衣原体GIPC噬菌体衣壳蛋白Vlp的克隆,表达和鉴定
从噬菌体表面展示肽库中筛选衣原体单克隆抗体识别的抗原表位
ｒ ｅａ ｔ ｅ ． ｉ ｎ ｉ ｎ ｖ ｇ Ｋｅ ｒｂ：Ｐ ａ ｅ ｄ ｓ ｌ ｙ Ｒａ ｄ ｍ ｅ ｆ ｅ ｌ ｒ ｒ Ｃｈａ ｄ ａ Ｅｐｔ ｐ ｙ ｗ０ 【 ｈ ｇ ｉ ａ ； ｎ ｏ ｐ ｐ ｄ ｉ ａ ｙ； ｔｍｙ ｉ ； ｉ ｅ ｐ ｉ ｂ ｏ
正常小 鼠 ｌＧ筛选结果为阴性 （ ） ｇ ０ 。三轮筛 选后 ， 若 Ｐ ０比值大于 ２ 可认为出现富集 ， ／ ０ 随机挑选单克 隆制备原种 。筛选所用单抗 Ｃ ７ 正常小 鼠 ｔ １及 ｇ Ｇ 包被酶联板 ， ％Ｂ Ａ封闭非特 异性结合位点。加 ５ Ｓ 单克 隆 噬 菌 体 原 种 与包 被 抗 体 充分 结 合 后 ， 以 ＨＩ 一ｎｉ ３ 、 ＭＢ显 色 。Ｄ ３ ２Ａ 型 酶 联 免 ａｔ Ｍ１Ａｂ Ｔ Ｇ ０２
２ １ 生 物淘 洗 （ ｉ ａｎｎ ） ． Ｂｏ ｎ ｉ ｐ ｇ 单抗 Ｃ ７和正 常 小 鼠 ［Ｇ 溶 液 各 １０ ｌ 被 １ ｇ ０ 包 酶联板微 孔 ， 盒 ４ 过 夜 ，％Ｂ Ａ 封 闭 。淘 洗 方 湿 ℃ ５ Ｓ
心的研究 、 小分子肽疫苗设计、 抗原表位的确定中显 示 出优势 －。 １Ｊ ３
疫检 测 仪测 ０３５ 。 １４０ ２３ 提 取 阳性 克 隆单 链 Ｄ ． ＮＡ＋ ＱＩ ｒｐＳ ｉ 按 Ａｐｅ ｐｎ Ｍ１ ｔ５ ） 剂盒操 作 指 南进 行 。送 北 京 市普 京 ３Ｋｉ ０ 试 （ 康 生 物工程 技术 有 限公 司测序 ， 序 列 比较 分析 。 进行 ２ ４ 竞争 抑制 试验 Ｌ ． ５ Ｊ 衣原 体 超 声 波 破 碎 抗 原 包 被 酶 联 板 ， ％Ｂ Ａ ５ Ｓ
衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)的克隆、表达及纯化(一)
衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)的克隆、表达及纯化(一)作者：王飞朱庆三苗旭漫胡宁宁李霄金宁一【摘要】目的构建含衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)的原核表达载体，经转化E.coli以表达CPAF融合蛋白，研究其生物学功能。
方法从病料中克隆得到CPAF的原始基因，将PCR产物经纯化连接到，将重组质粒经NdeI和BamHI双酶切，与用相同酶消化的原核表达载体pET42b(+)连接，建立表达载体，阳性克隆经鉴定后，转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达，经亲和纯化、离子交换纯化、分子筛纯化融合蛋白，进行分析，Western印迹检测。
结果经酶切鉴定和测序分析证实原核表达质粒构建正确。
和Western印迹结果显示在70kD处呈现单一蛋白条带，重组载体在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地表达了CPAF天然蛋白，目的蛋白占全菌体蛋白的20%左右，采用镍柱的亲和纯化后，可达70%左右。
结论经DNA测序、、Western 印迹检测表明成功构建了能够稳定表达可溶性CPAF的菌株，并获得纯化CPAF的方法，为今后CPAF的研究及应用奠定了基础。
【关键词】衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF);表达;纯化;生物学功能衣原体泌尿生殖道感染是艾滋病病毒(HIV)感染的重要危险因素，也是人乳头状瘤病毒(HPV)致宫颈癌的协同因子。
衣原体具有广泛的宿主，尽管不同种属衣原体的宿主不尽相同，然而他们却拥有极其相似的基因组序列和高度保守的细胞内生活周期。
衣原体要确保完成其胞内繁殖，就必须保证受浸染细胞不被机体免疫细胞识别，从而逃逸宿主的免疫防御。
衣原体拥有多种策略来逃逸宿主的免疫防御，衣原体蛋白酶样活性因子(chlamydialproteaseactivityfactor，CPAF)就是重要的一种因子，其作用的机制是通过降解形成肌球蛋白重链(MHC)所必须的转录因子，例如：调节因子和上游刺激因子，来达到抑制MHC合成的作用〔1〕。
人类受到衣原体感染时，CPAF特异性抗体效价明显高于外膜蛋白(MOMP)和热休克蛋白60(HSP60)，这说明CPAF具有良好的免疫原性。
衣原体rnasehⅱ编码基因的克隆与表达及酶的纯化与性质鉴定
河南大学硕士学位论文衣原体RNase HⅡ编码基因的克隆与表达及酶的纯化与性质鉴定姓名：***申请学位级别：硕士专业：遗传学指导教师：李锁平;王子成20050601衣原体ＲＮ越ｃＨｌｌ编码基因的克隆与表达及酶的纯化与性质签定中英文对照２致谢衷心感谢我的导师李锁平教授。
三年以来，在学习、生活和工作上，李老师给了我莫大的关怀和教导。
从李老师的身上我目睹了一代典范导师的风采。
李老师默驮无闻、踏踏实实、兢兢业业的工作作风更是对我产生了深远的影响。
在毕业之际谨向李老师致以最崇高的敬意ｌ感谢尚富德老师在这三年里对我的帮助。
从尚老师身上我体会到了做事先做人的深刻含义，我将努力做人。
感谢宋纯鹏院长、王恒兵副院长、苗琛副院长、王天仕副院长、海富生副书记和丁圣彦教授三年来在学习和生活中给我的指导和帮助ｌ衷心感谢本实验室的王子成博士、李玉阁老师、高安礼老师、黄世全老师对实验的悉心指导和热情帮助。
衷心感谢李淑娟老师、李忠爱老师在学习和生活上给予了无私的关怀和无微不至的帮助。
感谢生命科学学院里的张骁博士、郭曙光老师、谷艳芳老师、张霖老师、杨生玉老师、王刚博士、张彤老师、安国勇老师、苗雨晨老师、白玲老师、周云老师、王棚涛老师、王鹏程老师、金志荣老师、李黎老师、燕静安老师、徐仪广老师、壬磊老师等也给予了莫大的关心和帮助。
办公室的张莉老师为实验仪器的购买、维护付出了辛勤的劳动，办公室的史振莹老师为论文的排版和打印付出了辛勤的工作，办公室的薛敬忠老师为实验室的日常维护做出默默的贡献，在此一并表示感谢ｌ感谢上海交通大学生命科学技术学院生物化学和分子生物学实验室的导师刘建华教授给予我的无私帮助。
感谢上海交大实验室的老师余晶和同学刘喜朋、王坚、葛宜和、刘俊、侯敬丽、梁如冰、于爱蓉、张毅等。
在上海实验的一年时间里我受益匪浅，内心里时时被感动着。
从他们身上我懂得了做科研需要有无私的胸怀。
