PAGE胶蛋白微量回收试剂盒使用说明

PAGE胶蛋白微量回收试剂盒使用说明

胶蛋白微量回收试剂盒（以下简称试剂盒）是一种用于从聚丙烯酰胺

凝胶电泳（）胶中回收目标蛋白质的试剂盒。本文将详细介绍试剂盒的使

用方法。

一.实验前准备

1.准备好实验室所需的培养基、显微镜玻片等。

2.检查试剂盒中的试剂瓶是否有球结，如有疑问请勿使用。

二.胶回收实验步骤

1.准备样品：取适量的包含目标蛋白质的胶，将其剪碎并放入E盒洗

涤缓冲液中，孵育15分钟，然后通过藻蓝溶液染色观察胶中的蛋白条带。

2.胶块处理：将BL3溶液倒入胶块处理管中，将样品转移到胶块处理

管中，尽量避免将胶块带入胶块处理管。然后用吸滤纸吸去底部的液体，

加入2次体积的洗涤缓冲液洗涤胶块。

3.添加胶析试剂：将胶块处理管倒置并放置在收集管上，将胶析试剂

加入胶块处理管中，使其接触胶块。注意避免产生气泡。缓慢旋转收集管，使胶析试剂均匀分布。

4.离心：将收集管与胶块处理管在离心机上离心10分钟，使胶析试

剂顺着离心力聚集在胶块底部。保留悬液。

5.胶结析：从收集管底部用吸头吸去尽量多的溶液，用吸头吸取底部

的胶，放入重结析管中，加入BL3溶液充满整个管子。注意避免产生气泡。离心2分钟，废液倒掉。

6. 洗涤蛋白：重置重结析管的位置，用2ml洗涤缓冲液洗涤胶2次，每次洗涤10分钟。收集液体。

7. 胶脱水：加入3ml脱水溶液，重置离心管的位置，离心2分钟，

废液倒掉。重复此步骤2次，最后倒掉废液。

8.再溶解：加入约30μl再溶解缓冲液，然后离心2分钟，收集上清液。

9.分析：取适量的上清液进行进一步实验。

三.注意事项

1.使用试剂盒前，请阅读使用说明书，并严格按照说明操作。

2.实验中使用的所有试剂和器材都必须经过严格的无菌操作。

3.在实验过程中，应注意避免直接接触试剂与胶液。

4.在洗涤、离心和脱水过程中，要小心操作，避免试剂或胶溶液外溢。

5.在试剂盒过程中，应注意实验室内的清洁和卫生。

四.结语