家蝇体内卵对CAT的摄入和传代的观察

乙 醇 沉 淀 ，最 后 溶 于 Ｔ 中 ，贮 于 ２ ℃待 用 。 Ｅ ０
１
Ａ
Ｂ
２
３ １
Ａ
２
３
Ｃ
Ｂ
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图 １ 影 响 注射 结 果 的 日 素 比较 （ 杂 交 结 果 ） 点
Ｆｉ ．１ Ｄｏｔｈｙ ｉ ｉ ａ ｉ ｎ ０ ｈ ａ ｔ ｇ ｈｒｄ ｚ ｔｏ ｆｔ ｅ ｆ ｃ ｏｒ ｏｆａ ｆ ｃ ｎｇ ｉ ｅ ｔ ｆｅ ｔ ｆｅ ｔ ｎｌｃ ｉ ｅ ｆ ｃ ｉ ｏｎ
的另一端 ，缓缓地将 针刺＾约 ｌ ｍｍ 深 的位 置 ，然 后 轻 轻 地 将 液 体 吹 ＾ （ 意 不 要 将 空 气 吹 ＾ ） 本 实 验 注
在 同一 饲 养 条 件 下 ，分 别 进 行 了 ３组 试 验 ：第 １组 选 择 腹 部 和 背 部 两 种 不 同 的 注 射 部 位 ，用 １ ｇ的剂 ． 量 ， 分 别 注 射 刚 羽 化 ３ ６ ｈ的 家 蝇 ；第 ２组 在 同 一 注 射 剂 量 ｎ ５／ ） ， 分 别 对 ４个 时 段 ｄ 、 ２ 、 ３ ．ｘ 下 ｇ ２ ４ ６ ４ ） 家蝇 进 行 注 射 ； 第 ３组 对 刚 羽 化 ３ ８ｈ的 ６ｈ家蝇 进 行 了 ８个 不 同 剂 量 （ｌ、 １５ ２ ．２５ ３０ｘ） 比 １ ０ ．、 ． ０ 、 ． ／ 的 ｇ
照 。
膻 洼 总 共 ３批 ，１ Ａ、 １ 、 １ 为 第 １批 Ｆ 卵 、Ｆ Ｂ Ｃ 幼 虫 、 Ｆ２卵 ・ ２ Ａ、 ２ Ｂ、 ２ 为 第 ２批 Ｆ１卵 、Ｆ】幼 Ｃ 虫 、Ｆ 卵 ・３ Ａ、 ３ 、 ３ 为 第 ３批 Ｆ，即 、Ｆ 幼虫 、 Ｂ ｃ
Ｆ 卵 ｛ １ 阳 性 质 粒 （ｐ ｓ ＣＡＴ 对 照 Ｆ Ｄ 阴 性 。 Ｄ ｂｐ ） ２
１４ ｍｍｏ ／Ｌ 蔗 糖 ．１８ｍｍｏ ／Ｌ Ｃａ ， ２４ ３ 【 ． ｌ Ｃ１ ， ． ｍｍｏ ／Ｌ Ｎａ １ ＨＣＯ Ｐ ．） ３嵌 ， 用玻 棒 搅 戚 均 浆 ，然 Ｈ８０洗
后 加 ＾ 等 体 积 家 蝇 缓 冲 液 ｆ． ｏ２ ５ｍｏ／ Ｌ Ｔｒ ＨＣＩ ０５ｔｏ ／ Ｌ Ｎａ ， １ｍｍｏ／ Ｌ Ｐ Ｓ ｔ ｉ ｓ ， ． ｏ ｌ Ｃ［ ｌ Ｍ Ｆ， ５ ｍｍｏ ］ ／Ｌ Ｎａ Ｏ ） 匀 ， 加 ＾ １ ０体 积 冰 砖 的 ７ 高 氯 酸 ＣＡ） ＨＳ 混 ／１ ０ ，在 冰 上 感 作 １ ａｉ，１ ０ ／ｍｉ ３ｒ ｎ ００ ０ ｒ ｎ离 心 ５ ｉ ，弃 上 清 液 ， 用 ５ Ｐ Ａ 洗 沉 淀 ２谯 ，回 收 沉 淀 。 