裸鼠前列腺原位肿瘤模型的建立(一)
裸鼠皮下移植瘤实验造模步骤
裸鼠皮下移植瘤实验造模步骤顾名思义，这种模型的建立是将肿瘤细胞或肿瘤组织直接种植在小鼠的皮下。
种植的点也有讲究，一般选择血运淋巴回流丰富的腹股沟和腋窝。
可根据实验设计选择移植点，统一移植点的位置，除了遵守实验统一的条件外，待肿瘤成熟后收集肿瘤时留下照片证据也显得美观。
裸鼠（Balb/c 鼠，无毛发， T 淋巴细胞缺陷）是比较常见和常用的实验用鼠，尤其是在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。
裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。
当然，这种肿瘤模型也有缺陷，即不能很准确的模拟正常人体肿瘤发生发展的过程。
☞肿瘤细胞移植时的简要步骤首先准备好要移植的肿瘤细胞（细胞量根据不同肿瘤略有不同，我们所用的前列腺癌细胞系每个移植点一般选择1x106 左右；肿瘤细胞可与基质胶 1:1 混匀后用 1 ml 注射器吸取，基质胶能够给肿瘤细胞提供营养环境，有助于肿瘤细胞生长）。
戴无菌手套后，将小鼠用左手大拇指和食指捏住颈部皮肤，然后将鼠尾用左手无名指和小指固定于左手大鱼际。
将腋窝或腹股沟用75% 酒精消毒3 次。
右手持吸有肿瘤细胞和基质胶混合液的注射器，在腹股沟或腋窝的位置，45 度斜角进针，注意不要突破腹膜，将针头保持于皮下位置。
然后近水平位置将针头几乎完全插入皮下，将混有基质胶的肿瘤细胞注射入皮下（肿瘤细胞量约1x106），快速退针，左手食指轻压针孔约1 min 后将小鼠放回饲养笼中，注意将小鼠侧放于垫料上，放置其不适呕吐时呕吐物误入呼吸道引起窒息。
2～3 h 后观察小鼠是否苏醒。
如果是利用肿瘤组织（人体肿瘤标本或小鼠移植瘤传代）建立裸鼠皮下移植瘤模型，则需要首先将肿瘤组织用无菌PBS（或1640 培养基）洗涤3 次，然后在无菌平皿上切成或用无菌剪刀剪成<1 mm3体积的小块（种植前可裹基质胶）备用。
将小鼠用水合氯醛麻醉后平卧于解剖板上，四肢用胶带固定，将腋窝或腹股沟用 75% 酒精消毒 3 次，然后用眼科剪剪开约 0.5 cm 小口，小镊子将皮下筋膜与皮肤分开，然后将肿瘤组织放入贴近腹股沟或腋窝的深部，每个位置放置 2～3 块肿瘤组织，注意不同组间统一放置肿瘤组织块数以保持一致。
裸鼠肿瘤接种技术实验操作方法
裸鼠肿瘤接种技术实验操作方法裸鼠肿瘤接种一般有细胞接种和瘤块接种两种方式，接种取材有手术活检标本、癌性胸腹水标本和体外培养的细胞系三种。
l楼主看来是做体外培养的细胞的裸鼠接种，一般用带6号针头的注射器取适量细胞悬液注射于裸鼠的皮下，部位看试验要求而定，一般在腋下或背部皮下，每个接种部位注射0.1-0.2ml。
就是将培养的细胞收集起来调整到适宜浓度重悬于不含血清的培养液或PBS中，放于冰盒中携至动物房，直接注射即可。
是牵涉到细胞株的成瘤性问题，可以通过增大细胞悬液浓度的办法来解决。
一般细胞浓度可在1*10的6次方到5*10的7次方之间，浓度再大就可能打不进去了。
具体浓度需要查相关文献。
如果成瘤率太低，可以通过把瘤块在裸鼠身上传2—3代的方法提高成瘤率，即将已成瘤鼠的瘤块取出接种于新鼠身上，成瘤后再取出接种新鼠，如此传几代，肿瘤性质稳定后，再将肿瘤取出，剪碎、研磨、匀浆成为细胞悬液后再接种。
一、可移植性肿瘤的建立方法1．腹水瘤的建立将动物实体瘤细胞注入受体动物腹腔内，或将实体疤移植于受体动物的腹壁内，肿瘤生长后引起腹水，腹水内含高大量瘤细胞可移植传代．即为腹水瘤。
建议腹水瘤初期、腹水往往是血性，多次传代后逐渐变为乳白色的瘤性腹水。
腹水如培养基一样供给瘤细胞生长所需的营养。
若将腹水瘤细胞注入皮下，又可形成实体瘤。
由于瘤细胞游离在腹水内，因此总呈圆形，体积可有大、中、小之分c：r．在一些细胞边缘偶见大小不等的泡状突起，称之为“鼓泡”。
一般在接种后第5天时核分裂相达高峰。
偶见三吸或四极分裂。
二、肿癌移植方法1．常规保种传代方法(1)腹水瘤移植方法：瘤源一般用接种后第5～6天的腹水，抽出的腹水以乳白色为佳。
接种应从下腹部件入受体动物腹腔，一般接种o．1一o．2m1。
可在腹水内加适量的抗凝药物。
(2)实体型肿瘤接种法：1)小块接种法：将瘤取出后，切开，选出生长良好而无变性坏死、呈谈红色、鱼肉状的瘤组织，切成小块(约5*5*5mm)；在受体动物腹部外例剪开—个小口，用无钩眼科镊子夹取小块，送入切口内皮下。
裸鼠成瘤实验原理及详细步骤
裸鼠成瘤实验原理及详细步骤从体外细胞试验到动物水平体内试验，是基因功能研究的重要飞跃。
动物实验，由于其更能模拟人类的生理和病理条件，在科研上，动物实验获得的结果，将有更强的说服力。
肿瘤研究中，最常规的动物实验就是裸鼠成瘤实验。
由于大部分肿瘤研究使用的是人类细胞，所以由于异种排斥的存在，我们需要免疫缺陷型小鼠来作为移植瘤模型的载体，通过对该小鼠的注射肿瘤细胞，使其成瘤，观察流体的生长来判断其生物学变化。
实验室常用的是BALB/c-nu裸小鼠,随着裸小鼠年龄增长或有关因素的影响(如病毒感染),裸鼠体内正常T细胞会增加，故接种肿瘤实验一般采用4--6周龄的裸鼠。
裸鼠成瘤实验技巧1、细胞的状态是成瘤实验的关键，所以细胞生长状态一定要好，取处于对数生长期的细胞，细胞达80-90%左右密度为宜。
收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。
2、胰酶消化细胞后用预冷的PBS洗两遍，目的为去除细胞中残余的血清。
3、用PBS或者无血清培养基吹打细胞沉淀至合适的浓度，一般皮下瘤接种的细胞量为1-5×10^6个细胞/支，接种体积为0.1-0.2ml，因此细胞悬液的浓度为1-5×10^7个细胞/ml，如若有条件的实验室，也可以加基质胶以加速瘤块的生成，基质胶与PBS或无血清的比列为1:1。
4、细胞消化后应尽快接种到裸鼠皮下，一般尽量在半小时内完成（如果接种量大，可以分批接种），途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢以保持细胞的活性。
5、选择的裸鼠一般在4-6周龄，体重16-18g左右，种植部位选择血供丰富区域，如腋窝中后部。
6、接种前用枪将细胞悬液充分的吹散，防止细胞成团而降低细胞成活率，并且导致小鼠接种细胞数量的差异过大。
7、接种时，针头在皮下进针深一点，约1cm深，针头在皮下左右滑动几次，以便细胞接种成团，减少注射后细胞悬液从针眼溢出。
8、如何保定裸鼠?左手拇指和食指捏紧裸鼠颈背部皮肤，小拇指夹住裸鼠尾巴。
9、接种后1-2周左右可以见到皮下开始出现肿块。
人卵巢癌裸鼠卵巢原位移植瘤模型的构建
