Obelisc HPLC 色谱柱 ——— 液相分离池技术
安捷伦GPC SEC 色谱柱(学习资料)
GPC/SEC 色谱柱成功进行GPC/SEC 分离的关键是正确选择色谱柱。
安捷伦色谱柱设计的全线PLgel 产品已覆盖了聚合物分析应用的几乎全部领域，可以快速而可靠地选择正确的色谱柱、溶剂和校正标准品。
安捷伦的PLgel GPC 系列色谱柱适用于使用有机溶剂的聚合物应用。
PLgel 是一款高度交联的、多孔聚苯乙烯/二乙烯基苯基质的填料，这是一种GPC 色谱柱领域的领先技术。
PLgel 填料具有高孔容和高柱效，使分离度更高。
它们无与伦比的溶剂兼容性使极性溶剂和非极性流动相之间的转换快速简单，并且具有出色的机械强度，色谱柱寿命更长，使停机时间降至最低。
安捷伦的PL aquagel-OH 系列为水相SEC 的可靠分离提供了化学和物理稳定的固定相。
该色谱柱装填了带强亲水性的多羟基官能团的大孔径共聚物柱床。
“中性”表面及其广泛的溶剂操作条件，能为中性、离子和疏水组分提供高效分析，无论它们是单独存在的还是混在一起的。
PL aquagel-OH可用于分析和制备应用。
GPC/SEC 的原理•聚合物分子溶解在溶液中，由于分子量不同形成大小不同的球形线团状结构•聚合物线团随洗脱液流经色谱柱•色谱柱内填充具有特定孔结构的不溶性多孔小球•多孔小球的孔径与聚合物线团的体积接近•聚合物线团在孔内外扩散•洗脱基于分子大小——大分子先洗脱，小分子后洗脱•通过使用聚合物标准品建立的校正曲线将体积分离转换为分子量分离如何选择GPC/SEC的色谱柱（以黑体字显示的色谱柱为首选）有机GPCPlgel GPC 柱•最极端条件下稳定性极佳•在高达220 °C 的温度下保持稳定•良好的溶剂兼容性可允许在各种极性的溶剂之间轻松、快速转换PLgel 填料具有高孔容和高柱效，使分离度最高。
它们无与伦比的溶剂兼容性使极性溶剂和非极性流动相之间的转换快速简单，并且具有出色的机械强度，色谱柱寿命更长，使停机时间降至最低。
成功进行GPC 分离的关键是正确选择色谱柱。
高效液相色谱测定抗坏血酸对映体色谱柱选择
高效液相色谱测定抗坏血酸对映体色谱柱选择引言：抗坏血酸(Ascorbic acid)是一种水溶性维生素，也称为维生素C，具有抗氧化、抗癌、抗炎等多种生理活性。
它在医药、食品、化妆品等多个领域有着广泛的应用。
抗坏血酸分子只有一个手性中心，存在两种对映异构体：L-和D-异构体。
其中L-异构体为生物活性形式，D-异构体则为生物非活性形式。
因此，在药品和保健品等制剂中，需要考虑抗坏血酸的手性选择问题，以确保产品的药效和安全性。
高效液相色谱(HPLC)是一种广泛应用于分离化合物的技术，能够在短时间内高效地分离复杂的混合物，并且在检测灵敏度和准确性方面具有很高的优势。
在抗坏血酸对映体的拆分和定量中，HPLC也被广泛应用。
在本文中，我们将讨论HPLC测定抗坏血酸对映体时，如何选择色谱柱的问题。
1.常见的色谱柱选择(1) Silica gel色谱柱Silica gel色谱柱是HPLC中最常见的色谱柱之一，可以用于各种化合物的分离。
Silica gel色谱柱在高极性化合物分离上具有很高的分离能力，但对于极性较小的分子，其分离能力较差。
因此，对于抗坏血酸对映体的拆分分析，此类色谱柱并不适用。
(2) ODS色谱柱ODS(Octadecylsilane)是一种改性的Silica gel材料，具有更强的亲脂性能。
因此，ODS色谱柱对于脂溶性较强的化合物(如多肽、蛋白质、核苷酸等)有较好的分离能力，但对于亲水性较强的分子分离能力较差。
对于抗坏血酸对映体的分离，由于抗坏血酸具有较强的亲水性，因此ODS色谱柱也不太适用。
(3) Chiralpak AD色谱柱Chiralpak AD色谱柱是一种手性固定相色谱柱，其固定相是由3,5-二氧代苯基乙酰胺(DOPA)和四氢萘酚(TDN)组成的手性物质混合物。
此类色谱柱可以较好地拆分抗坏血酸对映异构体，但在分离时间和定量灵敏度方面存在一定的问题。
(1)样品性质样品的性质是影响色谱柱选择的最主要因素之一。
液相层析法中色谱柱选择与操作技巧
液相层析法中色谱柱选择与操作技巧液相层析法（Liquid Chromatography，LC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。
在液相层析实验中，选择合适的色谱柱和掌握操作技巧是非常重要的，本文将探讨液相层析法中色谱柱选择与操作技巧的相关内容。
一、色谱柱的选择1. 相性选择在选择色谱柱时，相性是首要考虑因素之一。
色谱柱的相性应与待分离的化合物相匹配，以保证分离效果。
对于极性化合物，可以选择正相色谱柱，如C18柱；对于非极性化合物，可以选择反相色谱柱，如C8柱。
此外，还有其他特殊相性的色谱柱，如糖酒石酸柱、氨基酸柱等，可以根据需要进行选择。
2. 尺寸选择色谱柱的尺寸也是需要考虑的因素之一。
