裸鼠肿瘤接种
裸鼠成瘤实验方法
裸⿏成瘤实验⽅法肿瘤细胞有良性和恶性之分；癌细胞则是恶性，是会扩散的细胞。
肿瘤细胞包含癌细胞，它们共同特点是从基因⽔平上失控的、能⽆限增殖的细胞。
癌细胞有三个显著的基本特征即：不死性、迁移性和失去接触抑制。
常规较容易成瘤的细胞Hep-G2（肝癌），Hep2（喉癌），NCI-H460(⼤细胞肺癌)， SK-OV-3（卵巢癌），MCF-7（乳腺癌）SKBR3， A375/B16-F10（⼈⿊⾊素瘤细胞），SGC7901 ⼈胃肿瘤细胞，CNE（⿐咽癌），H1299（肺癌）， SPC-A-1（肺腺癌）， HT-29/HCT116（结肠癌），BEL-7402（肝癌），MDA-MB-231 乳腺癌， CT26 （⼩⿏结肠癌细胞），U87 （⼈胶质瘤细胞）， MGC-803（⼈胃癌细胞），PC-3 （⼈前列腺癌细胞）。
裸⿏的选择实验室常⽤的是BALB/c-nu裸⼩⿏ ,随着裸⼩⿏年龄增长或有关因素的影响(如病毒感染),裸⿏体内正常T细胞会增加，故接种肿瘤实验⼀般采⽤4--6周龄的裸⿏。
裸⿏成瘤实验技巧1、细胞的状态是成瘤实验的关键，所以细胞⽣长状态⼀定要好，取处于对数⽣长期的细胞，细胞达80-90%左右密度为宜。
收集细胞前⼀天晚上更换新鲜培养基。
2、胰酶消化细胞后⽤预冷的PBS洗两遍，⽬的为去除细胞中残余的⾎清。
3、⽤PBS或者⽆⾎清培养基吹打细胞沉淀⾄合适的浓度，⼀般⽪下瘤接种的细胞量为1-5×10^6个细胞/⽀，接种体积为0.1-0.2ml，因此细胞悬液的浓度为1-5×10^7个细胞/ml，如若有条件的实验室，也可以加基质胶以加速瘤块的⽣成，基质胶与PBS或⽆⾎清的⽐列为1:1。
4、细胞消化后应尽快接种到裸⿏⽪下，⼀般尽量在半⼩时内完成（如果接种量⼤，可以分批接种），途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢以保持细胞的活性。
5、选择的裸⿏⼀般在4-6周龄，体重16-18g左右，种植部位选择⾎供丰富区域，如腋窝中后部。
裸鼠
T淋巴细胞功能缺陷的动物有裸小鼠(基因符号nu)和裸大鼠(基因符号rnu)利用育种技术已将裸基因nu或rnu导入其它品系动物，作为背景品系可以是近交系也可以是封闭群，目前nu基因已导入的近交系有数个以上。
rnu基因导入的大鼠品系也有10余种。
我国使用较多的裸鼠品系BALB/c-nu、NC-nu、Swiss-nu、NIH-nu。
1980年和1982年中国药品生物制品检定所分别从瑞士和日本引进裸小鼠，上海中山医院肝癌研究所1983年从美国引进了裸大鼠Rowett。
一、裸小鼠(一)概念及命名：1962年英国格拉斯医院Grist 在非近交的小鼠中偶然发现有个别无毛小鼠，后来证实是由于基因突变造成的并伴有先天性胸腺发育不良，称为裸小鼠(nude mice)，用“nu”表示裸基因符号。
裸小鼠是由于染色体上等位基因(第11对染色体上)突变引起的，已失去正常胸腺，原胸腺残留结构部分上皮样细胞呈巢状排列而部分呈外分泌腺结构。
裸鼠淋巴结胸腺依赖区的淋巴细胞消失，外周血中淋巴细胞数目减少。
1969年丹麦Rygaard首先将人类结肠腺癌移植裸小鼠成功，为免疫缺陷动物研究和应用开创了新局面。
(二)特性：裸小鼠的主要特征表现为无毛(hair less)和无胸腺(athymus)。
随着鼠龄增加皮肤变薄、头颈部皮皱褶、发育迟缓。
由于无胸腺,仅有胸腺残迹或异常上皮,这种上皮不能使T细胞正常分化，缺乏成熟T细胞的辅助、抑制及杀伤功能，因而细胞免疫力低下。
裸小鼠B 淋巴细胞正常，但功能欠正常，免疫球蛋白主要是IgM,只含少量IgG。
裸鼠由于T淋巴细胞缺陷，不能执行正常T淋巴细胞功能，在混合淋巴细胞反应中全无有丝分裂反应，也不产生细胞毒效应细胞，对刀豆A或植物凝集素亦无有丝分裂应答,无接触敏感性，无移植排斥，成年裸小鼠(6－8周龄)较普通鼠有较高水平的NK细胞活性，但幼鼠(3－4周龄)的NK细胞活性低下。
裸小鼠粒细胞比普通小鼠数量少。
裸鼠皮下成瘤抑制实验原理
裸鼠皮下成瘤抑制实验原理
裸鼠皮下成瘤抑制实验的原理基于肿瘤细胞的恶性增殖特性。
肿瘤细胞具有无限增殖的能力，并通过信号转导途径、细胞周期调控等机制实现自我增殖。
由于大部分肿瘤研究使用到的是人类来源的细胞，种植到免疫正常的动物体内会发生免疫排斥反应，所以需要用免疫缺陷型小鼠作为成瘤模型的动物。
在实验中，将肿瘤细胞悬液注射到裸鼠的皮下，模拟肿瘤在人体内的生长过程。
然后，可以施加某种干预（例如药物治疗或基因编辑）来观察其对肿瘤生长的影响。
如果干预有效，则肿瘤的生长应受到抑制。
这种实验方法有助于研究肿瘤的生长机制，以及探索新的治疗策略。
以上内容仅供参考，建议查阅关于裸鼠皮下成瘤抑制实验的文献，获取更准确的信息。
炎症_肿瘤实验报告总结
一、实验背景近年来，炎症与肿瘤之间的关系逐渐成为研究热点。
越来越多的研究表明，慢性炎症与多种癌症的发生发展密切相关。