人卵巢癌裸鼠卵巢原位移植瘤模型的构建詹光熙;彭书敏;美丽古丽·莫合买提;郭晓青【摘要】To build a suitable animal ovarian cancer model in vivo,so as to study the mechanism of its progression.Lentivirus transfection technology was used to build a green fluorescent protein (GFP) marked EOC cells model:SKOV3 (human ovarian serous carcinoma cell lines) and ES-2 (human ovarian clear cell carcinoma cell lines).After isoflurane anesthesia,4-6 week old BALB / C (nu / nu) nude female,back into the abdominal cavity from the median longitudinal incision.Micro multipoint injection method was used to transplant suspension cell model in one side ovary;Night OWL vivo imaging system was used to dynamically observe the growth and metastasis of xenografts in nude mice.Nude mice were dissected at 4-6 weeks after transplantation,the ovarian and metastatic tissues were stained with HE.Both SKOV3 and ES-2 GFP positive cell model was successfully constructed with ovarian orthotopic xenograft.nude mice did not lead to surgical death,the success rate of orthotopic transplanted tumor model in nude mice was 100％.The in vivo imaging system can dynamically monitor the growth of a transplanted tumor in nude mice by detecting the fluorescence intensity and range of GFP.SKOV3 cell model was built-in ovarian canceer and metastatic tissues,HE staining pathological features consistent with human ovarian serous adenocarcinoma;ES-2 cell model was built-in ovarian cancer and metastatic tissues,HE staining pathological features consistent with humanovarian clear cell carcinoma.it can be concluded that inhalation of isoflurane anesthesia,middle of the back vertical incision into the abdominal cavity,micro multipoint injection of GFP-carrying EOC cell model,can be successfully constructed dynamic observation of ovarian orthotopic transplantation tumor in nude mice animal models.This animal model is similar to the biological characteristics of human ovarian cancer and is suitable as an in vivo model to study the development of human ovarian cancer.%为探讨人卵巢癌进展机制的相关研究,构建适宜的体内动物模型.采用慢病毒转染技术,构建稳定过表达绿色荧光报告基因(GFP)的人EOC细胞模型:SKOV3(人卵巢浆液性腺癌细胞株)和ES-2(人卵巢透明细胞癌细胞株);异氟烷吸入麻醉4-6周龄BALB/C(nu/nu)雌性裸鼠,从裸鼠背部正中纵切口进入腹腔,显微多点注射法分别将细胞模型悬液,移植于裸鼠的单侧卵巢,每组6只裸鼠;NightOWL 活体成像系统动态观察裸鼠移植瘤生长和转移情况;移植术后4-6周解剖裸鼠,取卵巢和转移瘤组织行HE染色.结果显示,携带GFP的EOC细胞模型SKOV3和ES-2,均可成功构建裸鼠卵巢原位移植瘤模型,裸鼠未发生手术原因死亡,成功率均100％;活体成像系统通过检测GFP的荧光强度和范围,能够动态监测裸鼠移植瘤生长情况;SKOV3细胞模型构建的卵巢癌和转移瘤组织,HE染色观察病理特征符合人卵巢浆液性腺癌;ES-2细胞模型构建的卵巢癌和转移瘤组织,HE染色观察病理特征符合人卵巢透明细胞癌.由此可知,异氟烷吸人麻醉、从背部正中纵切口进入腹腔、显微多点注射法移植携带GFP的EOC细胞模型,能成功构建可动态监测的裸鼠卵巢原位移植瘤动物模型;该动物模型与人卵巢癌生物学特征类似,适宜作为研究人卵巢癌演变进展的体内模型.【期刊名称】《石河子大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(035)005【总页数】6页(P574-579)【关键词】卵巢癌;裸鼠;卵巢原位移植瘤模型;显微多点注射法【作者】詹光熙;彭书敏;美丽古丽·莫合买提;郭晓青【作者单位】石河子大学医学院,新疆石河子,832003;石河子大学医学院,新疆石河子,832003;石河子大学医学院,新疆石河子,832003;同济大学附属第一妇婴保健院,上海200040【正文语种】中文【中图分类】R711.75卵巢癌是致死率最高的妇科恶性肿瘤 [1]，早期往往缺乏典型临床症状，且没有灵敏的标志物和筛选手段，约超过70%的病人在被确诊时已是疾病晚期，其5年生存率不到30%，极易发生侵袭、转移等生物学特性是导致其预后差、死亡率高的主要因素之一[2]。
裸鼠移植瘤方法建立
裸鼠移植瘤方法建立1.细胞准备：1.1用PBS 清洗细胞两遍，加入胰酶消化，吹打离心，无血清培养基清洗两次，然后用无血清培养基将细胞重悬，进行细胞计数，使得200μL 悬浮液里面含有1×107个细胞。
总共需要细胞: 18（只）*200ul*1.2=4.32ml×107个，将混合好的细胞放于4°C冰盒运至动物房。
2.裸鼠准备：2.1 3周龄小鼠饲养一周后，每只于右侧腋腹壁皮下接种MDA-MB-231和MCF-7细胞1×107/200μ L。
每日观察肿瘤生长情况, 待出瘤后使用游标卡尺测量肿瘤体积, 肿瘤体积=(D×d 2)/2(D表示肿瘤的长径, d表示肿瘤的短径)。
（注射器型号BD一次性使用无菌胰岛素注射器规格：1ml 25G）2.2 当肿瘤体积约为80 mm 3 时(100至150左右)，将裸鼠进行随机分成3 组（肿瘤大小，体重尽量接近），每组3只。
对照组，TO901317组，DADS组。
每天（每天给药？会不会太频繁？可以查阅相关类似成药的半衰期或综合国外文献的数据）将实验组灌胃TO901317，剂量为25mg/kg/d，将粉末状的TO901317 溶解到蓖麻油（或芝麻油以及生理盐水）里，每只裸鼠注射含有TO901317 的蓖麻油200μL；对照组注射等体积的蓖麻油。
连续注射两周。
（12号灌胃针头，每次用后一定要煮沸消毒）（灌胃进针时针头偏右，一般就不会进肺了）腹腔注射DADS，剂量为50mg/kg (含10%小牛血清的D ME M 培养液（最好使用生理盐水）)每次注射200 μL , 隔日注射, 连续7次给药。
2.3每2～3d观察测量1次, 计算肿瘤相对体积(RTV)。
以每组动物移植瘤体积的平均值, 绘制移植瘤生长曲线。
实验结束时在超净工作台上对裸鼠进行拍照，完整剥离肿瘤，用游标卡尺对肿瘤的大小进行测量，用电子天平称量移植瘤重量，用手术剪取出肿瘤，拍照。
裸鼠前列腺原位肿瘤模型的建立
裸鼠前列腺原位肿瘤模型的建立裸鼠前列腺原位肿瘤模型是研究前列腺癌的一种重要方法，可以帮助研究前列腺癌的发生机制、治疗方法以及预后。
在这篇文档中，我们将介绍创建裸鼠前列腺原位肿瘤模型的步骤和需要注意的事项。
