天根琼脂糖gel DNA回收试剂盒
天根切胶回收说明书
天根切胶回收说明书
天根切胶回收试剂盒说明书
一、产品简介
天根切胶回收试剂盒是一种高效的DNA片段回收试剂盒,能够从凝胶中快速、准确地回收目的DNA片段。
该试剂盒采用独特的吸附技术,能够有效地去除凝胶中的杂质,纯化DNA片段。
回收的DNA片段可用于后续的克隆、测序、PCR等实验。
二、产品特点
1. 高效回收:能够从凝胶中快速、准确地回收目的DNA片段,回收率高达90%以上。
2. 纯度高:能够有效去除凝胶中的杂质,纯化DNA片段,提高后续实验的准确性和可靠性。
3. 操作简便:采用独特的吸附技术,无需使用有机溶剂,简化了操作步骤。
4. 稳定性好:试剂盒中的成分稳定,便于长期保存和使用。
三、使用方法
1. 准备凝胶和电泳缓冲液:将凝胶和电泳缓冲液按照要求准备妥当。
2. 切胶:按照实验要求将凝胶切成适当大小的胶块。
3. 洗涤:将切好的胶块放入离心管中,加入适量的洗涤液,充分混匀,洗涤去除凝胶中的杂质。
4. 吸附:将洗涤后的胶块放入吸附柱中,按照说明书要求进行吸附操作。
5. 洗脱:将吸附后的DNA片段进行洗脱,收集洗脱液。
6. 检测:对回收的DNA片段进行检测,如琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计检测。
四、注意事项
1. 使用前请仔细阅读本说明书,确保按照说明书要求正确操作。
2. 本试剂盒仅供实验室使用,请勿用于食品、药品等领域。
3. 使用过程中请注意安全,避免直接接触眼睛、皮肤和衣物等。
如不慎接触到皮肤或眼睛,请立即用清水冲洗,并及时就医。
4. 本试剂盒中的试剂和耗材均为一次性使用,用后请及时处理废弃物。
DNA凝胶回收(试剂盒)
DNA凝胶回收(试剂盒)
1.在紫外灯下切下含有目的DNA的琼脂糖凝胶,用纸巾吸净凝胶表面液体并切碎。
计算凝胶重量。
该重量作为一个凝胶体积。
(提前记录1.5ml离心管重量,100mg等于100ul体积)
2.加入3个凝胶体积的Buffer DE-A,混合均匀后于75℃加热(低熔点琼脂糖凝胶于40℃加
热),间断混匀(每2-3Min),直到凝胶块完全融化。
(约6-8Min)
注意:buffer DE-A为红色。
帮助观察凝胶是否完全融化。
3.加0.5个buffer DE-A体积的Buffer DE-B,混匀。
(当分离的DNA片段小于400bp时,需再加入一个凝胶体积的异丙醇)
注意:加入buffer DE-B 为黄色
4.吸取3中混合液,转移到DNA制备管中(2ml试剂盒内提供的离心管)中,12000g离心1Min,室温放置2Min。
弃滤液。
5.将制备管置于2ml 离心管中,加500ul buffer W1,放置2Min,12000g离心30s 弃滤液。
6.将制备管置于2ml 离心管中,加700ul buffer W2,放置2Min,12000g离心30s 弃滤液。
重复一次,不过时间为1Min。
7.将制备管置于2ml 离心管中,12000g再离心1Min。
8.将制备管置于洁净的1.5ml的离心管中(试剂盒内提供),在制备膜中央加入25-30ul Eluent,室温静置1min,12000g 离心1min 洗脱DNA.可暂放-20冰箱中。
DNA凝胶回收试剂盒产品说明书
北京四正柏生物科技有限公司网站: 客服热线:400-7060-959技术支持:DNA 凝胶回收试剂盒产品编号规格MDN3066-5050次MDN3066-100100次保存条件及效期:常温运输和保存,保质期一年。
产品描述:本试剂盒用于从琼脂糖凝胶中或DNA 反应体系中(如PCR 反应)回收DNA 片段。
试剂盒采用可以高效、专一结合DNA 的硅胶膜和独特的溶胶体系,或DNA 反应体系中回收的单链、双链及环状DNA ,回收效率可达50-90%(跟片段大小相关)。
得到的DNA 可直接用于连接、转化、酶切、测序、杂交等分子生物学实验。
产品组分:使用方法:1.凝胶回收:切取含DNA 片段的琼脂糖凝胶(100mg 左右,尽可能多地把多余的胶切除,否则会影响回收效率),放入一干净的1.5ml 塑料离心管(自备)中,用移液枪头捣碎,按重量比为1:3到1:5的比例加入通用溶胶液(100mg 琼脂糖凝胶需要加入300μl-500μl 通用溶胶液)。
PCR 产物回收:直接在PCR 反应管中加3-5倍体积的通用溶胶液,混匀,然后跳过第2步、直接从第3步做起。
如果PCR 反应中使用了石蜡,需要预先去除。
2.50℃保温使胶完全溶化(一般需要5分钟),其间可以振荡数次以促进琼脂糖凝胶的溶化。
如果片段长度在300bp 成份50次包装100次包装通用溶胶液25ml 50ml 吸附柱活化液25ml 50ml 通用洗柱液50ml 100ml 离心吸附柱50套100套DNA 洗脱液10ml 10ml 说明书1份1份以下,建议不要加热,以免DNA变性,影响回收率。
3.在等待期间,活化离心吸附柱。
在离心吸附柱中加入0.5mL吸附柱活化液,套上收集管后室温放置2分钟,然后12,000rpm离心2分钟,倒弃穿透液,再将吸附柱套上收集管后待用。
活化后的离心吸附柱必须在当天使用。
4.在上柱前,在溶化的胶中加入相当于胶块体积1/2的异丙醇(对100mg胶块,加50uL),快速振荡10秒混匀。
胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理
胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理首先,将含有目标DNA片段的琼脂糖凝胶切割出来。
这可以通过电泳将DNA片段从DNA混合物中分离出来,然后在紫外灯下观察到DNA片段的迁移带。
然后,将切割的琼脂糖凝胶用试剂盒提供的缓冲液进行均质化处理。
均质化后的琼脂糖凝胶中含有目标DNA片段。
接下来,使用离心机将均质化后的琼脂糖凝胶离心。
离心的目的是将琼脂糖凝胶上的DNA片段分离出来。
DNA片段会沉积到离心管底部的沉淀中。
上清液中则只含有琼脂糖凝胶、缓冲液和其他杂质。
然后,将离心管中的上清液去除。
