人参皂甙Rh2诱导人喉癌细胞株Hep2凋亡的研究
人参皂甙的作用 竟能杀死癌细胞
人参皂甙的作用竟能杀死癌细胞人参皂甙是人参的根，它对我们的身体有许多好处，比如能够增加人体的反抗力，预防癌症的发生，甚至可以杀死癌细胞。
那么大家知道人参皂甙的作用还有哪些吗，我们就一起来看看吧。
1.诱导癌细胞凋亡：细胞的凋亡就似乎是花开花落的瞬间相同，是一种自动的生理进程。
正常状况下，细胞增殖与细胞凋亡之间始终保持着有增有减的动态平衡状态，这种动态平衡又可保持细胞正常平稳的增殖。
当某种要素致使细胞增殖失控和细胞凋亡受阻时，便可致使细胞反常增殖而发生癌症。
2.增加机体免疫力：人体免疫功能失调或低下是癌症发生的主要缘由之一。
而癌症治疗过程中使用的化疗药物或放射治疗可进一步摧毁人体免疫功能。
人参皂甙单独使用能有效调整人体免疫功能。
在手术后或放、化疗期间协作使用，可有效的爱护免疫器官，增加免疫功能。
3.提高免疫力：免疫力是自身自然的防备屏障，免疫失调，则免疫监视作用失去作用，不能清除突变的细胞，也是引发肿瘤的缘由之一。
人参皂苷rh2能通过多种途径调整和增加机体免疫力，对免疫系统具有爱护作用。
4.缓解毒素作用：在治疗肿瘤的过程中，发觉癌症化疗的失败常与化疗药物产生肯定的耐药性有关。
一般的化疗药物不易进入癌细胞，癌细胞中的p-糖蛋白可以将化疗药物排出，造成癌细胞对化疗药物产生耐药性差，人参皂苷具有亲水性和亲油性两种特性，可以轻易的进入癌细胞核内杀死癌细胞。
5.抗疲惫作用：人参皂苷具有延长小鼠负重游泳时间和增加小鼠糖原储备或削减糖原消耗的作用，可降低运动后小鼠的血清尿素含量，对运动后小鼠的血乳酸上升有抑制作用，说明人参皂苷有较好的缓解体力.抗疲惫的作用。
在人参皂苷的作用中，第一条我们就为您介绍了它对癌症的治疗作用，它可以关心诱导癌细胞的凋亡，是不行多得的抗癌元素之一。
此外，人参皂苷还可以增加机体的免疫力、缓解疲惫以及抗疲惫，对养生保健是极好的，假如经济实力允许，适当的食用一些人参是有利无害的，当然进补也要有个度才行。
人参皂甙-Rh2诱导人肝癌Bel-7404细胞凋亡的作用
人参皂甙-Rh2诱导人肝癌Bel-7404细胞凋亡的作用樊光华姜浩欧文胜作者单位:330029江西省肿瘤医院(樊光华),421001南华大学第一附属医院(姜浩),423000郴州医专附属医院(欧文胜)出自：实用癌症杂志2003年1月第18卷第1期【摘要】目的研究人参皂甙-Rh2(GS-Rh2)诱导肝癌Bel-7404细胞凋亡的作用。
方法应用流式细胞术检测GS-Rh2对肝癌Bel-7404细胞凋亡的诱导作用以及对细胞周期的影响。
结果流式细胞术证实GS-Rh2具有诱导凋亡作用,细胞凋亡率(AR)随GS-Rh2浓度增高和作用时间延长而升高,当GS-Rh2浓度由12.5μg/ml增至50.0μg/ml时,AR由16.2%升高至27.5%,但GS-Rh2浓度由50.0μg/ml进一步增至100.0μg/ml后,AR未见相应升高;GS-Rh2可将细胞周期阻滞于G1期。
结论GS-Rh2能诱导体外培养的Bel-7404细胞凋亡;GS-Rh2诱导Bel-7404细胞凋亡可能与细胞周期阻滞有关。
【关键词】人参皂甙-Rh2;肝肿瘤;凋亡中图分类号:R735.7文献标识码:A文章编号:1001-5930(2003)01-0016-03 The Effect of Ginsenoside-Rh2in Induction of Apoptosis on Bel-7404Cell LineFAN Guang-hua,JIANG Hao,OU Wen-sheng.Jiangxi Province Tumor Hospital,Nanchang,330029【Abstract】Objective To explore the effect of ginsenoside-Rh2(GS-Rh2) in induction of apoptosis on Bel-7404 human hep-atoma cell line.Methods The apoptosis rate of Bel-7404 cells and its cell cycle analyzation was determined by flow cytometry(FCM).Results GS-Rh2induced apoptosis on Bel-7404 cell line in a dose-and time-dependent manner,When the concentration ofGS-Rh2was increased from 12.5μg/ml to 50.0μg/ml,the apoptosis rate(AR) of Bel-7404 cell line elevated from 16.2% to 27.5%accordingly;but when the concentration of GS-Rh2was increased up to 100μg/ml,the A R no longer rose;GS-Rh2was capable of ar-resting the cell cycle at G1phase.Conclusions:GS-Rh2could induce apoptosis on Bel-7404 cell line in vitro;Apoptosis of Bel-7404 cells induced by GS-Rh2may be related to arresting cell cycle at G1phase.【Key words】GS-Rh2(ginsenoside-Rh2);Liver neoplasm;Apoptosis(The Practical Journal of Cancer,2003,18:016~018)近年来的研究发现,我国的名贵中药人参具有抗癌活性,其主要活性成分人参皂甙(ginsenoside,GS)能诱导细胞分化和凋亡而发挥抗肿瘤作用[1,2]。
人参皂甙单体Rh2对人喉癌细胞株Hep2抗增殖作用
人参皂甙单体Rh2对人喉癌细胞株Hep-2抗增殖作用[关键词]喉肿瘤（Laryngeal Neoplasms）；人参皂甙（GINSENOSIDE）人参皂甙单体R h 2 （ginsenoside Rh2 ，G – Rh2）是近年从人参中提取的一种新的有效活性成分。
研究表明它对卵巢癌、黑色素瘤、肝癌、白血病和神经胶质瘤等肿瘤细胞生长具有明显的抑制作用。
探讨G – Rh2 对喉癌细胞的作用及其机制，现报道如下。
1资料与方法1.1 细胞培养。
喉鳞状细胞癌细胞株Hep - 2 购自北京市耳鼻咽喉科研究所，细胞用含1 0 % 灭活胎牛血清的RPMI1640培养基培养，每周传代2次。
1.2 M T T 试验。
取对数生长期H e p - 2 细胞，接种培养板中5 ×103/孔，每2 4h 换培养液。
培养2 4、4 8、7 2 h 后，观察细胞形态变化。
每孔加入MTT溶液10 µl，培养4 h后弃上清，加入D M S O 溶液1 0 0 µ l ，震荡后室温静止1 0 m i n ，然后用酶标仪于570n m 处测定吸光度（A）值，计算细胞生长抑制率。
生长抑制率（%）=（1－实验组A值/对照组A值）×100%。
1.3流式细胞仪检测细胞周期变化。
用G-Rh2 30 µg/ml处理Hep - 2 细胞2 4 h ，常规处理，碘化丙啶染色，流式细胞仪分析结果。
1.4免疫组化S A B C 法检测p27蛋白的表达。
按SABC 试剂盒说明进行常规免疫组化染色，封片后光镜观察。
每张切片随机取1 0 个高倍镜视野（400×），以CIAS - 1000 型全自动彩色细胞图像分析系统分析计算平均值，灰度值随表达量的增多而减少。
2 结果2 . 1 G-Rh2对Hep -2 细胞形态的影响。
不同浓度的G-Rh2对Hep -2 细胞共同培养2 4 、4 8、7 2h 后，倒置显微镜下观察。
人参皂苷Rh2多方黄金配比,抗癌药的升级新时代
人参皂苷Rh2多方黄金配比，抗癌药的升级新时代癌症不仅是医学界一直与其抗战的一个话题，更是全人类的关注所在，世代探索，推陈出新，不断改变着“癌症不可医”的论断，也不断刷新着癌症治愈率，给予生命最光明的希望。
近年来，随着科学技术的迅猛发展及分子肿瘤学、分子生物学技术的进步，新抗肿瘤药物不断涌现，抗癌药物的研究与开发已进入一个崭新的阶段。
肿瘤研究的根本目的是降低死亡率及发病率，降低死亡率主要靠治疗。
癌的化学治疗近年来有飞速发展，新抗癌药不断出现。
人参皂苷Rh2、Rg3抗肿瘤治疗作用的证实，被视为90年代抗癌药物研究的重大全新发现。
人参皂苷单体Rh2具有显著的抗癌活性，能增强正常细胞的功能，诱导癌细胞分化使癌细胞自然凋亡，促进癌细胞逆转为正常细胞，并可抑制肿瘤增生，抑制癌细胞侵润转移，减缓癌细胞分裂生长。
Rh2 可以有效增强单核巨噬细胞的吞噬功能，诱发肿瘤癌细胞凋亡。
Rh2 的HK细胞活性功能，诱导肿瘤癌细胞分化。
Rh2 可以通过提高免疫力降低放化疗的毒性，有效地减小放化疗的痛苦程度。
人参皂苷单体Rg3能抑制肿瘤细胞的黏附，侵润，阻止癌细胞新生血管的形成，从而抑制肿瘤生长，扩散和转移，具有显著的抗癌功能。
可明显改善放化疗及手术后引起的白血球下降，使血液流变学趋于正常，该成分有很强的预防和抗癌作用，可以提高人体机能和免疫功能，配合手术和放化疗效果显著。
降低发病率主要靠预防，现在已经知道肿瘤是一种特殊的疾病，不仅治疗离不开药物，预防也离不开药物，而且是最有希望的手段之一。
这是因为，由正常组织转变为癌一般都经过癌前阶段，而癌前疾病的治疗是癌的药物预防的理想靶点。
因此，抗肿瘤药物已不限于传统的细胞毒型药物，癌预防药物的研究与开发已成为有前景的新领域。
关于抗癌防癌的药物一直以来都是采取单方模式，集中某一种（人参皂苷Rh2或Rg3)进行针对性的预防或者治疗，其在抗癌防癌的疗效方面取得了一定的成绩与认可，但往往这类药品治疗过于局限和单一。
人参皂苷Rh2对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及机制
人参皂苷Rh2对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及机制Δ刘滢1，2＊，谭辉1，2，3，夏菁1，2，熊伟1，2，3，邓雪松1，2 #（1.重庆三峡医药高等专科学校基础医学部，重庆 404120；2.重庆市抗肿瘤天然药物工程研究中心，重庆 404120；3.三峡库区道地药材开发利用重庆市重点实验室，重庆 404120）中图分类号 R965；R739.41文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2023）20-2471-05DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2023.20.05摘要目的探讨人参皂苷Rh2对人胶质瘤U87、U251细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。