尤其感谢同实验室的张大乐、代小华、袁王俊、董美芳、苏亚蕊、高红云、李永、刘萍、曹进国、贺洁、韩洁、李瑾、刘春潮、何艳霞、张成婉同学以及王丽娟、赵伟、薛瑞丽、夏金蝉、薄惠、范文超、杨俊＊、张国增等同学的热情帮助和关心。
肺炎嗜衣原体主要外膜蛋白基因片段在大肠杆菌中的表达与鉴定
染性 原体表 面 的 主要 膜 蛋 白携带 多种 抗 原 决 定
簇 ， 诊 断试 剂 和疫 苗 开 发 的基础 ． 研 究 选 择 是 本 Ｃ ｎｏ Ａ （ ＭＰ基 因 ） ｐ ｍｐ ＭＯ 的一段 基 因片段 作 为研
原体 的感染 ， 在人 群 中的 血清 抗 体 阳性 率 可达 其 ５ ７ ％ ． Ｏ～ ０ ’ 由于病 原 不 明、 床 症 状 不 明显 ， 临
第１ ４卷第 ４期
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４ ９
上样到经缓 冲液预平衡 的 Ｎ — Ｔ ｉ Ｎ Ａ层析柱 中洗 Ｉ ｇ Ｇ抗体 、 显色底物 Ｔ Ｂ均购 自北京鼎 国公 司； 涤纯化（ Ｍ 具体操作见说 明书） 洗脱液洗脱收集表 ， 主要外 膜 蛋 白（ Ｍ ） Ｍ０ Ｐ 多克隆抗 体 由美 国德 州大 达产物． ｓ ｓ Ｐ Ｇ 经 Ｄ — Ａ Ｅ电泳分析后， 收集含 目的 学健康科学中心免疫和微生物学系钟广明教授惠 蛋 白的洗脱 液 ， 以透 析法 对纯 化产物 进行 复性 ， 然 赠． 后 缓 慢 去 除 变 性 剂 ， 复 目的蛋 白 的天 然 结 构 ． 恢 １２ 模板 和质粒 ． Ｂ Ａ法 测 定 蛋 白浓 度 ． Ｃ 纯化 产 物 以 ｗｅｔ —ｂｏ ｓｍ ｅ ｌｔ Ｃ ｎ标准 株 Ａ ｐ Ｒ一３ ９基 因组 Ｄ Ａ模 板 由美 鉴定结果 ， Ｎ 即经 ｓ ｓ—Ｐ Ｇ Ｄ Ａ Ｅ电泳后转移至硝酸 国德州大学圣安东尼奥健康科学中心免疫和微生 纤维素膜上 ，％脱脂 牛奶封 闭过夜 ，Ｂ Ｔ洗膜 ５ Ｔｓ 物学系钟广明教授惠赠． 大肠埃希菌 Ｊ Ｏ 、Ｌ ｌ 后 ， Ｍ Ｍ Ｍ１９ Ｂ ２ 与 ０ Ｐ多抗室温作用 ２ ， ｈ 再与辣根过氧化 （Ｅ ） Ｄ ３ 及表达载体 ｐ １０ 为本实验室保存所有． Ｅｒ ａ ３ 物酶标的羊抗人 Ｉ ｇ Ｇ孵育 ３ ，Ｂ Ｔ洗 涤后与底 ｈＴ ｓ 物反 应显 色 ． １ ３ Ｐ Ｒ扩增 ． Ｃ １ ６ 重 组蛋 白的鉴 定 ． 根据 Ｇ ｎａｋ收录 的 ｃ ｎ Ｍ Ｍ ｅｂｎ ｐ Ｏ Ｐ基 因序 列 取 ＩＴ Ｐ Ｇ诱导前与诱导后４ 超声破碎后沉淀 ｈ （ 录号 ： ｉ８６３９ ， 择优 势表 位 Ｖ ２一Ｖ ３ 登 Ｇ ：１３４ ）选 Ｄ Ｄ 及含有纯化蛋 白的洗脱液进行 ｓ ｓ— Ａ Ｅ及蛋 Ｄ ＰＧ 区 （ａ４ ａ２７ 设计 一对 引物 ． 向引 物 Ｐ ： ａ１７一 ａ９ ） 正 ｌ５ ＣＧ ＧＧＡ ＣＣ ＡＡＣ Ｔ Ｔ Ａ ＣＧ Ｔｒ Ｔ Ｃ ＣＡ Ｇ Ｃ ＡＡＴ Ｃ Ｔ 白质印迹分析 ， 观察表达情况和纯化效果． 一抗为 鼠抗 ｃ ｎＭ Ｍ 单克隆抗体， ｐ Ｏ Ｐ 二抗为辣根过氧化 ３ ， 人 Ｂ ｍ 切位 点 ； 向引 物 Ｐ ： 一 引 ａ Ｈ Ｉ酶 反 ２５ ＣＣ ＡＡＧＣＴＴ ＴＩ ｒＩ ＴＣＧ ＩＡ ＡＧＡ ＣＣＡ Ｇ ＡＣ Ｔｒ ｒ ＴＣＣ 一 物酶（ Ｒ ） Ｈ Ｐ 标记 的羊抗 鼠抗体． ３， 引入 Ｈｉｄ ｎ Ⅲ酶 切 位 点 ， 物 由 上 海 Ｓｌ０ 引 ａｇｎ公 １ ２ 结 果 司合成．０ ｌ ｃ ５ Ｒ反应体系中， ５ １ ｕ Ｐ 含 ０ｘ ｒ ｂ ． Ｃ （ Ｍｇ ）４ 的 ｄ １ 各 ０ ５ 的 引 物 ， ｐ ２ １ Ｐ Ｒ扩增 产 物结 果 含 ｃ ， ｌ Ｍ Ｐ， ． ｌ Ｃｎ
微生物检验学之衣原体及检验
微生物检验学之衣原体及检验衣原体是一类能通过细菌滤器、严格细胞内寄生、有独特发育周期的原核细胞型微生物。
衣原体在微生物检验学中具有重要地位，对其准确的检验对于疾病的诊断、治疗和预防都有着至关重要的意义。
衣原体的生物学特性较为独特。
它的形态多样，包括圆形、椭圆形或梨形等。
衣原体具有细胞壁，其成分与革兰阴性菌相似。
从生活周期来看，衣原体存在两种形态，即原体和始体。
原体体积较小，具有较强的感染性；始体则较大，是繁殖型，不具有感染性。
衣原体的种类较多，常见的有沙眼衣原体、肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体等。
不同种类的衣原体所引起的疾病有所不同。
沙眼衣原体主要引起沙眼、包涵体结膜炎、泌尿生殖道感染等；肺炎衣原体可导致肺炎、支气管炎等呼吸道感染；鹦鹉热衣原体则与鹦鹉热等疾病相关。
在临床检验中，对衣原体的检验方法多种多样。
首先是涂片镜检，通过对标本进行涂片、染色后，在显微镜下观察衣原体的形态特征。
但这种方法的敏感性较低，容易出现漏诊。
细胞培养法是衣原体检验的“金标准”。
将标本接种到合适的细胞培养体系中，观察细胞内有无衣原体的包涵体形成。
然而，细胞培养法操作复杂，对实验条件要求高，且耗时较长，限制了其在临床中的广泛应用。
免疫学方法在衣原体检验中应用广泛。
其中，酶联免疫吸附试验（ELISA）通过检测患者血清或分泌物中的衣原体特异性抗体，来判断是否感染。
这种方法简便、快速，但可能存在一定的假阳性和假阴性。
免疫荧光法利用荧光标记的抗体与衣原体抗原结合，在荧光显微镜下观察，具有较高的特异性和敏感性。
核酸检测技术是近年来发展迅速的衣原体检验方法。
聚合酶链反应（PCR）能够特异性地扩增衣原体的核酸片段，具有极高的敏感性和特异性。
实时荧光定量 PCR 还能对衣原体的核酸进行定量分析，有助于评估感染的严重程度和治疗效果。
在采集标本时，需要根据不同的感染部位选择合适的标本类型。
例如，对于泌尿生殖道感染，可采集尿道拭子、宫颈拭子、精液等；对于眼部感染，可采集眼结膜刮片；对于呼吸道感染，可采集鼻咽拭子、痰液等。
衣原体检测,蛋白定量方法(一)
衣原体检测,蛋白定量方法(一)衣原体检测和蛋白定量方法衣原体检测方法•基于PCR的检测方法–实时荧光PCR法–碳热抗体PCR法–寡核苷酸引物PCR法•基于扩增的检测方法–Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP)–Rolling-circle amplification (RCA)•蛋白芯片技术•病原学方法–细胞培养法–免疫组织化学检测法衣原体蛋白定量方法•二维凝胶电泳•质谱技术–MALDI-TOF–LC-MS/MS•Western blot•免疫组化基于PCR的检测方法PCR是一种常用的衣原体检测方法。