去除上清液的目的是除去琼脂糖凝胶的残余和其他杂质,以便纯化DNA片段。
最后,向离心管中加入酶切缓冲液和蛋白酶。
酶切缓冲液包含酶切DNA片段所需的盐和缓冲成分,以及一些防止核酸降解的物质。
蛋白酶则会降解琼脂糖和与其结合的蛋白质。
在将酶切缓冲液和蛋白酶加入后,离心管需要在适当的温度下进行酶切反应。
酶切反应的目的是分解凝胶中的琼脂糖和与其结合的蛋白质,从而释放出目标DNA片段。
在酶切反应完成后,离心管需要再次进行离心,以将琼脂糖和其他残留物沉淀到离心管底部。
上清液中则含有纯化后的DNA片段。
最后,将离心管中的上清液转移至干燥消化DNA纯化膜(试剂盒中提供),并根据试剂盒的说明进行后续的DNA回收操作。
根据不同试剂盒的要求,DNA可以通过洗涤、低温离心或其他方法进行最终的回收。
总的来说,胶回收DNA试剂盒的原理是通过离心法和蛋白酶酶解法将凝胶上的目标DNA片段回收,以获得纯化后的DNA样品。
这一方法简单有效,可以应用于分子生物学和生物医学研究中的DNA分析和操作。
琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒大比对
3. 评估方法 • 使用Nanodrop 2000测量OD值
图: 取2ul纯化的质粒DNA上样于1.0%琼脂糖凝胶电泳 分析结果。M: DL5000 DNA Marker. 结果表明,Magen的HiPure Plasmid Micro Kit与其它品 牌对应的产品效果相当,质粒条带完整,超螺旋质粒含量 高。
2. 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒大比对
1. 选择品牌: • Qiagen, QIAquick Gel Extraction Kit , 28704 • Tiagen, 超薄琼脂糖凝胶回收试剂盒,DP208 4. 电泳结果
• Omega, E.Z.N.A. Gel Extraction Kit, D2500-02
1. 选择品牌: • Qiagen, QIAamp DNA Blood Mini Kit, D51104 • Tiagen, 血液基因组提取试剂盒(DP318) 4. 电泳结果
试剂盒回收DNA,然后电泳检测DNA回收效率。结果表明,
Magen的HiPure Gel Pure DNA Micro Kit在小片段和大片段上 有更高的回收率,其余片段则相差不大。
3. 评估方法
•
用1琼脂糖电泳分析DNA回收效率
Magen HiPure Gel Pure DNA Micro Kit(D2110)的优势:
3. 评估方法
•
用1琼脂糖电泳分析DNA回收效率
Magen HiPure PCR Pure DNA Micro Kit(D2120)的优势: 1. 高效去除引物二聚体。 2. 低洗脱体积,可低至7-10ul洗脱。 3. 长时间稳定的结合柱,无需平衡液处理 4. 更高的回收率
4.பைடு நூலகம்柱法血液DNA提取试剂盒大比对
CTAB结合DNA凝胶回收试剂盒提取食用菌DNA
32生物技术且污染较少[I引。
综合前人研究成果,作者采用间接法提取青贮饲料中的微生物总DNA,使用了CTAB试剂,采用异丙醇沉淀DNA。
吸光度和PcR检测是评价DNA质量常用的手段。
临1,本研究中通过光吸收、琼脂糖电泳及PcR检验,结果表明提取的DNA质量较高。
进一步的DGGE结果表明,所述方法具有较高的涵盖性,对样品中的微生物没有遗漏。
图6目标菌株的扩增结果M:分子量标准;1:添加目标菌株的实验组;2:未添加目标菌株的对照组。
Fig.6A群∞∞egelelectmphon∞isofPCRamplifiedDNAfromlargetstrainM:DNAmarkerD12,000;1:cornstalkwithaddedtariffstrain;2:controlcomslalkwithNolmgetstrain.WhitehouseCA等¨6j通过向处理过的土壤中加入目标菌株Franci.靶llatularensis的方法评价不同商业DNA抽提试剂盒的抽提灵敏度,结果最好的两种试剂盒的极限灵敏度为20—100cfu/g材料。
本文用同样的策略,采用文中所述方法从含有75个L.case/的材料提取的DNA中PCR扩增出了目的片段,灵敏度折合约3cfu/g材料。
YangJin—Long等。
15。
用ERIC—PCR方法评价了从粪便中提取细菌总DNA的方法,本研究中用DGGE法对提取方法进行评价。
发现所述的提取方案能提取出所有的菌株的染色体,没有遗漏。
随着微生物分子生态学的发展,各种提取环境样品总DNA的方法陆续建立起来,但是对多种环境样品而言,没有一种方法能适用于所有的环境样品,每一种样品都需要根据其特有的理化和生物学特性,优化出一种合适的提取DNA的方法‘4'”J。
参考文献:[I]YangHY,WangXF,LiuJB,e1.a1.Effectofwater一.solublecarbo-hydratecontentmsilagefermentationofwheatstl'aw[J].JournalofBi旧-scienceandmomgiaeering.2006,lOI(3):232—237.[2]NisIdnoN,WadaH,瑚idaM,ela1.Micwbialcomls,fermentatian2009年19(1)prt】clucts,andaerobicstabilityofwholecropcornandatotalmixedrationell—siJedwithandwithoutinoeulmion0f厶吲06捌ZmⅢior厶删06∞姚Ⅱbucha硎【JJ.JournalofDairysd蛳蚀,2004,87(8):2563~2570.[3]RossF,De¨aglioF.QualityofsilagesfromItalianfarms∞att8tedbyn幽andindenfityofmicrobialindicators【Jj.JApptM.a删,2007,103(5):1707一1715.