方法以人胶质瘤U87、U251细胞为对象，经不同浓度的人参皂苷Rh2作用后，检测细胞的增殖、凋亡情况以及细胞中组蛋白脱乙酰酶1（HDAC1）蛋白和凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、切割型胱天蛋白酶3（cleaved caspase-3）]的表达情况。
结果10、20、30、40、50、60、70、80μmol/L的人参皂苷Rh2均能显著升高U87、U251细胞的增殖抑制率（P＜0.05或P＜0.01），该成分对2种细胞作用48 h的半数抑制浓度分别为51.34、55.84μmol/L；30、50μmol/L的人参皂苷Rh2均能显著升高2种细胞的总凋亡率，能显著降低HDAC1、Bcl-2蛋白的表达水平，并显著升高Bax、cleaved caspase-3蛋白的表达水平（P＜0.05或P＜0.01）。
结论人参皂苷Rh2可抑制2种人胶质瘤细胞增殖并促进其凋亡，其作用可能与下调HDAC1蛋白的表达和激活Bcl-2家族蛋白介导的凋亡途径有关。
关键词人参皂苷Rh2；胶质瘤；组蛋白脱乙酰基酶1；U87细胞；U251细胞；增殖；凋亡Effects and mechanism of ginsenoside Rh2 on the proliferation and apoptosis of human glioma cellsLIU Ying1，2，TAN Hui1，2，3，XIA Jing1，2，XIONG Wei1，2，3，DENG Xuesong1，2（1. Dept. of Basic Medical Science，Chongqing Three Gorges Medical College，Chongqing 404120，China；2. Chongqing Engineering Research Center of Antitumor Natural Drugs，Chongqing 404120，China；3. Chongqing Key Laboratory of Development and Utilization of Genuine Medicinal Materials in Three Gorges Reservoir Area， Chongqing 404120， China）ABSTRACT OBJECTIVE To investigate the effects and mechanism of ginsenoside Rh2on the proliferation and apoptosis in human glioma U87and U251cells.METHODS Using human glioma U87and U251cells as subjects，the proliferation and apoptosis，as well as the expression of histone deacetylase 1（HDAC1）protein and apoptosis-related proteins [B cell lymphoma-2（Bcl-2）， Bcl-2-associated X protein （Bax） and cleaved caspase-3] were detected after being treated with different concentrations of ginsenoside Rh2.RESULTS The concentrations of 10，20，30，40，50，60，70，80μmol/L ginsenoside Rh2could generally significantly increase the proliferation inhibition rate of U87and U251cells （P＜0.05or P＜0.01），and the half inhibitory concentrations of this component after 48hours of action were 51.34and 55.84μmol/L，respectively；30，50μmol/L ginsenoside Rh2could increase the total apoptotic rate of both types of cells，reduced the protein expressions of HDAC1and Bcl-2，and increased the protein expressions of Bax and cleaved caspase-3significantly （P＜0.05or P＜0.01）.CONCLUSIONS Ginsenoside Rh2 has a significant inhibitory effect on the proliferation of glioma cells and promotes the apoptosis of cells， which may be through reducing the expression of HDAC1 protein and activating the Bcl-2 family protein-mediated apoptosis pathway.KWYWORDS ginsenoside Rh2； glioma； histone deacetylase 1； U87 cells； U251 cells； proliferation； apoptosis恶性胶质瘤多来源于低级别的星形细胞瘤细胞或正常的胶质细胞，其早期诊断和治疗方法虽不断发展，但患者易耐受，且复发率高、预后差、5年生存率低，现有手段的治疗效果仍然有限[1―2]。
人参皂苷Rh2诱导HL-60细胞凋亡的分子调控机制的开题报告
人参皂苷Rh2诱导HL-60细胞凋亡的分子调控机制的开题报告一、研究背景及意义人参被广泛应用于中药和保健品领域，其中的人参皂苷Rh2是人参中的一种重要生物活性成分。
研究表明，人参皂苷Rh2在抗肿瘤、免疫调节、抗衰老和保护神经等方面具有重要的生物学效应。
目前，研究人参皂苷Rh2诱导白血病细胞凋亡的机制尚不完全清楚，因此本研究旨在探究人参皂苷Rh2对HL-60细胞的分子调控机制。
二、研究方法1. HL-60细胞培养：选取HL-60细胞，进行培养和扩增。
2. 确定Rh2的最佳浓度和作用时间：在不同浓度和时间的Rh2处理下，检测HL-60细胞存活率和变化。
3. 测定HL-60细胞凋亡：采用流式细胞术和荧光显微镜观察Rh2处理后，HL-60细胞的凋亡情况和细胞核形态的变化。
4. 检测凋亡相关蛋白：Western blot 分析检测Rh2处理后，Bcl-2、Bax、Caspase3和PARP等凋亡相关蛋白的表达水平变化。
三、研究内容在本研究中，我们将在HL-60细胞株中应用人参皂苷Rh2来研究其诱导细胞凋亡的分子调控机制。
首先，我们将确定Rh2的最佳浓度和作用时间，并检测Rh2处理后，HL-60细胞的存活率和变化。
接着，采用流式细胞术和荧光显微镜观察Rh2处理后，HL-60细胞的凋亡情况和细胞核形态的变化。
最后，我们将通过Western blot 分析检测Rh2处理后，Bcl-2、Bax、Caspase3和PARP等凋亡相关蛋白的表达水平变化，并探究其调控机制。
四、预期结果本研究预计可以明确人参皂苷Rh2对HL-60细胞凋亡的效应和机制，并揭示相关的分子调控机制，这将有助于更好地理解人参皂苷Rh2的抗癌作用，为其临床应用提供重要的理论支持。
五、研究意义本研究将为人参皂苷Rh2的抗肿瘤机制提供新的证据和理论基础，为人参皂苷Rh2的临床应用提供新的思路和方向。
同时，本研究所揭示的分子调控机制，也可以为其他天然产物的药理学研究提供新的思路和参考。
人参皂甙Rh_2抗肿瘤作用的研究
・综 述・人参皂甙Rh2抗肿瘤作用的研究赵 越,苏 适(长春生物制品研究所,吉林长春 130062)摘 要 作为中国传统中药的人参在中药史中占有重要的地位,被用于多种古方验方的主药。
其主要成分人参皂甙具有多种药理作用,其中二醇组皂甙Rh2为从人参中提取的天然活性成分,经现代医学研究证明具有很高的抗肿瘤活性,对肿瘤细胞具有分化诱导、增殖抑制、诱导细胞凋亡等作用。
关键词 人参皂甙Rh2;抗肿瘤;细胞凋亡中图分类号 R282.71 文献标识码 A 文章编号 1005-7021(2003)02-0061-03 人参(Panax ginseng C.A)为五加科多年生草本植物,其成分具有诸多生物活性,为研究者所瞩目并进行了深入的研究,现代医学研究表明人参具有抗肿瘤、抗衰老、抗辐射等多种生物活性作用[1]。
人参皂甙是人参中一类主要的有效成分,迄今已确定结构的至少在30种以上,人参皂甙Rh2是由人参中提取的天然活性成分,属于二醇组皂甙,自从Odashima报告了从红参中提取的有效成分Rh2在体外对黑色素瘤B16细胞具有分化诱导作用后[2],各国学者先后通过多种体内外实验证实,Rh2可以通过诱导分化或调亡,抑制多种肿瘤细胞的增殖与生长,并证明对正常细胞的毒性甚低,现将近几年有关人参皂甙Rh2针对肿瘤细胞生物作用研究综述如下。
肿瘤治疗一般分为外科手术、放射疗法、化学疗法3种。
肿瘤化疗的目的是通过化学药物杀伤肿瘤细胞,促进肿瘤细胞的死亡或阻止其增殖,但是绝大多数化学药物的细胞毒性缺乏特异性,它在杀死肿瘤细胞的同时,无选择的杀伤正常细胞特别是造血组织细胞,正常细胞的损伤常导致严重的并发症。
此外并非所有肿瘤细胞都对化疗敏感,即使对化疗敏感的肿瘤细胞,在停止用药后也易复发。
由于肿瘤分化异常在肿瘤发病学上占有重要地位,所以有学者提出使用药物对肿瘤细胞的异常分化进行逆转,即将肿瘤细胞诱导分化为正常细胞或近似正常细胞,作为抗肿瘤药物研究的新途径,而从天然化合物中寻找分化诱导剂成为学者们研究的热点。
人参皂苷Rh_2含量测定方法及药理作用研究现状
