黄酮类化合物的提取和分离
第三节 黄酮类化合物的提取与分离
2019-5-18
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槐米中芦丁的提取
槐米（槐树Sophora japonica L. 花蕾）加约6倍 量水，煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳至 pH8~9，在此pH条件下微沸20~30分钟，趁热 抽滤，残渣同上再加4倍水煎1次，趁热抽滤。 合并滤液，在60~70℃下，用浓盐酸调至pH为5， 搅匀，静置24小时，抽滤。沉淀物水洗至中性， 60℃ 干 燥 得 芦 丁 粗 品 ， 于 水 中 重 结 晶 ， 70~80℃干燥得芦丁纯品。
2019-5-18
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分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小 大顺序洗脱。
分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分 子大小顺序洗脱。
总的洗脱顺序：糖多的苷糖少的苷 游离苷元（极性小大）
2019-5-18
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葡聚糖凝胶柱层析中常用的洗脱剂有：
碱性水溶液（如0.1mol/L NH4OH）， 含盐水溶液(0.5mol/L NaCl等)。
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有时溶剂萃取过程也可以用逆流分 配法连续进行。常用的溶剂系统有： 水-醋酸乙酯，正丁醇-石油醚等。
溶剂萃取过程在除去杂质的同时， 往往还可以收到分离苷和苷元或极 性苷元与非极性苷元的效果。
2019-5-18
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（二）碱提取酸沉淀法
黄酮苷类虽有一定极性，可溶于水， 但却难溶于酸性水，易溶于碱性水， 故可用碱性水提取，再于碱水提取液 中加入酸，黄酮苷类即可沉淀析出。 此法简便易行，如芦丁、橙皮苷、黄 芩苷的提取都应用了这个方法。
2019-5-18
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在用碱酸法进行提取纯化时，应当注意 所用碱液浓度不宜过高，以免在强碱性 下，尤其加热时会破坏黄酮母核。在加 酸酸化时，酸性也不宜过强，以免生成 （金羊）盐，致使析出的黄酮类化合物 又重新溶解，降低产品收率。
黄酮提取方法
黄酮提取方法黄酮是一类天然植物化合物，具有多种生物活性和药理作用。
以下是黄酮的一种常用提取方法：材料和试剂：-植物材料（如花朵、果实、叶子等）-乙醇或丙酮（有机溶剂）-蒸馏水（无机溶剂）-丙酮-水混合溶液（可选，用于分离黄酮类化合物）步骤：1. 准备植物材料：选择新鲜的植物材料，并将其洗净、晾干，去除杂质和不需要的部分。
根据具体植物材料的性质，可以选择使用花朵、果实、叶子等部位。
2. 粉碎植物材料：将植物材料切碎或研磨成细粉，以增加提取效率。
可以使用搅拌器、研钵或研磨机等设备进行粉碎。
3. 提取溶剂选择：选择适当的有机溶剂，如乙醇或丙酮，作为黄酮的提取溶剂。
这些溶剂具有良好的溶解性，能够高效地提取黄酮类化合物。
4. 溶剂提取：将粉碎后的植物材料与适量的有机溶剂混合，放入容器中，并密封。
让溶剂与植物材料充分接触，并进行提取。
可以选择常温静置提取、加热提取或超声波提取等方法，以增加提取效果。
5. 过滤：将提取液过滤，去除植物材料残渣和固体颗粒，得到澄清的提取液。
6. 浓缩提取液：使用浓缩设备（如旋转蒸发仪）将提取液中的溶剂蒸发掉，使其浓缩。
得到浓缩后的提取物，其中包含了黄酮类化合物。
7. 可选步骤：如果需要分离和纯化特定的黄酮类化合物，可以使用进一步的分离技术，如液相色谱（HPLC）或柱层析等方法。
这可以根据目标黄酮类化合物的性质和目的来选择。
以上是一般黄酮提取的常用方法，但需要根据具体的植物材料和实验条件进行调整和优化。
提取黄酮的方法可以因不同的植物种类和黄酮化合物的特性而有所差异。
因此，在实际操作中，建议参考相关的科学文献、专利或咨询专业人士的建议，以获取更详细和准确的提取方法。
此外，为确保实验操作的安全性和可靠性，请在进行实验之前仔细阅读和遵守相关实验室安全操作规程，并使用适当的个人防护设备。
在进行黄酮提取实验时，应注意溶剂的挥发性和易燃性，确保实验室通风良好，并遵循实验室废弃物管理规定。
最后，对于黄酮的提取和应用，建议与专业领域的研究人员、科学家或专业医疗人员进行深入讨论和咨询，以获取更准确和专业的指导。
黄酮类化合物有哪些提取方法
黄酮类化合物有哪些提取方法
黄酮类化合物是一类具有丰富生物活性的天然产物，常用的提取方法有以下几种：
