裸鼠肿瘤造模的一点经验分享

裸鼠皮下移植瘤实验造模步骤

裸鼠皮下移植瘤实验造模步骤顾名思义，这种模型的建立是将肿瘤细胞或肿瘤组织直接种植在小鼠的皮下。

种植的点也有讲究，一般选择血运淋巴回流丰富的腹股沟和腋窝。

可根据实验设计选择移植点，统一移植点的位置，除了遵守实验统一的条件外，待肿瘤成熟后收集肿瘤时留下照片证据也显得美观。

裸鼠（Balb/c 鼠，无毛发， T 淋巴细胞缺陷）是比较常见和常用的实验用鼠，尤其是在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。

裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。

当然，这种肿瘤模型也有缺陷，即不能很准确的模拟正常人体肿瘤发生发展的过程。

☞肿瘤细胞移植时的简要步骤首先准备好要移植的肿瘤细胞（细胞量根据不同肿瘤略有不同，我们所用的前列腺癌细胞系每个移植点一般选择1x106 左右；肿瘤细胞可与基质胶 1:1 混匀后用 1 ml 注射器吸取，基质胶能够给肿瘤细胞提供营养环境，有助于肿瘤细胞生长）。

戴无菌手套后，将小鼠用左手大拇指和食指捏住颈部皮肤，然后将鼠尾用左手无名指和小指固定于左手大鱼际。

将腋窝或腹股沟用75% 酒精消毒3 次。

右手持吸有肿瘤细胞和基质胶混合液的注射器，在腹股沟或腋窝的位置，45 度斜角进针，注意不要突破腹膜，将针头保持于皮下位置。

然后近水平位置将针头几乎完全插入皮下，将混有基质胶的肿瘤细胞注射入皮下（肿瘤细胞量约1x106），快速退针，左手食指轻压针孔约1 min 后将小鼠放回饲养笼中，注意将小鼠侧放于垫料上，放置其不适呕吐时呕吐物误入呼吸道引起窒息。

2～3 h 后观察小鼠是否苏醒。

如果是利用肿瘤组织（人体肿瘤标本或小鼠移植瘤传代）建立裸鼠皮下移植瘤模型，则需要首先将肿瘤组织用无菌PBS（或1640 培养基）洗涤3 次，然后在无菌平皿上切成或用无菌剪刀剪成<1 mm3体积的小块（种植前可裹基质胶）备用。

将小鼠用水合氯醛麻醉后平卧于解剖板上，四肢用胶带固定，将腋窝或腹股沟用 75% 酒精消毒 3 次，然后用眼科剪剪开约 0.5 cm 小口，小镊子将皮下筋膜与皮肤分开，然后将肿瘤组织放入贴近腹股沟或腋窝的深部，每个位置放置 2～3 块肿瘤组织，注意不同组间统一放置肿瘤组织块数以保持一致。

裸鼠卵巢癌模型实验技术原理

裸鼠卵巢癌模型实验技术原理
裸鼠卵巢癌模型造模：皮下移植A组：5只，用针头分别于左右背侧近前后肢处皮下注射Ao细胞悬液20ul/注射点，共注射20点；B 组：5只，同法注射20点，每点注射50ul Ao细胞悬液。

注射后每天观察肿瘤形成及有无**、溃破，成瘤后每周用游标卡尺测量瘤体长径与短径，计算肿瘤面积。

接种6w后处死裸鼠，无菌条件下取出瘤体，用于网膜移植并做成标本检测。

裸鼠卵巢癌模型网膜移植：取出瘤体取肿瘤实质部分切成大小一致的16个小块，再从中选出较大和较小的各三个瘤块于无菌室外称重，其余十个瘤块浸于生理盐水中备用。

受体10只裸鼠在麻醉下切开腹壁，将瘤块分别缝扎于脾区网膜表面并作半包埋。

关腹后每天向每只裸鼠注射含antibiotics的细胞培养液1ml，共2w，30d后处死裸鼠尸检并切取瘤体及脾区网膜称重。

方法比较：皮下移植瘤模型的优点是操作简单、便于观察，可根据不同时期肿瘤体积大小了解生长速度，反应肿瘤的生长特征及生物学行为变化。

而卵巢癌发生的原始环境为卵巢本身，皮下移植不符合环境要求。

所以很多学者致力于裸鼠卵巢内原位移植的研究，但裸鼠卵巢较小，操作较困难，且即使在人类卵巢也很难做到。

裸鼠移植瘤造模的注意事项

２．皮下移植瘤、手术切除的肿瘤组织、培养的肿瘤细胞等移植物要快速进行处理及移植，尽可能在２ｈ之内完成，为防止污染，可使用少许抗生素；
３．肿瘤细胞株皮下接种时要取对数生长期细胞，活细胞数大于９５％，用无血清的培养基、ＰＢＳ或生理盐水调整细胞浓度，制备成所需的细胞悬液，每只小鼠接种体积通常为０．１—０．２ｍＬ；
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中国比较医学杂志２０１７年３月第２７卷第３期ＣｈｉｎＪＣ。ｍｐＭｅｄＭａｃｈ２０１７，ｖ。Ｉ．２７．Ｎ。．３，
· 专家问答 ·
问：裸鼠移植瘤造模的注意事项答：１．实验要严格遵照无菌操作原则，所有手术器械和物品要在使用前严格消毒灭菌，且实验要在超净工作台内完成பைடு நூலகம்；
４．肿瘤细胞株皮下移植的部位较多，可选择接种皮肤松弛、血供良好、肿瘤生长后圆整度好、且易于实验操作和观察、便于测量肿瘤体积的部位，如腋窝、大腿外侧、颈背部等皮下部位；
５．肿瘤组织接种时要注意，所取的肿瘤组织需新鲜、生长良好，尽可能剔除包膜和坏死的肿瘤组织；６．实验中如需使用麻醉剂，要根据实验时间长短选择适当的麻醉剂，同时需要注意麻醉剂的用量，以达到对动物机体干扰最小而疼痛抑制效果最大为最佳；７．裸鼠需要原位移植肿瘤时，脏器手术应使用较细的可吸收缝合线以减少对脏器的损伤，术后应连续三天给予抗生素以防感染；８．手术后的动物要与清醒的动物分开饲养，以免挤压、踩踏、咬伤，待小鼠度过术后恢复期后按实验需要分组饲养；９．移植肿瘤后要加强对动物的护理，应注意保持动物实验室合适的温度、湿度，以及笼具、垫料、饲料和饮水等物品的洁净；ｌ０．裸鼠皮下移植瘤模型利于观察肿瘤的生长情况，注意肿瘤生长不宜太大（直径应小于＜１．５ｅｌｎ）。