[4]JanyJL.BarbierG.Culture—independenti'Ilf,th础qforidentifylngmicrobi—alcommunitiesincheese[J].FoodmiaobioIo科,.2008.25(7):839—848.【5JLeeL,rnnLS.KelleyST.Culture—independentanalysisofbacterialdi—versityiilachild—carefacility[J].BMCMicrobiol,2007.7(27):l—13.[6JAmininAL,WarganegaraFM,AditiawatiP,eta1.Siarpleenrichmentandindependentculturestoexp∞dbacteAalcommunityanalysisfromgedong-songohot@ring[J].JournalofBioscicneeand瑚帕呜.哪州雌,2008,106(2):21l一214.[7]MuyzerG.DGGF¨V,GEamethodforidentifyinggenesfromnaturaleeosys-terns【JJ.Curr0I'illMicrobiol。
多功能DNA纯化回收试剂盒操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://多功能DNA纯化回收试剂盒目录号:DR03试剂盒组成、储存、稳定性:试剂盒组成保存50次(DR0301)100次(DR0302)200次(DR0303)平衡液室温5ml 10ml 20ml 溶胶/结合液DB 室温50ml 100ml 200ml漂洗液WB 室温15 ml 25 ml 50 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温10 ml 15 ml 20 ml吸附柱EC 室温50个100个200个收集管(2ml)室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
适用范围:适用于琼脂糖凝胶DNA回收、PCR反应产物纯化回收、酶切产物DNA片断纯化回收、探针标记后纯化回收、DNA样品浓缩等。
储存事项:1. 所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清。
使用前应该恢复到室温。
2. 储存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果,因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃)进行。
3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍:在高离序盐存在的情况下,DNA片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除,最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点:1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2. 使用了优质溶胶液,不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐,不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3. 独特的溶胶液/结合液配方,将溶胶和结合两种功能统一,因此一个试剂盒可以运用于琼脂糖DNA回收、PCR产物清洁纯化、酶切产物纯化回收等多种情况,节省了需购买多种试剂盒的费用。
Geneaid GenepHlowTM Gel PCR 通用型DNA 纯化回收试剂盒说明书
完整说明书(英文)下载如果您是第一次使用本产品或对本产品的操作步骤不熟悉,请您经由扫描QR code 下载并详阅完整说明书一、从琼脂糖凝胶中回收DNA 片段1. 凝胶融解将单一的目的DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分,凝胶重量不超過300 mg )放入干净的离心管中. 向胶块中加入500 μl 溶液Gel/PCR, 55-60ºC 水浴放置10-15分钟,其间不断温和地上下翻转离心管,以确保胶块充分溶解.注意:凝胶完全融解后应呈现黄色,即可进行后续操作。
如果胶完全融解后溶液的颜色为紫色,请使用10 μl 3M 乙酸钠(pH 5.0)将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作.(溶液Gel/PCR 中含有pH 指示剂,当pH≤7.5时溶液的颜色为黄色,此时DNA 才能够有效的与膜结合,当pH 值偏高时溶液的颜色变为紫色,需要进行调整.)2. 吸附将吸附柱DFH 放入2 ml 收集管中. 待溶液温度降至室温后,将所得溶液加入吸附柱DFH中,以14-16,000 ×g 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放入收集管中.3. 漂洗向吸附柱DFH 中加入400 μl 漂洗液W1,以14-16,000 ×g 离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放入收集管中. 向吸附柱DFH 中加入600 μl 漂洗液Wash (使用前请先检查是否已加入无水乙醇),静置1分钟后以14-16,000 ×g 离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱DFH 放入收集管中. 以14-16,000 ×g 离心3分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除.注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切,PCR 等)实验.4. 