透明圈法筛选柚苷酶高产菌株

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几丁质脱乙酰酶的研究进展

几丁质脱乙酰酶的研究进展杨倩;刘建辉;蒋彤;董莉莉;段宏玉;孙纪录【摘要】Chitin deacetylase(CDA) is an enzyme which can catalyze deacetylase reaction in chitin generating chitosan. Chitosan has several excellent properties, such as antibacterial, anticancer, and antiviral, with wide application prospect in the medicine, chemical, and food industries. The research situation of CDA was re-viewed, including enzymatic properties, catalytic mechanism, the method of separation and purification, etc. Furthermore, the screening methods and process of CDA producing strains were briefly introduced, and the fu-ture research direction of CDA was prospected.%几丁质脱乙酰酶(chitin deacetylase,CDA)是可以催化几丁质脱乙酰基反应生成壳聚糖的酶类.壳聚糖因其具有抗菌、抗癌、抗病毒等特性,在医药、化工、食品等行业具有广阔的应用前景.对CDA的研究概况进行了综述,包括酶学性质、催化机理、分离纯化的方法等,同时对CDA产生菌的筛选方法及过程做了简要的阐述,并对CDA今后的重点研究方向进行了展望.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2017(038)010【总页数】4页(P200-203)【关键词】几丁质脱乙酰酶;几丁质;壳聚糖;脱乙酰【作者】杨倩;刘建辉;蒋彤;董莉莉;段宏玉;孙纪录【作者单位】河北农业大学理工学院,河北沧州061100;河北农业大学理工学院,河北沧州061100;河北农业大学理工学院,河北沧州061100;河北农业大学理工学院,河北沧州061100;河北农业大学理工学院,河北沧州061100;河北农业大学食品科技学院,河北保定071001【正文语种】中文几丁质又称甲壳素，是由N－乙酰－D－葡萄糖胺以β－1，4糖苷键连接而成的天然高分子多糖，在自然界中含量仅次于纤维素。

NTG诱变筛选高产柚苷酶抗药性突变株

１摇瓶发酵单位达７００／株７．６ＵｍＬ的３— ４一ＮＧ一１菌株，５Ｔ６号比出发菌株的产酶能力提高了近１０。０％
关键词：苷酶；药性致死突变；明圈柚抗透中图分类号：９６５Ｑ４．文献标识码：Ａ
Ｋｅｏｄｓ：ｎｒｎｉａｅ；ｈｍｉａｅｉｔｎｅｈｌｍｕａｉｎ；ｒｎｐｒｎｉｃｅｙｗｒａｉｇｎｓｃｅｃｌｒｓｓａｔｌｔａｔｔｏｔａｓａｅｔｃｒｌ
柚皮苷是柑桔类水果中的主要苦ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ味物质，柚苷酶能将其分解为柚配质（ａｉｅｉ）葡萄糖和鼠李Ｎｒｇｎｎ、ｎ糖，因而该酶可用于柑橘制品的脱苦。在这方面的应用国内外已有许多报道 ¨“ ，但在我国柚苷酶并没
文章编号：００２８（０７０ — ６００１ — ２６２０）４０７ — ５０
ＮＧ诱变筛选高产柚苷酶Ｔ抗药性突变株
陈玲，晓嵘，国全涂涂
（西农业大学生物科学与工程学院，西南昌３０４）江江３０５
ＳｒｅｉｇｏｅｉａｓｓａｔＭｕｎｔａｎｔｇｃｅｎｎｆＣｈｍｃｌＲｅｉｔｎａｔｔＳｒｉｓｗｉｈＨｉｈＮａｉｇｎｓ－ｐｏｕｉｇＣａａｉｙｂｅｎｆＮＴＣｎｕｔｏｒｎｉａｅ・ｒｄｃｎｐｃｔｙＭａｓｏ－Ｉｄｃｉｎ

微生物工程实验报告

实验1 培养基的配制和灭菌一、目的要求1.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。

2.了解几种灭菌方法，掌握高压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。

3.熟悉菌种分离筛选的前期准备工作及操作方法。

4.每2人一组，每人一份实验报告。

二、实验材料1.药品：酵母粉、蛋白胨、氯化钠、琼脂、葡萄糖、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O、1N HCl、1N NaOH2.设备：高压蒸汽灭菌锅、紫外线灭菌灯、75%酒精棉。

3.材料：天平、药匙、电炉、pH 试纸、烧杯、量筒、5mL、10mL 注射器、玻璃棒、试管、培养基、吸管、移液器（1mL 0.2mL）、牛皮纸、线绳、标签等。

三、实验内容(一) 培养基的配制1．培养基的配制方法和步骤1)称量：按照配方正确称取所需药品放于烧杯中。

2)溶化：在烧杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。

3)调pH 值：用1N NaOH 或1N HCl 调pH，用pH 试纸对照。

4)加琼脂溶化：加热过程要不断搅拌，可适当补水。

5)分装：注意不要污染试管塞或纱布。

6)包扎成捆：用记号笔注明何种培养基。

7)灭菌：在高压锅中， 115 °C 高温灭菌30min。

2．培养基的配制A.富集培养基（液体）：海水2216E 液体培养基（g/L）：蛋白胨5.0，酵母粉1.0，海水1L，pH 8.0。

取50mL 分装250mL 三角瓶后，8 层纱布封口，外包1层牛皮纸，121℃，高温灭菌20min。

B. 2216E 斜面（固体）：海水2216E 液体培养基中加入2%的琼脂粉，加热溶化琼脂，每支试管内。

加入3mL，121℃高温灭菌20min，灭菌后摆斜面。

C. 无菌生理盐水和保种液：生理盐水： NaCl 0.85% 蒸馏水配制。

每支试管加入5mL，盖上试管帽、包扎、121°C 高温灭菌20min。

保种液：生理盐水，加25%甘油D. 碳源优化培养基：以海水2216E 液体培养基（蛋白胨0.5%，酵母粉0.1%，磷酸铁0.01%，人工海水，pH7.6）为基础，碳源分别是：葡萄糖、蔗糖、甘油、柠檬酸钠、乳糖，每种碳源的添加量为1%。

黑曲霉菌发酵产柚苷酶培养基配方的优化研究

黑曲霉菌发酵产柚苷酶培养基配方的优化研究作者：张桃桃张萍石彦鹏牛春来源：《安徽农业科学》2021年第07期摘要 [目的]筛选出黑曲霉菌发酵产柚苷酶的最优培养基。

[方法]以沙氏琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基、察氏琼脂培养基作比较;选出最适黑曲霉菌生长的固体培养基，对固体培养基进行优化，得出最佳固体培养基;通过对发酵培养基不同碳源种类、氮源种类和无机盐的筛选和优化，确定黑曲霉生长和发酵的最适培养基，再通过正交试验确定黑曲霉固态发酵产柚苷酶最优培养基。

