方向，通常将DNA 3，5，端。
DNA DNA ，而只能从链，因此DNA 复制需要引物。
当引物与DNA 母链通过碱基互补配对结合后，DNA 聚合酶就能从引物的3，端开始延伸DNA 链，因此DNA利用了DNAPCR PCR中进行，须提供DNA 模板、DNA 复制在体外反复进行。
一般要经历30升到DNA 解聚为单链。
复性指当温度下降到DNA结合。
延伸指当温度上升到A 、T 、C 、G ）在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA 链。
5PCR酶吸血红蛋白的提取和分离1.负责血液中2.溶解度、吸附性质和对3.法。
内部有许多贯穿的通道，当相对分子质量质因此得以分离。
2019-2020学年高中生物人教版选修1配套习题：专题5 课题1 DNA的粗提取与鉴定 Word版含解析
专题5 DNA和蛋白质技术课题1 DNA的粗提取与鉴定课时过关·能力提升基础巩固1.下列各项中不宜选作DNA提取的材料的是( )A.洋葱表皮细胞B.鲜豌豆种子C.人的成熟红细胞D.鸡血细胞液解析:作为提取DNA的材料的首要条件是DNA含量丰富,而哺乳动物成熟的红细胞无细胞核,所以不宜选作实验材料。
答案:C2.DNA粗提取的实验中,若选择的实验材料为植物细胞,破碎细胞时要加入一定量的洗涤剂和食盐。
加入洗涤剂的目的是( )A.利于DNA的溶解B.瓦解细胞膜C.分离DNA和蛋白质D.溶解蛋白质解析:洗涤剂是一种离子去污剂,能瓦解细胞膜,有利于DNA的释放;食盐的主要成分是NaCl,有利于DNA的溶解。
答案:B3.DNA粗提取的实验中,在破碎血细胞时,要加入20 mL 的蒸馏水,其作用是( )A.溶解DNAB.使血细胞破裂,DNA释放C.稀释血液,防止凝固 D.有利于搅拌解析:一般用低渗溶液,如蒸馏水,使细胞过度吸水而破裂,从而使细胞中的DNA释放出来。
答案:B4.在除去杂质时将滤液放在60~75 ℃的恒温水浴箱中保温10~15 min,这样做的目的是( )A.使DNA变性B.使蛋白质变性C.使DNA和蛋白质变性D.分解蛋白质解析:大多数蛋白质不能忍受60~80 ℃的高温,而DNA在80 ℃以上才变性。
在60~75 ℃的恒温水浴箱中保温10~15 min,目的是使蛋白质变性,然后分离得到DNA。
答案:B5.某同学用洋葱进行DNA粗提取和鉴定实验,下列操作错误的是( )A.加入洗涤剂后,进行充分的研磨B.用蛋白酶纯化过滤后的研磨液中的DNAC.加入酒精后用玻璃棒轻缓搅拌D.加二苯胺试剂摇匀后沸水浴加热解析:提取洋葱的DNA时,在切碎的洋葱中加入一定量的洗涤剂和食盐,进行充分的搅拌和研磨,A项错误;蛋白酶能够分解研磨液中的蛋白质以纯化DNA,B项正确;加入酒精后用玻璃棒轻缓搅拌,以防止因DNA断裂而不能形成絮状沉淀,C项正确;加入二苯胺试剂并摇匀后,沸水浴加热5 min,以观察颜色是否变蓝,D项正确。
广东省高州中学高中生物 专题过关检测卷(五)DNA和蛋白质技术(含解析)新人教版选修1
广东省高州中学2015-2016高中生物专题过关检测卷（五）DNA和蛋白质技术（含解析）新人教版选修1(测试时间：90分钟评价分值：100分)一、选择题(共14小题，1～10小题每小题3分，11～14小题每小题5分，共50分。
每小题只有一个选项符合题意。
)1．在向溶解DNA的NaCl溶液中不断加入蒸馏水的目的是(C)A．加快溶解DNA的速度 B．加快溶解杂质的速度C．降低DNA的溶解度，加快DNA析出 D．降低杂质的溶解度，加快杂质的析出解析：加蒸馏水降低NaCl溶液的浓度至0.14 mol/L，以使DNA析出。
2．关于DNA的粗提取与鉴定实验的表述哪项是错误的(C)A．离心沉淀的血细胞中加水是为了提取DNA B．氯化钠溶液的物质的量浓度为2 mol/L 时，DNA溶解C．向溶解的DNA烧杯中加蒸馏水是漂洗DNA D．离心后除去血液中的上清液是为了除去杂质解析：向溶解的DNA烧杯中加蒸馏水的目的是降低NaCl溶液的浓度，使DNA的溶解度降低，使DNA析出。