apoA 21concentation in bamsters fed a lithogenicdiet [J ].J He patol ,2001,35(5):550.[15] Schmidt AM ,Hori O ,Cao R ,et al ..A novel cellularreceptor for advanced glycation and products [J ].Diabetes ,1996,45(Suppl 3):S 77.[16] Clark J M ,Diehl AM.Hepatic steatosis and type 2di 2abetes mellitus[J ].Ourr Diab Re p ,2002,2(3):210.[17] Swidsinski A ,L udwing W ,Pahlig H ,et al ..Molec 2ular evidence of bacterial colonization of cholesterol gallstones[J ].Cast roenterolog y ,1995,108(3):860.[18] Spranger J ,Kroke A ,Waki H ,et al ..Adiponectinand protection against type 2diabetes mellitus [J ].L ancet ,2003,361(9353):228.[19] Wang SN ,Yeh YT ,Yu ML ,et al ..Serum adiponec 2tin levels in cholesterol and pigment cholelithiasis[J ].B r J S urg ,2006,93(8):981.[20] 邹玲梅,陆春红.2型糖尿病患者血清C 肽、血脂水平与胆结石关系探讨[J ].临床医学,2007,32(6):680.[收稿日期] 20092042163[通迅作者] 朴惠顺(1964—),女(朝鲜族),副研究员,硕士,研究方向为抗肿瘤药物活性成分分离.人参皂苷Rh 2含量测定方法及药理作用研究现状李学哲1,朴惠顺23(1.延边大学附属医院肿瘤内科;2.延边大学药学院:吉林延吉133000)[关键词] 人参皂甙类;抗肿瘤剂(中药);黑色素瘤;食管癌;前列腺肿瘤[中图分类号] R 28515 [文献标识码] A [文章编号] 100021824(2009)022******* 人参是五加科人参属植物,是传统的名贵药材.近年来,众多学者报道了人参单体的药理作用,特别是抗肿瘤作用,而研究发现人参中的抗肿瘤有效成分主要为人参多糖和人参皂苷.随着对人参研究的深入,日本学者首次从红参(人参经蒸制、烘干后得到的制成品)中发现了人参皂苷Rh 2.这种皂苷是次生苷,是加入过程中由某些二醇组皂苷受热降解后生成的.金凤燮等[1]报道了酶转化法生产Rh 2等人参稀有皂苷,提取效果较传统方法提高了500～700倍,实现了工业化生产,为Rh 2的实际应用提供了可行性.本文对人参皂苷Rh 2含量的测定方法及药理作用进行了综述.1 Rh 2含量测定方法蒋磊等[2]报道,采用H PL C 法测定Rh 2准确含量,其测定条件中流动相为甲醇2乙腈2水为8∶8∶1,流动速度为1mL/min ,紫外检测波长为203nm ,色谱柱为Thermo Hypersil ODS 2(25010mm ×415mm ,510μm ),柱温为室温,回收率高于99174%,RSD 小于1183%,达到了药典规定.在该色谱条件下,人参皂苷Rh 2的保留时间均为8～10min ,并确定了人参皂苷Rh 2的R 型和S 型含量的高效液相色谱条件为Thermo Hypersil ODS 2(25010mm ×415mm ,510μm )色谱柱,流动相为乙腈2水为1∶1,柱温为室温,流动速度为1mL/min,进样量为10μL,检测波长为203nm,理论塔板数按人参皂苷Rh2峰计算应不低于3700,分离度应大于115,得人参皂苷Rh2中R型与S型之比为6∶4,在该色谱条件下,人参皂甙Rh2的R型保留时间均为17min,S型保留时间均为16min, R型在S型之后出峰.冯林等[3]报道,采用反相高效液相色谱法测定人参Rh2的含量,测定条件中色谱柱为ODS2C18(25010mm×416mm,51μm),流动相为乙腈2水(60∶40),流动速度为110mL/min,检测波长为203nm,柱温为30℃,结果表明人参皂苷Rh2质量浓度在80～240mg/L范围内时进样量与峰面积呈良好的线性关系,r=019992,平均回收率为99175%(n=6).顾轶等[4]报道,采用L C2MS 法测定Beagle犬血浆中人参皂苷20(R)2Rh2的含量,检测条件色谱柱为Cosmosil ODS柱(15010mm×210mm i.d.,5μm,Nacalai Tesque,日本),外加1个C18柱(Security Guard,Phe nomenex,美国),柱温为40℃,流动相为乙腈及500μmol/L氯化铵水溶液,流动速度为012mL/min,梯度为乙腈40mL/L(0min),乙腈60mL/L(0103min),乙腈80mL/L(5100min),乙腈95mL/L(5103min),乙腈99mL/L(7100min),乙腈40mL/L(7150min),Pump Stop(9150min).质谱检测条件中离子化方式为电喷雾(ESI),检测模式为选择性离子检测(SIM),检测离子为负离子, 20(R)2Rh2的m/z为657135,洋地黄毒苷m/z为799155,雾化气流动速度为115L/min,反吹气压力为1M Pa,曲形脱溶剂装置温度为250℃,电压为-5V,加热块温度为200℃,离子源温度为250℃,电压为-415kV,四级杆流电压为0V,交流电压为150V,检测电压为116kV.取具塞离心管数只,各加入Beagle犬空白血浆1mL,精密加入不同质量浓度的20(R)2Rh2标准品溶液10μL,分别制备成含20(R)2Rh2质量浓度为015,110,510,1010, 5010,10010,20010μg/L的溶液,按上述血浆样品处理方法进行操作测定.样品峰面积与内标峰面积的比值(Y)及对血药质量浓度(c)作线性回归,得标准曲线回归方程(n=6)为Y=010244c+010088 (r=019998).按上述方法测得20(R)2Rh2在Beagle犬血浆中最低定量限为015μg/L(信号噪声比大于10),相对标准偏差(RSD)为1717% (n=6),符合FDA对生物样本LLOQ的要求.方亮等[5]报道,采用大孔吸附树脂法测定梅花参芪精中人参皂苷含量,此法回收率为94158%,RSD为1154%.2 药理作用211 抗肿瘤作用 人参皂苷的抗肿瘤作用已备受关注,特别是Rh2对多种癌细胞的直接杀伤作用.已发现的作用机制有调节肿瘤细胞信号通路系统,影响细胞端粒酶的活性,阻断肿瘤细胞重要成分的合成与代谢,逆转肿瘤细胞的异常分化及耐药性,增强机体免疫力,提高抗肿瘤能力[6].21111 对黑色素B16细胞具有明显的分化诱导作用 体外实验证明,10mg/L人参皂甙Rh2可明显抑制黑色素B16细胞的生长,并呈现质量浓度依赖性, IC50为411mg/L;对B16细胞有较强的分化诱导作用,表现为黑色素生成能力明显增强,形态向上皮样细胞分化,黑色素颗粒增多,生长变缓慢.细胞动力学研究结果表明,Rh2可使黑色素B16细胞阻断在G1期,亦提示Rh2对B16细胞具有分化诱导作用[7]. 21112 C6胶质瘤细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用 2,4,8μmol/L人参皂苷Rh2对C6胶质瘤细胞均有抑制增殖作用,且呈现出明显的量效关系; 4μmol/L人参皂苷Rh2作用72h后,对C6胶质瘤细胞诱导凋亡作用最为明显;人参皂苷Rh2作用后,处于G0/G1期细胞百分率明显下降,而处于S期细胞百分率则显著增高[8].21113 对食管癌Eca2109细胞周期的影响 研究结果表明,人参皂苷Rh2对Eca2109细胞的生长具有抑制作用,并呈剂量及时间依赖性.人参皂苷Rh2可将人食管癌Eca2109细胞阻滞于G0/G1期,诱导肿瘤细胞分化,并通过影响细胞周期调控因子cy2clinE,CD K2,p21WA F1基因的表达来抑制食管癌细胞的增殖[9].21114 对前列腺癌细胞株PC23M移行周期的影响 可使PC23M细胞增殖周期阻滞于G1期,延缓肿瘤细胞增殖速度[10].21115 对人喉癌细胞株H ep22抗增殖作用的影响 人参单体皂苷Rh2可明显抑制Hep22细胞的增殖,并呈剂量及时间依赖性.用30mg/L人参单体皂苷Rh2处理细胞24h后,G期细胞由60109%显著增加至68186%,S期细胞由18189%明显减少至l2130%,G2/M期细胞及凋亡细胞无明显变化,细胞阻滞于G1期[11].提示人参单体皂苷Rh2对人喉癌细胞株Hep22具有明显的抑制增殖作用,使细胞阻滞于G1期.21116 对人类乳腺癌细胞MCF27增殖的抑制作用 人参皂苷Rh2可显著抑制MCF27细胞的生长,并呈剂量依赖关系,使细胞停留在G1期[12].经Rh2处理细胞,其周期蛋白D3水平下降,而抑制Cdk2活性的p21WA F1/CIP1水平上升.Rh2可显著降低磷酸化p Rb的水平和转录因子E2F21的水平. 21117 对裸鼠体内人卵巢癌细胞肿瘤的生长抑制作用 在体外只需10～60μmol/L的Rh2即可抑制多种人卵巢癌细胞的增殖,且IC50剂量可诱导细胞凋亡[13].Rh2经口服给药较腹腔给药效果佳,经口服给药除具有增加N K细胞活性的功效外,亦可诱导细胞凋亡.21118 对B el27404细胞及人肝癌SMMC27721细胞的作用 流式细胞术证实人参皂苷Rh2对体外培养的Bel27404细胞具有诱导凋亡的作用,细胞凋亡率(AR)随人参皂苷Rh2质量浓度的增高和作用时间的延长而升高[14215],当人参皂苷Rh2质量浓度由1215mg/L增高至5010mg/L时,AR则由1612%升高至2715%,但人参皂苷Rh2质量浓度由5010mg/L增高至10010mg/L时,A R却未见相应升高.人参皂苷Rh2以时间依赖性和浓度依赖性抑制人肝癌SMMC27721细胞的增殖,10mg/L人参皂苷Rh2作用6d后,抑制率达50%,而20mg/L 人参皂苷Rh2作用4d后抑制率近50%.10, 20mg/L人参皂苷Rh2作用于SMMC27721细胞后,A FP合成量明显下降,分泌量亦从6160±0130显著下降到2135±0106,γ2GT及耐热型AL P活性显著降低,而不耐热型AL P活性及Alb分泌量则显著升高.21119 对白血病H L260细胞凋亡的诱导作用 M T T结果显示,用0～60μmol/L人参皂苷Rh2分别处理HL260细胞24,48,72h后发现,HL260细胞的增殖明显受到抑制,且呈现浓度依赖性[16].人参皂苷Rh2作用于HL260细胞48h后,IC50为25μmol/L.212 抑制肿瘤转移的作用 通过人参皂甙Rh2对癌细胞转移影响的实验发现,人参皂甙Rh2对小鼠B162BL6黑色素瘤细胞转移株自发性肺部转移具有显著的抑制作用,25,52mg/kg Rh2作用后小鼠的肺转移抑制率与对照组相比较有显著性差异,813, 1616mg/kg Rh2预先给药后,小鼠肺转移抑制率分别为44%,64%[17].213 对免疫功能的影响 人参皂苷Rh2注射液可提高荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能及血清溶血素抗体的生成能力,提高小鼠N K细胞杀伤活性和IL22活性[18].214 抗过敏反应 人参皂苷Rh2可明显抑制IgE 诱导RBL,2H3细胞释放β2氨基己糖苷酶(IC50为011mmol/L)和小鼠被动皮肤过敏反应,且作用强于色甘酸钠.215 抗耐药作用 顺铂为临床广谱抗肿瘤药物,可诱导多种肿瘤细胞凋亡[19].