本实验旨在探讨炎症在肿瘤发生发展中的作用，以及通过抑制炎症反应是否能够减缓肿瘤的生长。
二、实验目的1. 观察炎症因子在肿瘤细胞生长过程中的作用；2. 探讨抑制炎症反应对肿瘤生长的影响；3. 为预防和治疗肿瘤提供新的思路和方法。
三、实验材料与方法1. 实验材料：小鼠肿瘤细胞系、炎症因子（如白介素-1）、炎症抑制剂（如阿那白质素）、培养皿、细胞培养液等。
2. 实验方法：（1）细胞培养：将小鼠肿瘤细胞系在含有10%胎牛血清的DMEM培养液中培养，置于37℃、5%CO2的培养箱中；（2）炎症因子处理：将培养好的肿瘤细胞分为实验组和对照组，实验组加入适量炎症因子，对照组加入等量生理盐水；（3）炎症抑制剂处理：在炎症因子处理的基础上，对实验组加入阿那白质素，对照组加入等量生理盐水；（4）细胞增殖实验：采用CCK-8法检测细胞增殖情况；（5）细胞凋亡实验：采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况；（6）肿瘤生长抑制实验：将小鼠肿瘤细胞接种于裸鼠体内，观察肿瘤生长情况。
四、实验结果1. 炎症因子处理组肿瘤细胞增殖能力显著高于对照组，提示炎症因子可促进肿瘤细胞生长；2. 在炎症因子处理组中加入阿那白质素，可显著抑制肿瘤细胞增殖，提示抑制炎症反应可减缓肿瘤生长；3. 炎症抑制剂处理组细胞凋亡率显著高于对照组，提示抑制炎症反应可促进细胞凋亡；4. 肿瘤生长抑制实验结果显示，与裸鼠肿瘤生长对照组相比，抑制炎症反应组肿瘤生长速度明显减慢。
五、实验结论1. 炎症因子在肿瘤细胞生长过程中发挥促进作用；2. 抑制炎症反应可减缓肿瘤生长，为预防和治疗肿瘤提供新的思路和方法；3. 本实验为后续研究炎症与肿瘤的关系提供了实验依据。
六、实验讨论1. 本实验结果表明，炎症因子在肿瘤细胞生长过程中发挥重要作用，提示炎症与肿瘤的发生发展密切相关；2. 抑制炎症反应可减缓肿瘤生长，为预防和治疗肿瘤提供了新的思路和方法；3. 本实验结果与已有文献报道一致，进一步证实了炎症与肿瘤之间的密切关系。
肝胆胰脾裸鼠皮下成瘤及原位瘤动物实验方案
裸鼠皮下成瘤及原位瘤动物实验方案分组:正常细胞组、EGFR1转染无关siRNA组、EGFR1转染目的基因（每组6只）。
细胞准备及注射裸鼠方法：到动物室准备实验。
取出未作处理的小鼠和处理后小鼠用鼠笼，顺序摆放在超净台中。
选体形较大的小鼠称重，以3μl/g剂量，腹腔注射10％水合氯醛麻醉小鼠。
约5分钟，小鼠开始进入安静状态，将其仰卧固定。
切忌麻醉剂过量使用。
(1)铺白布于鼠板上，仰卧位固定小鼠四爪，碘伏棉球消毒腹侧面上至颈部、下至腹股沟、后至腋后线。
消毒两次。
铺手术巾于小鼠上，在其左侧剪口（4*4cm），暴露其左侧腹部, 用碘伏消毒一次。
在左侧肋弓下缘1cm处向下剪开2cm皮肤，暴露腹壁肌肉，镊子牵拉腹壁肌肉，避开腹腔内脾脏，剪开腹壁肌肉，暴露内脏。
用棉签蘸PBS，拨出脾脏下极，切忌牵拉，以免损伤脾脏和胰腺。
(2)找到脾脏同时，用25微升Matrigel混合于细胞管中，打悬细胞沉淀，使细胞分散均匀成单细胞悬液。
用BD针吸净EP管中的单细胞悬液，稍退针芯，打出气泡，在脾脏下极内侧（凹面）进针向脾门方向约2mm开始注射细胞，注射完毕停留约30秒钟，缓慢退出针，以防细胞渗出。
同时用蘸PBS的棉球压迫周围出血点止血。
(3)用注射器吸取庆大霉素注射液（用生理盐水250：1稀释）约400微升，注入腹腔，棉球蘸干皮缘渗出的抗生素。
开始缝合腹壁肌肉（连续缝合4针）。
再次用注射器吸取庆大霉素注射液约400微升冲洗缝合口，棉球蘸干。
缝合皮肤（间断缝合4针）。
碘伏棉球消毒缝合口。
撤除固定，使小鼠处于自然体位，放于鼠笼中。
(4)所有细胞注射完毕，剪耳标记，记录剪耳标记及分组情况。
Day5-7：注意小鼠的状态，及时发现小鼠是否有因手术刺激、胰腺损伤、感染等死亡的情况。
Day42：颈椎离断，处死小鼠，解剖尸体，观察脾脏肿瘤生长状况，肝脏、肺脏及其他器官是否有转移瘤形成。
所有可疑组织均做好标记，拍照，若有表面结节，计数后，冻于液氮中。
裸鼠荷瘤方法及注意事项
关于肿瘤细胞株的选择，确实是一个很麻烦的问题，各类文献中提到过的细胞株有很多，但是一般而言，我觉得，对于我们做裸鼠肿瘤模型，细胞株的选择应该考虑一下几个方面：1. 国际公认度，虽然SFDA的指导原则上表示只要是建株细胞株均可以，但是一般来说，还是应该尽量考虑国际上比较公认的细胞株。
2. 体内生长情况，很多细胞株，在文献中有很高的出镜率，但是实际上，基本都是从体外开始有名，所以很多人就硬生生的往体内套，结果就是吃力不讨好，比如楼主提到的A549，还有MCF-7，都是很有名气的细胞株，但是在体内却不是一个好的试验对象，成瘤率低，生长慢，均一度差。