一、实验动物选择当前，最常用的裸鼠前列腺原位肿瘤模型是使用BALB/c裸鼠进行实验。
这种鼠标品系的免疫系统极度压制，不会产生对异位移植物的免疫反应，从而提供了可行的肿瘤原位移植模型。
二、细胞株选择在建立裸鼠前列腺原位肿瘤模型的时候，选择合适的细胞株非常重要。
选择常用的前列腺癌PC-3和LNCaP细胞，或者使用病人前列腺癌细胞系，也可以根据需要转移所选原位移植物的特定表型。
三、移植前肿瘤细胞的处理肿瘤细胞的本质是异种细胞体，从人体获取到的肿瘤组织处理一般包括酶处理过程和细胞悬液制备过程。
酶液（例如胰酶）可以消化组织基质和纤维素，使细胞更容易生长。
酶液需要在恰当的温度和pH值下进行消化，并获得最高的细胞产量。
消化完毕后，过滤产生的细胞系悬液，以获得细胞。
四、移植前的裸鼠准备在移植前，要为裸鼠准备好阴茎垫和保持体温的设备。
可以使用小激光剪切器轻轻地切割皮肤做一个小孔，将悬液注入到前列腺内。
五、细胞移植移植前，应将细胞重新悬浮在适合的细胞培养基中，调整至合适的细胞浓度。
将细胞直接注入到头孢钠和甲苯磺丁脲等抗生素加载的BALB/c裸鼠前列腺中。
六、术后护理在移植完成后，将裸鼠安置在恰当的环境中，并监测它们的舒适程度。
为了预防感染和控制感染，需要注射抗生素和止痛药，以及监测患处的融合情况。
七、标本收集和肿瘤评估从移植的裸鼠体内收集原位移植物的标本，并用组织学方法鉴定癌细胞的形态学，确定癌细胞类型。
在肿瘤评估过程中，还可以进行微管道侵袭实验、体内药物毒理学试验等进一步的研究。
总之，裸鼠前列腺原位肿瘤模型的建立对研究前列腺癌的发生机制、治疗方法和预后等方面有重要意义。
从以上步骤和注意事项可以看出，建立该模型的过程繁琐，需要确保实验严谨，才能有效提高研究精度和推进前列腺癌的临床治疗。
裸鼠成瘤实验-超详细资料
裸鼠成瘤实验-超详细资料裸鼠成瘤实验总结-超详细资料接种量接种部位接种部位:腋窝中部外侧皮下为好。
皮下肿瘤模型中，想要成瘤率高就接种在腋下。
接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针，要保证与接种点的距离小于针头的长度，向头部方穿行，绝对不能刺破皮肤或者刺破肌肉层，当针头到达接种位点时注射，退出针头，这样操作的目的并不完全是避免漏液，其实熟练后，不需要皮下穿行也不会漏液，主要是避免污染，进针点还有少量污染的可能性的，针头在皮下穿行一段后，接种点离进针点较远，最大限度减少污染的可能。
如果是用于正式实验，那么一只老鼠就只能接种一个位点，不可以接种多个位点用于保证可用的模型数。
因为在有些情况下，一个老鼠身上有多于一个肿瘤的情况下，会有相互影响的可能，无论这几个肿瘤相距有多远。
要是想多打几个部位做做预试验，倒也不是不可以，但是我觉得，基本上没有什么必要。
皮肤不用绷得太紧，平展就可以了，另外接种的时分进针点很靠下，针头在皮下走一段再注射，速度不要太快。
注射前针头稍微动一动，能动就申明在皮下，不然大概在皮内或者肌肉内。
普通来说都是有鼓包的但是要是你接种位置太深入腋窝，你是看不到鼓包的。
主要靠针头稍微动一动来判断。
是否应用免疫抑制剂裸鼠皮下种瘤后，可以通过应用免疫抑制剂，比如环磷酰胺（2mg每只，打两天）来加速瘤体的生长，当然我知道裸鼠是T免疫缺陷动物，但是人家说的CTX可以进一步抑制裸鼠的体液免疫和NK细胞杀伤的保护作用，可以加快瘤子的生长，这样造模的周期很短，也可以进行人为的控制，不知道这个观点是不是有道理，实践中是不是真有人这么做呢？楼上说的文献中也有报道，而且还有预先用放射照射抑制动物免疫功能再接种的方法，但是一般常规应用中大多数时候不推荐这么做。
另外还有一个问题应该被考虑到，大家现在都在琢磨着怎么让肿瘤出瘤的更快，造模周期更短，但是如果人为的把肿瘤生长加速，其实对实验并不好。
因为造模周期短，很可能生长速度也会被加快，肿瘤可能很快就溃烂了，这样就不得不被迫中止实验，而用药却没有用到足够的时间，药效还没有发挥出来就结束了，这样是很不利的。
肿瘤动物模型的构建
肿瘤动物模型的构建第一类是皮下移植瘤顾名思义，这种模型的建立是将肿瘤细胞或肿瘤组织直接种植在小鼠的皮下。
种植的点也有讲究，一般选择血运淋巴回流丰富的腹股沟和腋窝。
可根据实验设计选择移植点，统一移植点的位置，除了遵守实验统一的条件外，待肿瘤成熟后收集肿瘤时留下照片证据也显得美观。
裸鼠（Balb/c 鼠，无毛发，T 淋巴细胞缺陷）是比较常见和常用的实验用鼠，尤其是在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。
裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。
当然，这种肿瘤模型也有缺陷，即不能很准确的模拟正常人体肿瘤发生发展的过程。
肿瘤细胞移植时的简要步骤：首先准备好要移植的肿瘤细胞（细胞量根据不同肿瘤略有不同，我们所用的前列腺癌细胞系每个移植点一般选择1x106左右；肿瘤细胞可与基质胶1:1 混匀后用 1 ml 注射器吸取，基质胶能够给肿瘤细胞提供营养环境，有助于肿瘤细胞生长）。
戴无菌手套后，将小鼠用左手大拇指和食指捏住颈部皮肤，然后将鼠尾用左手无名指和小指固定于左手大鱼际。
将腋窝或腹股沟用75% 酒精消毒 3 次。
右手持吸有肿瘤细胞和基质胶混合液的注射器，在腹股沟或腋窝的位置，45 度斜角进针，注意不要突破腹膜，将针头保持于皮下位置。
然后近水平位置将针头几乎完全插入皮下，将混有基质胶的肿瘤细胞注射入皮下（肿瘤细胞量约1x106），快速退针，左手食指轻压针孔约1 min 后将小鼠放回饲养笼中，注意将小鼠侧放于垫料上，防止其不适呕吐时呕吐物误入呼吸道引起窒息。
2～3 h 后观察小鼠是否苏醒。
如果是利用肿瘤组织（人体肿瘤标本或小鼠移植瘤传代）建立裸鼠皮下移植瘤模型，则需要首先将肿瘤组织用无菌PBS（或1640 培养基）洗涤 3 次，然后在无菌平皿上切成或用无菌剪刀剪成<1 mm3 体积的小块（种植前可裹基质胶）备用。
将小鼠用水合氯醛麻醉后平卧于解剖板上，四肢用胶带固定，将腋窝或腹股沟用75% 酒精消毒3 次，然后用眼科剪剪开约0.5 cm 小口，小镊子将皮下筋膜与皮肤分开，然后将肿瘤组织放入贴近腹股沟或腋窝的深部，每个位置放置2～3 块肿瘤组织，注意不同组间统一放置肿瘤组织块数以保持一致。
裸鼠前列腺原位肿瘤模型的建立(一)
裸鼠前列腺原位肿瘤模型的建立(一)作者：罗勇，张林琳，贺大林，李翔，宁亮，侯惠莲【关键词】,前列腺癌EstablishmentofprostatecancermodelbyorthotopicinjectionofhumanprostatecancercelllineDu145【Abstract】AIM:Toestablishaprostatecancerorthotopicinjectionmodelinnudemiceandtodiscussitsvalueofappli cation.METHODS:Lowerabdominalincisionwasmadein10malenudemice.Afterthebladderandprost atewereexposed,Du145（6×106）wasinjectedinventralprostatelobesundertheprostaticcapsulebyaTBsyringewitha29gaugeneedleat5 0μLpermouse.Theabdominalwallandskinwerethenclosedwith70surgicalsutureandthevitalsignsoft