1. 浸提法：将含有黄酮类化合物的植物材料浸泡在适当的溶剂中，通过浸泡时间和温度来促使黄酮类化合物溶解于溶剂中，最后采用蒸馏或浓缩方法得到提取物。
2. 水蒸气蒸馏法：将含有黄酮类化合物的植物材料放入水蒸气蒸馏器中，通过水蒸气的温度和压力作用使植物材料中的黄酮类化合物挥发出来，再通过冷凝器冷却收集得到提取物。
3. 超声波辅助提取法：将植物材料与提取溶剂放入超声波提取器中，利用超声波作用使黄酮类化合物充分溶解于溶剂中，提高提取效率。
4. 微波辅助提取法：将植物材料与提取溶剂放入微波提取器中，通过微波辐射加热，使黄酮类化合物迅速溶解于溶剂中，提高提取效率。
5. 超临界流体提取法：利用超临界流体（如二氧化碳）具有较高的溶解能力和较低的粘度，在适当的温度和压力下将黄酮类化合物提取出来，再通过减压蒸发或蒸馏得到提取物。
这些方法可以根据不同黄酮类化合物的特性和需求进行选择和优化。
同时，需要
注意提取条件的选择，如溶剂的选择、温度和时间控制等，以达到最佳的提取效果。
黄酮类化合物的提取
黄酮类化合物的提取黄酮类化合物是一类具有重要药用价值的天然产物，其具有抗氧化、抗炎、降血压、降血脂等多种生物活性。
因此，黄酮类化合物的提取和分离一直是天然药物研究领域的热点之一。
本文将从黄酮类化合物的来源、提取方法以及提取过程中的优化等方面进行详细介绍。
一、黄酮类化合物的来源黄酮类化合物广泛存在于植物中，包括花、果实、叶子等部位。
其中，柑橘属植物中含有较为丰富的黄酮类化合物，如柚皮中含有丰富的柚皮素和橙皮素等。
此外，苦楝属植物也是黄酮类化合物的重要来源之一，如苦楝素和芦丁等。
二、黄酮类化合物的提取方法1.传统提取方法传统提取方法主要包括水浸提法、乙醇浸提法和超声波辅助浸提法等。
（1）水浸提法水浸提法是最为简单的提取方法之一，其操作简单、成本低廉。
但是，由于黄酮类化合物在水中的溶解度较低，因此水浸提法提取效率较低。
（2）乙醇浸提法乙醇浸提法是常用的黄酮类化合物提取方法之一。
乙醇具有良好的溶解性和挥发性，可有效地溶解黄酮类化合物。
但是，乙醇浸提法存在一定的毒性和燃爆风险。
（3）超声波辅助浸提法超声波辅助浸提法是一种新型的黄酮类化合物提取方法。
其利用超声波对植物细胞壁进行破碎，从而促进黄酮类化合物的释放和溶解。
该方法具有操作简单、高效快捷等优点。
2.现代提取方法现代提取方法主要包括超临界流体萃取法、微波辅助萃取法和固相萃取法等。
（1）超临界流体萃取法超临界流体萃取法是目前最为先进的黄酮类化合物提取方法之一。
其利用超临界流体对植物组织进行萃取，具有高效、环保等特点。
（2）微波辅助萃取法微波辅助萃取法是一种快速高效的黄酮类化合物提取方法。
其利用微波加热对植物组织进行破碎和溶解，具有操作简单、高效快捷等优点。
（3）固相萃取法固相萃取法是一种基于化学吸附原理的黄酮类化合物提取方法。
其利用具有亲和力的固相材料对黄酮类化合物进行选择性吸附，从而实现分离和提纯。
三、黄酮类化合物提取过程中的优化1.影响因素影响黄酮类化合物提取效率的因素主要包括原料质量、溶剂种类、浸提时间、浸提温度等。
黄酮类化合物的提取与分离工艺研究
黄酮类化合物的提取与分离工艺研究黄酮类化合物是一类具有丰富生物活性的植物次生代谢产物，被广泛应用于医药、食品和化妆品等领域。
本文将围绕黄酮类化合物的提取与分离工艺展开探讨。
一、黄酮类化合物的概述黄酮类化合物是一类含有两个苯环的多羟基化合物，具有较强的抗氧化作用和抗炎作用。
它们被广泛存在于许多植物中，如花朵、果实、根茎等部位。
由于其生物活性的独特性，研究人员对黄酮类化合物的提取与分离工艺进行了深入研究。
二、提取工艺的研究1. 溶剂提取法溶剂提取法是目前较为常用的提取黄酮类化合物的方法之一。
该方法利用溶剂对植物样品进行浸提，使黄酮类化合物溶于溶剂中，然后通过浓缩和干燥等步骤得到目标产物。
常用的溶剂有乙酸乙酯、甲醇等。
此方法对设备要求较低，但可能导致有机溶剂残留和产物的破坏。
2. 超声波辅助提取法超声波辅助提取法是一种改进的提取方法，通过超声波的作用，可以增加植物样品与提取溶剂的接触面积和渗透速度，加速黄酮类化合物的溶解和迁移。
该方法提取效果较好，但对设备要求较高，操作难度也较大。
三、分离工艺的研究1. 柱层析法柱层析法是一种常用的分离黄酮类化合物的方法。
该方法利用固定相和流动相之间的相互作用，根据黄酮类化合物的不同物理化学性质进行分离。
常用的固定相有硅胶柱、C18柱等。
该方法分离效果较好，但操作较为繁琐。
2. 薄层层析法薄层层析法是一种简便、快速的分离方法。
该方法将样品溶液涂布在薄层层析板上，通过固定相对黄酮类化合物进行分离，然后用显色剂喷洒在薄层层析板上，可通过色谱带的出现判断黄酮类化合物的位置。
该方法缺点是分离效果较差，但操作简便。
四、工艺优化与产物应用在黄酮类化合物的提取与分离工艺研究中，工艺的优化是十分重要的。
通过对溶剂种类、提取温度、提取时间等参数的不断调整，可以提高黄酮类化合物的提取率和纯度。
此外，对于产物的应用也是研究的重点，黄酮类化合物广泛应用于医药领域的抗炎药物、抗氧化剂和化妆品中的护肤成分等方面。
34532黄酮类化合物的分离
O
OCH3
＞
OH O
OH O