实时荧光PCR法通过检测PCR 反应体系中释放的荧光信号来确定衣原体是否存在。
碳热抗体PCR法则利用PCR扩增过程中高温不变性的碳热核酸结构来增加PCR产物的特异性。
寡核苷酸引物PCR法则通过寡核苷酸引物的特异性与衣原体基因组序列匹配来实现检测。
基于扩增的检测方法Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP)和Rolling-circle amplification (RCA)是两种基于扩增的衣原体检测方法。
LAMP通过酶的作用在等温条件下进行多次扩增，最终形成大量特异性产物，通过目视判断结果。
RCA则利用DNA或RNA的环形扩增特性，通过DNA或RNA聚合酶在特定引物的作用下，形成大量线性扩增产物。
蛋白芯片技术蛋白芯片技术是一种高通量、快速且高灵敏度的衣原体蛋白定量方法。
它基于蛋白质和特定抗体的特异性识别，通过将抗体固定在芯片表面，然后与样品中的衣原体蛋白发生反应，最终通过荧光标记或质谱等方法，定量分析芯片上的蛋白质含量。
病原学方法细胞培养法是一种常用的衣原体检测方法，它通过从患者样品（如尿液、唾液等）中分离衣原体，然后将其接种在特定培养基上培养并观察衣原体的生长情况。
免疫组织化学检测法则利用特异性抗体与衣原体蛋白结合，在显微镜下观察抗原与抗体的反应，从而确定衣原体是否存在。
IHNV核衣壳蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及鉴定
IHNV核衣壳蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及鉴定谢三磊;王雯慧;孙惠玲【摘要】采用RT-PCR方法从传染性造血器官坏死病病毒( IHNV)中扩增RNA获得1176 bp的核衣壳蛋白( N)基因,将其插入于pFB-LIC-Bse杆状病毒载体中,构建了重组质粒pFB-LIC-Bse-N,转化至感受态细胞DH10Bac中,获得重组杆粒rBacmid-N。
再将其转染至Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。
IFA和Western Blot分析表明,重组N蛋白可以被辣根过氧化物酶(HRP)标记的组氨酸单抗(anti-His)识别,表明,IHNV N基因在昆虫细胞Sf9中获得了正确表达。
为深入研究N蛋白的功能和免疫学特性奠定了基础。
%To study the major structural nucleoprotein ( N ) of infectious hematopoietic necrosis virus ( IHNV ) by baculovirus systems,in this study nucleoprotein ( N) gene(1 176 bp) was amplified by RT-PCR from infectious hematopoietic necrosis virus ( IHNV) and inserted into the baculovirus vector pFB-LIC-Bse to construct a recombi-nant plasmid pFB-LIC-Bse-N. The constructed recombinant transposition plasmid pFB-LIC-Bse-N was transformed to competent E. coli DH10Bac to get recombinant bacmids rBacmid-N. The obtained recombinant bacmid rBacmid-N was transfected to insect Sf9 cells,and the recombinant baculovirus that contained N gene was obtained. IFA and Western Blot analysis showed that the recombinant N protein can be recognized by horseradish peroxidase ( HRP) labeled histidine monoclonal antibody ( anti-His) which indicated IHNV N gene has been successfully expressed in Sf9 cells infected with recombinant baculovirus. The studylaid a foundation of further study on N protein structure, function and immunological characteristics.【期刊名称】《华北农学报》【年(卷),期】2014(000)003【总页数】5页(P36-40)【关键词】传染性造血器官坏死病病毒;核衣壳蛋白基因;重组杆状病毒【作者】谢三磊;王雯慧;孙惠玲【作者单位】甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州 730070; 北京市农林科学院畜牧兽医研究所，畜禽疫病防控技术北京市重点实验室，北京 100097;甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州 730070;北京市农林科学院畜牧兽医研究所，畜禽疫病防控技术北京市重点实验室，北京 100097【正文语种】中文【中图分类】S432.4传染性造血器官坏死病(Infectious haematopoietic necrosis,IHN)是鲑、鳟鱼类的一种以造血组织严重坏死、显著贫血、肝、脾、肾褪色为主要特征的传染性疾病。
名词解释病毒的衣壳
名词解释病毒的衣壳病毒的衣壳是指病毒颗粒外层的蛋白质壳。
它在病毒生命周期中起着至关重要的作用，不仅保护病毒的遗传物质，还参与病毒的感染过程和免疫逃逸。
病毒衣壳的结构和功能具有多样性，对于研究病毒感染机制和防治疾病具有重要意义。
病毒是一种微小的生物体，无法独立生存，需要寄生在宿主细胞内才能复制自身。
病毒的主要组成部分包括遗传物质（DNA或RNA）和蛋白质壳，其中蛋白质壳即是病毒的衣壳。
病毒衣壳由大量的蛋白质分子组成，通过非共价键或共价键与病毒颗粒内的遗传物质相结合。
病毒的衣壳在病毒生命周期的不同阶段发挥着不同的功能。