[结果]黑曲霉固态发酵产柚苷酶最优培养基组成为0.1%磷酸二氢钾，4%鼠李糖，1%葡萄糖，0.2%无水CaCl2，0.2%七水硫酸镁，0.1%硫酸铵，02%柚皮苷，2%豆粉。

优化后的培养基（618 U/g）比优化前的基础培养基（401 U/g）的酶活提高了54.1%。

[结论]该研究为后续进行菌种遗传改造与分子育种提供了原材料，并为大规模商业化生产奠定了良好的基础。

关键词黑曲霉;发酵培养基;单因素试验;正交试验中图分类号 TS201.3 文献标识码 A文章编号 0517-6611（2021）07-0170-04Abstract [Objective] To screen out the optimal medium for producing naringinase by Aspergillus niger fermentation.[Method] Sartre’s AGAR medium，potato glucose AGAR medium and Tsar AGAR medium were compared.The best solid medium for Aspergillus niger growth was selected and optimized to obtain the best solid medium.Through selection and optimization of different types of carbon source，nitrogen source and inorganic salts in the fermentation medium，to determine the optimal culture medium for growth and fermentation of Aspergillus niger，the optimum medium for producing naringinase by solid fermentation of Aspergillus niger was determined by orthogonal experiment.[Result]The optimal culture medium was： 0.1% potassium dihydrogen phosphate，4% sugar lee，1% glucose，0.2% anhydrous CaCl2，0.2% MgSO4 7H2O，0.1% ammonium sulfate，0.2% naringin，2% soybean meal.The enzyme activity of optimized medium （618 U/g） was 54.1% higher than the optimized base medium （401 U/g）.[Conclusion] It provided raw materials for genetic modification and molecular breeding，and laid a good foundation for largescale commercial production.Key words Aspergillus niger;Fermentation medium;Single factor test;Orthogonal test作者簡介张桃桃（1990—），女，宁夏银川人，助理工程师，从事生物制药研究。

柚苷酶选育方案

柚苷酶菌种选育方案一第一阶段：菌种的培养与选育一、培养产柚苷酶菌种培养基配方：低糖柚苷培养基（500ml)MgSO4 0.5%, ——2.5gK2HPO4 0.1% ——0.5g, KCL0.5%, ——2.5g蔗糖1%，——5.0gNaNO30.3%, ——1.5g柚苷0.5%，——2.5g琼脂1.5%。

——7.5gPH自然（来自西南农业大学柚苷酶生产菌的选育）。

实验仪器：烧杯(200ml 一个)，三角瓶（1000ml 一支），量筒（100ml），玻棒，容量瓶（500ml 一支）天平(0.1 和0.0001) ，药匙，高压蒸汽灭菌锅，磁力搅拌器,精密PH计，棉花，纱布，牛皮纸，标签纸，麻绳，皮筋。

配制培养基：1、按上述配方称量药品，置于烧杯中加少许水搅拌至全溶；2、将混合液倒入500ml的容量瓶中定容；3、将定容混合液倒入1000ml烧杯中，加入1.5% 琼脂(先溶），用磁力搅拌器加热搅拌融化;4、将融液分装到1000ml的三角瓶中，加塞，用牛皮纸包扎，灭菌锅灭菌（0.1MPa，121度，灭菌30min）；5、贴上标签，灭菌完后，冷却放入培养箱保存（待用）。

2，接种仪器及药品：柚苷酶，蒸馏水，无菌水，新制低糖柚苷培养基涂布器，培养皿(20个) ，称量纸，移液枪，移液枪盒，0.1和1.0的移液枪头， 1.5ml 离心管（10个），离心管盒，培养箱，超净台，电子天平（0.0001），高压灭菌锅，橡皮筋，旧报纸，。

菌种选育：1、用酒精擦拭天平外表面，之后放置在超净台过夜灭菌；2、将移液枪枪头放入移液枪枪盒，离心管放入离心管盒(离心管单独灭菌，称量纸，牛皮纸），并分别用旧报纸包好，同时也将培养皿，涂布器，烧杯，手套用旧报纸包装好，将50ml二次蒸馏水加入三角瓶中加塞包扎，分次用高压灭菌锅灭菌（0.1MPa，121度，灭菌30min），之后放入超净台灭菌半小时；3、取出柚苷酶在超净台中戴手套打开包装，用灭菌后的称量纸称量50mg酶粉末；4、取六只灭菌好的1.5ml离心管，编号（1——7），分别用移液枪加入0.9ml无菌水，（3、4步双人同时操作）；5、将粉末倒入1号离心管中，震荡充分溶解，用移液枪取出0.1ml溶液加入2号离心管中，震荡混匀，在3——7号进行同样操作，依次配备出10-1（2号管），10-2，10-3，10-4，10-5，10-6。

高产纤维素酶生产菌的筛选及诱变育种

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1.1.3 试剂 1mg/mL 葡萄糖标准液: 葡萄糖置于 110℃烘箱
中烘 2h 至恒重，称取 0.1g 烘好的葡萄糖，溶解并定容至 100mL。
0.01M 乙酸-乙酸钠缓冲溶液 (pH4.8):A 液：冰醋酸 6mL，蒸馏水定容至 1000mL，配制成 0.1M 醋酸溶液；B 液：称取 8.2g 醋酸钠，蒸馏水定容至 1000mL，配制成 0.1M 醋酸钠溶液；以 A：B=4：6 的比例混合，低温冷藏备用。
5g 固体曲湿料加 50mL 去离子水，30℃ 浸提 6min，纱布过滤，3000r/min 15min，上清液即为用于测定的固体曲酶液。 1.2.4.2 DNS 法测定波长的确定
取 0.5mL 葡萄糖标准液及 0.5mL 蒸馏水分别置于 25mL 试管中，再各加 2mL DNS 试剂，沸水浴加热 5min，流水冷却，蒸馏水定容至 25mL。将 DNS 试剂-水(空白)、葡萄糖显色液-DNS 试剂(空白)分别在波长 400nm～600nm 范围内进行扫描。 1.2.4.3 葡萄糖标准曲线的绘制
第 46 卷（总第 155 期）
Food and Fermentation Technology
第 46 卷（第 1 期） Vol.46，No.1
高产纤维素酶生产菌的筛选及诱变育种
方尚玲，杨丹丹，钱志伟，李小强，陈茂彬*
（发酵工程省部共建教育部重点实验室，湖北工业大学生物工程学院，湖北武汉 430068）
取 8 支洗净烘干的 25mL 比色管，编号后按表 1 加入标准葡萄糖溶液和蒸馏水，配制成一系列不同浓度的葡萄糖溶液。充分摇匀后，向各试管中加入 2mLDNS 溶液,沸水浴 5min，取出冷却后用蒸馏水定容至 25mL，充分混匀。在选定波长下，以 1 号试管溶液作为空白对照，测定其它各管溶液的 OD 值并记录结果。以葡萄糖含量（mg）为横坐标，以对应的 OD 值为纵坐标，绘制出葡萄糖标准曲线。 1.2.4.4 内切纤维素酶活[8](Cx，CMC 酶活)