常见的色谱柱直径有2.1 mm、4.6mm等，长度一般为150-250 mm。
选择合适的柱尺寸可以提高分离效果和样品通量，同时也会影响分离时间和分辨率。
对于复杂的样品，可以选择细柱，如2.1mm×50 mm，以提高峰形和分辨率；对于样品量较大的情况，可以选择大柱径，如4.6 mm×250 mm，以增加样品通量。
3. 粒径选择色谱柱的粒径也是一个重要的选择因素。
粒径是指填充在柱中的固定相颗粒的直径，常见的有3 μm、5 μm、10 μm等。
粒径越小，表面积越大，分离效果越好，但也会带来较高的压力和较长的分离时间。
一般而言，对于常见的分析要求，5μm的粒径已足够满足分离要求；对于更高的分离要求，可以选择更小的粒径。
需要注意的是，选择不同粒径的柱时，需调整相应的操作参数，以保证分离效果。
二、色谱柱的操作技巧1. 前处理样品在液相层析实验中，样品前处理是一个非常关键的步骤。
样品中的杂质和干扰物会对分离效果产生不利影响，因此需要进行适当的前处理。
常见的前处理方法包括：固相萃取（Solid Phase Extraction，SPE）、液液萃取等。
前处理的目的是提取和富集分析物或去除干扰物，以提高检测灵敏度和分离效果。
高效液相色谱测定抗坏血酸对映体色谱柱选择
高效液相色谱测定抗坏血酸对映体色谱柱选择
高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分离和测定化合物的方法。
在选择抗坏血酸对映
体色谱柱时，需要考虑以下几个方面：
1. 分离效果：色谱柱的分离效果是评估柱性能的关键指标之一。
抗坏血酸有两个对
映体，L-抗坏血酸和D-抗坏血酸，它们在结构上只有一个手性中心的异构体。
选择一个能够有效分离这两个对映体的色谱柱非常重要。
通常，分离效果可以通过观察对映体的峰形、保留时间和分离度来评估。
2. 选择适当的固定相：固定相是色谱柱的重要组成部分，可以对分离作用起到关键
影响。
对于抗坏血酸对映体的分离，笔者建议选择手性固定相色谱柱。
手性固定相通过提
供与分离的目标分子具有相互作用的手性识别元素，能够实现抗坏血酸对映体的有效分
离。
3. 色谱柱的理论板数：理论板数是衡量色谱柱效率的指标之一。
对于分离对映体，
需要选择一个具有较高理论板数的色谱柱，以获得更好的分离效果。
4. 品牌和供应商信誉：选择一个可靠的品牌和供应商也非常重要。
优质的色谱柱通
常由经验丰富的制造商生产，并且具有良好的稳定性和重复性。
选择抗坏血酸对映体色谱柱需要考虑分离效果、固定相、理论板数以及品牌和供应商
信誉等因素。
在具体选择柱子之前，可以先进行一些试验，评估不同色谱柱的分离效果，
以选择最适合的柱子。
色谱分离柱
色谱分离柱是色谱分析中不可或缺的重要组成部分，它承担着样品分离和分析的关键任务。
色谱分离柱的选择对于色谱分析的结果具有至关重要的影响，不同类型的柱具有不同的特性和应用范围。
本文将从色谱分离原理、分离柱的类型、特性及选择等方面展开详细介绍。
一、色谱分离原理色谱分离是利用不同物质在固定相和流动相作用下移动速度不同而实现的分离方法。
在色谱分离中，分离柱是承载固定相的载体，通过与流动相和待分离物质的相互作用，实现了不同化合物的分离。
根据不同的机理，色谱分离可分为气相色谱（Gas Chromatography, GC）和液相色谱（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）两大类。
二、分离柱的类型1. 气相色谱分离柱气相色谱分离柱通常采用毛细管柱或填充柱。
毛细管柱一般用于高效气相色谱，其分离效果好，但对进样量和操作技术要求较高。
填充柱则是将固定相填充在惰性填充物上。
填充柱的优点是稳定性好，适用于高温和宽温度范围，但由于传质阻力大，通常只适用于一般分析。
2. 液相色谱分离柱液相色谱分离柱按照固定相的不同可以分为正相柱和反相柱。
正相柱是指固定相相对亲水性较强，适用于亲水性物质的分离，常用的填料有硅胶、葡萄糖酸等；反相柱则是指固定相相对亲水性较弱，适用于疏水性物质的分离，常用的填料有碳链、苯乙烯等。
三、分离柱的特性1. 分离效率：分离效率是衡量分离柱性能的重要指标，通常用理论板数（N）来表示。
理论板数越大，分离效率越高。
2. 保留力：柱对物质的保留力决定了溶质在柱上停留的时间，保留力大的柱适用于分离挥发性差的化合物。
3. 选择性：柱的选择性反映了柱对不同化合物的分离能力，通常用选择因子（α）来表示。
4. 耐热性：柱的耐热性决定了其在高温条件下的稳定性，对于高温色谱分析尤为重要。
四、分离柱的选择在选择分离柱时，首先需要考虑待分离物质的性质，如极性、疏水性等，以确定使用正相柱还是反相柱。
液相色谱的方法开发分离机理及色谱柱
有非常不同的选择性 柱效及韧性比相应的硅胶柱低 色谱机理不太清楚 文献背景低，用户少
选HPLC参数时的基本考虑
