ViiA7相对定量简易操作指南
QIAamp
本操作手册适用于离心法从140ul 血清、血浆、尿液、细胞培养上清液、无细胞体液、拭子浸液中纯化病毒RNA 。
如需配合QIAcube 核酸纯化工作站实现自动化病毒RNA 纯化，请参阅QIAcbue 操作说明。
如处理更大量的样本（可多至560ul ），按照标准操作流程增加适当比例的裂解液以及载样次数即可。
针对一些病毒含量很低的样本，可参照附录中样本浓缩操作步骤对样本进行浓缩。
注意事项注意事项：：1、 所有步骤所有步骤均均于室温下室温下操作操作(15–25°C)。
2、 样本收集和离心后，血浆（未经处理，或用肝素之外的抗凝剂处理）或血清可在2–8°C 下储存至多6个小时。
如需长期保存，推荐分装后在–20°C 或 –80°C 保存。
冷冻血浆或血清样本不可反复冻融样本不可反复冻融样本不可反复冻融。
反复冻融将会促使蛋白变性沉淀，因而病毒含量降低，导致纯化得到的病毒RNA 的量减少。
并且，反复冻融形成的冷凝蛋白将有可能导致QIAamp 膜堵塞。
冷凝蛋白可通过 6800 x g 下快速离心3 分钟去除，小心吸取上清后立即进行下一步操作。
这一步骤不会影响病毒的含量。
3、 本操作步骤不适用于RNA 和DNA 分离，样本中存在的样本中存在的DNA 和RNA 会被同时纯化出来会被同时纯化出来。
如需完全去除DNA 的影响，推荐使用无细胞体液作为病毒RNA 纯化的起始样本。
含有细胞的样本，例如脑脊液、骨髓、尿液、以及大部分拭子，首先需要过滤，或者1500 x g 离心10分钟以上取上清使用。
如DNA 和RNA 已经一并完成纯化，可将洗脱液经过无RNA 酶的DNA 酶消化处理，接着热处理将DNA 酶灭活。
4、 可以纯化所有大于大于200nt 的RNA 分子分子，小分子RNA 将不能得到高效率的纯化。
本操作手册仅限内部学习使用！如有任何疑问，请联系：胡川（189****3075）准备事项准备事项：：1、 所有样本所有样本平衡至室温平衡至室温2、 Buffer AVE 平衡至室温3、 每个样本每个样本提供提供4个2ml 收集管收集管，，根据不同需要适当自备根据不同需要适当自备无无RNA 酶超净2ml 收集管/1.5ml 离心管4、 按照按照下面的配方准备下面的配方准备AW1 和AW2 BufferBuffer AW1以浓缩液的形式提供。
荧光定量PCR原理与实验流程
林天时 王秋泉 Field Application Scientist 400 820 8982 / 800 820 8982 - 2 - 3 cnmcbsupport@
Life Technologies™ Proprietary | 1
实时荧光定量PCR技术原理
•ViiA™ 7实时荧光定量PCR系统
Channel 1 2 3 4 5 6 Proprietary | 54 Life Technologies™ Dye Examples FAM™, SYBR®, SYTO®9 (MeltDoctor™), Fluorescein, SYPRO® Orange VIC®, JOE™, TET™, HEX™ NED™, BODIPY® TMR-X，TAMRA™ ROX™, Texas Red® LIZ™ Alexa Fluor®, Joda-4 Excitation Wave Lenthgh 455~485nm 510~530nm 540~550nm 570~590nm 630~650nm 650~670nm Emission Wave Lenthgh ~520nm ~550nm ~580nm ~620nm ~680nm ~710nm
455~485nm
•7500实时荧光定量PCR系统
Channel 1 2 3 4 5
Life Technologies™ Proprietary | 52
Dye Examples FAM™, SYBR® VIC®, JOE™ NED™, Cy3，TAMRA™ ROX™, Texas Red® CY5 Dye™
定量PCR如何工作?
