5_氮杂胞苷对HL_60细胞中XIAP和Caspase_9表达水平的影响
5-氮杂胞苷对HL-60细胞中XIAP和Caspase-9表达水平的影响
Ｃ ｓａｅ９表达的相关性 ， ａｐ ｓ一 初步了解 Ｘ Ａ Ｉ Ｐ抗凋亡 的途径 。方法 干预前后 ＸＡ ＩＰ和 Ｃ ｓａｅ９的表达水平 。结果 ａｐｓ一
Ｌｎ Ｄ ｐ ｒ ｅｔｆＨ ｍａｏ ｇ ， ｅＳｃｎ ｏ ｉ ｌｆＨ ｂｉ ｄｃｌ ｎｖ￣ ｔ，ｈ ＇ｚｕ ｎ ５ ０ ０ Ｃ ｉ ｉ． ｅａｔ ｎ ｅ ｔ ｏｙ ｔ ｅｏｄＨ ｓ ｔ ｅｅ Ｍｅｉ ｉ ｉ Ｓ ｏａｈ ａ ｇ０ ０ ０ ， ｈｎ ｍ ｏ ｌ ｈ ｐａ ｏ ａＵ ｅ ｙ ｉ ａ
【 关键词 】 ５氮杂胞苷 ； Ｈ － 一 Ｌ６ ０细胞株 ； ＸＩ ＡＰ；
中 图分 类 号 ： ７３ ７ Ｒ ３ ． 文献标识码 ： Ａ
Ｃａ ｐ ｅ９ ｓ ａ － ｓ
文 章 编 号 ：０ ９— ４ ０ ２ １ ）５— ０ １０ ０ ６ （０ ０ ０ ０ ３—０ ４ ３
Ｉ ｌｕｅ ｃ ｆ５－ ｚ ｃ ｔｄ ｎｅ ｏ ｘ ｅ ｓｏ ｌ ｖ ｌｏ ＡＰ ｎｄ ｃ ｓ ａ ｅ ９ ｉ ｎｆ ｎ ｅ ｏ ａ ａ ｙ ｉ ｉ ｎ ｅ ｐｒ ｓｉ ｎ ｅ ｅ ｆＸＩ ａ ａ ｐ ｓ － ｎ ＨＬ－ ０ ｃ ｌｓ ６ ｅｌ
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０ ０ ０ 石 家庄 河北 医科 大学 第二 医院血液 科 ５００
骨肉瘤组织中XIAP mRNA、Caspase-9 mRNA的表达变化及意义
与骨 肉瘤 临 床病 理指 标 的联系 。方法 采用 原 位杂 交技术 检测 ５ １例骨 肉瘤 组 织 中 Ｘ Ａ Ｎ ＩＰ ｍＲ Ａ和 ｃ ｓａｅ９ ａｐｓ－
ｍＲ Ａ， Ｎ 并以 １ ０例骨软骨瘤 （ 良性病变 ） 骨 组织为对照（ 对照组） 。结果
ａ ｄ Ｃ ｓ ａ ｅ ９ ｍＲＮ ｉ ｓｅ ｓ ｒｏ ．Ｍ ｅｈ ｄ Ｔ ｅ ＸＩ ｎ ａ ｐｓ － Ａ ｎ ｏ ｔｏ ａ ｍａ ｅ ｔ ｏ ｈ ＡＰ ｍＲＮＡ ａ ｄ Ｃａ ｐ ｓ － ｎ ｓ ａ ｅ ９ ｍＲＮＡ ｆ １ ｏ ｔｅ ａｃ ｍａ ｔ ｓ ｅ ｎ ｏ ｓｅ ｒ ５ ｓ ｏ ｉ ｕ ｓ ａ ｄ ｓ １ ｓｅ ｃ ｏ ｄ ｏ ｓ ｕ ｓ ｗ ｒ ｅ ｅ ｔｄ ｂ ｉ ｙ ｒ ｉ ａｉｎ ｍｅｈ ｄ ０ ｏ ｔｏ ｈ ｎ ｒ ｍａ ｔ ｓ ｅ ｅ ｅｄ ｔｃ ｅ ｙｉ ｓ ｕｈ ｂ ｄ ｚ ｔ ｔ ｏ ．Ｒｅ ｕ ｔ Ｔ ｅｅ ｐ ｓｉ ｎ ｒｔ ｉ ｎ ｔ ｉ ｏ ｓ ｌｓ ｈ ｘ ｒ ｓｏ ａｅ ｉ ｅ ｎ￣ｔｏ ａｃ ｍａ ａ ｄ ｅ ｓ ｒｏ ｎ
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HL-60细胞内核干细胞因子抑制后全基因组表达谱的变化的开题报告
HL-60细胞内核干细胞因子抑制后全基因组表达谱
的变化的开题报告
1. 研究背景
HL-60细胞为人类骨髓单核细胞系中的一种，被广泛用作白血病和
炎症等疾病的模型细胞。
HL-60细胞具有干细胞样的特征，可以分化为类似粒细胞的细胞。
细胞因子在HL-60细胞分化调控中发挥重要作用，包
括促进分化的因子和抑制分化的因子。
然而，HL-60细胞因子信号通路调控的全面机制还未完全阐明。
2. 研究目的
本研究旨在探究干细胞因子在HL-60细胞分化调控过程中的作用机制，以及细胞因子抑制后全基因组表达谱的变化情况，为进一步研究HL-60细胞分化调控提供参考。
3. 研究方法
- HL-60细胞培养及分化处理。
将HL-60细胞分为处理组和对照组，处理组细胞加入细胞因子抑制剂，对照组细胞不加入抑制剂。
采用光镜
观察和细胞计数法检测细胞形态变化和细胞增殖情况，实时荧光定量
PCR检测分化标记基因的表达情况，流式细胞术检测细胞凋亡情况。
- 全基因组表达谱测序及分析。
提取处理组和对照组细胞的总RNA，建立文库并进行高通量基因表达测序。
通过生物信息学分析，筛选出表
达量差异最显著的基因，进行Gene Ontology和Pathway分析。
此外，
采用实时荧光定量PCR验证关键差异表达基因的表达情况。
4. 研究意义
本研究将加深对HL-60细胞分化调控的理解，特别是研究干细胞因
子在该过程中的作用机制。
此外，通过全基因组表达谱的分析，可以发
现新的分化调控关键基因，为进一步研究HL-60细胞分化和治疗提供了理论基础。
5-氮杂胞苷对骨髓间充质干细胞向肌细胞增殖及分化的影响
5-氮杂胞苷对骨髓间充质干细胞向肌细胞增殖及分化的影响陈伟;王丽娜;姜艳芳;王金成;段德生【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2006(32)1【摘要】目的:探讨在不同浓度5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导间充质干细胞(MSCs)分化为成肌细胞过程中,其对干细胞增殖及分化的影响.方法:分离纯化鉴定4周龄Wistar大鼠骨髓MSCs,以不同浓度5-Aza作用,用四唑盐(MTT)法测定细胞生长活力,观察细胞形态变化,通过RT-PCR及电泳测定诱导后大鼠的MSCs中骨骼肌肌动蛋白的表达.结果:0和1μmol·L-1 5-Aza对细胞增殖无明显影响;随着5-Aza浓度的增高,MSCs的增殖逐渐减弱;20～30 μmol·L-1 5-Aza对细胞有毒性作用,影响其增殖.3和6 μmol·L-1 5-Aza,MSCs有骨骼肌肌动蛋白的表达;9和12 μmol·L-1 5-Aza,MSCs有骨骼肌肌动蛋白的表达,该浓度作用9 d后有部分细胞体明显增粗,12 d有肌管样细胞出现.结论:5-Aza影响干细胞分化,调控基因的表达及调控MSCs向肌细胞定向分化为肌管样细胞的过程.【总页数】4页(P39-42)【作者】陈伟;王丽娜;姜艳芳;王金成;段德生【作者单位】吉林大学中日联谊医院骨科,吉林,长春,130033;吉林大学第一医院妇产科,吉林,长春,130021;吉林大学第一医院中心实验室,吉林,长春,130021;吉林大学中日联谊医院骨科,吉林,长春,130033;吉林大学中日联谊医院骨科,吉林,长春,130033【正文语种】中文【中图分类】R-332;Q253【相关文献】1.碱性成纤维细胞生长因子和5-氮杂胞苷对大鼠骨髓间充质干细胞分化潜能和细胞增殖的影响 [J], 陈莉;买霞;徐瑞成2.黄芪注射液与5-氮杂胞苷体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞的研究 [J], 唐新征;张炜宁;邓鸣3.5-氮杂胞苷对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖及成肌分化的影响 [J], 陈凯佳;刘小斌;邱仕君;周健洪;肖莹4.成肌分化因子和5-氮杂胞苷体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向骨骼肌细胞的分化 [J], 陈振强;孙占胜;智伟5.成肌分化因子和5-氮杂胞苷联合诱导骨髓间充质干细胞向骨骼肌细胞分化的实验研究 [J], 孙占胜;陈振强;王伯珉;张云峰;冯震;李连新;穆卫东;王永会;王珍;智伟;王杨因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