溶解度 - 选择流动相的条件 分子量 - 在样品预处理或GPC分析时有用 官能团 - 有否离子化基团? 保留特性如何? 样品的基质 - 考虑如何前处理 在基质中样品的含量 - 分析、制备都考虑 检测特性 - 有否紫外吸收? 荧光? 找出样品中不同组份之间的差异
摸索条件的重要线索
寿命，柱效，速度，溶剂消耗
对HPLC柱的了解
平均颗粒度，颗粒度分布
颗粒度(dp)
颗粒度越小：柱效越高(传质好，涡流扩散小) 柱压越高(渗透性差)
颗粒分布
颗粒分布越宽∶柱效低(渗透性差)
颗粒形状
球型∶柱效高、重现性好、柱床结构均匀 无定型：柱床结构不均匀
流动相线性速度不均匀 谱带扩展
对HPLC柱的了解（二）
聚合物填料
pH：2-12 pH值小于2时 键合相水解
硅胶的溶解曲线
123456789 pH
Waters各种硅胶基质的色谱柱
C1 C4 C6 C8 C18 Phenyl CN NH2
mBandaPak
✓
✓ ✓✓
Resolve
✓✓
✓
Nova-Pak
✓✓
✓ ✓✓
Delta-Pak
✓
✓
Symmetry
✓✓
高纯度硅胶：Fe，Al，Mg等均<10ppm 孔径100A，5m球形颗粒，端基封口 超高含碳量：C18/19%，C8/12% 表面积：300 m2/g 孔体积：1mL/g 特点
好峰形，好重现性，不同的选择性，使用寿命长
Waters聚合物基质的反相柱
(Mobile phase)——液体或气体色谱柱(Column)
色谱法简单分类
按溶质在分离过程中的原理：
• • • 吸附色谱 分配色
高效液相色谱(HPLC) High Performance Liquid Chromatogrphy
高选择性 高效能 高灵敏度 分析速度快 应用范围广
对未知物分析的定性专属性差 需要与其他分析方法联用(GC-MS,LC-MS)
HPLC原理及基本操作
色谱分离
淋洗液
慢 中等 快
Temporal course
定义：利用物质的物理化学性质建立的分离、 分析方法 目的：定性分析或定量分析
1．1906年由俄国植物学家Tsweet创立(命名) 植物色素分离 2．现在：一种重要的分离、分析技术 固定相(Stationary phase)——固体或是液体 流动相(Mobile phase)——液体或气体 色谱柱(Column)——各种材质和尺寸 被分离组分——不再仅局限于有色物质
4、环境分析
5、精细化工
发展趋势
1.新型固定相: 如手性固定相.
2.新型检测器(Detector): 如PFPD(GC),
ELSD(PHLC). 3.色谱新方法: 如SFC, HPCE, 4.色谱联用技术: 如GC-MS, GC-FTIR, PHLC-MS, SFC- MS, GC-ICPAES. 5.色谱专家系统: 优化样品处理,分离条 件,定量及结果分析
1. 储存和输
送液体设
备
2. 进样系统
3. 柱系统 4. 检测器 5. 控制和数 据处理系 统
1. 保留时间 tR(retention time) 2. 死时间t0： 3.调整保留时间tR’
t t R t0
' R
液相色谱法的分离原理
液相色谱法的分离原理
液相色谱法（liquid chromatography, 简称LC）是一种基于溶液中被分离物质与固定相之间选择性相互作用力的色谱技术。
它利用固定在柱上的固体填充物（固定相）的特异性相互作用能力来实现样品中化合物的分离。
液相色谱法的分离原理主要包括以下几个方面：
1. 吸附色谱分离原理：这是最常见的液相色谱分离原理。
其基本原理是样品中的组分与填充柱固定相表面发生吸附作用，进而通过洗脱溶液中的移动相来实现物质的分离。
不同样品成分与固定相的相互吸附作用力的强弱决定了它们在柱中被保留的时间，从而实现分离。
2. 分配色谱分离原理：这种原理主要通过溶液中的物质在两个不同相之间的分配系数来实现分离。
柱内装有极性或非极性的液体填充物，移动相通过填充物时，样品中的成分会在两相之间进行不断地分配与再分配，从而实现分离。
3. 离子交换色谱分离原理：这种分离原理主要基于固定相上存在离子交换基团（阳离子或阴离子交换树脂）。
样品中的离子与交换基团之间发生离子交换反应，从而实现物质的分离。
离子交换色谱主要用于有机物或无机离子的分离和富集。
4. 凝胶过滤色谱分离原理：该原理利用固定相的孔隙大小与样品成分的分子量相比较，使分子小的物质能渗透进入孔隙内，而分子大的物质则在固定相表面滞留，从而实现分离。
总的来说，液相色谱法利用固定相与溶液中组分之间的相互作用力来实现样品的分离，不同的分离原理会根据具体的实验需求和样品特性来选择和优化。
高效液相色谱测定抗坏血酸对映体色谱柱选择
高效液相色谱测定抗坏血酸对映体色谱柱选择
高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分析技术，具有高分离效率、高灵敏度和高选择性的优点。
抗坏血酸是一种重要的生物活性物质，它存在于自然界中并且对人体有很多益处。
抗坏血酸有两个对映体，分别是L-抗坏血酸和D-抗坏血酸。