• PCR反应液加入了 各种类型的荧光标记物
一个PCR循环
7500 2.0相对定量简易操作流程
8. 分析之后的结果，可以利用菜单中的 File>Export 功能，导出 Excel 格式的结果。 若想存储图片结果，可直接在图片上单击鼠标右键，选择 Save as，存成 JPEG 格式的图片。
4. 在“Select relative quantitation setting” 中设置内参基因及对照样本。
相对定量实验简易操作流程
5. 进入 Run Method 界面，设定反应条件及反应体积。
6. 点击
，文件储存成 Experiment Document Single Files （*.eds）格
applied biosystems 7500荧光定量PCR仪 相对定量实验简易操作流程 SDS 2.0
相对定量实验简易操作流程
7500定量PCR仪 相对定量实验简易操作流程
1. 双击桌面图标 ，或从 Start >All Programs > Applied Biosystems > 7500
Software > 7500 V2.0 开启软件。进入主界面后选择 Advanced Setup
相对定量实验简易操作流程量实验简易操作流程
3.1 在
界面中设置基因及样品。利用
添加
新的基因，并在Target Name中编辑基因名称，Reporter和Quencher
中选择所标记的荧光基团及淬灭基团。对于Quencher的选择，如果是
MGB探针，请选择NFQ-MGB；如果是TAMRA探针，请选择TAMRA；
如果是其他形式的非荧光淬灭基团（如BHQ），请选择None。
相对荧光定量PCR的常用方法和注意事项
相对定量方法实际操作（常用方法）parative Delta-delta Ct法定量流程（RG6000软件设置）1).先对样品中的目的基因与看家基因分别做标准曲线，通过标准曲线确定两个基因的扩增效率是否一致或接近；将扩增效率优化为一致。
2).同一样品分别进行看家基因和目的基因的扩增，分列在两页中P1 P2相同的样品在两页里命名成相同的名称，并定义为unknown分别分析P1和P2页选delta-delta Ct选项依次填入，并定义对照样品公式：Comparative Delta-delta Ct 法的特点、注意事项及实际应用1). Comparative Delta-delta Ct 法是很常用的一种相对定量方法，其最大特点是，当优化的体系已经建立后，在每次实验中无需再对看家基因和目的基因做标准曲线，而只需对待测样品分别进行PCR 扩增即可。
2). 其缺点是，每次实验都默认目的基因和看家基因的扩增效率一致，而并非真实扩增情况的反映，这里势必存在一定的误差。
3). Comparative Delta-delta Ct 法展开定量实验前，在预实验中，必需对目的基因和看家基因做两组标准曲线。
Rotor-Gene 的软件会自动给出两组标准曲线的R 值、扩增效率等信息，如果两组标准曲线的斜率，即M 值的差小于0.1，那么后续实验中就可以用Comparative Delta-delta Ct 法进行相对完成分析F=2—待检样品看家基因平均Ct 值对照组目的基因平均Ct 值 对照组看家基因平均Ct 值— 待检样品目的基因平均Ct 值 ——定量分析。
反之，如果M差值大于0.1，就无法用该方法进行相对定量分析。
此时的解决方法有两种，一是优化实验，使两组标准曲线的斜率差值小于0.1，二是换用其它的相对定量方法。
应用实例：如上图，将标准品进行梯度稀释后，分别对目的基因（Gene of Interest）和看家基因（Housekeeper Gene）做标准曲线。
7500 2.0相对定量
AppliedBiosystems7500荧光定量PCR仪相对定量实验简易操作流程SDS 2.07500定量PCR仪相对定量实验简易操作流程1.双击桌面图标，或从Start >All Programs > Applied Biosystems > 7500Software >7500 V2.0开启软件。
进入主界面后选择Advanced Setup（Fig1-1）。
Fig 12.默认进入Setup 下的Experiment Properties 界面2.1输入实验名称（Experiment Name）2.2确认仪器型号2.3在实验类型中，选择Quantitation-Standard Curve2.4选择试剂种类2.5确认运行模式3.进入Setup下的Plate Setup 界面，编辑基因（Target）及样本（Sample）：Fig23.1在界面中设置基因及样品（Fig2-1）。
利用“Add New Target”（Fig2-2）添加新的基因，并编辑基因名称及所标记的荧光种类。
例如基因名称为18S，报告基团为FAM，淬灭基团为NFQ-MGB，进行如下图的设定。
也可以通过下拉菜单进行不同的选择：TAMRA作为淬灭基团时选择TAMRA，其他非荧光淬灭基团选择None。
还可以利用其他按钮将之前已添加的基因进行保存或删除。
利用AddNew Sample（Fig2-3）添加新的样本，并编辑样品名称。
3.2在进行样品板的排布。
利用鼠标单击或拖拽以选择反应孔，然后勾选左侧的基因及样本（Fig3-1），同时在Task选项中指定该反应孔的类型（U代表未知样本，N代表阴性对照，Fig3）。
Fig33.3在“Select relative quantitaion settings”中设置内参基因及参照样本（Fig3-3）。
3.4在“Select the dye to use as passive reference”（Fig3-4）中设置参比荧光，如下。
相对定量简易操作流程SDS1.4