通过人参单体皂苷Rh2增强顺铂对PC23M致凋亡效应的研究发现,顺铂与Rh2联合应用可提高顺铂对前列腺癌细胞的诱导凋亡效应[20].216 抗增生作用 在培养小鼠成纤维细胞过程中发现,人参皂苷Rh2对DNA合成具有抑制作用[21].[参 考 文 献][1] 金凤燮,鱼红闪,卢明春,等.人参皂苷实现工业化生产[J].家庭医学,2004(9):5.[2] 蒋磊,卢明春,鱼红闪,等.人参皂甙Rh2产品质量检验及含量测定方法[J].大连轻工业学院学报,2002,21(3):197.[3] 冯林,曾宪斌,胡现辉.反相高效液相色谱法测定人参源胶囊中人参皂苷Rh2的含量[J].食品与药品,2008, 10(7):35.[4] 顾轶,王广基,孙建国,等.L C2MS法测定Beagle犬血浆中人参皂苷20(R)2Rh2及其药代动力学研究[J].中国临床药理学与治疗学,2006,11(3):256.[5] 方亮,戈延茹,郭建鹏,等.吸附树脂法测定梅花参芪精中人参皂甙的含量[J].延边大学医学学报,1998,21(3):165.[6] 王占峰,罗毅男,洪新雨,等.人参皂甙Rh2抗肿瘤作用机制的研究[J].北华大学学报:自然科学版,2005,6(1):50.[7] 夏丽,娟韩锐.人参皂甙Rh2体外对小鼠黑色素瘤细胞的分化诱导作用[J].药学学报,1996,31(10):742. [8] 李殿友,罗毅男,杨红,等.人参皂苷Rh2诱导C6胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用[J].白求恩医科大学学报,2000,26(4):342.[9] 李丽,齐凤英,刘俊茹,等.人参皂苷Rh2对食管癌细胞Eca2109细胞周期的影响[J].中国中药杂志,2005,30(20):1617.[10] 周桂花,孟艳,李杨,等.人参单体皂苷Rh2对前列腺癌细胞株PC23M细胞移行周期的影响[J].中国病理生理杂志,2002,18(7):823.[11] 于光久,康健,郭风.人参皂苷Rh2对人喉癌细胞株Hep22抗增殖作用的研究[J].锦州医学院学报,2003,24(6):34.[12] Oh M,Choi S,Chung H.Anti2proliferating effects ofginsenoside Rh2on MCF27human breast cancer cells[J].I nt J Oncol,1999,14(5):869.[13] 张丽娟.人参皂苷对卵巢癌细胞的影响[J].国外医学中医药分册,1996,18(4):4.[14] 樊光华,姜浩,欧文胜.人参皂苷Rh2诱导人肿癌Bel27404细胞凋亡的作用[J].实用癌症杂志,2003,18(1):16.[15] 曾小莉,涂植光.人参皂苷2Rh2对人肝癌细胞SMMC27721信号传导的影响[J].中华肝脏病杂志,2004,12(9):565.[16] 李罗丝,罗志勇,文斌,等.人参皂苷Rh2对白血病HL260凋亡的诱导作用[J].中国现代医学杂志,2006,16(21):3215.[17] 陶丽华,高峰,刘红岩,等.20(R)2人参皂苷Rh2抗癌细胞转移实验研究[J].人参研究,2002,14(4):17. [18] 葛迎春,李晨燕,任慧君,等.人参皂苷Rh2注射液对荷肝癌(H22)小鼠免疫功能的影响[J].特产研究,2002(3):4.[19] 元放,张宝泉,徐炎,等.铂诱导的喉癌细胞凋亡及其对细胞周期的影响[J].中华医学杂志,1999,79(4):298.[20] 盂艳,周桂华,李扬,等.人参单体皂甙Rh2增强顺铂对PC23M致凋亡效应的研究[J].中国病理生理杂志,2003,19(5):689.[21] Byun B H,Shin IL,Lee L.Antipholiferative effects ofPanax ginseng ginseno2sides on DNA synthesis in cul2tured mouse fibroblasts[J].Koryo I nsam H ak hoechi,1995,19(2):114.。
人参皂苷Rh2通过影响NO分泌和增强巨噬细胞活性起到显著抗炎作用
⼈参皂苷Rh2通过影响NO分泌和增强巨噬细胞活性起到显著抗炎作⽤⼈参皂苷Rh2通过影响NO分泌和增强巨噬细胞活性起到显著抗炎作⽤炎症是机体对于刺激的⼀种防御反应，在炎症过程中，⼀⽅⾯损伤因⼦直接或间接造成组织和细胞的破坏，另⼀⽅⾯通过炎症充⾎和渗出反应，以稀释、杀伤和包围损伤因⼦。
同时通过实质和间质细胞的再⽣使受损的组织得以修复和愈合。
因此可以说炎症是损伤和抗损伤的统⼀过程。
⼈参皂苷Rh2具有显著的抗炎活性，主要表现为抑制相关酶类的活性，影响NO、PGE2产⽣，发挥抗炎作⽤。
在炎症过程中，巨噬细胞在特异性和⾮特异性免疫反应中发挥着关键的作⽤。
⼈参皂苷Rh2影响NO分泌⼀、⼀、⼈参皂苷NO是⼀种内源的防御分⼦，在⽣理病理状态下可帮助调节组织器官的⾎流并保持⾎管内⽪细胞和炎症细胞的协调性，研究表明，⼀氧化氮(NO)具有促进炎症和抗炎的双重特性。
根据NO的浓度及潜在形式、病变部位及靶细胞的反应不同机体表现各异。
NO抗炎作⽤主要表现如下⼏个⽅⾯：1、⾮特异性抗炎作⽤和诱导肿瘤细胞凋亡在炎症反应中宿主明显产⽣的⼤量NO可能为防御细胞、病毒、寄⽣⾍的⼊侵建起⼀道防线，同时NO的⾮特异性免疫可阻⽌病原体⼊侵，且能杀死肿瘤细胞，诱导其凋亡。
研究证实，NO能诱导COLO205细胞系(低分化⼈结肠癌)、Hepg2细胞系(⼈肝癌细胞)、HL60(⼈早幼粒⽩⾎病细胞)、U937(⼈单核细胞⽩⾎病细胞)凋亡，并上调P53蛋⽩的表达。
2、抑制⾎⼩板聚集与粘附NO对⾎⼩板的作⽤是cGMP依赖的，它使⾎⼩板中cGMP⽔平升⾼，致胞浆内Ca2 暂时储存，降低胞内游离Ca2 浓度，⾎⼩板不能聚集。
NO还通过调整⾎⼩板－⾎管壁间相互作⽤来维持⾎管内⽪的完整性，抑制⾎⼩板聚集或解聚已聚集的⾎⼩板，故⽽有抗⾎栓形成及抑制炎症早期的作⽤。
3、⼈参皂苷Rh2促进巨噬细胞分泌NO发挥抗炎作⽤在《⼈参单体皂甙Rh2对⾮⼩细胞肺癌患者肺泡巨噬细胞免疫活性的影响》⼀⽂中通过实验得到⼈参皂苷Rh2能促进⾮⼩细胞肺癌患者肺泡巨噬细胞分泌细胞毒效应分⼦。
人参皂甙Rh2 抗肿瘤作用机制的研究
第6卷第1期北华大学学报(自然科学版)Vol.6No.12005年2月JOURNAL OF BEIHUA UN IV ERSIT Y (Natural Science )Feb.2005文章编号:100924822(2005)0120050203人参皂甙Rh 2抗肿瘤作用机制的研究王占峰1,罗毅男1,洪新雨1,鞠 砚1,孙玉芹2,韩海铃2(1.吉林大学第一医院,吉林长春 130021;2.北华大学附属医院,吉林吉林 132011)摘要:恶性肿瘤治疗至今尚无好的方法.传统化疗药因其缺乏特异性的细胞毒性作用,治疗中容易造成正常细胞的损伤,从而引起一系列的并发症.人参皂甙Rh 2是人参中提取的天然活性成分,具有很高的抗肿瘤活性,而对正常细胞无毒副作用.文章从人参皂甙Rh 2的抗肿瘤作用机制(抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、诱导分化、抑制肿瘤DNA 合成、提高荷瘤机体的免疫功能和抑制肿瘤转移、抗肿瘤耐药性增强、其他化疗药物对耐药肿瘤作用)等方面进行研究.关键词:生物提取物;人参皂甙Rh 2;抗肿瘤作用机制中图分类号:R282 文献标识码:A 收稿日期:2004210210作者简介:王占峰(1978-),男,硕士研究生,主要从事脑外伤及颅脑肿瘤的临床治疗及基础研究. 人参作为中国传统中药,在中药史上占有重要的地位,具有大补元气,补气益肺,安神益智的功效,被用于多种古方验方的主药.人参为五加科多年生草本植物,其成分具有诸多生物活性成分,现代医学研究表明,人参具有抗肿瘤、抗衰老、抗辐射等多种生物活性作用[1,2].人参皂甙是人参中主要的有效成分,迄今已分离出40多种单体,人参皂甙Rh 2是从人参中提取的天然活性成分,属于十二醇皂甙,在体外对黑色素瘤16细胞具有分化诱导作用.通过实验已证实,Rh 2可以通过诱导分化或凋亡,抑制多种肿瘤细胞的增殖和生长,并证明对正常细胞毒性作用甚低[3].肿瘤的常规治疗包括手术治疗、放射治疗、化学治疗.肿瘤化疗的目的在于通过化疗药物杀伤肿瘤细胞,促进肿瘤细胞的死亡或阻止其增殖.但绝大多数药物其细胞毒性缺乏特异性,造成正常细胞的死亡,特别是增生活跃的造血干细胞,导致骨髓移植及全身毒性等并发症,影响治疗效果.因此,迫切需要寻找新的方法弥补和完善常规治疗的不足.肿瘤细胞区别于正常细胞的一个主要特征在于分化障碍,因此,恶性肿瘤被看作是细胞分化异常的疾病.分化异常后,返回原始胚胎细胞表型,即去分化.近来的研究表明,引起细胞分化阻抑特异性的基因改变在一定条件下是可逆的.诱导分化治疗就是基于以上认识,应用分化诱导剂,使恶性肿瘤细胞向正常细胞分化转变,甚至完全转变为正常细胞,即再分化或肿瘤逆转,已成为抗肿瘤药物研究的新途径,从天然化合物中寻找分化诱导剂成为学者们研究的重点[4].细胞凋亡是一个程序化死亡的过程,其与肿瘤发生、发展及其对治疗因子的反应关系密切.近年来,人们逐渐认识到凋亡可维持细胞的形态,减轻周围炎症反应,促进肿瘤细胞的凋亡,并成为恶性肿瘤化疗的新目标.大量研究表明,该药抗肿瘤作用与传统的化疗药物有所不同,深入研究的抗肿瘤作用机制具有重要的现实意义[5].1 抑制肿瘤细胞DNA 合成通过[3H]2TdR 掺入实验检测人参皂甙Rh 2对前列腺癌细胞株PC 23M 细胞核酸合成的影响,发现人参皂甙Rh 2作用的PC 23M 细胞的[3H ]2TdR 掺入率明显少于对照组,这可能是人参皂甙Rh 2作用于细胞后对DNA 合成复制有抑制作用,且作用强度随药物浓度的增高而增强[6,7].2 诱导肿瘤细胞的凋亡和分化2.1 诱导肿瘤细胞的凋亡人参皂甙Rh 2诱导肿瘤细胞凋亡是其抗肿瘤作用机制的重要方面之一,超微结构和DNA 凝胶电泳都发现了人参皂甙Rh2诱导C6胶质瘤细胞凋亡所致的形态学与生化改变.用电镜观察到典型的细胞凋亡特征:核染色体密度增高并凝聚于核膜周边,核固缩,沿核膜孔裂解为核碎裂片,但细胞膜完整,并可见凋亡小体.流式细胞术分析在DNA组方图上出现初小典型凋亡峰(Ap峰),且该作用存在时间与剂量依赖性,随作用时间延长和药物浓度增高,凋亡细胞的比例明显增加[6,7].韩国Hyun2Eui kim等利用小鼠胶质瘤细胞株观察研究人参皂甙Rh2对脑瘤的潜在作用时发现,通过引起细胞形态的改变,DNA断裂,caspe(凋亡活化基因)的激活和活性氧系列(Ros)的产生导致胶质瘤细胞的凋亡,但在应用Rh2处理后,特异性的(ADP2核酶)多聚酶却没有像在其他凋亡实验中断裂成85ku蛋白, Bcl22和Bax表达水平也没有发生改变,且过度表达的抗氧化蛋白质也与亲本细胞相类似[8].