洗脱将吸附柱DFH 放入一个干净的离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加20-50 μl 洗脱缓冲液EB ,(如果回收的目的片段>5 kb ,则洗脱缓冲液EB 应置于60ºC 水浴预热),室温放置2分钟. 以14-16,000 ×g 离心2分钟收集DNA 溶液.注意:1. 为了增加DNA 回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2分钟,以14-16,000×g 离心2 分钟,将DNA 溶液收集到离心管中. 2. 如果使用ddH 2O 做洗脱液,需保证其pH 值≥8.0,pH 值低于8.0会降低洗脱效率.Instruction Manual Download完整说明书(英文)下载如果您是第一次使用本产品或对本产品的操作步骤不熟悉,请您经由扫描QR code 下载并详阅完整说明书二、从琼脂糖凝胶中回收DNA片段 (回收DNA进行测序实验)1. 凝胶融解 将单一的目的DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分,凝胶重量不超過300 mg )放入干净的离心管中. 向胶块中加入500 μl 溶液Gel/PCR, 55-60ºC 水浴放置10-15分钟,其间不断温和地上下翻转离心管,以确保胶块充分溶解.注意:凝胶完全融解后应呈现黄色,即可进行后续操作.如果胶完全融解后溶液的颜色为紫色,请使用10 μl 3M 乙酸钠(pH 5.0)将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作.(溶液Gel/PCR 中含有pH 指示剂,当pH≤7.5时溶液的颜色为黄色,此时DNA 才能够有效的与膜结合,当pH 值偏高时溶液的颜色变为紫色,需要进行调整.)2. 吸附将吸附柱DFH 放入2 ml 收集管中. 待溶液温度降至室温后,将所得溶液加入吸附柱DFH 中,以14-16,000 ×g 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放入收集管中.3. 漂洗向吸附柱DFH 中加入600 μl 漂洗液Wash (使用前请先检查是否已加入无水乙醇),静置1分钟后以14-16,000 ×g 离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱DFH 放入收集管中. 重复向吸附柱DFH 中加入600 μl 漂洗液Wash (使用前请先检查是否已加入无水乙醇),以14-16,000 ×g 离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱DFH 放入收集管中,以14-16,000 ×g 离心3分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除.注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验.4. 洗脱将吸附柱DFH 放入一个干净的离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加20-50 μl 洗脱缓冲液EB ,(如果回收的目的片段>5 kb ,则洗脱缓冲液EB 应置于60ºC 水浴预热),室温放置2分钟. 以14-16,000 ×g 离心2分钟收集DNA 溶液.注意:1. 为了增加DNA 回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2分钟,以14-16,000×g 离心2 分钟,将DNA 溶液收集到离心管中. 2. 如果使用ddH 2O 做洗脱液,需保证其pH 值≥8.0,pH 值低于8.0会降低洗脱效率.Instruction Manual Download完整说明书(英文)下载如果您是第一次使用本产品或对本产品的操作步骤不熟悉,请您经由扫描QR code 下载并详阅完整说明书三、从PCR 反应液或酶切反应液中回收DNA 1. 样品前处理取20-100 μl PCR 反应液或酶切反应液加入1.5 ml 离心管中,向其中加入五倍体积溶液Gel/PCR ,充分混匀(无需去除石蜡油或矿物油). 注意: 如PCR 反应体系为50 μl (不包括石蜡油体积),则加入250 μl 溶液Gel/PCR . 樣品混匀后溶液应呈现黄色,即可进行后续操作. 如果溶液的颜色为紫色,请加入10 μl 3M 乙酸钠(pH 5.0)将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作. 2. 吸附将吸附柱DFH 放入2 ml 收集管中. 将上一步所得溶液加入吸附柱DFH 中,以14-16,000 ×g 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放入收集管中. 注意:吸附柱容积为750 μl ,若样品体积大于750 μl 可分批加入.3. 漂洗向吸附柱DFH 中加入600 μl 漂洗液Wash (使用前请先检查是否已加入无水乙醇),静置1分钟后以14-16,000×g 离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱DFH 放入收集管中. 以14-16,000×g 离心3分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除. 注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切,PCR 等)实验.4. 洗脱将吸附柱DFH 放入一个干净的离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加20-50 μl 洗脱缓冲液EB ,(如果回收的目的片段>5 kb ,则洗脱缓冲液EB 应置于60ºC 水浴预热),室温放置2分钟. 以14-16,000 ×g 离心2分钟收集DNA 溶液.注意:1. 为了增加DNA 回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2分钟,以14-16,000×g 离心2 分钟,将DNA 溶液收集到离心管中. 2. 如果使用ddH 2O 做洗脱液,需保证其pH 值≥8.0,pH 值低于8.0会降低洗脱效率.Instruction Manual Download。
胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理
胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理胶回收DNA试剂盒是一种常用的分子生物学实验工具,用于从琼脂糖凝胶中回收纯化DNA的方法。
其原理主要基于琼脂糖凝胶电泳的分离特性和DNA与硅胶膜亲和吸附的原理。
下面将详细介绍胶回收DNA试剂盒的原理和方法。
1.原理:1.1琼脂糖凝胶电泳分离:首先,将DNA样品与琼脂糖混合并加热使其溶解后,将混合物加入琼脂糖凝胶槽中,随后进行电泳。
由于琼脂糖具有分子筛的特性,DNA分子根据大小被分离在凝胶中的不同位置。
1.2硅胶膜吸附:电泳结束后,将琼脂糖凝胶取出,然后将硅胶膜放置在凝胶表面,使其与DNA分子接触。
由于硅胶膜具有强烈的亲和吸附性,它能够有效地吸附DNA分子。
1.3洗脱纯化:在硅胶膜上吸附的DNA分子可以通过洗脱的方式从硅胶膜上释放出来。
一般情况下,通过使用适当的缓冲液可以将DNA洗脱出来,得到纯化的DNA样品。
2.方法:2.1样品制备:将待分离和纯化的DNA样品进行适当的制备处理,如酶切产生的片段、PCR扩增产生的产物等。
根据需要,可以使用酶切缓冲液、PCR停止液等添加剂来优化样品的制备。
2.2琼脂糖电泳:将样品加入琼脂糖凝胶槽中,通过电泳操作进行DNA分离。
根据需要,使用适当的电泳缓冲液和电泳条件来获得所需的分离效果。
2.3硅胶膜吸附:电泳结束后,取出琼脂糖凝胶,将硅胶膜放置在凝胶表面,使其与DNA分子接触。
根据实验要求,可以根据需要对硅胶膜进行预处理,如加热、孵育等。
2.4洗脱纯化:通过使用适当的洗脱缓冲液,将硅胶膜上吸附的DNA 洗脱出来。
通常,洗脱缓冲液中包含盐和其他成分,以提高DNA的纯度和回收率。
2.5最终保存:将洗脱的DNA样品进行适当的保存和处理。
根据实验需求,可以进行浓缩、冻干或直接用于后续实验。
总结:胶回收DNA试剂盒通过利用琼脂糖凝胶电泳分离DNA,并利用硅胶膜的亲和吸附性,实现了从琼脂糖凝胶中回收纯化DNA的目的。
这种方法简便易行,能够在短时间内获得高质量的DNA样品,广泛应用于分子生物学研究和实验室应用中。
02 琼脂糖凝胶回收DNA片段及检测
琼脂糖凝胶回收DNA片段及检测 琼脂糖凝胶回收DNA片段及检测
一、DNA片段的回收纯化 DNA片段的回收纯化
利用DNA凝胶纯化回收试剂盒(离心柱型) 利用DNA凝胶纯化回收试剂盒(离心柱型) 进行DNA纯化回收。 进行DNA纯化回收。 此试剂盒可用于琼脂糖凝胶DNA回收, 此试剂盒可用于琼脂糖凝胶DNA回收, PCR反应产物纯化回收,酶切产物DNA片 PCR反应产物纯化回收,酶切产物DNA片 段纯化回收,探针标记后纯化回收,DNA 段纯化回收,探针标记后纯化回收,DNA 样品浓缩等。
10. 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管 中,在吸附膜的中间部位加40µ 中,在吸附膜的中间部位加40µl洗脱缓冲液 EB(洗脱缓冲液事先在65-70℃ EB(洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中加热 效果更好),室温放置2分钟,12,000rpm离 效果更好),室温放置2分钟,12,000rpm离 心1分钟。
பைடு நூலகம்
灌入水平胶框,插入梳子,自然冷却。 凝胶在室温下放置30min,使其自然凝结, 凝胶在室温下放置30min,使其自然凝结, 小心拔出梳子。 将凝胶放入电泳槽中,向电泳槽中加入电 泳缓冲液,刚好没过凝胶约1mm。 泳缓冲液,刚好没过凝胶约1mm。
2.加样 2.加样
取回收的DNA样品20 取回收的DNA样品20 µl, 加样缓冲液3 加样缓冲液3 µl(6X),混匀,点入琼脂糖 6X),混匀,点入琼脂糖 的样品孔内。 加样DNA 加样DNA marker DL2000 6 µl 。 开始电泳(120V) 开始电泳(120V),当溴酚蓝迁移到距凝 胶下缘2cm时,停止电泳。 胶下缘2cm时,停止电泳。 利用紫外投射仪观察DNA条带。 利用紫外投射仪观察DNA条带。
琼脂糖凝胶回收纯化DNA标准操作规程
琼脂糖凝胶回收纯化DNA标准操作规程(编号:013)
1、目的及适用范围
该SOP用于分离纯化目的DNA片段。
2、主要仪器及试剂
台式离心机、微量移液器、binding buffer、wash buffer、elution buffer,各试剂均来自胶回收提取试剂盒。
3、实验步骤
3.1 琼脂糖电泳,将特异电泳带用刀切下放入到离心管中,称琼脂糖带的重量;
3.2 按照每100mg加400µL的量加入binding buffer,放入到离心管振荡器中,45℃~55℃温育振荡,直到所有的琼脂糖都溶解(大概要5min);
3.3 取出纯化柱,将上述溶解液转移至柱中,室温下放置2min,8000rpm 离心1min,弃离心管中的液体,将纯化柱放回离心管中;
3.4 加500µL的wash buffer至柱中,8000rpm 离心1min,弃管中的溶液;
3.5 重复操作4步的操作1次,最后将纯化柱放入EP管中10000rpm离心30s,除去残余的wash buffer;
3.6 将纯化柱放入一个新的离心管。
加30~40µL H2O或者elution buffer至纯化柱膜的中央,在37℃或50℃下放置2min,10000rpm离心1min洗脱DNA,将离心管中的DNA溶液放在-20℃保存。