applied biosystems 7300/7500/7500 FastReal‐Time PCR System相对定量简易操作指南SDS 1.41. 仪器启动1.1. 打开计算机，待开机完成后再打开 7300/7500/7500 Fast 主机电源；1.2. 待仪器自检完成显示绿灯常亮后，双击计算机屏幕上的软件快 捷图标 开启ABI Prism 7300/7500/7500 Fast SDS软件 ；2. 实验文件设置2.1. 点击进入Create New Document界面：2.2. 在New Document Wizard界面中：在Assay中选择 ddCt (Relative Quantitation) Plate ○1 ，点击Next ○2；2.3. 编辑Detector：2.3.1.选中此次实验所用的Detector ○1，点击Add将Detector加入 Detectors in Document ○2，点击Next○3；2.3.2. 新建Detector：点击New Detector建立新的Detector○1，输入相应信息后点击ok○2，点击Next ○3；也可点击 Create Another，继续添加Detector；Name: 输入基因名称；Reporter Dye: 选择荧光种类；Quencher Dye: MGB 淬灭基团选None；TAMRA淬灭基团选TAMRA；SYBR 选 none；2.3.3. 删除Detector：如果文件中Detector过多需要删除，则在set up 界面中，点击Tools，并在下拉菜单 Detector Manager 中选择不需要的Detector 进行删除；2.4. 命名样品：选定Plate Document 中放样品的孔，选择Detector，在Detector列中Use下勾选○1，同时在Task栏中选择样品的种类○2：Target （目的基因），ENDO（内参基因），点击Finish○3；2.5. 保存文件：点击 File，在下拉菜单中选Save As，输入文件名称并存成SDS Document (*.sds) 的格式；2.6. 设置PCR反应条件：Plate Document 上点击Instrument，进入PCR反应程序设定窗口，可直接更改温度和时间，也可以利用Add Cycle，Add Hold，Add Step或Delete来更改反应步骤，信号收集设置在延伸步骤；使用 SYBR染料法，则点击Add Dissociation Stage添加熔解曲线步骤；3. 结果分析：3.1. 分析查看相对定量数据：运行结束后，单击分析数据；3.2. 在Results选项卡下查看扩增结果：3.3. 相对定量研究分析：点击File，选择New，进入New document Wizard，在Assay中选择ddCt (Relative Quantitation) study○1，点击Next○2；3.3.1. 单击Add plates添加反应板，然后单击Open；在一个RQ研究中最 多可添加10个反应板，单击Finish；如果要同时分析多个plate document，必须确认:a.所有PCR反应板的条件必须一致；b. 正确设置sample name；c. 所有PCR反应板需要有相同的内参基因；3.3.2. 数据分析：选择数据显示方式○1，选择对照样品○2，选择柱状图显示方式○3，进行分析○4；3.4. 导出数据：可点击File，在下拉菜单中选择Export，接着选择Results，导出 .csv数据，用Excel打开。
Voluson730超声诊断仪操作规程
Voluson 730彩色超声诊断仪操作规程、仪器对电源和环境的要求1. 工作环境温度：10-40 °C2. 相对湿度：30%-85%。
3. 电源：100〜120V或220V三线（带接地线）：频率50赫兹。
4. 交流电电源稳压器配置与否取决于当地电源的质量和厂商的要求。
、开机操作程序1. 使用前的准备：1）确保仪器后面的电路开关置于“ OFF”的位置。
2）将仪器连接到电流负荷可达15A、带接地线的电源上。
3）根据使用需要选择探头，将探头连接器插入探头插座，顺时针锁定探头，把探头放在探头架上。
4）连接脚踏开关（必要时）。
5）E CG及生理选件连接（必要时）。
2. 接通电源：1）将主电源开关和控制面板上电源开关开启2）仪器进行初始化和常规自检。
3）监视器出现二维显示。
3. 输入病人资料：1）在键盘上选择“”新建病人键，显示病人资料输入界面2）根据提示输入病人相关资料。
3）再按“”键，资料输入并存储，结束病人资料新建4. 选择探头：1）确认所需探头已经安装好。
2）在键盘上选择" （S）”按键，再从触摸面板界面上选择适当的探头及应用条件。
3）探头可以在多个检查种类/应用中使用。
5. 成像模式及选择：仪器初始化后，二维图像显示在屏幕上。
a ） 按M 、C 、PW 、2D 、3D/4D 、HI 等控制键，可开始不同的显示 模式。
b ） 按相同的控制键，即可退出此模式。
二维成像a ）在控制面板中按压有关控制键和转动有关按钮，可以调节二维图按钮；TGC 调节TGC 滑钮，增益调节可直接旋转 2D 旋钮。
M 型成像a ） M 型图像的获取：按操作面板上的 M 键，用轨迹球将移动二维 图像上M 型取样线定位至所需图像区域，要退出可再按 M 键,b ） 调节M 型显示增益与二维图像的调节方法相同。
多普勒成像a ）脉冲多普勒成像：只需按PW 控制键，再次按PW ,可关闭脉冲 多普勒成像并显示先前的模式。
ViiATM7Dx荧光定量PCR仪操作规程
ViiATM 7 Dx荧光定量PCR仪操作规程Ⅰ. 目的描述ViiATM 7 Dx荧光定量PCR仪的使用和一般维护的标准操作规程。
Ⅱ. 范围适用于ViiATM 7 Dx荧光定量PCR仪的使用和维护。
Ⅲ. 职责由研究所制定程序性文件，所主任负责监督实施。
Ⅳ. 规程1 打开ViiATM 7 Dx仪器：1.1 拨动ViiATM 7 Dx仪器后面的电源开关，然后等待仪器初始化。
（注：当触摸屏显示Main Menu时，ViiATM 7 Dx仪器准备就绪，可以使用。
）1.2 打开ViiATM 7 Dx仪器计算机：1.2.1 按下计算机的电源按钮，然后等待计算机初始化。
1.2.2 当Login屏幕出现时，输入用户名和密码，然后单击OK。
1.2.3 在桌面上，双击ViiATM 7 Dx Sofeware。