从细胞增殖动力学角度研究人参皂甙Rh2诱导人肝癌细胞SK2HEP21的细胞凋亡结果表明,人参皂甙Rh2诱导人肝癌细胞SK2HEP21的细胞凋亡作用,是通过与细胞周期性蛋白A激酶复合物有关的p21WAF/CIPI分裂蛋白的分裂方式导致SK2HEP2 1的细胞凋亡[9].用流式细胞仪研究人参皂甙Rh2对S180肉瘤细胞周期移型性影响,发现人参皂甙Rh2能使肉瘤细胞周期阻止于S期.通过人参皂甙Rh2诱导人肝癌Bel27404细胞凋亡的实验证明,人参皂甙Rh2其抗肿瘤作用是通过诱导肿瘤细胞凋亡而实现其抗肿瘤作用[9,11].2.2 诱导分化诱导分化是恶性肿瘤细胞在体内外分化诱导剂的作用下,再分化向正常方向逆转现象.它作为肿瘤生物治疗学的一个新领域,已日益受到关注.各国学者先后通过多种体内外实验证实:Rh2其通过诱导分化凋亡,抑制多种肿瘤.Odashima报告了从红参中提取的有效成分Rh2在体内外对黑色素瘤细胞具有分化诱导作用[12].Rh2作用后,B16细胞不仅在形态上出现分化改变,如细胞呈网状结构,细胞变大变长,多数细胞具有树突状结构,而且功能上也出现了分化改变,表现为黑色素生成能力和酪氨酸酶活力增加.人参皂甙Rh2属非细胞毒性抗肿瘤药物,通过诱导肿瘤细胞分化和凋亡可能是其抗肿瘤主要机制,但对于前者目前的研究还比较少[13].3 抗肿瘤的免疫机制人参皂甙Rh2抗肿瘤免疫机制是近年来研究的另一个热点,人参皂甙Rh2能够通过不同种途径改善和提高机体免疫功能,对免疫系统具有保护作用,这使得该药有可能成为一种独特的新型抗肿瘤药物.人参皂甙Rh2有提高荷瘤机体细胞免疫功能作用.IL22主要是由活化的辅助性T淋巴细胞产生的细胞因子,IL22具有自身正向免疫调节作用.N K 细胞是细胞免疫中非特异部分.在大多数荷瘤机体N K细胞活性明显降低时,IL22系统处于明显的抑制或紊乱[14].通过人参皂甙Rh2诱注射液对核肝癌(H22)小鼠免疫功能的影响实验观察到,(H22)荷瘤小鼠的N K细胞活性处于严重低下状态,而人参皂甙Rh2注射液高中剂量组与荷瘤组比较,N K细胞杀伤活性明显增强.本实验中(H22)荷瘤小鼠的IL22活性低于正常组,人参皂甙Rh2注射液高剂量组显著提高IL22活性.人参皂甙Rh2注射液通过调节和增强机体免疫发挥抗肿瘤作用[15].4 相关研究4.1 抗肿瘤转移通过20(R)2人参皂甙Rh2对抗癌细胞转移实验研究发现,人参皂甙Rh2对小鼠B162BL6黑色素瘤细胞高转移株自发性肺部转移具有显著的抑制作用,Rh2在26,52mg/kg的剂量下的肺系数于对照组有显著的差异,Rh2在8.3,16.6mg/kg的剂量下预先给药,肺转移抑制率为44%,64%,其中16.6mg/kg的剂量下肺转移节结数与对照比较,具有明显差异.4.2 抗耐药性顺铂(Cisplad)为临床广谱抗肿瘤药物,可诱导多种肿瘤细胞凋亡[16].通过人参单体皂甙Rh2增强顺铂对PC23M致凋亡效应的研究发现[17],以顺铂与Rh2皆能促进肿瘤细胞凋亡为理论依据,将二者联合应用,以期能提高顺铂对前列腺癌细胞的致凋亡效应,为前列腺癌治疗提供新线索.人参皂甙Rh2作为人参有效抗癌成分,具有促进多种肿瘤细胞凋亡作用,可提高柔红霉素、长春新碱等抗肿瘤药物对多耐药白血病细胞的细胞毒性.这表明人参皂甙Rh2不易使肿瘤细胞产生抗药性,特别适用于已对其他化疗药物产生耐受性的肿瘤治疗.5 小结和展望人参皂甙Rh2属非细胞毒性抗肿瘤药物,它能有效抑制多种肿瘤细胞的生长增殖.抑制肿瘤细胞核酸合成,诱导肿瘤细胞凋亡和分化是其作用机制15第1期王占峰,等:人参皂甙Rh2抗肿瘤作用机制的研究 的一个主要特点,人参皂甙Rh2能改善和提高荷瘤机体的细胞免疫功能.此外,榄香烯还具有抗肿瘤转移、毒副作用小和不易耐药、增加其他药物抗肿瘤作用等优点,具有良好的应用前景.虽然对人参皂甙Rh2的抗肿瘤作用已有多方面研究,但我们发现本领域的研究还缺少系统和深入,尤其是对于人参皂甙Rh2的作用部位、作用通路,以及榄香烯对癌基因、抑癌基因的影响等还有待阐明.研究中还发现不同肿瘤对该药的敏感性差异较大,人参皂甙Rh2对不同肿瘤细胞的作用以及其诱导分化效应也需进一步的明确和证实.随着人参皂甙Rh2在临床的逐渐应用,其抗肿瘤机制将随着进一步深入研究而逐渐清楚.参考文献:[1]Odiashima ST,K ohmo H.Control of PhcnotypicExpression of Cultured B16Melannoma Cell by PlantG lycosides[J].Cancer Res,1985,45:2781.[2]潘正安.中药大辞典[M].上海:上海科技出版社,2003.3～5.[3]周洪语,钟春龙.神经胶质瘤诱导分化治疗的研究进展[J].国外医学神经病学神经外科学分册,2000,27:3. [4]陈一筠,章翔,顾建文.人脑胶质瘤凋亡的原位研究[J].第四军医大学学报,2000,21(9):49.[5]K err J FR,Winterford CM,Hamon BV.A ppoptosis ItsSignificance in Cancer and Cancer Theropy[J].Cancer, 1994,73(8):2013～2026.[6]李殿友,罗毅男,杨红,等.人参皂甙Rh2诱导参C6胶质瘤细胞凋亡实验研究[J].中国肿瘤临床,2003,30(7): 231.[7]周桂华,孟艳,李扬,等,人参单体皂甙Rh2诱对前列腺癌细胞株PC-3M细胞移形周期的影响[J].中国病理生理杂志,2002,18(7):823～825.[8]Hyun2Eui K im J,SK Lee,Y ong J.Gnscnoside Rh2Induces Appoptic Cell Death in Rat c6G lionma Via Reactive Oxygen and Caspase Dependent but Bcl2XL2 independent Pathway[J].Life Sci,1999,65:33～40. [9]马文彬,宋长春,马兴元.应用流式细胞光度计研究人参单体Rh1和Rh2对S180肉瘤细胞周期移型性影响[J].白求恩医科大学学报,1991,19(7):551.[10]赵越,苏适.人参皂甙Rh2抗肿瘤作用研究[J],微生物学杂志,2003,23(2):61.[11]Odashima S,Ohta T,K ohno H,et al.Control ofPhenotypic Expression of Cultured B16Melanoma Cell by Plant G lycosides[J].Cancer Res,1985,45:2781. [12]夏丽娟,韩锐.人参皂甙Rh2体外对小鼠黑色素瘤细胞的分化诱导作用[J].药学学报,1996,31(10):7422745.[13]彭贵勇,袁爱力,蔡景修.荷瘤小鼠脾细胞淋转N K和LA K活性[J].上海免疫学杂志,1994,14(2):196. [14]葛迎春.人参皂甙Rh2诱注射液对核肝癌(H22)消暑免疫功能的影响[J].特产研究,2003,(3):5.[15]亓放,张宝泉,徐炎,等.铂诱导的喉癌细胞凋亡及其对细胞周期的影响[J].中华医学杂志,1999,79(4):298～301.[16]孟艳,周桂华,李扬,等.人参单体皂甙Rh2增强顺铂对PC23M致凋亡效应的研究[J].中国病理生理杂志, 2003,19(5):689～692.[17]韩锐.肿瘤化学预防及药物治疗[M].北京:北京医科大学,中国协和医科大学联合出版社,1991.283～290.Study on Anti2tumor Mechanism of Crude ExtractiveG inseng Saponin Rh2WANG Zhan2feng1,L UO Yi2nan1,H ONG Xin2yu1,J U Yan1,SUN Yu2qin2,HAN H ai2ling2(1.Fi rst Hospital of Jili n U niversity,Changchun130021,Chi na;2.A f f iliated Hospital of Beihua U niversity,Jili n132011,Chi na)Abstract:Up to day no obvious progression on the therapy of malignant tumor.The tradition chemotherapy drugs defect specific cytotoxicity can result in inducing normal cell damage and a series of complications.G inseng,as a traditional Chinese herbal drug,plays a leading role in history of herbal drugs,which is used as element drug in all kinds of traitional Chinese medicinal drugs.Protopanaxdiol is the main natural active ingredient in G inseng.The protopanaxdiol not only has high anti2tumor function but also can not damage normal cell.This article describes that the antie2tumor mechanism of G insenoside Rh2in detail(induce differentiation,suppress growth and induce apoptosis of tumor cells,enhance cancer bearing organism immune function,anti2tumor2drug2resistance,enhance the anti2tumor effects of other chemotherapy drugs).K ey w ords:Extract;G insenoside2Rh2;Anti2tumor machanism【责任编辑:陈丽华】25 北华大学学报(自然科学版)第6卷。
人参皂苷Rh2抗肿瘤细胞作用研究进展
人参皂苷Rh2抗肿瘤细胞作用研究进展
程春;何志贤;王华
【期刊名称】《交通医学》
【年(卷),期】2010(024)001
【摘要】@@ 人参是传统名贵中药,具有大补元气,补气益肺,安神益智的功效.研究发现人参中有效成分人参皂苷Rh2可通过调节免疫功能,抑制肿瘤的浸润和转移,诱导癌细胞凋亡及抑制肿瘤新生血管的形成;逆转肿瘤细胞的耐药性,增强抗癌药的药效;诱导癌细胞分化并抑制癌细胞生长;还具有拮抗致癌剂起化学防癌的作用.本文对人参皂苷Rh2的特点、抗癌作用机制综述如下.