《5-氮杂-2-脱氧胞苷对牛胎儿成纤维细胞和人肺癌细胞A549的影响及作用机理的研究》范文
《5-氮杂-2-脱氧胞苷对牛胎儿成纤维细胞和人肺癌细胞A549的影响及作用机理的研究》篇一一、引言近年来，随着生物医学的飞速发展，抗肿瘤药物的研究已成为科研领域的重要课题。
其中，5-氮杂-2-脱氧胞苷作为一种新型的抗肿瘤药物，其独特的化学结构和生物活性引起了广泛关注。
本研究旨在探讨5-氮杂-2-脱氧胞苷对牛胎儿成纤维细胞和人肺癌细胞A549的影响及其作用机理，为进一步开发和应用该药物提供理论依据。
二、材料与方法1. 材料本实验所使用的5-氮杂-2-脱氧胞苷购自Sigma公司，牛胎儿成纤维细胞和人肺癌细胞A549购自ATCC。
实验中所用试剂均为分析纯。
2. 方法（1）细胞培养：将牛胎儿成纤维细胞和人肺癌细胞A549分别接种于培养皿中，在37℃、5%CO2条件下培养。
（2）药物处理：将不同浓度的5-氮杂-2-脱氧胞苷分别加入到细胞培养液中，处理一定时间后观察细胞形态变化。
（3）细胞活力检测：采用MTT法检测细胞活力。
（4）流式细胞术：分析细胞周期和凋亡情况。
（5）Western blot：检测相关蛋白表达水平。
三、实验结果1. 细胞形态变化在5-氮杂-2-脱氧胞苷处理后，人肺癌细胞A549的形态发生了明显变化，细胞变得圆缩、失去贴壁能力，而牛胎儿成纤维细胞的形态变化相对较小。
2. 细胞活力变化随着5-氮杂-2-脱氧胞苷浓度的增加，人肺癌细胞A549的细胞活力逐渐降低，而牛胎儿成纤维细胞的细胞活力降低幅度较小。
这表明5-氮杂-2-脱氧胞苷对人肺癌细胞的生长抑制作用更为明显。
3. 细胞周期和凋亡分析流式细胞术分析结果显示，5-氮杂-2-脱氧胞苷处理后，人肺癌细胞A549的G1期细胞比例增加，S期和G2期细胞比例减少，同时出现明显的凋亡峰。
这表明该药物能够阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡。
4. 相关蛋白表达水平检测通过Western blot检测发现，5-氮杂-2-脱氧胞苷处理后，人肺癌细胞A549中与DNA损伤修复、细胞周期调控和凋亡相关的蛋白表达水平发生了明显变化。
5-氮杂胞苷对SMMC-7721细胞增殖与侵袭的影响及机制探讨的开题报告
5-氮杂胞苷对SMMC-7721细胞增殖与侵袭的影响及机制探讨的开题报告开题报告：一、研究背景肝癌是全球范围内常见的一种恶性肿瘤，预计在21世纪中肝癌仍将是全球死亡率最高的癌症之一。
目前，尽管在治疗方面取得了一定的进展，但肝癌的治疗仍然面临巨大挑战。
因此，需要寻找新的治疗方法和药物。
5-氮杂胞苷是一种新型的核苷酸类似物，具有抗肿瘤活性。
研究表明，5-氮杂胞苷能够抑制多种恶性肿瘤的细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡，但对于SMMC-7721的作用机制研究较为缺乏。
二、研究目的本研究的目的是探讨5-氮杂胞苷对SMMC-7721细胞增殖和侵袭的影响以及其可能的作用机制，为其在肝癌治疗中的应用提供理论和实践基础。
三、研究内容与方法研究内容：1. 评估5-氮杂胞苷对SMMC-7721细胞增殖和侵袭的影响；2. 探究5-氮杂胞苷对SMMC-7721细胞周期和凋亡的影响；3. 调查5-氮杂胞苷对SMMC-7721恶性转移相关分子、细胞信号通路和相关受体的影响。
研究方法：1. 采用MTT法检测肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制率和半数抑制浓度（IC50）；2. 采用Transwell姜筛法评估细胞侵袭和迁移能力；3. 利用PI染色和Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞周期和凋亡的变化；4. 采用Western blot技术检测5-氮杂胞苷对SMMC-7721细胞恶性转移相关分子、细胞信号通路和相关受体的影响。
四、研究预期结果本研究预计将获得5-氮杂胞苷对SMMC-7721细胞增殖和侵袭方面的新实验结果，以及其在细胞周期、凋亡和信号转导通路等方面的作用机制。
结果有望为临床治疗提供新的靶向肝癌细胞的治疗方法和药物。
五、研究意义本研究将填补关于5-氮杂胞苷对SMMC-7721细胞作用的缺失，并为肝癌的治疗提供新的思路。
同时，本研究将丰富关于5-氮杂胞苷的作用机制的认识，为进一步应用5-氮杂胞苷的研究提供理论和实践基础。
XIAP和caspase-9在子痫前期患者胎盘中的表达
²临床论著²XIAP和caspase-9在子痫前期患者胎盘中的表达杨涛涛杨元元王文君王永红【摘要】目的探讨抑制凋亡蛋白XIAP及caspase-9的表达与胎盘滋养细胞凋亡的关系。
方法选取2013年4至12月于山西医科大学第二临床医院妇产科住院分娩的孕妇，其中25例子痫前期重度患者作为研究组，另外选取25例正常晚期妊娠妇女作为正常对照组，收集患者全部临床资料和分娩时的胎盘组织。
用免疫组织化学二步法及Western blot检测XIAP和caspase-9在胎盘组织中的定位及表达，并用BI-2000医学图像分析系统对图片进行处理。
统计分析采用SPSS 17.0两独立样本t检验进行统计学处理。
结果两组临床资料的比较：研究组与正常对照组在年龄（t＝－0.95，P＞0.05）及孕龄（t＝1.99，P＞0.05）上差异无统计学意义；在收缩压（t＝－8.64，P＜0.01）、舒张压（t＝－8.09，P＜0.01）、新生儿出生体重（t＝6.59，P＜0.01）、新生儿评分（t＝7.56，P＜0.01）之间差异有统计学意义。
免疫组化检测结果：两组孕妇胎盘滋养细胞的胞质中均可见XIAP和caspase-9的阳性表达。
子痫前期组胎盘滋养细胞中XIAP的表达的OD值显著低于正常对照组（0.23±0.03 vs. 0.34±0.04，t＝－11.12，P＜0.01）；caspase-9的表达高于正常组（0.32±0.04 vs. 0.26±0.05，t＝－5.23，P＜0.01）。
Western blot检测结果：子痫前期组胎盘滋养细胞中XIAP的表达低于正常对照组（灰度值0.36±0.14 vs. 0.96±0.43，t＝－3.00，P＜0.05）；子痫前期组胎盘滋养细胞中caspase-9的表达高于正常对照组（灰度值2.58±0.47vs. 1.66±0.19，t＝－3.69，P＜0.05）。
急性白血病病人XIAP和Caspase-3的表达及其临床意义
段翠翠 ， 王庆 国 ， 王为 光 ， 鲍 莹莹 ， 张 纯
