沙门氏菌和大肠杆菌O157：H7双重荧光PCR检测方法的研究
多重PCR检测粪便中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157H7方法
丁晓贝１樊学军２李娜１陈喜凯１田绿波２左浩江１裴晓方１
（１成都６１００４１，四川大学华西公共卫生学院医学检验教研室：２成都６１００４１，四川检验 检疫局国际旅行卫生保健中心．通信作者：裴晓方，Ｅｍａｉｌ：ｘｘｐｅｉＢｓｉｎａ．ｔｏｍ．四川出入境 检验检疫局合作项目（０５Ｈ７９２）和欧盟食品安全ＭｏｎｉＱＡ项目部分资助）
１７７
ａ
ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ ａｎｄ ｒａｐｉｄ ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ ｏｆ
ｓａｎｉｔａｒｙ
ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ ａｎｄ ｆｏｏｄ ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓａｆｅｔｙ．
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＰＥＩ Ｘｉａｏｆａｎｇ，Ｅｍａ ｉ ｌ：ｘｘｐｅｉＢｓ ｉｎａ．ｔｏｍ
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］
Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ
Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ
ａ
ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ＰＣＲ．ｂａｓｅｄ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｓｐｐ．，Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｐｐ．ａｎｄ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ０１５７：Ｈ７ ｉｎ ｆｅｃａｌ ｓａｍｐｌｅ ｉｎ １２ｈ．
３．新建多重ＰＣＲ体系２应用于粪便样品效果评价：（１）样品前处理：采集疾控中心常规 体检获得的健康人肛拭子，分别放入ｌＯ ｍｌ的ＳＳ肉汤和１０ ｍｌ的ｍＥｃ肉汤中，在部分样品 中分另ｌＪＪｔａ入浓度约为１０‘、１０２、１０３ ＣＦＵ／ｍ１的目的菌（肠炎沙门菌。志贺菌５１０６１，大肠杆 菌０１５７：Ｈ７）悬液，同时进行茵落计数，并设立对照（未加待检菌），３６℃，８ ｈ前增菌培 养；（３）多重ＰＣＲ法：取前增菌的样品沸水浴法提取模板，根据条件优化后的多重ＰＣＲ体系 ２对其进行检测，观察特．片性片段条带及可能出现的非特异性杂带情况。 ４．传统培养法：肛拭样本ＳＳ肉汤增茼后分别划线接种于ＨＥ、Ｍａｃ，３６℃培养过夜挑选 可疑菌落接种ＴＳＩ，３６℃１８一－４ ｈ培养后进行血清凝集实验。肛拭样本ｍＥＣ肉汤过夜培养 后划线接种于改良山梨醇麦康凯（ＣＴ－ＳＭＡＣ）３６℃培养过夜，挑选可疑菌落接种ＴＳＩ，３６℃
大肠埃希氏菌O157H7 能力验证结果分析及讨论
分析检测大肠埃希氏菌O157:H7能力验证结果分析及讨论刘 霓（辽宁省检验检测认证中心，辽宁沈阳 110000）摘 要：目的：从FAPAS能力验证样品（沙拉）中分离、鉴定大肠埃希氏菌O157:H7，分别判定两个样品是否检出目标菌。
方法：本实验采用国家标准《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验》（GB 4789.36—2016）第一法和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法（Matrix-assisted Laser Desorption Ionization-time of Flight Mass Spectrometry，MALDI-TOF MS）对能力验证样品进行鉴定。
结果：样品M248d11A中未检出大肠埃希氏菌O157:H7，鉴定干扰菌株为大肠埃希氏菌；样品M248d11B中检出大肠埃希氏菌O157:H7，结果为满意。
结论：在进行能力验证实验中，为避免交叉污染，尽量选择不同生物安全柜进行试验；MALDI-TOF MS对于血清型的鉴定可以参考聚类树状谱系图，但不建议作为判定的主要依据。