（或选择Start→All Programs→Applied Biosystems →ViiATM 7 Dx Instrument→ViiATM 7 Dx Software.）2 关闭ViiATM 7 Dx仪器：不使用时，Applied Biosystems ViiATM 7 Dx实时PCR仪在低功率模式下进行；然而，ViiATM 7 Dx仪器可以完全断开电源，从而部件没有电源。
2.1 关闭ViiATM 7 Dx仪器：2.1.1如果ViiATM 7 Dx仪器触摸屏不是空白，触摸以使仪器置于待机模式。
2.1.2拨动ViiATM 7 Dx仪器后面的电源开关。
2.2 关闭ViiATM 7 Dx仪器计算机：在桌面，选择Start→Shut Down。
3 保存ViiATM 7 Dx仪器：Applied Biosystems ViiATM 7 Dx实时PCR仪可以长时间断开电源和保存。
停用时间长度决定您断开ViiATM 7 Dx仪器电源的方法。
3.1 所需要的材料：MicroAmp Optical 384孔反应板（在运输期间或超过1周的停用期间，空白板能够保护ViiATM 7 Dx仪器的内部部件）。
ViiA7实时荧光定量PCR仪
级线
围,
(384‐well)
Amplification of plasmid DNA (7‐7E10 total copies/rxn)
35 钟 级线 应结 围. 达 9
TaqMan Fast Universal MMx, 5ul Rxn, 384‐well format
12 April 2010 © 2010 Life Technologies. All Rights Reserved. | Proprietary and Confidential.
12 April 2010
© 2010 Life Technologies. All Rights Reserved. | Proprietary and Confidential.
11
灵
: 1.5
异
RNaseP copies: ‐ 10,000 ‐ 6,667 ‐ 4,500 ‐ 3,000 ‐ 1,500 ‐ 1,000
户
评
“… The Next Generation Instrument in the format of a low‐density array/microfluidic card … are in agreement with results obtained on ABI 7900HT device in a 96‐well format.”—Principal Investigator, Medical University of Vienna
Launched ABI Prism® 7000 Instruments
2007
Launched StepOne™ and StepOnePlus™ Instruments
实时荧光定量PCR仪ViiA7操作步骤
实时荧光定量PCR仪ViiA操作步骤7——以 RNase P示例实验为例一、定义384孔样品模块的实验属性打开电脑访问ViiA 7 软件，然后打开左侧仪器开关。
单击Experiment Setup 图标。
单击Experiment Properties 以访问 Experiment Properties 屏幕。
在 ViiA 7 软件中设计 RNase P实验示例时，请输入：二、使用Define 屏幕定义RNase P 示例实验的目标基因、样品。
1.单击 Define 以访问 Define 屏幕。
2.定义目标基因a.单击 New 以增加和定义目标基因。
b.在目标基因表中，单击 Target Name 列中的一个单元格，并输入：c.（可选）单击 Save 以便将新增或原有的正在编辑的目标基因保存到Target Library 。
d.单击 Add Saved 从目标基因库添加目标基因。
3.定义样品a.单击 New 以增加和命名样品。
b.在样品表中，单击 Sample Name 列中的一个单元格，并输入：c. （可选）单击Save 以将新增或原有的正在编辑的样品保存到Sample Library 。
d.单击 Add Saved 从样品库添加样品。
4.（可选）定义生物学平行测定a. 在 Define Biological Replicates Groups 表中，单击 New 以增加和命名生物学平行测定组。
b.从下拉菜单选择 Color 。
c.单击 Comments 列，以便为该生物学平行测定组添加注释。
注：实验示例不使用生物学平行测定组。
保留Biological Replicate Groups 空白。
5.选择用作参比荧光的染料ROX 。
三、分配目标基因、样品和生物学组利用 Assign（分配）屏幕将目标基因、样品和生物学平行测定组分配到RNase P 实验示例反应板内的各孔。
注：您可以在不进行分配的情况下开始运行，但在扩增曲线中，将不会有实时数据（只有在您已经对板进行设置后，才可以见到扩增曲线）。
实时荧光定量PCR技术原理
Excitation Wave Lenthgh 455~485nm 510~530nm 570~590nm
•StepOnePlus™实时荧光定量PCR系统
Emission Wave Lenthgh ~520 ~550 ~620
Channel 1 2 3 4
44 Life TeFAM™, SYBR®
•ViiA™ 7实时荧光定量PCR系统
Channel 1 2 3 4 5 6
45 Life Technologies
Dye Examples
FAM™, SYBR®, SYTO®9 (MeltDoctor™), Fluorescein, SYPRO® Orange
VIC®, JOE™, TET™, HEX™
13 Life Technologies
14 Life Technologies
15 Life Technologies
16 Life Technologies
17 Life Technologies
18 Life Technologies
?