选择一种适用于分离抗坏血酸对映体的色谱柱非常重要。
在选择抗坏血酸对映体的色谱柱时，需要考虑以下几个因素：
1. 分离效果：色谱柱的分离效果是首要考虑的因素。
对于抗坏血酸对映体的分离，应选择一种具有良好分离能力和分离效率的色谱柱。
一般来说，手性色谱柱是最常用的用于分离对映体的方法。
常见的手性色谱柱有手性HPLC柱、手性SFC柱等。
3. 灵敏度：对于抗坏血酸对映体的分析，尤其是在低浓度条件下，需要选择一种具有高灵敏度的色谱柱。
色谱柱的灵敏度直接影响到对映体的检测限和定量结果的准确性。
4. 色谱方法：除了色谱柱的选择，还需要考虑适用的色谱方法。
对于抗坏血酸对映体的分离，可以选择手性色谱、反相色谱或离子对色谱等方法。
根据需要选择适用的色谱方法，有助于提高分离效果和分析结果的准确性。
在实际选择抗坏血酸对映体的色谱柱时，可以根据以上因素进行评估和比较，选择适合自己研究需要的色谱柱。
也可以参考文献中已有的方法和经验，以提高选择的准确性和效果。
要注意合理使用色谱柱，根据需要进行保养和更换，以确保色谱柱的使用寿命和分离效果。
液相色谱柱操作技术
液相色谱柱操作技术杨征敏液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。
正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合CN,NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团（ODS）称为C18 柱，其它常用的反相柱还有C8,C4,C2 和苯基柱等。
另外还有离子交换柱，GPC 柱，聚合物填料柱等。
反相色谱柱的选择1．柱子的PH 值使用范围反相柱优点是固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。
但硅胶为基质的填料，使用时一定要注意流动相的PH 范围。
一般的C18 柱PH 值范围都在28，流动相的PH 值小于2 时，会导致键合相的水解；当PH 值大于7 时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解。
一旦发生上述情况，色谱柱入口处会塌陷。
同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。
如果流动相PH 较高或经常使用缓冲液时，建议选择PH 范围大的柱子。
2．戴安公司Acclaim 柱子介绍—极性封尾C16 固定相柱戴安公司有28 种柱子，Acclaim 反相柱填料高纯，金属含量极低，完全封尾。
PH 29范围内兼容，低流失，高柱效。
尤其是推出的Acclaim 极性封尾C16 柱，是最先商品化的磺酰氨O链接键的色谱柱，具极低的硅羟基活性，能在极性溶剂甚至100%水的条件下长期使用。
对酸性和碱性化合物有极为尖锐的好的色谱峰形，与现有的一流色谱柱相比有更好的立体选择性。
液相色谱柱的使用色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。
1、样品的前处理a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、使用0.45μm 的过滤膜过滤除去微粒杂质（固体不溶物、无机盐和细菌）。
液相色谱的方法开发_分离机理及色谱柱
液相色谱的方法开发_分离机理及色谱柱液相色谱（Liquid Chromatography，LC）是一种基于溶解性的物质在液相中的分离性质，利用溶液在固定相（色谱柱）中的分配和分离来实现分析或纯化的方法。
液相色谱是分析化学中最常用的技术之一，广泛应用于食品、药品、环境、生物化学等领域。
液相色谱的方法开发分为两个主要方面：分离机理和色谱柱的选择。
分离机理包括溶质在液液分配和扩散过程中的相互作用、溶质与色谱柱固定相之间的相互作用等。
色谱柱的选择则是选择适合实验目标的固定相材料和柱形特征。
在液-液分配过程中，静电相互作用、范德华力和氢键是影响分离的重要因素。
静电相互作用包括溶质和固定相之间的离子-离子、离子-双极子、离子-极性分子和极性分子-极性分子间的作用。
溶质与氢键供体或受体之间的氢键相互作用会影响分离。
范德华力是分配过程中非极性分子与溶剂和固定相之间的相互作用。
这些相互作用决定了溶质在液相色谱中的保留时间和分离性。
色谱柱是液相色谱中最重要的组成部分，包括固定相和柱型。
固定相可以是液态、固态或附着于固态的液-固混合相。
选择合适的固定相材料对于分析结果和柱寿命非常重要。
最常用的固定相材料包括疏水相、亲水相、离子交换相、手性相等。
疏水相适用于疏水性或非极性化合物的分离，亲水相适用于极性化合物的分离，离子交换相适用于离子化合物的分离，手性相适用于手性化合物的分离。
不同的固定相材料适用于不同的样品类型和分离目标。
柱的形状和尺寸也会影响液相色谱的分离性能。