Ｃ ａ ｓ ｐ ａ ｓ ｅ 一３ 在 ＡＬ发 生发 展 中的 具 体 机 制 还 有 待 于 进 一 步研 究 。 关 键 词 ：怎 性 白 血 病 ； 细胞 凋亡； Ｘ连锁凋亡抑帝 】 蛋 白； 半胱天冬蛋白酶一３ ；逆 转 录聚 合 酶 链 反 应 中 图分 类 号 ： Ｒ５ ５ ７ 文献标识码 ： Ａ 文章 编 号 ： １ ０ ０ ８ —０ １ ０ ４ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ２ —０ ０ ８ ３ 一Ｏ ２ 自血 病 是 一 种 血 液 系 统 恶 性 肿 瘤 ， 严 重危 害 着人 类 的健 ８ Ｏ ℃下 保 存 。 所有 操作要严格按 照 Ｉ ｎ ｖ ｉ ｔ ｒ ｏ ｇ ｅ ｎ公 司 的试 剂 盒 康 我 国 白 血 病 发 病 率 为２ ． ７ ６ ／ １ ０ 万。 在恶性 肿瘤 死亡率 中， 的 说 明书 进 行 ， 提取 上述单个 核细胞 中 的总 Ｒ ＮＡ， Ｒ ＮＡ 的 白血 病 居 第 ６ ６ Ｚ （ 男 性） 和第 ８ 位（ 女性 ） ［ Ｊ ］ 。 它 同 实 体 肿 瘤 一 完 整 性采 用 变 性 凝 胶 电 泳检 测 ， 并使用 Ｂ ｅ ｃ ｋ ｍａ ｎ ＤＵ６ ４ ０ 蛋白 样， 肿瘤 细 胞 的 过 度 增 殖 和 凋 亡 受 抑 制 是 其 发 生 发 展 的 重要 核 酸 分析 仪 进 行 ＲＮＡ浓 度 和 纯 度 （ Ａ２ ６ Ｏ ／ Ａ２ ８ Ｏ 的值 在 １ ． ８ ～ 机 制 ］ 。 凋 亡抑制蛋 自（ Ｉ ＡＰ ） 是 近 年 来 新 发 现 的 一 类 蛋 白家 ２ ． Ｏ ） 的检 测 。 族， 其 可以对抗各种凋亡诱导 因素的作用 ， 抑制细胞凋亡 ， 与 １ ． ３ 逆转录、 聚合酶链反应 （ Ｒ Ｔ－ －Ｐ Ｃ Ｒ） 分 析 肿 瘤 疾 病 的发 生 、 发 展 关 系 密切 。 至 今 为 止 人 类 已经 发 现 了８ １ ． ３ ． １ 逆转 录 Ｐ Ｃ Ｒ 试 剂 盒 购 自上 海 捷 瑞 生 物 工 程 有 限 公
采用定量蛋白质组学技术筛选急性髓系白血病HL-60细胞的甲基化相关基因
采用定量蛋白质组学技术筛选急性髓系白血病HL-60细胞的甲基化相关基因汤参娥;肖志强;谭潭;肖艳华;阮林;李萃;彭芳;李茂玉;张鹏飞;易红【期刊名称】《中南大学学报（医学版）》【年(卷),期】2010(35)7【摘要】目的:筛选人急性髓系白血病细胞株HL-60甲基化沉默基因,为揭示白血病的发病机制及防治提供科学依据.方法:应用荧光差异双向凝胶电泳(two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis, F-2D-DIGE)分离甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2-脱氧胞苷(5-aza-2-dC)处理与未处理的HL-60细胞的总蛋白质,Decyder和PDquest图像分析软件识别差异表达蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术鉴定差异表达蛋白质.结果:建立了5-aza-2-dC 处理与未处理的HL-60 细胞蛋白质的F-2D-DIGE图谱,图像分析识别了53个差异表达的蛋白质点,质谱分析鉴定了35个差异表达的蛋白质,其中32个蛋白质在5-aza-2-dC 处理后的HL-60 细胞中表达上调,3个蛋白质表达下调.结论:35个差异表达蛋白可能与甲基化相关,为白血病的表观遗传学研究提供了有价值的信息.【总页数】8页(P641-648)【作者】汤参娥;肖志强;谭潭;肖艳华;阮林;李萃;彭芳;李茂玉;张鹏飞;易红【作者单位】中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室,长沙,410008;中南大学湘雅医院医学实验研究中心,长沙,410008;中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室,长沙,410008;湖南省郴州市第一人民医院检验科,湖南,郴州,432000;中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室,长沙,410008;中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室,长沙,410008;中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室,长沙,410008;中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室,长沙,410008;中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室,长沙,410008;中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室,长沙,410008;中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室,长沙,410008【正文语种】中文【相关文献】1.CD44抗体HI44a对急性髓系白血病细胞株HL-60细胞体外增殖、分化作用的研究 [J], 宋清晓;吴勇;陈元仲2.急性髓系白血病细胞多药耐药相关基因的筛选 [J], 付劲蓉;刘文励;周剑锋;孙汉英;罗莉;冉丹;张恒3.急性髓系白血病BCL2L10基因启动子区异常甲基化定量研究 [J], 杜传清;毛平;王艳茹;羊乃康4.5-氮-2'脱氧胞苷对急性粒细胞性白血病细胞系HL-60中CDH13基因甲基化的影响 [J], 陶钧宇;王艳丽5.白细胞介素-33对急性髓系白血病细胞株HL-60、NB4凋亡和周期的调控作用及机制研究 [J], 陈雪欣;王一倩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
5-氮胞苷和利福平对丛枝病泡桐幼苗形态和蛋白质变化的协同影响
Ａｂ ｔ ａ ｔ： ｅ ｐ ｐｅ ａ ｅ ｔ ｅ ｓ ｅ ｌ ｓ ｏ Ｐ ｏ ｅ ｉ Ｓ ［ ｒ ｔ ｅ ｐａ ｄ ｎ ａ ｉ ｆ ｃ ｅ ｔ ｈ ｓ ｒ ｃ Ｔｈ ａ ｒ ｔ ｋ ｈ ｅ ｄ ｉ ｆ ｎｇ ｔ ｍ ｌｔ ａ ｘｐ． ｔ Ｏ ｏ ｍ ｉ ｔ ｏｗ ｌ ｎ ｅ ｔ ｄ ｗｉｃ ｅ’Ｓ ｂ ｏ ｍ ｒｏ
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关 键词 ：泡 桐丛 枝 病 ；５ 氮胞 苷 ；利 福 平 ；蛋 白质 ；双 向 电泳 一 中 图分 类 号 ：Ｓ７ ３１ ． ６ 文 献标 识 码 ：Ａ 文章 编 号 ：１ ０ — ６ ０（ ０ ０） ３ ０ ０ ０ ３ ２ ３ ２ １ ０ — ０４
Ｅ ｃ ｓ ｏ 一 ａ ａ ｄ Ｏｔ ｅ ｘ ｒ ｎ ｏ ｓ Ｓｕ ｓ ａ ｃ ｓｏｎｔ ｅＣｈ ｎ ｅ 仟ｅ ｔ ｆ５ Ａｚ ｎ ｈ ｒＥ ｔａ ｅ ｕ ｂ ｔ ｎ ｅ ｈ ａ ｇ ｓ
ｃ ｎ ｅ ｆａ ｏ ｆ５一Ａ ａ ａ ｄ ｒｆ ｌ ｉ ａ ｅ ｔａ ｎ ｐ ｕ ｏ ｉ ｔ ｈ Ｓｂｒ ｏ Ｔｒ ａ ｅ ｔｏ ５ ｍ ｏ ・ ～ 一 ｏ ｃ ｎ ｆ ｎ ｏ 一 ｚ ｎ ｉ ｉ ｎ ａ ｐ ｎ ｃ ｎ ｒ ｓ ｒ ｉ ａ ｌ ｗｎ ａ ｗｉｃ ｅ’ ｏ ｍ． ｅ ｍ ｎ ｆ１ ０ Ｉ ￣ ｌＬ ５