用 ２倍 体 积 Ｏ３ｍｏ ／Ｌ Ｎａ ａ ｒｎ Ｃ ． ｌ ＯＨ 悬 浮 沉 淀 ，在 ３ ℃ 下 感 作 １ｈ ７ ，加 ＾ １ ５体 积 的 ７ Ｐ Ａ ，在 冰 中 冷 却 １ ａｉ ，用 ５ Ｐ Ａ 洗 涤 沉 淀 １谯 ， 回 收 上 ／ ０ Ｃ ｎ ０ｒ Ｃ 清 渣 。 将 沉 淀溶 于 ８ ０体 积 １ Ｐ ／１ ． ５ ＣＡ， 在 ９ ℃ 感 作 ２ ａｉ Ｏ ０ｒ ｎ，加 １ ０体 积 的 １５ Ｐ Ａ ，在 冰 上 砖 ／２ ． Ｃ 却 ，用 １ｊ Ｐ ． ＣＡ 冼 潦 沉 淀 １ ， 回收 上 清 蒗 。 台 并 上 两 次 上 清 液 ， 用 酚 ／ 氯 仿 抽 提 ，２倍 体 积 冷 无水 趺
１５ ｇ ｐ ｐＣＡＴ ｍ ｒ ２ ｔ ２ … ． ｈｓ ｆ ｎ Ａ ｏ Ｄ ｓ ｆ ｌｏ ： １ ， ｏｌ ｗ ２
２ ．６ ４ ４ ３ ， ８ｈ‘３ ｈ ｙ ｎｅｔｄ ｉｔ ｏ ｓ ｆ ｔ ．Ｔ ｅｗａ ｓｉｉ ｅ ｎｏ ｈ ｕ ｅ ｙｗｉ ｅ ｌ ｈ
对 已 纯化 ｐ ｓ Ｃ ｈｐ ＡＴ ＤＮＡ 进 行 消 化 提 纯 ，并溶 于双 蒸 水 中 ，测 其吉 量 ， 置－ ０ ２ ℃贮 存 备 用 ＝ １ ， 注射 方 法 ．条 件 以 及 寡蝇 卵 和 幼 虫 的 收 集 ４ 家 蝇 用 乙 醚 麻 醉 后 ｔ将 其 放 在 解 剖皿 内 ，在 解 剖 显 微 镜 下 ，就 准 注 射 部 位 ，１只 手 用 镊 子 将 家蝇 固定 ，另 １ 手 持 带 有 目的基 因的 注射 针 ，用 嘴 音 住 胶 管 （ 只 自制 ）
制 备 方 法 参 照 《分 子 克 隆 》 （ 冬 雁等 译 ，１ ９ ） 用 生 理 盐 水 稀 释 其 质 粒 ＤＮＡ， 在丹 光 光 度 计 上 测 定 其 金 ９ ２。
■蟹，然后置于 ２ 备用｝ ０ ｃ ②质粒 Ｄ ＮＡ的线性化：用 Ｘ ｏＩ ｈ 限制酶 ｉｍ 公司购买） ｇａ ，按其操作方法
物 ， 包 括 基 因 表 达 研 究 以及 疾 病 模 型 和 生 物 反 应 嚣 的 构 建 等 ，并 且 获 得 了 可喜 的 进 展 和 成 果 。但 是 由于 受 精 卵 来 源 有 限 ， 外 源 基 因整 台 随 机 性 极 大 以 及盛 胚 率 和 表 达 率 低 等 原 因 ，转 基 因 哺 乳 动 物 的构 建 和 发 展 受 到 经 费 投 资 太 ，技 术 设 备 要求 高等 条件 限制 ， 因此 人 们 正 在 探 索 新 的 途 径 。 