首先，在病毒的感染过程中，衣壳与宿主细胞受体结合，促进病毒进入宿主细胞内。
衣壳上的特定结构域与宿主细胞表面的受体结合，介导病毒与宿主细胞之间的相互作用。
这一步骤对病毒感染的选择性和效率至关重要。
其次，衣壳也能帮助病毒逃避宿主免疫系统的攻击。
病毒感染宿主后，宿主免疫系统会立即发动一系列免疫应答来清除入侵物。
病毒衣壳上的一些蛋白质可以模拟宿主细胞的表面结构，欺骗免疫系统，使免疫细胞无法识别和攻击病毒颗粒。
这种逃避机制使病毒能够在宿主体内长期存活，增加传播的机会。
此外，病毒衣壳还具有良好的组装能力。
病毒复制时，它的遗传物质会在宿主细胞内复制，同时衣壳蛋白质也会被合成。
这些合成的蛋白质会自发地组装成成熟的衣壳结构，并将复制好的遗传物质包装在内部。
病毒衣壳的组装是一个高度精确的过程，需要确保衣壳蛋白质正确地叠加和结合，从而形成稳定的病毒颗粒。
随着科技和研究的进展，人们对病毒衣壳的结构和功能有了更深入的认识。
通过高分辨率的电子显微镜技术和蛋白质结晶学等手段，科学家们可以观察病毒衣壳的微观结构，并在此基础上设计抑制病毒感染的药物。
例如，一些抗病毒药物可以与病毒衣壳上的特定结构域相互作用，阻碍病毒进入宿主细胞。
总之，病毒衣壳在病毒生命周期中起着至关重要的作用。
它不仅保护病毒的遗传物质，还参与病毒的感染过程和免疫逃逸。
利用蛋白质组技术快速鉴定噬菌体结构蛋白
关键词 ：噬菌体；ｖ Ｂ Ｅ ｆ ａ Ｐ Ｉ ＭＥ １ ９ ９ ；基因组学 ；蛋 白质组学
中 图分 类 号 ：Ｒ９ ７ ８ ． １ ，Ｑ ９ ３ ９ ． ４ ８ 文 献 标 志 码 ：Ａ
Ｒａ ｐｉ ｄ ｉ ｄｅ ｎｔ ｉ ｉｃ ｆ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｐｈａ ｇ ｅ ｓ ｔ ｒ ｕｃ ｔ ｕｒ ａ ｌ ｐｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎｓ ｂｙ ｐｒ ｏ ｔ ｅ ｏ ｍｉ ｃ ｔ ｅ ｃ ｈｎｉ ｑ ｕｅ ｓ
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衣原体基因的分子生物学检测技术研究
衣原体基因的分子生物学检测技术研究本文以“衣原体基因的分子生物学检测技术研究”为研究目标，详细介绍了衣原体的分子生物学检测技术的研究过程、发展趋势及其应用前景。
衣原体是一种传染性疾病，它可以通过接触病毒传播。
有很多研究表明，科学的诊断对于准确识别衣原体感染病毒的宿主是必不可少的。
因此，这里将探讨衣原体基因的分子生物学检测技术及其在实践中的应用。
衣原体基因的分子生物学检测主要是要调查衣原体感染病毒的宿主DNA或RNA，以期更加准确地诊断衣原体感染。
其基本步骤是先收集宿主的DNA或RNA样本，然后进行核酸扩增，在此基础上建立被检验的衣原体抗原的分子分子检测体系，同时，开发新的和已有的检测方法，以检测和鉴定衣原体感染病毒的宿主。
因此，衣原体基因的分子生物学检测是一种有效的衣原体感染诊断技术。
衣原体基因的分子生物学检测技术可以将临床检测和实验室检测有机地结合，从而提高检测效率和准确度。
同时，可以改进已有的抗原检测方法，以检测更多的衣原体感染病毒的宿主。
将临床检测和实验室检测有机地结合起来，衣原体基因的分子生物学检测技术可以及时、准确、全面地分析各种宿主的衣原体感染情况，从而使病毒的预防和控制更加有效。
此外，衣原体基因的分子生物学检测技术还可以识别出衣原体感染病毒的抗药性基因，从而更有针对性地应用有效的抗病毒药物。
此外，在很多研究中，衣原体基因的分子生物学检测技术也被应用于新药物开发、抗感染药物筛选、药物耐药性诊断等方面。
以上是衣原体基因的分子生物学检测技术的具体介绍，可以看出，衣原体基因的分子生物学检测是一种重要的衣原体感染检测技术，并可广泛应用于医疗保健、药物研究和发现等领域。
在技术发展方面，衣原体基因的分子生物学检测技术主要依赖于分子生物学技术和生物技术，包括DNA子克隆技术、荧光原位杂交技术和自动检测技术等。
今后，衣原体基因的分子生物学检测技术的发展将处于爆发性增长的趋势，其发展前景广阔。
同时，业界也需要注重加强研究技术的科学性，增强技术的可靠性，以进一步提高衣原体的诊断准确性，促进衣原体的治疗效果。
鸡贫血病毒衣壳蛋白VP1基因的克隆、原核表达和纯化
鸡贫血病毒衣壳蛋白VP1基因的克隆、原核表达和纯化吴艳红;陈建龙;李丛丛;何成强;李云龙【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2007(28)1【摘要】根据GenBank中CAV哈尔滨分离株基因序列,设计出针对CAV VP1大片段(608 bp)的引物,利用PCR方法从CAV基因组序列中扩增出VP1基因的大片段(608 bp),按照正确的读码框克隆到原核表达载体pET32a(+)上,得到含VP1大片段的pET32a(+)重组子,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导重组蛋白表达,经SDS-PAGE和Western blotting检测发现有分子质量约42 ku的融合蛋白表达,与预期分子质量大小一致,通过Ni亲和层析柱纯化出融合蛋白,经Western blotting鉴定,融合蛋白与His单抗能够结合.CAV VP1基因的克隆表达及其融合蛋白的纯化为后续制备多克隆抗体和单克隆抗体提供了良好的抗原来源,也为研究VP1与其他CAV蛋白之间的相互关系奠定了基础.【总页数】4页(P46-49)【作者】吴艳红;陈建龙;李丛丛;何成强;李云龙【作者单位】山东师范大学生命科学学院动物抗性实验室,山东济南,250014;山东省济南第一中学,山东济南,250011;山东师范大学生命科学学院动物抗性实验室,山东济南,250014;山东师范大学生命科学学院动物抗性实验室,山东济南,250014;山东师范大学生命科学学院动物抗性实验室,山东济南,250014【正文语种】中文【中图分类】S852.659.2;Q785【相关文献】1.鸡贫血病毒衣壳蛋白基因的原核表达 [J], 郭淑华2.鸡贫血病毒衣壳蛋白的表达纯化及多克隆抗体制备 [J], 王晓艳;文刚;高玉龙;高宏雷;王笑梅3.施马伦贝格病毒核衣壳蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备 [J], 张永宁;吴绍强;吕继洲;冯春燕;王彩霞;袁向芬;邓俊花;林祥梅;Wernike Kerstin1型口蹄疫病毒VP1基因的克隆、原核表达及纯化 [J], 独军政;常惠芸;丛国正;林彤;邵军军;魏小娟;刘在新;谢庆阁5.鸡贫血病毒(CAV)vp1基因的克隆及与其他CAV vp1基因的比较(英文) [J], 张刚;何成强;安利国;李云龙因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