透明圈法筛选菌种

透明圈法筛选菌种全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：透明圈法是一种用于筛选菌种的常用方法，通过该方法可以方便快速地筛选出具有特定特性的菌株。

在微生物学研究中，筛选菌种是非常重要的一环，只有选取到适合需求的菌株才能进行后续的实验和研究工作。

透明圈法能够帮助我们快速准确地找到需要的菌株，从而提高实验效率，促进科研工作的进展。

透明圈法是利用菌株对特定物质的代谢能力来筛选菌株的一种方法。

通常来说，我们可以通过改变培养基的成分来选择出具有某种代谢能力的菌株。

透明圈法的原理是根据菌株生长在含有特定物质的培养基上形成明显的透明圈，通过观察这些透明圈的大小和形状，可以初步判断菌株对特定物质的代谢能力。

在应用透明圈法筛选菌种时，首先需要准备含有特定物质的培养基。

以筛选产生某类酶的菌株为例，我们可以在培养基中添加某种底物，如淀粉、蛋白质等，然后将待检菌株点斑于培养基表面。

接着将培养皿放入恒温培养箱中进行培养，待菌株生长一段时间后，观察培养皿上出现的透明圈并进行记录。

透明圈法的优点在于简单易行，无需复杂的实验操作，只需要一些基本的实验仪器和耗材即可完成。

而且该方法结果直观，适合用于初步筛选菌株。

但是需要注意的是，在使用透明圈法筛选菌种时，需要结合其他实验方法来进行综合分析，以确保选出的菌株真正符合所需的要求。

除了透明圈法外，还有许多其他方法可以用于筛选菌种，如酶活性检测、遗传分析等。

每种方法都有其独特的优势和适用范围，我们可以根据具体的实验需求选择合适的筛选方法。

透明圈法是一种简单有效的筛选菌种方法，可以帮助我们快速准确地找到需要的菌株，为后续的研究工作奠定良好的基础。

【2000字】第二篇示例：透明圈法筛选菌种是一种常用的微生物筛选方法，通过观察菌落周围的透明圈形成情况来判断细菌产生的酶的类型和活性。

透明圈是由于细菌分泌的特定酶作用于培养基中的某些物质，使其在菌落周围产生透明带。

这种方法简单易行，可快速筛选出产酶菌株，对于微生物学研究和应用具有重要意义。

工业微生物育种复习题解析

工业微生物育种复习题解析第一章绪论1.什么是工业微生物？作为工业微生物应具备哪些特征？答：工业微生物：对自然环境中的微生物经过改造，用于发酵工业生产的微生物。

具备特征：(1)菌种要纯(2)遗传稳定且对诱变剂敏感(3)成长快，易繁殖(4)抗杂菌和噬菌体的能力强(5)生产目的产物的时间短且产量高(6)目的产物易分离提纯2.工业微生物育种的基础是什么？答：工业微生物育种的基础是遗传和变异。

3.常用的工业微生物育种技术有哪些？答：常用技术：(1)自然选育【选择育种】(2)诱变育种(3)代谢控制育种(4)杂交育种(5)基因工程育种第二章微生物育种的遗传基础1.基因突变的类型有哪些？答：有碱基突变，染色体畸变2.叙述紫外线诱变的原理？答：原理：紫外线对微生物诱变作用，主要引起DNA的分子结构发生改变（同链DNA的相邻嘧啶间形成共价结合的胸腺嘧啶二聚体），从而引起菌体遗传性变异。

3.基因修复的种类有哪些？答：种类：(1)光复活修复(2)切除修复(3)重组修复(4)SOS修复4.真核微生物基因重组的方式有哪些？答：方式：(1)有性杂交(2)准性生殖(3)原生质体融合第三章出发菌株的分离与筛选1.什么是富集培养？答：富集培养：指在目的微生物含量较少时，根据微生物的生理特点，设计一种选择性培养基，创造有利的生长条件，使目的微生物在最适的环境下迅速地生长繁殖，数量增加，由原来自然条件下的劣势种变成人工环境中的优势种，以利于分离到所需要的菌株。

2.哪些分离方法能达到“菌落纯”？哪些分离方法能达到“细胞纯（菌株纯）”？答：菌落纯：稀释分离法、划线法、组织法细胞纯：单细胞或单孢子的分离法3.分离好氧微生物常用的方法有哪些？答：(1)稀释涂布法(2)划线分离法(3)平皿生化反应分离法4.平皿生化反应分离法有哪些？分别用来筛选哪些菌？各自原理如何？答：(1)透明圈法原理：在平板培养基中加入溶解性较差的底物，使培养基混浊，能分解底物的微生物便会在菌落周围产生透明圈，圈的大小可以放映该菌株利用底物的能力。

