土壤碱性蛋白酶(Solid - Alcalase Protease,S-ALPT)试剂盒说明书
碱性蛋白酶(Alkaline protease, AKP)活性测定试剂盒说明书
货号：MS2302 规格：100管/48样碱性蛋白酶（Alkaline protease, AKP）活性测定试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：AKP是指在碱性条件下催化蛋白质肽键水解的酶类，属于丝氨酸蛋白酶。
此外，该酶还能够水解酯键、酰胺键，具有转酯及转肽的功能。
该酶是主要工业用酶之一，广泛应用于制药、丝绸、食品、制革等行业。
测定原理：在碱性条件下，AKP水解酪蛋白生成酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸生成钨蓝；钨蓝在680nm有特征吸收峰，测定680nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。
自备仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、0.5mL EP管和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。
临用前加 5mL 蒸馏水溶解。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。
临用前加入 5mL 试剂一，沸水浴中磁力搅拌溶解。
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存。
临用前加 20mL 蒸馏水溶解。
试剂五：液体×1 瓶，4℃保存。
标准品：液体×1 支，0.25μmol/mL 标准酪氨酸溶液，4℃保存。
粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。
2. 血清或培养液：直接测定。
3. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
测定操作：1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到680nm，蒸馏水调零。
土壤碱性蛋白酶(Solid - Alcalase Protease,S-ALPT)
货号：MS2910 规格：100管/48样土壤碱性蛋白酶（Solid - Alcalase Protease，S-ALPT）试剂盒说明书微量法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。
S-ALPT在碱性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。
测定原理：碱性条件下，S-ALPT可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；在680nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔板、双蒸水试剂组成和配置：试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5ml蒸馏水充分溶解；用不完的试剂4℃保存；试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入50μL试剂七使粉剂润湿，然后加入10ml试剂一，转入烧杯中沸水浴磁力搅拌溶解后待用；用不完的试剂4℃保存；试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入20ml蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；试剂五：液体3mL×1瓶，4℃保存；试剂六：液体1.5mL×1支，0.05mg/ml标准酪氨酸溶液，4℃保存；试剂七：液体1.5mL×1支，4℃保存；样品处理：新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。
测定操作：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。
2、试剂二、三和四40℃水浴10min。
第1页，共2页注意：标准管只需测一次。
每个测定管设一个对照管。
S-ALPT活性计算：单位定义：每天每g土样中产生1mg酪氨酸为一个 S-ALPT活力单位。