诺如病毒表达衣壳蛋白单克隆抗体的制备、鉴定和初步应用
诺如病毒表达衣壳蛋白单克隆抗体的制备、鉴定和初步应用Ⅱ组广州株NVgz01（DQ369797）Norovirus N蛋白免疫BALB/c 小鼠, 通过PEG使小鼠脾细胞和Sp2/0细胞融合, 利用HAT选择性培育基培育融合细胞, 用间接ELISA和Western blot测定mAb的效价、免疫球蛋白亚型和mAb的特异性, 并将各mAb之间进行配对。
结果: 通过细胞融合和克隆化, 共挑选出4株分泌抗NorovirusⅡ组广州株Norovirus N蛋白产生特异性反映, 而且能与天然粪便标本中的G Ⅱ组Norovirus产生特异性反映。
配对结果显示N2C3和N7C2之间配对, 对表达蛋白和天然病毒都具有较强的检测灵敏度。
结论: 取得了诺如病毒GⅡ组特异性mAb, 为制备免疫诊断试剂盒及致病机制的研究奠定了基础。
【关键词】 Norovirus NVgz01 核衣壳蛋白单克隆抗体诺如病毒作为流行性肠胃炎的要紧病因之一, 不管在进展中国家仍是发达国家, 从儿童到成年人都能够受到诺如病毒感染, 并可造成暴发流行, 成为阻碍人类健康的不可轻忽的问题, 最近几年来慢慢引发了研究者的重视。
美国CDC通过评估以为, 每一年在美国发生的食源性疾病有2 300万宗是由诺瓦克及诺瓦克样病毒引发的［1］; 在欧洲, 数据显示1995～2000年间, 有超过85％的食源性病毒肠胃炎暴发案例由诺瓦克及诺瓦克样病毒引发［2］。
由于人类诺如病毒分为GⅠ和GⅡ两组［3, 4］, 依照北京［5］、太原［6］和武汉［7］三地的血清学调查结果, 初步以为GⅡ组病毒为我国要紧流行组。
由于诺如病毒无法在体外感染细胞及动物模型来进行培育分离鉴定, 目前对诺如病毒的诊断方式主若是免疫电镜法（IEM）、放射免疫法（RIA）、ELISA法、 RealTimeⅡ组广州株Norovirus N蛋白作为免疫原, 免疫BALB/c小鼠并制备mAb, 为研制诺如病毒检测试剂盒奠定基础。
衣原体噬菌体Vp2蛋白的生物临床价值分析
衣原体噬菌体Vp2蛋白的生物临床价值分析姚卫锋;卢桂玲;谢艳秋;于旺;宋蒙蒙;李士颖【期刊名称】《天津医药》【年(卷),期】2014(000)007【摘要】目的：明确衣原体噬菌体Vp2蛋白在病毒重组、筛查研究中的作用，评估Vp2的临床价值。
方法以COBALT程序在线比对各株衣原体噬菌体衣壳蛋白Vp2蛋白序列；并以ProteinBlast的Distance tree功能构建种系发生树。
以高保守区氨基酸序列为基础，采用Gamier-Robson法、Chou-Fasman法分析蛋白二级结构；以Karplus-Schulz法分析柔性区域；Kyte-Doolittle法、Hopp-Woods法分析亲水性；Emini法分析表面可及性；Jameson-Wolf法分析抗原指数。
结果6株衣原体噬菌体Vp2蛋白序列高度保守，差异主要在Chp1与其他5株噬菌体的Vp2蛋白之间亲缘关系较远。
各株噬菌体的Vp2蛋白均有α螺旋为主的二级结构，蛋白序列高保守区存在多个细胞表位。
结论 Vp2蛋白性质保守，是衣原体噬菌体衣壳的重要组分。
其蛋白分子结构复杂，高保守区有较强的免疫原性，在病毒重组、沙眼衣原体噬菌体野生株筛查研究中有实际研究价值。
%Objective To evaluate the effect of chlamydiaphage virus protein 2(Vp2) on the recombinant virus and virus screening research, and it clinical value thereof. Methods To compare the Vp2 protein sequences to get the conserva-tive region with COBALT. A phylogenetic tree was built with ProteinBlast of Distance tree. The amino acid sequence in the high conservative region was predicted by the methods of Gamier-Robson and Chou-Fasman, andits flexibe regions were predicted by Karplus method. The hydrophilicityplot was predicted by Kyte-Doolittle and Hopp-Woods method. The sur-face probability was analysed by Emini, and the antigenic index was analysed by Jameson-Wolf method. Results The six Chlamydiaphage Vp2 proteins were the highly conserved sequences. There were obvious differences between Chp1Vp2 and other 5 Vp2 proteins. There were the main structure-alpha helix and some cell epitopes in the high conserved region. Con-clusion Vp2 protein is the important component of chlamydia phage capsid with the conservative nature. Vp2 protein has complicated structures and high conservative region with strong immunogenicity, playing a practical value of research in vi-rus recombinantment and screening the wild strains of chlaymdia trachomatis phage.