菌种筛选方法

菌种筛选方法在实际工作中,为了提高筛选效率,往往将筛选工作分为初筛和复筛两步进行;初筛的目的是删去明确不符合要求的大部分菌株,把生产性状类似的菌株尽量保留下来,使优良菌种不致于漏网;因此,初筛工作以量为主,测定的精确性还在其次;初筛的手段应尽可能快速、简单;复筛的目的是确认符合生产要求的菌株,所以,复筛步骤以质为主,应精确测定每个菌株的生产指标,测得的数据要能够反映将来的生产水平;1 从菌体形态变异分析有时,有些菌体的形态变异与产量的变异存在着一定的相关性,这就能很容易地将变异菌株筛选出来;尽管相当多的突变菌株并不存在这种相关性,但是在筛选工作中应尽可能捕捉、利用这些直接的形态特征性变化;当然,这种鉴别方法只能用于初筛;有人曾统计过3,484个产维生素B2的阿舒假囊酵母E remothecium ashbyii的变异菌落,发现高产菌株的菌落形态有以下特点：菌落直径呈中等大小8-10毫米,凡过大或过小者均为低产菌株；色泽深黄色,凡浅黄或白色者皆属低产菌株;又如,在灰黄霉素产生菌荨麻青霉Penicillium urticae的育种中,曾发现菌落的棕红色变深者往往产量有所提高,而在赤霉素生产菌藤仓赤霉Gibber ella fujikuroi中,却发现菌落的紫色加深者产量反而下降;1 纸片培养显色法将饱浸含某种指示剂的固体培养基的滤纸片搁于培养皿中,用牛津杯架空,下放小团浸有3%甘油的脱脂棉以保湿,将待筛选的菌悬液稀释后接种到滤纸上,保温培养形成分散的单菌落,菌落周围将会产生对应的颜色变化;从指示剂变色圈与菌落直径之比可以了解菌株的相对产量性状;指示剂可以是酸碱指示剂也可以是能与特定产物反应产生颜色的化合物;2 变色圈法将指示剂直接掺入固体培养基中,进行待筛选菌悬液的单菌落培养,或喷洒在已培养成分散单菌落的固体培养基表面,在菌落周围形成变色圈;如在含淀粉的平皿中涂布一定浓度的产淀粉酶菌株的菌悬液,使其呈单菌落,然后喷上稀碘液,发生显色反应;变色圈越大,说明菌落产酶的能力越强;而从变色圈的颜色又可粗略判断水解产物的情况;3 透明圈法在固体培养基中渗入溶解性差、可被特定菌利用的营养成分,造成浑浊、不透明的培养基背景;将待筛选在菌落周围就会形成透明圈,透明圈的大小反映了菌落利用此物质的能力; 在培养基中掺入可溶性淀粉、酪素或CaCO3可以分别用于检测菌株产淀粉酶、产蛋白酶或产酸能力的大小;4 生长圈法利用一些有特别营养要求的微生物作为工具菌,若待分离的菌在缺乏上述营养物的条件下,能合成该营养物,或能分泌酶将该营养物的前体转化成营养物,那么,在这些菌的周围就会有工具菌生长,形成环绕菌落生长的生长圈; 该法常用来选育氨基酸、核苷酸和维生素的生产菌;工具菌往往都是对应的营养缺陷型菌株;3 摇瓶培养法摇瓶培养法是将待测菌株的单菌落分别接种到三角瓶培养液中,振荡培养,然后,再对培养液进行分析测定;摇瓶与发酵罐的条件较为接近,所测得的数据就更有实际意义;但是摇瓶培养法需要较多的劳力、设备和时间,所以,摇瓶培养法常用于复筛;但若某些突变性状无法用简便的形态观察或平皿快速检测法等方法检测时,摇瓶培养法也可用于初筛; 初筛的摇瓶培养一般是一个菌株只做一次发酵测定,从大量菌株中选出10-20%较好的菌株,淘汰80-90%的菌株；而复筛中摇瓶培养一般是一个菌株培养3瓶,选出3-5个较好的菌株,再做进一步比较,选出最佳的菌株;4 特殊变异菌的筛选方法上述一般的筛选菌株方法的处理量仍是很大的,为了从存活的每毫升106左右细胞的菌悬液中筛选出几株高产菌株,要进行大量的稀释分离、摇瓶和测定工作;虽然平皿快速检测法作为初筛手段可减少摇瓶和测定的工作量,但稀释分离的工作仍然非常繁重;而且有些高产变异的频率很低,在几百个单细胞中并不一定能筛选到,所以,建立特殊的筛选方法是极其重要的;例如营养缺陷型和抗性突变菌株的筛选有它们的特殊性,营养缺陷型或抗性突变的性状就象一个高效分离的"筛子",以它为筛选的条件,可以大大加快筛选的进程并有效地防止漏筛;在现代的育种中,常有意以它们作为遗传标记选择亲本或在DNA中设置含这些遗传标记的片段,使菌种筛选工作更具方向性和预见性;本节还将简单介绍其它一些特殊变异株的筛选方法;营养缺陷型突变株的筛选经诱变处理后的菌悬液在筛选前一般应先进行诱变后培养,以促使变异细胞发生分离,防止出现表型延迟现象,筛选出不纯的菌株;营养缺陷型的筛选一般包括浓缩、进一步检出和鉴别营养缺陷型等步骤;1 浓缩营养缺陷型菌株诱变后的细胞群体中大部分存活菌是野生型,而营养缺陷型占的比例相当小,这对分离是很不利的,所以,应该淘汰大量的野生型,以达到浓缩营养缺陷型的目的;常用的浓缩方法有抗生素法、菌丝过滤法、差别杀菌法和饥饿法等;2进一步检出所需缺陷型浓缩后的菌液中营养缺陷型的比例较大,但并非全部都是;并且营养缺陷型中也有不同的类型,还需要进一步检出所需要的营养缺陷型;这样就需要采用逐个检出法、夹层培养法和限量补给法等方法进一步检出所需要的营养缺陷型;3营养缺陷型的鉴定获得的营养缺陷型菌株还应进一步确认其生长的所需物;菌株较少时,可用生长谱法, 若菌株较多时,常采用组合补充培养基法抗性突变菌株的筛选抗性突变株的筛选相对比较容易,只要有10-6频率的突变体存在,就容易筛选出来;抗性突变株的筛选常用的有一次性筛选法和阶梯性筛选法两种手段;1 一次性筛选法一次性筛选法就是指在对出发菌株完全致死的环境中,一次性筛选出少量抗性变异株; 噬菌体抗性菌株常用此方法筛选;将对噬菌体敏感的出发菌株经变异处理后的菌悬液大量接入含有噬菌体的培养液中,为了保证敏感菌不能存活,可使噬菌体数大于菌体细胞数;此时出发菌株全部死亡,只有变异产生的抗噬菌体突变株能在这样的环境中不被裂解而继续生长繁殖;通过平板分离即可得到纯的抗性变异株; 