4、注意事项
若想要不电泳而直接纯化DNA,只需要在第2步中按100µL液量加400µL的binding buffer,其余的步骤不变。
30。
琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒操作方法及步骤说明书
琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒操作方法及步骤说明书琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒操作方法及步骤说明书如下:琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒是用于从混合物中纯化和回收琼脂糖凝胶的试剂盒。
下面是具体的操作方法及步骤说明:1. 准备工作:a. 将琼脂糖凝胶样品放置于冷室中,在4℃下保存。
b. 准备所需的琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒及其附件。
2. 细胞破碎:a. 将琼脂糖凝胶样品加入细胞破碎试剂,并将细胞破碎试剂与样品混合均匀。
b. 在室温下,将样品放置于振荡器中,并在高速摇床上以600 rpm摇动60分钟。
3. 退火:a. 将样品加热至70℃,并在水浴保温器中保温5分钟。
b. 然后快速将样品冷却至室温。
4. 离心:a. 将样品离心15分钟,以去除细胞碎片和残留杂质。
b. 将上清转移到干净的离心管中,并避免沉淀。
5. 琼脂糖凝胶回收:a. 向离心管中加入等体积的琼脂糖凝胶凝胶缓冲液,并将样品与凝胶缓冲液混合均匀。
b. 将混合物加热至65℃,并保温10分钟。
c. 快速冷却混合物至室温,并离心10分钟,从而使琼脂糖凝胶沉淀。
d. 将上清倒掉,并保留沉淀。
6. 洗涤:a. 向琼脂糖凝胶沉淀中加入1 mL 75%乙醇,然后轻轻颠倒离心管,使乙醇与琼脂糖凝胶充分混合。
b. 离心琼脂糖凝胶沉淀和乙醇混合物10分钟,并将上清倒掉。
c. 重复上述步骤一次。
7. 干燥:a. 向琼脂糖凝胶沉淀中加入1 mL无水乙醇,然后快速颠倒离心管,使无水乙醇与琼脂糖凝胶充分混合。
b. 离心琼脂糖凝胶沉淀和无水乙醇混合物10分钟,并将上清倒掉。
c. 重复上述步骤一次。
8. 最终回收:a. 将琼脂糖凝胶沉淀放置在干燥器中,将温度设置为50℃,并将它们完全干燥。
b. 最后,将琼脂糖凝胶沉淀转移到干净的容器中,并储存于冷室中。
请注意,以上操作步骤仅供参考。
在使用试剂盒之前,务必阅读和按照试剂盒的详细说明书执行实验。
琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒
琼脂糖凝胶DNA 回收试剂盒说明书修订日期说明书修订日期::2015.07.13Cat Number :KGA3050/KGA30100 Store at RT/ 4for 24 months ℃For Research Use Only (科研专用)一、 试剂盒说明凯基琼脂糖凝胶DNA 回收试剂盒采用机械切割的硅胶膜吸附材料作为离心吸附柱,在优化的指定缓冲液提供的条件下,可选择性结合回收目标DNA ,去除污染杂质;溶胶液的溶胶效率高,并含特有成分消除硼酸对吸附的干扰,适用于TAE 和TBE 缓冲液;回收40bp-50kb 片段效果佳。
回收的产物可用于PCR 、酶切、连接反应、测序等工作。
产品特点与经典的凝胶回收、纯化方法相比较,本试剂盒具有以下特点:·快速――在≤120min 内就可以从凝胶中回收DNA ; ·可靠――最适的缓冲液保证了高纯度的DNA ; ·安全――这是无有机物的抽提;·质量――纯化得的DNA 可做任何下游应用。
二、 试剂盒组份组 份 KGA3050 50T KGA30100 100T 储存 离心吸附柱50个 100个 RT 溶胶液 25ml 50 ml RT 漂洗液 50ml 100ml RT 洗脱液 5ml 10ml RT pH 调节剂0.6ml1.2 mlRT三、 操作步骤操作步骤((所有离心步骤都在室温下进行所有离心步骤都在室温下进行))1. 在琼脂糖凝胶-EB 电泳后,在紫外灯上小心的把所需的DNA 片段切下来,尽量去除多余的凝胶并尽量少带电泳缓冲液,称重,装入1.5ml 离心管,用Tip 头捣碎。
2. 按照凝胶的重量可近似地确定其体积。
假设其密度为1g /ml ,于是凝胶的体积便可通过如下方法得到:凝胶薄片的重量为0.2g 则其体积为0.2ml 。
3.加入3倍凝胶体积的溶胶液于50℃保温10min ,或直至凝胶完全融化。
期间可振荡促融。
凝胶DNA回收试剂盒使用说明
凝胶DNA回收试剂盒使用说明一、试剂盒组成1.碱性ELUTION缓冲液:用于回收DNA片段。
2.DNA绑定胶柱:用于吸附DNA片段。
3.洗涤缓冲液:用于去除琼脂糖凝胶残渣和其他杂质。
4.电子式试剂盒设备:用于快速洗脱DNA片段。
二、凝胶DNA回收试剂盒使用步骤1.准备工作:a.将碱性ELUTION缓冲液加热至65℃,并保存在试剂盒中。
b.手套和面具是使用过程中必需的,以确保实验环境的干净。
c.严格遵守实验室的安全操作规程。
2.凝胶切割:a. 切割需回收的DNA片段:将琼脂糖凝胶切割为片段大小约为50-5000 bp的目标DNA。
b.将切割好的琼脂糖凝胶片段放入微量离心管中,注意不要弄混不同大小的DNA片段。
c.记录每个DNA片段的位置和大小。
3.DNA回收:a.将切割好的琼脂糖凝胶片段放入DNA绑定胶柱中。
b.将绑定胶柱放入收集管中,通过离心将DNA片段吸附到胶柱上。
c.倒掉废液,并使用洗涤缓冲液洗脱胶柱上的残驻琼脂糖凝胶和其他杂质。
重复此步骤1-2次以确保彻底洗脱。
4.DNA洗脱:a.将洗柱放回空的收集管中。
b.加入预热的碱性ELUTION缓冲液(65℃),封闭试管盖,并放入电子式试剂盒设备中。
c.按照设备操作说明进行启动,并设置相应的洗脱温度和时间。
d.在洗脱完成后,将洗脱液转移到新的离心管中。
可以使用适当的方法(如乙醇沉淀或其他纯化方法)进一步纯化DNA。