henudemicewereobserved.Whenthemiceweredying,theyweresacrificed.Afterthemousewaskilled, thetissuesofprostate,bladder,lymphaticnode,lungandliverweretakenout,fixedin40g/Lformaldehyd e,embeddedinparaffin,stainedbyHEandthenobservedmicroscopically.Thebonemetastasiswasobse rvedbyXray.RESULTS:Theincidenceofprimarytumorafterintraprostaticinjectionwas60%（6of10）.About14dlater,thereweresmallpalpablenodesinprostateandabout19dlater,cachexiaocc urredinnudemice.Afterdissection,itwasshownthatthediameterofprimarytumorsvariedfrom0.8cmt o1.5cmandtheenvelopeoftheliverbecamecrimpy.Acutehepatitiscouldbeobservedundermicroscop y,whichrepresentedalargescaleofhepatocytedeath,liversinusdilatationandhyperemia,hepaticlobul einfiltratedbylymphocyteandmacrophageandinconspicuoushyperplasia.CONCLUSION:Theorthoto picinjectionmodelisanoptimalanimalmodeltostudytheoccurrenceanddevelopmentofprostatecanc er.Itmimicsthenaturalsituationofhumanprostatecancerandwillhelptounderstandthemechanismsof androgenindependenceandosseousmetastasisandtumorhostdeterminantsofprostatespecificantig en(PSA)expression.【Keywords】prostateneoplasms;orthotopicinjection;metastasis;nudemice【摘要】目的：建立一种裸鼠前列腺癌原位模型.方法：在10只裸鼠下腹部切口，显露膀胱和前列腺，用1mLTB针筒、29G针头在其前列腺左右腹侧叶包膜下接种人前列腺癌DU145细胞50μL，共计6×106个，以建立原位肿瘤模型，观察裸小鼠生命体征变化.于濒死状态下处死，并取原位肿瘤、膀胱、盆腔淋巴结、肺脏和肝脏标本，用40g/L甲醛固定、石蜡包埋和HE染色后显微镜下观察，Ｘ线照射显示骨骼转移情况.结果：10只裸鼠中有6只模型建立成功.接种后14ｄ左右，可触及前列腺部位有黄豆大小的包块，质硬.19d后出现恶液质，解剖后发现前列腺部位有包块生长，直径约在0.8～1.5ｃｍ，其中2例侵及膀胱.肝脏泛黄、被膜皱缩，镜下呈急性重型肝炎的病理改变.结论：小鼠前列腺原位移植瘤模型建立成功.【关键词】前列腺癌；原位注射；转移；裸鼠0引言前列腺癌初诊时大约30%～50%的患者已发生转移〔1〕，而目前针对前列腺癌侵袭和转移的机制及有效的治疗措施研究较少，一个重要原因是缺乏合适的动物模型.为了建立一种更接近于人类肿瘤体内自然生长过程的前列腺癌动物模型，我们通过原位注射人前列腺癌细胞Du145技术建立起BALB/c裸鼠的前列腺癌原位种植瘤模型如下.1材料和方法1.1材料雄性BALB/c裸鼠10只，6wk龄，体质量20ｇ左右，由第四军医大学实验动物中心提供.均在SPF条件下层流架内饲料饮水自由摄入.Du145细胞系由美国ChungLW惠赠.用含100mL/L 胎牛血清（杭州四季青公司）的RPMI1640培养液（美国Gibco公司）在37℃，50mL/LCO2的孵箱内培养，以1.25g/L胰酶和0.2g/LEDTA的混合液消化传代.1.2方法裸鼠用10g/L戊巴比妥钠（75mg/kg）麻醉，仰卧位，胶带固定四肢，下腹部正中横切口1cm，暴露膀胱和精囊腺，用棉签轻压膀胱顶壁、腹侧壁，并向下游离至膀胱颈，推开肌肉及生殖腺进一步暴露前列腺，可见其大小约1.0ｍｍ×1.5ｍｍ×2.0ｍｍ，分左右2叶，呈粉红色，有明显的腺体组织特征.用1mLTB针筒、29G针头轻轻挑起一侧前列腺包膜，缓慢进针，直至顶起对侧包膜，明确针尖进入包膜后，再缓慢推注Du145细胞悬液50μL（6×106个），以包膜向上鼓起，脱离腺体表面为满意标准.恢复脏器的解剖位置，用70可吸收线分别间断缝合腹壁肌肉层和皮肤层，待鼠苏醒后回笼.以裸鼠出现恶液质、处于濒死状态作为观察终点，颈椎脱臼法处死.尸解并观察荷瘤部位肿瘤的生长情况.裸鼠处死后，立即在100mA，40kV，5.23ms条件下行Ｘ线检查.裸鼠与球管距离为1.0ｍ；然后取前列腺、膀胱、盆腔淋巴结、肝脏和肺脏标本，40g/L甲醛固定、石蜡薄层切片4μm，HE染色后光镜下观察有无转移灶.2结果2.1肿瘤模型的建立裸鼠注射后14d可于下腹前列腺部触及结节，黄豆大小、表面光滑、质硬、活动度差.19d出现恶液质，解剖后发现6只裸鼠前列腺部位有包块形成，直径0.8～1.5ｃｍ.病理证实原位移植瘤模型建立成功.2.2侵袭和转移前列腺部位包块呈结节状、质硬，与周围精囊腺、输精管、膀胱及肠管黏连.肝脏有明显的肉眼病变，体积缩小、颜色泛黄、表面被膜皱缩、遍布黄色斑点状病变.2只裸鼠前列腺原位肿瘤侵及膀胱（Fig1），病理检查未见肝、肺、盆腔淋巴结肿瘤转移灶；X线也未发现骨骼病变.2.3HE染色结果前列腺组织内有成群密集的未分化上皮细胞，细胞排列紊乱，有丰富的、泡沫样的嗜酸细胞象，异形性明显，核大深染，核内有多形的、数目不均的染色质（Fig2），有巨核细胞，间质成分少，瘤体中间无坏死，仅见极少腺样结构；肝脏呈急性重型肝炎表现，镜下可见：肝细胞弥漫性的大片坏死，以小叶中央最为明显，肝窦扩张充血，小叶内有淋巴细胞和巨噬细胞为主的炎性细胞浸润，小叶增生不明显.3讨论人前列腺癌动物模型是研究前列腺癌发病机制、肿瘤与宿主关系、癌肿侵袭与转移过程和治疗措施有效性不可缺少的理想实验工具，因此，建立理想的前列腺癌动物模型应能最大程度地模拟人类前列腺癌的发生过程并具备以下特点〔2〕:①人源性肿瘤,可分泌前列腺特异性抗原(PSA)；②肿瘤特性与人类前列腺癌相似；③对激素的治疗反应与人前列腺癌相似.。
裸鼠抑制肿瘤瘤实验具体步骤及方法
动物体内抑瘤实验具体步骤及方法活体生物发光成像技术的原理：在小型哺乳动物体内利用报告基因（荧光素酶基因）表达所产生的荧光素酶蛋白与其小分子底物荧光素在氧、Mg2+存在的条件下消耗ATP 发生氧化还原反应，将部分化学能转化为可见光能释放。
因此只有在活细胞内才会发生发光现象。
并且光的强度与标记细胞的数目线性相关。
一、材料准备1. 动物：裸鼠9 只，6～8周龄，雄性；C57小鼠24 只，6～8 周龄，雄性；动物均为自由饮水采食。
2. 细胞：MDA-MB-231人乳腺癌细胞系，使用荧光素酶基因标记。
方法：用荧光素酶报告基因标记的质粒转染人乳腺癌细胞，共转染的还有选择性标记基因，从而保证转染细胞的稳定性，形成表达荧光素酶的肿瘤细胞株；B16 黑色素瘤细胞。
二、实验步骤1. 紫杉醇混合胶束的制备（1）将适量紫杉醇溶解在少量无水乙醇和丙二醇的混合溶剂中.（2）加入适当比例的磷脂和表面活性剂A 进行充分混合，制得稳定的紫杉醇混合胶束前体制剂，载药浓度为6 g/L。
（3）临用时按剂量加入生理盐水中稀释、摇匀后即可使用。
制剂体系的粒径大小与分布特征采用动态激光光散射粒度仪检测。