裸鼠肿瘤接种技术实验操作方法

裸鼠肿瘤接种技术实验操作方法裸鼠肿瘤接种一般有细胞接种和瘤块接种两种方式，接种取材有手术活检标本、癌性胸腹水标本和体外培养的细胞系三种。

l楼主看来是做体外培养的细胞的裸鼠接种，一般用带6号针头的注射器取适量细胞悬液注射于裸鼠的皮下，部位看试验要求而定，一般在腋下或背部皮下，每个接种部位注射0.1-0.2ml。

就是将培养的细胞收集起来调整到适宜浓度重悬于不含血清的培养液或PBS中，放于冰盒中携至动物房，直接注射即可。

是牵涉到细胞株的成瘤性问题，可以通过增大细胞悬液浓度的办法来解决。

一般细胞浓度可在1*10的6次方到5*10的7次方之间，浓度再大就可能打不进去了。

具体浓度需要查相关文献。

如果成瘤率太低，可以通过把瘤块在裸鼠身上传2—3代的方法提高成瘤率，即将已成瘤鼠的瘤块取出接种于新鼠身上，成瘤后再取出接种新鼠，如此传几代，肿瘤性质稳定后，再将肿瘤取出，剪碎、研磨、匀浆成为细胞悬液后再接种。

一、可移植性肿瘤的建立方法1．腹水瘤的建立将动物实体瘤细胞注入受体动物腹腔内，或将实体疤移植于受体动物的腹壁内，肿瘤生长后引起腹水，腹水内含高大量瘤细胞可移植传代．即为腹水瘤。

建议腹水瘤初期、腹水往往是血性，多次传代后逐渐变为乳白色的瘤性腹水。

腹水如培养基一样供给瘤细胞生长所需的营养。

若将腹水瘤细胞注入皮下，又可形成实体瘤。

由于瘤细胞游离在腹水内，因此总呈圆形，体积可有大、中、小之分c：r．在一些细胞边缘偶见大小不等的泡状突起，称之为“鼓泡”。

一般在接种后第5天时核分裂相达高峰。

偶见三吸或四极分裂。

二、肿癌移植方法1．常规保种传代方法(1)腹水瘤移植方法：瘤源一般用接种后第5～6天的腹水，抽出的腹水以乳白色为佳。

接种应从下腹部件入受体动物腹腔，一般接种o．1一o．2m1。

可在腹水内加适量的抗凝药物。

(2)实体型肿瘤接种法：1)小块接种法：将瘤取出后，切开，选出生长良好而无变性坏死、呈谈红色、鱼肉状的瘤组织，切成小块(约5*5*5mm)；在受体动物腹部外例剪开—个小口，用无钩眼科镊子夹取小块，送入切口内皮下。

裸鼠荷瘤实验

接种量要查文献来确定接种量，在找不到任何相关资料的情况下，最高就用到1*107/0.2ml/site,再高也没有意义了。

如果你的细胞很小，1*107/0.1ml也可以操作，不至于很粘稠，那么最好是1*107/0.1ml/site。

查文献看他们的构建条件是什么样的，比如培养条件，接种量，接种位置什么的，是不是一定要用雌性鼠等等。

有的瘤株也有可能很容易成瘤，而且生长速度很快。

建议用几只动物试试不同的接种浓度，万一能够长出来，而且还长得很快，那你就要根据情况选择一个合适的浓度了。

基本上一般认为比较合适的接种浓度有这么几个特征：1. 接种后10到15天左右可以开始试验。

2. 开始试验时可以用于试验的动物数不少于60~70%，而且SD 不大于平均值的1/3左右。

3. 开始试验三、四周后肿瘤重量大于1g，并且没有溃烂。

当然，这些条件都是锦上添花的东西，如果以1*107/site 都勉勉强强长出肿瘤，那么就不必过多的去考虑它了。

接种部位接种部位:腋窝中部外侧皮下为好。

皮下肿瘤模型中，想要成瘤率高就接种在腋下。

接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针，要保证与接种点的距离小于针头的长度，向头部方穿行，绝对不能刺破皮肤或者刺破肌肉层，当针头到达接种位点时注射，退出针头，这样操作的目的并不完全是避免漏液，其实熟练后，不需要皮下穿行也不会漏液，主要是避免污染，进针点还有少量污染的可能性的，针头在皮下穿行一段后，接种点离进针点较远，最大限度减少污染的可能。