S-ALPT(mg/d/g)=C标准×(A测定管-A对照管)÷A标准管×V反总÷W÷T=48×(A测定管-A对照管)÷A标准管C标准管：标准管浓度，0.05mg/mL；V反总：反应体系总体积，0.2mL；T：反应时间，30min=1/48d；W：样本质量，0.01g。
碱性蛋白酶
碱性蛋白酶产品概述奥迪尔碱性蛋白酶是经原生质体诱变方法选育的枯草杆菌通过深层发酵、提取及精制而成的一种蛋白水解酶。
广泛应用于制革、丝绸、食品、医疗、酿造等行业。
产品原理碱性蛋白酶活性成分属于一种丝氨酸内切碱性蛋白酶，它能水解蛋白质分子肽链生成多肽或氨基酸，在有机溶剂中它还可催化多肽的合成。
产品特性1.温度范围：有效温度范围20-60℃，最适温度范围在35-45℃。
2.PH值范围：有效pH范围6-11，最适pH值范围9.5-10.5产品性状1.产品规格：固体100000u/g，200000u/g粉末（颗粒状）；液体100000u/ml液体酶pH（25℃）：7.0-9.0，容重：≤1.25g/ml；固体酶细度（0.4mm标准筛通过率）：≥80%。
2.酶活力定义：1g固体酶粉（或1ml液体酶），在40℃±0.2℃、pH10.5条件下，1min水解酪蛋白产生1μg酪氨酸，为1个酶活力单位，以u/g（u/ml）表示。
3.产品标准：执行中华人民共和国国家标准GB/T23527-2009应用方法1.碱性蛋白酶用于皮革加工具有简化工序、缩短周期、提高成品质量、增加的率、降低生产成本等优点。
用于浸水工序的加酶量为0.02-0.1%（按原料质量计，酶活力以10万u/ml计，下同），20-25℃作用12-20小时；用于皮革软化的加酶量为0.05-0.2%,35-38℃作用3-6小时；用于脱毛的加酶量为0.1-0.3%，20-35℃作用12-20小时。
以上使用pH均为9-11.2.碱性蛋白酶用于丝绸脱胶有丝素不受损伤、不起毛丝和蓬松的效果。
原料经过前处理，按0.8-2.4%加酶，pH9-11,40-50℃的条件下作用30-60min。
3.碱性蛋白酶用于软骨素生产，可有效提高收率和纯度。
原料在碱提取后，按照0.2-0.6%的添加量，pH8-10，温度40-50℃的酶解条件作用4-8小时。
4.碱性蛋白酶用于肝素钠的生产，可提高分子均一性和产品纯度。
(完整word版)最新相关土壤酶测定方法(综合)
土壤蛋白酶活性测定(茚三酮比色法）实验试剂:1、pH7。
6的0.05mol/L的tris—HCL缓冲液（三羟甲基氨基甲烷—盐酸缓冲液):50ml0.2mol/L 的三羟甲基氨基甲烷与27.5ml0.2mol/L的盐酸混合,稀释成200ml。
2、2%酪酸钠溶液:称取2g 酪酸钠，加入10ml0.1mol/L的NaOH溶液，沸水浴处理5min,待膨化后加入pH7.6的tris—HCl缓冲液约80ml，继续沸水浴处理,直至完全溶解，用同样的缓冲液定容至100ml。
3、Tris—HCl—CaCl2混合溶液:用pH7.6的0.05mol/Ltris—HCl缓冲液配制的0。
01mol/L的CaCl2溶液。
4、0。
6mol/L乙酸铅溶液。
5、草酸钠—乙酸混合溶液：每1000ml0。
26mol/L的草酸钠溶液含有240。
7ml0。
2mol/L的乙酸.6、茚三酮—乙醇—抗坏血酸混合试剂:称取2g茚三酮，0。
02g 抗坏血酸，溶于100ml无水乙醇。
7、0。
2％KIO3溶液。
8、pH5.8乙酸-乙酸钠缓冲液：94 ml0。
2mol/L乙酸钠与6ml0。
2mol/L乙酸混合.9、0.01%甘氨酸标准溶液：1g甘氨酸溶于1000ml水，再稀释10倍。
10、甲苯。
以上试剂均为分析纯。
实验仪器:基本仪器如试管、烧杯等、离心机、分光光度计、刻度试管、水浴锅、电子天平、移液管实验步骤1、标准曲线的绘制①分别吸取50 、100、150、200、250、300μl0。
01％甘氨酸标准溶液,置于10 ml刻度试管中(浓度分别相当于NH2 0.107、0。
213、0。
320、0。
426、0。
533、0.639μg/ml），加入2mlpH5。
8的乙酸—乙酸钠缓冲溶液②加入1。
5ml 茚三酮—乙醇—抗坏血酸混合试剂，混合均匀,沸水浴加热16min③取出立即用自来水冷却15min,加入1ml0.2%KIO3并混合均匀，用蒸馏水定容至10ml，1h内在570nm处比色测定吸光值；以氨基氮(NH2）的浓度为横坐标,吸光值为纵坐标,绘制标准曲线.2、培养与测定①称取0.200g土壤,加入2mlTris—HCl—CaCl2混合溶液和1ml甲苯,混合均匀后静置15min以抑制微生物活性；②然后再加入5ml2%的酪酸钠溶液,50℃振荡培养2h。
土壤亮氨酸氨基肽酶
土壤亮氨酸氨基肽酶