19 Life Technologies
Taq is special . . .
温度
单一PCR产物的熔解曲线
荧光
53 Life Technologies
温度
多个PCR产物的熔解曲线
54 Life Technologies
非特异扩增
引物二聚体
定量PCR的数学原理
55 Life Technologies
PCR动力学曲线和四个阶段
平台期 线性增长期 指数增长期 基线期
56 Life Technologies
对数图谱
59
基线
荧光定量PCR仪使用说明
7500荧光定量PCR 仪使用说明注意事项：实验过程必须戴干净的一次性乳胶手套进行操作。
PCR 反应所用的96孔板、8联管或单管必须为ABI7500专用，凸盖PCR 管禁止使用。
使用8联管两侧需用空管支撑，使用单管四角需用空管支撑，以防止板槽受力不均。
实验数据用光盘刻录，禁止U 盘拷取，数据可暂存于本机电脑硬盘中，各实验室D 盘中有指定文件夹，中心外部人员数据存于FUWU 文件夹下的子文件夹中。
操作步骤开机放入反应板注：关闭仪器托盘时，应按一个角度推压托盘的右侧。
按压此处 ！ 待电脑启动稳定后，按压7500仪器电源按扭，等待仪器启动（约30 s ）。
当仪器只显示Power 状态指示灯时，方可按压托盘以打开它。
（以下过程按字母顺序a →q 进行操作）创建反应板文件双击电脑桌面上SDS 软件图标打开SDS 软件；a. 从 Assay 下拉列表中选择反应板类型c. 单击Next 反应板文件类型有以下几种：1. Relative Quantification (ddCt) Plate（相对定量） 2. AbsoluteQuantification(StandardCurve)（绝对定量，标准曲线）3. Allelic Discrimination （等位基因鉴别）4. Plus/Minus （阳性/ 阴性实验）d. 选择要添加到反应板文件的探针（引物），单击Add 添加选中探针e. 如果在列表中未列出所需探针，请单击New Detector 创建新探针f. 单击Nextb. 为反应板文件命名为反应孔设置样品名g.选取探针相同的反应孔h.点击反应孔对应的探针。
i.单击 Task栏的下边指定探针任务。
j.选择Use （使用）。
k.单击Finish （完成）。
ghijkl.选取反应孔，直接输入相应样品名（也可右键，调出反Well Inspector对话框，在Sample Name中进行修改）设定PCR循环参数、运行程序1.实验结束后关闭软件。
QS 6 7 相对定量简易操作指南
Applied Biosystems QuantStudio6&7实时荧光定量PCR仪V1.X相对定量简易操作流程1.双击桌面图标，或从Start>All programs>Applied Biosystems>QuantStudio™Real-Time PCR Software>QuantStudio™Real-Time PCR Software开启软件。
进入主界面后选择“Experiment Setup”。
2.选择“Setup”下的“Experiment Properties”界面。
2.1输入实验名称(Experiment Name)。
2.2选择仪器类型及Block类型。
2.3选择相对定量实验类型，“Comparative C T”。
2.4选择试剂种类。
Taqman探针法选择“Taqman Reagents”，SYBR染料法选择“SYBR Green Reagents”。
2.5选择运行模式。
普通试剂选择“Standard”，快速试剂选择“Fast"。
3.选择“Setup”下的“Define”界面设置基因名称(Target)和样品名称(Sample)。
3.1在“Targets”下点击“New”，添加待测基因。
在“Target Name”中编辑基因名称，“Reporter”和“Quencher”中选择所标记的荧光基团及淬灭基团。
对于“Quencher”的选择，如果是MGB探针，请选择NFQ-MGB；如果是TAMRA探针，请选择TAMRA；如果是其他形式的非荧光淬灭基团则选择None。
3.2在“Samples”下点击“New”，添加待测样品。
在“Sample Name”中编辑样品名称。
3.3在“Analysis Settings”下选择合适的“Reference Sample”（对照样品）和“Endogenous Control”（内参基因）。
4.选择“Setup”下的“Assign”界面编辑样品板。
荧光定量仪操作指南