如果是用于正式实验，那么一只老鼠就只能接种一个位点，不可以接种多个位点用于保证可用的模型数。

因为在有些情况下，一个老鼠身上有多于一个肿瘤的情况下，会有相互影响的可能，无论这几个肿瘤相距有多远。

要是想多打几个部位做做预试验，倒也不是不可以，但是我觉得，基本上没有什么必要。

皮肤不用绷得太紧，平展就可以了，另外接种的时候进针点很靠下，针头在皮下走一段再注射，速度不要太快。

注射前针头稍微动一动，能动就说明在皮下，否则可能在皮内或者肌肉内。

裸鼠荷瘤方法及注意事项

关于肿瘤细胞株的选择，确实是一个很麻烦的问题，各类文献中提到过的细胞株有很多，但是一般而言，我觉得，对于我们做裸鼠肿瘤模型，细胞株的选择应该考虑一下几个方面：1. 国际公认度，虽然SFDA的指导原则上表示只要是建株细胞株均可以，但是一般来说，还是应该尽量考虑国际上比较公认的细胞株。

2. 体内生长情况，很多细胞株，在文献中有很高的出镜率，但是实际上，基本都是从体外开始有名，所以很多人就硬生生的往体内套，结果就是吃力不讨好，比如楼主提到的A549，还有MCF-7，都是很有名气的细胞株，但是在体内却不是一个好的试验对象，成瘤率低，生长慢，均一度差。

现在国内的很多研发单位，特别是一些公司的领导们，缺乏这方面的认识，动不动就把这些著名的细胞株挂在嘴边，硬压着一线的研究人员去花功夫做这些细胞株，作的不好，就怀疑大家的水平如何如何的，奶奶的，对此非常生气！3. 药物的敏感性，这一点常常被大家忽视，大部分的裸鼠肿瘤模型都是为抗肿瘤药物的筛选以及研究服务的，但是常常大家只考虑了这个细胞株是不是好做，但是没有考虑到细胞株本身对于药物的敏感性，比如Lovo细胞，国际公认度也还可以，体内生长情况也很棒，但是对于药物的敏感性不佳，大部分的常规化疗药物到了它这里，抑瘤率都会下降，显而易见，对于抗肿瘤药物的筛选来说，它不是一个好的选择。

另外说一点，体内与体外的关系，现在做体内的人，常常被体外的人牵着鼻子走，体外做出来什么什么细胞株敏感，体内的人就得吭哧吭哧的去做这个，但是却死活做不好，其实，现在我和一些老前辈们的观点是，体内和体外应该协调好细胞株的选择问题，体外的人手上有大把的细胞株可以选择，如果，体内的人不去和他们协调，那么将永远被牵着鼻子走，受累还不讨好，应该大家坐下来，一起选择20~30种细胞株作为常规的筛选细胞株，这就足够了，细胞株选择的时候考虑好方向（胃癌、肝癌、肺癌什么的）、靶点（EGF、vEGF等等），不能漫无边际的抓着哪个体内就的做哪个，谁也没有这个本事啊。

裸鼠前列腺原位肿瘤模型的建立

裸鼠前列腺原位肿瘤模型的建立裸鼠前列腺原位肿瘤模型是研究前列腺癌的一种重要方法，可以帮助研究前列腺癌的发生机制、治疗方法以及预后。

在这篇文档中，我们将介绍创建裸鼠前列腺原位肿瘤模型的步骤和需要注意的事项。

一、实验动物选择当前，最常用的裸鼠前列腺原位肿瘤模型是使用BALB/c裸鼠进行实验。

这种鼠标品系的免疫系统极度压制，不会产生对异位移植物的免疫反应，从而提供了可行的肿瘤原位移植模型。

二、细胞株选择在建立裸鼠前列腺原位肿瘤模型的时候，选择合适的细胞株非常重要。

选择常用的前列腺癌PC-3和LNCaP细胞，或者使用病人前列腺癌细胞系，也可以根据需要转移所选原位移植物的特定表型。

三、移植前肿瘤细胞的处理肿瘤细胞的本质是异种细胞体，从人体获取到的肿瘤组织处理一般包括酶处理过程和细胞悬液制备过程。

酶液（例如胰酶）可以消化组织基质和纤维素，使细胞更容易生长。

酶液需要在恰当的温度和pH值下进行消化，并获得最高的细胞产量。

消化完毕后，过滤产生的细胞系悬液，以获得细胞。

四、移植前的裸鼠准备在移植前，要为裸鼠准备好阴茎垫和保持体温的设备。

可以使用小激光剪切器轻轻地切割皮肤做一个小孔，将悬液注入到前列腺内。

五、细胞移植移植前，应将细胞重新悬浮在适合的细胞培养基中，调整至合适的细胞浓度。

将细胞直接注入到头孢钠和甲苯磺丁脲等抗生素加载的BALB/c裸鼠前列腺中。

六、术后护理在移植完成后，将裸鼠安置在恰当的环境中，并监测它们的舒适程度。

为了预防感染和控制感染，需要注射抗生素和止痛药，以及监测患处的融合情况。

七、标本收集和肿瘤评估从移植的裸鼠体内收集原位移植物的标本，并用组织学方法鉴定癌细胞的形态学，确定癌细胞类型。

在肿瘤评估过程中，还可以进行微管道侵袭实验、体内药物毒理学试验等进一步的研究。

总之，裸鼠前列腺原位肿瘤模型的建立对研究前列腺癌的发生机制、治疗方法和预后等方面有重要意义。

从以上步骤和注意事项可以看出，建立该模型的过程繁琐，需要确保实验严谨，才能有效提高研究精度和推进前列腺癌的临床治疗。

裸鼠荷瘤方法及注意事项

关于肿瘤细胞株的选择，确实是一个很麻烦的问题，各类文献中提到过的细胞株有很多，但是一般而言，我觉得，对于我们做裸鼠肿瘤模型，细胞株的选择应该考虑一下几个方面：1. 国际公认度，虽然SFDA的指导原则上表示只要是建株细胞株均可以，但是一般来说，还是应该尽量考虑国际上比较公认的细胞株。