土壤亮氨酸氨基肽酶是一种水解酶，可以将含有亮氨酸的肽链水解为亮氨酸和其他氨基酸。
该酶广泛存在于土壤中，并在土壤有机质的分解过程中发挥着重要作用。
亮氨酸氨基肽酶的酶学性质与反应条件有密切关系。
一般情况下，该酶的最适反应条件为PH值7-9，催化反应的温度一般为30-50℃。
此外，酶的活性还受到金属离子、底物浓度等因素的影响。
该酶在土壤农业方面的应用正在逐渐展开。
研究表明，在农业生产中，添加亮氨酸氨基肽酶可以促进植物生长和提高作物产量。
此外，该酶还可以降低土地污染物的浓度，并促进土壤中微生物的生长和繁殖。
总之，土壤亮氨酸氨基肽酶作为一种重要的土壤水解酶，在土壤物质循环和农业生产中具有重要的作用和潜在应用。
碱性蛋白酶产生菌的筛选
文章编号:1001-3717(2006)01-0070-03碱性蛋白酶产生菌的筛选3李树文,陆秀华,尚海利(莱阳农学院生命科学院,山东青岛266109)摘要:本试验从5份土壤中共筛选出产碱性蛋白酶菌株9株,即SHL-4、SHL-6、SHL-7、SHL-10、SHL-8、SHL-11、SHL-12、SHL-18、SHL-20,其中SHL-4、SHL-6、SHL-7、SHL-10产酶效果较好;采用正交试验设计,初步地确定了菌株SHL-4产酶培养基组分,即蛋白胨0.5%、牛肉膏1.5%。
关键词:碱性蛋白酶;筛选;菌株中图分类号:Q939.97文献标识码:AScerrning R ning of Alkaline Protease Producing StrainsL I Shu2wen,L U Xiu2hua,SHAN G Hai2li(Life Science College,L AC,Qingdao266109,China)Abstract:Nine st rains producing alkaline p rotease were screened out f rom five soil samples,namely SHL-4、6、7、10、8、11、12、18、20,SHL-4、6、7、10of which wit h high protease activity.Through an or2 t hogonal test,t he p roducing protease cult ure medium of t he SHL-4st rain was confirmed preliminarily, namely0.5%of pepto ne,1.5%of beef ext ract.K ey w ords:alkaline protease;screening;st rain 碱性蛋白酶是指在碱性的条件下具有活性,能够水解蛋白质肽键的酶类。
不同沙地植被对土壤酶活性的影响
０． ０ ７ ２７ ０． ０ ８ １４ ０． １ ２ ６３
半固定沙地 Ｈ ａ ｌ ｆ ｆ ｉ ｘ ｅ ｄ ０． １ ２ ４４ ３． ０ １ ９３ 固定沙地 Ｆ ｉ ｘ ｅ ｄ ０． ２ ２ ０１ ３． ２ ３ ７３
表 ２ 不同季节土壤酶活性变化
／ 犜 犪 犫 犾 犲２ 犛 犲 犪 狊 狅 狀 犪 犾 犮 犺 犪 狀 犲 狊狅 犳 狊 狅 犻 犾 犲 狀 狕 犿 犲犪 犮 狋 犻 狏 犻 狋 ｇ ｇ 犵 狔 狔μ 春季 Ｓ ｒ ｉ ｎ ｐ ｇ ０． ０ ９ ５７ ２． ３ ０ ５４ 夏季 Ｓ ｕ ｍｍ ｅ ｒ ０． ３ ７ ０３ ３． ２ ０ ３２ 秋季 Ｆ ａ ｌ ｌ ０． １ ４ ０１ ３． ７ ４ ７８ 冬季 Ｗ ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ０． ０ ５ ６９ ３． ４ ６ ３２
产碱性蛋白酶菌株的筛选_分子鉴定及其酶学性质的初步研究
碱性蛋白酶是在碱性范围内水解蛋白质肽键的酶类，一般最适pH值为9~11，属内肽酶中的丝氨酸蛋白水解酶类，主要用于加酶洗涤剂中，在制革、纺织、医药、化妆品等的生产中也有广泛的应用[1]。
目前，全世界所生产的酶中碱性蛋白酶占到总产量的30%左右，显示出良好的使用性能和经济价值。
碱性蛋白酶广泛存在于细菌、放线菌和真菌中，其中以芽孢杆菌属的碱性蛋白酶研究的最深入。
本实验从山东东营的盐碱地采集土样，从中分离出若干株产碱性蛋白酶的菌株，并对其进行16S rRNA分子鉴定以及酶学性质的初步研究，以期为工业应用提供基础理论依据。
1材料与方法1.1土样来源山东东营盐碱地中采集土样。
1.2培养基富集培养基：牛肉膏0.5g、蛋白胨1g、NaCl0.5g、水产碱性蛋白酶菌株的筛选、分子鉴定及其酶学性质的初步研究成堃，路福平*，李玉，王盛楠，王建玲（天津市工业微生物重点实验室天津科技大学生物工程学院，天津300457）摘要：从盐碱地土壤中筛选到5株产碱性蛋白酶的细菌，分别命名为TCCC11001、TCCC11004、TCCC11013、TCCC11024、TC-CC11029。