2. MDA-MB-231人乳腺癌细胞荷瘤鼠模型的建立（1）培养荧光素酶基因标记的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系，使用DMEM 培养基（添加10%胎牛血清），37 ℃、5% CO2 培养箱中培养，每3天传代1次。
（2）待细胞密度为80%～90%、细胞总量达到实验所需要求时，使用胰酶消化，收集于PBS溶液重悬。
（3）如有需要，在细胞培养一定时间后，应使用抗生素Zeocin进行抗性筛选，保证荧光素酶基因的表达量足够。
（4）收集细胞，使用PBS稀释至细胞数1.5×108/mL，接种于裸鼠腋下，每只裸鼠的接种量为0.1 mL 。
3. 动物活体成像检测（1）接种后将裸鼠随机分为3组，分别为生理盐水组、紫杉醇注射液组、紫杉醇混合胶束制剂组，每组3只。
裸鼠肿瘤造模的一点经验分享
裸鼠肿瘤造模的一点经验分享1、取5-6周龄裸鼠饲养(此时大小约16-23g。
)。
虽然此时的裸鼠个头较小，但是，标准的做法与权威的文章都是如此。
考虑可能是此时裸鼠个体差异小，对实验数据影响小吧。
2、制备肿瘤细胞悬液，按5×10*6-2×10*7细胞/只(稀释成0.2ml)接种于裸鼠腹腔，形成腹腔种植瘤。
(小鼠腹水出现情况一般如下：5～6 d出现腹水，6～8d抽取传代最好，10～12 d出现血性腹水，14～15 d小鼠开始死亡。
)3、取腹水瘤，细胞数5×10*6-2×10*7，稀释成0.2ml接种于裸鼠前腋皮下。
4、加药。
根据使用药物的不同，方法各异。
时间上可以是24小时，或第1、3、5天等等。
给药方式可以是腹腔或鼠尾静脉。
注意，由于鼠尾静脉非常细，推药一定要非常慢。
药物的量一般根据裸鼠的体重进行调节。
当然，最重要的是药物的特性。
4、20-30天处死裸鼠，并进行相关数据的检测(肿瘤大小、重量等。
)。
注意时间点，可以经常观察，在最能体现你结果的时候将裸鼠处死。
备注：1、若对照组中20%小鼠的肿瘤小于400mg或平均重量小于1g，均为肿瘤生长不良，实验数据应作废。
因为裸鼠比较小，肿瘤生长相对缓慢，因此，时间可以调整以达到要求。
2、如对照组小白鼠肿瘤平均重量小于1g或20%鼠的瘤重小于400mg，大白鼠肿瘤平均重量小于2g，表示肿瘤生长不良。
3、在试验期间给受试物组鼠死亡超过20%，或平均体重(去瘤后)下降(自身对照)超过15%者，表示受试物的毒性反应。
应当减少剂量重新试验。
但是，肿瘤时间长可导致鼠恶病质，因此，肿瘤生长时间也不能太长，肿瘤不能太大。
否则无法判断时恶病质还是药物导致的毒性反应。
4、也可以不使用腹水瘤，直接用培养的细胞接种。
但是，细胞数一定要根据自己的需要。
一般来说，10*6即可使绝大部分裸鼠成瘤，但要想成瘤率高些，最好达到10*7细胞。
接种的时候一定要将细胞摇匀，否则肿瘤大小不一。
人胃癌裸鼠移植瘤模型的建立
人胃腺癌裸鼠移植瘤模型的建立动物：BALB／c(nu／nu)裸小鼠，鼠龄6～1 0周，体重l5～25 g，雄性。
饲养在无特殊致病菌、空气洁净的净化工作台内，室内恒温、恒湿，定期消毒。
笼具、垫料、饲料和饮水均经高压蒸气灭菌，并在无菌条件下适时更换。
方法：收集培养的BGC-823细胞(癌细胞在含10% 小牛血清的RPMI-1640 培养液中，于CO2恒温孵育箱中培养，常规传代。
)在细胞培养至对数期时，用RPMI-1640制成约2×l07个／ml细胞悬液，取0．2ml(4x106个BGC-823细胞/只)注入裸小鼠颈部皮下或者背部皮下，每组接种3只鼠，当皮下移植瘤长至直径为l cm3左右时取出移肿瘤（大约在10d左右），及时放入含无血清培养液的平皿中，A再在超净工作台内修剪肿瘤组织，去除脂肪，结缔组织及坏死肿瘤组织，并用无血清培养液洗涤2次，将瘤组织切成约l mm×l mm×2mm的小块，加入适量的pbs备用。
以戊巴比妥经腹腔注射麻醉裸鼠，常规消毒背部肩胛区，（切开局部皮肤）用无菌套管针抽吸准备好的2mm3大小瘤块，将其接种于裸鼠背部肩胛区皮下，建立祼鼠皮下移植的人体胃癌祼鼠模型。
作鼠间传代(2只／代)。
移植瘤生长特性：胃癌细胞接种后的第三天即可见到裸鼠接种处皮下出现结节，直径约1．5 mm，质地较硬，在以后的几天中，上述皮下结节没有继续增大，此阶段为肿瘤细胞生长的潜伏期(7-10d左右)。
随后，裸鼠皮下的肿瘤结节开始缓慢生长．体积逐渐增大。
大概(25-30d)传代后荷瘤鼠皮下移植瘤的生长情况与初代移植瘤相近。
A具体操作：1一般要求需在无菌条件下进行。
可在接种罩、超净工作台或无菌室内操作。
动物处死后，用新吉尔灭(1∶1000)或碘酊、酒精消毒，对每个实体瘤应分别用灭菌的外科器械切取，对腹水瘤则应分别用灭菌的空针抽吸。
瘤块污染常是接种失败的主要原因，应予注意在高温季节操作时，应注意降温，可在盛有瘤源的器皿周围放置冰块。
小鼠肿瘤模型 (1)
肿瘤模型我们一般常用的就是小鼠模型和人肿瘤裸小鼠移植瘤模型。
其中用得最多的是皮下模型，另外还有腹水（或者尾静脉注射）以及原位模型，其他的模型很少用，就不提他们了。
小鼠模型分三大类：第一类是以S180、EAC、H22等为代表的，他们的宿主小鼠多选用KM，可产生腹水，也可在皮下成瘤。
多以腹水传代，实验时抽取腹水，经过一定稀释后皮下接种构建模型，接踵后第二天开始给药，给药7到10天，接种10天后结束试验，剥取肿瘤称瘤重。
1. 关于构建瘤种可以用体外细胞株培养后，用PBS悬浮至1~3×106/mouse，接种即可，最好用6号左右的针头，就是常用的2ml一次性注射的针头。
2. 关于腹水传代观察到第一代的种鼠肚子较大后（一般约8~9天左右），可以传代，传代时取1ml注射器，用2ml 注射器的针头，种鼠腹部消毒后直接将针头插入抽取腹水即可，注意不要把针头插得很深，尽量浅一点，还可以把老鼠拎起来，利用重力，让腹水集中在某处便于抽取，一般抽个就可以了，不用离心，直接用P BS3~6倍稀释后，接种到新的老鼠腹腔，腹水颜色为白色或者略有发黄都是正常的，但是血性腹水说明不好，需要注意调整，第二代以后，尽量6~7天的时候传代，不要等的时间太久，否则腹水容易血性。
三代后可用于试验。
3. 关于接种进行试验这个时候抽取的腹水需要量比较多，一般需要处死种鼠后，小心地用消毒眼科剪刀镊子剥开腹部皮肤，注意不要弄破肌肉，然后，用镊子（最好是哪种前面有倒勾的镊子，学名好像是唇型镊）拎起腹部的肌肉，用剪刀剪开一个小口，然后用玻璃滴管或者去掉针头的注射器吸取腹水。
然后进过一定的稀释后，接种到小鼠的腋下。
关于稀释量，各个实验室的情况都不一样，最好摸索一下，开始的时候可以适当的计数，但是要用台盼兰染色后计活细胞数。
接种部位在小鼠腋下，但是不要深入到腋窝里面，会给以后的操作带来麻烦。
接种时的进针处离接种处远一点，让针头在皮下多走一段，不容易污染。
仓鼠胰腺癌原位模型的建立及生物学特性(1)(精)