2. 体内生长情况，很多细胞株，在文献中有很高的出镜率，但是实际上，基本都是从体外开始有名，所以很多人就硬生生的往体内套，结果就是吃力不讨好，比如楼主提到的A549，还有MCF-7，都是很有名气的细胞株，但是在体内却不是一个好的试验对象，成瘤率低，生长慢，均一度差。

现在国内的很多研发单位，特别是一些公司的领导们，缺乏这方面的认识，动不动就把这些著名的细胞株挂在嘴边，硬压着一线的研究人员去花功夫做这些细胞株，作的不好，就怀疑大家的水平如何如何的，奶奶的，对此非常生气！3. 药物的敏感性，这一点常常被大家忽视，大部分的裸鼠肿瘤模型都是为抗肿瘤药物的筛选以及研究服务的，但是常常大家只考虑了这个细胞株是不是好做，但是没有考虑到细胞株本身对于药物的敏感性，比如Lovo细胞，国际公认度也还可以，体内生长情况也很棒，但是对于药物的敏感性不佳，大部分的常规化疗药物到了它这里，抑瘤率都会下降，显而易见，对于抗肿瘤药物的筛选来说，它不是一个好的选择。

另外说一点，体内与体外的关系，现在做体内的人，常常被体外的人牵着鼻子走，体外做出来什么什么细胞株敏感，体内的人就得吭哧吭哧的去做这个，但是却死活做不好，其实，现在我和一些老前辈们的观点是，体内和体外应该协调好细胞株的选择问题，体外的人手上有大把的细胞株可以选择，如果，体内的人不去和他们协调，那么将永远被牵着鼻子走，受累还不讨好，应该大家坐下来，一起选择20~30种细胞株作为常规的筛选细胞株，这就足够了，细胞株选择的时候考虑好方向（胃癌、肝癌、肺癌什么的）、靶点（EGF、vEGF等等），不能漫无边际的抓着哪个体内就的做哪个，谁也没有这个本事啊。

裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立

裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立是一种重要的疾病模型，它可以为肝癌治疗研究提供有力的实验支持。

本文将对裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立方法、优点、应用以及未来发展进行详细的探讨。

一、裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立方法1.1 细胞培养：选择合适的肝癌细胞系进行体外培养，确保细胞状态正常、细胞活性强。

1.2 细胞检测：检测细胞的纯度、细胞数目、细胞的拓扑形态、基因表达差异等，以保证肝癌细胞的最佳种植状况。

1.3 裸鼠荷瘤：通过注射细胞的方式给裸鼠诱发肝癌，注射前需要消毒裸鼠的皮肤及手术器械，减少致病菌的感染；肝癌细胞的注射部位可以是裸鼠体表组织、皮下或者肌肉内部。

1.4 实验监测：在瘤细胞注入裸鼠后，要检测裸鼠的体温、体重、食欲等生理指标，观察种植瘤的生长状态；待瘤体体积足够大时进行实验，通过静脉注入药物、瘤组织取材等方式进行肝癌治疗药物研究。

二、裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的优点2.1 模型来源稳定：使用人肝癌细胞系进行裸鼠皮下肝癌模型建立，不同于动物体内自然发生的肝癌，因此可以控制稳定来源，有利于肝癌治疗药物的研究。

2.2 生理指标齐全：裸鼠作为模型动物，具有生物学模拟度高、生活习性简单、繁殖周期短等特点，且实验性调节饲养和环境等因素更为容易，因此比较适合进行肝癌相关实验研究。

2.3 操作方便：裸鼠皮下肝癌模型建立起来比较简单，易于进行肝癌治疗药物研究，而且与其他模型动物相比，裸鼠实验后的数据质量也能更好地保证。

三、裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型在肝癌治疗研究中的应用3.1 新药筛选：裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型可以用于新药筛选，通过对不同的治疗手段处理，以期找到最有效的肝癌治疗方式。

3.2 治疗机制研究：通过裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立，开展治疗机制的研究，从生物学角度解析肝癌的治疗机制，为临床诊断和治疗提供科学依据。

3.3 评估药物的毒副作用：裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型在肝癌药物毒副作用评估中起着重要作用，有助于肝癌药物研发单位减少不必要的药物开发风险，提高药物研发效率。

裸鼠成瘤实验-超详细资料

裸鼠成瘤实验-超详细资料裸鼠成瘤实验总结-超详细资料接种量接种部位接种部位:腋窝中部外侧皮下为好。

皮下肿瘤模型中，想要成瘤率高就接种在腋下。

接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针，要保证与接种点的距离小于针头的长度，向头部方穿行，绝对不能刺破皮肤或者刺破肌肉层，当针头到达接种位点时注射，退出针头，这样操作的目的并不完全是避免漏液，其实熟练后，不需要皮下穿行也不会漏液，主要是避免污染，进针点还有少量污染的可能性的，针头在皮下穿行一段后，接种点离进针点较远，最大限度减少污染的可能。