《5-氮杂-2-脱氧胞苷对牛胎儿成纤维细胞和人肺癌细胞A549的影响及作用机理的研究》范文
《5-氮杂-2-脱氧胞苷对牛胎儿成纤维细胞和人肺癌细胞A549的影响及作用机理的研究》篇一一、引言随着分子生物学和细胞生物学的发展，药物分子对不同细胞类型的影响及作用机理成为了科研的热点。
5-氮杂-2-脱氧胞苷（5-aza-2'-deoxycytidine）作为一种重要的抗肿瘤药物，其作用机制和在细胞中的效果一直是研究的焦点。
本文旨在研究5-氮杂-2-脱氧胞苷对牛胎儿成纤维细胞和人肺癌细胞A549的影响及其作用机理。
二、材料与方法1. 材料本实验所需材料包括：5-氮杂-2-脱氧胞苷、牛胎儿成纤维细胞、人肺癌细胞A549、培养基、血清等。
2. 方法首先建立细胞培养模型，将牛胎儿成纤维细胞和人肺癌细胞A549分别培养在适当的环境中。
然后对不同浓度的5-氮杂-2-脱氧胞苷进行处理，并设置对照组，以观察药物对细胞的生长、增殖和凋亡等影响。
最后，通过实验技术手段（如PCR、Western Blot等）研究其作用机理。
三、实验结果1. 细胞生长与增殖的影响实验结果显示，5-氮杂-2-脱氧胞苷对牛胎儿成纤维细胞和人肺癌细胞A549的生长和增殖具有明显的影响。
在适宜的浓度下，该药物能够有效抑制人肺癌细胞A549的增殖，并诱导其发生凋亡。
而对牛胎儿成纤维细胞的影响则相对较小。
2. 细胞凋亡与周期的影响通过流式细胞术等实验技术手段，我们发现5-氮杂-2-脱氧胞苷能够诱导人肺癌细胞A549发生凋亡，并使细胞周期发生改变。
具体表现为S期和G2/M期细胞比例增加，而G0/G1期细胞比例减少。
3. 作用机理研究通过PCR、Western Blot等实验技术手段，我们发现5-氮杂-2-脱氧胞苷的作用机理主要与其对DNA甲基化水平的影响有关。
该药物能够降低DNA甲基化水平，从而影响基因的表达，进而影响细胞的生长、增殖和凋亡等过程。
此外，该药物还可能通过影响其他信号通路（如Wnt、NF-κB等）来发挥其作用。
四、讨论本研究表明，5-氮杂-2-脱氧胞苷对牛胎儿成纤维细胞和人肺癌细胞A549具有不同的影响。
高考生物一轮复习 第6单元 第讲 基因的表达跟踪检测
藏躲市安详阳光实验学校第20讲基因的表达‖A级·基础练‖一、选择题1．下列关于转录和翻译两个过程的说法中，错误的是( )A．均以核酸为直接的模板B．均遵循碱基的互补配对C．都需要运输原料的工具D．都需要能量和相应的酶解析：选C 翻译需tRNA转运氨基酸，转录时则不需转运工具。
2．(沈阳模拟)下列关于人体内某些物质的叙述，正确的是( )A．RNA是由多个脱氧核苷酸形成的多聚体B．食物中的蔗糖可被小肠上皮细胞直接吸收C．无机盐离子含量过低可导致人体酸碱平衡紊乱D．蛋白质结构的多样性只与氨基酸的种类和数量有关解析：选C RNA是由多个核糖核苷酸形成的多聚体，A错误；食物中的蔗糖不能被小肠上皮细胞直接吸收，需要水解成单糖才能被吸收，B错误；无机盐能够维持细胞的酸碱平衡，如果含量过低可导致人体酸碱平衡紊乱，C正确；蛋白质结构的多样性与氨基酸的种类、数量、排列顺序，以及组成蛋白质的肽链条数和空间结构的不同有关，D错误。
3.(温州期中)视网膜色素变性患者，某基因的测序结果显示，与正常人相比，患者模板链的互补碱基序列发生了改变(如图)，据此可推断患者该基因mRNA 上发生的碱基改变是( )A．U→A B．G→AC．C→U D．C→T解析：选C 根据题图分析可知，正常人模板链的互补链为CCG，患者模板链的互补链为CTG，患者模板链的互补链上发生了碱基C→T的改变，说明患者模板链上发生了碱基G→A的改变，据此可推断患者该基因mRNA上发生了碱基改变是C→U。
4．(成都一模)放线菌素D是链霉菌产生的一种多肽类抗生素，它能插入到双链DNA中，妨碍RNA聚合酶沿DNA分子前进，但对DNA的复制没有影响。
放线菌素D进入细胞后将直接影响( )A．核糖体沿着信使RNA向前移动B．信使RNA与tRNA的碱基配对C．遗传信息从DNA流向信使RNAD．以信使RNA为模板合成多肽链解析：选C 由题干可知，放线菌素D能插入到双链DNA中，妨碍RNA聚合酶沿DNA分子前进，但对DNA的复制没有影响。
5-氮杂胞苷对结肠癌细胞CHD5基因表达及细胞增殖活性的影响
5-氮杂胞苷对结肠癌细胞CHD5基因表达及细胞增殖活性的影响赵蕊;严启滔;吕静野;黄海丽;马文丽【摘要】Objective To study the effect of 5-Aza-2-deoxycytidine (AZA) on re-expression of the hypermethylated and silenced CHD5 (Chromodomain,helicase,DNA-binding 5) gene in human colon carcinoma cells and cell proliferation.Methods Lovo and SW480 cells were exposed to 5 μmol/L AZA for 72 h,and then CHD5 expression was determined by quantitative RT-PCR (qPCR),methylation status of CHD5 genes was determined by bisulfite sequencing PCR (BSP),and the proliferation of the cells was evaluated by MTT assay.Results After treatment with 5 μmol/L AZA,the promoter region of the CHD5 gene exhibited a demethylation status,and CHD5 mRNA was re-expressed.Meanwhile,the growth of Lovo and SW480 cells were reduced.Conclusions AZA may reverse methylation of CHD5 gene to regulate the expression of CHD5 gene,and effectively inhibit the cell proliferation of human colon carcinoma cells%目的研究甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-氮杂胞苷,AZA)对人肿瘤相关基因CHD5(染色质解旋酶DNA结合蛋白5)在结肠癌细胞中的基因转录的诱导作用以及其对细胞增殖的影响.方法5 μmol/L 5-氮杂胞苷分别作用于Lovo和SW480细胞,连续作用72 h后,用荧光定量PCR(qPCR)检测两种结肠癌细胞系中CHD5mRNA的表达,重亚硫酸盐测序(BSP)法分析启动子区的甲基化状况,MTT法分析5-氮杂胞苷对Lovo和SW480细胞增殖的影响.