细胞工程实验室组成及无菌操作技术共102页
细胞工程第二章
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(3)干热灭菌
主要用于玻璃器皿的灭菌。将用 于细胞培养的器皿放入干燥箱内， 加热至160º C，保温90-120 min。
（4）过滤除菌：
会被高热破坏之溶液，例如细胞培养基或培 养基添加物(例如氨基酸、蛋白质溶液等)，可用 过滤膜除菌。 使溶液通过0.1 um 或0.2 um孔径之 无菌过滤膜，以达无菌之目的。 滤器型号按直径大小划分。如过滤量大的培 养用液常用较大型号的金属滤器(直径90 mm、100 mm、142 mm……等)，配以过滤泵使用。过滤量较 小的液体常用注射器推动的塑料小滤器(直径20 mm、25 mm等)。滤膜孔径有0.60um、0.45um、 0.35um、0.22um、0.10um等，以0.22um除菌最为 保险，但对于较粘稠难滤过的液体，仍需选用孔 径较大的滤膜。
2.化学消毒法
• 利用化学药剂杀灭微生物的方法称为化学
消毒法。化学消毒法操作简单、方便有效。
常用的消毒液有如下几种：
• • •
(1)70 ％ ( 或 75 ％ ) 酒精：超净台里常备 70 ％酒精 棉球 ( 卫生级酒精 ) ，用于手和一些金属器械或工 作台面的消毒。 (2)0.1％新洁尔灭：主要用于手和前臂的清洗以 及工作后超净台面的清洁。超净台旁应常备盛有 0.1％新洁尔灭溶液的容器及纱布。 (3) 来苏儿水 ( 煤酚皂溶液 ) ：主要用于无菌室桌 椅、墙壁、地面的消毒和清洗．以及空气喷撒消 毒，特别是污染细胞的消毒处理。使用浓度按说 明。
• (4)0.5%过氧乙酸：是强效消毒剂，10 min即可将 • •
芽孢菌杀死。用于各种物品的表面消毒，用喷撒 和擦拭方式进行。 (5)乳酸蒸气：将乳酸放人坩锅内用酒精灯或电炉 加热至沸腾为止。将门窗紧闭1-2d。可将空气中 漂浮的微生物杀死。 (6)37％甲醛加高锰酸钾：使用前先紧闭门窗。将 37％甲醛用酒精灯或电炉加热至沸腾后断电或灭 火，用一张纸盛好适量的高锰酸钾，迅速放入已 加热好的甲醛中形成蒸气，1-3d后方可达到消毒 空气的目的。
《细胞工程》实验指导书
实验指导书课程：细胞工程授课专业：生物工程、生物技术主编：徐艳实验一实验室的概况与培养基母液的配制一、实验目的：熟悉植物细胞工程实验室的基本结构、必须的基本设备及其用途与作用方法，掌握配制培养基母液的基本技能。
二、材料与用具：1、药品：生长调节类物质、无机盐类、有机化合物等。
2、用具：分析天平、移液管、量筒、培养瓶、烧杯、冰箱、母液瓶等。
三、教学时数：4课时。
四、实验内容：（一）实验室的基本结构及主要设备：1、洗涤室：水槽、工作台、蒸馏水器等功能：器皿及材料洗涤；蒸馏水制备。
2、消毒室：高压蒸汽灭菌锅、烘箱等功能：器皿的干燥；器皿及培养基的消毒。
3、试剂室：试剂柜、冰箱功能：存放试剂及器皿。
4、准备室：工作台、天平、水浴锅、电炉、显微镜及各种玻璃仪器、金属仪器等功能：培养基药品称量、配制、分装、灭菌；材料预处理；培养材料的观察分析。
5、接种室（含缓冲室）：超净工作台、接种箱等功能：无菌操作。
6、培养室：培养架、摇床等功能：培养物的控制培养。
7、驯化移栽室：如温室、大棚等功能：试管苗的驯化移栽。
（二）培养基母液的配制：1、MS基本培养基母液：各成分单独称量、单独溶解后混合定容①大量元素母液：10倍，1L注意：CaCl2.2H2O易与其他成分反应产生沉淀；②微量元素母液：100倍，0.5L③铁盐母液：100倍，0.5L注意：两者等体积溶解后混合，且需80℃水浴1h充分螯合，等待冷却后定容；④有机母液：100倍，0.5L2、激素类母液的配制：①1mg/ml的6－BA 50ml：先用0.1mol∕L的 HCL或NaOH溶解后再加水定容；②0.1mg/ml的NAA 50ml：先用少量0.1mol∕L的NaOH溶解后再加水定容。
注：精度要求精确到小数点后三位。
（三）培养器皿的洗涤：1、对污染的培养器皿先进行消毒灭菌处理；2、清除残渣，用清水洗净，浸泡于合成洗涤剂中6-24小时；3、用洗涤刷洗涤，并用自来水冲洗干净；4、用烘箱烘干或晾干，存放于防尘橱内备用。
