裸鼠成瘤

肝胆胰脾裸鼠皮下成瘤及原位瘤动物实验方案

裸鼠皮下成瘤及原位瘤动物实验方案分组:正常细胞组、EGFR1转染无关siRNA组、EGFR1转染目的基因（每组6只）。

细胞准备及注射裸鼠方法：到动物室准备实验。

取出未作处理的小鼠和处理后小鼠用鼠笼，顺序摆放在超净台中。

选体形较大的小鼠称重，以3μl/g剂量，腹腔注射10％水合氯醛麻醉小鼠。

约5分钟，小鼠开始进入安静状态，将其仰卧固定。

切忌麻醉剂过量使用。

(1)铺白布于鼠板上，仰卧位固定小鼠四爪，碘伏棉球消毒腹侧面上至颈部、下至腹股沟、后至腋后线。

消毒两次。

铺手术巾于小鼠上，在其左侧剪口（4*4cm），暴露其左侧腹部, 用碘伏消毒一次。

在左侧肋弓下缘1cm处向下剪开2cm皮肤，暴露腹壁肌肉，镊子牵拉腹壁肌肉，避开腹腔内脾脏，剪开腹壁肌肉，暴露内脏。

用棉签蘸PBS，拨出脾脏下极，切忌牵拉，以免损伤脾脏和胰腺。

(2)找到脾脏同时，用25微升Matrigel混合于细胞管中，打悬细胞沉淀，使细胞分散均匀成单细胞悬液。

用BD针吸净EP管中的单细胞悬液，稍退针芯，打出气泡，在脾脏下极内侧（凹面）进针向脾门方向约2mm开始注射细胞，注射完毕停留约30秒钟，缓慢退出针，以防细胞渗出。

同时用蘸PBS的棉球压迫周围出血点止血。

(3)用注射器吸取庆大霉素注射液（用生理盐水250：1稀释）约400微升，注入腹腔，棉球蘸干皮缘渗出的抗生素。

开始缝合腹壁肌肉（连续缝合4针）。

再次用注射器吸取庆大霉素注射液约400微升冲洗缝合口，棉球蘸干。

缝合皮肤（间断缝合4针）。

碘伏棉球消毒缝合口。

撤除固定，使小鼠处于自然体位，放于鼠笼中。

(4)所有细胞注射完毕，剪耳标记，记录剪耳标记及分组情况。

Day5-7：注意小鼠的状态，及时发现小鼠是否有因手术刺激、胰腺损伤、感染等死亡的情况。

Day42：颈椎离断，处死小鼠，解剖尸体，观察脾脏肿瘤生长状况，肝脏、肺脏及其他器官是否有转移瘤形成。

所有可疑组织均做好标记，拍照，若有表面结节，计数后，冻于液氮中。

裸鼠成瘤ppt课件

瘤
2.建株的人体肿瘤组织培养细胞
理论上建株的肿瘤细胞均可以
我们实验室均采用细胞株作为材料，这个方式是性价比最高的，操作简便，材料安全且容易获取。
6
细胞株的选择细胞的选择大致有一下几个方面：
1.国际公认度较高的细胞株。 2.根据体内生长情况来确定，很多细胞株，在文献中有
很高的出镜率，但是实际上，基本都是从体外开始有名。当然，我们对于细胞株的选择是没有选择的！
一些比较有争议的细胞：
Hela（宫颈癌），HCT（人回盲肠癌细胞/人结直肠癌腺癌细胞）。
8
细胞慢病毒感染
1、慢病毒保存
理论上慢病毒可在-80℃保存6个月，在4℃可保存3天。因为慢病毒每次冻融会降低病毒滴度10%，因此慢病毒实验最好是提前分装。
2、MOI值
细胞感染达到80%以上所需MOI值，这个大部分细胞是可以查到，不过因为因为慢病毒感染细胞是很灵活的，因此MOI 值的选择也是很有差异性的，具体情况具体分析。
裸鼠皮下成瘤
---慢病毒感染后的细胞
1
裸鼠
无胸腺裸鼠（Nude Mouse，简称裸鼠）。目前已成为医学生物学研究领域中不可缺少的实验动物模型。特别是在肿瘤学、免疫学、药品与生物制品的安全性评价及有效药品的筛选等实验方面，它有着特殊的价值。
裸鼠（纯合子nu/nu突变鼠）主要表现为无毛（但可看到一种细毛组织学证明有被毛滤泡）以及缺乏正常胸腺。杂合子小鼠（nn/+）各方面表现都正常。
9
细胞慢病毒感染
附：慢病毒使用量的相关计算公式 MOI=（慢病毒使用的体积*慢病毒滴度）/ 需要感染的细胞数其中：慢病毒使用体积单位为ml 慢病毒滴度单位为TU/ml 例如： Hep-G2细胞，MOI=20，慢病毒滴度=1.0*108 TU/ml, 24孔板的细胞总数：2.0*105个。因此：感染24孔板中1孔的HEP-G2细胞所需要的慢病毒体积为： (20* 2.0*105)/ 1.0*108 =0.04ml

裸鼠皮下移植瘤实验造模步骤

裸鼠皮下移植瘤实验造模步骤顾名思义，这种模型的建立是将肿瘤细胞或肿瘤组织直接种植在小鼠的皮下。

种植的点也有讲究，一般选择血运淋巴回流丰富的腹股沟和腋窝。

可根据实验设计选择移植点，统一移植点的位置，除了遵守实验统一的条件外，待肿瘤成熟后收集肿瘤时留下照片证据也显得美观。

裸鼠（Balb/c 鼠，无毛发， T 淋巴细胞缺陷）是比较常见和常用的实验用鼠，尤其是在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。

裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。

当然，这种肿瘤模型也有缺陷，即不能很准确的模拟正常人体肿瘤发生发展的过程。

☞肿瘤细胞移植时的简要步骤首先准备好要移植的肿瘤细胞（细胞量根据不同肿瘤略有不同，我们所用的前列腺癌细胞系每个移植点一般选择1x106 左右；肿瘤细胞可与基质胶 1:1 混匀后用 1 ml 注射器吸取，基质胶能够给肿瘤细胞提供营养环境，有助于肿瘤细胞生长）。

戴无菌手套后，将小鼠用左手大拇指和食指捏住颈部皮肤，然后将鼠尾用左手无名指和小指固定于左手大鱼际。

将腋窝或腹股沟用75% 酒精消毒3 次。

右手持吸有肿瘤细胞和基质胶混合液的注射器，在腹股沟或腋窝的位置，45 度斜角进针，注意不要突破腹膜，将针头保持于皮下位置。

然后近水平位置将针头几乎完全插入皮下，将混有基质胶的肿瘤细胞注射入皮下（肿瘤细胞量约1x106），快速退针，左手食指轻压针孔约1 min 后将小鼠放回饲养笼中，注意将小鼠侧放于垫料上，放置其不适呕吐时呕吐物误入呼吸道引起窒息。

2～3 h 后观察小鼠是否苏醒。

如果是利用肿瘤组织（人体肿瘤标本或小鼠移植瘤传代）建立裸鼠皮下移植瘤模型，则需要首先将肿瘤组织用无菌PBS（或1640 培养基）洗涤3 次，然后在无菌平皿上切成或用无菌剪刀剪成<1 mm3体积的小块（种植前可裹基质胶）备用。

将小鼠用水合氯醛麻醉后平卧于解剖板上，四肢用胶带固定，将腋窝或腹股沟用 75% 酒精消毒 3 次，然后用眼科剪剪开约 0.5 cm 小口，小镊子将皮下筋膜与皮肤分开，然后将肿瘤组织放入贴近腹股沟或腋窝的深部，每个位置放置 2～3 块肿瘤组织，注意不同组间统一放置肿瘤组织块数以保持一致。

裸鼠肿瘤造模的一点经验分享

1、取5-6周龄裸鼠饲养(此时大小约16-23g。

)。

虽然此时的裸鼠个头较小，但是，标准的做法与权威的文章都是如此。

考虑可能是此时裸鼠个体差异小，对实验数据影响小吧。

2、制备肿瘤细胞悬液，按5×10*6-2×10*7细胞/只(稀释成0.2ml)接种于裸鼠腹腔，形成腹腔种植瘤。

(小鼠腹水出现情况一般如下：5～6 d出现腹水，6～8d抽取传代最好，10～12 d出现血性腹水，14～15 d小鼠开始死亡。

)3、取腹水瘤，细胞数5×10*6-2×10*7，稀释成0.2ml接种于裸鼠前腋皮下。

4、加药。

根据使用药物的不同，方法各异。

时间上可以是24小时，或第1、3、5天等等。

给药方式可以是腹腔或鼠尾静脉。

注意，由于鼠尾静脉非常细，推药一定要非常慢。

药物的量一般根据裸鼠的体重进行调节。

当然，最重要的是药物的特性。

4、20-30天处死裸鼠，并进行相关数据的检测(肿瘤大小、重量等。

)。

注意时间点，可以经常观察，在最能体现你结果的时候将裸鼠处死。

备注：1、若对照组中20%小鼠的肿瘤小于400mg或平均重量小于1g，均为肿瘤生长不良，实验数据应作废。

因为裸鼠比较小，肿瘤生长相对缓慢，因此，时间可以调整以达到要求。

2、如对照组小白鼠肿瘤平均重量小于1g或20%鼠的瘤重小于400mg，大白鼠肿瘤平均重量小于2g，表示肿瘤生长不良。

3、在试验期间给受试物组鼠死亡超过20%，或平均体重(去瘤后)下降(自身对照)超过15%者，表示受试物的毒性反应。

应当减少剂量重新试验。

但是，肿瘤时间长可导致鼠恶病质，因此，肿瘤生长时间也不能太长，肿瘤不能太大。

否则无法判断时恶病质还是药物导致的毒性反应。

4、也可以不使用腹水瘤，直接用培养的细胞接种。

但是，细胞数一定要根据自己的需要。

一般来说，10*6即可使绝大部分裸鼠成瘤，但要想成瘤率高些，最好达到10*7细胞。

接种的时候一定要将细胞摇匀，否则肿瘤大小不一。

裸鼠荷瘤方法及注意事项

关于肿瘤细胞株的选择，确实是一个很麻烦的问题，各类文献中提到过的细胞株有很多，但是一般而言，我觉得，对于我们做裸鼠肿瘤模型，细胞株的选择应该考虑一下几个方面：1. 国际公认度，虽然SFDA的指导原则上表示只要是建株细胞株均可以，但是一般来说，还是应该尽量考虑国际上比较公认的细胞株。

2. 体内生长情况，很多细胞株，在文献中有很高的出镜率，但是实际上，基本都是从体外开始有名，所以很多人就硬生生的往体内套，结果就是吃力不讨好，比如楼主提到的A549，还有MCF-7，都是很有名气的细胞株，但是在体内却不是一个好的试验对象，成瘤率低，生长慢，均一度差。

现在国内的很多研发单位，特别是一些公司的领导们，缺乏这方面的认识，动不动就把这些著名的细胞株挂在嘴边，硬压着一线的研究人员去花功夫做这些细胞株，作的不好，就怀疑大家的水平如何如何的，奶奶的，对此非常生气！3. 药物的敏感性，这一点常常被大家忽视，大部分的裸鼠肿瘤模型都是为抗肿瘤药物的筛选以及研究服务的，但是常常大家只考虑了这个细胞株是不是好做，但是没有考虑到细胞株本身对于药物的敏感性，比如Lovo细胞，国际公认度也还可以，体内生长情况也很棒，但是对于药物的敏感性不佳，大部分的常规化疗药物到了它这里，抑瘤率都会下降，显而易见，对于抗肿瘤药物的筛选来说，它不是一个好的选择。