如果是用于正式实验，那么一只老鼠就只能接种一个位点，不可以接种多个位点用于保证可用的模型数。

因为在有些情况下，一个老鼠身上有多于一个肿瘤的情况下，会有相互影响的可能，无论这几个肿瘤相距有多远。

要是想多打几个部位做做预试验，倒也不是不可以，但是我觉得，基本上没有什么必要。

皮肤不用绷得太紧，平展就可以了，另外接种的时分进针点很靠下，针头在皮下走一段再注射，速度不要太快。

注射前针头稍微动一动，能动就申明在皮下，不然大概在皮内或者肌肉内。

普通来说都是有鼓包的但是要是你接种位置太深入腋窝，你是看不到鼓包的。

主要靠针头稍微动一动来判断。

是否应用免疫抑制剂裸鼠皮下种瘤后，可以通过应用免疫抑制剂，比如环磷酰胺（2mg每只，打两天）来加速瘤体的生长，当然我知道裸鼠是T免疫缺陷动物，但是人家说的CTX可以进一步抑制裸鼠的体液免疫和NK细胞杀伤的保护作用，可以加快瘤子的生长，这样造模的周期很短，也可以进行人为的控制，不知道这个观点是不是有道理，实践中是不是真有人这么做呢？楼上说的文献中也有报道，而且还有预先用放射照射抑制动物免疫功能再接种的方法，但是一般常规应用中大多数时候不推荐这么做。

另外还有一个问题应该被考虑到，大家现在都在琢磨着怎么让肿瘤出瘤的更快，造模周期更短，但是如果人为的把肿瘤生长加速，其实对实验并不好。

因为造模周期短，很可能生长速度也会被加快，肿瘤可能很快就溃烂了，这样就不得不被迫中止实验，而用药却没有用到足够的时间，药效还没有发挥出来就结束了，这样是很不利的。

美国实验室裸鼠移植瘤造模带教体会

美国实验室裸鼠移植瘤造模带教体会许红霞【期刊名称】《局解手术学杂志》【年(卷),期】2011(020)003【总页数】2页(P341-342)【关键词】裸鼠;移植瘤;造模;带教【作者】许红霞【作者单位】第三军医大学营养与食品卫生学教研室,重庆,400038【正文语种】中文【中图分类】R-332;G420裸鼠移植瘤模型是抗癌药物筛选的主要体内模型。

2008年至2010年，笔者在美国伯明翰阿拉巴马大学(university of alabama at birmingham，UAB)医学院药理毒理系做博士后研究，主要研究方向为抗肿瘤药物的筛选并数次为新进实验室的博士生及博士后进行裸鼠移植瘤造模带教。

本文以胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型的造模带教为例，谈几点体会。

1 胰腺癌裸鼠移植瘤造模方法培养人胰腺癌细胞PANC-1，消化后以无血清培养基洗涤并重悬，以1︰1比例将细胞悬液与Matrigel Matrix(美国BD公司)混合［1］，使终浓度为5×106/0.2 mL，混匀后注射于5周龄裸小鼠(体重约20 g)右侧腹股沟(每只注射0.2 mL)［2］。

每日观察一般情况及长瘤情况，隔日测量体重及肿瘤大小。

4～5周后肿瘤长至约1 000 mg(肿瘤质量计算公式:肿瘤质量(mg)= 0.5×肿瘤长度(cm)×肿瘤宽度(cm)2×1 000)，于超净台异氟醚(isoflurane)吸入麻醉并颈椎脱臼法处死小鼠，无菌取出瘤组织，置于PBS中迅速去除包膜及坏死组织，将瘤组织切成约2 mm2均匀大小，将瘤组织块置于无菌套管针前端，裸鼠经异氟醚吸入麻醉后将其颈部右侧皮肤提起，套管针刺破皮肤，将瘤快送入裸鼠左侧背颈部，不需缝合。

裸鼠送回至无菌动物室喂养，每日观察一般状况及长瘤情况，隔日测量体重及肿瘤大小，待肿瘤长至约60～70 mg大小时为造模成功，准备用于抗肿瘤药物筛选的体内试验。

2 带教过程移植瘤模型的带教从培养肿瘤细胞开始，首先教他们计算所需的肿瘤细胞数量。

裸鼠肝癌模型构建实验技术原理

裸鼠肝癌模型构建实验技术原理
裸鼠肝癌模型构建：取对数生长期细胞消化后离心，定量的PBS 缓冲液及培养基将细胞吹打成3个不同细胞浓度组。

将裸小鼠分为6组，每组10只，将以PBS缓冲液混悬的细胞和以完全培养基混悬的细胞分别接种在小鼠左后肢腋下及右后肢腋下，以每个接种部位0.2ml 皮下注射，注射完毕缓缓拔出注射器，酒精棉球按压穿刺部位10s左右以防细胞混悬液流出。