耐高温菌株在工业发酵中的应用意义在于它可以节约冷却水的用量,尤其是在夏季,并能减少染菌的机会;耐高温菌株所产生酶的热稳定性较高,适用于一些特殊的工艺过程;耐高温菌株也常采用此法筛选;将处理过的菌悬液在一定高温下处理一段时间后再分离;对此温度敏感的细胞被大量杀死,残存的细胞则对高温有较好的耐受性; 耐高浓度酒精的酵母菌的酒精发酵能力较高,也适宜提高发酵醪浓度,提高醪液酒精浓度;而耐高渗透压的酵母菌株具有积累甘油的性能,可用于甘油发酵;耐高酒精度、高渗透压的菌株也可分别在高浓度酒精或加蔗糖等造成的高渗环境下一次性筛选获得;2阶梯性筛选法药物抗性即抗药性突变株可在培养基中加入一定量的药物或对菌体生长有抑制作用的代谢物结构类似物来一次性筛选,大量细胞中少数抗性菌在这种培养基平板上能长出菌落;但是在相当多的情况下,无法知道微生物究竟能耐受多少高浓度的药物,这时,药物抗性突变株的筛选需要应用阶梯性筛选法; 因为药物抗性常受多位点基因的控制,所以药物的抗性变异也是逐步发展的,时间上是渐进的,先是可以抗较低浓度的药物,而对高浓度药物敏感,经"驯化"或诱变处理后,可能成为抗较高浓度药物的突变株;阶梯筛选法由梯度平板或纸片扩散在培养皿的空间中造成药物的浓度梯度,可以筛选到耐药浓度不等的抗性变异菌株,使暂时耐药性不高,但有发展前途的菌株不致于被遗漏,所以说,阶梯性筛选法较适合于药物抗性菌株的筛选,特别是在暂时无法确定微生物可以接受的药物浓度情况下组成酶变异株的筛选许多水解酶是诱导酶,只有在含有底物或底物类似物的培养环境中,微生物才会合成这些酶类,所以,诱导酶的生产不仅需要诱导物,而且受到诱导物的种类、数量以及分解产物的影响;能迅速利用的碳源如葡萄糖往往会引起酶合成的减少,诱导物有时又比较昂贵;这些都可能造成这些水解酶工业生产的波动以及生产成本提高;如果控制这些酶合成的调节基因发生了变异,诱导酶就可能转变成组成酶,它的合成与细胞的其它组织蛋白一样,不再需要诱导物的存在;由诱导型的出发菌株诱变筛选出组成型变异株对于水解酶的工业生产具有重要的现实意义;具体的筛选方法有恒化器法、循环培养法和诱导抑制物法;1 恒化器法恒化器常被用于微生物的"驯化";在培养基中添加不能起诱导作用的低浓度底物,接入处理后的菌悬液进行培养,此时出发菌株由于不能被诱导,无法合成有关的诱导酶而不能分解该底物,从而生长速率极慢,而群体中少数组成型变异株则可合成有关的酶,分解利用该底物,生长速率较快;为了提高组成酶变异株的优势,即它在群体中的比例,可以应用恒化器培养技术;随着恒化器培养中不断加入新鲜基质而逐渐增大组成酶变异株的优势,这样就能够比较容易地做进一步的纯化分离;2 循环培养法利用不含诱导物的培养环境和含有诱导物的培养环境进行交替循环培养待分离的菌悬液,从而使组成酶变异株得到富集;当接种到不含诱导物而含有其它可利用碳源的培养基中时,两种类型菌株同样能较好地生长,但在此环境中组成型突变株已能合成有关的水解酶,而诱导型菌株就不能合成; 进而将它们转接入含诱导物的培养基中时,变异株能迅速利用诱导底物进行生长繁殖,而诱导型出发菌株需经历一个诱导合成酶的阶段,两类菌株的生长就不同步了,随着循环交替培养的继续,组成酶变异株所占的比例将逐渐增大;3 诱导抑制剂法有些化合物能阻止某些诱导酶的合成,如α-硝基苯基-β-岩藻糖苷对大肠杆菌的β-半乳糖苷酶的诱导合成有抑制作用,称为诱导抑制剂;当在诱导物和诱导抑制剂同时存在的培养环境中培养待分离菌群时,诱导型菌株不能产生诱导酶,无法正常生长,只有组成型变异株能够利用底物进行生长繁殖;高分子废弃物分解菌的筛选随着石油化工和塑料工业的发展,各种高分子包装废弃物日益增多,这些"白色污染"在自然界很难被消化而进入物质循环;设法选育能分解利用这些高分子材料的微生物对于环境保护至关重要;这些高分子材料大多是不溶于水的,直接分离具有分解功能的微生物很困难;为此,有人设计了阶段式筛选法,首先寻找能在与聚乙二醇结构相似的含两个醚键的三甘醇上生长的微生物,接着,诱变筛选能分解聚乙二醇的变异株；或者筛选能以乙二醇、丙二醇为碳源的菌株,继而诱变筛选出能利用聚乙二醇等物质的变异株;这种由简单的聚合物单体入手逐级筛选高分子废弃物分解菌也许是一条有效的筛选思路;无泡沫菌株及高凝聚性菌株的筛选有些菌在发酵过程中会产生大量的泡沫,从而造成发酵液满溢,增大了染菌的机会,使发酵体系反应不均匀,也有可能引起某些发酵产物的生物活性丧失,如蛋白酶变性失活;为了避免泡沫的产生,常常需通过牺牲发酵液的装量或加入大量的消泡剂来消除泡沫的不利影响;发酵过程产生泡沫是菌体代谢、培养基和发酵工艺等方面的原因造成的,而菌种是产生泡沫的关键,选育无泡沫或少泡沫菌株可以从根本上解决泡沫问题; 有人用气泡上浮法筛选出了无泡沫的酒精酵母;将变异处理后的菌悬液接种入生长培养基中,培养器皿的底部放置无菌压缩空气喷口,培养过程中不断通入无菌空气,形成鼓泡,易产生泡沫的酵母菌会随泡沫而除去,留下的是不易产生泡沫的变异菌株；也有人用苯胺蓝染色法进行筛选,将经过变异处理的菌悬液经培养后涂布在含葡萄糖3%、酵母膏%、苯胺蓝%的平板上培养4天,出发菌株呈浅蓝色,变异菌株因细胞壁成分和结构改变造成与染料结合力改变,少泡沫的变异菌株呈深蓝色; 啤酒发酵和单细胞蛋白培养都希望由凝聚性较好的酵母菌株担任发酵菌种,以便于啤酒的澄清和保持良好的风味,以及单细胞蛋白的收集;采用上述的泡沫上浮法也可以除去不易凝聚的细胞,通过改变鼓泡速度的调节,可以获得具不同凝聚性的菌株;。

