裸鼠肿瘤造模的一点经验分享

1、取5-6周龄裸鼠饲养(此时大小约16-23g。)。虽然此时的裸鼠个头较小，但是，标准的做法与权威的文章都是如此。考虑可能是此时裸鼠个体差异小，对实验数据影响小吧。

2、制备肿瘤细胞悬液，按5×10*6-2×10*7细胞/只(稀释成0.2ml)接种于裸鼠腹腔，形成腹腔种植瘤。(小鼠腹水出现情况一般如下：5～6 d出现腹水，6～8d抽取传代最好，10～12 d出现血性腹水，14～15 d小鼠开始死亡。)

3、取腹水瘤，细胞数5×10*6-2×10*7，稀释成0.2ml接种于裸鼠前腋皮下。

4、加药。根据使用药物的不同，方法各异。时间上可以是24小时，或第1、3、5天等等。给药方式可以是腹腔或鼠尾静脉。注意，由于鼠尾静脉非常细，推药一定要非常慢。药物的量一般根据裸鼠的体重进行调节。当然，最重要的是药物的特性。

4、20-30天处死裸鼠，并进行相关数据的检测(肿瘤大小、重量等。)。注意时间点，可以经常观察，在最能体现你结果的时候将裸鼠处死。

备注：

1、若对照组中20%小鼠的肿瘤小于400mg或平均重量小于1g，均为肿瘤生长不良，实验数据应作废。因为裸鼠比较小，肿瘤生长相对缓慢，因此，时间可以调整以达到要求。

2、如对照组小白鼠肿瘤平均重量小于1g或20%鼠的瘤重小于400mg，大白鼠肿瘤平均重量小于2g，表示肿瘤生长不良。

3、在试验期间给受试物组鼠死亡超过20%，或平均体重(去瘤后)下降(自身对照)超过15%者，表示受试物的毒性反应。应当减少剂量重新试验。但是，肿瘤时间长可导致鼠恶病质，因此，肿瘤生长时间也不能太长，肿瘤不能太大。否则无法判断时恶病质还是药物导致的毒性反应。

4、也可以不使用腹水瘤，直接用培养的细胞接种。但是，细胞数一定要根据自己的需要。一般来说，10*6即可使绝大部分裸鼠成瘤，但要想成瘤率高些，最好达到10*7细胞。接种的时候一定要将细胞摇匀，否则肿瘤大小不一。细胞从制备单细胞悬液到接种时间要尽量短，否则细胞活力受很大影响。但是细胞数是一个非常个体化的东西。如果你要观察血管生成等，最好细胞数低一些，否则很快就生成血管，让你的实验无法进行。此时甚至可以将细胞数降低到10*4。10*4肿瘤细胞即可使部分裸鼠成瘤。当然，成瘤与细胞株的特性也有相当大的关系。不同的细胞可以有一定的差别。

5、细胞消化成单细胞悬液后，可置于冰上保存，这样细胞损伤小。最好用PBS稀释。因为培养液、血清等可能会导致动物的炎症反应。

6、接种部位一般不前腋下，这里血管丰富，易成活。接种于皮下。太浅则因血管少而不易成瘤，太深会在肿瘤长大后与周围的肌肉、结缔组织等相粘连，让你不能很好地分清肿瘤与侵犯的组织；特别是不易观察肿瘤的生长情况。

7、肿瘤生长到一定大小后，一般是大小0.8-1cm后，中心常出现坏死区。在分离时要小心，不要用皮肤镊，夹钳肿瘤要小心，否则常会导致部分肿瘤破溃，使肿瘤大小及重要的的测量结果不准确。