将其革兰氏染色、16S rRNA鉴定为Bacillus subtilis、Bacillus alcalophilus、Bacillus pumilus、Bacillus subtilis、Bacillus licheni-formis。
将菌株接入发酵培养基中，37℃、180r/min摇床培养48h，发酵液进行不同处理后Folin法测定酶活。
结果发现：TCCC11001、TCCC11029的最适作用温度为40℃，TCCC11004、TCCC11013、TCCC11024的最适作用温度为50℃；TCCC11001、TCCC11004、TC-CC11013、TCCC11024、TCCC11029的最适作用pH值分别为10.0、11.0、10.0、9.0、11.0；TCCC11004、TCCC11013于40℃保温2h，残留酶活为最高酶活70%；TCCC11001、TCCC11024、TCCC11029的残留酶活＜50%。
Alcalase碱性蛋白酶酶解蚕豆蛋白的研究
豆蛋 白水解物。通过单因素试验 ， 调查了 ｐ 、 Ｈ 底物质量分数、 酶用量（ ：） Ｅ ｓ 和酶解温度等 因素对 Ａｃｌ ｅ ｌ ａ 碱性 ａｓ 蛋白酶酶解蚕豆蛋白效果的影响。通过正交试验设计 ， 确定 Ａｃ ａｅ ｌ ｓ 碱性蛋白酶酶解蚕豆蛋 白适 宜的工艺参 ｌ ａ 数： 酶解温度 ６ ０℃ ， 底物质量分数 ３ ， ％ 酶用量（ ：） ％ ，Ｈ９０ 此条件下， Ｅ Ｓ ８ ｐ ． ， 蚕豆蛋 白水解度（ Ｈ 达最大， Ｄ ） 为
温水浴锅 、Ｅ ２ Ｓ 型旋转蒸发器 ： Ｒ ５ Ｃ 一１ 上海亚荣生化 仪器厂 ；Ｈ ９３ Ｄ Ｇ一 ０６型电热恒温鼓风干燥箱 ： 上海精 宏实验设备有限公 司。
１２ 试 验 方法 ． １２ １ 蚕豆 蛋 白的提取 ．．
温和 ， 易除杂质和水解度高等优点。Ａｃｌ ｅ ｌ ａ 碱性蛋 ａｓ
Ａｃｌ ｅ ｌ ａ 碱性蛋 白酶对蚕豆蛋 白酶解的影响因素， ａｓ 包
括 ｐ 底物 质量分 数 、 Ｈ、 酶用 量 （ Ｓ 和 酶解 温度 ， Ｅ： ） 初
加工业主要利用蚕 豆生产粉丝 、 粉皮等， 仅利用其中 的淀粉部分 ， 而作 为重要 营养成分 的蛋 白质未被合 理利用 ， 蚕豆多肽的研究还处于空 白。 植物源多肽具有 增强免 疫调节 力 、 衰老 、 抗 抗 氧化和降血 压等作用 。大豆 蛋 白酶 解物 和大米蛋 白酶解物均具有刺激巨噬细胞吞 噬的功能 ， 可激发 非特异 的免疫 防御 系统 ； 大豆肽 对 ・ Ｈ 自由基具 Ｏ 有清除能力 ， 清除率为 ５ ．％； ６５ 燕麦蛋 白酶解物对血 管紧张素转移酶活性 （ Ｃ ） Ａ Ｅ 抑制率为 ８ ．０ － 。 ５４ ％ ６ ］ 刘淳等 发现蚕豆蛋白酶解物具有一定的抗氧化活 性。 目前， 生产多肽的方法有分离提取法 、 化学合成 法 、 因重 组 法 和 酶解 法 等 。酶 解 法具 有 条 件 基
碱性蛋白酶技术参数
蛋白酶可以分为很多种，其中一种就是碱性蛋白酶，由于具有较强的分解能力，因此被广泛应用于食品、酿造、洗涤、丝绸等行业。
有关企业在选择这个产品的时候需要对其技术参数信息做好详尽的了解。
碱性蛋白酶也就是碱性条件下能够水解蛋白质肽键的酶，相关的技术参数如下：
【别名】地衣芽胞杆菌蛋白酶，2709碱性蛋白酶，地衣杆菌蛋白酶
【酶活定义】在40℃，PH10.5条件下，每分钟水解酪素产生1ug酪氨酸所需的酶量为1个酶活力单位，以u表示。
【产品规格】5-160万u/g，可根据客户要求生产不同规格的产品。
【应用条件】最适PH值：9-12 最适温度：40℃--55℃
【产品用途】
1、皮革脱毛原料皮→水洗→脱脂→碱膨胀→拔毛→剖层→脱碱→酶脱毛→水洗→浸酸→鞣制。
酶脱毛具有简化物产工序，缩短周期，提高成品质量，增加
得革率，降低生产成本，改变劳动成本与环境卫生，变污水为肥等优点。
2、食品加工应用于食品行业动植物蛋白质的水解，生成多肽或氨基酸，形成具有独特风味的蛋白质水解液，被广泛使用在调味液和保健品行业当中。
3、日化行业将蛋白酶加入洗衣粉、洗涤剂等洗涤用品中，能大幅度提高洗涤去污能力，特别对血渍、汗渍、奶渍、油渍等蛋白类污垢, 也可作医用试剂清洗生化仪器等，具有独特的洗涤效果。
以上就是对于碱性蛋白酶相关的产品信息介绍了，由于每个厂家生产的碱性蛋白酶型号不同，技术方面的信息可能总结的不全面，建议大家找到产品厂家做详细的了解。
碱性蛋白酶（碱性酶，Alkalineproteinase）