另外说一点，体内与体外的关系，现在做体内的人，常常被体外的人牵着鼻子走，体外做出来什么什么细胞株敏感，体内的人就得吭哧吭哧的去做这个，但是却死活做不好，其实，现在我和一些老前辈们的观点是，体内和体外应该协调好细胞株的选择问题，体外的人手上有大把的细胞株可以选择，如果，体内的人不去和他们协调，那么将永远被牵着鼻子走，受累还不讨好，应该大家坐下来，一起选择20~30种细胞株作为常规的筛选细胞株，这就足够了，细胞株选择的时候考虑好方向（胃癌、肝癌、肺癌什么的）、靶点（EGF、vEGF等等），不能漫无边际的抓着哪个体内就的做哪个，谁也没有这个本事啊。

裸鼠荷瘤方法及注意事项

关于肿瘤细胞株的选择，确实是一个很麻烦的问题，各类文献中提到过的细胞株有很多，但是一般而言，我觉得，对于我们做裸鼠肿瘤模型，细胞株的选择应该考虑一下几个方面：1. 国际公认度，虽然SFDA的指导原则上表示只要是建株细胞株均可以，但是一般来说，还是应该尽量考虑国际上比较公认的细胞株。

2. 体内生长情况，很多细胞株，在文献中有很高的出镜率，但是实际上，基本都是从体外开始有名，所以很多人就硬生生的往体内套，结果就是吃力不讨好，比如楼主提到的A549，还有MCF-7，都是很有名气的细胞株，但是在体内却不是一个好的试验对象，成瘤率低，生长慢，均一度差。

现在国内的很多研发单位，特别是一些公司的领导们，缺乏这方面的认识，动不动就把这些著名的细胞株挂在嘴边，硬压着一线的研究人员去花功夫做这些细胞株，作的不好，就怀疑大家的水平如何如何的，奶奶的，对此非常生气！3. 药物的敏感性，这一点常常被大家忽视，大部分的裸鼠肿瘤模型都是为抗肿瘤药物的筛选以及研究服务的，但是常常大家只考虑了这个细胞株是不是好做，但是没有考虑到细胞株本身对于药物的敏感性，比如Lovo细胞，国际公认度也还可以，体内生长情况也很棒，但是对于药物的敏感性不佳，大部分的常规化疗药物到了它这里，抑瘤率都会下降，显而易见，对于抗肿瘤药物的筛选来说，它不是一个好的选择。

另外说一点，体内与体外的关系，现在做体内的人，常常被体外的人牵着鼻子走，体外做出来什么什么细胞株敏感，体内的人就得吭哧吭哧的去做这个，但是却死活做不好，其实，现在我和一些老前辈们的观点是，体内和体外应该协调好细胞株的选择问题，体外的人手上有大把的细胞株可以选择，如果，体内的人不去和他们协调，那么将永远被牵着鼻子走，受累还不讨好，应该大家坐下来，一起选择20~30种细胞株作为常规的筛选细胞株，这就足够了，细胞株选择的时候考虑好方向（胃癌、肝癌、肺癌什么的）、靶点（EGF、vEGF等等），不能漫无边际的抓着哪个体内就的做哪个，谁也没有这个本事啊。

RNAi沉默EGFR基因在卵巢癌裸鼠移植瘤的成瘤抑制作用

ｃｌｓＭｅｈｅｌ．ｔｏｄｓ：ＴｈｅＥＧＦＲｅｅｅｅｓｅｉｃｄｓｇｎｅｓｑｕｎｃ－ｐｃｆＲＮＡｘｅｓｏｅｔｒｗａｏｔｕｔｄ，ｉｏｅｔｍｉｅｔａｆｒＳｉｅｐｒｓｉｎｖｃｏｓｃｎｓｒｃｅｌｐｆｃａｎｒｎｓｅＫＯＶ３ｅｌｎｄｃｌｓａＧ４１ｒｅｏｈｅｅｔｏｆｐｓｔｖｌｎｅ．８ｗｅｅｕｓｄｆｒｔｅｓｌｃｉｎｏｏｉｉｅｃｏｓＸｅｎｇａｕｏｏｅｓｗｅｅｅｔｂｌｈｄ．ｅｍｏｅｃｒｖｄｅｎｏｐｓｔｅｉｏｒｆｔｍｒｍｄｌｒｓａｉｅＴｈｄｌｍｉｅｗｅｅｄｉｉｄｉｔｏｉｖｎ— ｉｓｉｔｒｅｅｅｒｕｐ，ｅａｉｅｃｎｒｌｇｏｅｆｒｎｅｇｏｎｇｔｖｏｔｏｒｕｐ，ａｋｃｎｔｏｒｕｐ．ｂｌｎｏｒｌｇｏＴｈｅｔｕｍｏｏｕｍｅｗａｎｉｏｅｔｅｔｍｏａｉｓｍｅｓｒｄ；ｈｅｅｒｖｌｓｍｏｔｒｄ；ｈｕｒｑｕｌｔｗａａｕｅｔｘ— ｙ
【ｂｔｃ】ｂｅｔｅＴｖｓｇｔｔｅｉｈｂｔｎｅｅｔｆｉｎｉｇＥＦｅｅｂＮｉｎｔｍｏｉｎｓｆｖｒｎｃｎｅＳＯ３ＡｓａｔＯｊｃｉ：ｏｉｅｔａｉｉｆｃｏｌｃＧＲｇｎｙＲＡｒｅｅｉｏｏａｉａｃｒＫＶｒｖｎｉｅｈｎｉｏｆｓｅｎｏｕｇｓａ
ｐｅｓｏｆｒｓｉｎｏＥＧＦｅｅｉｈｅｏｒｆｔｍｏｓｄｔｃｅｙＲ－ＣＲ，ｅｔｒｏｎｍｍｕｏｉｔｃｅｃ１Ｒｅｕｔ：ｈｕｒｇ — ＲｇｎｔｅｘｎｇａｔｕｒｎｗａｅｅｔｄｂＴＰＷｓｅｎＢｌｔｄｉａｎｈｓｏｈｍｉａ．ｓｌＴｅｔｍｏｉｅｓ