目录：1 安全预防法2 安装交货包装仪器的安装功能性单元Mastercycler ep realplex启动realplex模块与热模块之间的连接Mastercycler ep realplex 与计算机之间的连接与其它部件的连接realplex软件的安装安装主程序数据恢复开始realplex软件的运行3. 操作管理者登陆登陆用户变更系统配置对使用者的管理新用户建立编辑用户删除用户用户层循环仪realplex 模块系统层特性登陆出错信息用户登陆软件更新检测项目管理建立检测项目打开检测项目保存检测项目保存模板文件模板文件的使用复制检测项目检测项目的输出检测项目的输入建立文件夹删除检测项目和文件夹探针管理染料管理校准背景校准颜色校准使用商业的校准工具包进行的颜色校准客户特有的染料的校准数据库管理当前数据库的自动保存当前数据库的保存输入数据库数据库的归档4 编程（检测项目的建立）建立一个新的检测项目建立板布局染料的确定参考染料的选择样本容积输入探针类型的确定背景的确定样品类型的定义标准阳性对照阴性对照未知样品复制和标准系列的自动建立定量的样品类型相对定量的样品类型多plex分析例子单plex分析的例子熔点分析中的样品类型终点测定中的样品类型+/-检测项目中的样品类型基因辨识中的样品类型样品的复制与剪切删除样品几个样品的归组子检测项目的测定板布局的删除完整检测项目的板布局编辑pcr程序的建立用模板程序建立一个pcr程序不用模板程序建立pcr程序程序步的插入和编辑温度循环（1－5步循环）保温暂停声音熔解曲线终点程序的复制程序的删除测量点的确定热盖设置5 操作（监测）样品的加载模块温度控制样品体积启动检测项目单个样品的选择单个样品类型的选择循环仪状态当前运行检测项目的中断继续运行检测项目终止检测项目mastercycler ep realplex 作为pcr的使用 mastercycler ep realplex 作为荧光计的使用关闭6 分析概要打开检测项目打开在运行的检测项目打开子检测项目单一检测项目的选择使样品处于不活动状态样品类型的选择分析模式的选择图标缩放存储默认设置图表的保存和复制样品数据的保存和复制编辑报告模板报告的应用分析的保存调用分析定量阈值确定基准线测定标准曲线分析multiplex 分析相对定量阈值的测定多plex 分析的估算单plex分析的估算熔解曲线分析阈值的测定分析终点测量标准曲线分析+/-检测项目将终点测定作为数据源的+/-检测项目分析模式阈值的测定pcr数据作为数据源的+/-assay阈值测定分析多plex分析基因测定阈值测定分析7 维护清洁仪器的一般方法热模块的清洁热模块的验证与校准8 故障查找一般故障在sybr绿色分析中发生的错误qrt－pcr过程中发生的错误登陆新用户的建立创建一个检测项目检测项目的保存执行检测项目概述板布局pcr程序开始检测项目当前运行检测项目的中断继续运行检测项目退出检测项目分析10 技术数据功能性单元Mastercycler ep realplex图1：关闭的realplex模块前面观1 realplex模块2 状态显示3 密封压板（锁住状态）4 控制面板的挂钩（Mastercycler ep realplex不需要）5 热模块图2：打开的realplex模块前面观1 密封压板（开启状态）2 realplex模块3 热模块放入试验样本后，向前拉动realplex模块，覆盖住插入的试管。
ViiA7 技术参数-MDx
ViiA7技术参数1、应用领域1.1 基于标准曲线的绝对定量Standardcurve(absolutequantitation)1.2 相对标准曲线Relativestandardcurve1.3 基于比较Ct值的相对定量ComparativeCt(relativequantitation)1.4 融解曲线分析Meltcurveanalysis(asastandaloneapplication)1.5 存在/不存在Presence/Absence(Plus/minus)1.6 基于或非基于实时扩增的基因分型Genotyping(withorwithoutreal-timeamplification)1.7 *基于荧光定量PCR的蛋白表达分析功能，并提供同品牌原厂试剂1.8 *基于荧光定量PCR的microRNA分析，并提供同品牌原厂试剂1.9 *基于荧光定量PCR的基因拷贝数（CNV）分析，并提供同品牌原厂试剂2、仪器规格2.1 热循环系统：珀耳帖效应系统2.2 *通道数：6色激发光通道和6色检测光通道可自由组合，最多检测21种不同的荧光光谱。
2.3 模块规格：支持4种模块(标准96孔模块,快速96孔模块,384孔模块, *微流体芯片模块)。
2.4 反应体积：标准96孔模块：10-100μL；快速96孔模块：10-30μL；384孔模块：5-20μL；微流体芯片模块：1μL；2.5 支持耗材：常规96孔(0.2mL)反应板与光学盖膜，快速96孔(0.1mL)反应板与光学盖膜；384孔反应板与光学盖膜。