碱性蛋白酶（碱性酶，Alkalineproteinase）碱性蛋白酶是由地衣芽胞杆菌经发酵提炼而成的蛋白水解酶，主要成分为地衣芽胞杆菌蛋白酶，分子量约为27300，是丝氨酸型的内切蛋白酶，在一定温度、PH值下能将大分子的蛋白质水解成多肽及氨基酸等产物，具有较强的分解蛋白质的能力。
其生产工艺是采用微滤超滤膜分离、喷雾干燥或真空冷冻干燥等先进技术，产品质量达到食品级标准及试剂级标准，广泛应用于食品、医疗、酿造、丝绸、制革、血渍清洗、洗涤行业，可以满足各种不同要求需要。
【别名】地衣芽胞杆菌蛋白酶，2709碱性蛋白酶，地衣杆菌蛋白酶【酶活定义】在40℃，PH10.5条件下，每分钟水解酪素产生1ug酪氨酸所需的酶量为1个酶活力单位，以u表示。
【产品规格】5-160万u/g，可根据客户要求生产不同规格的产品。
【应用条件】最适PH值：9-12 最适温度：40℃--55℃固体碱性酶液体碱性酶【碱性蛋白酶应用范围】● 大豆多肽及大豆磷脂功能食品将大豆蛋白（大豆分离蛋白或大豆浓缩蛋白等）水解为大豆多肽，提高大豆蛋白的溶解性及功能特性，用作饮料、奶制品、老年及婴幼儿食品的蛋白补充剂和营养补充剂。
● 酵母抽提物碱性蛋白酶配合风味酶用于酵母提取物，提高最终产品的蛋白质利用率及风味。
● 动物来源蛋白抽提物及肉味香精基料碱性蛋白酶配合风味酶使用对原料肉、肉渣、骨、血、鱼胶原蛋白等动物蛋白的水解，能使原料较彻底的水解最终产品较高的蛋白质利用率，及产品风味醇厚自然，毫无苦味之干扰。
● 洗涤行业碱性蛋白酶可加入洗涤剂的配方中，血液和蛋白质用具去污，辅助除去蛋白质为主的污点，通过添加碱性蛋白酶的洗涤剂可以大幅度地提高洗涤去污能力，特别对血渍、汗渍、奶渍、油渍等到蛋白类污垢，还可达到护理织物、增白增艳的独特功效，具有独特的洗涤效果纺织工业中它可以用于生丝精练。
● 皮革行业利用碱性蛋白酶可制成脱毛剂，经鞣制的皮革，脱毛干净，粒面清晰，无明显损伤，毛孔细致光亮。
碱性蛋白酶在洗涤剂行业的生产及应用
碱性蛋白酶在洗涤剂行业的生产及应用前言碱性蛋白酶（又称丝氨酸蛋白酶）是能使蛋白质水解成肽或氨基酸的酶的总称，包括动物产生的胃蛋白酶和胰蛋白酶、由植物产生的木瓜朊酶和由微生物产生的霉菌蛋白酶。
碱性蛋白酶对去除奶渍、汗渍、血渍及肉汁等蛋白质类污渍很有效果，使不溶性的蛋白质污渍分解成可溶性氨基酸和肽，从而去除这些污渍。
广泛存在与细菌、放线菌和真菌中，研究最为广泛和深入的是芽孢杆菌的丝氨酸蛋白酶。
这种酶在洗涤剂、制革、丝绸等工业上有广泛用途。
1 碱性蛋白酶的性质碱性蛋白酶最早发现于猪胰脏中，1913年Rohm首先将胰蛋白酶作为洗涤浸泡剂使用。
1945年瑞士学者Jaag等发现微生物能产生碱性蛋白酶，如芽孢杆菌属细菌和曲霉属的真菌等，从而使蛋白酶应用拓展到洗涤剂工业。
近20年来，随着新的产碱性蛋白酶菌株的不断分离和发现，碱性蛋白酶的研究有了很大的发展。
迄今，已有多种微生物来源的碱性蛋白酶被纯化和鉴定。
昆虫病原菌产蛋白水解酶的报道很少。
自60年代始，有关耳霉属菌株分泌碱性蛋白酶的报道日渐增多，研究日益深入。
研究表明，耳霉能产生高分子量的碱性蛋白酶A和低分子量的碱性蛋白酶B。
冠状耳霉分泌的碱性蛋白酶B分子量蛋白为6800，是迄今为止报道的分子量最小的碱性蛋白酶。
它的最适pH 9.7，最适反应温度45℃。
该酶经50℃时1小时后完全失活。
该酶具有广泛的底物专一性，能催化水解多种天然蛋白质（如酪蛋白，血红蛋白，卵清蛋白，牛血清白蛋白），其中酪蛋白是最适底物。
此外，碱性蛋白酶B还具有一定的酯酶活性，可专一性水解苯赖氨酸和苯甘氨酸衍生物L－型异构体酯键的羧基，而D－型异构体不受酶处理的影响。
可用于分离氨基的消旋混合物。
可望代替目前工业上用来分离DL－旋光异构体的枯草芽孢杆菌蛋白酶。
与其它产碱性蛋白酶菌株相比，冠状耳霉能分泌高比活力碱性蛋白酶。
如地衣芽孢杆菌株2709碱性蛋白酶比活力为1800u/mg蛋白，枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶比活力为880u/mg蛋白，短小芽孢杆菌碱性蛋白酶比活力为3602.4u/mg蛋白，嗜麦芽假单胞菌碱性蛋白酶比活力为1173u/mg蛋白。
Alcalase2_4L碱性内切蛋白酶改性大豆蛋白的工艺研究
［3］ W U Wu , et al. HydropHobicity, solubility, and emulsifying properties of soy protein peptides prepared by papain modification and ultrafiltration ［J］. J AOCS, 1998 ，75 (7 ): 845- 850 .