5.质量检测:a.使用电泳进行质量检测,以确认回收的DNA片段大小和纯度。
b.如果需要,可以定量将DNA溶液保存在冰箱中以备后续实验使用。
三、注意事项1.使用前确保熟悉试剂盒的组成和使用步骤。
2.使用过程中务必佩戴手套和面具,确保操作环境的洁净。
3.严格按照试剂盒的说明进行操作,并遵循实验室的安全操作规程。
4.需要注意的是,琼脂糖凝胶切割和回收过程极易受到外源DNA污染,因此要确保实验环境的洁净,并尽量避免不必要的接触。
5.回收的DNA片段应尽快进行下一步的实验处理,以避免DNA降解和污染。
DNA凝胶回收试剂盒
产品简介:碧云天2005年底最新推出的DNA凝胶回收试剂盒(DNA Gel Extraction Kit),是世界上最先进的DNA凝胶回收试剂盒之一。
本产品采用了融胶液,可以使琼脂糖凝胶完全融化。
同时采用了一种新型的离子交换柱,在特定条件下,使DNA能在离心过柱的瞬间,结合到DNA纯化柱上,在一定条件下又能将DNA充分洗脱,从而实现DNA的快速纯化。
无需酚氯仿抽提,无需酒精沉淀,通常12个样品只需不足20分钟即可完成。
DNA纯化柱的容量约为15微克。
适用于PCR反应后去除引物,酶,矿物油,甘油,盐等杂质;也同样适用于酶切,连接,磷酸化,补平或切平,随机引物等反应后的DNA纯化。
所得的DNA可直接用于酶切,连接,转化细菌,测序,PCR,杂交等后续操作。
本试剂盒适用于纯化100bp-10kb DNA。
长至30个碱基的引物均可被完全去除。
DNA回收效率通常为60-90%。
接近100bp或10kb的DNA片断回收效率要略低一些,大于10kb的DNA回收效率迅速下降。
另外如果样品中DNA含量特别低也会导致回收效率下降。
每个试剂盒足够用于50个平均重量不超过400微克的凝胶样品。
包装清单:保存条件:室温保存,一年有效。
注意事项:第一次使用前在溶液II (洗涤液)中加入39ml无水乙醇,混匀,并在瓶上做好标记。
溶液I对人体有刺激性,操作时请小心,并注意适当防护。
本试剂盒所有操作均在室温进行,操作时无需冰浴。
所有离心也均在室温进行。
废液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丢弃。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:1. 切胶回收后,称重,将胶切碎或在离心管内用1ml枪头捣碎。
2. 加入等体积的溶液I(如胶为100mg,则加100微升溶液I),vortex或颠倒混匀。
3. 50-60℃水浴加热约10分钟至胶全融,期间,需vortex或颠倒混匀3-4次,以加速凝胶融解。
若果胶碎片较小,3-5分钟即可全融;凝胶碎片较大则需较长时间,胶全融后至少再在50-60℃水浴加热2分钟。
DNA回收试剂盒原理
DNA回收试剂盒原理
摘要:回收试剂盒的原理是在特定溶液环境下(高盐、低pH)使核酸吸附在固相介
质(一般是硅胶膜)上,洗涤去除杂质后,洗脱得到纯的DNA片段。
回收试剂盒的原理是在特定溶液环境下(高盐、低pH)使核酸吸附在固相介质(一般是硅胶膜)上,洗涤去除杂质后,通过改变溶液环境使DNA溶解到纯水或TE(低盐、高pH)中进行洗脱,可去除PCR反应中的dNTPs、引物、矿物油和聚合酶等及DNA样本中的其它杂质,得到的DNA片段可用于酶切、连接、测序、PCR反应模版等后续操作。
目前的回收试剂盒主要有离心柱型和磁珠型两种,离心柱型主要是通过将硅胶膜固定在离心管中,让含有核酸的溶液用离心力或者负压让液体通过硅胶膜,使核酸在特定溶液环境中吸附在硅胶膜上,经过洗涤、洗脱等步骤得到纯的核酸。
目前大多数的生物试剂公司生产的回收试剂盒主要是采用该方法来回收核酸,这种方法操作简单、时间短。
目前也有很多公司采用磁珠法来提取,不需要离心,可以用于自动化操作。
回收试剂盒可以从琼脂糖凝胶(TAE、TBE)、聚丙烯酰胺凝胶或酶切、PCR等产物中回收DNA片段,根据DNAP片段来源,按照DNA来源上可以分为PCR纯化回收试剂盒、琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒和聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒这三类。
如果片段大小在50bp-50kb之间,且片段单一,可以采用 PCR纯化回收试剂盒,可以节约跑电泳的时间以及紫外对DNA的破坏,如果片段不是单一条带,可以采取琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒,可以切取单一的条带来进行DNA片段的回收。
如果需要回收片段更小的DNA片段,可以使用聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒来进行。
胶回收试剂盒成分及作用
胶回收试剂盒成分及作用
小伙伴们!今天咱们来唠唠胶回收试剂盒的那些事儿。
首先呢,胶回收试剂盒里有结合缓冲液。
这东西可重要啦!它的作用就是为了让咱们从琼脂糖凝胶里切下来的DNA片段能够很好地结合到硅胶膜上。
你想啊,如果没有这个结合缓冲液,那DNA片段就像没头的苍蝇似的,到处乱飘,根本没法好好进行下一步回收工作呢!我感觉这个结合缓冲液的量得控制好,不过具体多少有时候也得根据实际情况来定,多一点少一点可能不会有太大影响,但也别太离谱啦。
还有洗脱缓冲液。
这是干啥用的呢?它就是把吸附在硅胶膜上的DNA给洗下来。
我就这么跟你说吧,要是没有洗脱缓冲液,咱们千辛万苦把DNA吸附上去了,结果却拿不下来,那不是白忙活了嘛!一般来说按照试剂盒的说明加就好,但是呢,我试过稍微改变一点洗脱缓冲液的量,好像也能得到不错的结果,当然啦,这只是我的一点小经验哈。
另外,试剂盒里肯定有硅胶膜啦。
这个硅胶膜就像是一个小小的“DNA捕捉器”。
DNA片段经过结合缓冲液的作用后,就乖乖地被吸附在这个硅胶膜上了。
不过要注意哦,在操作的时候千万别把硅胶膜弄破了,一旦破了,那整个回收过程可能就会出问题啦!这一步一定要小心谨慎呀!