2.6 温控模块最高升降温速率：6.5°C/秒2.7 温度范围：4°C–100°C2.8 温度精度：+/-0.25℃2.9 温度均一性：+/-0.5℃2.10 熔解曲线分辨率：小至0.04°C2.11 *光学系统：卤钨灯(寿命2000小时)、6色激发滤光片，6色检测滤光片、冷CCD成像；2.12 安装时已校准染料：FAM,SYBR®,SYTO®9(MeltDoctor),Fluorescein,SYPRO®Orange，VIC®,JOE,TET,HEX，TAMRA,NED,BODIPY®TMR-X，TexasRed®，LIZ，AlexaFluor®,Joda-4 2.13 *荧光染料：能同时检测并区分VIC荧光和TAMRA荧光，以用于基因拷贝数(CNV)检测 2.14 *被动参照染料：软件支持Rox荧光校正去除移液误差2.15 *数据同时采集：所有反应孔同时采集荧光数据，不同孔之间不存在时间差2.16 触摸屏：LCD/FullVGA(640x480)/32K色2.17 尺寸：53.3cm(21in)x63.5cm(25in)x64.5cm(25.4in)；重量：60.7千克3、已验证性能指标3.1 动态范围：9个对数的线性动态范围3.2 检测灵敏度：单拷贝检测/反应体系3.3 *精密度：最低可分辨1.5倍拷贝数差异，置信度99.7%3.4 运行时间：35分钟完成384孔板40个循环反应4、软件4.1 设置向导/高级设置/快速启动4.2 自动标准曲线建立4.3 相对标准曲线4.4 基因分型，数据和反应板读取4.5 移液反应/反应体系设计4.6 导出至excel,powerpoint,jpeg4.7 *远程监控（最多可监测15台机器，并控制其中4台机器）和Email通知4.8 高级分析选项，每孔手动基线设定。
爱威版全自动尿液分析检测标准操作规程样本
A VE75系列( CCD版) 全自动尿液分析仪【尿干化SOP】标准化操作程序1【目的】用于尿液干化学分析。
2【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动可由任一使用本SOP的工作人员提出并报经下述人员批准签字: 专业主管、科主任。
3【适用仪器】A VE-75系列( CCD版) 全自动尿液( 干化学) 分析仪;4【性能参数】4.1.检测项目: 尿胆原( UBG) 、胆红素( BIL) 、酮体( KET) 、血( BLD) 、蛋白质( PRO) 、亚硝酸盐( NIT) 、葡萄糖( GLU) 、白细胞( LEU) 、比重( SG) 、酸碱度( pH) 、维生素C( VC) 等; 【可扩充微量白蛋白、肌酐、钙】4.2.测试速度: 240条/小时(15秒/条);4.3.数据存贮量: 常规记录10000条; 急诊记录5000条; 质控记录1000条;4.4.试管架容量: 10个试管架( 容纳100份样本) ;4.5.样本量: 试管内样本液面不低于试管架标识刻度线;4.6.吸入样本量: 小于2.0mL;5【样本系统】5.1、采样要求: 参照《检验样本采集手册》。
5.2、标本的验收和处理: 清晨空腹第一次尿, 应在1h内送检。
应准备干净、干燥采尿杯, 在一般情况下, 由患者自己采集中段尿。
女性患者应清洗外阴部后留取。
为了保持尿沉渣中细胞成分维持原来的形态特征, 要求迅速送检。
1）新鲜尿液; 标本量>3毫升。
2）样本容器: 尿样本试管( 规格16X100mm圆底) 。
3）一次样本最大进样量: 50份, 可连续进样。
4）标本室温2h内完成检验, 于2~8℃可保存6h。
5.3、标本拒收标准: 参照《检验科标本管理制度》5.4、标本保存: 当天完成检测常规标本至报告发出后不保存6【试剂及试纸】:●A VE75系列全自动尿液分析仪专用试剂包( 清洗液) , 贮存于干燥4-35℃条件, 防紫外线、防潮、避免阳光直射。
不能进行冰冻或加温处理; 远离开放的电源装置; 在有效期内使用。
荧光定量相对定量操作方法
荧光定量相对定量操作方法
荧光定量实验通常包括以下步骤：
1. 制备标准曲线
使用已知浓度的标准物质，如DNA、蛋白质等制备一系列不同浓度的标准溶液。
将这些标准溶液分别加入荧光染料，测定它们的荧光强度，并绘制荧光强度与浓度之间的标准曲线。
2. 样品处理
样品可能需要进行预处理，如细胞裂解、核酸或蛋白质的提取和纯化等。
根据实验需要，样品还可能要进行稀释、消除背景干扰等操作。
3. 荧光检测
将荧光染料加入样品中，使样品中的目标分子与荧光染料结合，并在特定的波长下激发荧光。
使用荧光检测仪测定样品中荧光的强度。
4.计算浓度
根据标准曲线，将样品中荧光的强度转化为目标分子浓度。
对于相对定量实验，可以将不同样品的荧光强度进行比较，而无需计算准确浓度。
仪器设备标准操作规程
仪器设备标准操作规程⼀、仪器设备标准操作规程（⼀）西门⼦Viva-E⾎药浓度监测仪标准操作规程1.仪器组成本仪器由样品转盘、试剂转盘、⽐⾊杯转盘、试剂移液器、样品移液器、冷却单元、外部条形码读取器、分析仪⼯作站（DELL计算机及有关软件）等部件组成，各部件均各有电源插头与电源接线板相接。
2.接通电源将电源插头分别插⼊插座后，依次打开计算机等电源开关。
3.⽔箱系统将⽔箱装满⽔(10L DIH2O + 25mL 系统溶液)，将废⽔箱清空，在试剂转盘上将0.1N HCL瓶装满（盐酸），在样本转盘上W位置上⽤试管装上10%次氯酸钠（针清洗），在样本转盘上B位置上装上蒸馏⽔。