一种降解柚皮苷的菌种及方法[发明专利]

(10)申请公布号(43)申请公布日 (21)申请号 201510520364.7(22)申请日 2015.08.18CGMCC No.6472 2012.09.18C12N 1/20(2006.01)A23L 1/015(2006.01)C12R 1/01(2006.01)(71)申请人方柏山地址361005 福建省厦门市碧山路128鹭江海景2期801室(72)发明人方柏山(54)发明名称一种降解柚皮苷的菌种及方法(57)摘要本发明涉及一种降解柚皮苷的菌种及方法，提供一种能够降解柚皮苷的菌种叶杆菌Wb51b(Phyllobacterium sp.)。

在一定条件下，以2g/L 的柚皮苷为唯一碳源培养菌种72h，菌体浓度达0.45g/L，柚皮苷含量降为0.0037g/L，几乎被完全降解。

直接用游离细胞降解0.6g/L 的柚皮苷，反应时间30min，柚皮苷的含量降为0.1g/L，降解率达83.3％；用固定化细胞降解1.2g/L 柚皮苷，反应时间60min，柚皮苷的含量降为0.076g/L，降解率达93.7％。

该菌种能够高效降解柚皮苷，对营养要求简单、易培养；此外，该菌种无致病性，可直接应用于食品工业。

(83)生物保藏信息(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页说明书4页序列表2页CN 105238707 A 2016.01.13C N 105238707A1.一种降解柚皮苷的菌种，所述菌种为叶杆菌(Phyllobacterium sp.)Wb51b，已于2012年9月18日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，该保藏中心登记入册编号为保藏号为CGMCC No.6472。

2.一种降解柚皮苷的方法，其特征在于，将叶杆菌(Phyllobacterium sp.)接种入含有柚皮苷的培养基，在初始pH值为3.5～8.5的条件下进行培养，并使用所培养的游离细胞、进行固定化后的细胞或其混合形态，来降解柚皮苷。

一种高产蛋白酶霉菌菌株的快速筛选方法

一种高产蛋白酶霉菌菌株的快速筛选方法高产蛋白酶霉菌菌株的快速筛选方法可以采用以下步骤：
1. 采集不同环境样品，如土壤、水体、植物等，制备样品悬浮液。

2. 将样品悬浮液分别接种到含有蛋白质的琼脂平板上，培养24-48小时。

3. 观察菌落形态和周围透明圈的大小，筛选出产生蛋白酶的菌株。

4. 对筛选出的菌株进行初步鉴定，如形态学观察、生理生化特性检测等。

5. 通过测定菌株在不同培养条件下的蛋白酶产量，筛选出高产蛋白酶的菌株。

6. 对高产蛋白酶的菌株进行进一步鉴定和优化培养条件，以提高蛋白酶产量和质量。

该方法简单易行，可快速筛选出高产蛋白酶霉菌菌株，适用于大规模筛选和优化培养条件。

果胶酶生产菌株的筛选过程

果胶酶生产菌株的筛选过程
果胶酶是一种水解果胶的酶，广泛应用于饮料、果汁、果酱等果蔬加工行业，因此具
有广阔的市场前景。

果胶酶的生产需要先筛选出高效的产酶菌株，这是整个生产链中的重
要环节之一。

本文将介绍果胶酶生产菌株的筛选过程。

一、菌株筛选的目的
菌株筛选的目的是选择能够高效稳定产生果胶酶的菌株，并进行进一步的优化。

其中，首先对原料的化学成分进行分析，确定产酶菌株种类；然后利用生物学方法进行初步筛选，筛选出具有较高产酶活力的菌株；最后通过构建适合产酶环境的基因工程菌株，提高果胶
酶产量及质量。

二、原料分析
果胶酶生产的原材料主要是果胶。

在根据应用对象的要求确定产酶菌株种类前，需要
对果胶的化学成分进行分析。

化学成分分析涉及果胶的多种指标，如果胶的含量、分子量、分枝度等。

三、生物学初筛
四、构建基因工程菌株
生物学初筛之后，还需要进一步构建基因工程菌株，进一步提高产酶能力。

通常采用
两种策略：一是通过原位突变构建高酶力突变菌株；二是将产酶基因转化到优良的生产菌
株中，形成高产酶菌株。

这两种策略的原理是一样的，都是通过改变产酶基因的表达水平，实现在原生菌株中快速构建高效产酶菌株的目的。

以上就是果胶酶生产菌株的筛选过程的详细介绍。

通过该过程的步骤，可以产生高效、稳定、可持续产酶的菌株，促进果胶酶的产业化发展。

一株产柚苷酶菌株黑曲霉的分离及菌种鉴定的初步研究

一株产柚苷酶菌株黑曲霉的分离及菌种鉴定的初步研究赖崇德;蔡华静;夏海林;施孝活;刘金国;涂国全【期刊名称】《江西农业大学学报》【年(卷),期】2005(027)005【摘要】设计试验了一种新的柚苷酶产生菌的选育模型,以橘皮粉为唯一的碳和氮源,通过富集培养的方式从腐烂的橘皮上筛选出一株高产柚苷酶生产菌株A166.对该菌株进行摇瓶发酵测定酶活力达到955.6 U/mL.通过对该菌株的形态特征、培养特征的观察,对照<真菌鉴定手册>初步判定该菌株为黑曲霉(Aspergillus nigeer).并对该菌株所产柚苷酶对柑桔类果汁进行了一定的脱苦性实验.【总页数】5页(P759-763)【作者】赖崇德;蔡华静;夏海林;施孝活;刘金国;涂国全【作者单位】江西农业大学,生物工程系,江西,南昌,330045;江西农业大学,生物工程系,江西,南昌,330045;江西农业大学,生物工程系,江西,南昌,330045;江西农业大学,生物工程系,江西,南昌,330045;江西农业大学,生物工程系,江西,南昌,330045;江西农业大学,生物工程系,江西,南昌,330045【正文语种】中文【中图分类】Q556+.2【相关文献】1.不同温度、pH和无机离子对黑曲霉A66菌株产柚苷酶活力影响的初步研究 [J], 张璟晶;袁敏;管远红;涂国全2.一株产β-葡萄糖苷酶黑曲霉菌株的分离筛选 [J], 刘德海;解复红;贾彬;权淑静;马焕;刘金刚3.黑曲霉TC-01产柚苷酶分离纯化及其降解内毒素研究初探 [J], 邓媛;毛勇;杨国武;李飞;李皎;张美丽;王燕4.一株高产碱性果胶酶菌株的分离、产酶条件的优化和酶液的初步分离提纯 [J], 牛永梅5.产柚苷酶菌株B04的分离及产酶特性研究 [J], 张晨;刘志伟;郑彦彤;蔡植松因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

【CN109825495A】一种高通量筛选红曲色素高产菌株的方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910156087.4(22)申请日 2019.03.01(71)申请人江南大学地址 214000 江苏省无锡市蠡湖大道1800号(72)发明人刘松　黎青华　堵国成　李江华　(74)专利代理机构哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211代理人林娟(51)Int.Cl.C12N 15/01(2006.01)C12N 13/00(2006.01)C12R 1/645(2006.01)(54)发明名称一种高通量筛选红曲色素高产菌株的方法(57)摘要本发明公开了一种高通量筛选红曲色素高产菌株的方法，属于高通量筛选技术领域。