裸鼠成瘤实验-超详细资料

裸鼠成瘤实验-超详细资料裸鼠成瘤实验总结-超详细资料接种量接种部位接种部位:腋窝中部外侧皮下为好。

皮下肿瘤模型中，想要成瘤率高就接种在腋下。

接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针，要保证与接种点的距离小于针头的长度，向头部方穿行，绝对不能刺破皮肤或者刺破肌肉层，当针头到达接种位点时注射，退出针头，这样操作的目的并不完全是避免漏液，其实熟练后，不需要皮下穿行也不会漏液，主要是避免污染，进针点还有少量污染的可能性的，针头在皮下穿行一段后，接种点离进针点较远，最大限度减少污染的可能。

如果是用于正式实验，那么一只老鼠就只能接种一个位点，不可以接种多个位点用于保证可用的模型数。

因为在有些情况下，一个老鼠身上有多于一个肿瘤的情况下，会有相互影响的可能，无论这几个肿瘤相距有多远。

要是想多打几个部位做做预试验，倒也不是不可以，但是我觉得，基本上没有什么必要。

皮肤不用绷得太紧，平展就可以了，另外接种的时分进针点很靠下，针头在皮下走一段再注射，速度不要太快。

注射前针头稍微动一动，能动就申明在皮下，不然大概在皮内或者肌肉内。

普通来说都是有鼓包的但是要是你接种位置太深入腋窝，你是看不到鼓包的。

主要靠针头稍微动一动来判断。

是否应用免疫抑制剂裸鼠皮下种瘤后，可以通过应用免疫抑制剂，比如环磷酰胺（2mg每只，打两天）来加速瘤体的生长，当然我知道裸鼠是T免疫缺陷动物，但是人家说的CTX可以进一步抑制裸鼠的体液免疫和NK细胞杀伤的保护作用，可以加快瘤子的生长，这样造模的周期很短，也可以进行人为的控制，不知道这个观点是不是有道理，实践中是不是真有人这么做呢？楼上说的文献中也有报道，而且还有预先用放射照射抑制动物免疫功能再接种的方法，但是一般常规应用中大多数时候不推荐这么做。

另外还有一个问题应该被考虑到，大家现在都在琢磨着怎么让肿瘤出瘤的更快，造模周期更短，但是如果人为的把肿瘤生长加速，其实对实验并不好。

因为造模周期短，很可能生长速度也会被加快，肿瘤可能很快就溃烂了，这样就不得不被迫中止实验，而用药却没有用到足够的时间，药效还没有发挥出来就结束了，这样是很不利的。

mir-711对人胃癌sgc-7901细胞裸鼠成瘤及emt的影响

miR-711对人胃癌SGC-7901细胞裸鼠成瘤及EMT的影响摘要:目的：在前期的研究基础上，通过观察miR-711对人胃癌SGC-7901细胞裸鼠成瘤及Sp1、E-cadherin、Vimentin蛋白表达的影响，进一步研究miR-711抑制胃癌发生、发展的作用机制。

方法：1）构建并包装miR-711过表达慢病毒Lv-miR-711(实验组)及空载体慢病毒Lv-NC（阴性对照组），并感染人胃癌细胞株SGC-7901，荧光显微镜下观察转染效率。

2）皮下注射成瘤，注射后，观察接种肿瘤细胞的裸鼠的瘤体生长情况，然后使用标准游标尺测量同时记录皮下瘤体大小（长a和宽b），计算肿瘤体积V=ab²/2，绘制裸鼠皮下移植瘤生长曲线。

4周后处死裸鼠，取瘤体，并称重：① HE染色观察各组瘤体组织形态；② Real-time PCR检测瘤体组织中miR-711的表达；③免疫组化检测瘤体组织Vimentin、E-canherin蛋白表达；④通过蛋白免疫印迹法检测裸鼠瘤体组织中Sp1、Vimentin、E-canherin蛋白表达；结果：1）荧光显微镜下观察转染效率：胃癌细胞SGC-7901的转染效率均在70%以上；2）成功建立了过表达miR-711基因和空载体人胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤模型，过表达组与阴性对照组相比较，过表达组裸鼠I皮下移植瘤体积、瘤体重量均显著小于阴性对照组，显微光镜下显示：各瘤体组织学形态均符合腺癌，过表达组较阴性对照组移植瘤癌细胞异型性降低，炎症细胞减少，差异有统计学意义（P<0.05）；3）Real-time PCR结果显示：过表达组miR-711的表达量明显高于阴性对照组；4）免疫组化结果显示：与阴性对照组相比，miR-711过表达组E-cadherin表达增多，Vimentin的表达减少。

有统计学差异（P<0.05）；5）蛋白免疫印迹显示：与阴性对照组相比，miR-711过表达组Sp1表达减少，E-cadherin蛋白表达增多，Vimentin蛋白表达减少。