结果5 μmol/L 5-氮杂胞苷处理Lovo和SW480细胞72 h后,Lovo和SW480细胞中CHD5基因的发生了去甲基化,其mRNA重新表达,细胞生长受到抑制.结论 5-氮杂胞苷能够反转CHD5基因的甲基化状态,调控CHD5 mRNA表达,并能有效地抑制结肠癌细胞的增殖.【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2013(033)008【总页数】5页(P976-980)【关键词】CHD5基因;甲基化;结肠癌细胞【作者】赵蕊;严启滔;吕静野;黄海丽;马文丽【作者单位】南方医科大学基因工程研究所,广东广州510515;南方医科大学基因工程研究所,广东广州510515;南方医科大学基因工程研究所,广东广州510515;南方医科大学基因工程研究所,广东广州510515;南方医科大学基因工程研究所,广东广州510515【正文语种】中文【中图分类】Q2;Q7结肠癌在我国的发病率近年来有逐年增高的趋势，其死亡率也成为仅次于肺癌和肝癌，占我国恶性肿瘤的第3位。
氮杂胞苷类化合物的设计、合成及抗肿瘤活性研究
氮杂胞苷类化合物的设计、合成及抗肿瘤活性研究氮杂胞苷和地西他宾是DNA甲基转移酶抑制剂,临床用于治疗骨髓增生异常综合征。
这两种药物在高剂量下具有细胞毒作用,在低剂量下,通过抑制DNA甲基转移酶而达到抑制肿瘤生长的作用。
一些肿瘤抑癌基因由于DNA高甲基化引起基因的静息,去甲基化后,能恢复基因的表达,实验结果证实氮杂胞苷和地西他宾具有恢复抑癌基因表达的作用。
氮杂胞苷和地西他宾具有呋喃糖结构,因此它们能结合到DNA或RNA中从而导致细胞毒作用。
在碱性及中性条件下,4-氨基-1,3,5-三嗪-2（1H）-酮片段开环形成无活性的N-（甲酰氨基-亚氨甲基）-N’-[（2-去氧-）-β-D-呋喃核糖基]脲,因此在三嗪6位引入甲基、乙基、苯基,用硫原子代替氧原子形成硫酮,并用吡喃单糖/双糖代替呋喃糖,设计合成了52个化合物,其中48个为新化合物,包括4-氨基-6-烷基-1-吡喃糖基/呋喃糖基-1,3,5-三嗪-2（1H）-酮（N<sub>1</sub>-苷）,6-氨基-4-烷基/芳香基-1-吡喃糖基-1,3,5-三嗪-2（1H）-酮（N<sub>3</sub>-苷）和4-氨基-6-烷基-1,3,5-三嗪-2-基-1-硫代-吡喃糖/呋喃糖苷（S-苷）等三类化合物,以期获得毒副作用低、活性好的化合物。
对目标化合物进行肿瘤细胞生长抑制、诱导分化以及与ATRA的协同作用等活性筛选,初步证明了设计思想,DNA 甲基转移酶抑制作用及选择性抑制作用研究正在进行中。
目标化合物结构经<sup>1</sup>H-NMR、IR、MS图谱数据确认。
苷的构型可以从J<sub>1’2’</sub>的偶合常数确定,其符合Baker反式规则,甘露糖苷、鼠李糖苷为α构型;葡萄糖苷、木糖苷、乳糖苷、麦芽糖苷为β构型。
采用三种方法合成目标化合物,三甲基硅烷化法适用于6-甲基-N<sub>1</sub>-苷、N<sub>3</sub>-苷及S-苷,异氰酸酯法适用于N<sub>1</sub>-硫酮苷的合成,N-乙酰基吡喃糖基-N’-[（甲酰氨基）-亚胺亚甲基)]脲环合法可用于合成6位具有较大取代基的N<sub>1</sub>-苷的合成。
5氮杂胞苷联合干扰素-γ上调神经母细胞瘤细胞Caspase 8表达的研究
5氮杂胞苷联合干扰素-γ上调神经母细胞瘤细胞Caspase 8表达的研究佟海侠;陆春伟;王秋实;王立维【期刊名称】《现代肿瘤医学》【年(卷),期】2011(19)3【摘要】Objective : To investigate if induction of Caspase 8 by demethylation agent 5 - Azacytidine( 5AZA ) and/or γ - interferon ( IFNγ ) renders neuroblastoma ( NB ) cells sensitive to tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand( TRAIL ). Methods: Caspase 8 expression was monitored by Western blot analysis. The effects of 5AZA,IFNγ, TRAIL, 5AZA and/or IFNγ +TRAIL, 5AZA and/or IFNγ + Caspase 8 inhibito r + TRAIL on the growth and apoptosis of NB cells were detected with flow cytometry. The relative Caspase 8 activity was measured with colorimetric assay. Results : Caspase 8 was undetectable in SH - SY5Y( SY5Y ) cells which were resistant to TRAIL , but an increased expression of Caspase 8 was found after treatment with 5AZA and/or IFNγ. The level of Caspase 8 protein in IFNγ +5AZA group was higher than that in single treatment group. Moreover, TRAIL combined with 5AZA and/or IFNγ induced apoptosis in SY5Y cells. The relative Caspase 8 activity of SY5Y cells in SAZA and/or IFNγ + TRAIL group was significantly higher than those of control group, 5AZA group, IFNγ group, TRAIL group and Caspase 8 inhibitor group. Conclusion :5 - AZA and IFNγ could coopera te toupregulate Caspase - 8 expression in NB cells. TRAIL induced apoptosis in NB cells expressing Caspase 8 with an increase of relative Caspase 8 activity.%目的:应用去甲基药5氮杂胞苷(5AZA)和/或干扰素(IFNγ)诱导神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞Caspase 8的表达,并观察是否可以恢复NB细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的敏感性.