现在国内的很多研发单位，特别是一些公司的领导们，缺乏这方面的认识，动不动就把这些著名的细胞株挂在嘴边，硬压着一线的研究人员去花功夫做这些细胞株，作的不好，就怀疑大家的水平如何如何的，奶奶的，对此非常生气！3. 药物的敏感性，这一点常常被大家忽视，大部分的裸鼠肿瘤模型都是为抗肿瘤药物的筛选以及研究服务的，但是常常大家只考虑了这个细胞株是不是好做，但是没有考虑到细胞株本身对于药物的敏感性，比如Lovo细胞，国际公认度也还可以，体内生长情况也很棒，但是对于药物的敏感性不佳，大部分的常规化疗药物到了它这里，抑瘤率都会下降，显而易见，对于抗肿瘤药物的筛选来说，它不是一个好的选择。
另外说一点，体内与体外的关系，现在做体内的人，常常被体外的人牵着鼻子走，体外做出来什么什么细胞株敏感，体内的人就得吭哧吭哧的去做这个，但是却死活做不好，其实，现在我和一些老前辈们的观点是，体内和体外应该协调好细胞株的选择问题，体外的人手上有大把的细胞株可以选择，如果，体内的人不去和他们协调，那么将永远被牵着鼻子走，受累还不讨好，应该大家坐下来，一起选择20~30种细胞株作为常规的筛选细胞株，这就足够了，细胞株选择的时候考虑好方向（胃癌、肝癌、肺癌什么的）、靶点（EGF、vEGF等等），不能漫无边际的抓着哪个体内就的做哪个，谁也没有这个本事啊。
细胞悬液接种法血管瘤裸鼠动物模型的建立
细胞悬液接种法血管瘤裸鼠动物模型的建立目的：探索人毛细血管瘤裸鼠移植瘤模型建立的条件。
方法：将体外培养的血管瘤内皮细胞通过注射的方式植入裸鼠(BALB/c nude mice)皮下，测量不同生长时期瘤体体积变化，观察至60天后进行病理学光镜检查，并通过血管内皮细胞单克隆抗体CD31、细胞增殖标记抗体Ki-67免疫组化染色研究所成瘤体的同源性及增殖活性。
结果：通过皮下植入血管瘤内皮细胞的方法成功建立了人血管瘤裸鼠动物模型，所成瘤体与原血管瘤生物学特点相似。
结论：皮下植入人血管瘤内皮细胞的裸鼠动物模型建模方法可靠，能较真实地反映人血管瘤的发展过程，是研究血管瘤的较理想的平台。
Abstract:ObjectiveTo establish the human hemangioma model in nude mice.Methods Human hemangioma endothelial cells cultured in vitro were injected hypodermically into nude mice(BALB/c nude mice). The volume of in the transplanted tumor was measured in 60 days. Samples were taken from survival tumor and stained immunohistochemically by CD31 and Ki-67 before subjected to histopathological examination.ResultsHemangioma model were successfully established in nude mice and the original tumor histological characters were retained in the transplanted tumor.ConclusionHemangioma model established in nude mice by hypodermically injection with human hemangioma endothelial cells retains all the biological characteristics of the human hemangioma and can be a good model for research on hemangioma.Key words: hemangioma;nude mice;disease model血管瘤是婴幼儿常见的良性肿瘤，在新生儿的发病率为1.1％～2.6％，1岁时的发病率高达10％。
裸鼠肿瘤接种[最新]
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裸鼠肿瘤接种一般有细胞接种和瘤块接种两种方式，接种取材有手术活检标本、癌性胸腹水标本和体外培养的细胞系三种。
做体外培养的细胞的裸鼠接种，一般用带6号针头的注射器取适量细胞悬液注射于裸鼠的皮下，部位看试验要求而定，一般在腋下或背部皮下，每个接种部位注射0.1-0.2ml。
就是将培养的细胞收集起来调整到适宜浓度重悬于不含血清的培养液或PBS中，放于冰盒中携至动物房，直接注射即可。
是牵涉到细胞株的成瘤性问题，可以通过增大细胞悬液浓度的办法来解决。
一般细胞浓度可在1×106到5×107之间，浓度再大就可能打不进去了。
具体浓度需要查相关文献。
如果成瘤率太低，可以通过把瘤块在裸鼠身上传2—3代的方法提高成瘤率，即将已成瘤鼠的瘤块取出接种于新鼠身上，成瘤后再取出接种新鼠，如此传几代，肿瘤性质稳定后，再将肿瘤取出，剪碎、研磨、匀浆成为细胞悬液后再接种。