裸鼠成瘤标准

裸鼠成瘤标准
白色小鼠可以作为模型来研究肿瘤，常用实验动物有小鼠，大鼠和兔子。

小鼠肿瘤模型是肿瘤生物学非常重要的研究手段，所以在小鼠瘤模型的建立方面有很多研究。

一般情况下，小鼠瘤模型的制备包括移植法和致瘤剂法两种。

移植法最常使用是小鼠和兔子细胞培养成瘤。

将细胞培养成瘤，然后移植到裸鼠皮下或者腹腔。

致瘤剂法是用致瘤剂，如甲苯胺咪唑（MTT），甲硝唑（MNU），敌敌畏（DMBA）等制备瘤体或者瘤细胞，然后将致瘤物质直接注入裸鼠的体内或者皮下。

拥有肿瘤模型的裸鼠都需要特殊的照顾，特别是在进行实验前，需要确保裸鼠的精神和身体健康，可以接受治疗。

另外，给裸鼠提供正常的饲养环境也非常重要，建立金标准的超净舍，保证裸鼠不受外界紫外线，空气，土壤和食物等致病因素的影响，以维持健康状态。

裸鼠荷瘤实验中常见问题的解析和总结

裸鼠荷瘤实验中常见问题的解析和总结赵勇;伍静;毛峰峰;赵善明;张彩琴;白冰;师长宏【摘要】Objective Discussion the common problem of tumor-burdened in node-mice, In order to improve the success rate of tumor burden. Method Through analysis the influence of various factors of tumor-burden in node-mice, seek the solution of problem in tumor burdended. Result Summarized the various factors in the tumor burden, and put forward reasonable suggestions. Conclusion Node-mice tumor burden is the base of the oncology, drug and biological products of safety evaluation and effectiveness screening. This paper is to provide reasonable suggestions for the preparation of good nude mice tumor model.%目的探讨裸鼠荷瘤过程中的出现的常见问题,提高裸鼠荷瘤的成功率.方法通过分析实验过程中影响裸鼠荷瘤的各种因素,寻求裸鼠荷瘤常见问题的解决方案.结果总结了在裸鼠荷瘤实验中的各种影响因素,并提出了合理的建议.结论裸鼠肿瘤模型的制备是研究肿瘤学、免疫学、药品与生物制品的安全性评价以及有效性筛选等研究课题的基础,本文为制备良好的裸小鼠肿瘤模型提供合理的建议.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2012(022)007【总页数】4页(P17-20)【关键词】裸鼠;肿瘤;模型,动物【作者】赵勇;伍静;毛峰峰;赵善明;张彩琴;白冰;师长宏【作者单位】第四军医大学实验动物中心,西安710032;第四军医大学实验动物中心,西安710032;第四军医大学实验动物中心,西安710032;第四军医大学实验动物中心,西安710032;第四军医大学实验动物中心,西安710032;第四军医大学实验动物中心,西安710032;第四军医大学实验动物中心,西安710032【正文语种】中文【中图分类】Q95-331;R332无胸腺裸鼠(outbred nude mice)是当今医学生物学研究领域中不可缺少的实验动物模型。

关于肿瘤细胞株的选择，确实是一个很麻烦的问题，各类文献中提到过的细胞株有很多，但是一般而言，我觉得，对于我们做裸鼠肿瘤模型，细胞株的选择应该考虑一下几个方面：1. 国际公认度，虽然SFDA的指导原则上表示只要是建株细胞株均可以，但是一般来说，还是应该尽量考虑国际上比较公认的细胞株。

2. 体内生长情况，很多细胞株，在文献中有很高的出镜率，但是实际上，基本都是从体外开始有名，所以很多人就硬生生的往体内套，结果就是吃力不讨好，比如楼主提到的A549，还有MCF-7，都是很有名气的细胞株，但是在体内却不是一个好的试验对象，成瘤率低，生长慢，均一度差。

现在国内的很多研发单位，特别是一些公司的领导们，缺乏这方面的认识，动不动就把这些著名的细胞株挂在嘴边，硬压着一线的研究人员去花功夫做这些细胞株，作的不好，就怀疑大家的水平如何如何的，奶奶的，对此非常生气！3. 药物的敏感性，这一点常常被大家忽视，大部分的裸鼠肿瘤模型都是为抗肿瘤药物的筛选以及研究服务的，但是常常大家只考虑了这个细胞株是不是好做，但是没有考虑到细胞株本身对于药物的敏感性，比如Lovo细胞，国际公认度也还可以，体内生长情况也很棒，但是对于药物的敏感性不佳，大部分的常规化疗药物到了它这里，抑瘤率都会下降，显而易见，对于抗肿瘤药物的筛选来说，它不是一个好的选择。

另外说一点，体内与体外的关系，现在做体内的人，常常被体外的人牵着鼻子走，体外做出来什么什么细胞株敏感，体内的人就得吭哧吭哧的去做这个，但是却死活做不好，其实，现在我和一些老前辈们的观点是，体内和体外应该协调好细胞株的选择问题，体外的人手上有大把的细胞株可以选择，如果，体内的人不去和他们协调，那么将永远被牵着鼻子走，受累还不讨好，应该大家坐下来，一起选择20~30种细胞株作为常规的筛选细胞株，这就足够了，细胞株选择的时候考虑好方向（胃癌、肝癌、肺癌什么的）、靶点（EGF、vEGF等等），不能漫无边际的抓着哪个体内就的做哪个，谁也没有这个本事啊。

多种肿瘤裸鼠成瘤实验具体步骤及说明

多种肿瘤裸鼠成瘤实验具体步骤及说明诱发性肿瘤动物模型是指研究者用化学致癌剂、放射线、致癌病毒诱发动物的肿瘤等。

一、肝癌1．二乙基亚硝胺（DEN）诱发大白鼠肝癌（1）取体重250 g左右的封闭群大白鼠，雌雄不拘；（2）按性别分笼饲养。

除给普通食物外，饲以致癌物，即用0.25%DEN水溶液灌胃，剂量为10 mg/kg，每周一次，其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由饮用；（3）共约4个月可诱发成肝癌；（4）也可以单用0.005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。