关键词：能力验证；大肠埃希氏菌O157:H7；基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法Analysis and Discussion on the Verification Results ofEscherichia coli O157:H7LIU Ni(Liaoning Inspection Examination and Certification Center, Shenyang 110000, China) Abstract: Objective: To isolate and identify Escherichia coli O157:H7 from FAPAS ability verification sample (salad), and determine whether the target bacteria are detected in the two samples. Method: The first method of GB 4789.36—2016 and matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) were used to identify the ability verification samples. Result: Escherichia coli O157:H7 was not detected in sample M248d11A, and the interfering strain was identified as Escherichia coli. Escherichia coli O157:H7 was detected in sample M248d11B. Conclusion: In the capacity verification experiment, in order to avoid cross contamination, different biosafety cabinets should be selected as far as possible; MALDI-TOF MS can refer to the clustering tree pedigree for the identification of serotypes, but it is not recommended as the main basis for judgment.Keywords: proficiency test; Escherichia coli O157:H7; matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry大肠埃希氏菌又称大肠杆菌，是一种革兰氏阴性杆菌，于1885年被ESCHERICH首次发现，在正常情况下，大多数大肠埃希氏菌与人体可以互利共生，但也存在着一些致病性大肠埃希氏菌对人体造成伤害，如大肠埃希氏菌O157:H7[1]。
大肠杆菌O157：H7检测方法的研究进展
大肠杆菌O157：H7检测方法的研究进展
刘占通;李金磊
【期刊名称】《中国畜禽种业》
【年(卷),期】2012(8)1
【摘要】肠出血性大肠杆菌O157：H7是一种新型人兽共患病原菌,其感染具有暴发流行性、高度的致病性和致死性。
目前,许多国家仍存在大肠杆菌O157：H7暴发与流行,发病呈上升趋势,对人类健康构成极大威胁,己成为全球性的公共卫生问题。
因此,应用特异、灵敏、快速的检测方法和技术检测该病菌的分布是预防其暴发流
行的重要环节。
本文就大肠杆菌O157：H7检测方法的研究进展做一综述。
【总页数】4页(P48-51)
【作者】刘占通;李金磊
【作者单位】河南省兽药监察所,450008;河南省兽药监察所,450008
【正文语种】中文
【中图分类】S852.612
【相关文献】
1.肠出血性大肠杆菌O157:H7检测方法研究进展 [J], 王燕琴;朱建勇
2.肠出血性大肠杆菌O157:H7的分子生物学检测方法研究进展 [J], 丁红雷;毛旭虎;邹全明;王豪举
3.基于双球信号放大的大肠杆菌O157:H7免疫HCR检测方法 [J], 李国强; 熊智娟; 黄艳梅; 山珊; 黄鹤; 刘成伟; 刘道峰
4.一种快速鉴别牛肉中大肠杆菌O157∶ H7检测方法的建立及应用 [J], 赵亚男;
戴建君; 曾德新; 郭德华; 蒋原; 蒋鲁岩; 李鑫妮; 陈伟; 汤芳; 薛峰
5.纺织品中大肠杆菌O157:H7的检测方法 [J], 李轲;张子宏;禹建鹰;连素梅;丁友超;谢堂堂;傅科杰;郭会清