昆 虫 转 基 因 工 程 始 于 ８ ０ 年 代 初 期 ， 主 要 目的 是 将 外 源基 因 或 ＤＮＡ 片 段 引 ＾ 昆 虫 细 胞 ， 使 之 发 生 转 化 ．以 期 收 获 珍 贵 的 生 物 活 性 物 质 ｅ ｌ 等 ．１ ９ ；０’ ｒｃ ｔ ｍｄｅ ｒ ９１ ｂｏ ｈａ等 ， ｌ ８ ） ９ ８ 。本 实 验 的 目的 是 试 图通 过 外 源 基 因 腹 腔 直 接 注 射 法 ， 探 索 外 源 基 因 能 否 进 人 家 蝇 体 内 卵 ，为 家 蝇 的基 因 转 移 提 供 一 个 新 的 有效 的方 法 ，也 为 应 用 转 基 因家 蝇 作 为 生 物 反 应嚣 ，表 达 和 生 产 有 用 的 基 因 产 物 ，探 索 一 条 新 的 途径 。 目前 ， 未见 国 内外 有类 似 的 报道 。
Ｉ ＴＡＫＩ Ｇ Ｎ Ｎ ＡＮ Ｄ ＴＲＡＮ ＳＭ Ｉ ＳＳ１ Ｎ Ｆ Ｉ ． ０ ０ Ｎ Ｉ ＥＣ ＴＥＤ ＣＡＴ ＥＮ Ｅ Ｇ ＢＹ ０ Ｕ ＳＥＦＬＹ Ｈ ＥＧ ＧＳ
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关 键词 三 ！ 旦， ‘ 壁童 苎 垒 墨 型 璺 ，
Ｋｅ ｒ ｓ ＣＡＴ ｅ ｅ Ｈｏ ｓ ｆ ｙｗｏｄ ｇｎ ， ｕ ｅｌ Ａｂ ｏ ｎ ｌ ｎｅ ｔ ｎ．Ｇ ｅｌ ｒ ｎ ｆ ３ ｔ ｎ ｙ． ｄ ｍｉａ ｊｃｉ ｉ ｏ ｉ ｔａ ｓｏ ｎ ａ ｉ ｅ ｒ ｏ
１ 材 料 和 方 法
１１ 寡 蝇 由军 事 医学 科 学 院 五 所 提 供 家 蝇 饲 养 于 ２ ． ７ Ｃ、 １ ２ ｈ光 照 的 条 件 下 ： 成 虫 饲 养 于 一 纱 笼
内 ， 喂 以 奶 粉 、 白 糖 和 水 ，羽 化 后 ３日 即 可 开 始 收 卵 ＝ 幼 虫 可 在 ５ ０ ０ ｍＬ 罐 头 瓶 内 ， 以 麦 麸． 水 、奶
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动
物
学
研
究
１９ ９ ８， １ ｆ ：２ ０ ２ ３ ９ ３） ５ ５
ＣＮ ５ １ ４ ３ ０ ０／ Ｑ Ｉ Ｎ ０ ５ ＳＳ ２ ４￣ ８ ３ ５
Ｚ ｏ ｏｇｉ ａｌＲｅ ｅ ｒ ｈ ｏｌ ｃ ｓ ａ ｃ
家 蝇 体 内卵 对 Ｃ ＡＴ 的摄 入 和传 代 的观 察
粉 、 白糖 ０Ｏ １ ０： ： ） 混 合 物 饲 养 。 ０ｔ ８ １ 的 １ ． 显微注射针的制备 ２ 选 择 较 细 的毛 细 玻 璃 管 ，在 拉 针 机 上 ，制盛 内径 约 １ ２ｐ 的 注射 针 ｍ － ① 注 射 质 粒 的制 备 ：氧 酶 紊 乙 酰转 移 酶 表 达 质 粒 （ ｈｐ ｐ ｓＣＡＴ ＤＮＡ 的 ） １ ． 注射 质粒 的 制 备 和 线 性 化 ３