2．4-2甲基氨基氮苯（DBA）诱发大鼠肝癌（1）用含0.06%DBA的饲料喂养大鼠，饲料中维生素B2 不应超过1.5～2 mg/kg；（2）4～6月就有大量的肝癌诱发成功。

3．2-乙酰氨基酸（2AAF）诱发小鼠、狗、猫、鸡、兔肝癌（1）给成年大鼠含0.03% 2AAF标准饲料；（2）每日每平均2～3 mg 2AAF（也可将2AAF混于油中灌喂），3～4月后有80～90%动物产生肝肿瘤。

4．二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌：（1）用剂量为每日0.3～14 mg/kg体重，混于饲料或饮水中给予；（2）6～9个月后255/300大鼠发生了肝癌。

5．亚胺基偶氮甲苯（OAAT）诱发小鼠肝癌（1）用1%OAAF苯溶液（约0.1 ml含1 mg）涂在动物的两肩胛间皮肤上，隔日一次，每次2～3滴，一般涂100次。

（2）实验后7～8周即而出现第一个肝肿瘤，7个月以上可诱发小鼠肝肿瘤约55%。

（3）或用2.5 mg OAAT溶于葵瓜子油中，给C3H小鼠皮下注射4次，每日间隔10天，也可诱发成肝癌。

6．黄曲霉素诱发大鼠肝癌（1）每日饲料中含0.001～0.015 ppm，混入饲料中喂6个月后，肝癌诱发率达80％。

二、胃癌1．甲基胆蒽诱发小鼠胃癌（1）取20 g左右的小鼠，无菌手术下，在腺胃粘膜面穿挂含甲基胆蒽（MC）线结。

（2）含MC的线结是用普通细线，在一端打结后，将线结置于盛有MC小玻璃试管内，在酒精灯上微微加温，使MC液化渗入线结。

裸小鼠脑胶质瘤原位移植瘤模型的建立及磁共振成像研究

裸小鼠脑胶质瘤原位移植瘤模型的建立及磁共振成像研究王舒楠，张伟国，陈金华，马长锁，赵丽(第三军医大学大坪医院野战外科研究所放射科，重庆400042)摘要：目的建立裸鼠脑胶质瘤原位移植瘤模型并进行MR扫描，摸索扫描的最佳参数，探讨1.5T磁共振在检测裸鼠颅内成瘤的可行性，为下一步实验奠定基础。

方法SHG-44细胞传代培养后，用微量注射器吸取肿瘤细胞悬液直接穿刺接种，在肿瘤细胞接种后第15天行1.5T MR扫描，裸鼠麻醉后置于小动物线圈采集图像并利用影像工作站测量体积。

而后取脑组织做病理切片，计算体积后行HE及CD34染色，与MRI图像进行对比分析。

结果除去围手术期死亡2只裸鼠外，剩余的13只裸鼠在MR增强序列图像上均能见到肿瘤，成瘤率达100%，且位置同组织切片相一致。

在MR 图像上测得的肿瘤体积为（29.41±10.95）mm3，组织切片测得的肿瘤体积为(26.57±9.70) mm3，二者无显著性差异（P＞0.05）但具有明显的相关性（r=0.985，P ？）。

肿瘤微血管丰富，且主要集中在肿瘤的边缘。

结论采用微量注射器直接建立裸鼠胶质瘤原位移植瘤模型简单便捷，成瘤率高。

1.5T 磁共振能活体检测裸鼠脑胶质瘤成瘤情况，并能进行一定的功能成像，是动态监测裸鼠胶质瘤发生发展的有效途径。

关键词：裸鼠；胶质瘤；磁共振成像；原位移植Estabilshment of human glioma orthotopic model in nude mice and monitored by 1.5T magnetic resonance imagingWang Shu-nan, Zhang Wei-guo, Chen Jin-hua, Ma Chang-suo, Zhao Li（Department of Radiology, Daping Hospital, The Third Military Medical University, Chongqing 400042, China）Abstract：Objective To establish the model of human glioma orthotopic implantation in nude mice，and investigate 1.5T magnetic resonance in the detection of transplanted tumor. Methods The glioma cell line SHG-44 was cultured in vivo. The glioma cells were injected into nude mice brain using micro-syringe to form glioma. Fifteen days later, nude mice were scaned by 1.5T MR with animal-coil to detect the tumor. Tumor volume was measured in AW4.3 imaging workstation. Then take brain tissue biopsy done with HE staining and CD34 staining. Tumor volnme was measure under microsope to evaluated the relativity with the dates in MR imagings. Results Two nude mice were dead in perioperative, the other thirteen mice survive and be detected tumor in bran by MR scanning with contrast injected. The location in MRI isconsistent withthat in tissue section. Tumor volume is 29.41±10.95mm3measured by MRI and is 26.57±9.70mm3 measured under microsope. There is no significant difference（P＞0.05）but significant correlation（r =0.985）. Conclusion It is easy and convenient using micro-syringe directly to establish the human glioma orthotopic implantation model in nude mice. 1.5T MR can detect the tumor in mouse brain in vivo, and to carry out certain functional imaging. 1.5T MR is an effective way to dynamic monitor the occurrence and development of glioma in nude mice.Key word：Nude mice；Glioma；Orthotopic implantation；Magnetic resonance imaging胶质瘤是脑内最常见、浸润性最强的一种原发性脑肿瘤，临床治疗效果差，病死率很高。

裸鼠成瘤试验protocol

裸鼠成瘤试验protocol
——weichengming制5—6周龄雌性裸鼠：30只
分组：Sham Vehicle Low Dose High dose
数目：6888
麻醉：10%水合氯醛腹腔注射0.05mL/10g。