【总页数】4页(P634-637)【作者】姚卫锋;卢桂玲;谢艳秋;于旺;宋蒙蒙;李士颖【作者单位】天津市中医药研究院附属医院邮编300120;天津市中医药研究院附属医院邮编300120;天津市中医药研究院附属医院邮编300120;天津市中医药研究院附属医院邮编300120;天津市中医药研究院附属医院邮编300120;天津市公安医院【正文语种】中文【中图分类】R373.9【相关文献】1.猪流产嗜性衣原体omp-1基因噬菌体疫苗免疫效果评价 [J], 刘伟;张畅;张发明;李应超;杨君敬;凌勇;袁吉磊;何诚2.衣原体噬菌体衣壳蛋白Vp1及其高保守区二级结构及B细胞表位研究 [J], 姚卫锋;卢桂玲;谢艳秋;于旺;宋蒙蒙;李士颖3.衣原体噬菌体Chp3衣壳蛋白Vp1二级结构及B细胞抗原表位预测 [J], 姚卫锋;刘原君;李燕;齐蔓莉;田敬群;刘全忠4.应用噬菌体展示7肽文库技术进行蓝舌病1型病毒VP2蛋白表(拟)位分析 [J], 熊和丽;宋建领;王金萍;苗海生;李华春5.衣原体GPIC噬菌体衣壳蛋白Vp2的克隆、表达和鉴定 [J], 刘原君;姚卫锋;侯淑萍;齐蔓莉;王惠平;刘全忠因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1的原核表达及提纯研究的开题报告
衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1的原核表达及提纯研究的开题报告题目：衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1的原核表达及提纯研究背景和研究意义：衣原体是革兰氏阴性细菌，被认为是一种特殊的细胞寄生物，它们存在于人类和其他动物的许多器官中。
衣原体噬菌体phiCPG1是一种噬菌体，可以感染衣原体。
衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1是该噬菌体中的主要结构蛋白，它的表达和纯化对研究噬菌体感染衣原体的机制以及噬菌体作为抗生素的应用具有重要意义。
研究内容：本研究的主要内容是对衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1进行原核表达和提纯。
在表达载体pET28a中克隆目标基因vp1，通过诱导表达和Ni-NTA亲和层析纯化得到目的蛋白。
蛋白的质量和纯度通过SDS-PAGE和Western blot进行检测，同时利用动态光散射仪（DLS）测定蛋白颗粒的粒径。
研究目标：1.成功构建含vp1基因的表达载体pET28a；2.成功在原核表达系统中表达vp1蛋白；3.通过Ni-NTA亲和层析技术纯化vp1蛋白，获得高质量、高纯度的目的蛋白；4.测定蛋白颗粒的粒径，为后续研究衣原体噬菌体的结构及其与衣原体的相互作用提供基础数据。
研究方法：1.基因克隆：将vp1基因克隆到表达载体pET28a中，得到含vp1基因的重组质粒。
2.原核表达：将重组质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）细胞中，将细胞在IPTG的诱导下表达vp1蛋白。
3.蛋白纯化：通过Ni-NTA亲和层析纯化vp1蛋白。
4.蛋白检测：用SDS-PAGE及Western blot检测蛋白质量和纯度。
5.蛋白颗粒粒径测定：使用动态光散射仪测定蛋白颗粒的粒径。
预期成果及意义：1.成功构建了vp1基因的表达载体，为后续研究衣原体噬菌体结构和与衣原体的相互作用提供基础数据。
2.成功原核表达和纯化vp1蛋白，为后续研究衣原体噬菌体的结构和机制提供实验基础。
3.通过测定蛋白颗粒的粒径，评估并优化蛋白的纯化条件，为后续应用提供可靠数据。
西南大学18秋1165《微生物免疫》在线作业答案
1、下列只存在于成熟B细胞表面的免疫球蛋白是1. IgD2. IgEzxl3. IgA4. IgG5. IgM2、感染病毒的细胞在胞核或胞浆内存在可着色的斑块状结构称1.异染颗粒2.极体3.空斑4.蚀斑5.包涵体3、能独立生活的最小原核细胞型微生物是1.衣原体2.立克次体3.支原体4.病毒5.细菌4、检查钩端螺旋体常用的方法是1.革兰氏染色2.抗酸染色3.姬姆萨染色4.墨汁染色5.镀银染色5、革兰阳性菌类似菌毛作用的成分是1.膜磷壁酸2. SPA3.肽聚糖4.壁磷壁酸5. M蛋白6、氯霉素的耐药机制为细菌产生1.乙酰转移酶2.灭活酶3.钝化酶4.β-内酰胺酶5.水解酶7、有关衣原体的描述不正确的是1.沙眼衣原体含有DNA和RNA两种核酸2.沙眼衣原体对氨基糖甙类抗生素(如链霉素)不敏感3.沙眼衣原体包涵体中无糖原存在,而肺炎衣原体包涵体有糖原存在4.沙眼衣原体是专性细胞内寄生,自然宿主是人和小鼠5.衣原体主要引起眼结膜炎与泌尿生殖道炎症8、具有感染性的衣原体物质是1.始体2.包涵体3.原体4.中间体5.核糖体9、在显微镜下观察真菌时，常用于处理标本的物质是：1.硝酸银2.几丁质3.葡聚糖4.纤维素5.脂多糖10、下面哪个药物是抑制细菌肽聚糖合成的抗生素1.氯霉素类2.β-内酰胺类3.氟喹诺酮类4.氨基糖苷类5.四环素类11、细菌的繁殖方式主要是1.二分裂法2.裂殖法3.芽生法4.复制法5.以上均不是12、下列那项不是血清学诊断抗原1.环状沉淀抗原2.变态反应抗原3.凝集反应抗原4.沉淀反应抗原5.补体结合抗原13、有关L型细菌的特性，错误的是1.抗原性改变2.需用低渗含血清培养基3.呈高度多形性4.革兰染色均为阴性5.对青霉素不敏感14、紫外线杀菌原理是1.与细菌核蛋白结合2.破坏细菌细胞壁肽聚糖结构3.破坏D.NA.构型4.使菌体蛋白变性凝固5.影响细胞膜通透性15、构成病毒核心的化学成分是1.类脂2.蛋白质3.肽聚糖4.磷酸5.核酸16、细菌的合成性代谢产物不应包括1.热原质2.维生素3.色素4.细菌素5. H2S17、人类T细胞不具备的受体是1. IgG Fc受体2. C3b受体3. E受体4. DHA受体5. IL—2受体18、人类B细胞成熟的中枢免疫器官是1.胸腺2.淋巴结3.脾4.骨髓5.法氏囊19、关于病毒的概念,错误的是1.病毒在细胞外不能合成蛋白质2.包膜病毒需用宿主的细胞膜作为包膜成分3.病毒在细胞外不能产生能量4.病毒在细胞外不能合成自身复制所需要的酶5.病毒需降解宿主细胞的DNA以获得核苷酸20、传染病最危险的传染源是1.