一、可移植性肿瘤的建立方法1．腹水瘤的建立将动物实体瘤细胞注入受体动物腹腔内，或将实体疤移植于受体动物的腹壁内，肿瘤生长后引起腹水，腹水内含高大量瘤细胞可移植传代．即为腹水瘤。
建议腹水瘤初期、腹水往往是血性，多次传代后逐渐变为乳白色的瘤性腹水。
腹水如培养基一样供给瘤细胞生长所需的营养。
若将腹水瘤细胞注入皮下，又可形成实体瘤。
由于瘤细胞游离在腹水内，因此总呈圆形，体积可有大、中、小之分c：r．在一些细胞边缘偶见大小不等的泡状突起，称之为“鼓泡”。
一般在接种后第5天时核分裂相达高峰。
偶见三极或四极分裂。
二、肿癌移植方法1．常规保种传代方法(1)腹水瘤移植方法：瘤源一般用接种后第5～6天的腹水，抽出的腹水以乳白色为佳。
接种应从下腹部注入受体动物腹腔，一般接种0.1- 0.2m1。
可在腹水内加适量的抗凝药物。
(2)实体型肿瘤接种法：1)小块接种法：将瘤取出后，切开，选出生长良好而无变性坏死、呈谈红色、鱼肉状的瘤组织，切成小块(约5×5×5mm)；在受体动物腹部外例剪开—个小口，用无钩眼科镊子夹取小块，送入切口内皮下。
动物模型：裸鼠PC-9细胞肿瘤模型
动物模型：裸鼠PC-9细胞肿瘤模型一、嘉美实验裸鼠PC-9细胞肿瘤模型的构建方法采用腋窝皮下接种PC-9人肺癌细胞，建立PC-9人肺腺癌细胞裸鼠移植瘤模型并给与药物进行干预，观察药物对肿瘤的作用。
二、裸鼠PC-9细胞肿瘤模型的构建及后续实验操作1、25只BALB c裸鼠，适应性饲养一周后，调整制备好的PC-9人肺腺癌细胞单细胞悬液浓度，用1m 1l无菌注射器吸取细胞悬液，于每裸鼠右侧腋下皮下注射0.2mL细胞悬液(接种细丹包量约为1×x102/ml)，细胞悬液接种于裸鼠的右侧腋下7-10d后，观察成瘤情况，肿瘤仁本积大于100m3后，选取肿瘤大小相近的小鼠按肿瘤体积随机分为4组:(1)对照组，5只；(2)高剂量组，7只:(3)中剂量组，7 )顺铂组，6只。
当天高剂量组、中剂量组、顺铂组开始给药其中，高剂量组连续21天每天灌胃给药，顺铂组每三天腹腔注射给药，齐量5m/e次。
每两天测量荷瘤裸鼠体重和冲瘤体积。
于第22天停止给药病禁食2h，第再次测量肿瘤体积，计算相对肿瘤体积(RTV)，绘制肿瘤生长曲线，毛材当天称量最后一次体重和瘤重计算肿瘤指数完整剥离瘤块，其中一半瘤块组织于 10%福尔马林中固定，备用；另半肿瘤组织存放于液氮中冻存。
血样用109 mmol/L枸櫞酸钠19抗凝，分离血浆。
2、小鼠接种PC-9人肺腺癌细胞后 9天左右，可观察到裸鼠右侧腋下均现黄豆大小瘤块，于当天开始测量肿瘤体积并称重。
于接种第11天时，测量肿瘤生长指数和体重时发现，各组荷瘤裸鼠肿瘤体积均值达到100mm3，于当天开始分组给药在给药过程中发现，顺铂组荷瘤裸鼠的体重下阳夆明显，与对照组相比具有极显著性差异루(P<0.01)高剂量组荷瘤裸鼠的体重于d7、dI 3、d19天时有显著性差异(P~0.05)，其他各组体重与对照组相比均无明显差异。
顺铂组肿瘤体积于d13、d17、dl9、d21 d23时与对照组相比明显减小，并有显著性差 :(P<0.05)，在d15天时有极显著性差쿠(P<0.01)。
裸鼠模型在肿瘤治疗研究中的应用
裸鼠模型在肿瘤治疗研究中的应用近年来，肿瘤治疗研究一直是医学界的热门话题。
而其中一个被广泛应用的模型就是裸鼠模型。
该模型是一种没有免疫系统的小鼠，其所患种类繁多的人类癌症与人体癌症的生理和生化特征高度一致。
因此，裸鼠模型被视为一种可靠的人类癌症模型，在肿瘤治疗研究中得到越来越广泛的应用。
一、裸鼠模型有助于肿瘤药物筛选和剂量的选择裸鼠模型的特点是没有免疫系统，因此可以有效地模拟人类癌症患者对化疗药物的反应。
研究人员可以将不同类型的人类肿瘤细胞种植到裸鼠的体内，然后观察不同药物的疗效以及适应性。
这种方法可以帮助筛选出最有效的化疗药物，并确定最佳的剂量方法，以降低剂量过大或过小的患者药物副作用和治疗效果不佳的风险。
二、裸鼠模型可以用于研究免疫药物的作用机制裸鼠模型的另一个重要特点是它们缺乏免疫系统。
因此，在研究免疫药物的作用机制时，其免疫抑制作用可以被完全消除。
这些免疫药物通常用于治疗肿瘤细胞免疫逃逸的疾病。
研究人员可以在裸鼠体内种植癌细胞，并给予不同的免疫药物处理，以便研究药物在治疗肿瘤免疫逃逸方面的作用和机制，为开发更加有效的肿瘤免疫疗法提供理论基础。
三、裸鼠模型可以模拟人类癌症的药物耐受性药物耐受性是肿瘤治疗中的一个重要问题。
但是直接在人体内进行研究很难获得满意的结果，因为某些药物在实验室中表现出的耐受性可能与实际情况不同。
通过使用裸鼠模型，可以准确地模拟人类癌症的耐受性情况，并研究这些药物的各种机制。
这种方法可以帮助人们更好地了解药物耐受性的机制，促进新药物的开发，改善现有的肿瘤治疗方法。
四、裸鼠模型可以进行肿瘤的转移研究在许多情况下，治疗肿瘤并不仅仅是消灭原发肿瘤，还需要防止肿瘤进行转移。
而裸鼠模型在这个方面有很大的应用潜力，尤其是在研究转移性肿瘤时。