肿瘤细胞注射方式：Vehicle、Low Dose和High dose组：（1mL皮试针）经胫骨平台穿刺至胫骨骨髓腔，注射50uL细胞悬着液，细胞含量为10^6/mL。

注射细胞后2—3天开始给药。

给药方式：Sham不给药；Vehicle给PBS；Low Dose和High dose 组分别给ug/Kg、ug/Kg。

2天腹腔给药一次，连续28天。

28天后脱颈处死。

标本采集和处理：
1、取整根胫骨（保留完整），游标卡尺测量胫骨最宽处横径。

2、4%多聚甲醛固定48小时，PBS缓冲液清洗3次，75%酒精浸泡保存在15mL离心管。

3、送Micro-CT扫描整根胫骨。

4、扫描结束后，行病理切片检查。

裸鼠皮下成瘤抑制实验原理

裸鼠皮下成瘤抑制实验原理
裸鼠皮下成瘤抑制实验的原理基于肿瘤细胞的恶性增殖特性。

肿瘤细胞具有无限增殖的能力，并通过信号转导途径、细胞周期调控等机制实现自我增殖。

由于大部分肿瘤研究使用到的是人类来源的细胞，种植到免疫正常的动物体内会发生免疫排斥反应，所以需要用免疫缺陷型小鼠作为成瘤模型的动物。

在实验中，将肿瘤细胞悬液注射到裸鼠的皮下，模拟肿瘤在人体内的生长过程。

然后，可以施加某种干预（例如药物治疗或基因编辑）来观察其对肿瘤生长的影响。

如果干预有效，则肿瘤的生长应受到抑制。

这种实验方法有助于研究肿瘤的生长机制，以及探索新的治疗策略。

以上内容仅供参考，建议查阅关于裸鼠皮下成瘤抑制实验的文献，获取更准确的信息。

裸鼠成瘤实验安全操作及保养规程

裸鼠成瘤实验安全操作及保养规程引言近年来，裸鼠成瘤实验逐渐成为一种常见的实验手段，被广泛应用于生物医学领域的基础、药物研究。

然而，由于实验过程中需要使用大量的化学试剂和高度精密的操作，所以如果在实验操作过程中未能注意安全问题，会带来诸多安全隐患。

因此，为了确保实验的顺利进行，有效避免实验操作中出现意外情况，本文将针对裸鼠成瘤实验，列出相应的安全操作及保养规程。

裸鼠成瘤实验前的准备工作在进行裸鼠成瘤实验时，需要提前准备充足的实验器材和生化试剂，同时也需要对实验室的环境进行合理的调整。

下面列出相应的注意事项：1.实验室环境要求实验室环境需保持干净整洁，避免有任何因素干扰实验的进行。

库房要求干燥、通风，实验区不得放置一切与实验无关的器械、试剂或物品，以确保实验室内部的清洁程度，并保持实验设备的灭菌。

2.实验器材和试剂的准备裸鼠成瘤实验器材需保证正常功能，严格按照使用说明使用，并对每种器材进行标注。

在实验前，应对涉及到的试剂进行检查，确保其没有已失效或污染，充分消毒。

对于不同类型的裸鼠成瘤实验所需要的各种器材和试剂的使用方法进行预见性的了解，将可在实验操作之前大幅降低因操作不当而产生的误差和成本。

3.人员准备实行裸鼠成瘤实验的操作人员应具有科学背景，拥有必要的实验技能和实验安全意识。

在实验操作之前，必须全面了解实验流程及实验器材的使用，以及实验操作过程中所需要的基本操作技能并保证其全面掌握。

裸鼠成瘤实验中的关键操作技能为了确保裸鼠成瘤实验的成功，降低实验操作中产生的偏差，必须合理掌握实验中的关键操作技能。

下面分别介绍实验中的几个关键操作技能：1.裸鼠的饲养和保养保证裸鼠进食和饮水的质量和数量，确保空气清洁，为其提供足够的光源和温度环境，定期检查和清理它们的笼子和环境等都是保证裸鼠安全、健康和成瘤的关键操作技能。

2.药物的制备及添加药物的选择要合理，必须进行初步检测。

准确制备药物，严格按照说明书添加化学试剂，安全量。

裸鼠成瘤实验方法

裸⿏成瘤实验⽅法肿瘤细胞有良性和恶性之分；癌细胞则是恶性，是会扩散的细胞。

肿瘤细胞包含癌细胞，它们共同特点是从基因⽔平上失控的、能⽆限增殖的细胞。

癌细胞有三个显著的基本特征即：不死性、迁移性和失去接触抑制。

常规较容易成瘤的细胞Hep-G2（肝癌），Hep2（喉癌），NCI-H460(⼤细胞肺癌)， SK-OV-3（卵巢癌），MCF-7（乳腺癌）SKBR3， A375/B16-F10（⼈⿊⾊素瘤细胞），SGC7901 ⼈胃肿瘤细胞，CNE（⿐咽癌），H1299（肺癌）， SPC-A-1（肺腺癌）， HT-29/HCT116（结肠癌），BEL-7402（肝癌），MDA-MB-231 乳腺癌， CT26 （⼩⿏结肠癌细胞），U87 （⼈胶质瘤细胞）， MGC-803（⼈胃癌细胞），PC-3 （⼈前列腺癌细胞）。

裸⿏的选择实验室常⽤的是BALB/c-nu裸⼩⿏ ,随着裸⼩⿏年龄增长或有关因素的影响(如病毒感染),裸⿏体内正常T细胞会增加，故接种肿瘤实验⼀般采⽤4--6周龄的裸⿏。