细胞工程细胞工程实验室组成及无菌操作技术精选文档
倒置显微镜
分注器
血球计数器
磁力搅拌器
移液器
8、其它辅助设备
①培养基灌装机及洗瓶机
②空调机：用于接种 室和培养室温度的控 制。
③ 除湿机：使培 养室的湿度保持在
定的范围内。
⑤冰箱：用于在常温下易变 性或失效的试剂和母液的储 藏，细胞组织和试验材料的 冷冻保藏，以及某些材料的 预处理。
锅内温度达121℃。在此蒸气温度下，可以很快 杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。
(2)使用方法：首先检查灭菌锅内是否有水，而且水
刚好淹住加热器，然后放入灭菌材料，对称拧紧灭菌锅 上的螺丝，关闭放气阀通电。待压力上升到0.05MPa时， 打开放气阀，放出空气，待压力表指针归零后，再关闭 放气阀。三次放气后，关阀再通电，压力表上升达0.10.15Mpa时，维持20min后，断电，待压力降至零时，打 开入气阀，取出灭菌材料。
④烘箱：用于干燥洗净后的玻 璃器皿，还可用80℃的温度烘 干组织培养植物材料以测定干 物质。
⑥ 纯 水 机 与 蒸 馏 水 发 生 器
⑦天平：天平包括分析天平，电 子天平，药物天平等，用于制备 母液时培养基组成成分的称取。 如一些需要量少的激素和微生素 类物质，天平的精确度要到 0.0001g，这就要求精确度更高的 分析天平。
（4）培养室：
培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根据需 要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。其设计以充分利用空间和 节省能源为原则。高度比培养架略高为宜，周围墙壁要求有绝热防火的性 能。
培养材料放在培养架上培养。培养架大多由金属制成，一般设4-5层， 最低一层离地高约l0cm，其他每层间隔30cm左右，培养架即高1.7m左右。 培养架长度都是根据日光灯的长度而设计， 如采用40W日光灯，则长1.3m， 30W的长lm，宽度一般为60cm。
细胞工程实验室涉及的基本操作技术
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1. 培养基准备。
细胞工程实验室组成及无菌操作技术
玻璃漏斗式滤器
微孔滤膜滤器
干热灭菌箱/烘箱
电热灭菌器
2.培养仪器设备
培养架、培养箱、摇床、生物反应器等。
3.细胞学观察设备
应备有普通显微镜和倒置显微镜。
4. 化学实验常规设备
主要用于试剂保存与称量、培养基配制与 分装和水处理等，根据实际需要予以配置。
冰箱、天平、酸度计、离心机、加热器、 纯水器、分装设备等。
操作的场所。 要求：封闭性好，干燥清洁明亮，防止空气
对流。外应设缓冲室、更衣室 。
基本的设备：超净工作台（接种箱）、电热灭菌器、喷雾
消毒器、紫外灯、酒精灯等。
③培养室 功能：是对接种到培养瓶的离体材料进行控制培养的 场所。 要求：是要能控制光照和温度，应保持干燥和清洁， 防止微生物感染。
培养室基本设备：培养架、摇床、光照培养箱、通 风设施、时间过程控制器、空调机、加湿器、除湿 机及温度感应器等。
▪ 灭菌(sterilization)：是指用物理或化学的方法， 杀灭或清除传播媒介上的所有微生物，使之达到无 菌程度。
▪ 消毒（disinfection）：是指杀死、消除或充分抑 制部分微生物，使之不再发生危害作用。经过消毒， 许多细菌芽孢、霉菌的厚垣孢子等不会完全杀死， 即消毒后的环境里、物品上还有活着的微生物。
4、滤 器
▪ 玻璃滤器：与玻璃器皿清洗相同。无论是水 浸泡还是酸浸泡，都可用抽滤法。
▪ 不锈钢滤器：使用后弃去石棉滤膜，金属部 分刷洗干净，最后用蒸馏水漂洗2～3次，晾 干备用。
▪ 微孔滤膜滤器：使用后弃去微孔滤膜，滤器 用清水充分冲洗，最后用蒸馏水漂洗，晾干 备用。
二、灭菌和消毒方法
灭菌和消毒是组织培养重要的工作之一 。
第二节、无菌操作技术
细胞工程实验室配置及基本技术
用蔗糖调节外，常用的还有甘露醇，山梨