4.反应杯空⽩从主菜单上选择 [F5] Special functions特殊功能,选择 [F1]Rotor/system转盘/系统,双击 Blank rotor空⽩转盘,选择 [F2] Blank空⽩.5.系统重灌从主菜单上选择 [F5] Special functions特殊功能,选择 [F1]Rotor/system转盘/系统,双击灌注/清空系统 system,选择[F1] Refill system 重灌系统.6.请求定标从主菜单从选择 [F8] Request samples(请求样本)，选择样本类型Calibrate(定标)，选择要进⾏的测试，选择 [F9] Sample handling(样本处理)，下⼀步到装载定标液/质控说明7.请求质控从主菜单上选择[F8] Request samples(请求样本)，选择测试类型Control(质控)，双击质控名称，选择需要的测试，如果需要另外的质控,选择[F8]New sample(新样本) if ,并重复上⾯的 2-4步，所有的质控安排好后,选择 [F9] Sample handling(样本处理)，下⼀步到装载定标/质控说明。
8.请求样本从主菜单上选择 [F8] Request samples(请求样本)，选择样本类型如Normal(普通)，输⼊样本ID，输⼊样本姓名 (可选)，输⼊⽣⽇ (可选)，选择需要的测试，选择 [F8] New samples(新样本) 去请求下⼀个样本并重复 2-6步，选择 [F9] Sample handling(样本处理)，下⼀步到装载样本说明。
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Applied Biosystems ViiA™7实时荧光定量PCR仪V1.X相对定量简易操作流程
1.双击桌面图标，，或从Start>All programs>Applied Biosystems>ViiA7Software>ViiA7Software v1.X开启软件。
进入主界面后选择“Experiment Setup”。
2.选择“Setup”下的“Experiment Properties”界面。
2.1输入实验名称(Experiment Name)。
2.2选择Block类型。
2.3选择相对定量实验类型，“Comparative C T”。
2.4选择试剂种类。
Taqman探针法选择“Taqman Reagents”，SYBR染料
法选择“SYBR Green Reagents”。
2.5选择运行模式。
普通试剂选择“Standard”，快速试剂选择“Fast"。
3.选择“Setup”下的“Define”界面设置基因名称(Target)和样品名称(Sample)。
3.1在“Targets”下点击“New”，添加待测基因。
在“Target Name”中编
辑基因名称，“Reporter”和“Quencher”中选择所标记的荧光基团及淬灭基团。
对于“Quencher”的选择，如果是MGB探针，请选择NFQ-MGB；如果是TAMRA探针，请选择TAMRA；如果是其他形式的非荧光淬灭基团则选择None。
3.2在“Samples”下点击“New”，添加待测样品。
在“Sample Name”中
编辑样品名称。
3.3在“Analysis Settings”下选择合适的“Reference Sample”（对照样
品）和“Endogenous Control”（内参基因）。
4.选择“Setup”下的“Assign”界面编辑样品板。
利用鼠标单选或拖拽以选择反应孔，然后勾选左侧的基因及样本，同时在“Task”选项中指定该反应孔的类型(U代表未知样本，N代表阴性对照)。
5.选择“Setup”下的“Run Method”界面，编辑运行条件。
6.选择“Run”下的“Amplification Plot”界面，点击“Save As”保存文件，
点击“Start Run”开始运行。
7.实验运行结束后，进入“Analysis”界面，点击右上角的“Analyze”按钮分析数据并查看扩增结果。
7.1设置基线和阈值线：软件默认使用“Auto”功能自动设定基线和阈
值线。
查看阈值线或基线：选择需要查看的基因，将show后的“Threshold”及“Baseline”选择打勾。
扩增曲线图上会出现相应的基线范围和阈值线。
7.2点击”Gene Expression”查看基因表达柱状图。
7.3对于SYBR Green实验，在“Melt Curve Plot”界面中查看熔解曲线。
7.4查看“QC Summary”结果：反应孔存在异常情况时，会出现黄色三
角，数字1代表有一种情况，2代表有两种情况，以此
类推。
详细信息及解决方案可以在“Flag Details”中查看。
8.数据导出：在”Export”界面下导出需要的数据。