柱形包括直管柱、针型柱、螺旋柱等，常见的为直管柱。
柱的内径和长度决定了柱的分离能力和保留时间。
内径越小，分离能力越高，但流速越慢。
柱的长度越长，分离能力越高，但分析时间越长。
根据实验要求，我们需要选择合适的柱形和尺寸。
除了固定相和柱形，还有其他因素也会对液相色谱的分析结果产生影响，例如溶剂选择、流速控制、温度等。
溶剂选择应考虑样品性质和固定相的亲水/疏水性。
液相色谱分离技术
液相色谱分离技术是一种常用的分离技术，它可用于分离各类化合物，例如药物、天然产物、生物分子等。
它采用一种特殊的柱子，称为色谱柱，将待测化合物从混合物中分离出来。
本文将讨论的基本原理、色谱柱、检测器以及应用领域。
的基本原理是基于样品在移动相和固定相间的分配系数不同进行分离。
移动相是液态的，其经由色谱柱疏水层或离子层与样品中的化合物分配。
移动相是不断从样品中流过的，样品中的溶质将分配到移动相中，并因此在柱中移动。
这种移动相分散了样品，使它们在色谱柱中均匀分布，从而充分利用了柱子内表面的面积。
固定相是在色谱柱基质上发展的，它主要利用了不同化合物在不同类型的固定相上分配系数的变化。
固定相的类型对色谱柱分离性能有重要影响。
操作者必须确定哪种固定相的性质最适合样品的分离和检测。
色谱柱是由固定相填充而成的工具，它使得在柱中并流同一移动相的混合物可以移动和分离，并在柱的底部收集其成分。
根据柱的类型，色谱柱可能是普通固定相柱、专用柱或拟静态柱。
普通固定相柱用于分离含有两种以上化合物的混合物。
检测器是负责检测分离出来的化合物的工具。
检测器通常是一个能够测定各种化合物共存情况的仪器，例如紫外可见光谱法、荧光光谱法、电化学检测法以及质谱分析法。
在使用时，对检测器的选择是至关重要的，因为检测器将直接关系到检测的灵敏度和分辨率。
广泛应用于复杂样品的分析和纯化中。
生物化学家利用测定蛋白质和其他生物大分子的结构和活性，研究它们在生物体内的作用，以及在生产过程中的组成和含量。
药品、化妆品和食品工业使用此种技术以保证其产品的安全性。
在环境科学和计划，该技术主要包括空气、水、土壤、食品等样品中的化学品的测定。
在食品行业中，被用于检测添加化学品和毒素，例如防腐剂和农药，以保证消费者的健康和安全。
总之，是一种强大的分离和检测工具，它在各种不同的领域和应用中得到了推广和应用。
这种技术基于样品分配到不同相的原理，利用了移动相和固定相之间的分配系数的变化，为在复杂气相中的分析提供了新的途径。
《液相色谱分离法》课件
3 后续学习和深入研
究的建议
建议进一步学习和掌握 液相色谱的原理和应用， 以及最新的技术进展， 为研究和实验提供更丰 富的分析手段。
数据的处理与分析
数据的处理与分析包括峰的识别、峰面积的计算和结果的解释，以完成定量和定性分 析。
应用和拓展
1 液相色谱在实际应用中的常见场景 2 液相色谱的技术进展和未来发展
方向
液相色谱广泛应用于医药、食品、环境、
化工等领域，例如药物检测、食品安全监
液相色谱在仪器设备、分离介质和检测方
测和污染物的分析。
手性色谱
手性色谱是一种用于分离 和鉴定手性化合物的方法， 常用于药物合成和生化分 析。
仪器设备
1 液相色谱仪的基本构成
2 液相色谱仪的使用方法和操作流程
液相色谱仪由进样系统、色谱柱、检测器 和数据处理软件等组成，确保分离和检测 的可靠性和准确性。
液相色谱仪的使用方法包括样品准备、进 样、运行方法设置和数据分析等步骤。
法等方面不断发展，为更高效、更精确的
分离和分析提供了新的可能。
总结
1 液相色谱分离法的
优缺点
液相色谱分离法的优点 包括分离效果好、选择 性高和适用性广泛，缺 点是分离时间长和一些 化合物不易分离。
2 液相色谱在实验中
的重要性
液相色谱在分离和定量 分析方面具有重要的应 用价值，是科学研究和 实验室工作中不可或缺 的技术手段。
《液相色谱分离法》PPT课件
这个PPT课件将介绍液相色谱分离法的基本原理、仪器设备和实验步骤，以 及其在实际应用中的应用场景和技术进展。同时还探讨了液相色谱分离法的 优缺点，以及深入研究的建议。
什么是液相色谱分离法
液相色谱分离法是一种基于样品在液体流动相与固定相之间的分配行为进行物质分离的技术。它广泛应 用于药物分析、食品安全监测和环境污染检测等领域。
适用于蛋白质分离的HPLC型SEC色谱柱
用于HPLC 分离的XBridge Protein BEH SEC ■■■■■用于SEC HPLC 分离10-1,500 kDa 范围内的蛋白质，具有更高的通量卓越的SEC 色谱柱寿命与硅胶基质SEC 色谱柱相比，显著减少不希望发生的蛋白与色谱柱之间的相互作用全面的测试可保证无可比拟的柱间一致性，并提高了已验证方法的可靠性互补ACQUITY UPLC ® SEC 色谱柱系列，可根据不同的应用需求实现方法的无缝转换[ 产品解决方案 ]沃特世XBridge ® Protein BEH SEC 200Å和450Å, 3.5 µm 补现有的用于蛋白分离的小粒径UPLC HPLC SEC 色谱柱基于相同的沃特世亚乙基桥杂化颗粒(合技术，与传统100%硅胶基质SEC 产品相比性能更佳。