食具2.患病动物3.患者4.病人家属5.带菌者21、发现杆状细菌芽孢的科学家是1.科恩2.科赫3.巴斯德4.埃伦贝格5.弗莱明22、新生儿溶血反应属于1.Ⅳ型变态反应2.Ⅴ型变态反应3.Ⅲ型变态反应4.Ⅰ型变态反应5.Ⅱ型变态反应23、菌落是指1.细菌在培养基上繁殖而形成肉眼可见的细胞集团2.不同种细菌在培养基上生长繁殖而形成肉眼可见的细胞集团3.一个细菌在培养基上生长繁殖而形成肉眼可见的细胞集团4.一个细菌细胞5.从培养基上脱落的细菌24、不属于细菌基本结构的是1.鞭毛2.细胞膜3.细胞质4.核质5.细胞壁25、关于支原体的生物学性状，下述错误的是1.呈多形性2.细胞膜中胆固醇含量高3.无细胞壁4.有独特生活周期5.能通过滤菌器26、卡介苗的获得是通过1.结构变异2.抗原变异3.以上均可4.耐药性变异5.毒力变异27、惟一能通过胎盘的Ig是1. IgG2. IgA3. IgD4. IgE5. IgM28、鸟类B细胞成熟的中枢免疫器官是1.淋巴结2.骨髓3.脾4.法氏囊5.胸腺29、类毒素是指1.内毒素经甲醛处理后脱毒而保持抗原性的物质2.外毒素经甲醛处理后脱毒而保持抗原性的物质3.外毒素经甲醛处理后脱毒并改变抗原性的物质4.细菌素经甲醛处理后的物质5.抗毒素经甲醛处理后的物质30、下列描述的微生物特征中，不是所有微生物共同特征的是1.个体微小2.只能在活细胞内生长繁殖3.种类繁多4.可无致病性5.分布广泛31、前噬菌体是指1.成熟的子代噬菌体2.以整合到宿主菌染色体上的噬菌体基因组3.尚未完成装配的噬菌体4.进入宿主菌体内的噬菌体5.尚未感染细菌的游离噬菌体32、干扰素抗病毒的特点是1.阻止病毒体与细胞表面受体特异结合2.直接灭活病毒3.抑制病毒体成熟释放4.作用于受染细胞后,使细胞产生抗病毒作用5.增强体液免疫33、T细胞分化成熟的场所是1.胸腺2.脾3.淋巴结4.腔上囊5.骨髓34、细菌的“核质以外的遗传物质”是指1.核蛋白体2.质粒3.异染颗粒4.性菌毛5. mRNA35、人体内半衰期最长的抗体是1. IgE2. IgG3. IgM4. IgA5. IgA36、维持细菌固有形态的结构是1.细胞膜2.荚膜3.细胞质4.芽胞5.细胞壁37、关于乙醇的叙述,不正确的是1. .用于体温计浸泡消毒2.经常用于皮肤消毒3.浓度在70-75%时消毒效果好4.易挥发,需加盖保存,定期调整浓度5.用于粘膜及创伤的消毒38、浆细胞是那种细胞活化，增殖，分化形成的1. K细胞2. T淋巴细胞3.树状突细胞4. B淋巴细胞5.巨噬细胞39、由（）介导的免疫应答为体液免疫1. K细胞2. NK细胞3. T细胞4. B细胞40、初次注入大量抗毒素的马血清所引起血清病的发病机理属于1.Ⅴ型变态反应2.Ⅰ型变态反应3.Ⅱ型变态反应4.Ⅲ型变态反应5.Ⅳ型变态反应41、细菌内毒素的成分是1.脂多糖2.肽聚糖3.荚膜多糖4. H抗原5. O抗原42、带菌者的描述正确的是1.感染后，临床症状明显，传染他人2.体内带有条件致病菌3.携带某病原菌但无临床症状，又不断向体外排菌者4.体内带有正常菌群5.病原菌潜伏在体内，不向体外排菌43、下列哪一类细胞产生IgE抗体1.肥大细胞2.巨噬细胞3. B淋巴细胞4. T淋巴细胞5.嗜碱粒细胞44、噬菌体感染的特异性取决于:1.噬菌体的核酸类型2.噬菌体的形态3.其核酸组成与宿主菌是否相符4.噬菌体蛋白与宿主菌表面受体分子结构的互补性5.细菌的种类45、化脓性球菌侵入血流后在其中大量繁殖，又到其他脏器引起化脓性病灶，称为1.菌血症2.毒血症3.败血症4.病毒血症5.脓毒血症46、未成熟B细胞表面的膜表面Ig的类型是1. IgM2. IgD3. IgG4. IgA5. IgE47、与衣壳生物学意义无关的是1.介导病毒体吸附易感细胞受体2.构成病毒特异性抗原3.本身具有传染性4.保护病毒核酸5.病毒分类.鉴定的依据48、具有粘附作用的细菌结构是1.芽胞2.荚膜3.普通菌毛4.性菌毛5.鞭毛49、下列可形成分泌免疫球蛋白的是1. IgA2. IgA3. IgE4. IgG5. IgM50、朊病毒(或称朊毒体)的化学本质是1.核酸2.核酸.蛋白质和多糖3.糖蛋白4.蛋白质5.核酸和蛋白质51、抗体对病毒的中和作用主要是1.阻止病毒与靶细胞相互作用2.诱导干扰素产生3.杀伤细胞内的病毒4.抑制病毒生物合成5.中和病毒毒素52、病毒在细胞内的复制周期过程,正确的描述是1.特异性结合、脱壳、复制、组装及释放2.吸附、结合、穿入、生物合成、成熟及释放3.吸附、脱壳、生物合成、成熟及释放4.吸附、穿入、脱壳、生物合成、组装、成熟及释放5.结合、复制、组装及释放53、Ⅳ型超敏反应重要病理学特征是1.中性粒细胞浸润2.嗜酸性粒细胞浸润3.巨噬细胞浸润4.红细胞浸润5.淋巴细胞浸润54、下列描述病毒的基本性状中 ,错误的是1.专性细胞内寄生2.只含有一种核酸3.可在宿主细胞外复制病毒组装成分4.形态微小,可通过滤菌器5.结构简单,非细胞型结构55、预示早期感染的抗体是1. IgA2. IgG3. IgA4. IgE5. IgM主观题56、NK细胞参考答案：是一类不需特异性抗体参与也无需靶细胞上的MHCI类或II类分子参与即可杀伤靶细胞的淋巴细胞。
临床执业医师考试知识点：衣原体
临床执业医师考试知识点：衣原体2017年临床执业医师考试知识点：衣原体衣原体为革兰氏阴性病原体，是一类能通过细菌滤器、在细胞内寄生、有独特发育周期的原核细胞性微生物。
以下是店铺带来的详细内容，欢迎参考查看。
共同特征1.体积大于病毒，约250~500nm(纳米)，在光学显微镜下勉强可见。
2.含有DNA和RNA。
3.有细胞壁，过去认为无肽聚糖，但是最新研究结果表示“肽聚糖”存在于复制中的“沙眼衣原体”内。
衣原体目(包括人类病原体“沙眼衣原体”在内的革兰氏阴性寄生生物)过去被认为是一个罕见的例外：它们编码负责“肽聚糖”生物合成的基因，对-内酰胺抗生素敏感，但试图检测衣原体“肽聚糖”的努力过去却一直没有成功。
现在，这个被称为“衣原体异常”的矛盾已被解决。
利用一个新颖的“点击化学”(click chemistry)方法来通过D-氨基酸二肽探针标记“肽聚糖”的这项研究，显示“肽聚糖”存在于复制中的“沙眼衣原体”内。
只含微量的细胞壁，由二硫键连接的多肽作为支架。
4.对多种抗生素敏感。
5.具有一些酶类但不够完善，这些酶缺乏产生代谢能量的`作用，要由宿主细胞提供，须严格胞内寄生。
能在鸡胚卵黄囊膜、小白鼠腹腔和HeLa细胞组织培养物等多种活体内生长繁殖。
6.有独特发育周期，仅在活细胞内以二分裂方式繁殖。