橙皮查耳酮
橙皮素
OH OCH3
黄酮类化合物的提取分离
4）不同类型的黄酮类化合物，先后出柱顺序： 异黄酮＞二氢黄酮醇＞黄酮＞黄酮醇
5）各种溶剂在聚酰胺柱上的洗脱能力由弱至强的顺序： 水＜甲醇或乙醇＜丙酮＜稀氢氧化钠水溶液＜甲酰胺＜二甲基甲酰胺
聚酰胺色谱法总结
吸附规律：与酚羟基的数目、位置及溶剂介质有关。 与溶剂介质的关系： 吸附力：水﹥甲醇乙醇（浓度由低到高）﹥碱性溶剂 洗脱规律： 与吸附规律正好相反，即吸附力越强，越难洗脱
例：
HO
O
OH
HO
OH O
OH
OH OH O
OH OH O
山柰酚
桑色素
黄酮类化合物的提取分离
2）当分子中羟基数目相同时，吸附力与形成氢键的位置有关。 例：
HO
O
HO
O
OH O
A
OHOΒιβλιοθήκη OHBO H
O CH3
黄酮类化合物的提取分离
3）分子内芳香化程度越高，共轭双键越多，则吸附越强。
例：
OH
HO
OH
HO
1 pH梯度萃取法
总游离黄酮的乙醚液
依次以5%NaHCO3 、5%NaCO3、 0.2%NaOH、4%NaOH
5%NaHCO3 酸化
7，4`-二OH
5%NaCO3 酸化
7-或4`-OH
0.2%NaOH 酸化
一般酚OH
4%NaOH 酸化
5-OH
2 聚酰胺柱色谱（分离黄酮最理想的吸附剂）
分离原理：氢键吸附
黄酮类化合物的提取分离
二、 黄酮类化合物的分离
黄酮类化合物的提取与分离
（三）炭粉吸附法
主要适于苷类的精制工作。通常，在植 物的甲醇粗提取物中，分次加入活性炭， 搅拌，静置，直至定性检查上清液无黄 酮反应时为止。过滤，收集吸苷炭末， 依次用沸甲醇、沸水、7%酚/水、15%酚/ 醇溶液进行洗脱，各部分洗脱液进行定 性检查（或用PPC鉴定）。
二、分离 较常用的分离方法有： （一）柱层析法
分离黄酮类化合物常用的吸附剂或
载体有硅胶、聚酰胺及纤维素粉等。 此外，也有用氧化铝、氧化镁及硅 藻土等。
1.硅胶柱层析： 此法应用范围最广，主要适于分离 异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及 高度甲基化（或乙酰化）的黄酮及 黄酮醇类。少数情况下，在加水去 活化后也可用于分离极性较大的化 合物，如多羟基黄酮醇及其苷类等。
2. 聚酰胺柱层析：
对分离黄酮类化合物来说，聚酰胺
是较为理想的吸附剂。其吸附强度 主要取决于黄酮类化合物分子中羟 基的数目与位置及溶剂与黄酮类化 合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合 能力的大小。
聚酰胺柱层析可用于分离各种类型
的黄酮类化合物，包括苷及苷元、 查耳酮与二氢黄酮等。
黄酮类化合物从聚酰胺柱上洗脱时
Hale Waihona Puke 酸 性 :7 ， 4- 二 OH 溶 于 5%NaHCO3 液 ) 7-或4-OH （5%Na2CO3液） 一般OH（0.2%NaOH） 5-OH （4% NaOH液）
（三）根据分子中某些特定官能团进 行分离
在黄酮类成分的混合物中，具有邻
二酚羟基成分与无此结构的成分， 可用铅盐法分离。有邻二酚羟基的 成分可被醋酸铅沉淀，不具有邻二 酚羟基的成分可被碱式醋酸铅沉淀， 达到分离的目的。
与黄酮类成分混存的其它杂质，如
分子中有羧基（如树胶、粘液、果 胶、有机酸、蛋白质、氨基酸等） 或邻二酚羟基（如鞣质等）时，也 可被醋酸铅沉淀达到去杂目的。
黄酮类化合物的提取分离方法
一.黄酮类化合物的提取分离方法按所用溶剂不同分类(1)热水提取法(以水作溶剂)---------- 灵芝多糖热水提取(2)有机溶剂萃取法-----------生产茶多酚工业试验、乳酸(3)碱提取酸沉淀法.---------- 橙皮苷、黄芩苷、芦丁等都可用此法提取.2.按提取条件不同分类(1)回流提取法----------从苦楝树皮中提取苦楝素(2)索式提取法----------柑橘属类黄酮(3)微波辅助提取法----------采用微波辅助法从黎蒿中提取黄酮类化合物(4)超声提取法----------提取山楂中黄酮类物质(5)超滤法----------黄岑甙(6)酶提取法----------采用纤维素酶对红景天进行酶解处理,可提高黄酮类物质的浸出率(7)超临界流体提取法----------竹叶黄酮、从干姜片中提取挥发油PH梯度萃取法：石榴果皮褐变产物、葛花总异黄酮高效液相色谱分析法：五味子、葛根高速逆流色谱分离法：甘草、分离蜜环菌发酵液乙醇提取部位柱色谱法（1）硅胶柱色谱：姜黄素（2）聚酰胺柱色谱：紫锥菊（3）葡聚糖凝胶柱色谱：回心草、茵陈蒿（4）大孔吸附树脂分离法：川草乌、三七总皂甙二. 槐米中芸香苷（芦丁）的提取方法有哪些（设计）方法：渗漉法、煎煮法、回流提取法（1）槐米粗粉20g加约120ml的%硼砂水溶液，提碱搅拌下加入石灰乳至pH8-9，取溶1v1.0 可编辑可修改2 并保持该pH 值煮沸20分钟，四层纱布趁热滤过，反复2次提取液 药渣浓盐酸调pH2~3搅拌，静置放冷，滤过。