裸鼠肝癌模型注意：接种前进行空白混悬剂皮下注射，观察空白混悬剂PBS缓冲液及培养基对裸鼠的影响。

每隔一日用游标卡尺测量肿瘤的长径、短径，计算肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线。

两周后，颈椎脱臼处死荷瘤小鼠，剪开肿瘤生长处的皮肤，取出肿瘤称重。

方法比较：裸鼠肝癌模型的建立中，接种的条件尤为重要。

为了给癌细胞稳定的生长环境和充足的生长空间，一般选择在动物的皮下接种细胞或肿瘤组织。

直接接种肿瘤组织的办法具有肿瘤组织生长快速的、大小均匀的特点，但操作复杂，需要对动物进行麻醉、切口、缝合等。

对于裸鼠来说，这无一不增加了感染的风险，影响术后生存质量。

腹水癌细胞皮下注射的方法也需要先对细胞进行在腹水中的增殖、分离和稳定传代，增加了工作量。

相比较这两种方法，癌细胞直接接种的方法简单、快速、有效、风险低。

人乳腺癌裸鼠移植模型建立体会

Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｈｕｍａｎｂｒｅａｓｔｃａｒｃｉｎｏｍａｍｏｄｅｌｉｎｎｕｄｅｍｉｃｅ
ＺＨＯＵＷｅｎｂｉｎ。，ＺＨＯＵＤｏｎｇｘｉａｎ，ＣＨＥＮＹｉｘｉｎ，ＰＥＮＧＳｈｕｓｏｎｇ，ＭＡＮＧＪｉａｎｂｏ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｒｅａｓｔａｎｄＴｈｙｒｏｉｄＳｕｒｇｅｒｙ，ＳｈｅｎｚｈｅｎＰｅｏｐｌｅ ’ ｓＨｏｓｐｉｔａｌ＆ＳｅｃｏｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｃｉａｌＣｏｌｅｌｇｅｏｆ眦ｎＵｎｉｖｅｍｉｔｙ，ＳｈｅｎｚｈｅｎＪ８Ｄ２０，Ｃｈｉｎａ；ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ］ｎｓｔｉｔｕ —
山西医科大学学报，２０１５年８月，第４６卷第８期
・８ｌ９・
人乳腺癌裸鼠移植模型建立体会
周文斌，周冬仙，陈亦欣，彭树松。，邙建波¨ （深圳市人民医院＆暨南大学第二临床医学院乳腺甲状腺外科，深
圳５１８０２０；深圳市人民医院＆暨南大学第二临床医学院肿瘤研究所； ’ 深圳市人民医院＆暨南大学第二临床医学院病理
结论本研究成功将乳腺癌ＭＣＦ－７（ＥＲ＋）细胞株植入裸鼠右下腹壁，肿瘤生长良好、肿瘤表面皮肤完整。乳腺癌的病理特征得以保留。这可能是开展乳腺癌研究的一个有效的模型。关键词：乳腺肿瘤；动物模型；裸鼠

人胃癌裸鼠移植瘤模型的建立

人胃腺癌裸鼠移植瘤模型的建立动物：BALB／c(nu／nu)裸小鼠，鼠龄6～1 0周，体重l5～25 g，雄性。

饲养在无特殊致病菌、空气洁净的净化工作台内，室内恒温、恒湿，定期消毒。

笼具、垫料、饲料和饮水均经高压蒸气灭菌，并在无菌条件下适时更换。

方法：收集培养的BGC-823细胞(癌细胞在含10% 小牛血清的RPMI-1640 培养液中，于CO2恒温孵育箱中培养，常规传代。

)在细胞培养至对数期时，用RPMI-1640制成约2×l07个／ml细胞悬液，取0．2ml(4x106个BGC-823细胞/只)注入裸小鼠颈部皮下或者背部皮下，每组接种3只鼠，当皮下移植瘤长至直径为l cm3左右时取出移肿瘤（大约在10d左右），及时放入含无血清培养液的平皿中，A再在超净工作台内修剪肿瘤组织，去除脂肪，结缔组织及坏死肿瘤组织，并用无血清培养液洗涤2次，将瘤组织切成约l mm×l mm×2mm的小块，加入适量的pbs备用。

以戊巴比妥经腹腔注射麻醉裸鼠，常规消毒背部肩胛区，（切开局部皮肤）用无菌套管针抽吸准备好的2mm3大小瘤块，将其接种于裸鼠背部肩胛区皮下，建立祼鼠皮下移植的人体胃癌祼鼠模型。

作鼠间传代(2只／代)。

移植瘤生长特性：胃癌细胞接种后的第三天即可见到裸鼠接种处皮下出现结节，直径约1．5 mm，质地较硬，在以后的几天中，上述皮下结节没有继续增大，此阶段为肿瘤细胞生长的潜伏期(7-10d左右)。

随后，裸鼠皮下的肿瘤结节开始缓慢生长．体积逐渐增大。

大概(25-30d)传代后荷瘤鼠皮下移植瘤的生长情况与初代移植瘤相近。

A具体操作：1一般要求需在无菌条件下进行。

可在接种罩、超净工作台或无菌室内操作。

动物处死后，用新吉尔灭(1∶1000)或碘酊、酒精消毒，对每个实体瘤应分别用灭菌的外科器械切取，对腹水瘤则应分别用灭菌的空针抽吸。

瘤块污染常是接种失败的主要原因，应予注意在高温季节操作时，应注意降温，可在盛有瘤源的器皿周围放置冰块。

裸鼠皮下成瘤实验操作注意事项

裸鼠皮下成瘤实验操作注意事项1、裸鼠成瘤细胞系的选择与状态并非所有的肿瘤细胞都可以成瘤。

在正式做实验之前，建议去查查ATCC上面的测试数据。

如果不得不用不能独立成瘤或者难以成瘤的细胞系，请看第3点选NOD SCID小鼠，以及第4点的Matrigel法。

细胞的状态是成瘤实验的关键，所以细胞生长状态一定要好，取处于对数生长期的细胞，细胞达80-90%左右密度为宜。

收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。

2、成瘤细胞的处理细胞消化后应尽快接种到裸鼠皮下，一般尽量在半小时内完成，途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢。

细胞接种量1*107/200ul/只，或者浓缩为1*107/100ul/只，根据肿瘤细胞成瘤效果调整细胞量，最高不要超过1*107。

接种肿瘤实验一般采用4--6周龄的裸鼠，裸鼠太老会加大成瘤难度，放大个体差异。

3、裸鼠成瘤接种部位选择的裸鼠一般在5-8周龄，体重18-20g左右，种植部位选择血供丰富区域，如腋窝中后部、腹股沟中上部，背部、腋下、颈部均可以，当然腋下和颈部效果最好。