因此，色谱工作者现在能够根据实验室仪器、所需蛋白组分分离度和样品通量的要求，轻松地开发和/或转换SEC 方法。
适用于蛋白质分离的HPLC 型SEC 色谱柱图1. XBridge Protein BEH SEC 200Å(绿色)和450Å(蓝色)，3.5 µm 粒径SEC 色谱柱上所得的各种蛋白质、多肽和尿嘧啶的校准曲线。
图2. XBridge Protein BEH SEC 450Å(上图)和200Å(下图)，3.5 µm 粒径SEC色谱柱上各种蛋白质、多肽和尿嘧啶的曲线分离结果的比较。
图3. 沃特世BEH200 SEC 蛋白质标准品混合物(部件号：186006518)在(A )其它品牌的250Å, 5 µm SEC 硅胶基质色谱柱，流速为1.0 mL/min 和(B )XBridge Protein BEH SEC 200Å, 3.5 µm 色谱柱，流速为2.0 mL/min ，100 mM 磷酸钠缓冲液，流动相pH 6.8条件下分离结果的比较。
欧洲药典10.02.2.4620246色谱分离技术
07/2016:202462.2.46.色谱分离技术色谱分离技术是样品组分在流动相和固定相两相中分布的多级分离方法。
固定相可能是由固体或凝胶承载的固体或液体。
固定相可以填充在一柱子内，或分散成一层，或分布成一层薄膜等。
流动相可以是气体或液体或超临界流体。
分离可能是基于吸收、质量分布（分配）、离子交换等，或者基于分子理化特性的不同，诸如分子的大小、质量、体积等。
本文包含了常用参数的定义和计算及系统适用性通常适用的要求。
分离的原理、装置和方法在下列通用方法中给出：—纸色谱（2.2.26）;—薄层色谱（2.2.27）;—气相色谱（2.2.28）;—液相色谱（2.2.29）;—尺寸排阻色谱（2.2.30）;—超临界流体色谱（2.2.45）。
定义各论中的系统适用性和可接受标准已经用下文定义的参数设置。
对于某些设备的某些参数，例如信噪比和分离度，可由设备制造商提供的软件计算。
使用者有责任确保该软件的计算方法与欧洲药典的要求相当，如果不是这样，进行必要的修正。
色谱图检测器响应、流出液浓度或用于测量流出液浓度的其他数量对时间或体积的一种图解或其他的表示方法。
理想的色谱图被描述成是基线上高斯峰的序列（图2.2.46.-1）。
峰当某一单一组分（或者2或更多未分离的组分）从色谱柱被洗脱出来时，色谱图中记录检测器响应的部分。
色谱峰可用下列参数定义，峰面积或峰高（h）及半峰高处的峰宽（w h）或峰高（h）及拐点之间的峰宽（W i）。
在高斯峰中（图2246.-1）,有下列关系：W h = 1.18W i保留时间（t R）洗脱出某一组分所需的时间（图2.2.46.-1，基线刻度以分钟表示）保留体积（V R）洗脱出某一组分所需的流动相体积。
可使用下面公式，通过保留时间和流速（F）, 单位毫升每分钟，来计算：V R = t R X F滞留时间（t M）洗脱出非保留组分所需的时间（图 2.2.46.-1，基线刻度以分钟表示）。
尺寸排阻色谱中使用符号t o表示（见下文）。
博蕴生物色谱柱
博蕴生物色谱柱
博蕴生物色谱柱（Bioecosphere columns）是一种高性能液相色谱柱，用于生物分离和分析。
该柱由博蕴生物技术公司（Bioecosphere Technologies Inc.）开发和生产，以提供优异的分离性能和分析结果。
博蕴生物色谱柱采用高质量的硅胶基质，并具有独特的表面改性技术，可提供高效、高分离度和高重复性的色谱分离。
该柱适用于各种生物分子的分离，如蛋白质、多肽和核酸等。
博蕴生物色谱柱提供多种尺寸和填充材料选择，以满足不同分离需求。
同时，该柱还支持常见的色谱模式，如反相、离子交换、凝胶过滤等，适用于不同的应用领域。
博蕴生物色谱柱具有以下特点：
1. 高分辨率和高选择性：优化的硅胶基质和表面改性技术可提供卓越的分离性能，能够准确、快速地分离复杂的生物样品。
2. 高效率和高重复性：柱内填充材料均一性好，能够实现高效的分离，并保证分析结果的可重复性。
3. 宽pH稳定性范围：博蕴生物色谱柱具有良好的耐酸碱性能，在不同pH值下稳定运行，适用于多种样品类型和分析条件。
4. 长寿命和稳定性：优质的硅胶基质和表面改性技术使得博蕴生物色谱柱具有较长的使用寿命和稳定性，能够满足长时间的分析需求。
综上所述，博蕴生物色谱柱是一种性能优异的液相色谱柱，广泛应用于生物分离和分析领域，能够提供高质量的分离结果和可靠的分析数据。
分离分析—色谱柱系统B
分离分析—色谱柱系统B色谱柱系统由色谱柱、进样器、检测器和控制系统等组成。
在色谱分离中，色谱柱是至关重要的，它是样品分离的载体。
色谱柱系统B是一种高性能液相色谱柱系统，常用于分析复杂的混合物。
色谱柱系统B的色谱柱通常采用高效液相色谱柱，具有较高的分离能力和分辨率。