方法:应用Western blot方法检测5AZA和/或IFNγ作用前后SY5Y细胞Caspase 8蛋白的表达;应用流式细胞术检测5AZA 、IFNγ、TRAIL、5AZA 和/或IFNγ+TRAIL、5AZA和/或IFNγ+Caspase 8抑制剂zIETD-FMK+TRAIL对NB细胞生长及凋亡的影响;应用比色法测定Caspase 8相对活性.结果:对TRAIL耐药的SY5Y细胞不表达Caspase 8,经5AZA 和/或IFNγ处理后Caspase 8 蛋白表达水平逐步增加;IFNγ与5AZA联合作用后其Caspase 8 表达较单一用药明显增加.IFNγ和/或5AZA与TRAIL联用对SY5Y细胞有明显诱导凋亡作用.5AZA和/或IFNγ+TRAIL组的SY5Y细胞Caspase 8相对活性明显高于对照组、IFNγ组、5AZA 组、TRAIL组及抑制剂组.结论:5AZA联合IFNγ可以明显上调NB细胞Caspase 8 表达;表达Caspase 8的NB细胞对TRAIL的诱导凋亡作用敏感;TRAIL诱导NB细胞凋亡过程中伴随Caspase 8活性的增加.【总页数】4页(P432-435)【作者】佟海侠;陆春伟;王秋实;王立维【作者单位】中国医科大学附属盛京医院,输血科,辽宁,沈阳,110022;中国医科大学公共卫生学院,卫生检验教研室,辽宁,沈阳,110001;中国医科大学附属盛京医院,输血科,辽宁,沈阳,110022;辽阳市辽化总医院,检验科,辽宁,辽阳,111003【正文语种】中文【中图分类】R730.53;R739.4【相关文献】1.5-氮杂胞苷对HL-60细胞中XIAP和Caspase-9表达水平的影响 [J], 任金海;林凤茹;郭晓楠;张静楠;王颖;乔淑凯;张丽红;李琳2.土贝母苷甲通过上调FADD/caspase-8/caspase-3的表达促进人胶质瘤 U251细胞凋亡 [J], 贾耿;夏锡伟;彭亚;王强;邵耐远;王穗暖;杨伊林3.9-顺式维甲酸协同-干扰素下调神经母细胞瘤细胞MYCN和MDR1基因mRNA 表达的实验研究 [J], 孙福涛;王兴;张文同4.5氮杂胞苷诱导NB细胞Caspase8表达及对TRAIL敏感性的研究 [J], 佟海侠;张锦华;张继红;陆春伟5.5-脱氧氮杂胞苷上调肺癌细胞p16_(INK4A)基因表达的作用观察 [J], 白明;张晓菊;金阳;陶晓南因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
5-氮杂胞苷增强阿霉素对神经母细胞瘤细胞的抗瘤活性
5-氮杂胞苷增强阿霉素对神经母细胞瘤细胞的抗瘤活性刘建秋;李爱敏;张继红【期刊名称】《中国当代儿科杂志》【年(卷),期】2007(9)6【摘要】目的许多神经母细胞瘤细胞系及肿瘤组织标本中caspase-8表达缺失,caspase-8基因沉寂的主要原因是其启动子区域高度甲基化。
该文探讨去甲基化药物5-氮杂胞苷对caspase-8表达及对化疗药阿霉素抗人神经母细胞瘤细胞作用的影响及其影响机制。
方法应用RT-PCR方法检测5-氮杂胞苷作用前后SH-SY5Y细胞中caspase-8 mRNA水平变化。
MTT分析研究5-氮杂胞苷与化疗药阿霉素联合应用前后人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的存活率,以及加入caspase-8活性抑制剂后存活率的变化。
结果RT-PCR方法发现SH-SY5Y细胞株不表达caspase-8 mRNA,5-氮杂胞苷作用3d后可检测到caspase-8 mRNA表达,5d后表达较第3天增加;5-氮杂胞苷与不同浓度阿霉素(0.05,0.1,0.25,0.5μg/mL)联合应用后SH-SY5Y细胞存活率为(77.61±7.30)%,(57.35±6.64)%,(46.25±4.46)%,(35.59±5.12)%,同一浓度单独应用阿霉素组细胞存活率为(94.89±4.15)%,(80.60±8.50)%,(64.48±4.92)%,(52.32±6.71)%,5-氮杂胞苷与阿霉素联用组细胞存活率明显低于单用阿霉素组,差异均有显著性。
caspase-8抑制剂组与同一浓度的5-氮杂胞苷+阿霉素组比较,细胞存活率明显增加,依次为(92.95±3.48)%,(78.39±4.28)%,(62.31±6.50)%,(49.92±5.77)%,差异均有显著性。
结论阿霉素对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y具有增殖抑制作用,5-氮杂胞苷可以增强阿霉素的抗瘤活性。
甲基化抑制剂5-氮杂胞苷对HL-60细胞增殖及凋亡的影响
甲基化抑制剂5-氮杂胞苷对HL-60细胞增殖及凋亡的影响苏庸春;徐酉华;蔡倩;胡艳妮;李欣;罗庆【期刊名称】《重庆医科大学学报》【年(卷),期】2010(35)7【摘要】目的:观察5-氮杂胞苷对髓系白血病细胞系HL-60的增殖抑制作用,探讨其对细胞周期、细胞凋亡的影响。
方法:常规方法培养HL-60细胞,加入不同浓度的5-氮杂胞苷,以MTT法测定对HL-60的抑制作用,计算细胞生长抑制率;流式细胞术检测小剂量5-氮杂胞苷处理HL-60细胞后48h的细胞凋亡率及细胞周期分布特点。
结果:不同浓度5-氮杂胞苷均可以不同程度的抑制细胞生长,且表现为时间、浓度依赖性。
在小剂量浓度5-氮杂胞苷处理HL-60细胞48h后,随着5-氮杂胞苷浓度的增加,凋亡细胞百分比逐渐增多(P<0.05);G1期细胞逐渐增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,细胞阻滞在G1期。
结论:5-氮杂胞苷对髓系白细胞细胞系HL-60的生长抑制表现为浓度和时间依赖性,一定剂量的5-氮杂胞苷诱导细胞凋亡,使细胞阻滞在G1期。
【总页数】4页(P981-984)【关键词】基因甲基化;5-氮杂胞苷;白血病;凋亡;细胞周期【作者】苏庸春;徐酉华;蔡倩;胡艳妮;李欣;罗庆【作者单位】重庆医科大学附属儿童医院血液肿瘤科【正文语种】中文【中图分类】R733.7【相关文献】1.5-氮杂胞苷对RASSF1去甲基化与胃癌细胞增殖和凋亡的关系 [J], 李信华;张万里;曾荣;杜寒松;翟荣林;牛彦锋2.吡格列酮联合5－氮杂胞苷干预对大鼠胰岛素瘤细胞增殖、凋亡及功能的影响[J], 李莉;李松;石晓娟;王顺阁;王雪;陈民3.5-氮杂胞苷抑制乳腺癌细胞Bcap-37增殖及逆转RASSF1A基因甲基化作用[J], 吴丽明;杨建平;莫先启;袁建辉;庄志雄4.5-氮杂胞苷逆转P16基因甲基化对血管瘤细胞增殖和凋亡的影响 [J], 付桂莉;郑源泉;卢静静;黄美莲;李延5.P53-P21蛋白通路对5-氮杂胞苷诱导的大鼠骨髓间充质干细胞增殖和凋亡的影响 [J], 燕学波;吕安林;刘博武;侯婧;黄炜;李垚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
5-氮杂脱氧胞苷对非小细胞肺癌细胞A549中抑癌基因FHIT表达的影响