仓鼠胰腺癌原位模型的建立及生物学特性(1)】目的：建立仓鼠胰腺癌原位模型，并研究其生物学特性. 方法：将仓鼠胰腺癌细胞株pGHAM1接种于仓鼠胰腺背膜下，分别于第7, 14, 21, 28日各剖杀10只，肉眼及光学显微镜下观察原位肿瘤的生长、淋巴结转移及肝转移，同时观测腹水量. 结果：仓鼠胰腺癌原位模型成活率达95%，生长迅速. 接种后第7， 14， 21， 28日原位肿瘤大小分别为（16±6），（173±44），（369±87），（974±226） mm3. 第21日，毛细淋巴管内可见癌细胞团，部分淋巴结有癌细胞转移，可见少量淡血性腹水. 第28日，淋巴结阳性率进一步增加，可见血性腹水，量明显增多；部分仓鼠发生了肝转移. 结论：仓鼠胰腺癌细胞株 pGHAM1原位模型建立方法简便，易复制，而且肿瘤保持了胰腺癌的生物学特性，是理想的胰腺癌研究模型.【关键词】胰腺肿瘤；疾病模型，动物；金仓鼠0引言胰腺癌是一种恶性程度高、预后极差的肿瘤［1］. 其原因是胰腺癌发病隐匿，很难早期诊断，而即便早期诊断，部分患者也已经发生肝脏转移、腹膜播散或者局部复发［2］. 基于为胰腺癌研究提供一个肿瘤的试验系统目的，已有大量胰腺癌动物模型建立，但很多是裸鼠模型. 在肿瘤研究方面，由于裸鼠没有正常的免疫系统，其发病机制可能与人有所不同［3］. 而叙利亚金色仓鼠在形态学、生物学以及免疫学等方面与人相似. 我们拟建立仓鼠胰腺癌原位模型，并研究其生物学特性.1材料和方法1.1材料雌性叙利亚金黄仓鼠40只，4～5周龄，纯近交系，体质量40～50 g，购自中国兰州生物制品研究所. 饲养条件：温度（22±3）℃，相对湿度为（40±5）%，光/暗周期为12 h/12 h，按照标准食物喂养，自由饮水；DMEM培养液为Gibcol BRL产品；胎牛血清购自杭州四季青生物工程公司.1.2方法1.2.1仓鼠胰腺癌细胞株pGHAM1的建立用甲硝二胺诱导叙利亚金黄色仓鼠胰腺导管癌［4］. 肿瘤组织用剪刀剪成1 mm×1 mm×1 mm并用套针植入仓鼠肩胛区皮下，6～8 wk后处死动物，切除肿瘤自治后反复继代种植，第8次种植后切除肿瘤组织，用0.5 g/L的胰蛋白酶消化，37℃下EDTA处理10 min, 1000 r/min离心10 min，收集细胞，于含100 mL/L胎牛血清的DMEM培养液中培养，并加 100 U/L青霉素链霉素，100 mg/L卡那霉素以及100 mg/L两性霉素B，反复传代培养60代，建立pGHAM1细胞株.1.2.2仓鼠胰腺癌原位模型的建立PGHAM1细胞株于DMEM培养液中稳定传代5~6代. 观察细胞增殖旺盛时终止培养，用无血清DMEM培养液制备细胞悬液，调整细胞密度至1×1010/L，备用. 以60 mg/kg腹腔注射戊巴比妥钠，取腹部正中切口，牵出胰腺，于脾门较宽大处胰腺背膜下注射1×106/L PGHAM1细胞悬液后常规关腹. 于术后7, 14, 21, 28 d分别剖杀10只. 切除原位肿瘤，用测径器测量肿瘤大小，按公式V=π/6×长×宽×高计算肿瘤体积，同时观察腹水的质与量、有无淋巴结、大网膜、壁层腹膜及肝脏转移.1.2.3病理学检查切除大网膜，平铺在蜡片上，“卷席法”处理大网膜标本；40/L甲醛固定原位肿瘤、壁层腹膜、肝脏及可疑淋巴结，石蜡包埋切片，HE染色，光学显微镜观察.2结果2.1原位肿瘤及转移情况接种后第7日，可见胰内原发灶大小（16±6）mm3,侵至背膜，10只仓鼠中有5只管状斑处有癌细胞团；壁腹膜镜检显示间皮细胞部分正常（Fig 1A），而部分间隙增宽；肝脏及淋巴结未见转移，无腹水. 第14日，胰腺内原发灶大小（173±44） mm3,侵至背膜；10只仓鼠中9只管状斑处可见癌细胞团，且较原来增大；壁腹膜间皮细胞开始增生脱落（Fig1B）；未检测到淋巴结和肝脏转移，未见腹水. 第21日，肿瘤进一步增大至（369±87） mm3，侵至背膜；有少量淡血性腹水；10只仓鼠管状斑均可见癌细胞团，同时毛细淋巴管中亦可见癌细胞团；壁腹膜间皮细胞大片脱落；10只仓鼠有4只检测到淋巴结转移；肝脏未见转移. 第28日，原位肿瘤大小为（974±226） mm3，与周围脏器或组织粘连（Fig 1C）；腹水呈血性，量较大；10只仓鼠有1只死亡，8只检测到淋巴结转移；5只肝脏表面出现大小较一致的多发转移结节.2.2病理学特征原位移植瘤呈圆形或椭圆形，表面凹凸不平，外观呈粉红色（Fig 1C），切面呈灰白色，部分中心有坏死，肿瘤组织质地较脆；镜下可见肿瘤细胞呈多角形、梭形或不规则形，胞质淡染，胞核大而圆，异形性明显，核分裂相多见，肿瘤细胞结节状生长，排列成实性巢状，内有小的血窦，无腺腔样结构，与低分化胰腺腺癌一致（Fig 1D）. 转移肝脏表面可见多发结节，部分已经发生融合（Fig 1E）；镜下可见肝小叶结构遭破坏，取而代之的为癌细胞团，癌细胞特征与胰腺原位肿瘤细胞特征一致（Fig 1F）.【关键词】,胰腺肿瘤Establishment of orthotopic model of hamster pancreatic cancer and its biologic cha本篇论文是由3COME文档频道的网友为您在网络上收集整理饼投稿至本站的，论文版权属原作者，请不用于商业用途或者抄袭，仅供参考学习之用，否者后果自负，如果此文侵犯您的合法权益，请联系我们。
裸小鼠脑胶质瘤原位移植瘤模型的建立及磁共振成像研究
裸小鼠脑胶质瘤原位移植瘤模型的建立及磁共振成像研究王舒楠，张伟国，陈金华，马长锁，赵丽(第三军医大学大坪医院野战外科研究所放射科，重庆400042)摘要：目的建立裸鼠脑胶质瘤原位移植瘤模型并进行MR扫描，摸索扫描的最佳参数，探讨1.5T磁共振在检测裸鼠颅内成瘤的可行性，为下一步实验奠定基础。
方法SHG-44细胞传代培养后，用微量注射器吸取肿瘤细胞悬液直接穿刺接种，在肿瘤细胞接种后第15天行1.5T MR扫描，裸鼠麻醉后置于小动物线圈采集图像并利用影像工作站测量体积。
而后取脑组织做病理切片，计算体积后行HE及CD34染色，与MRI图像进行对比分析。
结果除去围手术期死亡2只裸鼠外，剩余的13只裸鼠在MR增强序列图像上均能见到肿瘤，成瘤率达100%，且位置同组织切片相一致。
在MR 图像上测得的肿瘤体积为（29.41±10.95）mm3，组织切片测得的肿瘤体积为(26.57±9.70) mm3，二者无显著性差异（P＞0.05）但具有明显的相关性（r=0.985，P ？）。
肿瘤微血管丰富，且主要集中在肿瘤的边缘。
结论采用微量注射器直接建立裸鼠胶质瘤原位移植瘤模型简单便捷，成瘤率高。
1.5T 磁共振能活体检测裸鼠脑胶质瘤成瘤情况，并能进行一定的功能成像，是动态监测裸鼠胶质瘤发生发展的有效途径。
关键词：裸鼠；胶质瘤；磁共振成像；原位移植Estabilshment of human glioma orthotopic model in nude mice and monitored by 1.5T magnetic resonance imagingWang Shu-nan, Zhang Wei-guo, Chen Jin-hua, Ma Chang-suo, Zhao Li（Department of Radiology, Daping Hospital, The Third Military Medical University, Chongqing 400042, China）Abstract：Objective To establish the model of human glioma orthotopic implantation in nude mice，and investigate 1.5T magnetic resonance in the detection of transplanted tumor. Methods The glioma cell line SHG-44 was cultured in vivo. The glioma cells were injected into nude mice brain using micro-syringe to form glioma. Fifteen days later, nude mice were scaned by 1.5T MR with animal-coil to detect the tumor. Tumor volume was measured in AW4.3 imaging workstation. Then take brain tissue biopsy done with HE staining and CD34 staining. Tumor volnme was measure under microsope to evaluated the relativity with the dates in MR imagings. Results Two nude