这种色谱柱由一定长度的包覆着固定相的管状材料构成，通常使用不同的填料来实现不同的分离。
色谱柱系统B的进样器是样品进入色谱柱的入口，通常采用自动进样器。
自动进样器可以实现精确和稳定的样品进样，提高分析的准确性和重复性。
色谱柱系统B的检测器是用于检测分离物的信号输出设备。
常用的检测器包括紫外可见检测器、荧光检测器、电化学检测器等，根据不同的分析需求选择不同的检测器。
控制系统是色谱柱系统B的核心部分，用于控制和调节整个色谱分析的过程。
控制系统包括色谱仪控制器、数据采集系统等，可以实时监测和记录分析结果。
色谱柱系统B在分析中具有以下特点和优势：1.高分辨率：色谱柱系统B采用高效液相色谱技术，能够实现样品分离和分辨率较高的分析。
2.宽线性范围：色谱柱系统B的检测器具有宽线性范围，可以适应不同浓度范围的样品分析。
3.快速分析：色谱柱系统B的分析速度快，通常只需要几分钟或更短的时间就可以完成一次分析。
4.高精度和高重复性：色谱柱系统B采用自动进样器和精密控制系统，可以实现高精度和高重复性的样品进样和分析。
5.多种检测方式：色谱柱系统B可以根据不同的分析需求选择不同的检测器，如紫外可见检测器、荧光检测器等，扩展了分析的应用范围。
色谱柱系统B在许多领域中广泛应用，如环境监测、食品安全、药物分析等。
通过色谱柱系统B的分离分析，可以得到准确和可靠的分析结果，为科研和生产提供重要的数据支持。
超高效液相色谱柱
超高效液相色谱柱
超高效液相色谱柱，简称UHPLC柱，是一种用于分离复杂混合物的高灵敏度、高分离性以及高精密度的柱填料。
它使用高流动速率，以及微小的孔径大小和细长的柱体，能够更快地将混合物分离出来。
UHPLC柱具有极高的分离效率和良好的精确度，且分析时间更短，并且对样品的要求也比传统的液相色谱柱要求更低，因此被广泛用于生命科学领域的分析检测中。
UHPLC柱的工作原理是利用液体的压力来把混合物分离开，基本过程是将样品加入柱内，然后通过柱腔内的驱动力，利用液相色谱的原理，将样品里的不同组分慢慢分离出来，最后收集分离出来的每一组分。
UHPLC柱具有细长柱体，小孔径以及高流速，使得它具有更高的分离效率，而且分离时间更短。
UHPLC柱的优点是分离效率高、分离快、灵敏度高、精确度高。
由于它分离更快，因此可以避免部分组分降解或凝固，防止样品组分的损失。
即使是一种复杂的混合液，也可以在更短的时间内完成分离，从而节省大量的时间和人力资源。
它的灵敏度很高，可以更准确地检测出来，精确度也更高，因此它可以提供更准确的数据。
然而，UHPLC柱也有一些缺点。
由于柱体很细，孔径很小，因此运行时易于堵塞，容易造成故障，需要定期维护和清洗，以保证柱的性能。
另外，UHPLC柱的价格高于传统的液相色谱柱，因此不太适合小型实验室的使用。
总之，UHPLC柱是一种高效的色谱柱，具有极高的分离效率和精确度。
它可以更快更准确地将混合物分离出来，而且分析时间更短，在不同的分析检测中有着广泛的应用。
但是由于它价格昂贵，容易堵塞，所以仍然有一定的局限性。
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Obelisc™HPLC 色谱柱———液相分离池技术
Obelisc™色谱柱是由Primesep 的发明者，采用SIELC最新技术研制的新型色谱柱。
在众多专利中，Obelisc色谱柱是第一个商业化的应用液态分离池技术( LiSC™)的色谱柱。
LiSC技术是采用了硅胶孔的新型化学修饰，这种新的修饰形成了一个带有自身电荷特性、tt离子强度和疏水特性的液态分离池。
像活细胞与外界环境存在平衡一样，液态分离池存在于一个与流动相不断平衡的环境中。
与活细胞的相似性
●内部分离池环境与外界环境(流动相)有很大的不同。
●孔壁构成液态分离池的空间和结构。
●分离池的内部环境具有稳定(被限制的)和可交换的(流
动的)组分。
●分离池内部与外部的pH值和离子强度不同。
●开口的孔被用作分析物的膜通道。
●分离池随着外部环境的物理和化学变化而改变。
●这些变化包括长的疏水和亲水链，离子化程度，电荷
分布和反离子特性上的构象变化。
性能卓越的Obelisc™色谱柱的主要特点
1. 较高的池内和流动相离子强度，即使在流动相为低浓度的缓冲液的情况下也能实现带电分析物进出分离池的快速高通量转换。
2. 固定相占据了整个分离池的体积，这一点与其它色谱柱固定相只占据池壁部分不同，它的固定相占据了整个池，这给固定相带来了高负载性。
3. 被长的有机链分开的分离池配合基的正负离子使正负电荷可以同时参与静电相互作用。
基于LiSC™技术的两种色谱柱Obelisc R 和Obelisc N, 运用多种分离机制来分离极性和非极性化合物
Obelisc R 和Obelisc N 色谱柱可替代多种高效液相色谱柱，如:反相柱，AQ型反相柱，极性嵌入式反相色谱柱，正相柱，阳离子交换柱，阴离子交换柱，离子排阻柱和疏水色谱柱。