3．下图表示DNA变性和复性过程，相关说法正确的是(A)A．向右的过程为加热(80～100 ℃)变性的过程B．向左的过程是DNA双链迅速致冷复性C．变性与在生物体内解旋过程的条件、实质都相同D．图中DNA双链片段共有4个游离的磷酸基、4个3′端解析：变性后的DNA在缓慢降温后才会复性；变性与在生物体内解旋过程的条件不同、实质相同；任一DNA片段都有两个游离的磷酸基(5′端)和两个3′端。
4．下图是哪次循环的产物(A)A．第一次循环 B．第二次循环C．第三次循环 D．第四次循环解析：在PCR反应中，以引物为标记，第一次循环时，以加入的DNA为模板，两条DNA 链可分别由引物Ⅰ和引物Ⅱ与其结合并在DNA聚合酶的作用下延伸，所以形成的每个子DNA 中只有一种引物；从第二次循环开始，上次产生的DNA分子又可作为模板参与反应，所以会形成DNA分子两端均含引物的情况，如图所示：因此题干中所出现的情况是第一次循环的产物。
高中生物选修一课件：专题5 DNA和蛋白质技术
加入二苯胺试剂4mL，用玻棒搅拌使DNA溶解，沸水 浴5min，观察溶液是否出现浅蓝色。
实验小结
1.共有“三次过滤，两次析出，七次搅拌” 2.加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精”
实验原理拓展介绍
1.DNA的释放 DNA主要在鸡血细胞的细胞核内，正常情况下不会释 放出来，蒸馏水对于鸡血细胞是一种低渗液，水分可 以大量进入血细胞，使之胀破，同时加上玻璃棒快速 搅拌的机械作用，加速血细胞的细胞膜和核膜的破裂。 但释放出来的大量DNA与RNA、蛋白质结合在一起， 即释放的不是纯净的DNA，常称为DNA核蛋白。
酒精溶液，利用这一原理可以_去__除__杂__质___，可以推测溶
于酒精中的可能有_某__些__盐__类__、__蛋__白__质、糖类。
或其他大分子物质
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专题五 DNA和蛋白质技术
课题二 多聚酶链式反应扩增 DNA片段
【课题背景】
在刑事侦破案件中常需要对样品DNA进行分析， PCR技术能快速扩增DNA片段，在几个小时内复制 出上百万份的DNA拷贝，有效地解决了因为样品中 DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题。 现在PCR技术已广泛应用于遗传病的诊断、刑侦破 案、古生物学、基因克隆和基因测序。
随堂训练
1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸 馏水的作用是( B ) A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出 C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA
2.实验中NaCl的物质的量浓度为2 mol／L 和0.14 mol／L对DNA有何影响?
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7.DNA在 NaCl溶液中的溶解度有两重性，随着 NaCl溶
专题5DNA和蛋白质技术
专题5 DNA和蛋白质技术DNA和蛋白质技术，包括DNA的提取、蛋白质的提取、DNA片段的扩增等，是开展分子生物学研究的基本技术。
本专题将从基础入手，学习DNA的粗提取、PCR技术和血红蛋白的提纯。
学习这些技术，不仅能够帮助学生初步了解分子生物学的基本实验方法，而且能够巩固必修课中学习的有关DNA和蛋白质的理论知识。
专题分析一、教学目的要求本专题三个课题均依照课程标准中的具体内容标准编排，其对应关系如下表。
其中，课题1“DNA的粗提取与鉴定”在课程标准中没有明确要求，但考虑到不少学校都曾做过DNA的粗提取的实验，并且DNA 的提取与蛋白质的提取相比，难度较低、成功率较高，因此安排了课题1“DNA的粗提取与鉴定”。
在本专题的学习中，学生需要了解提取生物大分子的基本思路和方法，尝试DNA和蛋白质的提取。
学生应当理解PCR扩增DNA片段的原理，尝试PCR技术的基本操作和应用。