滤液 沉淀 热水或乙醇重结晶芸香苷结晶碱溶酸沉法提取分离槐米中芸香苷的流程图（2）取30g 槐花米，置于250mL 烧杯中，加入%硼砂沸水200ml ，在搅拌下缓缓加入石灰乳调节pH=8～9，在此pH 下保持微沸20～30min ，趁热用棉花滤过，残渣再加水，同上法再煎一次，趁热抽滤。
合并滤液，在60～70℃下用浓盐酸调至pH=4—5，静置。
黄酮类化合物的提取和分离
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从柠檬果皮中分离降血压有效成分 提取分离实例1
OCH3
[L-1]
OCH3
HO
O
OH [L-2]
HO
O
OH O
O glc rha
258, 274, 357
glcO rha OH O
OH
273, 338
[L-3]
glc
HO
O
OH [L-4]
OCH3
HO
O
OCH3 OH
glc OH O
216, 273, 335
Fr. I-P
(pH5的酸水洗脱部分)(pH7的水洗脱部分)
Fr. O-R (pH9的氨水洗脱部分)
硅胶色谱法 硅胶层析
分别反复进行SiO 2CC(Wakogel-C-300) 并用CHCl3 -MeOH-HOAc-H2 O(70:15:12:3) 或(60:20:15:5)洗脱 或反复重复结晶
化合物L-1~L-11
规律：
苷元的羟基数越多，Ve/Vo越大，越
难以洗脱。 吸附作用
苷的分子量越大, 其上联结糖的数目
越多,Ve/Vo 越小, 容易洗脱。 分子筛原理
苷比苷元先洗脱。
15
黄酮类化合物的提取和分离 梯度pH萃取法
原理： 黄酮类化合物具有酸性、且不同数目和不同位置
的酚羟基的酸性强弱不同 适用范围：适用于分离酸性强弱不同的黄酮苷元 酸性：7,4′-OH＞ 7-或4′-OH ＞一般酚OH＞5-OH
极性大吸附能力强 e g ： A 苷元 B 二糖苷 C 单糖苷
Rf：A > C > B
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黄酮类化合物的提取和分离 聚酰胺柱色谱
原理：氢键吸附（作用） 洗脱规律：（先—后）
黄酮类化合物的提取_分离_纯化研究进展
３讨 论 ，
文献青海蕨麻中类黄酮的提取及其抗氧化性研究报道采用半 黄 酮类 化合物近年被 做为保健产品被越来越 多的国家开发 ， 大 微量超声波甲醇提取蕨麻类黄酮比常规索氏提取法的提取率高出 量 的新技术应用于提取分离黄酮类化合 物。
５ ４％ 嗍 。
１ ． １ ． １乙醇提取工艺 可重复利用 ， 已有树脂法被用于工业 生产 。
文献蕨菜黄酮类化合物的提取与分析报道 “ 用７ ０ ％的乙醇对 ２ ． ３ 溶剂萃取法 蕨菜浸提 ， 发现蕨菜的黄酮非常高， 可得到含量达百分之三十七点 利用化合 物在两种互 零三的蕨菜黄酮” 嘲 。文献葛根黄酮的提取与应用报道“ 对葛根黄酮 系数 的不 同 ， 使化合物从一种溶剂 内转移到另外一种溶剂 中。经过 进行乙醇提取研究， 得到百分之七点四三的总黄酮” 『 ３ 】 。文献报道在 反复多次萃取 ， 将绝大部分的化合物提取 出来 。可 以通过黄酮类化 提取银杏叶总黄酮过程中使用百分之七十乙醇提取明显高于水煎 合物极性 不同采用不 同极性 的有机溶剂进行萃取 ， 达到 分离黄酮的 法的收率。 目的 。
１ ． ２ 超 声提取法
法。 超声波产生的冲击流使植物细胞壁及整个生物体的破裂在瞬间 ２ ０ ０ ４ ， （ ６ ） ： １ － ４ ． 完成， 并释放出内含物质 ， 具有低温操作、 能耗低、 效率高、 传质速度 ［ ３ 降 洪雄 ，彭志远 ， 邹海英．葛根黄酮的提取与应用［ Ｊ 】 ． 吉首大学学 快、 溶解能力强、 不破坏有效成分的特点。 多篇文献报道超声提取葛 报（ 自然科学版） ， ２ ０ ０ ６， ２ ７ （ ３ ）： １ １ ３— １ １ ６． 根、 甘薯叶、 山楂叶、 元宝枫叶、 桑叶中的黄酮都得到很好的收率 。 ［ ４ ］ 韩志萍． 青海蕨麻 中类黄酮的提取及其抗氧化， 巨研究［ Ｊ 】 ． 食 品研 究
黄酮的提取与分离
（2）醇性溶剂展开时，同一类型苷元，
羟基越多，Rf越小，即Rf值依次为：
苷元 （Rf>0.7）> 单糖苷 > 双糖苷。
（3）醇性溶剂展开时，羟基被甲氧基取代， 因极性减小，Rf将增大。 （4）醇性溶剂展开时，如黄酮类化合物羟 基被苷化，因极性增大，Rf将下降。
5、大部分极性大的黄酮出现在滤纸的右上方， 极性小的黄酮则出现在滤纸的左下方。 6、大多数黄酮类化合物在纸色谱上用紫外光 灯检查时，可以看到有色斑点，以氨蒸汽处理 后常产生明显的颜色变化
⑤ 水层中含有较纯的黄酮苷类。
（四）聚酰胺吸附法
1、 聚酰胺对于黄酮类化合物是比较理想的 吸附剂
2、洗脱剂：不同浓度的乙醇、丙酮以及碱水
3、分离效果：粗分
例如：银杏叶黄酮的提取
（五）超临界流体萃取法
1、以CO2为单一流体萃取极性较低的游离黄酮
或黄酮的碳苷类；
2、在CO2中加入水、乙醇等作为夹带剂，萃取
③ 硅胶中混存少量金属离子，应预先用浓 盐酸处理除去，以免干扰分离效果。 ④ 分离黄酮苷元时，用氯仿-甲醇混合溶
剂做移动相；
⑤ 分离黄酮苷时，用氯仿-甲醇-水或乙酸