研究人员可以通过种植具有转移潜力的细胞系，观察肿瘤转移的过程和机制，并测试不同的治疗方案，以便开发更加有效的肿瘤转移治疗方法。
五、裸鼠模型可以用于研究基因治疗基因治疗是一种新型的肿瘤治疗方法，其作用机制涉及基因转导、表达、调控和重组等方面。
人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的建立实验具体步骤及方法
人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的建立实验具体步骤及方法先用组织学完整的新鲜人肝癌组织接种于裸鼠皮下，形成皮下移植瘤，然后用此移植瘤组织再接种于裸鼠肝内，建立肝原位移植瘤模型（间接肝原位移植瘤模型），并将其与直接肝原位移植瘤模型、皮下移植瘤模型和腹腔内移植瘤模型作比较。
一、间接肝原位移植瘤模型的制备1. 用新鲜的肝癌外科手术切除标本（来自长海医院，患者为1名47岁男性，病理诊断：肝左叶肝细胞癌，粗梁型，Ⅱ级），在Hanks液中，去除坏死组织和非癌组织后切成1～2 mm3小块。
2. 取2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头植入裸鼠腰背部皮下，待皮下移植瘤长到直径约1 cm时切取肿瘤，在Hanks液中，去除坏死组织后切成1～2 mm3小块，裸鼠用戊巴比妥钠腹腔麻醉后，行左上腹横切口，暴露肝脏。
3. 取上述2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头植入裸鼠肝右叶深部实质内，全层关腹。
二、直接肝原位移植瘤模型的制备1. 同一例新鲜肝癌手术切除标本，处理方法同皮下移植，裸鼠处理同间接肝原位移植，取2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头直接植入裸鼠肝右叶深部实质内。
2. 皮下移植瘤模型和腹腔内移植瘤模型的制备。
三、病理检查和相关指标检测1. 解剖和组织学检查（1）所有裸鼠接种后，分组分笼饲养，自由进食，每天观察1～2次。
（2）当裸鼠处于全身衰竭状态时处死并作大体解剖，对接种瘤和转移瘤分别进行观察、测量，记录肿瘤侵袭和转移情况，重要器官（主要为肝和肺）经10%中性甲醛固定后，常规石蜡制片，光学显微镜检查。
2. 周围血甲胎蛋白(AFP)检测处死前，均采用摘眼球采血的方法获得血液，用生化法检测AFP的分泌量。
3. 瘤细胞DNA含量分析留取部分移植瘤标本采用流式细胞术进行DNA含量分析。
注意事项目前，肝癌的复发和转移仍然是其术后长期存活的主要障碍。
为了研究肿瘤的转移机制，建立接近于人体的肿瘤动物模型显得尤为重要。
Vero细胞致肿瘤原性的研究
Vero细胞致肿瘤原性的研究目的：通过对生产疫苗所用的细胞系进行的致肿瘤原性实验，确定160代以内的Vero细胞可安全用于生产。
方法：用Vero细胞和Hela细胞接种裸鼠，观察肿瘤的发生情况。
结果：Vero细胞实验组裸鼠注射部位、肺部组织、肝脏组织均未见肿瘤组织发生；Hela细胞对照组的10只裸鼠全部有肿块形成，致癌致瘤率为10/10（100%）。
结论：Vero细胞系非致瘤性细胞系，符合我国对疫苗生产所用细胞的要求，其在160代以内可安全用于疫苗生产。
标签：Vero细胞；Hela细胞；肿瘤原性；研究作为生物制品研究与生产的重要原材料，传代细胞系的株系特征，特别是其致肿瘤性，不仅直接影响到疫苗的质量，而且关系到人畜的健康与安全，因此一直被生物制品研究与生产部门所重视。
生产疫苗所用细胞系应无外源因子污染，符合细胞遗传学要求，尤其应在生产所使用的细胞代次内无致肿瘤性，这才能符合我国对疫苗生产所用细胞的要求。
笔者在建立传代Vero细胞种子库与工作库基础上，对研制生产疫苗所用的Vero细胞系160代进行了致肿瘤原性实验，以确定160代以内的Vero细胞可安全用于生产。
1 材料与方法1.1 材料细胞株：非洲绿猴肾Vero细胞，160代（沈阳安迪生物高科技公司）；人宫颈癌Hela细胞S-3株，13代（中国药品生物制品检定所细胞室）；（2）裸鼠：Balb/C无胸腺雌性裸鼠20只，约4周龄（中国药品生物制品检定所动物中心）。
1.2 方法1.2.1 细胞制备Vero细胞160代，250 ml细胞瓶，Hela细胞13代4瓶，用胰酶消化，用无牛血清的Eagles MEM吹下、50 ml离心管1000 r/min，离心10 min，弃上清，加35 ml PBS重悬细胞沉淀，1000 r/min，离心10 min，弃上清，细胞沉淀用灭菌PBS洗1次，用1.5 ml PBS再洗1次，用1.5 ml PBS重悬细胞，取0.1 ml，100倍稀释，细胞计数，再将细胞浓度调到1.0×108/ml，Hela细胞为1.5 ml，Vero细胞为1.5 ml。
裸鼠成瘤实验-超详细资料
裸鼠成瘤实验-超详细资料裸鼠成瘤实验总结-超详细资料接种量接种部位接种部位:腋窝中部外侧皮下为好。