（ 常 家 蝇 幼 虫 ） 对 ｊ【 ３ 阴 性 （正 常 家 蝇 卵 ） 对 正 ｆ｝ Ｄ ｝
ｊ【 ！。 ｝
１ Ｔ ｅ ａ ｕ ｔｏ ｂ ｐ ｈ ｍｏ ｎ ｆｐ ｓ ＣＡＴ ｉｊｃｅ ｎｏ ３ 一 ｏ ｒ ｎｅ ｔ ｉ ｔ ６ ｈ ｕ ｄ
ｈ ｕｓ ｆ ｒ ｍ １ ｔ １ ａ ｏ ｅ ｙ ｆｏ ｌ Ａ ｏ Ｅ … ｓ ｆ １ ： １ ０，１ ５ ． ， ｏ１ ０ｗ ． ． ，２ ０
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ａ ｄ ｍｅ ｎｅｔ ｎ ｓ ｏ ｔｔｔｅｔ ｓ Ａ，１ ｎ Ｃ ｂ ｏ ｎｉｊｃｉ ｈ ｕ ｈ ｅ ｉ ．１ ｏ ｍｅ Ｂａ ｄ１
本 文 １ ７ ７ ７收 到 ．１ ９ １ ２ ∞ ０ １ ９ ７ ｏ ７修 回
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３抽
刘
燕 等 家 蝇体 内 卵 对 ＣＡＴ 的 摄 ＾ 和 传 代 的 观 察
化 蛹一 羽 化一 然 后 收 集 卵 。
１５ 卵 内核 酸 的 提 取 收 取 一 定 家 蝇 卵 ， 用 家 蝇 生 理 盐 水 ｎ２ ｍｍｏ／ ＬＮａ ， １ ． ８ ｌ Ｃ１ ． ３ｍｍｏ／ Ｌ ＫＣｔ ］
较
上 述 注 射 后 的 家 蝇 ，在 ２ Ｃ 置 笼 内饲 养 ，一 旦 开 始 产 卵 ， 就集 中 收 集 第 ２天 内 的 卵 。 一 部分 保 存 ７ ） 一 部分 置 ５ ０ｍＬ 罐 头 瓶 内继 续 孵 化 ，待 幼 虫 培养 ２天 后 ， 收集 一 部 分 幼 虫 保 存 ，其 亲 部 分 继 续 ， ０
雷 ２ 注 射 家 蝇 传 代 点 杂 交 图
Ｆｉ ．２ Ｄｏｔｈ ｂｒｄ ｚ ｔｏｎ ｏｆｐａ ｓ ｇ ｆ ｇ ｙ ｉｉａ ｉ ｓ ａ ｅｏ
ｉｊｃｅ ｏ ｓ ｆ ｎ ｔｄ ｈ ｕ ｅ ｙ ｅ ｌ
第 １列 示 剂 量 比较 ． １ Ａ、 １ Ｂ、１ Ｃ、１ 、１ 俄 欢 为 Ｄ Ｅ １０ Ｌ 、 ２ ．、 ５ ． ２５和 ３０ ｜ 第 ２刊 示 时 间 比 较 ， ０、 ． ． ｇ ２ Ａ、２ Ｂ、２ Ｃ、２ 依 欢 为 １ 、２ 、 ３ 、 ４ Ｄ ２ ４ ６ ８ ｈ；第 ３列 示 都 位 比较 ，３ Ａ、 ３ 示 膻 洼 ，３ Ｂ Ｃ、３ 示 背 注 ｜２Ｅ Ｄ 阳 性 质 粒 ｂ ｐ ｓＣＡＴ） 照 Ｆ Ｅ 阴 性 旺 常 家 蝇 即 埘 ￣ ３