【总页数】4页(P23-25,28)
【作者】程春;何志贤;王华
【作者单位】南通大学附属医院普外科,江苏226001;南通大学附属医院普外科,江苏226001;南通大学附属医院普外科,江苏226001
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
【相关文献】
1.人参皂苷Rh2抗肿瘤作用机制的研究进展 [J], 张丽媛;吴铁
2.人参皂苷Rh2和Rg3抗肿瘤作用研究进展 [J], 黄月云;夏婷;赵成国;陈素云;张裔辉
3.树突状细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞共培养的抗肿瘤作用研究进展 [J], 白引苗;艾军
4.人参皂苷Rh2抗肿瘤作用机制研究进展 [J], 吴颉;
5.肿瘤微环境中免疫抑制性细胞和细胞因子在抗肿瘤免疫反应中的作用研究进展[J], 何亚运;罗泊涛;陆元志
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人参皂苷Rh2对肿瘤细胞增殖周期和凋亡的影响
人参皂苷Rh2对肿瘤细胞增殖周期和凋亡的影响————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：浅谈人参皂苷Rh2对肿瘤细胞增殖周期和凋亡的影响郭志廷1,王鲁1,褚秀玲2,王春元1,韦旭斌*基金项目:国家自然科学基金(项目编号: 30471272)作者简介:郭志廷(1979-),男,内蒙古人,在读硕士。
研究方向:临床兽医中药学。
*为通讯作者,教授,博士生导师(1·吉林大学临床兽医教研室,吉林长春130062; 2·河北北方学院,河北张家口075131)摘要:人参皂苷Rh2是人参中具有抗肿瘤活性的有效成分之一,其抗肿瘤的机理比较广泛,本文着重就其对肿瘤细胞增殖周期调控和诱导凋亡两方面的最新研究作一综述。
关键词:人参皂苷Rh2;抗肿瘤;细胞凋亡人参皂苷-Rh2(ginsenoside Rh2)是从人参中分离得到的原人参二醇型低糖链皂苷单体。
它是生晒参加工红参时,由于某些原人参二醇组人参皂苷受热分解产生的次皂苷。
大量的研究表明,其具有良好的抗肿瘤活性,可以补充手术、放疗、化疗的不足和防止毒副作用的发生。
近年来,逐渐成为众多学者所瞩目的焦点。
Rh2抗肿瘤的机制非常广泛,但对肿瘤细胞增殖周期进行调控和诱导凋亡是其抗肿瘤机制中最基本、最有效的途径。
正常情况下细胞增殖与细胞凋亡之间保持着一种动态平衡。
这种平衡是维持多细胞生物自身稳定的重要因素。
细胞增殖失控或细胞凋亡受阻均可导致肿瘤发生,通过人工启动肿瘤细胞死亡来治疗或消除肿瘤是目前许多抗肿瘤药物的主要作用机制之一。
1增殖周期调控细胞增殖周期一般分为G1、S、G2和M期,其中最为关键的是DNA倍增和染色体复制的S期。
大多数抗肿瘤药物为细胞周期特异性药物,主要杀伤处于增殖期的肿瘤细胞,特别是对S期和M期细胞最为敏感。
研究发现, G -Rh2在体外浓度为10 ~60μmol/L间能够以剂量依赖方式抑制各种已知人类卵巢癌细胞株的增殖,并且在IC50（半抑制浓度）浓度左右导致细胞凋亡[1]。
人参皂苷Rh2促进人子宫内膜癌细胞凋亡及其机制研究
人参皂苷Rh2促进人子宫内膜癌细胞凋亡及其机制研究王敏【摘要】目的探讨人参皂苷Rh2对子宫内膜癌细胞的抑制活性,并研究其促进肿瘤细胞凋亡的相关机制.方法使用人参皂苷Rh2处理的人子宫内膜癌细胞,分别采用CCK8法、流式细胞技术和免疫印迹技术,检测细胞增殖水平、细胞凋亡率以及细胞凋亡相关蛋白的表达水平.结果人参皂苷Rh2处理后,显著抑制子宫内膜癌细胞的增殖活性,呈现显著的剂量依赖性;细胞凋亡率在人参皂苷Rh2处理后显著升高(P＜0.01),并且呈现出时间依赖性.人参皂苷Rh2处理细胞的PARP水平和caspase-3蛋白水平相比空白对照组显著升高.结论人参皂苷Rh2可以诱导子宫内膜癌细胞凋亡,其作用机制可能与提高PARP水平和caspase-3蛋白水平有关.【期刊名称】《西南国防医药》【年(卷),期】2018(028)008【总页数】4页(P720-723)【关键词】人参皂苷Rh2;子宫内膜癌;细胞凋亡;增殖【作者】王敏【作者单位】610017成都,成都市第二人民医院妇产科【正文语种】中文【中图分类】R737.33人参是最重要的中药材之一，有多种药理作用，在临床中应用广泛。
人参的主要生物学活性依赖于人参皂苷，人参皂苷属于三萜皂苷，具有多种生物学活性，如抗炎、抗氧化、促进血管舒张、对部分肿瘤的抗癌活性等[1-5]。
人参皂苷有多种活性成分，包括Rh1、Rh2、Rg1、Rg3和其他成分等。
既往研究显示，人参皂苷分子糖基数目越少，其抗肿瘤活性越好[6-7]。
人参皂苷Rh2对多种肿瘤细胞均有显著的增殖抑制活性，但是其作用机制尚未明确[7-8]。
此外，人参皂苷Rh2对子宫内膜癌的治疗效应及其分子机制尚不清楚。
因此，本研究中探讨了人参皂苷Rh2对子宫内膜癌细胞增殖的抑制活性及其诱导细胞凋亡的相关机制。
1 材料与方法1.1 体外细胞培养人子宫内膜癌细胞HEC1A，购于ATCC；采用DMEM培养液，补加10%胎牛血清、1%青霉素和链霉素。
人参皂苷Rh2联合紫杉醇治疗人肝癌细胞HepG2和移植瘤小鼠的效果
皂苷组及联合组小鼠移植瘤平均质量均低于阴性对照组，联合组抑瘤率高于紫杉醇组、人参皂苷组，差异均有统计学意义（P<0.05）。
结论：人参皂苷 Rh2 联合紫杉醇可抑制人肝癌细胞 HepG2 增殖、侵袭与迁移，降低移植瘤小鼠移植瘤平均质量，提高抑瘤率，作用机制
可能与其能降低 PCNA、MMP-2、MMP-9 的表达水平有关。
细 胞 HepG2 分 为 紫 杉 醇 组（40 mg/L 紫 杉 醇 注 射 液）、 人 参 皂 苷 组（20 mmol/L 人 参 皂 苷 Rh2）、 联 合 组（40 mg/L 紫 杉 醇 注 射 液 和
20 mmol/L 人参皂苷 Rh2）和阴性对照组（培养液），比较四组人肝癌细胞 HepG2 活力、细胞迁移与侵袭数、细胞周期和增殖细胞核
苷组、联合组 OD490 值均低于阴性对照组，人参皂苷组 OD490 值均高于紫杉醇组和联合组，差异有统计学意义（P<0.05）；紫杉醇组、人 参皂苷组和联合组细胞迁移与侵袭数均低于阴性对照组，且联合组低于紫杉醇组、人参皂苷组，差异有统计学意义（P<0.05）；紫杉醇组、
人参皂苷组、联合组 G1 期细胞比例均高于阴性对照组，S 期、G2 期细胞比例均低于阴性对照组，且联合组 G1 期细胞比例高于紫杉醇组、 人参皂苷组，S 期、G2 期细胞比例低于紫杉醇组、人参皂苷组，差异均有统计学意义（P<0.05）；紫杉醇组、人参皂苷组、联合组 PCNA、 MMP-2、MMP-9 表达水平均低于阴性对照组，且联合组低于紫杉醇组、人参皂苷组，差异均有统计学意义（P<0.05）；紫杉醇组、人参
2021 年 5 月 中国民康医学 May，2021
第 33 卷 半月刊 第 9 期摇 摇 摇 摇 摇
人参单体皂甙Rh2对人喉癌细胞株Hep
人参单体皂甙Rh2对人喉癌细胞株Hep人参单体皂甙Rh2对人喉癌细胞株Hep-2抗增殖作用的研究于广久1,康健1,郭凤2(1·锦州医学院附属第一医院耳鼻咽喉-头颈外科,辽宁锦州121000;2·齐齐哈尔市第一医院耳鼻咽喉科,黑龙江齐齐哈尔161005)出处：锦州医学院学报〔作者简介〕于广久(1977-),男,辽宁省丹东市人,在读硕士研究生,主要研究方向是喉癌的肿瘤学治疗。
【摘要】目的探讨人参单体皂甙Rh2对体外培养的人喉癌细胞株Hep-2的抗增殖作用及其作用机制。
方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验、流式细胞技术及免疫组织化学S-ABC 法分别检测人参单体皂甙Rh2对喉癌细胞株Hep-2的增殖、细胞周期的影响。
结果(1)人参单体皂甙Rh2可明显抑制Hep-2细胞的生长,并呈剂量、时间依赖性作用。
(2)人参单体皂甙Rh2 (30μg/ml)处理细胞24h: G1期细胞由60·09%增加至68·86% (P<0·01), S期细胞由18·89%减少至12·30% (P<0·01), G2/M期细胞及凋亡细胞无明显变化(P>0·05),细胞阻滞于G1期。
结论人参单体皂甙Rh2对人喉癌细胞株Hep-2具有明显的生长抑制作用,并可导致其G1期细胞周期阻滞。
G1期细胞周期阻滞可能是人参单体皂甙Rh2抗肿瘤作用的机制之一。
【关键词】人参单体皂甙Rh2 (G-Rh2);喉癌;细胞周期【中图分类号】R739·65【文献标识码】A【文章编号】1000-5161 (2003) 06-0034-04Anti-proliferative Effect and the Mechanism of Ginsoniside Rh2on Human Laryngeal Carcinoma Cell Line Hep-2YU Guang-jiu1, KANG Jian1, GUO Feng2(1·Department of ORL-HNS, the First Affiliated Hospital of inzhou Medical College, Jinzhou 121000 China; 2·Department of ORL,the First Hospital of Qiqiha’er City, Qiqiha’er 161005 China)【Abstract】Objective To study the anti-proliferative effect and the用0·25%的胰蛋白酶消化后分瓶,每周传代两次,培养条件: 5%CO2,温度37℃,湿度100%。
人参皂甙-Rh2对Ara-c诱导HL60细胞增殖抑制和凋亡作用的影响