醇等。
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§3.培养条件
六.气体影响
CO2、 O2
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§3. 培养条件
六.气体影响
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§4.离体培养的营养需求
一.无机盐类 二.有机化合物 三.植物激素 四.其它附加成分
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§4.离体培养的营养需求
一.无机盐类
消毒器、紫外灯。
无菌操作设备 净化工作台、接种箱。 光温控制设备 时间程序控制器、空调及温度感应器。 细胞培养设备 培养设备根据需要而定，包括培养架、培养箱、
摇床、 生物反应器等。
细胞学鉴定设备 光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜。
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§2.实验室设置
二.基本设备配置
灭菌设备
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§3.培养条件
四.pH值
通常使用的pH值范围是5.0～6.5。pH在 4.0以下或7.0以上培养物就不能正常生长。
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§3.培养条件
五.渗透压
事实上为了某些培养需要，在设计培养基
时就应该考虑渗透压的问题，如White培
养基的渗透压为0.15个大气压，MS培养基
为1.9个大气压。此外，培养基的渗透压除
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§2.基本技术
一.洗涤技术
洗涤方法 玻璃器皿洗涤 新的玻璃器皿 已使用过的试管、烧杯、三角瓶 吸管、滴管等内径狭小的玻璃制品 塑料用品洗涤 一般用合成洗涤剂洗涤，因其附着力较 强，因此冲洗时必须反复多次，最后用 蒸馏水冲洗。 金属用品洗涤 金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤， 需要清洗时，一般用酒精擦洗，然后火 焰干燥。 第12页/共32页
第三章细胞工程基本技术
２、电离辐射消毒 适用于消毒量大和不适于做高压或滤过的
用品。
３、湿热灭菌 湿热灭菌即高压蒸气灭菌，是最常用和
最有效的一种方法。布类、胶塞、金属器械、 玻璃器皿及某些培养用液都可用此法消毒灭 菌。 各种物品有效消毒灭菌压力和时间不同， 一般培养用液、橡胶制品要求10磅(114℃)， 10～20分钟或8磅(112℃)30分钟。布类、玻 璃制品、金属器械等为15磅(12l℃)20分钟。
玻璃滤器适用于各种培养液的滤过除菌。玻璃滤 器根据滤板的孔径分为G1一G6几种规格，一般采用 G6型(孔径在1.5μm以下)，可达到除菌目的。
3、塑料器皿的清洗
细胞培养使用的塑料器皿主要有培养板、培 养皿及培养瓶等。这些产品主要是进口的一次 性商品，己消毒灭菌，打开就可使用。
如想反复使用，清洗方法如下：用后立即用 流水清洗或浸泡在水中，用脱脂棉清拭掉残留 附着物，用2％NaOH浸泡过夜，流水冲净后再 用5％盐酸浸泡30min，自来水冲洗、蒸馏水漂 洗2~3次，最后三蒸水漂洗2次，晾干备用。
② 刷洗
浸泡后的玻璃器皿要用软毛刷和优质洗涤剂（加 热）刷洗。
③ 浸酸
刷洗不掉的极微量杂质经过清洗液浸泡的 强氧化作用可被除掉。清洗液对玻璃器皿无 腐蚀作用，去污十分有效，是清洗过程中关 键环节。清洗液是由重铬酸钾、浓硫酸和水 按一定比例配制而成。浸泡时器皿要充满洗 液，不留气泡。浸泡时间不应少于6小时，一 般应浸泡过夜。
新配制的清洁液为棕红色，经多次使用，水份增多 或遇有机溶剂时成为绿色，这时表示清洁液已失效， 应废弃而重新配置。