4、裸鼠皮下接种操作接种前用枪将细胞悬液充分的吹散，防止细胞成团而降低细胞成活率；接种时，针头在皮下进针深一点，约1cm深，减少注射后细胞悬液从针眼溢出；左手拇指和食指捏紧裸鼠颈背部皮肤，小拇指夹住裸鼠尾巴；接种后一周左右可以见到皮下开始出现肿块。

5、皮下肿瘤大小根据肿瘤细胞的特性和接种细胞的量，一般皮下成瘤的周期为1-2个月。

肿瘤不宜生长过大，一般不要超过1000mm3。

肿瘤大小测量一般为1周两次，游标卡尺测量肿瘤最长和最短部位。

V=1/2ab2 (a 为长轴，b为短轴)。

6、皮下肿瘤保存皮下瘤取下后一部分冻液氮用作以后提蛋白和RNA，一部分福尔马林固定用做免疫组化、免疫荧光等。

裸鼠的肿瘤移植模型研究

裸鼠的肿瘤移植模型研究肿瘤是一种常见的疾病，也是医学研究的一个重要领域。

随着科学技术的不断发展，人们对肿瘤的认识也在不断深入。

其中，裸鼠的肿瘤移植模型研究是一种常用的实验手段。

一、裸鼠是什么裸鼠是一种没有毛发的实验小动物，通常被用来进行肿瘤移植研究。

这种小动物一般来自人工培育的遗传变异株，因为它没有毛发，所以被称为裸鼠。

这种小动物体型小、活力强，非常适合作为实验对象。

二、肿瘤移植模型的意义肿瘤移植模型是一种通过将人类肿瘤细胞移植到裸鼠体内来模拟肿瘤生长和发展的实验方法。

这种实验方法能够为生物医学研究人员提供宝贵的研究材料，用于发现和开发新的抗肿瘤药物和治疗方法。

同时，肿瘤移植模型还能够为临床医学研究提供重要的参考，帮助医生们更好地了解肿瘤生长和发展的规律，找到控制肿瘤的有效方法。

三、裸鼠肿瘤移植模型的基本步骤1. 建立肿瘤细胞株首先，需要建立一种稳定的肿瘤细胞株。

一般来说，肿瘤细胞株可以从患者的体内或者文献报道中获取，然后通过培养和筛选，筛选出能够稳定生长的肿瘤细胞株。

2. 准备裸鼠裸鼠一般都需要进行体表消毒和饲养管理等操作。

在进行实验前，需要将裸鼠的体表消毒，避免外来细菌对实验结果的影响。

此外，裸鼠的饲养、环境、温度、湿度等也需要进行精心管理，确保实验的准确性和有效性。

3. 移植肿瘤细胞将准备好的肿瘤细胞接种到裸鼠的体内，一般是通过皮下注射或者腹腔注射的方式进行。

移植后，需要观察肿瘤的生长和发展情况，并及时进行处理、剖解和测量等操作。

四、裸鼠肿瘤移植模型的优缺点优点：1. 易于建立：裸鼠的肤色和体毛特征明显，容易观察，建立肿瘤移植模型相对容易。

2. 可控性强：通过各种手段可以有效控制实验的变量，确保实验结果的可靠性和准确性。

3. 结论可靠：通过对裸鼠肿瘤移植模型的研究，可以得到比较可靠的实验结论，从而为后续的研究提供重要参考。

缺点：1. 模拟程度低：由于裸鼠与人体存在较大的生物学差异，因此在某些肿瘤特征的模拟程度上会存在一定的局限性。

人乳腺癌的裸鼠移植模型的制作讨论(一)

人乳腺癌的裸鼠移植模型的制作讨论（一）引言概述：人乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，研究人乳腺癌的病理机制和新型治疗方法对于提高乳腺癌患者的治疗效果具有重要意义。

裸鼠移植模型作为一种重要的实验模型，在研究人乳腺癌中起着关键的作用。

本文将讨论人乳腺癌裸鼠移植模型的制作方法和相关注意事项。

正文：1. 选择裸鼠种类：- 了解裸鼠种类的特点和应用范围- 考虑使用的乳腺癌细胞系和裸鼠种类的适配性- 考虑裸鼠的耐受性和维护成本等因素2. 人乳腺癌细胞系的选取：- 选择与研究需求匹配的人乳腺癌细胞系- 考虑细胞系的来源、传代数和特殊基因改造等因素- 确保细胞系的纯净性和生长状态3. 裸鼠移植模型的建立：- 麻醉裸鼠并准备手术场所和器械- 选择合适的手术方法：正常组织移植、原位肿瘤移植等- 控制操作时间和温度，在手术中保证裸鼠的生命安全4. 裸鼠移植后的观察和评价：- 监测裸鼠移植部位的肿瘤生长情况- 测定肿瘤体积和质量等指标- 运用影像学和组织学等方法评估移植肿瘤的特征和转移能力5. 实验数据的分析与解释：- 对裸鼠移植模型进行数据统计和分析- 比较不同实验组间的差异和相关性- 结合其他实验结果和临床数据解释实验结果的意义总结：人乳腺癌裸鼠移植模型的制作是研究乳腺癌病理机制和治疗方法的重要实验手段。

通过选择合适的裸鼠种类和人乳腺癌细胞系，进行细致的手术操作和观察评价，以及对实验数据的严谨分析，可以获得可靠的实验结果，并进一步深入了解乳腺癌的发生发展机制，为治疗提供理论依据。