裸⿏成瘤实验技巧1、细胞的状态是成瘤实验的关键，所以细胞⽣长状态⼀定要好，取处于对数⽣长期的细胞，细胞达80-90%左右密度为宜。

收集细胞前⼀天晚上更换新鲜培养基。

2、胰酶消化细胞后⽤预冷的PBS洗两遍，⽬的为去除细胞中残余的⾎清。

3、⽤PBS或者⽆⾎清培养基吹打细胞沉淀⾄合适的浓度，⼀般⽪下瘤接种的细胞量为1-5×10^6个细胞/⽀，接种体积为0.1-0.2ml，因此细胞悬液的浓度为1-5×10^7个细胞/ml，如若有条件的实验室，也可以加基质胶以加速瘤块的⽣成，基质胶与PBS或⽆⾎清的⽐列为1:1。

4、细胞消化后应尽快接种到裸⿏⽪下，⼀般尽量在半⼩时内完成（如果接种量⼤，可以分批接种），途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢以保持细胞的活性。

5、选择的裸⿏⼀般在4-6周龄，体重16-18g左右，种植部位选择⾎供丰富区域，如腋窝中后部。

裸鼠肿瘤接种技术实验操作方法

裸鼠肿瘤接种技术实验操作方法裸鼠肿瘤接种一般有细胞接种和瘤块接种两种方式，接种取材有手术活检标本、癌性胸腹水标本和体外培养的细胞系三种。

l楼主看来是做体外培养的细胞的裸鼠接种，一般用带6号针头的注射器取适量细胞悬液注射于裸鼠的皮下，部位看试验要求而定，一般在腋下或背部皮下，每个接种部位注射0.1-0.2ml。

就是将培养的细胞收集起来调整到适宜浓度重悬于不含血清的培养液或PBS中，放于冰盒中携至动物房，直接注射即可。

是牵涉到细胞株的成瘤性问题，可以通过增大细胞悬液浓度的办法来解决。

一般细胞浓度可在1*10的6次方到5*10的7次方之间，浓度再大就可能打不进去了。

具体浓度需要查相关文献。

如果成瘤率太低，可以通过把瘤块在裸鼠身上传2—3代的方法提高成瘤率，即将已成瘤鼠的瘤块取出接种于新鼠身上，成瘤后再取出接种新鼠，如此传几代，肿瘤性质稳定后，再将肿瘤取出，剪碎、研磨、匀浆成为细胞悬液后再接种。

一、可移植性肿瘤的建立方法1．腹水瘤的建立将动物实体瘤细胞注入受体动物腹腔内，或将实体疤移植于受体动物的腹壁内，肿瘤生长后引起腹水，腹水内含高大量瘤细胞可移植传代．即为腹水瘤。

建议腹水瘤初期、腹水往往是血性，多次传代后逐渐变为乳白色的瘤性腹水。

腹水如培养基一样供给瘤细胞生长所需的营养。

若将腹水瘤细胞注入皮下，又可形成实体瘤。

由于瘤细胞游离在腹水内，因此总呈圆形，体积可有大、中、小之分c：r．在一些细胞边缘偶见大小不等的泡状突起，称之为“鼓泡”。

一般在接种后第5天时核分裂相达高峰。

偶见三吸或四极分裂。

二、肿癌移植方法1．常规保种传代方法(1)腹水瘤移植方法：瘤源一般用接种后第5～6天的腹水，抽出的腹水以乳白色为佳。

接种应从下腹部件入受体动物腹腔，一般接种o．1一o．2m1。

可在腹水内加适量的抗凝药物。

(2)实体型肿瘤接种法：1)小块接种法：将瘤取出后，切开，选出生长良好而无变性坏死、呈谈红色、鱼肉状的瘤组织，切成小块(约5*5*5mm)；在受体动物腹部外例剪开—个小口，用无钩眼科镊子夹取小块，送入切口内皮下。

CDX模型简述书

CDX模型简述书
细胞株移植瘤模型（cell derived xenograft,CDX)，即将体外传代培养的肿瘤细胞接种至免疫缺陷小鼠，也就是我们平时所说的裸鼠成瘤。

裸鼠成瘤实验，即在裸鼠皮下注入肿瘤细胞，观察肿瘤的形成、发展及抗肿瘤药物的效果。

动物选择
一般选择4-6周龄Nude裸鼠，需要提前到SPF环境中适应1周。

接种部位与接种细胞量
接种部位常为皮下，静脉或原位；细胞量一般是5*106个/200ul，但是不同的细胞系的接种量略有差别。

成瘤时间
皮下接种的细胞一般会在1-2周成瘤，一般不会超过1个月；尾静脉和腹腔接种的细胞一般也是1周左右，需要密切观察动物的体重与状态进行判断。

为什么肿瘤不长？
如果细胞接种后超过预期的观察时间仍未成瘤，需要从以下方面进行排查原因：一是细胞活力，细胞活力是影响肿瘤形成的重要原因，活力不够不能成瘤，因此细胞消化下来PBS清洗后要尽快接种；二是动物选择，选择的裸鼠周龄不宜过大，否则也会增大成瘤难度（如果还未成瘤建议更换缺陷程度更高的Nod-scid小鼠，NOG小鼠）；三是饲养环境，环境影响动物状态，状态差的鼠容易发生死亡，不易成瘤。

为什么瘤子长起来又消失？
很可能开始我们观察到的肿瘤是炎症反应，到后来肿瘤细胞被小鼠自身吸收，需要继续观察肿瘤细胞吸收之后是否还能长出来，长不出来建议分析上述原因重新实验
需要观察什么？
在肿瘤长出后，需要密切观察动物的状态，体重和瘤体积。

瘤体积的测量一般采用公式V=ab2/2进行计算。

动物体重的增加或者减少量，直接反映着动物的整体状态，评估肿瘤是否出现转移等。