也可以使用10％～40％的硝酸溶液。
第二章 细胞工程基本理论及其基本操作技术课件高中生物竞赛
微生物以及它们的芽孢或袍子，使物体成为无菌状态 消毒：是非彻底杀菌，即用物理或化学等方法，杀死物体上的有
害物质，但不能杀死全部芽孢 防腐：是抑菌过程，即用化学或物理方法，防止或抑制微生物生
长繁殖
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实验室常用于细胞工程的 三种消毒灭菌方法：物理法、化学法、抗生素法 1）物理法：
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要求 1、掌握 组织培养的概念及相关 2、掌握植物组织培养技术中 营养条件有哪些 3、掌握培养基中必不可少 的六大类无机盐元素 4、了解各无机盐元素的生理功能
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有机化合物
糖 类：
1）作用：既可作为C源，又可维持细胞的渗透压；
胁迫作用
2）原因：通常植物本身能进行光合作用，不需要从
外部供给糖，但植物组织培养进行异养的情况下，大
可根据需要配制成 弱、中、强三种。 弱 用重铬酸钾50g加入蒸馏水1L，加热溶化，冷却后再缓慢加
入浓硫酸90ml。 中 用重铬酸钾50g加入蒸馏水100ml，加热溶化，冷却后再缓
慢加入浓硫酸875ml。 强 与浓硫酸加热的同时缓慢加入磨碎的重铬酸钾，直到重铬
酸钾达到饱和为止。一般浓硫酸1L加入重铬酸钾50g
在胡萝卜胚状体的分化中，仅含硝酸盐是不能分化，只有 铵盐同时存在时才会产生胚状体的分化。
植物组织从培养基中吸收NO3-和NH4+后，经过一系列的反应转 化成氨基酸，进而合成蛋白质，成为植物体的主要组成部分
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无机盐类
磷：常用的是磷酸盐，是植物必需元素之一。 磷参与植物生命过程中的核酸合成、蛋白质合
是一种全新的植物组织培养技术, 是环境控制技术和组培技术的有机结合。
其特点在于: 1）以CO2 代替糖作为植物体的碳源,利用工程技术手段调节组培 微环境的空气、光照、湿度等影响因子,促进植物体自养生长 。 2）提高苗的质量和产苗率,缩短培养周期。
细胞工程第三章 细胞工程实验室设置与基本技术
箱．振荡器．超声波清洗仪等。
第三章、细胞工程实验室设置与基本技术
第二节 实验室主要仪器设备
四、培养容器与用具
（一）接种用具 用途：主要用于接种外植 体．解剖动物．取材和原代培 养中切割组织。
消毒方法采用高压蒸汽消毒或 采用70％酒精浸泡消毒。
超净工作台
第三章、细胞工程实验室设置与基本技术
第三节 细胞工程的基本操作技术
一、洗涤技术 体外培养细胞使用的器材品种较多，器皿表面
常残留微量有毒物质。由于离体细胞对各种毒物都很敏 感，除去器皿表面残留的微量有毒物质，改善玻璃表面 性质，有利于细胞的粘着和生长，所以细胞培养所用器 材的清洗．消毒处理是培养能否成功的关键之一。
一、洗涤室 用途：洗涤室主要用于玻璃器皿．用具和培养材料清洗 配置:洗涤水槽、落水架、干燥箱、柜子、超声波清洗器
二、灭菌室 用途：用于培养基及培养器械的灭菌。
配置:配备实验台．高压灭菌锅．排风灭火设备．细菌 过滤设备．干热消毒柜．电炉等。
要求：设备的安装和排列要合理．房间要宽敞明亮．通 风条件好，地面要便于清洁．防滑。
（1）干热灭菌
适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。操作方法： 150℃ 、40min或120℃ 、120min，如果发现芽孢 杆菌，160℃ 、90~120min
（2）湿热灭菌
适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸 等。121℃ 维持20~30min 注意点：加足水、排尽气、气压降到0时，才能开盖
第三章、细胞工程实验室设置与基本技术
第三章、细胞工程实验室设置与基本技术