但在使用裸鼠移植模型进行实验时，也需遵守伦理和动物保护的原则，确保实验的科学性和可行性。

裸鼠成瘤的一些个人经验

之袁州冬雪创作动物实验杂七杂八的做了很多，分享一下今朝做的裸鼠成瘤的一些经历，希望和大家相互交流一下，旨在提高一下自己关于这个方面的技能.自己完全是自己根据一些文献，自己试探，摸着石头过河做的，没得正规的导师知指导，苦~ 自己接洽方：(之前原本留个小企鹅的，成果暗示文库给我一直都是提交中，苦~望大家在评论中交流哈~)，希望大家有好的意见和建议，多多交流一下啊！下面开端正题：1、实验环境：也就是裸鼠饲养环境，由于条件限制，所饲养的裸鼠均为普通级，当然购买的必定是SPF级哈.最开端饲养的时候，很担心，因为裸鼠免疫缺陷，会不会动不动就挂了呢！在丁香园不竭活跃了一翻.最后根据实际情况总结了一翻今朝裸鼠饲养的条件：首先，裸鼠必须和大小鼠分开，哪怕只是单独的隔一个屏风，大小鼠很容易传染鼠肝炎给裸鼠，裸鼠一旦得了这个病，死是必定的了（当然前提是不会医治哈，若能医疗就另当别论了）.这个病的症状就是：裸鼠皮肤很红，弓背，越来越瘦瘦的成了皮包骨头了.当你发现这个情况出现后，请及时处理掉，否则的话所有的裸鼠都会渐渐得这个病（亲身履历，惨不忍睹啊~）其次，裸鼠饲养的垫料，当然是要无菌垫料啦，这个应该不难吧，至少一般的高校动物中心都可以购买的啦~如果确实没的这个，可使用卫生纸作为垫料，前提需要很勤的更换，普通的无菌垫料（松木花什么的）一般来讲可以3-5天换一次，用纸的话就得几乎1-2天换了，太费事啦~再者，饲料和水源的问题，饲料采取无菌饲料这个全国各地都有买的.水源很重要，至少等级为纯清水（就是办公司喝的那种），我现在用的是纯水仪退化的水，嘻嘻~.关于水外面是否加抗生素的问题，自己暗示最开端加了一下什么青霉素链霉素等等，该死的还是死，后来不再加了，一样没有问题，主要是饲养环境好就行.晒一晒我自己的山寨版本的饲养条件：普通储物箱（就是超市外面常常卖的），一个独立的房间，纯水，无菌垫料和饲料.OK 啦~，到今朝位置，饲养的裸鼠没有再死掉啦~别的关于饲养时间的问题：网上传播的大部分是饲养4个月就不成了~，嗯嗯，自己饲养的一般来讲也就3-4个月，但是基本上没有出现问题现在.别的，如果发现裸鼠身上发白，很分明的白灰的话，可以用酒精棉球全身擦拭，一般来讲可以节制这个情况.别的：代养在动物中心的请无视这个！！！！2、裸鼠皮下成瘤：首先你要确定你的细胞可否成瘤，或者说成瘤效果好欠好！这个一定要多查查文献，自己就有不堪回首的履历，使用的细胞基本上没人说过可以成瘤，成瘤了数次均已失败告终，即时有白色的节点，也无法成型，1、2周就消失了.其次，一般来讲细胞接种的量1*107/0.2ml/只，或者稀释为1*107/0.1ml/只.有的细胞很容易成瘤的话就不需要思索这么多了，根据个人经历，HEPG-2类，A375类等一些肿瘤类细胞很好成瘤，基本上是100%，我用的是T25培养瓶养满了（80%）可以打2针都能完全成瘤，妥妥的！当然，我这个只是要求成瘤了便可以，不必管其他的哈！再者接种的部位，根据个人经历，背部、腋下、颈部都可以，当然腋下和颈部效果最好的啦！接种方法（摘抄）：皮下肿瘤模子中，想要成瘤率高就接种在腋下.接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针，要包管与接种点的间隔小于针头的长度，向头部方穿行，相对不克不及刺破皮肤或者刺破肌肉层，当针头到达接种位点时注射，退出针头，这样操纵的目标其实不完全是防止漏液，其实熟练后，不需要皮下穿行也不会漏液，主要是防止污染，进针点还有少量污染的能够性的，针头在皮下穿行一段后，接种点离进针点较远，最大限度减少污染的能够.这个方法我也是琢磨了很久的~3、肿瘤后续的一些情况（摘抄）：3.1鼠皮下种瘤后，可以通过应用免疫抑制剂，比方环磷酰胺（2mg每只，打两天）来加速瘤体的生长，当然我知道裸鼠是T免疫缺陷动物，但是人家说的CTX可以进一步抑制裸鼠的体液免疫和NK细胞杀伤的呵护作用，可以加快瘤子的生长，这样造模的周期很短，也可以停止人为的节制！！！（这个是否有效，操纵起来如何，希望做过的朋友交流一下，自己也在测验测验这个操纵，希望多多交流.）3.2肿瘤倍增时间：肿瘤动物实验模子肿瘤的倍增时间（doublingtime），应该是在瘤体积100－800之间计算，但是一组动物有10只，每周丈量2次瘤体积，如果我想计算从200倍增到400的时间的话，10只动物不会在我丈量体积的时候正好到200或400，那末，在计算的时候，详细应该怎么做？Geddes 等[29]将结节倍增时间的计算公式暗示为：DT =（ln 2△ t）/ln（V2/V1），V1、V2分别是前后两次丈量的体积，△t是两次丈量的时间间隔最后，裸鼠成瘤概括来讲的话就是，不要担心裸鼠承受不了，大胆的的接种，要勤观察记录肿瘤生长情况以及裸鼠情况，成瘤很快，后续的记录和丈量很慢~以上就是自己的一些小小的经历，希望大家相互交流学习，多多指导一下！感谢！。