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探讨荧光定量PCR技术在临床微生物检测中的应用
探讨荧光定量PCR技术在临床微生物检测中的应用摘要】目的：本文就荧光定量PCR技术在临床微生物检测中的应用价值进行分析与探究。
方法：选择我市第一人民医院2014年5月—2016年7月期间收治的住院患者100例，其后对所有患者的临床标本予以回顾性分析，所有患者均接受荧光定量PCR技术，最后对微生物检测结果进行总结。
结果：通过对本组患者的临床标本回顾性分析可知，脓液标本中5株为金黄色葡萄球菌，大便标本中24株沙门氏菌，1株为O157：H7，10株为副溶血性弧菌。
结论：在临床微生物检测中应用荧光定量PCR技术，具有较高的灵敏度和特异性，因此该检测手段可以在临床上更进一步的实践与应用。
【关键词】荧光定量PCR技术；微生物检测；应用价值【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）28-0124-02以往的PCR技术存在诸多问题，机械化程度相对较低[1]。
近年来，医疗技术的进一步发展，荧光定量PCR技术应运而生，并且广泛应用于临床。
该检测手段具有较高的特异性和敏感性，在PCR反应体系中将荧光基因加入，利用荧光信号累积，对整个阶段进行监测，最后以定量分析法为主对未知模板进行分析，从而提高临床检测精准度[2]。
本次研究为探究该检测手段的临床价值，选择我院2014年5月—2016年7月期间收治的住院患者100例，其后对所有患者的临床标本予以回顾性分析，以下为所得数据和过程。
1.临床资料与方法1.1 临床信息本次研究共抽取住院患者100例，入选年份为2014年5月—2016年7月。
本组患者中，男性患者60例，女性患者40例，最大年龄为80岁，最小年龄为20岁，经统计后中位年龄为（46.5±5.2）岁。
其中20例患者为泌尿系统感染，12例患者为细菌性食物中毒，48例患者为上呼吸道感染，10例患者为流行性感冒，8例患者为肾俞肾炎，2例患者为慢性阻塞性肺病。
本组患者的临床标本中，60份为粪便，40份为脓液。
大肠杆菌O157︰H7实时荧光PCR快速检测方法的建立
大肠杆菌Ｏ157︰Ｈ7实时荧光ＰＣＲ快速检测方法的建立（浙江省湖州市疾病预防控制中心，浙江湖州313000）摘要[目的] 利用特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量PCR技术，建立大肠杆菌O157:H7污染的快速敏感特异的检测方法。
[方法] 以大肠杆菌O157H7的rfbE基因作为靶序列，设计一对引物和探针，以大肠杆菌O157H7菌株提取核酸DNA作为模板，优化引物和探针的浓度比和Mg2+浓度，以大肠杆菌O157:H7和10种相7关细菌考核检测体系的灵敏性、稳定性和特异性。
[结果] 本研究建立的反应体系在引物和探针的浓度为0.6μmoL/L、0.8μmoL/L；Mg2+浓度为4 mmoL/L时，具有良好的特异性和敏感性。
在10株相关菌株的检测中，除大肠杆菌O157:H7出现很好的阳性外，其余菌株均为阴性。
在纯菌条件下，定量检测低限17cfu/mL。
稳定性分析表明：同一样品重复检测3次Ct值的变异系数均小于5％。
检测样品结果显示Real-time PCR方法较传统方法敏感、快捷、简便。
[结论] 该方法特异性强，稳定性高，操作简便快捷，适应食品微生物检验发展需要，具有较大的推广及应用价值。
标签：荧光定量PCR；TaqMan探针；大肠杆菌O157:H7Construction and primary application of a TAQMAN PCR detection method for detection of escherichia coli O157H7DE Shun-XuYUE Hua-Shen CHENG Ping-Qing (Huzhou Municipal Center for Disease Control and Prevention，Huzhou 313000, China)Abstract[Objective] To establish a rapid sensitive and specific detection method of Escherichia coli O157:H7 with TaqMan PCR. [Methods] To design a pair of primers and probe depending on rfbE gene by way of target sequence of