本发明利用固态发酵的方式表征液态发酵色素产量的高低，成功解决了孔板液态发酵溶氧偏低，菌丝发酵时容易长成球状而导致色价极低甚至发酵失败的问题。

结合ARTP诱变技术、流式细胞仪高效分选技术，成功实现了高产红曲色素红曲霉的高通量快速筛选，且摇瓶验证效果极佳，且极大地节省了人力、物力，提高了筛选效率，为红曲霉菌的高通量筛选提供了一种有效的方法。

权利要求书1页说明书5页附图2页CN 109825495 A 2019.05.31C N 109825495A权　利　要　求　书1/1页CN 109825495 A1.一种快速筛选高产红曲色素红曲霉菌株的方法，其特征在于，应用高通量筛选技术进行筛选，所述筛选包括如下步骤：(1)获得红曲霉的多个含死孢子在内的待筛选的孢子；(2)利用PI染料和FDA染料对待筛选的孢子悬液进行染色；(3)上流式细胞仪检测孢子活性并分选有活性的单孢子至装有固体发酵培养基的高通量孔板中；(4)将高通量孔板进行固体发酵培养；(5)向高通量孔板里直接添加体积分数为70％-75％的酒精，震荡浸提25-30min，离心后取上清，在合适的浓度下用酶标仪测定505nm下的吸光值OD，比较红曲色素积累的相对高低；(6)选取上一步得到的相对高产的菌株多株进行复筛。

产柚苷酶高产菌株的筛选

产柚苷酶高产菌株的筛选刘艺文;刘素纯【摘要】以橘皮粉为培养基质,对堆积腐烂的柑橘表皮采用稀释平板法和透明圈法筛选出一株柚苷酶生产菌株D7.通过菌落和形态特征观察初步鉴定为黑曲霉.对该菌株进行摇瓶发酵测其酶水平达到291.41U.该菌株具有较强的降解柚皮苷能力,在食品加工业中具有广阔的市场前景和应用价值.%Taking orange peel powder as culture medium,the accumulation of rotten orange skin was screened by dilution plate method and transparent circle screening,and a strain of naringinase production strain D7 was gotlen.The morphology was identified as Aspergillus niger.By shake flask fermentation the enzyme level reached 291.41 U on the strain.The strains with strong degradation of naringin ability,has a broad market prospect and application in food industry.【期刊名称】《食品与机械》【年(卷),期】2013(029)003【总页数】4页(P55-57,78)【关键词】柚苷酶;黑曲霉;橘皮粉;发酵;苦味【作者】刘艺文;刘素纯【作者单位】湖南农业大学食品科学技术学院,湖南长沙410128;湖南农业大学食品科学技术学院,湖南长沙410128【正文语种】中文中国是世界柑橘四大原产地之一，年产量约为1 500万t，居世界第三。

柑橘经深加工后会出现明显的苦味，难以去除。

产柚苷酶高产菌株的筛选、鉴定及产酶特性研究的开题报告

产柚苷酶高产菌株的筛选、鉴定及产酶特性研究的开题报告一、研究背景与意义柚叶素是一种来自柚子中的苄基化的二苯基丙烷类化合物，具有抗肿瘤、抗氧化、减肥、降血糖等多种药理活性。

其主要形式为柚叶素苷（naringin），是一种黄酮丙糖苷，可在体内通过酯酶水解为柚叶素。

因此，柚叶素苷是柚子中的生物前体，具有重要的发展前景。

目前，柚叶素主要从柚子中提取分离，但其收率较低且分离过程较复杂。

利用微生物发酵生产柚叶素苷是一种新的生产方式，具有生产成本低、规模化生产能力强等优点，因此备受关注。

柚叶素苷在体内通过酯酶水解为柚叶素，因此酶解柚叶素苷的酶——柚苷酶是柚叶素苷生产的关键酶。

因此，如何高效地筛选和鉴定柚苷酶高产菌株，以及对该酶的产酶特性进行研究，对柚叶素苷的生产具有重要的意义。

二、研究目的本研究旨在通过筛选、鉴定和产酶特性研究，寻找高柚苷酶产生的菌株，并对该酶的产酶特性进行探究，为柚叶素苷生产提供基础研究支持。

三、研究内容与方法1. 筛选高产柚苷酶菌株。

从自然界和土壤样品中，通过培养基筛选出菌株，利用酶促法快速鉴定柚苷酶高产菌株。

2. 鉴定柚苷酶高产菌株。

对筛选出的柚苷酶高产菌株进行16S rDNA序列分析，确定其属于的种或亚种。

3. 产酶特性研究。

利用该菌株发酵生产柚苷酶，并对该酶的反应条件、酶促性质、稳定性等多个产酶特性进行研究。

四、研究预期成果本研究预期可筛选出柚苷酶高产菌株，并对该菌株的产酶特性进行研究，从而为柚叶素苷的生产提供基础研究支持。

【2019年整理】紫外线诱变育种

紫外线诱变选育α-淀粉高产菌株一、实验目的1.学习菌种的物理因素诱变育种基本技术。

2.通过诱变技术筛选出高产ɑ-淀粉酶的菌株。

二、实验原理紫外线是一种最常用有效的物理诱变因素，其诱变效应主要是由于它引起DNA结构的改变而形成突变型。

紫外线诱变，一般采用15W或30W紫外线灯，照射距离为20-30cm，照射时间依菌种而异，一般为1-3min，死亡率控制在50％-80％为宜。

被照射处理的细胞，必须呈均匀分散的单细胞悬浮液状态，以利于均匀接触诱变剂，并可减少不纯种的出现。

同时，对于细菌细胞的生理状态则要求培养至对数期为最好。

本实验以紫外线处理产淀粉酶的枯草杆菌，通过透明圈法初筛，选择淀粉酶活力高的生产菌株。

三、实验材料1.菌种产淀粉酶枯草芽孢杆菌2.器材装有15W或30W紫外灯的超净工作台、电磁力搅拌器（含转子）、低速离心机、培养皿、涂布器、10m L离心管、（1、5、10m L）吸管、250m L三角瓶、恒温摇床、培养箱、直尺、棉签、橡皮手套、洗耳球3.培养基和试剂①无菌水、75%酒精②0.5％碘液碘片1g、碘化钾2g、蒸馏水200m L，先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘片全部溶解后，加足水即可。