二、技术要项本专题围绕DNA和蛋白质技术展开，主要操作技术归纳如下。
1.DNA的粗提取和鉴定。
2.PCR技术。
3.血红蛋白的提取和分离技术。
三、设备条件本专题课题1并不需要特殊的实验用具或器材。
课题2需要PCR仪及PCR试剂盒，PCR仪也可以用3个恒温水浴锅代替。
课题3需要色谱柱、交联葡聚糖凝胶G-75、离心机、缓冲液等提取蛋白质的常规设备和材料用具。
四、教学安排本专题的3个课题相对独立，没有严格的先后顺序。
课题1的操作难度不高，学生比较容易获得结果，2课时就能够完成。
课题2的操作难度也不高，但对PCR原理的理解是教学中的难点。
教学中，教师要充分利用教材的图文资料，化解这一难点，然后再引导学生进行实验操作。
课题3的操作难度比较大，建议教师做好预实验，摸索成功的经验，然后再进行教学。
由于蛋白质的分离需要一定的时间，因此教师还要调动学生，充分利用课余时间。
参考书目1．分子克隆实验指南（第三版）。
［美］J.萨姆布鲁克、D.W.拉塞尔著。
高中生物选修1专题五课件：DNA与蛋白质技术
4、 Taq DNA聚合酶的应用
高温解决了打开双链的问题，但是，又导致 DNA聚合酶失活的问题，耐高温的Taq DNA 聚合酶解决了高温导致DNA聚合酶失活的问 题，促成了PCR技术的自动化
5、 缓冲液需要为PCR反应提供的物质
DNA模板，分别与两条模板链相结合的两种引 物，四种脱氧核苷酸，耐热的DNA聚合酶，同 时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行
11、复制的意义 DNA分子通过复制使遗传信息从亲代传给了 后代，从而保持了遗传信息的连续性
12、DNA复制过程中的等量关系
①一条双链DNA分子，复制N次，形成的子代 DNA分子中，含亲代DNA母链的有两个DNA 分子，占子代DNA总数的2/2N；亲代DNA分 子母链两条，占子代DNA中脱氧核苷酸链总 数的2/2 N+1= 1/2N
5、反应
将离心管放入PCR仪上，设置好PCR仪的循 环程序
循环数 第一次 30次 最后一次
变性
94°C， 10min ９4℃， 30s ９4℃， 1min
复性 －
延伸 －
55℃，30s 72℃， 1min
55℃，30s 72℃， 1min
6、注意事项 PCR技术高度灵敏，为了避免外源DNA等因素的 污染而造成干扰实验，PCR操作时要注意做到：
8、细胞内复制和PCR不同点
① PCR过程需要的引物不是RNA，而是人工 合成的DNA单链，其长度通常为20－30个脱 氧核苷酸
② PCR过程中DNA的解旋不依靠解旋酶，而是 通过对反应温度的控制来实现的
（五） PCR的反应过程
1、PCR的反应步骤
PCR一般经历三十多次循环，每次循环可以 分为三个基本步骤──变性、复性和延伸 2、循环过程冈崎片断连接起来。形 成一条完整的新的DNA链。新链与旧链构成新的 DNA
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专题五DNA和蛋白质技术
23．（江苏多选）下列关于DNA和蛋白质提取与分离实验的叙述，正确的有
A．提取细胞中的DNA和蛋白质都需用蒸馏水涨破细胞
B．用不同浓度NaCl溶液反复溶解与析出DNA可去除蛋白质
C．蛋白质提取和分离过程中进行透析可去除溶液中的DNA
D．蛋白质和DNA都可以用电泳的方法进行分离纯化
38.（广东A卷）（10分）生物技术实践
（1）商品化植酸酶主要来自微生物。
在产酶菌株筛选过程中，常在基本培养基中添加不溶于水的植酸钙制成固体平板，植酸钙被植酸酶分解后可在平板上产生，可根据其大小选择目的菌株，所得菌株需要进一步测定植酸酶活性。
活性测定可以植酸钠作为底物，活性可用一定条件下单位时间表示。
（2）利用上述所得菌株制备植酸酶的流程如下图：
Ⅰ中的主要成分为；Ⅱ中包含多种酸酶等多种蛋白质。
请写出一种纯化得到植酸酶的方法及其依据。
（3）为建设基因工程菌，可用PCR等技术从上述菌株中克隆植酸酶基因。
PCR反应包含多次循环，每次循环包括三步：。
反应过程中打开模板DNA双链的方法是。
23．BD。