Escherichia coli O157:H7, and apply Escherichia coli O157:H7 of standard bacterium strain for template to appraise Escherichia coli O157:H7. The best Mg2+ concentration. primer and probe ratio were optimized. Specificity，sensitivity and stability analysis test were performed by Escherichia coli O157:H7 and 10 other associated bacteria strains. [Results] The best Mg2+ concentration was 4mmoL/L. Concentretion of primer s and probe was 0.6μmoL/L, 0.8μmoL/L.Test showed that t he probe were highly conservative and specific. The results of all 10 bacteria strains were negative except of strains of Escherichia coli O157:H7.The quantitative detection Limit of the method was 17cfu/mL in pure cultured broth . Stability test show that Co-efficient Variables were all less than 5% in 4 different concentrations. The results show that real-time PCR method is more sensitive, more easier and more faster than conventional culture method for detection of Escherichia coli O157:H7.[Conclusion] Real-time PCR method has high sensitivity and specialty . The real-time PCR is a handy and rapid method. That can be used in food microorganism examination and has great value in practical work.Key words: Real-time PCR; TaqMan-based probe; Escherichia coli O157:H7；肠出血性大肠杆菌(Entero Hemorrhagic E，coli) O157:H7是近10年来认识的一种引起人类出血性结肠炎(Hemorrhagic colitis HC)和溶血性尿毒综合征(Hemolytic uremie syndrom HUS)的肠道致病菌[1]。
大肠O157H7能力验证技术方案
大肠O157H7能力验证技术方案大肠O157：H7是一种致病性较强的细菌，可以引起胃肠道疾病，甚至导致严重的肠道出血性综合征。
为了确保食品安全，对于制造食品的企业来说，进行大肠O157：H7的能力验证非常重要。
下面是一种针对大肠O157：H7能力验证的技术方案。
1.实验设计(1)选择符合要求的实验室：确保实验室设备完备、环境干净卫生，并具备高水平的技术人员。
(2) 选择适当的分离培养基：大肠O157：H7一般使用MacConkey菌落计数法进行检测，这种培养基对大肠杆菌和厌氧菌等其他细菌的生长具有选择性，而且可以较好地分辨出大肠O157：H7菌落。
(3)筛选合适的试验样品：样品应包括不同潜在污染源，并包括可能存在大肠O157：H7的食品。
(4)制定实验组和对照组：实验组是在有大肠O157：H7存在的样品中进行检测，而对照组是在没有大肠O157：H7存在的样品中进行检测。
2.样品处理(1)样品的准备：a.前处理：依据样品的不同特点进行去除杂质、稀释，确保样品中的大肠O157：H7可以达到有效检测的浓度。
b.混合：如样品是复合食品，需要将样品充分混合以获得一个代表性的样品。
3.大肠O157：H7的检测方法(1)定量PCR法：利用特异性引物和探针，通过PCR扩增技术检测样品中的大肠O157：H7数量。
(2)培养法：将样品在选择性培养基上培养，然后进行分离鉴定。
