质粒提取试剂盒说明书

质粒提取试剂盒说明书
而载体构建的方法有多种：
常规克隆（分子克隆你不知道的那些事）
TA克隆（这么简单的TA克隆来领走吧）
同源重组（秒杀分子克隆！同源重组快人一步）
而经转化（DH5α感受态制备及转化）、菌落PCR（菌落PCR）验证得到阳性克隆后，就需要提取质粒了。

构载体是分子生物学中最基本的实验了，而提质粒可以说是最简单的实验了，完全不经过大脑，照着说明书就是“机械”操作，因为这个有现成的试剂盒嘛。

嗯，虽然简单，但是也不能不想啊，要不然提质粒是按什么原理来的你都不知道，这不，当你还在傻傻用试剂盒提质粒的时候，我已经开始自己配buffer了。

加灭菌水补足到1 L。

这个溶液的主要作用是细胞裂解，氢氧化钠会破坏细胞膜的结构，同时会使基因组变性成单链，而对质粒无影响。

在这一步，试剂盒的说明书上会说时间不能过长，因为时间长了对质粒也是有影响的。

而SDS可以和蛋白结合，使变性蛋白质将溶解在溶液中，从而多肽链更好地与基因组DNA缠绕。

这个溶液一看就是酸，用来中和碱的，同时还能清除掉蛋白质等细胞内的杂质，此时基因组也会复性沉淀下来。

另外醋酸钾会与Solution Ⅱ中的SDS发生作用，反应生成的十二烷基硫酸钾，而十二烷基硫酸钾不溶于水，会迅速发生沉淀，也就是我们提质粒时经常看到的沉淀。

好了，到这一步后，试剂盒法一般是要先离心，取上清去过柱，有的剂盒有一个柱的平衡液：。