5-氮杂脱氧胞苷对非小细胞肺癌细胞A549中抑癌基因FHIT表达的影响李洪利;李文通;张伟栋;尹崇高;唐勇;刘传亮【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2009(25)10【摘要】@@ DNA甲基化是表观遗传修饰的主要方式之一,启动子CpG的高甲基化是除突变和缺失外肿瘤中抑癌基因失活的重要机制[1].脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)是第一个将脆性位点和肿瘤联系起来的抑癌基因[2],并且FHIT基因甲基化异常是肿瘤发生和发展过程中的早期事件.去甲基化治疗已成为一种新的抑制细胞增殖和诱导细胞分化的肿瘤治疗方法.5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-dC)是一种脱甲基化试剂,实验采用5-Aza-dC处理非小细胞肺癌细胞株A549细胞,观察其FHIT基因甲基化改变及对A549生长的影响.【总页数】2页(P1399-1400)【作者】李洪利;李文通;张伟栋;尹崇高;唐勇;刘传亮【作者单位】山东省潍坊医学院科研处医学研究实验中心,山东,潍坊,261042;山东省潍坊医学院病理学教研室,山东,潍坊,261042;山东省潍坊医学院病理学教研室,山东,潍坊,261042;山东省潍坊医学院护理学院外科护理学教研室,山东,潍坊,261042;山东省潍坊人民医院保健三科,山东,潍坊,261042;山东省潍坊人民医院保健三科,山东,潍坊,261042【正文语种】中文【中图分类】R329.24;R394.2;R734.202.2;R734.205.3【相关文献】1.5-氮杂-2′脱氧胞苷对肺癌 A549／DDP 细胞hMLHl，MGMT 基因甲基化及其表达的影响 [J], 王虹;李丽丽;张吉才;高波;骆海军2.5-氮杂脱氧胞苷对肝癌细胞HepG2中抑癌基因FHIT表达的影响 [J], 李洪利;张伟栋;李文通;尹崇高3.5-氮杂-2'-脱氧胞苷对HepG2中抑癌基因MIA2表达的影响 [J], 杨少奇;姚文暾;杨花;黄睿;胡建国;何芳4.5-氮杂-2′-脱氧胞苷和MS-275对非小细胞肺癌细胞株生长及DNMT1蛋白表达的影响 [J], 刘邦卿;栾加强;孙晓林;白剑;宋剑非;杜振宗5.5-杂氮-2'-脱氧胞苷对肺癌细胞小分子RNA let-7a-2表达的影响 [J], 吉丛;夏启胜;李红艳;刘轩;徐波;周天红;陈志华;喻长远因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
5-杂氮胞苷对小鼠内皮祖细胞干细胞抗原-1表达的影响的开题报告
5-杂氮胞苷对小鼠内皮祖细胞干细胞抗原-1表达的
影响的开题报告
题目：杂氮胞苷对小鼠内皮祖细胞干细胞抗原-1表达的影响
背景：内皮干细胞是一类能够分化成内皮细胞和其他细胞类型的多功能干细胞。
内皮干细胞在维持血管生物学功能、修复受损组织等方面具有重要作用。
干细胞抗原-1（SCA-1）是一个细胞表面分子，广泛存在于内皮干细胞上。
SCA-1在干细胞的分化、增殖和迁移过程中发挥重要作用。
杂氮胞苷是一种嘌呤类似物，具有抗病毒、免疫调节和抗增殖等多种生物学特性。
目的：本研究旨在探讨杂氮胞苷对小鼠内皮祖细胞SCA-1表达的影响及其可能的分子机制。
方法：通过体外培养小鼠内皮祖细胞，将细胞分为对照组和不同浓度杂氮胞苷处理组。
检测细胞的SCA-1水平变化，以及相关信号通路的变化。
同时，通过in vivo实验检测小鼠内皮干细胞SCA-1表达的变化。
预期结果：预计杂氮胞苷处理可显著降低小鼠内皮干细胞SCA-1的表达，同时影响相关信号通路的表达水平，进而影响内皮干细胞的增殖与分化能力。
结论：本研究可以为内皮干细胞研究提供实验依据，为深入探讨内皮干细胞分化机制提供新思路。
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52氮杂胞苷对HL 260细胞中X IAP 和Cas pase 29表达水平的影响33 基金项目:河北省自然科学基金资助项目(C2006000928)050000 石家庄 河北医科大学第二医院血液科任金海,林凤茹,郭晓楠,张静楠,王 颖,乔淑凯,张丽红,李 琳 【摘 要】 目的 探讨52氮杂胞苷(52aza 2CR )对HL 260细胞中X I A P 和Cas pase 29表达水平的影响以及X I A P 与Cas pase 29表达的相关性,初步了解X I A P 抗凋亡的途径。
方法 培养HL 260细胞,用不同浓度52aza 2CR 干预,流式细胞术检测干预前后X I A P 和Cas pase 29的表达水平。
结果 52aza 2CR 干预HL 260细胞后早期凋亡率在52aza 2CR 各浓度组均随干预时间的延长而增加,其中1010μmol/L 组干预4h 后凋亡率达(34126±3115)%;X I A P 表达水平在52aza 2CR 各浓度组均随干预时间的延长而下降,1010μmol/L 组干预4h 后降至76122±2184;Cas pase 29表达水平在52aza 2CR 各浓度组均随干预时间的延长而升高,1010μmol/L 组干预4h 后升至75145±4164;X I A P 和Cas pase 29表达水平呈负相关。
结论 HL 260细胞中X I A P 抗凋亡途径可能与抑制Cas pase 29表达相关。
【关键词】 52氮杂胞苷; HL 260细胞株; X I A P; Cas pase 29中图分类号:R73317 文献标识码:A 文章编号:1009-0460(2010)05-0403-03I nfluence of 52azacyti d i n e on expressi on level of X IAP and ca spa se 29i n HL 260cells R EN J in 2hai,L IN Feng 2ru,G UO X iao 2nan,ZHAN G J ing 2nan,WAN G Ying,Q I AO Shu 2ka i,ZHAN G L i 2hong,L I L in .D epart m ent of He m atology,the S econd Hospital of Hebei M ed ical U niversity,Shijiazhuang 050000,Ch ina 【Abstract 】 O bjecti ve To detect influence of 52azacytidine on exp ressi on level of X I A P and cas pase 29in HL 260cells,andanalyze the relati onshi p bet w een X I A P and cas pase 29.M ethods HL 260cells was co 2cultured with 52azacytidine in different concen 2trati ons and the cells was collected in different ti m e points .FC M was used t o detect