皮下肿瘤模型中，想要成瘤率高就接种在腋下。
接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针，要保证与接种点的距离小于针头的长度，向头部方穿行，绝对不能刺破皮肤或者刺破肌肉层，当针头到达接种位点时注射，退出针头，这样操作的目的并不完全是避免漏液，其实熟练后，不需要皮下穿行也不会漏液，主要是避免污染，进针点还有少量污染的可能性的，针头在皮下穿行一段后，接种点离进针点较远，最大限度减少污染的可能。
如果是用于正式实验，那么一只老鼠就只能接种一个位点，不可以接种多个位点用于保证可用的模型数。
因为在有些情况下，一个老鼠身上有多于一个肿瘤的情况下，会有相互影响的可能，无论这几个肿瘤相距有多远。
要是想多打几个部位做做预试验，倒也不是不可以，但是我觉得，基本上没有什么必要。
皮肤不用绷得太紧，平展就可以了，另外接种的时分进针点很靠下，针头在皮下走一段再注射，速度不要太快。
注射前针头稍微动一动，能动就申明在皮下，不然大概在皮内或者肌肉内。
普通来说都是有鼓包的但是要是你接种位置太深入腋窝，你是看不到鼓包的。
主要靠针头稍微动一动来判断。
是否应用免疫抑制剂裸鼠皮下种瘤后，可以通过应用免疫抑制剂，比如环磷酰胺（2mg每只，打两天）来加速瘤体的生长，当然我知道裸鼠是T免疫缺陷动物，但是人家说的CTX可以进一步抑制裸鼠的体液免疫和NK细胞杀伤的保护作用，可以加快瘤子的生长，这样造模的周期很短，也可以进行人为的控制，不知道这个观点是不是有道理，实践中是不是真有人这么做呢？楼上说的文献中也有报道，而且还有预先用放射照射抑制动物免疫功能再接种的方法，但是一般常规应用中大多数时候不推荐这么做。
另外还有一个问题应该被考虑到，大家现在都在琢磨着怎么让肿瘤出瘤的更快，造模周期更短，但是如果人为的把肿瘤生长加速，其实对实验并不好。
因为造模周期短，很可能生长速度也会被加快，肿瘤可能很快就溃烂了，这样就不得不被迫中止实验，而用药却没有用到足够的时间，药效还没有发挥出来就结束了，这样是很不利的。
裸鼠抑制肿瘤瘤实验具体步骤及方法
动物体内抑瘤实验具体步骤及方法活体生物发光成像技术的原理：在小型哺乳动物体内利用报告基因（荧光素酶基因）表达所产生的荧光素酶蛋白与其小分子底物荧光素在氧、Mg2+存在的条件下消耗ATP 发生氧化还原反应，将部分化学能转化为可见光能释放。
因此只有在活细胞内才会发生发光现象。
并且光的强度与标记细胞的数目线性相关。
一、材料准备1. 动物：裸鼠9 只，6～8周龄，雄性；C57小鼠24 只，6～8 周龄，雄性；动物均为自由饮水采食。
2. 细胞：MDA-MB-231人乳腺癌细胞系，使用荧光素酶基因标记。
方法：用荧光素酶报告基因标记的质粒转染人乳腺癌细胞，共转染的还有选择性标记基因，从而保证转染细胞的稳定性，形成表达荧光素酶的肿瘤细胞株；B16 黑色素瘤细胞。
二、实验步骤1. 紫杉醇混合胶束的制备（1）将适量紫杉醇溶解在少量无水乙醇和丙二醇的混合溶剂中.（2）加入适当比例的磷脂和表面活性剂A 进行充分混合，制得稳定的紫杉醇混合胶束前体制剂，载药浓度为6 g/L。
（3）临用时按剂量加入生理盐水中稀释、摇匀后即可使用。
制剂体系的粒径大小与分布特征采用动态激光光散射粒度仪检测。
2. MDA-MB-231人乳腺癌细胞荷瘤鼠模型的建立（1）培养荧光素酶基因标记的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系，使用DMEM 培养基（添加10%胎牛血清），37 ℃、5% CO2 培养箱中培养，每3天传代1次。
（2）待细胞密度为80%～90%、细胞总量达到实验所需要求时，使用胰酶消化，收集于PBS溶液重悬。
（3）如有需要，在细胞培养一定时间后，应使用抗生素Zeocin进行抗性筛选，保证荧光素酶基因的表达量足够。
（4）收集细胞，使用PBS稀释至细胞数1.5×108/mL，接种于裸鼠腋下，每只裸鼠的接种量为0.1 mL 。
3. 动物活体成像检测（1）接种后将裸鼠随机分为3组，分别为生理盐水组、紫杉醇注射液组、紫杉醇混合胶束制剂组，每组3只。
小白鼠实验肿瘤的数据整理
小白鼠实验肿瘤的数据整理1、取5至6周龄裸鼠饲养。
2、制备肿瘤细胞悬液，按5×106至2×107细胞/只（稀释成0.2ml）接种于裸鼠腹腔，形成腹腔种植瘤。
（小鼠腹水出现情况一般如下：5～6 d出现腹水，6～8d抽取传代最好，10～12 d出现血性腹水，14～15 d小鼠开始死亡。
）3、取腹水瘤，细胞数5×106至2×107，稀释成0.2ml接种于裸鼠前腋皮下（对吗？是稀释成5×106至2×107/ml加0.2ml还是加细胞数是5×106至2×107，稀释成0.2ml？）。
4、加药（具体是什么时候加？文章上说是第1天，是说接种的当天就给药物吗？）10至14天处死裸鼠，并进行相关数据的检测（肿瘤大小、重量等。
）备注：1、若对照组中20%小鼠的肿瘤小于400mg或平均重量小于1g，均为肿瘤生长不良，实验数据应作废。