细胞工程是以离体细胞和组织的无菌操作为基础的实验性学 科，它需要在模拟动．植物细胞生长发育而设置的实验条件 和环境下进行一系列操作的。为此需要各种实验设施．设 备．适宜的培养条件与技术。本章重点介绍细胞工程实验室 的设置．主要仪器设备以及细胞工程的基本实验操作技术， 这些是从事细胞工程工作的基础。
细胞工程
第二章细胞工程实验室组成及无菌操作技术植物细胞培养基的组成成分1.无机化合物大量元素(major element) ：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S微量元素(minor element) ：Fe、B、Zn、Cu、Mn、Co、Mo2.有机化合物（1）维生素：直接参与酶的形成以及蛋白质、脂肪的代谢，常用的有维生素VB1(盐酸硫胺素)、VB6(盐酸吡哆醇)、VB3（烟酸）、VB9(叶酸)、肌醇以及维生素•C(抗坏血酸)等（2）氨基酸：甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺等（3）其他有机附加物：水解酪蛋白（CH）、椰子汁（CM）、麦芽浸出物（ME）、酵母浸出物（YE）等3.碳源和能源常用蔗糖，作为碳源和能源，同时也可维持一定的渗透压；也可用葡萄糖、果糖、麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖等。
4.植物生长调节物质(Plant growth regulator)（1）生长素类(auxin)：促进细胞生长和分裂，用于诱导愈伤组织的形成和根的分化，常用的有2,4-D、IAA、NAA和IBA等（2）细胞分裂素类(cytokinin)：促进细胞分裂；诱导愈伤组织或器官的分化，常用6-BA、KT、ZT等（3）赤霉素类:常用赤霉酸(GA3)，可促进幼苗茎的伸长生长和胚状体发育成小植株（4）脱落酸（5）乙烯5.固化剂常用琼脂，一般用量为0.6～1.0％，有时可配成不加固化剂的液体培养基，进行液体浅层培养，液体培养有如下优点：低成本、生长快、移栽成活率高等。
6.其他成分：活性炭、硝酸银、抗生素等动物细胞培养基的组成、常用培养基类型、常用溶液培养基的成分1.糖类：作为碳源和能源，主要是葡萄糖，含量一般为1g/L（低糖）或4.5g/L（高糖）2.氨基酸：12种必需氨基酸3.维生素：包括叶酸、维生素B、烟酰胺和吡哆醇等4.无机盐类：大量元素包括Na+、K+、Ca2+、Mg2+、PO43-等，微量元素包括Cu2+ ，Zn2+ 和Mn2+等。
第三章 细胞工程基本技术
第三节、显微技术
1、光学显微镜 （1）普通光学显微镜 （2）相差显微镜：利用光的衍射和干涉，把投过标本不同区域的光波的光程差 转变成振幅差，使细胞内各种结构之间呈现清晰的明暗对比。 （3）倒置显微镜：物镜和照明系统颠倒，可观察培养的活细胞。 （4）荧光显微镜：单激光激发，观察荧光。 （5）激光共聚焦显微镜：激光扫描光源，逐点、逐行、逐面快速扫描成像，激 光和荧光共用一个物镜，共聚一个焦点。 （6）暗视野显微镜：遮光片阻止照明光线不直接进入物镜，只允许被标本反射 和衍射的光线进入。 （7）偏光显微镜：检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤丝、染色体等。
3、污染检测与控制
（1）细菌：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、假单胞菌、葡萄球菌等，通常细菌感染
后培养基颜色变黄、浑浊，细胞出现病变（变圆、漂浮）。 （2）真菌：黑曲霉、毛霉菌、白色念珠菌等，真菌污染后培养液出现白色、浅
黄色小点或颗粒漂浮于培养液表面、细胞生长变慢、培养液不浑浊，有纵横交错
的丝状、管状或树枝状菌丝。 （3）支原体：常见污染、主要是消耗营养，细胞生长缓慢，培养液不浑浊。 （4）病毒：细胞病变，培养基不浑浊。 （5）细胞交叉污染：多细胞培养时容易发生。
细胞接种
细胞培养
智 能 人 工 气 候 箱
光 照 培 养 箱 箱
2.辅助实验室
细胞学实验室
对培养材料进行细胞学鉴定和研究 由制片室和显微观察室组成