乙酯-丙酮-水做移动相。
2. 聚酰胺柱色谱
① 可用于分离各种类型的黄酮类化合物， 包括苷与苷元、查耳酮与二氢黄酮等。 ② 分离的机理: 主要为氢键吸附 ，其吸附
主峰 245-270 主峰 270-295 220-270
O CH O
肩峰 300-400
O
二氢黄酮（醇） 查耳酮类
OH O
O
橙酮类
主峰 查耳酮 2’-OH 使带 340-390 或 I 向红移影响大 340-390(Ia) 300-320(Ib) 主峰 370-430 常显 3-4 个峰
天然产物化学全套---黄酮类化合物的提取与分离
第五章 黄酮类化合物 （Flavonoids）
天然药化教研室 主讲教师：宋少江
1
本章内容
第一节 概述 第二节 理化性质及显色反应
第三节 提取与分离 第四节 检识与结构鉴定 第五节 结构研究实例
2
第三节 提取与分离
一、提取与粗分
苷元：用氯仿、乙醚、乙酸乙酯等回流提取。 苷及极性大的苷元：用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、 甲醇、醇-水加热提取。 提取黄酮苷类成分时，应避免发生水解，可按一般 苷的提取方法先破坏酶的活性。
A> B > C > D D>B>C>A
17
第三节 提取与分离
（三）根据分子中某些特定官能团进行分离
如：醋酸铅沉淀法（目前已不使用） ➢ 具有邻二酚羟基，可被醋酸铅沉淀 ➢ 不具有邻二酚羟基，可被碱式醋酸铅沉淀
二、分离
18
12
第三节 提取与分离
二、分离
黄酮类化合物在Sephadex LH-20(甲醇)上的Ve/V0
黄酮类化合物 芹菜素
木樨草素 槲皮素 杨梅素
山奈酚-3-半乳鼠李糖-7-鼠李糖苷 槲皮素-3-芸香糖苷 槲皮素-3-鼠李糖苷
取代图式 5,7,4'-三羟基 5,7,3',4'-四羟基 3,5,7,3',4'-五羟基 3,5,7,3',4',5'-六羟基
第三节 提取与分离
二、分离
（一）柱色谱法
1、硅胶柱色谱 主要用于分离弱极性和中等极性的化合物，应用最为广泛。 吸附规律：极性大的物质易于被吸附 一般洗脱顺序：苷元＞单糖苷＞双糖苷＞多糖苷
9
第三节 提取与分离
二、分离
黄酮类的提取方法
黄酮类的提取方法
提取黄酮类化合物的常用方法包括以下几种：
1. 溶剂提取法：将原料粉碎后与有机溶剂（如乙醇、丙酮、乙酸乙酯等）进行浸提，常用超声波辅助提取或连续提取，然后通过浓缩溶剂，得到黄酮类化合物的溶液。
2. 蒸馏提取法：将黄酮类含有的原料与溶剂共同蒸馏提取，在蒸馏过程中得到黄酮类化合物的提取物。
3. 水煎提取法：将原料切碎后加入适量的水，进行煎煮一段时间，然后通过过滤或离心等手段分离出液体，得到黄酮类化合物的提取物。
4. 萃取法：使用有机溶剂（如正己烷、二甲苯等）作为萃取剂，将原料与溶剂混合后搅拌或超声波辅助提取，然后通过分液漏斗或离心等分离工艺，得到黄酮类化合物的溶液。
5. 萃取树脂法：使用具有亲水或疏水性的萃取树脂固相萃取黄酮类化合物，将原料与树脂混合后搅拌或震荡一段时间，然后用适当溶剂洗脱黄酮类化合物。
需要注意的是，不同类型的黄酮类化合物在提取过程中可能需要采用不同的提取方法，因此具体的提取方法还需要根据目标黄酮类化合物的性质和特点来选择。
6.6-黄酮类化合物 -分离技术.
用途：分离各种类型的黄酮类成分，包括苷及苷元、
查耳酮、二氢黄酮等 。
双重色谱
相似相溶
水溶性相差较大
氢键吸附
水溶性相差不大
聚酰胺分离黄酮苷与黄酮苷元的规律性
①苷元相同时，洗脱先后顺序一般为：三糖苷 ＞双糖苷＞单糖苷＞苷元。 ②母核上羟基越多，洗脱速度相应减慢。 ③母核上羟基数目相同时，其位置的不同也影 响洗脱顺序。一般洗脱先后顺序为：邻位＞对 位或间位。 ④不同类型黄酮类成分，先后洗脱顺序一般为： 异黄酮＞二氢黄酮醇＞黄酮＞黄酮醇。 ⑤分子中芳香核、共轭双键多者较难被洗脱， 如查耳酮往往比相应的二氢黄酮难于洗脱。
5%NaHCO3
乙醚液 乙醚液 乙醚液 乙醚液 （脂杂）
5%Na2CO3
碱液(7,4’-二OH黄酮)
0.2%NaOH
碱液(7或4’-OH黄酮)
4%NaOH
碱液(一般酚OH黄酮)
碱液(或5-OH黄酮)
（3）柱色谱法
柱填充剂：聚酰胺、硅胶、氧化铝、氧化 镁、硅藻土、纤维素等。
① 聚酰胺柱色谱
原理：氢键吸附
黄酮类化合物分离技术
林 玲
黄酮类成分常用的提取、分离技术 醇提取法 热水提取法 碱溶酸沉法 溶剂萃取法 pH梯度萃取法 柱色谱法
2. 黄酮类化合物的分离
极性 差异
酚羟基
酸性 强弱
溶剂法 硅胶柱色谱
聚酰胺色谱
pH梯度
黄酮类化合物的分 离主要根据其极性 差异、酸性强弱、 相对分子质量大小 和有无特殊结构等， 采用适宜的分离方 法。
硅胶柱色谱
分离原理：极性吸附
适用范围：分离黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及高
度甲基化（或乙酰化）的黄酮及黄酮醇类
吸附规律：极性大吸附强
黄酮类化合物的提取
黄酮类化合物的提取1. 引言黄酮类化合物是一类具有重要生物活性的天然产物，广泛存在于植物中。