人参皂甙-Rh2对Ara-c诱导HL60细胞增殖抑制和凋亡作用的影响侯毅鞠;袁忠海;郭素红;李艳;孙可歆【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2009(49)23【摘要】目的探讨人参皂甙单体Rh2(GS-Rh2)对阿糖胞苷(Ara-c)抗白血病作用的影响. 方法体外培养人髓性白血病细胞株(HL60)并随机分为三组,其中Ara-c组加入终质量浓度分别为5.0～40.0 μg/ml的Ara-c,GS-Rh2组加入终质量浓度为4.0～32.0 μg/ml的GS-Rh2,联合组加入终质量浓度为4.0 μg/ml的GS-Rh2及上述质量浓度Ara-c.48 h后采用MTT法测定三组HL60细胞的增殖抑制率(IR),并计算半数抑制浓度(IC50)、合用指数(CI)、增效倍数及合并效应与期望合并效应的比值(q);倒置显微镜及常规瑞-吉染色法观察细胞凋亡形态.结果 Ara-c组、GS-Rh2组的IC50分别为32.0、13.0,联合组Ara-c的IC50为14.5 μg/L,显著低于Ara-c 组(P＜0.001);联合组CI为0.76, 4.0 μg/ml GS-Rh2对Ara-c的增效倍数为2.21,Ara-c质量浓度为5.0、10.0、20.0、40.0 μg/ml时的q分别为1.42、1.39、1.36、1.21;联合组细胞凋亡形态较其他两组明显.结论 GS-Rh2可提高HL60细胞对Ara-c的敏感性,减少Ara-c的临床用药剂量和毒副作用,加强Ara-c的疗效;此为临床治疗白血病提供了新的思路.【总页数】3页(P14-16)【作者】侯毅鞠;袁忠海;郭素红;李艳;孙可歆【作者单位】吉林医药学院检验系,吉林132013;吉林医药学院检验系,吉林132013;吉林医药学院检验系,吉林132013;吉林医药学院检验系,吉林132013;吉林医药学院检验系,吉林132013【正文语种】中文【中图分类】R733.3【相关文献】1.人参皂甙-Rh2诱导人肝癌Bel-7404细胞凋亡的作用 [J], 樊光华;姜浩;欧文胜2.人参皂甙Rh2诱导人喉癌细胞株Hep-2凋亡的研究 [J], 陆鸿略;康健3.人参皂甙Rh2和桦木酸协同诱导A549细胞凋亡的研究 [J], 李清;王晓宇;金英花4.人参皂甙单体Rh2诱导髓性白血病细胞株凋亡的时效与量效 [J], 侯毅鞠;袁忠海;田晶;郭素红;李艳5.维甲酸与人参皂甙-Rh2或半边旗二萜类化合物5F协同诱导肝癌细胞凋亡的研究[J], 蔡康荣;蔡春因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人参皂苷Rh2诱导口腔鳞癌耐药细胞凋亡
人参皂苷Rh2诱导口腔鳞癌耐药细胞凋亡徐亚娟;金志巍;刘莉莉;刘文书【期刊名称】《中国老年学杂志》【年(卷),期】2017(37)16【摘要】目的探讨人参皂苷Rh2对口腔鳞癌耐药细胞(KBV)的促凋亡作用及其对时间和剂量的时效量效关系.方法采用MTT法检测人参皂苷Rh2于不同时间和浓度下对KBV的生长抑制作用及药物毒性实验;通过台盼蓝染色进一步检测Rh2不同浓度和时间下诱导KBV的死亡率;利用提取Rh2作用后DNA进行琼脂糖凝胶电泳观察KBV细胞基因组降解情况.结果 48 h内,KBV细胞在0~100 μg/ml的Rh2诱导下,其所导致的生长抑制率随着时量和剂量的增加而有所加强,对正常细胞的抑制率均在10%以下并且台盼蓝染色得到的死亡率不超过12%,细胞DNA在人参皂苷Rh2作用后发生降解,琼脂糖电泳呈梯形条带.结论人参皂苷Rh2是一种安全有效毒副作用小的药物,其对KBV的抑制作用主要由凋亡引起,并随着浓度和时间的不断增加,持续作用于耐药癌细胞.【总页数】3页(P3956-3958)【作者】徐亚娟;金志巍;刘莉莉;刘文书【作者单位】吉林省肿瘤医院口腔颌面肿瘤外科,吉林长春 130012;吉林省肿瘤医院口腔颌面肿瘤外科,吉林长春 130012;吉林省肿瘤医院口腔颌面肿瘤外科,吉林长春 130012;吉林大学第一临床医院口腔科【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.人参皂苷Rh2诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的研究 [J], 刘艳红;章秀丽;陈少文;赵燕颖2.人参皂苷Rh2调控PI3 K／AKT／GSK-3β信号通路诱导人结肠癌细胞凋亡 [J], 石雪萍;李静;冉建华;熊伟;李海星;郭;陈地龙3.人参皂苷Rh2对低浓度的奥沙利铂诱导人胃癌SGC-7901侧群细胞凋亡的增敏作用 [J], 李靖;郑旭薇;贾建光;郭晨旭;金鑫;钱军4.S型与R型人参皂苷Rh2诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的体外研究 [J], 齐晓丹;张春晶;于海涛;师岩;孙艳;卢长方;陈刚5.人参皂苷Rh2诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究 [J], 李晶华;李杨;何侃;孔维;金英花因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人参单体皂甙Rh2对人喉癌细胞株Hep-2抗增殖作用的研究
人参单体皂甙Rh2对人喉癌细胞株Hep-2抗增殖作用的研究于广久;康健;郭凤【期刊名称】《辽宁医学院学报》【年(卷),期】2003(024)006【摘要】目的探讨人参单体皂甙Rh2对体外培养的人喉癌细胞株Hep-2的抗增殖作用及其作用机制.方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验、流式细胞技术及免疫组织化学S-ABC法分别检测人参单体皂甙Rh2对喉癌细胞株Hep-2的增殖、细胞周期的影响.结果(1)人参单体皂甙Rh2可明显抑制Hep-2细胞的生长,并呈剂量、时间依赖性作用.(2)人参单体皂甙Rh2(30μg/ml)处理细胞24h:G1期细胞由60.09%增加至68.86%(P<0.01),S期细胞由18.89%减少至12.30%(P<0.01),G2/M期细胞及凋亡细胞无明显变化(P>0.05),细胞阻滞于G1期.结论人参单体皂甙Rh2对人喉癌细胞株Hep-2具有明显的生长抑制作用,并可导致其G1期细胞周期阻滞.G1期细胞周期阻滞可能是人参单体皂甙Rh2抗肿瘤作用的机制之一.【总页数】4页(P34-37)【作者】于广久;康健;郭凤【作者单位】锦州医学院附属第一医院耳鼻咽喉-头颈外科,辽宁,锦州,121000;锦州医学院附属第一医院耳鼻咽喉-头颈外科,辽宁,锦州,121000;齐齐哈尔市第一医院耳鼻咽喉科,黑龙江,齐齐哈尔,161005【正文语种】中文【中图分类】R739.65【相关文献】1.人参单体皂甙Rh2对前列腺癌细胞株PC-3M细胞移行周期的影响 [J], 周桂华;孟艳;李扬;赵雪俭;陈燕萍;马兴元2.人参皂带Rh2联合顺铂应用对人喉癌细胞Hep-2的作用 [J], 徐洪君;孟艳;孙宇新3.人参皂甙Rh2诱导人喉癌细胞株Hep-2凋亡的研究 [J], 陆鸿略;康健4.人参皂甙单体Rh2诱导髓性白血病细胞株凋亡的时效与量效 [J], 侯毅鞠;袁忠海;田晶;郭素红;李艳5.人参皂甙单体Rh2对人喉癌细胞株Hep-2抗增殖作用 [J], 郭凤;于广久;朱立营;郑周红;常江;王斌;陈伟刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人参皂甙Rh2诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展
人参皂甙Rh2诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展
郭凤;于广久;康健
【期刊名称】《辽宁医学院学报》
【年(卷),期】2006(027)005
【摘要】人参皂甙Rh2（G—Rh2）属于Rh2类单体（Rh2类包括Rh1、Rh2、Rh3、Rh4），是从人参中提取的一种有效活性成分，具有较强的抗肿瘤作用。
国外学者对其研究颇多，主要从诱导细胞凋亡的角度对其作用机制进行了细胞分子水平上的探讨，并在卵巢癌、黑色素瘤。
肝癌、白血病等方面作了大量报道，国内亦有学者进行报道。
本文结合国内外学者近十年来对G—Rh2的研究状况，对其研究进展综述如下。
【总页数】3页(P52-54)
【作者】郭凤;于广久;康健
【作者单位】齐齐哈尔市第一医院耳鼻咽喉科,黑龙江,齐齐哈尔,161005;齐齐哈尔市第一医院神经外科,黑龙江,齐齐哈尔,161005;锦州医学院附属第一医院耳鼻咽喉科,辽宁,锦州,121000
【正文语种】中文
【中图分类】R2
【相关文献】
1.人参皂甙Rh2对耐药乳腺癌细胞P-糖蛋白和基质金属蛋白酶及其诱导物表达的影响 [J], 朴丽花;韩春姬;金元哲;陈琦;许祖德
2.人参皂甙Rh2诱导黑色素瘤细胞树突生成的机制研究 [J], 姜永生;王芙蓉
3.人参皂甙Rh2和桦木酸协同诱导A549细胞凋亡的研究 [J], 李清;王晓宇;金英花
4.人参皂甙-Rh2对Ara-c诱导HL60细胞增殖抑制和凋亡作用的影响 [J], 侯毅鞠;袁忠海;郭素红;李艳;孙可歆
5.人参皂甙单体Rh2诱导髓性白血病细胞株凋亡的时效与量效 [J], 侯毅鞠;袁忠海;田晶;郭素红;李艳
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人参皂苷Rh2的人类内靶点鉴定及抗肿瘤分子机制研究
人参皂苷Rh2的人类内靶点鉴定及抗肿瘤分子机制研究人参皂苷Rh2的人类内靶点鉴定及抗肿瘤分子机制研究(20S)G-Rh2是人参加工成红参过程中产生的次级皂苷,具有出色的抗肿瘤活性。
研究表明,(20S)G-Rh2可诱导人白血病细胞、人宫颈癌细胞、人卵巢癌细胞、人肺癌细胞、人肝癌细胞和人乳腺癌细胞在内的多种肿瘤细胞的细胞凋亡,并且(20S)G-Rh2同时启动线粒体途径和和膜死亡受体途径高效杀死癌细胞。