仅通过两种Obelisc色谱柱和一些简单的适用于质谱仪或者低紫外范围（<220 nm）的流动相便可简化方法开发过程。
具有反相特性的Obelisc R 色谱柱和具有正相特性的Obelisc N 色谱柱在类型和电荷基团的亲合性以及它们长链的疏水性上存在不同。
Obelisc R色谱柱在硅胶表面附近有阳离子基团，一个疏水链将其与硅胶表面分开。
Obelisc N 色谱柱在硅胶表面附近带有阴离子基团，一个亲水链将其与硅胶表面分开。
Obelisc R 和Obelisc N ——两种功能强大的高效液相色谱柱
■这两种色谱柱能够吸附和分离所有类型的小分
子物质以及它们的混合物。
■仅用这两种色谱柱就能快速开发出很多方法。
■简单的流动相选择。
■多样的分离模式(反相, 正相, 亲水, 离子交换)
■为质谱仪，蒸发光散射检测器准备的, 适用于低
紫外范围的（<220 nm）的低浓度缓冲剂
■在各种分离模式下根据有机溶剂含量，pH值和
缓冲能力调整的选择性。
将Obelisc 液相分离分离池技术应用到色谱分离中可得到与其它色谱柱非常不同的结果。
电荷和链构型是可变的，这一点可使分离选择性发生很大的变化。
分析方法的开发重新回归到实验科学而不是对柱子的试验和误差筛选上。
图1表示的是同一混合物在Obelisc R和Obelisc N上使用相似的流动相进行分离的情况。
仅通过改变流动相中乙腈的含量就可以使出峰顺序颠倒过来。
由于色谱柱的反相特性，疏水性的对羟基苯甲酸丙酯在Obelisc R 上的保留时间更长。
而极性组分多巴胺和二羟基丙氨酸在Obelisc N的正相模式中保留时间更长。
Obelisc R色谱柱
Obelisc R 色谱柱具有反相特性，可应用于传统反相条件。
因为具有离子基团和一个长疏水链，Obelisc R 色谱柱可提供传统反相柱所不具有的吸附力和调节力。
Obelisc 色谱柱典型的流动相是乙腈，水以及可适用于质谱的缓冲液甲酸铵(pH3)和乙酸铵(pH5)。
如果有必要在低紫外范围(<220 nm)下检测，建议使用磷酸盐缓冲液。
图2显示的是在调节乙腈含量和缓冲液pH值时，Obelisc R色谱柱的调整能力。
图3是Obelisc R和Zorgbax SB-AQ两个色谱柱分离一个极性药物时的比较。
AQ型色谱柱可以在低有机溶剂含量的流动相下工作，以便用来在反相色谱中分析极性的化合物。
这七种药物可通过Obelisc R色谱柱吸附和分离，但AQ 色谱柱即使在流动相中有机溶剂含量很低的情况下也缺乏吸附和分离能力。
图4 显示的是一个由氨基酸、碱基、酸和中性物质组成的复杂混合物在Obelisc R柱上的分离情况。
疏水性最强的组分甲苯(峰6)先于极性更强的2,6-二甲基吡啶，苄胺和苯甲酸洗脱下来。
在图5中显示的是极性很强的亲水除草剂--百草枯和杀草快在有甲酸铵基线分离的反相条件下被分离的情况。
用传统的C18色谱柱来分离极性异构体是很困难的。
ObeliscR附加的极性相互作用则为此提供了必要的选择性。
图6中对氨基吡啶异构体在Obelisc R色谱柱和普通C18色谱柱上的分离情况进行了对比。
Obelisc R色谱柱在对极性化合物的吸附能力方面与传统的反相色谱柱相比有了很大的提高。
图7 是根据10种极性化合物在Obelisc R色谱柱和两种普通反相色谱柱上的容量因子绘出的图,在各种情况下Obelisc R色谱柱的吸附能力最高可达普通柱的10倍。
而这两种普通反相色谱柱之间的差别很小。
Obelisc N色谱柱
Obelisc N色谱柱具有很好的极性特点,并且非常适用于极性以及带电样品的分离,在离子交换模式下，带电样品与固定相上相反的电荷基团存在相互作用。
Obelisc N色谱柱的正负电荷基团可与样品的电荷基团发生相互作用。
而在传统的亲水色谱模式中,带电
的或者中性的极性样品与极性固定相表面的水层相互作用。
在Obelisc N 色谱柱上，电荷被很好的分开，能独立地与分析物作用，这使Obelisc N 色谱柱与其他传统的亲水色谱柱和硅胶色谱柱(图8)相比，具有不同的选择性。
图9 显示的是pH值和有机溶剂含量对糖，氨基酸和羧酸分离的影响。
图10 是糖在亲水色谱模式下分离的一个例子。
流动相的组分不同可以改变长的亲水链的构成。
这会影响到液相分离池的性质和分离的选择性。
图11 显示的是缓冲液浓度对氨基丁酸异构体分离的影响。
仅通过改变缓冲溶液的浓度来使混合物达到基线分离是很困难的。
图12 显示了极性物质草甘膦在Obelisc N色谱柱上的分离情况。
图13 显示了核酸碱基的分离，从中我们可看出如何通过改变流动相的pH来调整色谱柱的选择性。
在pH5下分离开的峰2和峰3组分，在pH4下无法分开。
图14 显示的是用蒸发光散射检测器检测到的离子交换色谱对阴离子和阳离子的分离。
用于Obelisc N 色谱柱的典型的流动相是乙腈，水以及适用于质谱的甲酸铵(pH3)和乙酸铵缓冲液。
如果有必要在低紫外范围内检测(<220 nm)，那么建议使用磷酸盐缓冲液。