要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染
生化分析室
在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化验实验室，以
便于对培养物的有效成分随时进行取样检查
第五节、细胞分离技术
1、细胞初步分离 差速离心法：根据不同细胞的大小、沉降速度进行分离。
细胞工程基本技术
• 实验室
• 无菌技术
• 显微技术
• 细胞冻存与复苏
• 细胞的分离、观察与分析
一、实验室 1. 基本组成：
• 准备室
• 无菌间 • 操作间 • 培养室 • 分析室
2.主要设备：
包括 水处理设备（纯水系统）、无菌设备（灭菌
锅、超净工作台等）、培养设备（培养箱）、分离
观察设备（离心机、显微镜）、保存设备（超低温
• 不同固定剂对细胞的不同成分、结构固定效果不
同。
• 选择合适的固定液是达到固定目的的基础。
常用固定剂： • 甲醇/醋酸：浓度为3:1，适用于观察染色体和 Giemsa染色。 • FAA固定液（40%福尔马林5ml+冰醋酸5ml+80%乙醇90ml）： 可用作固定植物的一般组织。 • 卡诺氏（乙醇60ml+氯仿30ml+冰醋酸10ml）：适用 于显示细胞化学成分。
动，使其在1～2min完全融解； ③将细胞冻存悬液移入离心管，加入约5m1培养液，轻 轻吹匀； ④将细胞悬液经离心5min。弃上清液； ⑤给细胞沉淀物加入完全培养液，轻轻吹吸均匀；
⑥将细胞悬液移入培养瓶内，加足培养液进行培养。
五、细胞观察与分析
• 细胞计数：采用血细胞计数法，结果以每毫升细
胞数来表示。可采用结晶紫染色 • 细胞活力：总细胞中活细胞所占的百分比。常用 方法为台盼蓝染色法
• 常用光学显微镜、相差显微镜、倒置显微镜、荧
光显微镜等
四、细胞的冻存与复苏 • 细胞在传代过程中许多生物学性状容易发生改变， 如细胞的粘附性、染色体数目等； • 对有限增殖细胞系来说，传代次数是有限的； • 过多的传代增加污染机会； • 消耗大量人力物力。 细胞冻存与复苏
第三章 细胞工程实验室及实验基本操作
2．辅助实验室
2.1鉴定室
细胞学鉴定室 其功能是对培养材料进行细胞 学鉴定和研究。要求清洁、明亮、干燥，使各种光 学仪器不受潮湿和灰尘污染。应配置各种显微镜、 照相系统等。 生化分析室 在以培养细胞产物为主要目的的实验
室中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培
养物的有效成分随时进行取样检查。 离心机、酶
4、用70－75％的酒精拭擦台面并消毒双手。试验 用具也应该用酒精消毒。点燃酒精灯，将金属器 械在其火焰上灼烧，冷却待用。 注意：所有操作应在火焰近处并经过灼烧进行。 金属器械不能过度灼烧，以防退火。移液管不能 灼烧，培养瓶口、塑料材料、橡胶材料过火焰不 能时间太长。
5、取流水冲洗（至少30min）过的外植体，用一 定的消毒剂浸泡消毒，用无菌水冲洗3~4次，放入 无菌培养皿中，置于酒精灯火焰下方，用无菌的接 种器械进行分离、切割或其他处理。
1.5培养室
为了控制培养室的温度和光照时间及其强度，培 养室的房间不要窗户，但应当留一个通气窗，并安上 排气扇。室内温度由空调控制，光照由日光灯控制。 天花板和内墙最好用塑料钢板装修，地面用水磨石或 瓷砖铺设，一般要分两间，一为光照培养室，一为暗 培养室。培养室外应有一预备间或走廊。 培养室应配有培养架、转床、摇床、光照培养箱、 生化培养箱、自动控时器等。日光灯一般用40W，固 定在培养架的侧面或搁板的下面，每层有两支日光灯， 距离在20cm，光照强度为2000-3000lx。
（二）、灭菌的方法： 1、 物理方法：干热、湿热、过滤（0.25微 米）、紫外灯、超声波等。 2、化学方法：使用灭菌剂或抗菌素，如酒 精、次氯酸钠、升汞、漂白粉、高锰酸钾、双氧 水、福尔马林等
（1）干热灭菌 适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。操作方 法：150℃ 、40min或120℃ 、120min， 如果发现芽孢杆菌，160℃ 、90~120min