mice were dead in perioperative, the other thirteen mice survive and be detected tumor in bran by MR scanning with contrast injected. The location in MRI isconsistent withthat in tissue section. Tumor volume is 29.41±10.95mm3measured by MRI and is 26.57±9.70mm3 measured under microsope. There is no significant difference（P＞0.05）but significant correlation（r =0.985）. Conclusion It is easy and convenient using micro-syringe directly to establish the human glioma orthotopic implantation model in nude mice. 1.5T MR can detect the tumor in mouse brain in vivo, and to carry out certain functional imaging. 1.5T MR is an effective way to dynamic monitor the occurrence and development of glioma in nude mice.Key word：Nude mice；Glioma；Orthotopic implantation；Magnetic resonance imaging胶质瘤是脑内最常见、浸润性最强的一种原发性脑肿瘤，临床治疗效果差，病死率很高。
人胃癌裸鼠原位种植转移模型建立
1969年Rygaard等首次成功将人类结肠癌移植于裸鼠后，多种人类肿瘤已经在裸鼠体内移植成功，从而开辟了利用动物研究人类肿瘤的广阔前景。
以往的研究大多将癌组织直接移植于裸鼠皮下，但是这种模型由于周围结缔组织包裹，往往形成局部肿瘤而很少发生远处转移。
20世纪九十年代以后国内外学者相继建立了人类肿瘤裸鼠原位移植（orthotopictranplantation）模型，这种模型可以发生类似肿瘤临床特点的生长及转移过程。
Furukawa等发现将完整组织块原位缝挂裸鼠胃壁比肿瘤细胞悬液原位移植裸鼠胃壁后转移率高。
汪芳裕等在裸鼠胃壁缝制粘膜小囊包埋肿瘤组织块，这种模型肝脏转移率、腹水形成率较高。
但是传统的完整组织块模型，无论是缝挂法还是胃囊法又存在许多造模时的实际困难和弊端，如造模时间长，缝针时出血量较多，死亡率较高等。
从而导致造模成功率相对不高，如何能将完整组织块不需动一针一线就可以粘挂于胃壁呢？外科用的生物吻合胶给了我们极大的启发，本研究在此基础上进一步改进，用OB生物胶将瘤组织块粘贴于裸鼠胃壁，简便易行，能完整地重现胃癌的临床转移过程，成功地建立了一种有价值的胃癌转移模型。
详细实验方法∙采用OB胶粘贴法建立人胃癌裸鼠原位种植转移模型∙OB胶粘贴法实验材料∙SGC-7901人胃癌细胞株∙BALB/c无胸腺裸鼠试剂、试剂盒∙氯胺酮∙医用OB吻合胶∙胎牛血清∙RPMI-1640培养基∙秋水仙素∙甲醇冰醋酸固定液∙Giemsa染液∙伊红染液仪器、耗材∙高速冷冻离心机∙多功能倒置相差显微镜∙普通光学显微镜∙生物摄影显微镜浸润与转移是恶性肿瘤的重要特征，也是影响患者生命和治疗效果的主要原因，控制转移是改善癌症患者预后的主要因素之一。
动物实验是研究肿瘤转移的重要方法，而建立一个相关的理想动物模型就成为一个重要的前提。
1969年Rygaard等首次成功将人类结肠癌移植于裸鼠后，多种人类肿瘤已经在裸鼠体内移植成功，从而开辟了利用动物研究人类肿瘤的广阔前景。
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裸鼠前列腺原位肿瘤模型的建立(一)
作者：罗勇，张林琳，贺大林，李翔，宁亮，侯惠莲
【关键词】,前列腺癌EstablishmentofprostatecancermodelbyorthotopicinjectionofhumanprostatecancercelllineDu145【Abstract】AIM:Toestablishaprostatecancerorthotopicinjectionmodelinnudemiceandtodiscussitsvalueofappli cation.METHODS:Lowerabdominalincisionwasmadein10malenudemice.Afterthebladderandprost atewereexposed,Du145（6×106）wasinjectedinventralprostatelobesundertheprostaticcapsulebyaTBsyringewitha29gaugeneedleat5 0μLpermouse.Theabdominalwallandskinwerethenclosedwith70surgicalsutureandthevitalsignsoft henudemicewereobserved.Whenthemiceweredying,theyweresacrificed.Afterthemousewaskilled, thetissuesofprostate,bladder,lymphaticnode,lungandliverweretakenout,fixedin40g/Lformaldehyd e,embeddedinparaffin,stainedbyHEandthenobservedmicroscopically.Thebonemetastasiswasobse rvedbyXray.RESULTS:Theincidenceofprimarytumorafterintraprostaticinjectionwas60%
（6of10）.About14dlater,thereweresmallpalpablenodesinprostateandabout19dlater,cachexiaocc urredinnudemice.Afterdissection,itwasshownthatthediameterofprimarytumorsvariedfrom0.8cmt o1.5cmandtheenvelopeoftheliverbecamecrimpy.Acutehepatitiscouldbeobservedundermicroscop y,whichrepresentedalargescaleofhepatocytedeath,liversinusdilatationandhyperemia,hepaticlobul einfiltratedbylymphocyteandmacrophageandinconspicuoushyperplasia.CONCLUSION:Theorthoto picinjectionmodelisanoptimalanimalmodeltostudytheoccurrenceanddevelopmentofprostatecanc er.Itmimicsthenaturalsituationofhumanprostatecancerandwillhelptounderstandthemechanismsof androgenindependenceandosseousmetastasisandtumorhostdeterminantsofprostatespecificantig en(PSA)expression.
