裸鼠肿瘤接种

裸鼠肿瘤接种一般有细胞接种和瘤块接种两种方式，接种取材有手术活检标本、癌性胸腹水标本和体外培养的细胞系三种。

做体外培养的细胞的裸鼠接种，一般用带6号针头的注射器取适量细胞悬液注射于裸鼠的皮下，部位看试验要求而定，一般在腋下或背部皮下，每个接种部位注射0.1-0.2ml。就是将培养的细胞收集起来调整到适宜浓度重悬于不含血清的培养液或PBS中，放于冰盒中携至动物房，直接注射即可。

是牵涉到细胞株的成瘤性问题，可以通过增大细胞悬液浓度的办法来解决。一般细胞浓度可在1×106到5×107之间，浓度再大就可能打不进去了。具体浓度需要查相关文献。如果成瘤率太低，可以通过把瘤块在裸鼠身上传2—3代的方法提高成瘤率，即将已成瘤鼠的瘤块取出接种于新鼠身上，成瘤后再取出接种新鼠，如此传几代，肿瘤性质稳定后，再将肿瘤取出，剪碎、研磨、匀浆成为细胞悬液后再接种。

一、可移植性肿瘤的建立方法

1．腹水瘤的建立将动物实体瘤细胞注入受体动物腹腔内，或将实体疤移植于受体动物的腹壁内，肿瘤生长后引起腹水，腹水内含高大量瘤细胞可移植传代．即为腹水瘤。

建议腹水瘤初期、腹水往往是血性，多次传代后逐渐变为乳白色的瘤性腹水。腹水如培养基一样供给瘤细胞生长所需的营养。若将腹水瘤细胞注入皮下，又可形成实体瘤。由于瘤细胞游离在腹水内，因此总呈圆形，体积可有大、中、小之分c：r．在一些细胞边缘偶见大小不等的泡状突起，称之为“鼓泡”。一般在接种后第5天时核分裂相达高峰。

偶见三极或四极分裂。

二、肿癌移植方法

1．常规保种传代方法

(1)腹水瘤移植方法：瘤源一般用接种后第5～6天的腹水，抽出的腹水以乳白色为佳。接种应从下腹部注入受体动物腹腔，一般接种0.1- 0.2m1。可在腹水内加适量的抗凝药物。

(2)实体型肿瘤接种法：

1)小块接种法：将瘤取出后，切开，选出生长良好而无变性坏死、呈谈红色、鱼肉状的瘤组织，切成小块(约5×5×5mm)；在受体动物腹部外例剪开—个小口，用无钩眼科镊子夹取小块，送入切口内皮下。本法多用于建瘤株的初期及少量的接种。接种部位以腋窝和鼠蹊部为佳，特别是腋窝部皮肤松弛能使瘤结长得较大，宿主寿命也可延长。

2)悬液接种法：将选取的瘤组织用玻璃匀浆器研磨制成悬液，用注射器吸取瘤悬液．先计算活细胞数．再将瘤悬液注射到接种部位(多种丁皮下)，细胞数多在1000000～10000000。注射后用小镊夹针孔片刻，可避免注入液外溢。本法适用于成活率高的移植瘤的常规接种或大批接种实验。

做鼠源的肿瘤接种，因为鼠源的肿瘤比较柔软，所以可以用匀浆法匀浆以后接种老鼠，操作过程：先解剖肿瘤种鼠，取下肿瘤块，然后去中间坏死和血管，不用剪碎，直接放入匀浆器中匀浆，按你所需的匀浆比例加PBS，因为由于肿瘤的活性不同，匀浆的比例也不同，（肿瘤活性可以根据你前几代的传代数据中获得），当匀浆到无法在碾磨的时候，即没有柔软组织的时候说明已经匀浆彻底了，最后留在匀浆器里的是肿瘤的包膜，在匀浆过程中可以分批把匀浆好的肿瘤悬液倒出，带有血水是没有关系的，为了保持肿瘤细胞的活性（这个至关重要），尽量在短时间内操作，还有尽量保持环境清洁，最好在超净台中操作，倒出来的细胞悬液无需过滤，直接用7-8号针头的注射器注射接种。

就像楼主所说的，无法计数和堵塞细胞筛（这些我都试过），所以为了保持肿瘤细胞的活性，直接取匀浆液接种即可。

“进行瘤内注射时要先将针头进入瘤外皮下再进入瘤内”是指的针头在皮下穿行一小段距离后再刺入瘤体。

一般来说，瘤内注射的剂量可以按照肿瘤体积计算，比如每10个立方毫米的肿瘤注射多少药物，这样配制同样浓度的样品，无论肿瘤大小都是按照比例注射的。一般来说一个点注射不超过20ul，超过20ul就有可能药物漏出，应该分多点注射，多点注射要注意的就是针头推出瘤体，但是不能退出皮下，在皮下换个点直接刺入，不要完全把针拔出再刺入，很容易漏液。

3)瘤组织浆接种法：此法曾被广泛使用。从实体瘤选出新鲜瘤组织，剪碎成浆后即可做注射用。多适用于大动物(免、狗)的移植瘤。以保证较高成活率。移植部位以体内深部肌肉内或器官内较佳，家兔的成骨肉瘤移植多用此法。

(4) 培养细胞的移植法：将单层培养的细胞消化脱壁后稀释为一定浓度的细胞悬液，移植于动物皮下或其他部位。

活细胞计数方法如下：用新配制的0.05％伊红或0.1％台盼蓝生理盐水溶液．将瘤细胞悬液稀释、混匀后在血球计数盘上计数．染色者为死细胞、不染色为活细胞