③选择培养基可溶性淀粉2g，牛肉膏1g，N a C l0.5g，琼脂2g，蒸馏水100m L，p H6.8～7.0，121℃灭菌20m i n。

④肉汤培养基牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，N a C l0.5g，蒸馏水100m L，p H7.2～7.4，121℃灭菌20m i n。

四、实验步骤1.菌体培养取枯草芽孢杆菌一环接种于盛有20m L肉汤培养基的250m L三角瓶中，于37℃振荡培养12h，即为对数期的菌种。

2.菌悬液的制备取5m L发酵液于10m L离心管中，以3000r/m i n离心10m i n，弃去上清液。

加入无菌水9m L，振荡洗涤，离心10m i n，弃去上清液。

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Ｋｅｒｓ：ｒｎｉａｅ，ｒｓｒｎｒｌｙｗｏｄＮａｉｇｎｓＴａｐａｅｔＣｉｃｅｎ
Ｏ前言
柑桔类水果是世界上最主要的亚热带水果之
一
广泛应用，主要原因是柚苷酶工业化生产中尚其
缺乏适合的高产酶菌株，因此高产菌株的筛选是当务之急。开展新的筛选方法、型研究工Ｊ模作，高效地从成千上万的诱变后代中选出优秀突变株十分重要。本文依据柚苷酶酶活测定原理，利用ＤＳ在碱性条件下与培养基中未分解的底Ｅ
物柚皮苷发生黄色显色反应，究设计出一种较研
，
在我国柑桔资源丰富，产量巨大，其果实中含
多种营养成份，丰富的葡萄糖、有果糖等，含有还
一
定量的硫胺素、黄素、核生物类黄酮、胡罗卜类
素等生理活性物质。因此开展柑桔加工和综合利
用很有必要。柑桔加工过程中会出现明显苦Ｊ味，其中柚皮苷是苦味的主要成分。由于柚苷酶
能分解柚皮苷得柚配质（ａｉｇｎ）葡萄糖和Ｎｒｅｉ、ｎｎ
高层试管法更易观察的柚苷酶生产菌初筛方法。
维普资讯
第２卷第１５期
２００７年２月
江
西
科
学
Ｖｏ．５Ｎｏ１２．１Ｆｅ２７ｂ．００
ＪＡＮＧＳＩＮＣＩＸＩＣＥＥ
文章编号：０１６９２０）１— ０７一ｏ１０ —３７（０７００２３
ＡｅｈｏｆＴｒｎｐａｅｔＣｉｃｅＭｔｄｏａｓｒｎｒｌ
ＣＨＥＮｎＴＵｏｑｎＬｉｇ．Ｇｕ — ｕａ
（ｅａｔｅｔｆｉｎｎｅｉｇＪｎｘＡｒｕｕａＵｉｒｉ，ａｇｉａｃａｇ３０５ＰＣＤｐｒｎｏ￣ｅｒ，ｉｇｉｇｉｌｒｌｎｅｓｙＪｎｘＮｎｈｎ０４Ｒ）ｍｏＢｅｎａｃｔｖｔｉ３
ＡｂｓｒｔＡｒｎｓｒｎｉｃｅｍｏｌｆｒｅｆｃｅｔｓｒｅｉｇｎｆｎｉａｅ— ｒｄｃｎｔａｎｓｄｅ・ｔａｃ：ｔａｐａｅｔｃｒｌｄｅｏｆｉｉｎｃｅｎｎａｇｎｓ —ｐｏｕｉｇｓｉｓｗａ－ｉｒｓｇｅｎｅｔｄＴｈｅｕｔｈｏｄｔａｎ１ｅｓｒｅｔａｎｆｏａｏａｏｙ，ｔａｎ，ｄｓｇｉｎｄａｄｔｓｅ．ｅｒｓｌｓｓｗｅｈｔｉ０ｐｒｅｖｄｓｉｓｏｕｒｌｂｒｔｒａｓｒｉｒｅｉ— ｎａｅｐ３，ｐｅｒｄｔｅｇｅｔｓｎｙｉｌｗｉｒｎｉａｅａｔｖｔｆ２９ｔｄＡｓ．ａｐａｅｈｒａｅｔｅｚｍｅｙｅｄ，ｔａｎａｉｇｎｓｃｉｉｙｏ５１．３Ｕ／ｍＬｉｉ — ｈｎｌｑｕｉｄｕｄｍｅｉｍ．ＢｙｓｌｃｉｇＡｓ．Ａｓ３ —５ｓｂｅｗｈｉｈｅｈｂｔｄａｎａｉｉａｅ—ｐｏｕｃｎｅｅｔｎｐ３，ｐ．４ｗａｒｄ，ｃｘｉｉｅｒｎｇｎｓｒｄｉｇｃｐｂｉｔｆ３５．Ｕ／ｍＬｉｉｕｉｄｕａａｌｙｏ８２１ｉｎｌｑｄｍｅｉｍ．
透明圈法筛选柚苷酶高产菌株
陈玲，国全涂
（江西农业大学生物工程系，江西南昌３０４）３０５摘要：在前人的研究基础之上，初步研究设计和实验了一种改良的柚苷酶平板透明圈筛选模型。在本实验室保藏的１株柚苷酶菌株中，０３号黑曲霉产酶活最高，摇瓶产酶达２１９／，５．３ＵｍＬ经平板分离纯化，到３— ４得５
１材料与方法
１１材料．
鼠李糖，柚苷酶在柑橘制品的脱苦、加工中得到普
遍应用。目，国柚苷酶在生产中还没有得到前我
１１１供试菌种１～１．．０号产柚苷酶的黑
收稿日期：０６—１０；２０１— １修订日期：０７— １— ５２０００作者简介：陈玲（９２一）女，１８，江西高安人，江西农业大学在读硕士研究生，主要从事柚苷酶高产菌株的选育工作。
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２８・
江
西
科ｓｅｇｌｓｎｅ）株由江西农业大学生物Ａｐｒｉｕｉｒ菌ｌｇ
Ａｐ菌种，酶活测定，出３号菌种产酶活最ｓ．经得高，２１９／Ｌ见表ｌ为５．３Ｕｍ，。表ｌｌ—ｌ０号菌株酶活结果
号茵株，摇瓶产酶达３５２７２Ｕｍ。８．０／Ｌ
关键词：苷酶；明圈柚透
中图分类号：Ｓ０．Ｔ２１３
文献标识码：Ａ
Ｓｒｅｉｇｏｇｒｎｉａｅ—ＰｏｕｉｇＳｒｉｓｗｉｈｃｅｎｎｆＨｉｈＮａｉｇｎｓｒｄｃｎｔａｎｔ