(20S)G-Rh2还可通过抑制JNK、Akt、MAPK和β-catenin信号通路诱导肿瘤细胞周期G1期阻滞,抑制肿瘤细胞的生长。
在乳腺癌细胞中,(20S)G-Rh2可以抑制microRNA介导的多重药物抵抗。
在人多形型恶性胶质瘤细胞中,(20S)G-Rh2通过下调血管内皮生长因子A,抑制EGFR/PI3k/Akt/mTor信号通路,降低肿瘤细胞的侵袭转移能力。
动物水平研究表明,(20S)G-Rh2同样抑制多种种植瘤在小鼠中的生长。
本文旨在通过对(20S)G-Rh2相互作用蛋白质的研究,揭示(20S)G-Rh2的细胞内靶点,并最终阐述(20S)G-Rh2抗肿瘤作用的分子机制。
为探索与(20S)G-Rh2相互作用的蛋白质,我们分别使用(20S)G-Rh2-PEGA树脂和(20R)G-Rh2-PEGA树脂对人肝癌细胞HepG2的全细胞裂解液进行了pull-down分析,通过液相色谱串联质谱分析获得了381个蛋白质。
通过比较上述蛋白质在(20S)G-Rh2-PEGA树脂和(20R)G-Rh2-PEGA树脂的相对丰度,我们获得了113个与(20S)G-Rh2具有较强结合能力的蛋白质。
通过检索上述蛋白质在肝细胞癌中的相对表达水平,我们确定了13个在肝癌细胞中高表达的蛋白质。
结合(20S)G-Rh2相互作用蛋白质组的GO分析,最终选择Annexin A2进行深入的功能研究。
Annexin A2蛋白质是重要的多功能蛋白质,在细胞增殖、细胞迁移、细胞粘附等过程中发挥重要作用。
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人参皂甙Rh2诱导人喉癌细胞株Hep-2凋亡的研究
摘要!目的: 研究人参皂甙Rh-2( G-Rh2) 诱导喉癌Hep-2细胞凋亡的作用。
方法: 应用流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳检测G-Rh2处理前后Hep-2细胞的凋亡情况, 并应用SP免疫组化法检测药物处理前后相关基因产物Bax、Bcl-2蛋白的表达, 观察G-Rh2对喉癌Hep-2细胞的诱导凋亡作用及其对细胞周期的影响。
结果: ( 1) G-Rh2具有诱导凋亡作用, 且呈量效、时效关系, 细胞凋亡率随G-RH2浓度及作用时间的增加而升高, 并可将细胞周期阻滞于G0/ G1 期。
( 2) G-Rh2处理Hep-2后, Bax表达上调, Bcl-2在G-Rh2处理前后无明显变化。
结论: G-Rh2对体外培养的Hep-2细胞具有诱导凋亡的作用, 其机制可能与上调Bax的表达及细胞周期阻滞有关。
关键词!人参皂甙Rh-2; 喉癌; 细胞凋亡; 细胞周期
喉癌是常见的耳鼻咽喉恶性肿瘤, 占耳鼻咽喉各种恶性肿瘤的第三位。
目前, 喉癌的治疗仍以手术为主, 然后辅以化疗以延长患者生存率。
而大量抗癌药物是通过诱导细胞凋亡而发挥其细胞毒作用的。
所以, 促进肿瘤细胞凋亡成为恶性肿瘤化疗的新目标。
人参皂甙Rh2( Ginsenoside-Rh2, G-Rh2) 是近年来从人参中分离出来的一种有效成分, 属于人参二醇型四环三萜类低糖链皂甙单体, 体内、外实验表明, 它通过诱导分化或凋亡抑制肿瘤细胞的增殖, 并证明其对正常组织毒性很低。
本实验以人喉癌Hep-2细胞株为实验对象, 研究G-Rh2通过诱导凋亡对Hep-2细胞株的抑制作用, 从而为喉癌的临床治疗提供更多的实验依据。
1 材料与方法
1. 1 细胞株及细胞培养
人喉癌细胞株购于北京同仁医院耳鼻咽喉研究所, 培养于含10%胎牛血清的RPMI1640培养液中( 含100IU/ ml 青霉素和0. 1mg/ml 链霉素) , 于37# 、5%CO2恒温培养箱中培养, 细胞呈贴壁生长, 达80%左右时传代。
传代用0. 25%的胰蛋白酶消化。
1.2药品与试剂
G-Rh2购自吉林大学医学部天然药物化学研究室, 制成针剂, 浓度为20g/ L、纯度∃98%, 用时以RPMI1640培养液稀释为不同浓度。
琼脂糖和吖啶橙购自Sigma公司, 兔抗Bax 多抗及鼠抗Bcl-2单抗购自武汉博士德公司, 核糖核酸酶(RNase)和碘化丙啶( PI) 购自华美生物试剂公司。
1. 3 实验方法
1. 3. 1 流式细胞仪检测G-Rh2诱导凋亡的量效关系及细胞周期分析: 取对数生长期的Hep-2以1%105cell/ cm2接种于培养瓶中, 贴壁培养24小时后弃去上清, 处理组加入含不同终浓度( 10、20、40、80 mol/L) G-Rh2的培养液, 对照组加入等量培养液。
培养24小时, 经0. 25%胰蛋白酶消化后, 收集约1%106个细胞。
PBS洗涤, 制成单细胞悬液, 用70%的冰乙醇4℃固定12h。
于PI 一步染色液中染色30min后做流式细胞仪分析。
1. 3. 2 流式细胞仪检测G-RH2诱导凋亡的时效关系: 细胞取样、计数、培养同上。
根据以往采用MTT法检测G-Rh2对Hep-2细胞的生长抑制作用的结果,其半数抑制浓度( IC50) 为38. 6μmol/ L, 因此我们选择40 mol/ L( IC50的近似值) G-Rh2分别作用0、12、24、48h 后, 检测凋亡率。
1. 3. 3 琼脂糖凝胶电泳法: 细胞取样、计数、培养、分组同上。
37℃培养24h后终止培养, 分别收集各组悬浮和贴壁细胞至1. 5mlEP管中, 每管用细胞裂解液500μl 重悬细胞后加蛋白酶K至终浓度100μl/ ml,50℃水浴3小时。
经酚/ 氯仿抽提一次,
2. 5倍体积的无水乙醇
沉淀DNA。
1. 2%的琼脂糖凝胶电泳约1小时, 比较各组DNA电泳带型特点。
1. 3. 4 免疫组化: 细胞取样、计数同上, 接种于置有小盖片的24孔培养板中, 实验组加入含G-Rh240μmol/ l的培养液, 对照组加入等量RPMI1640培养液。
每组设3个复孔, 于37℃孵箱内培养48小时后, 收集细胞, 制备细胞涂片。
采用SP免疫组化法检测Bax 和Bcl-2的表达, DAB显色, 苏木素浅染, 光镜下观察, 以胞浆或胞膜出现棕黄色颗粒为阳性细胞。
1. 4 统计处理 采用X2检验进行统计分析。
2 结果
2. 1 G-Rh2诱导Hep-2细胞凋亡的量效、时效关系
采用流式细胞仪检测凋亡细胞, 各处理组细胞凋亡率随G-Rh2浓度增高而递增, 见表1。
在40 mol/ l G-RH2作用下, 不同时间处理组细胞凋亡率随处理时间的延长而增高, 见表2。
2. 2 G-Rh2作用后细胞周期变化
用流式细胞仪检测各期细胞数( 每组检测10000个细胞) , 结果证明G-Rh2处理Hep-2细胞24h后, 对G1期细胞的阻滞作用非常明显, 见表3。
2. 3 琼脂糖凝胶电泳结果
细胞凋亡时, 随着核酸内切酶的活化, DNA降解成寡聚核小体, 这些降解片段均为
180-200bp的倍数, 通过电泳可形成典型的“梯状带”。
无凋亡时, DNA未被降解, 电泳形成单一的条带位于点样孔附近。
本实验结果显示: 20μmol/ l、40μmol/ l、80μmol/ l G-Rh2组显示“阶梯状”条带( 即“ladder”) , 对照组及10 mol/ l G-Rh2组未见“ladder”(图1) 。
2. 4 免疫组化检测结果
免疫组化结果显示, Bax阳性产物位于胞浆, 对照组Bax表达呈弱阳性, G-Rh2处理后的细胞Bax 表达水平提高( 图2) 。
Bcl-2阳性表达可见于胞膜及胞浆, 对照组和G-Rh2处理组均呈阳性表达, 二者无显著性差异( 图3-4) 。
3. 讨论
肿瘤的发生发展与细胞凋亡异常有极其密切的关系, 因此细胞凋亡成为临床上体现对肿瘤实施化疗效果的一个重要指标。
国内外许多学者通过体内外实验证实G-Rh2具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用, 但喉癌细胞方面则鲜见报道, 本实验旨在阐述G-Rh2诱导喉癌细胞凋亡的机理, 为喉癌的临床治疗提供更多的实验依据。
本实验在采用流式细胞仪对G-Rh2诱导Hep-2细胞凋亡的研究中发现: Hep 2细胞的凋亡率在一定范围内具有随药物浓度增高而增高的趋势。
由此提示: 在一定范围内, G Rh2诱导细胞凋亡呈剂量依赖性。
根据Anodrew等的观点, 细胞死亡是由正常的细胞周期改变引起的。
细胞凋亡与细胞周期阻滞有关, 细胞阻滞与哪一期, 凋亡就发生在哪一期。
本实验结果表明: 各实验组G1期细胞数量增多, 说明G-Rh2能阻滞G1期细胞向S期移行。
在药物作用下, 部分肿瘤细胞发生凋亡, 未发生凋亡的部分细胞进入S期。
这一结果与樊文华等在研究G-Rh2诱导肝癌Bel-7404细胞凋亡的作用时所得结果一致。
在细胞凋亡的调控因子中, Bcl 2基因家族是重要成员, 此家族共有三种基因: Bcl-2、Bax、Bcl-x基因, 三者形成了一个凋亡调控系统: 1、当Bax 同源二聚体形成, 便诱导凋亡;2、随Bcl-2蛋白表达量上升, 越来越多的Bax二聚体分开, 与Bcl-2形成比Bax-Bax更稳定的Bax-Bcl-2异源二聚体, 从而“中和”了Bax-Bax诱导凋亡的作用, 即细胞内Bcl-2与Bax 的比例调节了凋亡的发生; 3、而当Bcl-xS存在时, 优先与Bcl-2形成异源二聚体, 而使游离的Bax得以形成同源二聚体, 便诱导了凋亡。
通过本实验结果, 我们认为G-Rh2在一定浓度范围内可诱导细胞凋亡, 此作用与上调Bax蛋白有关。
Bax 表达增强, 形成Ba-Bax 同源二聚体的量增加, 从而诱导凋亡。
Bcl-2是否参与诱导Hep-2凋亡, 根据本实验结果无法确定。
这一结果与韩国学者的报道一致。
通过以上结果, 说明G-Rh2具有诱导Hep-2细胞凋亡的作用. 其诱导凋亡作用可能与Bax 表达上调以及阻滞细胞于G1 期有关。