2、如对照组小白鼠肿瘤平均重量小于1g或20%鼠的瘤重小于400mg，大白鼠肿瘤平均重量小于2g，表示肿瘤生长不良。
对于人源性肿瘤做裸鼠的移植瘤一般有两种方法：细胞悬液接种和组织块接种，两种方法各有优缺点。
如果是实体瘤的话建议做组织块皮下接种，接种部位一般选择裸鼠腋窝后方肩胛部（可能描述不好，反正该处血供丰富，便于观查和测量），瘤块大小大约1.5×1.5，大概与穿刺针头的大小差不多，可以被正常吸入穿刺针内。
穿刺后可以清楚看到瘤块，可以沿着穿刺方向用穿刺针横着轻推一下，这样瘤块可以固定，而且以后的瘤块长得形状比较规则。
3、在试验期间给受试物组鼠死亡超过20%，或平均体重（去瘤后）下降（自身对照）超过15%者，表示受试物的毒性反应。
应当减少剂量重新试验。
裸鼠成瘤标准
裸鼠成瘤标准
白色小鼠可以作为模型来研究肿瘤，常用实验动物有小鼠，大鼠和兔子。
小鼠肿瘤模型是肿瘤生物学非常重要的研究手段，所以在小鼠瘤模型的建立方面有很多研究。
一般情况下，小鼠瘤模型的制备包括移植法和致瘤剂法两种。
移植法最常使用是小鼠和兔子细胞培养成瘤。
将细胞培养成瘤，然后移植到裸鼠皮下或者腹腔。
致瘤剂法是用致瘤剂，如甲苯胺咪唑（MTT），甲硝唑（MNU），敌敌畏（DMBA）等制备瘤体或者瘤细胞，然后将致瘤物质直接注入裸鼠的体内或者皮下。
拥有肿瘤模型的裸鼠都需要特殊的照顾，特别是在进行实验前，需要确保裸鼠的精神和身体健康，可以接受治疗。
另外，给裸鼠提供正常的饲养环境也非常重要，建立金标准的超净舍，保证裸鼠不受外界紫外线，空气，土壤和食物等致病因素的影响，以维持健康状态。
裸鼠的肿瘤移植模型研究
裸鼠的肿瘤移植模型研究肿瘤是一种常见的疾病，也是医学研究的一个重要领域。
随着科学技术的不断发展，人们对肿瘤的认识也在不断深入。
其中，裸鼠的肿瘤移植模型研究是一种常用的实验手段。
一、裸鼠是什么裸鼠是一种没有毛发的实验小动物，通常被用来进行肿瘤移植研究。
这种小动物一般来自人工培育的遗传变异株，因为它没有毛发，所以被称为裸鼠。
这种小动物体型小、活力强，非常适合作为实验对象。
二、肿瘤移植模型的意义肿瘤移植模型是一种通过将人类肿瘤细胞移植到裸鼠体内来模拟肿瘤生长和发展的实验方法。
这种实验方法能够为生物医学研究人员提供宝贵的研究材料，用于发现和开发新的抗肿瘤药物和治疗方法。
同时，肿瘤移植模型还能够为临床医学研究提供重要的参考，帮助医生们更好地了解肿瘤生长和发展的规律，找到控制肿瘤的有效方法。
三、裸鼠肿瘤移植模型的基本步骤1. 建立肿瘤细胞株首先，需要建立一种稳定的肿瘤细胞株。
一般来说，肿瘤细胞株可以从患者的体内或者文献报道中获取，然后通过培养和筛选，筛选出能够稳定生长的肿瘤细胞株。
2. 准备裸鼠裸鼠一般都需要进行体表消毒和饲养管理等操作。
在进行实验前，需要将裸鼠的体表消毒，避免外来细菌对实验结果的影响。
此外，裸鼠的饲养、环境、温度、湿度等也需要进行精心管理，确保实验的准确性和有效性。
3. 移植肿瘤细胞将准备好的肿瘤细胞接种到裸鼠的体内，一般是通过皮下注射或者腹腔注射的方式进行。
移植后，需要观察肿瘤的生长和发展情况，并及时进行处理、剖解和测量等操作。
四、裸鼠肿瘤移植模型的优缺点优点：1. 易于建立：裸鼠的肤色和体毛特征明显，容易观察，建立肿瘤移植模型相对容易。
2. 可控性强：通过各种手段可以有效控制实验的变量，确保实验结果的可靠性和准确性。
3. 结论可靠：通过对裸鼠肿瘤移植模型的研究，可以得到比较可靠的实验结论，从而为后续的研究提供重要参考。
缺点：1. 模拟程度低：由于裸鼠与人体存在较大的生物学差异，因此在某些肿瘤特征的模拟程度上会存在一定的局限性。
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对骨髓瘤裸鼠的抗瘤作用
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杨 雷 ，孔焕 育 ，曹莹
。 中国人民解放军第 四五八 医院肿瘤科 （ 广州 ５ ０ ０ ） 南方 医科大学新 药评价 中心（ 州 ５ ０ １ ） １６ ２ ； 广 １５ ５
【 摘要 】 目的
探讨肿瘤坏死 因子 相关凋亡诱导配体 （Ｒ Ｉ） Ｔ ＡＬ 对接种 骨髓瘤 细胞 裸 鼠的抗 瘤作 用。方 法
Ｃ ） ａｄｐｅｅｔ ｅｈ ｈｄｓ ｔ ｐｒｏ ｅｌｎｅｔ ｎｇｏｐ（ ｒｕ ） ｕ ａ ｃｍ ｉａｔ Ｒ Ｉ ｅｅｇ ｅ ｅｉ 。 ２ ， ｎ ｒｖｎｉ ｉ ｏｅｉ ｒ ｅｉｎ ａ ｉ ｃ ｏ ｕ Ｇ ｏｐＤ ．Ｈ ｍ ｎｒ ｏ ｂｎｎ Ａ Ｌｗ ｒ ｉ ｎｐｒｏ ｖ ｇ ｎａ ｔ ｊ ｉ ｒ ｅ Ｔ ｖ ｔ