4.实验操作(1)样品接种：将样品接种在适当的培养基上，并按照要求进行培养。
(2)培养：将培养基置于合适的环境中，提供适当的温度和湿度，促进大肠O157：H7的生长。
(3)分离鉴定：检测菌落的特征、培养的菌落特征和生物化学试验，以确认是否存在大肠O157：H7(4)数据记录：记录不同样品的检测结果，包括培养菌落数量和PCR分析结果等。
5.数据分析(1)计算大肠O157：H7的浓度：根据样品的稀释倍数和培养的菌落数量，计算出大肠O157：H7在样品中的浓度。
大肠杆菌O157：H7检测方法的新进展
大肠杆菌O157：H7检测方法的新进展大肠杆菌O157：H7是肠出血性大肠埃希菌(EHEC)血清型中极为重要的一组。
美国是发生O157:H7型肠出血性大肠杆菌引发的食物中毒的第一个国家，此后，在加拿大、德国、英国、日本等多国由此种菌引发的食物中毒不断发生，由此菌产生的感染问题日益严重，因此对该菌的控制已成为世界性问题。
寻求对EHEC快速、准确的检测方法是解决此问题的关键，因此大肠杆菌O157:H7检测方法的研究逐渐受到重视。
1 细菌学分离法细菌学分离法原理是采用培养基—山梨醇麦康凯琼脂，根据O157:H7绝大多数菌株不发酵山梨醇的特性进行分离。
但是由于还有部分血清型的大肠杆菌O157和某些革兰氏阴性菌也存在不发酵山梨醇的特性，因此需要对此方法进行改良。
其一，经加入鼠李糖和头孢克肟改进成为CRSMAC，可提高分离的敏感性；其二，作为一种单管筛选培养基，将H7抗血清加入SMAC半固体，检测EHECO157:H7。
此方法检测EHECO157:H7的优点是简单、直观、成本低，但是由于发酵山梨醇的O157:H7变异菌株和非O157血清型的 EHEC不能用山梨醇培养基分离，因此其最大缺点是敏感性和特异性都很差。
2 免疫学方法采用免疫学方法检测大肠杆菌O157：H7的方法较多，主要检测菌体抗原O157和鞭毛抗原H7，常见的有如下五种方法：2.1 血清凝集方法血清凝集实验用来观察可疑菌与O157抗血清是否特异性凝集，目前为达到简便快速以及增强特异性的效果，采用凝集试验与分离培养方法结合进行的方式较多。
此类方法因O157抗血清常与小肠结肠炎耶尔氏菌06血清型、厄班血清型、马耳他及其他血清型大肠杆菌O157等存在交叉反应，所以检测非O157血清型的EHEC不能应用此法。
2.2酶联免疫法(ELISA)随着酶联免疫技术在微生物检验中的广泛应用，对于大肠杆菌O157：H7的检测，酶联免疫法逐渐成为常用方法之一，其原理是通过连接在磁珠上的抗体及碱性磷酸酶标记抗体实现待测细菌的双抗体夹心检测。
动物源大肠杆菌O157:H7多重PCR检测方法的初步研究
动物源大肠杆菌O157：H7多重PCR检测方法的初步研究陈雅君;胡慧;段志刚;崔保安;张龙现;孟振北;彭新然;陈丽颖;王亚宾【摘要】为建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌O157:H7的多重PCR方法,根据GenBank上已发表的大肠杆菌O157:H7菌体抗原和鞭毛抗原的基因序列(rfbE和fliC基因)设计2对特异引物,分别建立针对rfbE fliC基因的单一PCR方法；通过优化扩增条件,进一步建立可用于动物粪便检测的大肠杆菌多重PCR方法,并进行特异性和灵敏性试验,同时还初步应用到临床样品的检测中.结果表明:所建立的多重PCR方法能同时扩增出rfbE基因(327 bp)和fliC基因( 247 bp)的特异性片段,特异性结果显示其他非大肠杆菌O157:H7的扩增结果均为阴性,表明该方法有较高的特异性；灵敏度试验结果显示细菌纯培养物的检测灵敏度为102cfu/mL.通过试验初步建立了快速、灵敏、特异的检测大肠杆菌O157:H7的多重PCR方法,为从动物粪便中分离鉴定大肠杆菌O157:H7提供了一种简单、灵敏的试验方法,可用于临床动物携带大肠杆菌O157:H7的分子流行病学调查.%To develop a multiplex PCR method for rapid and specific detection of Escherichia coli 0157: H7, two pairs of primers were designed based on the rfbE and fliC genes of Escherichia coli 0157: H7 in GenBank,from which two sets of PCR were established specific to rfbE and fliC gene, respectively. And then they