它们具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗菌等多种药理活性，对人体健康具有积极影响。
因此，黄酮类化合物的提取和研究对于开发新药、保健品以及食品添加剂等具有重要意义。
本文将介绍黄酮类化合物的提取方法，包括传统的溶剂提取法和现代的超声波辅助提取法。
同时还将讨论一些常见的黄酮类化合物提取实验中需要注意的问题，并介绍一些常用的分析方法。
2. 黄酮类化合物的溶剂提取法溶剂提取法是一种常用且有效的黄酮类化合物提取方法。
其基本原理是利用溶剂与植物材料中的黄酮类化合物发生相互作用，从而使黄酮类化合物从植物材料中转移到溶剂中。
2.1 实验步骤1.准备植物材料：选择含有丰富黄酮类化合物的植物材料，如柑橘皮、茶叶等。
2.粉碎植物材料：将植物材料研磨成粉末，增加溶剂与植物材料的接触面积。
3.溶剂选择：选择适当的溶剂，常用的溶剂有乙醇、甲醇、乙酸乙酯等。
溶剂的选择应考虑黄酮类化合物在该溶剂中的溶解度以及对环境和人体的安全性。
4.提取过程：将粉碎后的植物材料与选择好的溶剂混合，进行提取。
可以采用冷浸提取、热浸提取或回流提取等方法。
5.过滤和浓缩：将提取液通过滤纸过滤去除固体残渣，并利用旋转蒸发仪等设备将溶剂蒸发浓缩，得到黄酮类化合物的浓缩液。
2.2 实验注意事项1.操作环境要求：在通风良好的实验室中进行操作，避免溶剂蒸气对人体造成伤害。
2.溶剂选择：根据需要提取的黄酮类化合物种类选择合适的溶剂，并注意其安全性。
3.植物材料的处理：植物材料应干燥并研磨成细粉末，以增加提取效果。
4.提取时间和温度：提取时间和温度会影响黄酮类化合物的提取效率，需根据实验需要进行优化。
5.过滤和浓缩：过滤时要注意使用适当的滤纸，以防止黄酮类化合物丢失。
浓缩时要控制温度和压力，避免黄酮类化合物的分解。
3. 黄酮类化合物的超声波辅助提取法超声波辅助提取法是一种高效、快速且环境友好的黄酮类化合物提取方法。
碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理
碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理
碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理是一种常用的分离和提取黄酮化合物的方法。
黄酮类化合物属于一类重要的次生代谢产物，具有广泛的药理活性和抗氧化性质。
碱溶酸沉法通过调节溶液的酸碱性来实现黄酮类化合物的提取。
该方法通常包括以下步骤：
1. 初始处理：将待提取的植物材料进行粉碎、筛选，确保颗粒大小均匀，以增加提取效率。
2. 碱处理：将植物材料与一定比例的碱溶液混合，一般常用的碱有氨水或氢氧化钠。
通过碱性条件的调节，可以使得黄酮类化合物在碱性环境中形成离子或碱金属盐。
这有助于提高黄酮类化合物在提取溶剂中的溶解度，促进其提取。
3. 沉淀：在碱性条件下提取的溶液中，黄酮类化合物形成阳离子或盐的形式，通常与酸发生反应，回到中性环境中。
通过酸的加入，可以改变溶液的酸碱性，从而使得黄酮类化合物失去溶解性，发生沉淀。
4. 分离和纯化：通过离心或过滤等方法，将黄酮类化合物的沉淀与溶液分离。
得到的沉淀可以经过洗涤和干燥等步骤进行纯化。
5. 结晶与收集：最后，通过调节溶剂的挥发性来诱导黄酮类化合物的结晶。
结晶完毕后，可以用相应的溶剂溶解并收集黄酮类化合物。
总的来说，碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理是通过碱性条件下的形成离子或盐的方式，增强黄酮类化合物在提取溶剂中的溶解度，随后通过酸的加入使其沉淀，最终得到纯化的化合物。
这一方法的优势在于简单易行且高效，可广泛应用于黄酮类化合物的提取和纯化过程中。
黄酮类化合物的提取分离
各种溶剂在聚酰胺柱上洗脱能力由弱至强依次为：
水，甲醇，丙酮，氢氧化钠水溶液，甲酰胺，二甲基甲酰 胺，脲素水溶液。
黄酮类化合物从聚酰胺柱洗脱时有下列规律：
①苷元相同，洗脱先后顺序一般为： 三糖苷双糖苷单糖苷苷元 ②母核上增加羟基，洗脱速度相应减慢 羟基位置的影响：具有邻位羟基黄酮 具有对 位（或间位）羟基黄酮 ③不同类型的黄酮类化合物，先后流出顺序一般 是： 异黄酮二氢黄酮醇黄酮黄酮醇 ④分子中芳香核、共轭双键多者吸附力强，故查 耳酮往往较相应的二氢黄酮难于洗脱。
2. 苷类
水或热水提取，（多糖苷在热水中溶解度 较大，在冷水中溶解度较小）； 也可用EtOH、MeOH、EtOAc提取。
3. 含羟基的苷或苷元，可用碱水提取。
4. 提取花青素类可加入少量酸，但一般黄酮 类化合物则应避免。
二、粗提物的精制处理
1． 溶剂萃取法去杂
石油醚：除去叶绿素、胡罗卜素等脂溶性色素 水溶醇沉：除去蛋白质、多糖、大分子水溶性物 质 逆流分配：水-乙酸乙酯，正丁醇-石油醚 在萃取除杂的同时，可使不同极性或极性相差较 大者分离，如极性不同的苷和苷元，极性苷元和 非极性苷元。
２）硅胶层析
①对酚羟基多的黄酮类，如多羟基黄酮及 其苷类，硅胶减活性使用