雄性 Ｂ Ｌ ／ Ａ Ｂ Ｃ裸 小 鼠共 ３ ６只 ， 只 小 鼠 左侧 臀 部 皮 下 接 种 ９ ２ ・ 骨 髓 瘤 细 胞 ０ ２ｍＬ 随 机 分 ６组 ， 每 ．５ｘ１ ０ Ｌ ． 。 每 组 ６只 ： 照 组 、 腔 高 剂 量 组 、 腔 低 剂 量 组 、 周 高 剂 量 组 、 周 低 剂 量 组 和 腹 腔 高 剂 量 预 防 组 。 给 对 照 组 外 对 腹 腹 瘤 瘤 的 各 组 小 鼠给 予 重 组人 可 溶 性 Ｔ Ａ Ｌ样 品 ： 照组 不给 药 ； ＲＩ 对 高剂 量 组 每 只 给 药 剂 量 为 １５ｍ ／ ｇ低 剂 量 组 每 只 给 ． ｓ ｋ ，
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裸鼠肿瘤接种一般有细胞接种和瘤块接种两种方式，接种取材有手术活检标本、癌性胸腹水标本和体外培养的细胞系三种。
做体外培养的细胞的裸鼠接种，一般用带6号针头的注射器取适量细胞悬液注射于裸鼠的皮下，部位看试验要求而定，一般在腋下或背部皮下，每个接种部位注射0.1-0.2ml。
就是将培养的细胞收集起来调整到适宜浓度重悬于不含血清的培养液或PBS中，放于冰盒中携至动物房，直接注射即可。
是牵涉到细胞株的成瘤性问题，可以通过增大细胞悬液浓度的办法来解决。
一般细胞浓度可在1×106到5×107之间，浓度再大就可能打不进去了。
具体浓度需要查相关文献。
如果成瘤率太低，可以通过把瘤块在裸鼠身上传2—3代的方法提高成瘤率，即将已成瘤鼠的瘤块取出接种于新鼠身上，成瘤后再取出接种新鼠，如此传几代，肿瘤性质稳定后，再将肿瘤取出，剪碎、研磨、匀浆成为细胞悬液后再接种。
一、可移植性肿瘤的建立方法
1．腹水瘤的建立将动物实体瘤细胞注入受体动物腹腔内，或将实体疤移植于受体动物的腹壁内，肿瘤生长后引起腹水，腹水内含高大量瘤细胞可移植传代．即为腹水瘤。
建议腹水瘤初期、腹水往往是血性，多次传代后逐渐变为乳白色的瘤性腹水。
腹水如培养基一样供给瘤细胞生长所需的营养。
若将腹水瘤细胞注入皮下，又可形成实体瘤。
由于瘤细胞游离在腹水内，因此总呈圆形，体积可有大、中、小之分c：r．在一些细胞边缘偶见大小不等的泡状突起，称之为“鼓泡”。
一般在接种后第5天时核分裂相达高峰。
偶见三极或四极分裂。
二、肿癌移植方法
1．常规保种传代方法
(1)腹水瘤移植方法：瘤源一般用接种后第5～6天的腹水，抽出的腹水以乳白色为佳。
接种应从下腹部注入受体动物腹腔，一般接种0.1- 0.2m1。
可在腹水内加适量的抗凝药物。
(2)实体型肿瘤接种法：
1)小块接种法：将瘤取出后，切开，选出生长良好而无变性坏死、呈谈红色、鱼肉状的瘤组织，切成小块(约5×5×5mm)；在受体动物腹部外例剪开—个小口，用无钩眼科镊子夹取小块，送入切口内皮下。
本法多用于建瘤株的初期及少量的接种。
接种部位以腋窝和鼠蹊部为佳，特别是腋窝部皮肤松弛能使瘤结长得较大，宿主寿命也可延长。
2)悬液接种法：将选取的瘤组织用玻璃匀浆器研磨制成悬液，用注射器吸取瘤悬液．先计算活细胞数．再将瘤悬液注射到接种部位(多种丁皮下)，细胞数多在1000000～10000000。
注射后用小镊夹针孔片刻，可避免注入液外溢。
本法适用于成活率高的移植瘤的常规接种或大批接种实验。
做鼠源的肿瘤接种，因为鼠源的肿瘤比较柔软，所以可以用匀浆法匀浆以后接种老鼠，操作过程：先解剖肿瘤种鼠，取下肿瘤块，然后去中间坏死和血管，不用剪碎，直接放入匀浆器中匀浆，按你所需的匀浆比例加PBS，因为由于肿瘤的活性不同，匀浆的比例也不同，（肿瘤活性可以根据你前几代的传代数据中获得），当匀浆到无法在碾磨的时候，即没有柔软组织的时候说明已经匀浆彻底了，最后留在匀浆器里的是肿瘤的包膜，在匀浆过程中可以分批把匀浆好的肿瘤悬液倒出，带有血水是没有关系的，为了保持肿瘤细胞的活性（这个至关重要），尽量在短时间内操作，还有尽量保持环境清洁，最好在超净台中操作，倒出来的细胞悬液无需过滤，直接用7-8号针头的注射器注射接种。
就像楼主所说的，无法计数和堵塞细胞筛（这些我都试过），所以为了保持肿瘤细胞的活性，直接取匀浆液接种即可。
“进行瘤内注射时要先将针头进入瘤外皮下再进入瘤内”是指的针头在皮下穿行一小段距离后再刺入瘤体。
一般来说，瘤内注射的剂量可以按照肿瘤体积计算，比如每10个立方毫米的肿瘤注射多少药物，这样配制同样浓度的样品，无论肿瘤大小都是按照比例注射的。
一般来说一个点注射不超过20ul，超过20ul就有可能药物漏出，应该分多点注射，多点注射要注意的就是针头推出瘤体，但是不能退出皮下，在皮下换个点直接刺入，不要完全把针拔出再刺入，很容易漏液。
3)瘤组织浆接种法：此法曾被广泛使用。
从实体瘤选出新鲜瘤组织，剪碎成浆后即可做注射用。
多适用于大动物(免、狗)的移植瘤。
以保证较高成活率。
移植部位以体内深部肌肉内或器官内较佳，家兔的成骨肉瘤移植多用此法。
(4) 培养细胞的移植法：将单层培养的细胞消化脱壁后稀释为一定浓度的细胞悬液，移植于动物皮下或其他部位。
活细胞计数方法如下：用新配制的0.05％伊红或0.1％台盼蓝生理盐水溶液．将瘤细胞悬液稀释、混匀后在血球计数盘上计数．染色者为死细胞、不染色为活细胞。