were combined to a multiplex PCR after being optimized. The multiplex PCR system was evaluated for its specificity and sensitivity, and used to detect the clinical isolates. The results showed that the assay could amplify the 327 bp and 247 bp regions of corresponding genes rfbE and fliC. The multiplex PCR method had the characteristics of good specificity and repeatability, the sensitivity being 102 cfu/mL of bacteria samples. Themultiplex PCR was a rapid, specific and sensitive method for the detection of Escherichia coli 0157: H7,and provided new method for detection of Escherichia coli 0157: H7.【期刊名称】《华北农学报》【年(卷),期】2011(026)005【总页数】5页(P87-91)【关键词】大肠杆菌O157;H7;多重PCR;rfbE基因;fliC基因【作者】陈雅君;胡慧;段志刚;崔保安;张龙现;孟振北;彭新然;陈丽颖;王亚宾【作者单位】河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002;漯河出入境检验检疫局,河南漯河450046;漯河出入境检验检疫局,河南漯河450046;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002【正文语种】中文【中图分类】S855.1肠出血性大肠杆菌(EHEC)是能引起人的出血性腹泻和肠炎的一群大肠埃希氏菌,以O157∶H7血清型为代表菌株。
双重实时荧光PCR快速检测O157大肠杆菌的初步研究
双重实时荧光PCR快速检测O157大肠杆菌的初步研究张建华;卢亦愚;程苏云;陆群英;叶菊莲;罗芸【期刊名称】《现代预防医学》【年(卷),期】2007(34)14【摘要】[目的]建立双重实时PCR体系,实现对O157大肠杆菌rfbE和stx2基因的同步检测。
[方法]根据GenBank公布的O157大肠杆菌rfbE和stx2基因序列,应用分子生物学软件设计两对引物和TaqMan探针,并对荧光定量PCR反应条件进行优化,建立实时荧光定量PCR检测O157大肠杆菌的反应体系,并对该法的特异性、敏感性和重复性进行了评价。
[结果]所有O157大肠杆菌菌株的检测结果均为阳性,而所有其他菌株检测结果均为阴性;该方法对O157大肠杆菌纯培养的检测范围为100～106cfu/μl,重复性检测的变异系数均小于5%。
对模拟污染牛奶样本的检测范围为102～106cfu/μl。
从细菌核酸提取至完成检测约需3h。
[结论]基于Taqman探针技术的实时PCR检测体系可同步检测O157大肠杆菌rfbE和stx2基因,具有快速、灵敏度高、特异性强等优点,可用于O157大肠杆菌食物中毒的快速诊断和食品微生物检测。
【总页数】3页(P2611-2613)【关键词】实时PCR;Taqman探针;O157大肠杆菌;检测【作者】张建华;卢亦愚;程苏云;陆群英;叶菊莲;罗芸【作者单位】绍兴文理学院医学院;浙江省疾病预防控制中心【正文语种】中文【中图分类】R378.2【相关文献】1.大肠杆菌O157:H7特异基因的实时荧光定量PCR检测 [J], 胡慧;陈雅君;段志刚;孟振北;彭新然;张龙现;崔保安;王亚宾2.多重实时荧光定量PCR检测肠出血性大肠杆菌O157:H7 [J], 金大智;张政;罗芸;程苏云;朱敏;叶菊莲3.沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7双重荧光PCR检测方法的研究 [J], 许如苏;林彩华;蔡颖;李辉;杨梓坚;陈冠武4.大肠杆菌O157:H7实时荧光定量PCR快速检测试剂盒的组建及活菌检测 [J], 魏婉晴;孔梁宇;胡瑞瑞;陆兆新;周立邦;孟凡强;别小妹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
食品中大肠杆菌O157：H7检测研究的开题报告