②对酚羟基少的黄酮类，如甲基化、乙酰 化黄酮及二氢黄酮、异黄酮，则无须减 活性。
2. 利用分子大小不同，用葡聚糖凝 子筛分离
胶分
主要用两种型号的凝胶 Sephadex-G和Sephadex-LH20 分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小大洗脱。 分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分子大小洗脱。 总的洗脱顺序：糖多的苷 糖少的苷 游离苷元（极性 小大） 常用洗脱剂：①碱性水溶液，含盐水溶液 ②醇及含水醇 ③含水丙酮，甲醇－氯仿
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硅胶色谱法
硅 层 胶 析
分 反 进 SiO 2 别 复 行 CC(Wakogel-C-300) 并 CHCl3 -MeOH-HOAc-H O(70:15:12:3) 用 2 或 (60:20:15:5)洗 脱 或 复 复 晶 反 重 结 化 物 合 L-1~L-11
20
从柠檬果皮中分离降血压有效成分
258, 27 , 344 270, 336
O
O [L-9] O HO glc rha O
271, 338
OH
OCH3 OH
OH O
270, 330
glc
[L-11] rha glcO O
OH OH
OH O
275, 330, 412
22
满山红化学成分的提取分离
提取分离实例2
R1 主要成分： HO O OH OH O OH 山柰酚: R1=R2=H 槲皮素: R1=OH R2=H R2 杨梅素: R1=R2=OH
非极性固定相（非极性脂肪链） 含水溶剂（甲醇-水，极性大） 苷（极性大）（柱色谱分离） 苷元 < 苷（TLC色谱鉴别）
11
正相与反相层析
硅胶 固定相（硅醇）极性 > 流动相（醇）极性时为正相
聚酰胺 固定相（聚酰胺脂肪链）极性 < 流动相（醇水）极性时为反相
聚 酰 胺
硅 胶
TLC
TLC
12
黄酮类化合物的提取和分离
提取分离实例1
[L-1] HO
OCH3 O
OCH3 OH
[L-2] HO O
OH
O glc rha OH O
258, 274, 357
glcO rha
OH O
273, 338
[L-3] HO glc
glc O
OH
[L-4] HO CH3O
OCH3 O
OCH3 OH
O glc OH O
259, 277, 351
金丝桃甙： 槲皮素-3-O-β-D-gal 异金丝桃甙：槲皮素-3-O-α-D-gal
23
满山红化学成分的提取分离
满 红 山 叶 量 取 CaCO3 适 ,EtOH提 取 EtOH 提 液 浓 至 膏 沸 提 缩 浸 ,用 水 水 液 提 聚 胺 析 酰 层 1)水 洗 2)EtOH洗 水 液 洗 (无 盐 机 ) EtOH 液 回 EtOH 收 总 酮 黄 Et 2 O回 流 Et 2 O 液 放 ,析 置 晶 混 物 合 溶 EtOAc中 于 用 和 酸 饱 硼 水 液 摇 溶 振 硼 水 酸 层 HCl 沉 淀 聚 胺 析 酰 层 槲 素 皮 杨 素 梅 EtOAc液 山 酚 柰
15
黄酮类化合物的提取和分离
梯度pH萃取法
原理： 黄酮类化合物具有酸性、且不同数目和不同位置 的酚羟基的酸性强弱不同 适用范围：适用于分离酸性强弱不同的黄酮苷元 酸性：7,4′-OH＞ 7-或4′-OH ＞一般酚OH＞5-OH
溶于5%NaHCO3 溶于5%NaCO3 溶于不同浓度NaOH
16
黄酮类化合物的提取和分离
吸附规律：
极性大吸附能力强 e g ： A 苷元 B 二糖苷 C 单糖苷
9
Rf：A > C > B
黄酮类化合物的提取和分离
原理：氢键吸附（作用） 洗脱规律：（先—后）
聚酰胺柱色谱
母核上羟基增加，洗脱顺序递减 羟基数目相同时，有缔合羟基 > 无缔合羟基 苷元相同：三糖苷 > 双糖苷 > 单糖苷 > 苷元 不同类型黄酮类化合物的洗脱先后顺序为：
提取分离实例2
目 :去 鞣 等 少 质 的 除 质 ,减 杂 混 成 可 溶 加 溶 合 分 增 :增 不 于 水 成 在 中 溶 度 的 分 水 的 解
去除鞣质等 减少杂质
不 物 溶 EtOAc提 取 提 液 取 CHCl3 沉 (混 甙 淀 合 ) 聚 胺 析 酰 层 15% EtOH 金 桃 丝 甙 20~30% EtOH 异 丝 甙 金 桃
提取
提取： 苷元：极性小的溶剂，如氯仿、乙醚、乙酸乙酯等
回流提取
苷及极性大的苷元：
用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、醇-水加热提取 极性稍大的甙元一般指：羟基黄酮、双黄酮、 橙酮、查 尔酮
多糖苷类：一般用沸水提取
3
黄酮类化合物的提取和分离
粗分
溶剂萃取法（系统分离法） 碱提酸沉法 炭粉吸附法
4
黄酮类化合物的提取和分离
6
黄酮类化合物的提取和分离
原理：活性炭吸附黄酮苷类化合物
活性炭吸附法
用途：主要用于含量较高的黄酮苷类的精制