1.3.4.2 底物浓度对大豆分离蛋白酶解的影响 按
加酶量为 0.019 2 AU/g SPI，反应温度为 50℃，反应
时间为 1h，pH 值为 7.0，底物浓度为 9%、10%、11%、
12%、13%，以水解度和分散性为指标，探讨底物浓
度对酶解反应的影响。
1.3.4.3 反应温度对大豆分离蛋白酶解的影响 按
大豆蛋白的改性方式可分为物理改性、化学改 性和酶法，其中酶法被认为是较有潜力的一种。在大
豆蛋白酶解研究中，可供选择的酶有动物蛋白酶、植
物蛋白酶以及微生物蛋白酶三大类，其中动物蛋白 酶如胃蛋白酶、胰蛋白酶等价格昂贵、副反应多，胃 蛋白酶的水解条件固然温和，但反应时间太长，水解 效率较低，而且水解产物的苦味会随着水解时间的 延长而增加。植物蛋白酶如木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶 来源少、效率低，不适合工业化生产[2- 3]。随着生物技 术的进步，微生物蛋白酶的生产技术日趋成熟，价格 逐渐降低，而且来源广泛，是一种比较理想的酶源。 其中的碱性蛋白酶（Alkaline protease）是 1945 年瑞 士 Dr.Jaag 等人在地衣芽孢杆菌中发现的。碱性蛋白 酶来源较广，广泛存在于动、植物及微生物中，这些 酶除可以水解肽键外，还具有水解酯键、酰胺键和转 酯及转肽的能力[4]。由于碱性蛋白酶具有价格低廉、 来源广、产量高、菌体易于培养等特点，所以广泛应 用于食品、洗涤及制革等行业中，因此，微生物碱性 蛋白酶的研究一直被人们所关注[5]。本文以大豆分离 蛋白为原料，采用碱性蛋白酶 Alcalase 2.4L 对其进 行酶解，试图揭示酶解条件对大豆蛋白功能特性的 影响，探索出一条适合于工业化生产的专用型大豆 分离蛋白加工工艺，实现一条生产线生产两种或多 种大豆蛋白产品的加工方式。 1 材料与方法 1.1 主要材料和试剂
Alcalase碱性蛋白酶酶解绿豆分离蛋白制备小分子肽的工艺研究
对色素稳定性有较大影响，因此可初步推断茼蒿黄色素可用于茶饮料及酒类等食品加工业中，需尽量避免用于有色糖果、面食品、果汁饮料等食品。
氧化还原剂对茼蒿色素有较为明显的褪色作用，因此该色素要尽量避免用于高氧化还原性的食品中。
参考文献：[1]张国文.食用色素的研究现状与前景[J].粮油食品科技,2004（6）:17-19[2]聂晶，齐兴娟.食用合成色素研究动态[J].中国食品卫生杂志,2002,14（1）:58-60[3]郭承育.天然食用色素的开发应用[J].青海大学学报:自然科学版,2001,19（3）:45-46[4]张洪涛.茼蒿的利用价值与优质高效栽培技术[J].现代农业科技,2007（9）:34,38[5]Wills R B H,Wong A W K,Scriven F M,et al.Nutrient compositionof Chinese vegetables [J].Journal of Agriculture and Food Chemistry ，1984,32:413-416[6]Yoshihiro C,Hiroshi O,Mayumi O K,et al.Structural identification of two antioxidant quinic acid derivatives from Garland （Chrysanthemum coronarium L.）[J].Journal of Agriculture and Food Chemistry1996,44:2037-2039[7]B 觟hmer H.Koekboya.Natural Dyes and Textiles [M].Schweinfurt,Germany:Weppert,2002:142-143[8]迪丽努尔马克里,米丽班霍加,古丽娜尔,等.野蔷薇果皮色素的提取和稳定性研究[J].食品科学,2008,29（3）:116-118[9]张瑞宇,王文娟.金莲花天然色素的提取方法与稳定性研究[J].食品研究与开发,2007,28（3）:60-65[10]Ayed Amr, E.Al -Tamimi.Stability of the crude extracts ofRanunculus asiaticus anthocyanins and their use as food colorants [J].International Journal of Food Science and Technology,2007,42:985收稿日期：2008-09-16屠春燕，袁艳娟，徐娟，唐美华（南京工业大学制药与生命科学学院，江苏南京210009）Alcalase 碱性蛋白酶酶解绿豆分离蛋白制备小分子肽的工艺研究摘要：以绿豆为原料，用Alcalase 碱性蛋白酶酶解绿豆分离蛋白制备小分子多肽。
Alcalase碱性蛋白酶水解厚壳贻贝蛋白