7.对抑制细菌的抗生素和药物敏感。
衣原体Chlamydia以鹦鹉热病原体和沙眼病原体为代表的专性寄生性的微生物。
最早是由宫川米次等(1935)从腹股沟淋巴肉芽肿患者的染色体中作为宫川小体而发现的，被命名为宫川氏体(Miyagawanella)(E.Brumpt，1938)。
其后，相继又出现很多其它名称，例如作为立克次氏体的亲缘种被称为Rickettsiaformis、Neor-ickettsia等，也有作为病毒类而称之谓鹦鹅热和腹股沟淋巴肉芽肿病毒(psittacosislymp hogranvlo-ma，virus，PLV)、鹦鹅热病毒群(Psittacosisvirusgroup)等，相当混乱。
衣原体噬菌体衣壳蛋白Vp1及其高保守区二级结构及B细胞表位研究
衣原体噬菌体衣壳蛋白Vp1及其高保守区二级结构及B细胞表位研究姚卫锋;卢桂玲;谢艳秋;于旺;宋蒙蒙;李士颖【摘要】目的:分析衣原体噬菌体Vp1蛋白及其高保守区的二级结构并预测其B 细胞表位.方法:以ClustalX程序比对各株衣原体噬菌体衣壳蛋白Vp1序列获得高保守区序列.以Vp1氨基酸序列为基础,采用Gamier-Robson法、Chou-Fasman 法、Eisenberg 法和Karplus-Schulz法分析蛋白二级结构;按Kyte-Doolittle法、Emini法和Jameson-Wolf法预测蛋白的抗原表位.结果:衣原体噬菌体Vp1蛋白的二级结构以β折叠为主,有少量α螺旋;其高保守区含多个抗原位点,预测其N端1-8,103-110,158-164,189-196,322-332,427-434,478-488为优势表位.结论:衣原体噬菌体Vp1蛋白及其高保守区存在复杂的蛋白结构,可形成多个可选表位.【期刊名称】《天津医科大学学报》【年(卷),期】2014(020)003【总页数】4页(P188-191)【关键词】微病毒;蛋白;结构;分析【作者】姚卫锋;卢桂玲;谢艳秋;于旺;宋蒙蒙;李士颖【作者单位】天津市中医药研究院附属医院皮肤科,天津300120;天津市中医药研究院附属医院皮肤科,天津300120;天津市中医药研究院附属医院皮肤科,天津300120;天津市中医药研究院附属医院皮肤科,天津300120;天津市中医药研究院附属医院皮肤科,天津300120;天津公安医院内三科,天津300042【正文语种】中文【中图分类】Q7衣原体感染与人类的多种疾病关系密切[1]，同时本身也是衣原体噬菌体的宿主。
衣原体噬菌体与衣原体的关系逐渐成为研究的热点。
近10年发现的衣原体噬菌体已达5株，其20面对称衣壳均含有3种蛋白分子,其中Vp1（virus protein1）分子量最大，在衣壳中含量最高，肽链长度最长，有形成标志性抗原表位的良好物质基础[2]。
鹦鹉热嗜衣原体CPSIT_0420蛋白的克隆表达
鹦鹉热嗜衣原体CPSIT_0420蛋白的克隆表达摘要：目的CPSIT_0420蛋白的克隆表达，为进一步研究其结构与功能奠定基础。
方法构建重组质粒pGEX-6P-1/CPSIT_0420，经PCR、测序鉴定后将其转化至表达宿主菌E.coli BL21中。
结果构建了重组质粒pGEX-6P-1/CPSIT_0420，并在E.coli BL21菌中高效表达出Mr约为28kDa的GST-CPSIT_0420目的蛋白，表达了相对分子量（Mr）与预测分子量相近的可溶性蛋白。
重组蛋白经GST树脂成功纯化。
结论成功克隆表达了CPSIT_0420蛋白，为进一步研究其结构与功能奠定了基础。
关键词：鹦鹉热嗜衣原体；克隆；表达鹦鹉热嗜衣原体（Chlamydophila psittaci，Cps）是一种主要的人畜共患病的动物原性病原体[1]，专性细胞内寄生，具有独特的发育周期，包含形态和生物学特性不同2种发育状态：原体（EB）和始体（RB）[2]。
现代治疗和预防性药物设计的关键是选择合适的药物靶点。
Zhong等[3]明确指出，作为一种胞内寄生菌，衣原体要进入无吞噬功能的宿主细胞，并维持在宿主细胞包涵体内的正常生长，形成发育周期，调控宿主细胞基因的转录与翻译，必须要分泌效应蛋白与宿主细胞相互作用，相互调节[4]。
因此，寻找新的Cps和宿主细胞相互作用的关键效应蛋白作为设计防治性药物的靶点是医学基础研究攻关的重点。
本实验将克隆表达预测的分泌效应蛋白CPSIT_0420蛋白，为进一步研究其结构与功能奠定基础。
1材料和方法1.1 材料 pGEX6p-1质粒，E.coliBL21菌株，THP-1细胞株：均为南华大学病原生物学研究所保存。
AxyPrep PCR试剂盒（AXYGEN）、GST纯化树脂（默克Novagen）、BCA蛋白浓度测定试剂盒（碧云天公司）Tag酶、T4连接酶、BamHⅠ、NotⅠ限制性内切酶（美国Promega公司）。
衣原体-Microbiologyincludes
牢记安全之责，善谋安全之策，力务 安全之 实。2020年12月11日 星期五10时15分43秒 Friday, December 11, 2020
相信相信得力量。20.12.112020年12月 11日星 期五10时15分 43秒20.12.11
谢谢大家！
生活中的辛苦阻挠不了我对生活的热 爱。20.12.1120.12.11Friday, December 11, 2020
微生物学检查法
直接涂片镜检 分离培养 核酸检测
小结
衣原体的主要概念 衣原体的发育周期 沙眼衣原体、肺炎衣原体引起疾病
树立质量法制观念、提高全员质量意 识。20.12.1120.12.11Friday, December 11, 2020
人生得意须尽欢，莫使金樽空对月。10:15:4310:15:4310:1512/11/2020 10:15:43 AM
人生得意须尽欢，莫使金樽空对月。10:15:4310:15:4310:1512/11/2020 10:15:43 AM
做一枚螺丝钉，那里需要那里上。20. 12.1110 :15:431 0:15De c-2011 -Dec-2 0
日复一日的努力只为成就美好的明天 。10:15:4310:15:4310:15Friday, December 11, 2020
衣原体的共同特征
具有细胞壁 专性细胞内寄生 有独特的发育周期
发育周期与形态染色
原体（elementary body，EB） 始体（initial body）
衣原体的发育周期
包涵体
细胞内含繁殖的始体和子代原体的空泡
沙眼衣原体包涵体 透射电镜 5000
培养特性
专性细胞内寄生 能在鸡胚、小鼠和细胞繁殖