食品中大肠杆菌O157：H7检测研究的开题报告一、研究背景大肠杆菌O157：H7是一种常见的食品中污染菌，具有较强的致病性和毒力，可以引起严重的腹泻、胃痛、肝衰竭等健康问题。
因此，对食品中大肠杆菌O157：H7的检测研究具有重要的理论和实践意义。
目前，已经开展了多种大肠杆菌O157：H7的检测方法，包括传统的培养法、分子生物学方法、免疫学方法等，但各种检测方法都存在一定的局限性和不足之处。
二、研究目的本研究旨在建立一种新的大肠杆菌O157：H7的检测方法，既具有高准确性和高灵敏度，又具有简便易行的特点，为保障食品安全和人类健康提供有力的支持和保障。
三、研究内容1. 大肠杆菌O157：H7的检测方法的研究和开发；2. 大肠杆菌O157：H7的分离和纯化；3. 大肠杆菌O157：H7的生物学特性分析；4. 大肠杆菌O157：H7的检测方法的优化和改进；5. 大肠杆菌O157：H7的检测方法的敏感性和准确性的验证。
四、研究方法1. 根据大肠杆菌O157：H7的生物学特性和基因组结构，设计特异性引物和探针，建立一种新的大肠杆菌O157：H7的检测方法；2. 从食品样品中分离和纯化大肠杆菌O157：H7，进行菌株鉴定和生物学特性的分析；3. 采用不同的条件对大肠杆菌O157：H7的检测方法进行优化和改进，包括温度、时间、缓冲液的配比等；4. 采用不同浓度的大肠杆菌O157：H7进行检测方法的敏感性和准确性的验证。
五、研究意义1. 建立一种新的大肠杆菌O157：H7的检测方法，能够提高食品安全和人类健康的保障水平；2. 深入研究大肠杆菌O157：H7的生物学特性和基因组结构，为该菌株的诊断、治疗和防控提供科学依据和理论支持；3. 提高了对大肠杆菌O157：H7的检测研究领域的认识和理解，为该领域的深入发展和完善提供参考和借鉴。
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中 国动 物 检 疫
２０ ０ ８年第 ２ ５卷 第 ３期
＠ 攀
一一 ２ ０
文章编号：０５９４ （０８０—０００ １０—４Ｘ ２０ ） ０２— ４ ３
栏 目主持 人 ：胡藕 祥 ｈ ｏ＠ｅｉ ｏ ｒ ｕｘ ｐｚ ． ｇ ｏｏ
沙 门氏茵和大肠 杆菌 Ｏ Ｈ 双重 ：７ 荧 光 Ｐ 测 方 法 的研 究 ＣＲ检
的快 速 检 验 方 法 根 据 沙 门 氏茵 ｉ Ａ 基 因和 大 肠杆 茵 ｏ Ｈ ｎ ｖ ＲＦ Ｅ基 因的 保 守序 列 ， 计 引物 和探 针 ， 过 优 化 Ｂ 设 通
反 应 条件 ， 立 可 同 时检 测 沙 门 氏 菌和 大 肠 杆 菌 ｏ ： 建 Ｈ 的食 品 的 检 验 ， 与 应 并
许如苏 林彩华 蔡 颖 李 辉 杨 梓 坚 陈冠 武 （ 东 省汕 头 出入 境检 验检 疫局 ） 广 ５５３ ） １０ １
摘 要 ： 目的 建 立 一 种 能 同 时检 测 沙 门 氏 茵 和 大 肠杆 菌 ｏ Ｈ 双 重 荧 光 Ｐ 的 ＣＲ 方 法 ， 用 于 动 物 源 性 食 品 应
ｍｉｉ ＤＡＳ快 速初 筛方 法 和 Ｓ 标 准 方 法进 行 比较 。 果 本 研 究建 立 的 双 重 荧光 Ｐ ｎＶＩ Ｎ 结 ＣＲ 方 法 可 同 时快 速检 测 沙 门氏
菌和 大肠 杆 菌 ｏ ： 。对 纯 菌 的 检 测 灵 敏 度 均 低 于 １ｃＦ 双 重 荧光 Ｐ Ｒ 反 应 体 系。 应 用 本 方 法检 测 ３ 标 准／ Ｈ ０ ｕ／ Ｃ ６株 参考 菌株 ， 结果只有 ９ 目的茵标 准／ 株 参考 菌株 出现特 异性扩增 ， 其余 ２ 株 非 目的菌均呈 阴性反应 定量检测重复性 ７ 试 验 结 果 ， 内和批 间的 变异 系数 均 小 于 ２ 批 ％ 应 用 本 方 法检 测 人 工 染 菌样 品 ． 果 与 ｎｉｉ ＤＡＳ和 Ｓ 方 法检 测 结 结 １ ｖＩ ｎ Ｎ 果一致 ． 但检 测时间比 ｍ ｎＶ Ｄ Ｓ快 了 ３倍 ． Ｓ 标准快 了 １ ｉｉ Ｉ Ａ 比 Ｎ ０多倍 结论 本研 究建立的双重 荧光 Ｐ Ｒ 方法具有 Ｃ 快速 、 灵敏 、 异 、 复性 好 的优 点 ， 在 ８小 时 内 完成 样 品 沙 门 氏 菌和 大肠 杆 菌 ｏ Ｈ 检 验 特 重 可 的 关键 词 ：沙 门 氏 菌 ； 肠杆 菌 ｏ ： ； 重 荧光 Ｐ 大 Ｈ。双 ＣＲ
Ｄｅ ｅｏ ｖ ｌ ｐｍ ｅ ｆ Ａ ａ ａ － ｍ ｅ ＰＣＲ ｒ ｔ Ｄｅ ｅ ｔｏ ｆ Ｓａ ｍ ｏ ｅ ｌ ｐ ｎｔ Ｏ Ｄｕ ｌ Ｒｅ ｌ Ｔｉ Ｆｏ ｈｅ ｔｃｉ ｎ ｏ ｌ ｎ ｌ ｓ ｐ ａ
ａ ｄ ｃ ｅ ｉ ｈ ａ ｎ Ｅｓ ｈ ｒｃ ｉ Ｃｏ ｉ ｌ Ｏ１ ： ５ Ｈ７ ７