Alcalase碱性蛋白酶水解厚壳贻贝蛋白戴志远;张婷;张燕平;卢延斌;张艳萍【摘要】以厚壳贻贝为原料,Alcalase2.4L碱性蛋白酶为酶源,在单因素试验的基础上,以还原力A700为指标,运用响应面分析法(RSM)得到Alcalase2.4L酶解厚壳贻贝蛋白的优化条件为:底物浓度[S]3.2%、[E]/[S]2.12%、温度55.54℃、pH8.66、时间2h,该条件下制备的酶解物的还原能力为0.587.同时证明了该酶解物具有显著清除DPPH自由基活性和较强的超氧阴离子自由基清除能力.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2010(036)008【总页数】6页(P83-88)【关键词】厚壳贻贝;酶解;抗氧化;响应面分析法【作者】戴志远;张婷;张燕平;卢延斌;张艳萍【作者单位】浙江工商大学水产品加工研究所,浙江,杭州,310012;浙江工商大学水产品加工研究所,浙江,杭州,310012;浙江工商大学水产品加工研究所,浙江,杭州,310012;浙江工商大学水产品加工研究所,浙江,杭州,310012;浙江工商大学水产品加工研究所,浙江,杭州,310012【正文语种】中文厚壳贻贝(Mytilus coruscus)，富产于浙江省嵊泗列岛周围海域，是一种高蛋白，低脂肪，富含多种营养成分的海洋软体动物［1］，具有很高的药用价值和食疗功效。
据《本草纲目》记载，贻贝肉能治“虚劳伤惫，精血衰少，吐血久痢，肠鸣腰痛”。
随着养殖技术日趋完善，贻贝年产量日益增高，贻贝加工与高值化利用逐渐引起人们的注意，但目前对其深层的应用研究报道较少。
近年来，随着对生物活性肽的研究日趋升温，以天然食品作为蛋白源生产的抗氧化肽因其高效、低毒、易吸收等特点越来越受到重视。
而水产品因其高蛋白、来源丰富等特点成为制备抗氧化肽的优良原料。
Klompong［2］等研究了水解度和不同酶源对黄色条纹鲹蛋白酶解物抗氧化活性的影响。
Je［3］、庄永亮［4］等分别利用海鱼副产物、海蜇制得抗氧化肽;赵谋明［5］等则对蓝园鲹抗氧化肽的抗氧化稳定性做了研究;胡雪琼［6］、邱春江［7］等分别测定了马氏珠母贝肉酶解物和贻贝酶解物对自由基的清除作用。
Alcalase碱性蛋白酶水解棉籽蛋白动力学研究
46 2010,No.9收稿日期:2009 12 28;修回日期:2010 09 01作者简介:郭 城(1982 ),男,教师,硕士,主要研究方向为食品科学。
Alcalase 碱性蛋白酶水解棉籽蛋白动力学研究郭 城,罗 璇(华中农业大学楚天学院食品与生物科技学院,湖北武汉 430205)摘 要:采用pH-st at 法对A lcalase 碱性蛋白酶水解棉籽蛋白的动力学特性进行了研究,确定了Alcalase 碱性蛋白酶水解棉籽蛋白的最佳反应条件:温度60 、pH8.0、酶与底物比750U /g 、底物质量分数5%,水解300min 后水解度可以达到12.43%;动力学参数:K m =6.0133mol/L 、v max =9.5493 10-3mol/(min !L)。
关键词:棉籽蛋白;Alcalase 碱性蛋白酶;酶解;动力学;水解度中图分类号:S816.43;T S201.2+1 文献标识码:A 文章编号:1003-6202(2010)09-0046-03Resear ch on kinetics of hydrolyzing cottonse ed protein by Alcalase alkaline proteaseABSTRACT:pH st at met hod w as applied to research t he kinet ic characterist ics of hydrolyzing cot tonseed protein by Alcalase alkaline prot ease.T he opt imum reaction condit ions for hydrolyzing cot tonseed protein by A lcalase alkaline prot ease were det ermined as follow s:t emperat ure 60 ,pH value 8.0,enzyme substrate rat io 750U /g,mass fraction of t he substrate concent rat ion 5%.T he degree of hydrolysis could reach 12.43%aft er hydrolyzing for 300min;kinetic paramet ers:K m =6.0133mol/L and v max =9.5493 10-3mol/min !L )KEYWO RDS :cott onseed prot ein;A lcalase alkaline prot ease;enzymolysis;kinet ics;degree of hydrolysis棉籽蛋白是一种很好的食用蛋白质,其口味温和,没有豆腥味和其它异味,并且具有较高的营养价值。
碱性蛋白酶的分离纯化与性质初探
碱性蛋白酶的分离纯化与性质初探碱性蛋白酶的分离纯化与性质初探一、综述本课题国内外研究动态，说明选题的依据和意义:1.国内外研究现状碱性蛋白酶(Alkaline protease)广泛存在于微生物中,最早发现在猪的胰脏中，1913年Rhom首先将胰蛋白酶作为洗涤浸泡剂使用。
1945年瑞士的Dr.Jagg 等发现了微生物碱性蛋白酶,使其成为洗涤剂的主要添加剂之一。
碱性蛋白酶在丝绸、制革工业、饲料工业、动物食品加工中也有广泛用途。
由于市场的需求，高产、高效、耐高温、耐高碱的四高型碱性蛋白酶成为国内外当前研究的热点之一[1]。
研究结果发现，海洋酶具有作用pH 范围宽，最适pH 和反应温度适中，随反应温度的降低酶活性下降缓慢等特点。
海洋酶所具有的独特性质，引起学术界高度重视，日、美等国就此展开了深入的研究。
迄今为止，由海洋微生物生产海洋酶的专利已达20 余项。
海洋微生物酶的研究正逐渐成为发达国家开发新型酶制剂的重要途径[2,3]。
相比之下，国内在海洋碱性蛋白酶研究方面差距较大。
综合多篇文献分析，目前针对海洋细菌产生的碱性蛋白酶，分离提纯的方法大致多采用饱和硫酸铵分级盐析和层级技术。