操作：植物的甲醇提取物中，分次加入活性炭，
搅拌，静置，定性检查上清液无黄酮反应时为止。
过滤，收集活性炭，依次用沸水、沸甲醇、7%酚/水、 15%酚/醇溶剂进行梯度洗脱，对各部分洗脱液进行定 性检查。 大部分黄酮苷类可以用7%酚/水洗下。
原理： 利用黄酮类与其它杂质极性 不同，选不同溶剂进行萃取 醇水液
浓缩，回收醇，加水
溶剂萃取法
药 材
水或醇-水，加热提取
提取液
浓缩，加3-4倍醇
沉淀（水杂）
水 液
依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取
石油醚层
叶绿素等脂 溶性成分
氯仿层
黄酮苷元
乙酸乙酯层
大极性苷元 小极性的苷
5
正丁醇层
黄酮苷
水层
多糖 蛋白质
异黄酮＞二氢黄酮醇＞黄酮＞黄酮醇。
分子中芳香程度高、共轭双键多，则聚酰胺对其的吸附力
强，故难于洗脱。 应用范围：适合各种类型的黄酮类化合物，包括苷、苷元、 查耳酮及二氢黄酮
10
聚酰胺“双重色谱”原理
苷与苷元聚 酰胺色谱
正相色谱
反相色谱
聚酰胺：极性固定相（极性酰胺基团） 洗脱剂：有机溶剂（氯仿-甲醇，极性小） 先洗脱：游离黄酮（苷元，极性小） Rf值： 苷元 > 苷
目的：使要得到的 化合物溶解，而使 蛋白质、黏液质等 大极性成分形成沉 淀除去
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从柠檬果皮中分离降血压有效成分
溶剂萃取法有机溶剂萃取 铅盐沉淀法铅盐沉淀法
Hexane提 物 取 (3.6g) 滤 液 依 用 次 Hexane, n-BuOH 提 取
提取分离实例1
水 性 分 溶 部 n-BuOH提 物 取 (134.47g) (38.55g) 溶 1500ml水 ， 220gP b(OH)Ac饱 水 液 于 中 加 和 溶 黄 铅 沉 色 盐 淀 加 20g NaHCO 饱 水 液 拌 和 溶 ,搅 1hr,静 ,过 置 滤 3 生 PbCO3 成 滤 液 6mol/LHCl调 pH 5.3 n-BuOH提 (500ml× 取 5)
7
黄酮类化合物的提取和分离
硅胶
分离方法
极性
氢键
聚酰胺 凝胶
柱色谱法
分子大小（量）
酸性
梯度pH萃取法 金属盐络合法
特殊结构
8
黄酮类化合物的提取和分离
硅胶柱色谱
硅胶是一种高活性吸附材料，其化学分子式为mSiO2· 2O nH
应用范围：
主要分离小极性和中等极性的化合物，应用最为广泛。 异黄酮、二氢黄酮（醇）、高度甲基化（乙酰化）的黄 、 酮及黄酮醇 多羟基黄酮、黄酮醇及其苷类：硅胶加水去活化
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黄酮类化合物的提取和分离
碱提酸沉法
原理：酚羟基与碱成盐，溶于水；加酸后析出
碱： 常用Ca(OH)2，即石灰乳(石灰水)
优点 A：使含酚羟基化合物成盐溶解
B：使含羧基杂质（果胶、粘液质、蛋白质等） 形成沉淀
注意 a：提取时，碱液浓度不宜过高。
b：加酸酸化时，酸性也不宜过强。
应用：芦丁和槲皮素的提取、分离和鉴定
凝胶色谱法凝胶层析
n-BuOH提 物 取 (4.26g, 粗 酮 ) 黄 类
水 层
目的： 除去Pb，生成 PbCO3
凝 过 (TSKgel-HW-40) 胶 滤 Fr. O-R (pH9的 水 脱 分 氨 洗 部 )
Fr. I-P Fr. A-H 水 脱 分 (pH5的 水 脱 分 (pH7的 洗 部 ) 酸 洗 部 )
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从柠檬果皮中分离降血压有效成分
柠 果 2400g(相 于 柠 ) 檬 皮 当 60个 檬 水 取 提 搅 成 浆 热 浸 ， 滤 碎 匀 ， 水 取 过
提取分离实例1
水提醇沉法
滤 液 浓 至 体 ， 三 量 缩 小 积 加 倍 EtOH， 置 夜 静 一 过 ， 液 缩 冷 干 滤 滤 浓 ， 冻 燥 水 取 (183g) 提 物 取 179.37g 目 :使 得 的 西 解 的 要 到 东 溶 ， 而 蛋 质 液 等 成 使 白 ,粘 质 形 沉 除 淀 去 用 500ml水 解 过 溶 ， 滤
5,7,3’,4’－四OH 3, 5,7,3’,4’－五 OH
3, 5,7,3’,4’,5’－ 六OH 三糖苷
6.3
8.3 9.2 3.3
槲皮素-3-芸香糖苷
槲皮素-3-鼠李糖苷
14
双糖苷
单糖苷
4.0
4.9
黄酮类化合物的提取和分离
葡聚糖凝胶柱色谱
规律： 苷元的羟基数越多，Ve/Vo越大，越 难以洗脱。 吸附作用 苷的分子量越大, 其上联结糖的数目 越多,Ve/Vo 越小, 容易洗脱。 分子筛原理 苷比苷元先洗脱。
醇及含水醇，如甲醇，甲醇-水，乙醇等。 其它溶剂：含水丙酮、甲醇-氯仿(凝胶会膨胀， 体积变大)。
13
黄酮类化合物在Sephadex-LH20(甲醇)上的Ve/Vo
黄酮类化合物 芹菜素 取代情况 5,7,4’－三OH Ve/Vo 5.3
木犀草素
槲皮素 杨梅素 山奈酚-3-半乳糖鼠李糖-7-鼠 李糖苷