【Keywords】prostateneoplasms;orthotopicinjection;metastasis;nudemice
【摘要】目的：建立一种裸鼠前列腺癌原位模型.方法：在10只裸鼠下腹部切口，显露膀胱和前列腺，用1mLTB针筒、29G针头在其前列腺左右腹侧叶包膜下接种人前列腺癌DU145细胞50μL，共计6×106个，以建立原位肿瘤模型，观察裸小鼠生命体征变化.于濒死状态下处死，并取原位肿瘤、膀胱、盆腔淋巴结、肺脏和肝脏标本，用40g/L甲醛固定、石蜡包埋和HE染色后显微镜下观察，Ｘ线照射显示骨骼转移情况.结果：10只裸鼠中有6只模型建立成功.接种后14ｄ左右，可触及前列腺部位有黄豆大小的包块，质硬.19d后出现恶液质，解剖后发现前列腺部位有包块生长，直径约在0.8～1.5ｃｍ，其中2例侵及膀胱.肝脏泛黄、被膜皱缩，镜下呈急性重型肝炎的病理改变.结论：小鼠前列腺原位移植瘤模型建立成功.【关键词】前列腺癌；原位注射；转移；裸鼠
0引言
前列腺癌初诊时大约30%～50%的患者已发生转移〔1〕，而目前针对前列腺癌侵袭和转移的机制及有效的治疗措施研究较少，一个重要原因是缺乏合适的动物模型.为了建立一种更接近于人类肿瘤体内自然生长过程的前列腺癌动物模型，我们通过原位注射人前列腺癌细胞Du145技术建立起BALB/c裸鼠的前列腺癌原位种植瘤模型如下.
1材料和方法
1.1材料
雄性BALB/c裸鼠10只，6wk龄，体质量20ｇ左右，由第四军医大学实验动物中心提供.均在SPF条件下层流架内饲料饮水自由摄入.Du145细胞系由美国ChungLW惠赠.用含100mL/L 胎牛血清（杭州四季青公司）的RPMI1640培养液（美国Gibco公司）在37℃，50mL/LCO2的孵箱内培养，以1.25g/L胰酶和0.2g/LEDTA的混合液消化传代.
1.2方法
裸鼠用10g/L戊巴比妥钠（75mg/kg）麻醉，仰卧位，胶带固定四肢，下腹部正中横切口1cm，暴露膀胱和精囊腺，用棉签轻压膀胱顶壁、腹侧壁，并向下游离至膀胱颈，推开肌肉及生殖腺进一步暴露前列腺，可见其大小约1.0ｍｍ×1.5ｍｍ×2.0ｍｍ，分左右2叶，呈粉红色，有明显的腺体组织特征.用1mLTB针筒、29G针头轻轻挑起一侧前列腺包膜，缓慢进针，直至顶起对侧包膜，明确针尖进入包膜后，再缓慢推注Du145细胞悬液50μL（6×106个），以包膜向上鼓起，脱离腺体表面为满意标准.恢复脏器的解剖位置，用70可吸收线分别间断缝合腹壁肌肉层和皮肤层，待鼠苏醒后回笼.以裸鼠出现恶液质、处于濒死状态作为观察终点，颈椎脱臼法处死.尸解并观察荷瘤部位肿瘤的生长情况.裸鼠处死后，立即在100mA，40kV，5.23ms条件下行Ｘ线检查.裸鼠与球管距离为1.0ｍ；然后取前列腺、膀胱、盆腔淋巴结、肝脏和肺脏标本，40g/L甲醛固定、石蜡薄层切片4μm，HE染色后光镜下观察有无转移灶.
2结果
2.1肿瘤模型的建立裸鼠注射后14d可于下腹前列腺部触及结节，黄豆大小、表面光滑、质硬、活动度差.19d出现恶液质，解剖后发现6只裸鼠前列腺部位有包块形成，直径0.8～1.5ｃｍ.病理证实原位移植瘤模型建立成功.
2.2侵袭和转移前列腺部位包块呈结节状、质硬，与周围精囊腺、输精管、膀胱及肠管黏连.肝脏有明显的肉眼病变，体积缩小、颜色泛黄、表面被膜皱缩、遍布黄色斑点状病变.2只裸鼠前列腺原位肿瘤侵及膀胱（Fig1），病理检查未见肝、肺、盆腔淋巴结肿瘤转移灶；X线也未发现骨骼病变.
2.3HE染色结果前列腺组织内有成群密集的未分化上皮细胞，细胞排列紊乱，有丰富的、泡沫样的嗜酸细胞象，异形性明显，核大深染，核内有多形的、数目不均的染色质（Fig2），有巨核细胞，间质成分少，瘤体中间无坏死，仅见极少腺样结构；肝脏呈急性重型肝炎表现，镜下可见：肝细胞弥漫性的大片坏死，以小叶中央最为明显，肝窦扩张充血，小叶内有淋巴细胞和巨噬细胞为主的炎性细胞浸润，小叶增生不明显.
3讨论
人前列腺癌动物模型是研究前列腺癌发病机制、肿瘤与宿主关系、癌肿侵袭与转移过程和治疗措施有效性不可缺少的理想实验工具，因此，建立理想的前列腺癌动物模型应能最大程度地模拟人类前列腺癌的发生过程并具备以下特点〔2〕:①人源性肿瘤,可分泌前列腺特异性抗原(PSA)；②肿瘤特性与人类前列腺癌相似；③对激素的治疗反应与人前列腺癌相似.。