首先是从发酵液取上清制备粗酶液（此酶为一种外分泌蛋白，无需通过溶菌酶溶解或超声波破碎细胞来制备粗酶液），通过超速离心沉淀，饱和硫酸铵分级盐析，透析，凝胶层析或离子交换层析来分离提纯该菌所产生的碱性蛋白酶。
其中一些已经对酶的性质、序列等进行了研究[4-7]。
2.选题依据及意义此毕业设计的课题为《碱性蛋白酶的分离纯化及性质初探》，主要是对海洋细菌进行培养及分离提纯方案的改进，并对其性质进行初步探究。
大致是将各种相关参数和实验数据建立正交关系得到最佳培养条件，并对其产生的碱性蛋白酶进行分离提纯，同时得出最佳分离提纯方案。
最后对碱性蛋白酶的性质进行初步研究。
本设计针对目前研究较少的产碱性蛋白酶的海洋微生物新菌株，研发新型高效的碱性蛋白酶，这对满足人类生活、生产与技术开发的需求至关重要。
土壤过氧化氢酶过氧化物酶磷酸酶蔗糖酶脲酶测定方法
土壤过氧化氢酶过氧化物酶磷酸酶蔗糖酶脲酶测定方法土壤中的过氧化氢酶、过氧化物酶、磷酸酶、蔗糖酶和脲酶是土壤中重要的酶类，对于土壤质量的评价和土壤生态系统的健康状况具有重要意义。
以下将介绍测定这些酶类的方法。
1.土壤过氧化氢酶检测方法：过氧化氢酶（Catalase, CAT）是土壤中一种重要的氧化酶，参与有机物的降解和土壤氧化还原过程。
测定土壤过氧化氢酶的常用方法为测定土壤样品的过氧化氢气体释放量。
实验步骤：（1）取一定量的土壤样品加入适量的过氧化氢底物（如双酚酸），在室温下反应一段时间。
（2）反应结束后，用紫外光度计测定反应液中过氧化氢的吸光度。
（3）根据吸光度的变化，计算出土壤样品中的过氧化氢酶活性。
2.土壤过氧化物酶检测方法：过氧化物酶（Peroxidase, POD）是土壤中一类重要的酶类，参与土壤的有机物降解和氧化还原过程，是土壤抗氧化系统的重要组成部分。
测定土壤过氧化物酶的常用方法为测定土壤样品中过氧化物酶的催化能力。
实验步骤：（1）取一定量的土壤样品加入适量的过氧化氢底物（如过氧化氢），在适宜的温度和pH条件下反应一段时间。
（2）反应结束后，用显色试剂（如双对苯偶氮、间苯二胺等）与反应液中的过氧化氢发生反应，形成有色物质。
（3）用分光光度计测定反应液中有色物质的吸光度，并根据吸光度的变化计算出土壤样品中过氧化物酶的活性。
3.土壤磷酸酶检测方法：磷酸酶（Phosphatase, AP）是土壤中一种重要的酶类，参与有机磷的矿化和土壤磷循环过程。
测定土壤磷酸酶的常用方法为测定土壤样品中磷酸酶对底物（如对硝基酚磷酸酯）的水解能力。
实验步骤：（1）取一定量的土壤样品加入适量的磷酸酶底物，在适宜的温度和pH条件下反应一段时间。
（2）反应结束后，用显色试剂（如酚氨反应液）与反应液中的产物发生反应，形成有色物质。
（3）用分光光度计测定反应液中有色物质的吸光度，并根据吸光度的变化计算出土壤样品中磷酸酶的活性。
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货号: QS2910 规格：50管/24样土壤碱性蛋白酶（Solid-Alcalase Protease，S-ALPT）试剂盒说明书
可见分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。
S-ALPT在碱性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。
测定原理：
碱性条件下，S-ALPT可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；在680nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1ml玻璃比色皿、蒸馏水
试剂组成和配置：
试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10ml蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入100uL试剂七使粉剂润湿，然后加入20ml试剂一，转入烧杯中沸水浴磁力搅拌溶解后待用；用不完的试剂4℃保存；
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入50ml蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；
试剂五：液体10mL×1瓶，4℃保存；
试剂六：液体1.5mL×1支，0.05mg/ml标准酪氨酸溶液,避光保存；
试剂七：液体1.5mL×1支，4℃保存；
测定操作：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。
2、试剂二、三和四40℃水浴10min。
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注意：标准管只需测一次。
每个测定管设一个对照管。
S-ALPT活性计算：
单位定义：每天每g土样中产生1mg酪氨酸为一个 S-ALPT活力单位。
S-ALPT(mg/d/g)=C标准×(A测定管-A对照管)÷A标准管×V反总÷W÷T=48×(A测定管-A对照管)÷A标准管
C标准管：标准管浓度，0.05mg/mL；V反总：反应体系总体积，0.4mL；T：反应时间，30min=1/48d；W：样本质量，0.02g。
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