有些胶回收试剂盒可能还含有一些特殊的试剂成分,虽然我不太清楚具体每一个都是干啥的,但是它们肯定都是为了让胶回收这个过程更加顺利而存在的。
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快速:整个操作过程快速方便,几十分钟即可完成回收工作。 多样:可以回收单链、双链 DNA 片段以及环状质粒 DNA。 高效:独特的离心柱和精心配制的缓冲液,保证最大量回收到高纯度的目的 DNA。
7. 为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,重复 步骤 6。
CA1 柱的洗脱体积不应少于 20 μl,CA2 柱的洗脱体积不应小于 30 μl 过小影响回收效率。 洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内 (可以用 NaOH 将水的 pH 值调到此范围),pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应 保存在-20℃,以防 DNA 降解。
注意事项:请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1. 电泳时最好使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。 2. 如下一步实验要求较高,则应尽量使用 TAE 电泳缓冲液。 3. 切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对 DNA 造成损伤。 4. 如果回收率较低,可在胶充分溶解后检测 pH 值,如 pH 值大于 7.5,可向含
DP208/209-03 (200 次) 2 x 100 ml 50 ml 30 ml
20 个
50 个
200 个
20 个 1份
50 个 1份
Байду номын сангаас
200 个 1份
储存条件:
本试剂盒在室温(15–25℃)干燥条件下,可保存 12 个月;更长时间的保存 可置于 2–8℃。(注意:当低温贮存时,使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放 置一段时间,必要时可在 37℃水浴中预热 10 分钟,以平衡溶液温度。)
操作步骤:
第一次使用前请先在 15 ml 漂洗液 PW 中加入 60 ml 无水乙醇! 所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1. 将单一的目的 DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)放入干净的 离心管中,称取重量。
2. 向胶块中加入 3 倍体积溶胶液 PN(如果凝胶重为 0.1 g,其体积可视为 100 µl, 则加入 300 µl 溶胶液),50℃水浴放置 10 分钟,其间不断温和地上下翻转离心 管,以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块,可再补加一些溶胶液或继续 放置几分钟,直至胶块完全溶解 (若胶块的体积过大,可事先将胶块切成碎块)。
TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD Order: 010-82629288 Technical: 010-62521767 62526072 Toll-free: 800-810-2177
超薄/普通 琼脂糖凝胶 DNA 回收试剂盒
(离心柱型) 目录号:DP208/209
4. 向吸附柱中加入 700 μl 漂洗液 PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇), 13,000 rpm 离心 30 秒,倒掉废液,将吸附柱重新放入收集管中。
5. 向吸附柱中加入 500 μl 漂洗液 PW,13,000 rpm 离心 30 秒,倒掉废液。将离 心吸附柱 CA1 或 CA2 放回收集管中,13,000 rpm 离心 2 分钟,尽量除去漂洗 液。将吸附柱置于室温或 50℃温箱数分钟,彻底地晾干,以防止残留的漂洗液 影响下一步的实验。
注意:如果漂洗液有残留会影响回收效率和 DNA 质量。
订货电话:010-82629288
6. 将吸附柱放到一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加适量 65–70℃ 水浴预热的洗脱缓冲液 EB,室温放置 2 分钟。13,000 rpm 离心 1 分钟收集 DNA 溶液。
产品简介:
本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统, 从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段,同时除去蛋白质、其它有机化合物、 无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。可回收100 bp–40 kb大小的片段,回收率大 于80%(<100 bp 和>10kb 的DNA片段回收率为30-50 %)。
注意:胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱,因为吸附柱在较高温度时结合 DNA 的能力较弱。
3. 将上一步所得溶液加入一个吸附柱 CA1 或 CA2 中(依所购买的试剂盒种类而定) (吸附柱放入收集管中),13,000 rpm 离心 30 秒,倒掉收集管中的废液,将吸 附柱重新放入收集管中。
本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。
试剂盒内容:
试剂盒组成
溶胶液 PN 漂洗液 PW 洗脱缓冲液 EB 吸附柱 CA1 (DP208 超薄型)
或 吸附柱 CA2 (DP209 普通型) 收集管(2 ml)
说明书
DP208/209-01 (20 次) 20 ml 15 ml 15 ml
DP208/209-02 (50 次) 50 ml 15 ml 15 ml
DNA 浓度及纯度检测
回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯 度。
DNA 应在 OD260 处有显著吸收峰,OD260 值为 1 相当于大约 50 μg/ml 双链 DNA、40 μg/ml 单链 DNA。
OD260/OD280 比值应为 1.7–1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离 子水,比值会偏低,因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。
有 DNA 的胶溶液中加 10–30 µl 3 M 醋酸钠(pH5.2)将 pH 值调到 5–7 之间。
5. 回收<100bp 及>10kb 的 DNA 片段时,应加大溶胶液的体积,延长吸附和洗
脱的时间。 6. 回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率
越低。
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