exp ressi on level of X I A P and cas pase 29.Results Early apop t osis rate of HL 260cells after co 2cultured with 52azacytidine was increased in concentrati on and ti m e dependent manner .Itwas (34126±3115)%in 1010μmol/L gr oup after 4hours .Exp ressi on level of X I A P was decreased by 52azacytidine in concentrati on and ti m e dependentmanner in HL 260cells .Itwas 76122±2184in 1010μmol/L gr oup after 4hours .Exp ressi on level of cas pase 29was increased by 52azacytidine in concentrati on and ti m e dependent manner in HL 260cells .It was 75145±4164in 1010μmol/L gr oup af 2ter 4hours .X I A P was negative correlati on with cas pase 29.Conclusi on The mechanis m of X I A P anti 2apop t osis is correlated with cas pase 29. 【Key W ords 】 52azacytidine; HL 260cell line; X I A P; Cas pase 29 X I A P 是凋亡抑制蛋白(inhibit or of apop t osis p r oteins,I A Ps )家族成员之一。
基因定位于Xq25,通过抑制Cas pase 23、Cas pase 27和Cas pase 29而抗凋亡。
本研究利用不同浓度的52氮杂胞苷(52aza 2CR )干预HL 260细胞,利用流式细胞术检测干预前后各个时相X I A P 及Cas pase 29的表达水平,分析二者表达的关系,初步探明HL 260细胞中X I A P 抗凋亡的途径与Cas pase 29表达的相关性。
1 材料与方法111 材料 新生牛血清和RP M I 21640购自Hycl one公司,采用Corning 细胞培养瓶,CO 2培养箱为日本的Ther mo For ma 。
52aza 2CR 购自华美生物公司,X I 2AP 及Cas pase 29试剂盒购自Cell Signaling Technol o 2gy 公司,流式细胞仪为美国的F ACS Calibur,膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)试剂盒购自北京宝赛公司。
112 细胞培养 HL260细胞采用含10%新生牛血清的RP M I21640,并加入青霉素(100U/m l)和链霉素(100μg/m l),37℃、5%CO2饱和湿度培养箱培养。
取对数生长期的细胞进行实验。
113 52aza2CR干预方法 取对数生长期的HL260细胞进行干预,干预浓度分别为110μmol/L、510μmol/L和1010μmol/L。
每个浓度干预时间均设30m in、1h、2h、3h和4h。
重复3次。
114 AnnexinⅤ/P I标记染色测定凋亡细胞 调整待测细胞浓度为1×106个/m l,取1m l细胞,400×g、4℃离心10m in,弃上清,加入1m l冷P BS,轻轻震荡使细胞悬浮,400×g、4℃离心10m in,弃上清,重复2次,将细胞重悬于200μl B inding Buffer,加入10μl AnnexinⅤ2F I T C和5μl P I,轻轻混匀,避光室温反应15m in,加入300μl B inding Buffer,1h内上机检测。
重复3次。
115 流式细胞术检测X I A P 收集细胞并在含2%甲醛的1×P BS中固定10m in,于90%甲醇中4℃孵育30m in透膜,细胞数为每试管5×105个,加2μl X I A P抗体,室温孵育45m in,加二抗5μl,室温孵育30m in。
上机检测并应用Cell Quest软件进行分析。
重复3次。
116 Cas pase29检测方法 调整待测细胞浓度为1×106个/m l,52aza2CR诱导凋亡,同时培养1瓶细胞无药物诱导做对照,再设1个阴性对照(加1μl/m l Z2VAD2F MK抑制Cas pase29活性)。
上述3瓶细胞中各取300μl加1μl F I T C2LEHD2F MK,用F L21通道检测。
重复3次。
117 统计学分析 采用ST AT A810统计软件,进行正态性检验、方差齐性检验、t检验、直线相关等统计学检验。
以P<0105为差异有统计学意义。
2 结 果211 52aza2CR干预HL260细胞后凋亡率的变化 早期凋亡细胞在52aza2CR各浓度组均随干预时间的延长而增加,110μmol/L组干预4h后凋亡率为(14126±1154)%,510μmol/L组干预4h后凋亡率为(19126±2101)%,1010μmol/L组干预4h后凋亡率为(34126±3115)%,后两组分别与110μmol/L 组比较差异均有统计学意义(P=010282;P= 010006),而后两组之间比较,差异亦有统计学意义(P=010022)。
见图1。
212 52aza2CR干预后X I A P表达水平的变化 X I2图1 不同浓度52aza2CR对HL260细胞早期凋亡率的影响AP表达水平以平均荧光强度表示。
干预前水平为119114±3162,各52aza2CR浓度组均随干预时间的延长而下降。
110μmol/L组干预4h后为98182±4131,510μmol/L组干预4h后为87131±3169, 1010μmol/L组干预4h后为76122±2184,后两组分别与110μmol/L组比较差异均有统计学意义(P= 010246;P=010016),而后两组比较差异亦有统计学意义(P=010146)。
见表1。
表1 不同浓度52aza2CR干预后X I A P表达水平的变化( x±s)时间(h)110μmol/L510μmol/L1010μmol/L 0119114±3162119114±3162119114±3162015117149±3131115159±3177112116±31461112157±4102106137±2163104164±41232107163±2197101182±314498192±31563101146±315898144±218984169±3107498182±413187131±316976122±2184213 52aza2CR干预后Cas pase29表达水平的变化 Cas pase29表达水平以平均荧光强度表示。